Một số phương pháp định lượng alkaloid thực vật

PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ ALKALOID TRONG THỰC VẬT NỘI DUNG I Giới thiệu alkaloid II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật III Kết luận kiến nghị I Giới thiệu alkaloid I Giới thiệu alkaloid Khái niệm Alkaloid hợp chất hữu cơ:  Có chứa Nitơ (Nitơ vòng vòng)  Đa số có nhân dị vòng  Có phản ứng kiềm  Nguồn gốc chủ yếu từ thực vật I Giới thiệu alkaloid Cấu tạo MeO MeO COOH N NH2 MeO N MeO OMe H OMe Số nitơ: - thường từ – Loại vòng: - đa số: dị vòng Nitơ - số: vòng Carbon Số vòng: - vòng - thường – vòng Bậc nitơ: bậc II (-NH-), thường bậc III (=N-) N Me I Giới thiệu alkaloid Tính chất Có Oxi  Lý tính:  Trạng thái: O N N Me Thể rắn   N Thể lỏng Mùi vị: đa số không mùi, có vị đắng số có vị cay Màu sắc: hầu hết alkaloid không màu, trừ số alkaloid có màu vàng berberin, palmatin, chelidonin,…  Độ tan: - Alkaloid base không tan nước, dễ tan dung môi hữu methanol, ethanol, chloroform, benzen,… - Muối alkaloid dễ tan nước, không tan dung môi hữu phân cực I Giới thiệu alkaloid Tính chất  Hoá tính - Tính kiềm - Alkaloid tác dụng với acid tạo thành muối tương ứng - Alkaloid kết hợp với muối kim loại nặng (Hg, Bi, Pt) tạo muối phức - Alkaloid phản ứng với số thuốc thử gọi thuốc thử alkaloid II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật Nguyên tắc Để định lượng alkaloid cần phải thực chiết tách khỏi nguồn nguyên liệu trước, sau tiếp tục định lượng phương pháp khác Các alkaloid có tính kiềm nên thực vật thường tồn dạng muối với axit hữu Do vậy, tách chúng dạng muối alkaloid hay dạng bazơ alkaloid II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật Nguyên tắc 1.1 Chiết rút alkaloid dạng muối: Bột nguyên liệu Chiết nước rượu acid Cô thu hồi nước/ rượu hóa Alkaloid dịch acid Trích ly dung môi hữu Kiềm hóa Alkaloid dung môi hữu Trích ly dung môi hữu Acid hóa Muối alkaloid môi trường acid Trích ly dung môi hữu Kiềm hóa Bazơ alkaloid dung môi hữu Làm bay dung môi hữu Thu bazơ alkaloid tổng số II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật Phương pháp chung định lượng alkaloid 2.2 Phương pháp thể tích Chuẩn độ muối alkaloid: Các dung dịch nước/rượu muối alkaloid tạo thành từ alkaloid có tính bazơ yếu có đặc tính không phản ứng với phenolphthalein Do chuẩn độ chúng kiềm với thị màu phenolphthalein Màu dung dịch xuất tất bazơ giải phóng khỏi muối alkaloid, axit tạo từ muối kết hợp với kiềm dùng để chuẩn độ, giọt kiềm dư màu với thuốc thử II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein Chè phương pháp thể tích: Nguyên tắc: Khi dung dịch chứa caffein có mặt HCl dung dịch I KI làm cho toàn caffein chuyển thành chất kết tủa dạng có công thức tổng quát C6H10N4KI4 Sau dùng natrithiosunfat (Na2S2O3) để biết nồng độ chuẩn lượng I2 để biết lượng I2 tham gia phản ứng, từ tính lượng caffein có mặt dung dịch thí nghiệm II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein Chè phương pháp thể tích (tt): Sơ đồ: II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein Chè phương pháp thể tích (tt): II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein Chè phương pháp thể tích (tt): Tính toán kết quả: Trong đó: A - số ml Na2S2O3 0.1N dùng phân tích kiểm chứng B - số ml Na2S2O3 0.1N dùng phân tích caffein K - hệ số chỉnh nồng độ Na2S2O3 K G - trọng lượng chất khô mẫu chè 2.5 - hệ số tính lượng dung dịch thí nghiệm so với lượng dung dịch chè pha chế 0.0052 – số g caffein ứng với ml Na2S2O3 0.1N dùng để chuẩn lượng I2 tham gia kết tủa caffein II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật Quy chuẩn Việt Nam hàm lượng caffeine số sản phẩm cà phê: Bảng tiêu chuẩn sau trích từ Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia sản phẩm cà phê - QCVN…: 2013/BYT: Sản phẩm Hàm lượng (tính theo khối lượng) Cà phê nguyên chất ≥ 1% Cà phê hỗn hợp dạng lỏng ≥ 1% Cà phê tách caffein ≤ 0.1% Cà phê hòa tan ≥ 2.5 % Cà phê hòa tan hỗn hợp ≥ 1.5 % Cà phê hòa tan tách caffein ≤ 0.3% Cà phê hỗn hợp dạng lỏng ≤ 100mg/100ml sản phẩm II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật Phương pháp chung định lượng alkaloid 2.3 Phương pháp kết tủa Dùng chất kết tủa khác (thuốc thử Maies: HgI + KI dung dịch I2 KI) để chuẩn độ Ví dụ: Cho dung dịch I2 biết nồng độ vào dung dịch chứa alkaloid môi trường trung tính axit yếu, I2 tạo thành kết tủa với alkaloid Chuẩn độ lượng I dư dung dịch Na2S2O3 với chất thị màu hồ tinh bột II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng berberin Vàng đắng phương pháp kết tủa: Sơ đồ: II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng berberin Vàng đắng phương pháp kết tủa (tt): II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng berberin Vàng đắng phương pháp kết tủa (tt): Tính toán kết quả: Trong đó: 0.8982 - 1g tủa ứng với 898.2mg berberin (C20H18NO5) a- khối lượng tủa thu (g) 0.0001 - 1ml dịch lọc ứng với 0.1mg berberin V- thể tích dịch lọc thu (ml) P- khối lượng dược liệu khô kiệt lấy để định lượng (g) III Kết luận kiến nghị III Kết luận kiến nghị Kết luận: Do đa dạng cấu trúc phân tử tính chất mà có cách thức tách chiết khác cho alkaloid dựa số nguyên tắc chung, tùy vào loại alkaloid mà sử dụng dụng cụ, thiết bị dung môi khác cho thích hợp, việc lựa chọn sử dụng mang ưu điểm khuyết điểm riêng III Kết luận kiến nghị Kết luận: Ưu điểm nhược điểm việc lựa chọn sử dụng dung môi Sử dụng dung môi hữu không phân cực Sử dụng dung môi nước (dung môi hữu phân cực) Ưu điểm  Hiệu suất cao dịch chiết rút sạch, dễ  Dung môi rẻ tiền, dễ kiếm tinh chế tạp chất kèm  Có khả chiết chọn lọc alkaloid dạng base Nhược điểm  Dung môi đắt tiền  Thiết bị phức tạp, đầu tư lớn  Thiết bị đơn giản, vốn đầu tư  Dịch chiết lẫn nhiều tạp chất, khó tinh chế mát nhiều khâu tinh chế làm cho hiệu suất thấp III Kết luận kiến nghị Kiến nghị: - Thử nghiệm dung môi khác cho chất để tìm dung môi thích hợp cho việc tách chiết alkaloid - Kết hợp việc sử dụng hệ thống thiết bị đại nhằm giảm thời gian quy trình tách chiết so với quy trình tách chiết thủ công mà nghiên cứu trước - Quan tâm đầu tư thử nghiệm bổ sung alkaloid vào công thức thực phẩm thành phần dinh dưỡng bổ sung mang lại hiệu sức khỏe THANK YOU! ... II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein Chè phương pháp trọng lượng (tt): Sơ đồ: II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng. .. đồ: II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein Chè phương pháp thể tích (tt): II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật  Định lượng caffein... phức - Alkaloid phản ứng với số thuốc thử gọi thuốc thử alkaloid II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật II Một số phương pháp quy trình định lượng alkaloid thực vật Nguyên