Bước đầu tìm hiểu thành phần ký sinh trùng và vi sinh vật ký sinh trên cá thia đồng tiền ba chấm (dascyllus trimaculatus) nuôi trong hệ thống nuôi tuần hoàn tại trung tâm nghiên cứu và phát triển nuôi biển viện nghiên

[6] Xuất phát từ yêu cầu thực tế trên được sự đồng ý của Bộ Môn Bệnh HọcThủy Sản – Khoa Nuôi Trồng Thủy Sản – Trường Đại Học Nha Trang và sự giúp đỡ của Phòng Công Nghệ Sinh Học – Trung

MỤC LỤC

Trang LỜI CẢM ƠN

MỤC LỤC i

DANH MỤC CÁC BẢNG iii

DANH MỤC CÁC HÌNH iii

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv

MỞ ĐẦU 1

Phần 1: TỔNG QUAN 1.1 Sự phát triển của nghề cá cảnh biển 3

1.1.1 Trên thế giới 3

1.1.1 Việt Nam 3

1.2 Đặc điểm sinh học và giá trị kinh tế của cá thia đồng tiền ba chấm 5

1.2.1 Đặc điểm sinh học 5

1.2.2 Giá trị kinh tế của cá thia đồng tiền ba chấm 7

1.3 Những nghiên cứu về bệnh trên cá thia đồng tiền ba chấm 9

Phần 2 : PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu 13

2.2 Tìm hiểu hệ thống nuôi và các thông số môi trường nuôi: 13

2.3 Nghiên cứu thành phần ký sinh trùng và vi sinh vật ký sinh 13

2.3.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu: 13 2.3.13.2.2 Phương pháp thu mẫu và xử lý mẫu: 14

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu ký sinh trùng 14

2.3.4 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn 16

2.3.5 Phương pháp nghiên cứu nấm: 18

2.4 Phương pháp xử lý số liệu: 18

Phần 3 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết quả tìm hiểu hệ thống nuôi và các thông số môi trường 19

3.2 Kết quả thu mẫu 20

3.3 Kết quả nghiên cứu kí sinh trùng 22

3.3.1 Thành phần loài ký sinh trùng 22

3.3.2 Đặc điểm các loài ký sinh trùng trên 25

3.4 Kết quả nghiên cứu vi khuẩn 27

3.4.1 Kết quả nuôi cấy phân lập và định danh vi khuẩn 27

4.3.2 Kết quả thử độ nhạy kháng sinh 34

3.5 Kết quả nghiên cứu nấm 37

PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUÂT Ý KIẾN 4.1 Kết luận 38

4.2 Đề xuất ý kiến 39

TÀI LIỆU THAM KHẢO 40

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 3.1: Các thông số môi trường nuôi cá thia đồng tiền ba chấm 19

Bảng 3.2: Các dấu hiệu bệnh lý và tần số xuất hiện 21

Bảng 3.3: Thành phần loài và CĐCN, TLCN ký sinh trùng trên cá thia đồng tiền ba chấm 23

Bảng 3.4: Kết quả phản ứng sinh hóa và định danh vi khuẩn 30

Bảng 3.5: Tần số bắt gặp các chủng vi khuẩn 31

Bảng 3.6: Tính nhạy cảm của vi khuẩn đối với kháng sinh 35

DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cá thia đồng tiền ba chấm (Dascyllus trimaculatus) 5

Hình 2.2: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu thành phần ký sinh trùng và vi sinh vật ký sinh 13

Hình 3.1: Một số hình ảnh cá thia bệnh 20

Hình 3.2: Trichodina sp 25

Hình 3.3: Ceratomyxa sp 25

Hình 3.4: Myxobolus sp 25

Hình 3.5: Haliotrema sp 26

Hình 3.6: Prosohynchus pacificus 26

Hình 3.7: Hysterolectitha nahaensis 27

Hình 3.8: Goezia sp 27

Hình 3.9: Một số hình ảnh phân lập và định danh vi khuẩn 29

Hình 3.10: Biểu đồ tần số bắt gặp các chủng vi khuẩn phân lập 32

Hình 3.11: Kháng sinh đồ của vi khuẩn phân lập 37

LỜI MỞ ĐẦU

Hiện nay, cá cảnh biển đang là thị trường rất sôi động trên thế giới Ước tínhmột tấn cá kinh tế trị giá chỉ 6.000 USD trong khi đó một tấn cá cảnh biển lên đến496.000 USD Hằng năm trên thế giới tiêu thụ khoảng 35 triệu con cá cảnh biển,doanh thu đạt hơn 200 triệu USD [44]

Biển Việt Nam với khu hệ san hô trù phú và hàng ngàn đảo lớn nhỏ là nơi trúngụ của hơn 600 loài cá san hô là tiềm năng lớn cho nghề nuôi và kinh doanh cácảnh biển Cá cảnh mang thương hiệu Việt Nam đã được ưa chuộng ở nhiều nướctrênn thế Hoạt động nuôi và xuất khẩu cá cảnh biển ở , nước ta đã ngày được quantâm hơn hướng tới quy mô công nghiệp Có thể nói cá cảnh sẽ là sản phẩm thúc đẩynhanh kim ngạch xuất khẩu thủy sản của Việt Nam trong năm nhiều năm tới [17] “Một khi NTTS đã phát triển ở mức công nghiệp, thì kỹ thuật quản lý môitrường và dịch bệnh đã trở thành bí quyết quan trọng để đảm bảo sự thành công của

vụ nuôi” (Đỗ Thị Hòa, 2005) Với cá cảnh biển cũng vậy, mặc dù tiềm năng rất dồidào, giá trị kinh tế rất lớn nhưng để đảm bảo cho sự phát triển bền vững thì nhữngnghiên cứu về bệnh và biện pháp phòng trị bệnh là vô cùng cần thiết [6]

Xuất phát từ yêu cầu thực tế trên được sự đồng ý của Bộ Môn Bệnh HọcThủy Sản – Khoa Nuôi Trồng Thủy Sản – Trường Đại Học Nha Trang và sự giúp

đỡ của Phòng Công Nghệ Sinh Học – Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển NuôiBiển, đề tài “ Nghiên cứu công nghệ sản xuất giống và nuôi thương phẩm cá thia

đồng tiền ba chấm Dascyllus Trimaculatus”, Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy

Sản III, tôi đã thực hiện đề tài: “Bước đầu tìm hiểu thành phần ký sinh trùng và

vi sinh vật ký sinh trên cá thia đồng tiền ba chấm (Dascyllus trimaculatus) nuôi

trong hệ thống nuôi tuần hoàn tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Nuôi Biển - Viện Nghiên Cứu NTTS III”.

Đề tài được thực hiện với các nội dung sau:

1 Tìm hiểu hệ thống nuôi và các thông số môi trường nuôi cá thia đồng tiền bachấm tại cơ sở

2 Tìm hiểu thành phần ký sinh trùng ký sinh trên cá thia đồng tiền ba chấm.

3 Tìm hiểu thành phần vi khuẩn ký sinh trên cá thia đồng tiền ba chấm

4 Tìm hiểu thành phần vi nấm ký sinh trên cá thia đồng tiền ba chấm

Đề tài nhằm tìm hiều thành phần ký sinh trùng và vi sinh vật kí sinh trên cáthia đồng tiền ba chấm Trên cơ sở đó, bước đầu góp phần xác định nguyên nhângây bệnh trong qúa trình sản xuất giống và nuôi thương phẩm cá thia đồng tiền bachấm, làm cơ sở cho việc đề xuất biện pháp phòng trị bệnh

Luận văn đã được thực hiện với sự giúp đỡ tận tình của các cơ quan, thầy côgiáo, gia đình và bè bạn Tuy nhiên do kiến thức còn hạn chế, điều kiện nghiên cứucòn nhiều khó khăn nên luận văn khó tránh khỏi thiếu sót Em rất mong nhận được

sự đóng góp của quý thầy cô và bè bạn để luận văn được hoàn thiện hơn

Nha Trang, ngày 25, tháng 06, năm 2009

Sinh viên thực hiện:

Ninh Thị Thúy

Phần 1: TỔNG QUAN

1.1 Sự phát triển của nghề cá cảnh biển

Trước đây trong lĩnh vực thủy sản chủ yếu chỉ mới quan tâm tới các loài cákinh tế đáp ứng nhu cầu về thực phẩm cho con người Tuy nhiên khi cuộc sốngngày một nâng cao nhu cầu các loài sinh vật cảnh có giá trị thẩm mĩ, giải trí ngàycàng nhiều, trước xu thế đó cá cảnh biển đã sớm khẳng định được giá trị to lớn củamình Ước tính một tấn cá kinh tế chỉ trị giá 6.000 USD trong khi đó một tấn cácảnh biển lên đến 496.000 USD [44]

100 USD/con), cá rồng biển (5000 USD/con) [44]

Nhiều nước đã coi việc xuất khẩu cá rạn san hô là một nguồn lợi kinh tế quantrọng Những nước đứng đầu về xuất khẩu cá cảnh là: Philippines, Indonesia, theSolomon Islands, Sri Lanka, Australia, Fiji, Maldives và Palau Riêng xuất khẩu cácảnh biển của Indonesia năm 1993 đạt 3.043 tấn tương đương 8.5 triệu USD Giá trịxuất khẩu hàng năm của Philippin trong giai đoạn 1990-1994 đã đạt tới 6.76 triệuUSD Song song với các nước này, Mỹ, Anh, Hà Lan, Pháp, Đức là những thịtrường tiêu thụ cá cảnh biển trọng điểm (chiếm tới 99%) Ngoài ra, Đài Loan, NhậtBản và Hồng Kông cũng là những thị trường nhập khẩu cá cảnh quan trọng [26]Như vậy, có thể thấy cá cảnh biển là nguồn lợi có giá trị kinh tế lớn chonhững quốc gia có tài nguyên này

1.1.2 Việt Nam

Việt Nam có hơn 3000 km đường biển nằm trong vùng biển nhiệt đới là điềukiện thuận lợi cho các loài cá san hô Đặc biệt, vùng biển miền Trung với những đặcđiểm: ít cửa sông, độ mặn và độ trong cao với nhiều rạn san hô và hàng ngàn đảolớn nhỏ là môi trường lý tưởng của nhóm cá này Nguyễn Hữu Phụng và cs (1995)

đã thống kê được có 635 loài cá sống ở rạn san hô với 62 họ; trong đó có 4 họ

chiếm tỷ lệ lớn nhất là họ cá thia (Pomacentridae), cá bàng chài (Labridae), cá bướm (Chaetodontidae) và cá mó (Scaridae) Riêng quần đảo Trường Sa đã có 219

loài cá san hô thuộc 44 họ, trong đó có 159 loài đặc hữu Đặc biệt, vùng biển NhaTrang được ghi nhận là vùng biển rất đa dạng về cá rạn san hô với 398 loài [13]Những loài cá quý hiếm như cá hoàng đế, cá ngựa đen, cá rồng biển

(Phyllopteryx taeniolatus)…và nhiều loài cá cảnh biển có giá trị xuất khẩu cao như: Amphiprion sp, Dascyllus sp… đều có ở biển Việt Nam [44]

Từ năm 1980 Việt Nam bắt đầu xuất khẩu cá cảnh Cho đến nay nước ta đã gặthái được nhiều thành quả trong trong lĩnh vực này Ước tính hằng năm xuất khẩu cácảnh của Việt Nam đạt doanh thu khoảng 4 triệu USD, riêng năm 2004, đạt gần 10triệu USD, tăng gấp đôi so với 2 năm trước đó (5 triệu USD) Trong đó cá cảnh biểnchiếm khoảng 10% Cá cảnh mang thương hiệu Việt Nam đã có mặt ở nhiều nướcAnh, Đức, Pháp, Thụy Sỹ, Đan Mạch, Canada, Mỹ, Brazil, Đài Loan, Hồng Kông,Nhật Bản và đã được thị trường thế giới đánh giá rất cao về chất lượng cũng nhưchủng loại Việt Nam là quốc gia thuộc một trong ba khu vực có cá cảnh đẹp trênthế giới, bao gồm Nam Mỹ, Châu Phi và Đông Nam Á Có thể nói cá cảnh sẽ là sảnphẩm thúc đẩy nhanh kim ngạch xuất khẩu thủy sản của Việt Nam trong năm nhiềunăm tới [26], [10]

Để phát triển và bảo vệ nguồn lợi này, Việt Nam đã có một số nghiên cứubước đầu về sinh sản nhân tạo một số loài cá cảnh biển có giá trị Cụ thể như: ViệnHải Dương Học Nha Trang đã cho sinh sản nhân tạo thành công cá khoang cổ đỏ

(Amphiprion frenatus), sản xuất giống thành công cũng như nuôi thương phẩm ba loài cá ngựa: cá ngựa đen (Hippocampus kuda), cá ngựa vằn (Hippocampus comes),

cá ngựa gai (H spinosisimuss) Bên cạnh đó, hiện nay tại Trung tâm Nghiên cứu và

Phát triển Nuôi Biển-Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thuỷ Sản III, cá thia đồng tiền

ba chấm cũng đang được nghiên cứu sản xuất giống và nuôi thương phẩm [1]

1.2 Đặc điểm sinh học và giá trị kinh tế của cá thia đồng tiền ba chấm

 Đặc điểm hình thái phân loại

D trimaculatus có thân hình thoi, mình dẹt hai bên, thân có phủ lớp vẩy

lược, chiều dài thân bằng 1.4 -1.6 lần chiều cao thân Miệng nhỏ, răng dạng hìnhnón Cán đuôi nhỏ, vây đuôi hơi lõm vào trong Chúng chỉ có 1 vây lưng, và cũngmang đặc điểm chung của bộ cá vược với vây lưng và vây hậu môn có tia gai rấtphát triển Công thức vây: DX-XII,14–16, AII,12-15, P18-21, công thức đường bên:

4 5

17

10 11



 D trimaculatus có thân màu đen nhung nổi bật với ba chấm trắng, một ở

trước đầu và hai chấm ở hai bên thân, gần gốc vây lưng Những chấm trắng này nổibật khi cá còn nhỏ và mờ dần theo tuổi cá, khi cá trưởng thành chấm trắng trước

đầu gần như mất hẳn Kích cỡ khai thác phổ biến của loài này khoảng10 – 12 cm,kích thước lớn nhất có thể tới 16 cm [34]

 Đặc điểm phân bố và môi trường sống

Ngoài tự nhiên, D.trimaculatus phân bố ở bờ biển nhiệt đới của Tây Ấn Độ

Dương, vùng Tây Bắc của bờ biển Tây Úc, phía bắc của rặng Great Barier,Queensland, phía Nam của Newsouth Wales và đảo Lord Howe, các vùng biểnĐông Phi, Hồng Hải, Đông Á và Đông Nam Á Ở Việt Nam chúng có mặt ở cả 3miền nhưng tập trung chủ yếu ở vùng biển Trung Bộ và nhiều nhất ở khu vựcKhánh Hòa [12]

Cũng giống hầu hết các loài cá thia khác D.trimaculatus thích sống ở vùng có

rạn san hô hoặc vùng biển có đá ngầm và hầu như không di cư đến nơi khác Theo

nghiên cứu của Allen (1999), D.trimaculatus có thể sống được ở độ sâu từ 1 đến

55m, tập trung nhiều nhất ở 4 đến 10m, nhiệt độ 26-28OC, độ mặn từ 32-35o/oo, pH

từ 7.9-8.6 Ở giai đoạn giống, cá thia thường phân bố ở các vùng biển gần bờ nơi cóhải quỳ, nhím biển hay cỏ chân ngỗng Chúng có tập tính kết đàn và giai đoạn giốngchúng thường sống cộng sinh với hải quỳ Chúng bơi lội xung quanh hải quỳ, quấnmình vào những xúc tu và dần dần bơi vào nằm lên bên trên thân của hải quỳ Cáđược hải quỳ che chở, chúng thường tha thức ăn vào đây như một nơi dự trữ thức ăn

và hải quỳ cũng sử dụng nguồn thức ăn này (trích theo Nguyễn Hữu Phụng, 2005)

Đặc điểm dinh dưỡng

Cá thia có miệng nhỏ, răng dạng nón, dạ dày dạng túi tròn, ruột ngắn Cấutrúc hệ tiêu hóa của loài thể hiện tính ăn thiên về động vật

D.trimaculatus là loài cá ăn tạp, thức ăn tự nhiên của chúng bao gồm cả tảo

rong đáy và mảnh vụn hữu cơ, giáp xác nhỏ, copepoda và động vật không xươngkhác Giai đoạn nhỏ chúng ăn những sinh vật nhỏ, rong tảo cộng sinh và phân bốtrên rạng san hô Ngoài ra, Allen (1991) còn tìm thấy trong dạ dày cá cả trứng cáthia đồng tiền Trong điều kiện nuôi nhốt chúng ăn nhiều loại thức ăn được cungcấp: thức ăn công nghiệp, thức ăn tươi sống, thậm chí cả rau cỏ Do vậy khi nuôitrong điều kiện nhân tạo không khó để tập cho chúng ăn thức ăn công nghiệp Loài

này cũng khá háu ăn và hiếu chiến nên việc cung cấp đầy đủ thức ăn có vai trò quantrọng trong việc tạo quan hệ ôn hòa cho cá nuôi (theo Nguyễn Hữu Phụng, 2005).

Đặc điểm sinh học sinh sản

Ở nước ta, cá thia đồng tiền ba chấm sinh sản quanh năm nhưng tập trung từtháng 3 tới tháng 10 Cá trưởng thành dài khoảng 12,5cm Vào mùa sinh sản màuđen nhung trên cơ thể cá trở nên đậm hơn làm ba chấm trắng càng trở nên nổi bật.Gần giống với các loài cá nước mặn khác, loài này cũng làm tổ đẻ trứng Khi chuẩn

bị sinh sản chúng chọn một nơi để làm tổ, vật liệu làm tổ là sỏi đá và san hô gẫy.Chúng bảo vệ lãnh thổ của mình và sẵn sàng tấn công những cá khác xâm nhập lãnhthổ của chúng Sau khi cá cái đẻ trứng vào tổ, cá đực chăm sóc trứng và dọn dẹp tổbằng cách ăn những trứng không thụ tinh hay trứng bị thoái hóa [12]

1.2.2 Giá trị kinh tế của cá thia đồng tiền ba chấm

Họ cá thia ( Pomacentridae ) là nhóm cá rạn san hô có sự phong phú về

chủng loại (28 chủng, 321 loài) và sự đa dạng về kiểu dáng, sắc màu nên có sức thuhút lớn đối với những người chơi và kinh doanh cá cảnh Theo sự phân tích dữ liệuxuất nhập khẩu cá cảnh của tổ chức GMAD (The Global Marine AquariumDatabase) giai đoạn 1997- 2003, hoạt động kinh doanh cá cảnh trên toàn thế giớidiễn ra với 1.471 loài, số lượng trung bình mỗi năm khoảng 20 – 24 triệu con

Trong đó các loài thuộc họ cá thia (Pomacentridae) chiếm tỉ lệ lớn nhất (xuất khẩu

chiếm 47% và nhập khẩu chiếm 43%) Đặc biệt có tới 6 loài của họ cá này nằmtrong ‘top ten’ cá cảnh đầu bảng của thế giới Bao gồm: 2 loài cá khoang cổ(anemonefish) và 4 loài cá thia (damselfish) [24]

Ở nước ta, cá thia cũng là họ đa dạng nhất ( 66 loài) và có tỷ trọng lớnchiếm 29% về số lượng, 13% về giá trị trong xuất khẩu cá cảnh của Việt Nam; giábán trung bình mỗi con cá khoảng 0.7-2.5 USD Theo Võ Sĩ Tuấn trong chươngtrình giám sát sinh thái khu bảo tồn biển vịnh Nha Trang, Khánh Hòa, giai đoạn

2002 – 2005: Cá kích thước nhỏ (1 – 10cm), đặc biệt họ cá thia Pomacentridae và các loài Chromis weberi, C.ternatensis, Dascyllus reticulatus, D.trimaculatus,

chiếm ưu thế trong tổng độ phong phú của cá Các loài này có mật độ tương đốicao tại tất cả các điểm giám sat [26], [17]

Theo nghiên cứu của Yunaldi và cs (2005) về cá cảnh biển xuất khẩu ởPejarakan, Sumber Kima và Penyabangan, bắc Bali : trong tổng số 164 loài thì cáthia là loại cá cảnh biển ưu thế nhất Đây là nhóm cá có vùng phân bố rộng, đa dạng

về thành phần loài và hầu hết các loài trong nhóm này đều không kén chọn thức ăn,sức đề kháng cao, khả năng chống chịu tốt với các biến động thủy lý, thủy hóa củamôi trường, có tập tính sống bầy đàn và dễ hòa hợp với các loài cá và sinh vật kháctrong bể nuôi Do đó không ít loài trong nhóm này được xếp vào top đầu bảng như:

Chromis viridis, D.aruanus, D trimaculatus, D albisella [42]

Trong đó, D trimaculatus đứng thứ 6 trong top ten cá cảnh xuất khẩu toàn thế

giới, là 1 trong 15 loài đứng đầu ở Pejarakan (với tổng số 123 loài ), 1 trong 13 loàiđầu bảng ở Penyabangan và 1 trong 5 loài cá cảnh có sản lượng cao nhất ở

Sumberkima Hơn nữa, D.trimaculatus còn đứng thứ 2 trong topten của Sri Lanka,

một trong những nước đứng đầu về xuất khẩu cá cảnh [26]

Với nhiều ưu điểm về hình dáng màu sắc, đặc biệt là khả năng thích nghi vớimôi trường cao và sức đề kháng tốt, dễ nuôi trong điều kiện nhân tạo,

D.trimaculatus đã thực sự thu hút được người chơi cá cảnh Loài cá thia đồng tiền

ba chấm này đã khẳng định vị trí của mình vươn lên đứng thứ 6 trong top ten cácảnh nhập khẩu vào thị trường USA - thị trường có đòi hỏi cao về chất lượng cánhập khẩu đồng thời cũng là thị trường tiêu thụ cá cảnh lớn nhất thế giới (69%).Điều này có ý nghĩa rất lớn trong việc đánh giá về giá trị kinh tế của loài cá cảnhbiển xinh đẹp này [24]

Như vậy có thể nói D.trimaculatus là một trong những loài cá cảnh biển có

giá trị xuất khẩu cao trên thị trường thế giới Hiện nay, loài này không nằm trong

‘danh sách đỏ’ (những loài có nguy cơ tuyệt chủng) nhưng một khi nhu cầu thịtrường càng cao thì việc khai thác càng mạnh sẽ dẫn đến nguy cơ cạn kiệt nguồnlợi Do đó những nghiên cứu sâu hơn về đặc điểm của loài cũng như những nghiêncứu về sinh sản nhân tạo và phòng trị bệnh cho cá là cần thiết

1.3 Những nghiên cứu về bệnh trên cá thia đồng tiền ba chấm

Cá cảnh Việt Nam đã thực sự thu hút được thị trường thế giới Đặc biệt, Mỹ,Châu Âu – những thị trường khó tính nhất cũng đã trở thành thị trường nhập khẩu

cá cảnh lớn của Việt Nam, Mỹ chiếm 35%, châu Âu hơn 60% tổng kim ngạch xuấtkhẩu cá cảnh cả nước Tuy nhiên, hiện nay tình trạng bệnh trên cá cảnh đang là ràocản rất lớn [12]

Tp Hồ Chí Minh là nơi hoạt động nuôi và xuất khẩu cá cảnh rất sôi động.Trong đó, 2 loài có giá trị xuất khẩu lớn nhất là cá chép và cá vàng Đây cũng là 2loài nhạy cảm với bệnh virus mùa xuân (SVC- Spring Viraemia of Carp) và virusgây bệnh mụn dộp (KHV) Hiện thành phố có hơn 292 cơ sở nuôi và kinh doanh cácảnh nhưng mới chỉ có 3 cơ sở thực hiện tốt các yêu cầu của Mỹ trong suốt 2 nămqua và được Cục Thú y (Bộ NN-PTNT) trao giấy chứng nhận vùng an toàn dịchbệnh đối với virus này được xuất khẩu 2 loài cá trên Điều này đã mở ra khá nhiều

hy vọng cho việc nâng cao kim ngạch xuất khẩu cá cảnh Tuy nhiên, đó mới chỉ làmột chặng trong hành trình mở rộng thị trường xuất khẩu cá cảnh Vì cho đến nay,tại thị trường tiêu thụ cá cảnh lớn nhất là châu Âu, Việt Nam vẫn chưa được phépxuất khẩu 2 loại cá này, vì ở các thị trường này các quy định còn chặt chẽ hơnnhiều Và ngay cả thị trường Mỹ, cũng không phải đã hết “rào cản” Sau khi chophép nhập khẩu 2 loài cá trên, phía Mỹ cho biết 2 năm nữa (2011), nếu không cógiấy chứng nhận an toàn đối với hội chứng lở loét trên cá (EUS) thì việc xuất khẩucũng sẽ bị tắc như tình trạng cá chép Nhật và cá vàng mấy năm qua Mà hội chứngnày lại liên quan đến nhiều loại cá khác nhau chứ không phải chỉ 2 loại cá trên Vìvậy, việc vượt qua rào cản kỹ thuật này đến rào cản kỹ thuật khác như là nhữngcuộc “trường chinh” trong quá trình chinh phục và mở rộng thị trường cá cảnh xuấtkhẩu [12]

Hiện chưa có thông báo nào về tình trạng tương tự trên cá cảnh biển của ViệtNam Tuy nhiên, một khi nghề nuôi và kinh doanh cá biển thực sự phát triển màkhông có những kiến thức cần thiết về quản lý và chăm sóc sức khỏe cá thì nhữngrủi ro trên là không thể tránh khỏi Do đó, để đảm bảo cho sự phát triển bền vững

của ngành giàu tiềm năng này, những nghiên cứu về bệnh và biện pháp phòng trịbệnh cho cá cảnh biển là vô cùng cần thiết.

Dù vậy, đến nay những nghiên cứu về cá cảnh nói chung và D.trimaculatus

nói riêng còn rất hiếm Một số bệnh trên loài này đã được báo cáo như:

 Bệnh do dinh dưỡng: bệnh gan nhiễm mỡ (Lipoid liver disease) do cá cảnhchủ yếu được nuôi bằng thức ăn công nghiệp Khi hàm lượng lipid trong thức ănquá cao sẽ dẫn tới tình trạng tích mỡ thừa ở gan làm ảnh hưởng tới chức năng củagan và sức khỏe của cá Weisman và Miller (2006) đã thu những mẫu cá thia xanh(Blue Damselfish) có dấu hiệu bị sình bụng để kiểm tra sự biến đổi mô học Kết quảcho thấy sự hiện diện của những không bào và sự chiếm chỗ của những đám tế bào

mỡ (adipocytes) ở gan [30]

Bệnh do virus:

-Bệnh hoại tử thần kinh (viral nervous necrosis-VNN) do Betanodaviruses:Dennis Kaw Gomez và cs (2006) đã kiểm tra 237 mẫu cá (65 loài cá biển, 12 loài cá

nước ngọt) ở Seoul, South Korea Kết quả cho thấy D trimaculatus cùng 2 loài cá

nước ngọt và 7 loài cá biển khác có kết quả dương tính với virus này [25]

- Bệnh Lymphocyctis: Đây là bệnh do Iridovirus gây ra với dấu hiệu đặctrưng là sự tạo thành các khối u nhỏ do sự phì đại của các tế bào nhiễm virus Cáckhối u này có thể nằm riêng rẽ hoặc tụ lại thành từng cụm trên da, vây và mang của

cá Mầm bệnh virus phát tán ra ngoài môi trường khi các khối u này bị vỡ và lantruyền từ cá khỏe sang cá bệnh qua các vết thương hở Đôi khi các khối u vỡ ra gây

lở loét và xuất huyết Bệnh không gây chết nhiều nhưng lại làm mất đi vẻ đẹp - vốn

là yếu tố quyết định giá trị đối với mỗi loài cá cảnh Adrian và Ogle (1977) lần đầutiên đã được phát hiện bệnh Lymphocystis trên 4 loài thuộc giống cá thia đồng tiền:

D.trimaculatus, D.aruanus, D.melanurus, và black-tailed humbug Ở nước ta theo

Đỗ Thị Hòa và cs, 2005: Tần xuất gặp của bệnh lymphocystic ở cá biển nuôi tạiKhánh Hòa không cao, trong đó chỉ gặp bệnh này ở cá giò, cá chẽm, các loài cákhác chưa gặp bệnh này Có tới 80% trường hợp bệnh này xuất hiện vào mùa mưa.Bệnh có thể gặp ở các cỡ cá khác nhau, nhưng vẫn gặp ở cá con cao hơn [18], [7]

 Bệnh do vi khuẩn:

Chủng vi khuẩn Vibrio damsela đã được Milton Love và cs (1981) phân lập

và xác định là tác nhân gây bệnh lở loét trên da của loài cá Damselfish nhiệt

đới-Chromis punctipinnis Kết quả cảm nhiễm vi khuẩn này trên một số loài cá cho thấy

những loài cá thuộc họ cá thia (Damselfish) đều thể hiện dấu hiệu bệnh lý nhưngoài tự nhiên nhưng không thấy dấu hiệu bệnh trên những nhóm cá khác [36]

Zanoni cà cs (2008) đã phân lập được vi khuẩn Gram dương Mycobacterium

từ gan, thận, lách của những mẫu cá bị lở loét,đốm trắng thận thuộc nhiều loài cácảnh khác nhau (gồm cả cá tự nhiên và cá cảm nhiễm ngược) Trong đó có

D.trimaculatus và một số loài khác thuộc Damselfish [43]

 Bệnh ký sinh trùng:

- Cá thia cũng thường gặp một số bệnh ký sinh trùng gây ra bởi các tác nhân

như: sporozoas, Cryptocaryon, Oodinium, monogena, digenae, nematoida, crustaceans [22]

 Bệnh do nấm:

Bệnh nấm ở cá cảnh biển ít khi xảy ra và chúng thướng đóng vai trò là tácnhân thứ cấp nhiều hơn Một số tác nhân nấm bệnh đã được tìm thấy trên cá cảnhbiển như: nấm hạt Ichthyophonus chủ yếu nội ký sinh gây ra những u hạt trắngtrong các nội quan, đôi khi bệnh còn thể hiện cả trên da của cá Bên cạnh đó,exophialiosis cũng đã được biết đến là một bệnh do nấm ký sinh trên cá ngựa Bệnhkhông gây lở loét hay thương tổn trên da mà những thương tổn bên trong nội quan

là chủ yếu, đặc biệt là ở gan Bệnh dẫn tới tình trạng hôn mê và mất phương hướng

ở cá nhưng vẫn chưa có cách chữa trị Hiện vẫn chưa có thông báo nào về bệnh donấm trên cá thia đồng tiền ba chấm.[44]

Nhìn chung , những nghiên cứu về bệnh trên cá thia đồng tiền ba chấm cònrất hiếm Đây cũng là một khó khăn lớn khi chúng ta muốn phát huy nguồn lợi này

Ở nước ta cá thia đồng tiền ba chấm là đối tượng cá cảnh biển mới bước đầuđược quan tâm Hiện nay tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Nuôi Biển – Việnnghiên cứu NTTS III đang nghiên cứu sinh sản nhân tạo loài cá này nhằm đáp ứng

nhu cầu thị trường và giảm áp lực khai thác ngoài tự nhiên Tuy nhiên vấn đề đặt rahiện nay là trong quá trình sản xuất các đàn cá bố mẹ thường xuất hiện một số dấuhiệu bệnh gây ảnh hưởng xấu tới sức khỏe cá và gây chết cá như:

 Cá bị phồng mắt, sau vài ngày mắt cá bình thường trở lại

 Một số trường hợp cá bị xuất huyết trên da và gốc vây

 Cá bị lồi mắt kèm theo các dấu hiệu như: vây bị mòn cụt, da bị tróc vảy, lởloét, mắt lồi đục trắng căng phồng đến khi bị nổ và bị mù, cá bỏ ăn, bơi lội khôngbình thường, toàn thân trầy xước và cá chết sau 4-5 ngày thậm chí là sau 2 ngàynuôi và vẫn chưa xác định được nguyên nhân

Từ thực tế trên, để đảm bảo cho sự phát triển bền vững của nghề cá cảnh giàutiềm năng này thì những nghiên cứu về bệnh và biện pháp phòng trị bệnh trên cáthia đồng tiền ba chấm nói riêng và cá cảnh nói chung là rất cần thiết

Phần 2 : PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu

Nghiên cứu được thực hiện từ 09/03 -21/06/2009 tại các cơ sở của Việnnghiên cứu NTTS III : -Thu mẫu tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Nuôi Biển

-Phân tích mẫu tại phòng vi sinh- dự án NUFU

Đối tượng nghiên cứu: các giống loài ký sinh trùng và vi sinh vật ký sinhtrên cá thia đồng tiền ba chấm nuôi tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển NuôiBiển-Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thuỷ Sản III

2.2 Tìm hiểu hệ thống nuôi và các thông số môi trường nuôi:

- Thu thập số liệu thứ cấp

-Trực tiếp phỏng vấn cán bộ kỹ thuật tại cơ sở

2.3 Nghiên cứu thành phần ký sinh trùng và vi sinh vật ký sinh

2.3.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu:

Hình 2.1: Sơ đồ nội dung nghiên cứu thành phần ký sinh trùng và vi sinh vật ký sinh

NC nấm (mang, vây, vết loét, gan, thận, lách)

Nuôi cấy, phân lập

Nuôi cấy, phân lập

Phân loại

Tính CĐCN,

TLCN

Mẫu cá

3.2.2 Phương pháp thu mẫu và xử lý mẫu:

Thực hiện phương pháp thu mẫu chọn lọc: Thu những mẫu cá có biểu hiệnbệnh lý : cá yếu, bơi lờ đờ, mắt lồi, có các vùng da bị bì tróc vẩy và xuất huyết, cácvây xơ mòn cụt…

Mẫu cá sống được thu và vận chuyển về phòng thí nghiệm bằng thùng xốpchứa bao nilon đựng nước biển có sục khí Khi thu mẫu kết hợp ghi chép các thôngtin về thời gian địa điểm thu mẫu, loài cá, nguồn giống, chế độ chăm sóc… khôngthu mẫu cá chết Cá thu về trong thời gian nghiên cứu được nuôi trong bể compositechứa nước biển có sục khí

Trước khi tiến hành nghiên cứu phải quan sát bằng mắt thường các dấu hiệubệnh lý bên ngoài của cá: Trạng thái, màu sắc, da, vây, vẩy…Tiến hành đo chiềudài, cân khối lượng và ghi chép lại các thông tin

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu ký sinh trùng

Áp dụng phương pháp nghiên cứu ký sinh trùng toàn diện trên cá của Dogiel

1929 có sửa đổi bổ sung bởi Hà Ký ( 1993), Bùi Quang Tề ( 2002), Đỗ Thị Hòa(2005)…Nghiên cứu chỉ tiến hành kiểm tra ký sinh trùng ở các cơ quan ngoại quan

và một số cơ quan nội quan như: mật, dạ dày, ruột, dịch trong mắt.[4], [8], 15]

 Phương pháp thu mẫu ký sinh trùng:

Cạo nhớt da lên lam, quan sát dưới kính hiển vi để phát hiện ký sinh trùng.Giải phẫu cá tách các cơ quan ngoại quan như vây, mang, nắp mang cho vàocác hộp lồng chứa nước biển; các cơ quan nội quan như: ruột, dạ dày, mật để trongcác hộp lồng chứa nước muối sinh lý 0.85%

Mang, ruột và dạ dày khi quan sát bằng kính giải phẫu hoặc mắt thường có thể

tìm thấy ký sinh trùng có kích thước lớn như: giun tròn, Digena, Monogena Đồng

thời cạo nhớt soi dưới kính hiển vi để phát hiện trùng có kích thước nhỏ hơn

Dịch mật, dịch mắt: dàn mỏng trên lam để quan sát dưới kính hiển vi

Chú ý khi soi dưới kính hiển vi luôn soi lần lượt từ các độ phóng đại thấp đếncao tránh bỏ sót trùng

 Phương pháp cố định, làm tiêu bản:

Đối với Protozoa: sau khi phết lam, cố định bằng formol 10%, để khô tự nhiên rồi tiến hành nhuộm Nitrat bạc với trichodina, chilodoneella và nhuộm Hematoxiline với các Protozoa khác ( trừ Cnidosporidia, Sporzoa).

Đối với Monogena chọn những mẫu sạch không bị vỡ, cố định bắng cồn 700

và làm tiêu bản không cần nhuộm

Digena: tách trùng lên lam sạch, nhỏ acid glacial acetic lên để hút nước sau đó

nhỏ thuốc nhuộm carmine để khoảng 5 phút Quan sát nếu thấy trùng bắt màu đạtthì rửa nhẹ bằng nước cất rồi nhỏ acid glacial acetic một lần nữa để làm khô mẫurồi gắn bom canada giữ tiêu bản

Giun tròn, giáp xác có vỏ kitin dày không bắt màu thuốc nhuộm nên chỉ cốđịnh trong cồn 700 khi cần lấy ra làm trong và quan sát không cần nhuộm hay làmtiêu bản

 Phương pháp đo, đếm ký sinh trùng:

Có thể đếm trùng bằng mắt thường, kính giải phẫu hoặc kính hiển vi tùy theokích thước trùng

Đo những trùng có kích thước lớn bằng thước hoặc đo bằng kính giải phẫuhoặc kính hiển vi có gắn thước chia vạch với những trùng có kích thước nhỏ hơn

(trùng/cá)

CĐCN = Tổng số trùng quan sát được

Tổng số thị trường kính kiểm tra

(Trùng/thị trường kính)

 Phương pháp phân loại ký sinh trùng:

Phân loại động vật đơn bào ký sinh dựa vào tài liệu của Lom và Dykova(1992) [33]

Phân loại động vật đa bào ký sinh dựa theo chỉ dẫn của các tác giả trong vàngoài nước như: Wiliams và Jones (1994); Bùi Quang Tề (1997) [41], [15]

2.3.4 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn

Dựa theo phương pháp nghiên cứu bệnh vi khuẩn ở cá và động vật thủy sản của

M Eaddin (1980), Frerichs (1993), Holt và cs (1993), Đỗ Thị Hòa (2005) [31],[27], 32, [4]

Vi khuẩn được phân lập từ gan, thận, lách (một số mẫu còn phân lập từ mắt vànão) của cá và cấy trên các môi trường phân lập, nuôi cấy vi khuẩn ở 350C trongthời gian 18- 24h Chọn chủng vi khuẩn dựa vào vi khuẩn ưu thế trên đĩa thạch.(Các mô đích được sát trùng bằng cồn 700trước khi lấy và được rửa lại 2-3 lần bằngnước muối sinh lý vô trùng rồi dùng đũa thủy tinh giã nhuyễn tạo thành huyền dịchchuẩn bị cho nuôi cấy, phân lập)

 Phương pháp nuôi cấy, phân lập

 Môi trường phân lập

Môi trường tổng hợp: Trypticase Soya Agar (TSA) + NaCl 2%

Môi trường chọn lọc: Thiosulphate Citrate Bilesalt Sucrose Agar (TCBS)

Môi trường tăng sinh: Trypticase Soya Broth (TSB)

Môi trường được hấp tiệt trùng ở 121oC trong 15 phút ( trừ TCBS )

 Nuôi cấy tăng sinh:

Lấy 1 ít dịch nhuyên đã chuẩn bị cấy vào môi trường tăng sinh TSB + NaCl 2%,đặt vào tủ ấm sau 18-24h thu được dịch khuẩn đã tăng sinh Đối với mắt và thận lâymẫu cấy trực tiếp lên môi trường tăng sinh

 Nuôi cấy phân lập:

Có thể cấy trực tiếp từ mẫu ( thận ,mắt) hoặc cấy từ dịch khuẩn (đã tăng sinhhoặc chưa) Dùng que cấy đầu tròn hơ nóng đỏ trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội, lấydịch khuẩn cấy lên các đĩa thạch chứa các môi trường TSA, TCBS đặt trong tủ ấm

350C trong 18-24h Mục đích: cấy được các khuẩn lạc rời, dựa vào màu sắc, hìnhdạng, số lượng khuẩn lạc để chọn chủng vi khuẩn và nuôi cấy thuần chủng.

 Nuôi cấy thuần chủng :

Chọn những chủng có khuẩn lạc rời, chiếm ưu thế trên môi trường đã phân lập.Dùng que cấy vô trùng lấy chủng vi khuẩn nghi ngờ cấy trên đĩa lồng TSA +2%NaCl đặt trong tủ ấm 350C trong 18h-24h Sau khi phân lập được chủng thuần cóthể tiến hành định danh ngay Hoặc cấy giữ chủng để định danh sau

Kiểm tra khả năng chịu muối của vi khuẩn ở các nồng độ 0o/o, 3o/o, 5o/o, 7o/o,

10o/o.

Định danh vi khuẩn dựa vào kết quả các phản ứng sinh hóa và hệ thống phânloại vi khuẩn của Jean F Mac Faddin (1981), Frerich (1993), Holt và ctv (1994)…[34], [30], [32]

 Phương pháp làm kháng sinh đồ:

Lập kháng sinh đồ theo phương pháp đĩa giấy của Kirby Bauer: Chủng vi khuẩncần nghiên cứu phải được nuôi cấy trên TSA trước đó 18-24h rồi lấy 1 số khuẩn lạccủa vi khuẩn này phân tán trong nước muối 2% vô trùng để đạt mật độ tương đương

108 tb/ml Lấy 0.1ml dịch khuẩn cấy láng đều lên đĩa thạch TSA, để khô mặt thạch(khoảng 5-10 phút) rồi đặt lên mặt thạch các đĩa kháng sinh (4-5 đĩa/hộp lồng) saocho các đĩa kháng sinh cách đều nhau và cách thành hộp lồng 1.5-2 cm

Lật ngược hộp lồng, đặt trong tủ ấm 350C, sau 24h đo đường kính vòng vôkhuẩn từng loại kháng sinh và so sánh với độ nhạy chuẩn để xác định độ nhạy củakháng sinh.

2.3.5 Phương pháp nghiên cứu nấm:

Dựa theo tài liệu của Alexopoulos (1962), Bùi Quang Tề (1995, 1997), ĐỗThị Hoà và cộng tác viên (2003)

 Phương pháp soi tươi: lấy một ít mô đích: gan, thận, lách, mang, vây đặt lên lamsạch, dùng lamen ép dàn mỏng mô và quan sát dưới kính hiển vi ở các độ phóng đạikhác nhau

 Môi trường nuôi cấy: Sabouraud Aga (SA) + NaCl 2% hấp tiệt trùng có bổ sungStreptomycine, Penicinine để ức chế sự phát triển của các vi khuẩn Gram âm vàGram dương

 Phương pháp nuôi cấy, phân lập:

Dùng que cấy hoặc panh vô trùng lấy một ít mô đích (gan, thận, lách, mang,vây) cấy lên đĩa môi trường SA, nuôi cấy trong tủ ấm 350C từ 3-5 ngày Sau khinấm phát triển, tiến hành cấy thuần sang hộp lồng khác (dùng que cấy hoặc phươngpháp đục lỗ), soi tươi hoặc nhuộm MG để quan sát các đặc điểm khuẩn ty, bào tử vàphân loại nấm

2.4 Phương pháp xử lý số liệu:

Số liệu được xử lý và vẽ đồ thị bằng phần mềm M Excel

Phần 3 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

3.1 Kết quả tìm hiểu hệ thống nuôi và các thông số môi trường

Cá thia đồng tiền ba chấm (D trimaculatus) là đối tượng mới đang được thử

nghiệm sản xuất giống nhân tạo tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Nuôi Viện nghiên cứu NTTS III Tại đây, cá được nuôi trong nhà bằng hệ thống nuôituần hoàn với các bể composite 6m3 có giàn sục khí, hệ thống cấp nước (nước cấp

Biển-đã được lọc và xử lý cực tím), mỗi bể có bố trí một hộp lọc nước tuần hoàn riêng

Do cá thia dễ thích nghi môi trường và tương đối dạn nên không đặt san hô và cácgiá thể khác trong bể để dễ kiểm soát và vệ sinh bể

Cá nuôi đang được bố trí thí nghiệm trong các lô thức ăn công nghiệp vàthức ăn cá tạp Cá được cho ăn 2 lần/ngày (lúc 8h và 14h) với khẩu phần ăn là 5%trọng lượng thân/ngày với thức ăn cá tạp hoặc 3% trọng lượng thân/ngày với thức

ăn công nghiệp Hàng ngày đều xiphon đáy 2 lần vào lúc 10h và 16h Thay nước 2ngày 1 lần, mỗi lần thay 30-40% thể tích nước nuôi

Quá trình nuôi của cơ sở có theo dõi các yếu tố môi trường, chủ yếu là nhiệt

độ, độ mặn và pH Việc đo các thông số này được tiến hành ngày 2 lần vào 7h30 và14h30, pH và độ mặn chỉ đo một lần vào buổi sáng Kết quả tìm hiểu các thông sốmôi trường được trình bày trong bảng sau:

Bảng 3.1: Các thông số môi trường nuôi cá thia đồng tiền ba chấm

Thời gian Nhiệt độ (oC) pH Độ mặn (0/00)

0.190C Chênh lệch pH giữa các ngày là 0.3, chênh lệch độ mặn là 1.40/00 Nhiệt độ,

pH, độ mặn cao nhất và thấp nhất giữa các ngày lần lượt là 26.050C và 27.10C; 7.9

và 8.2; 320/00 và 33.40/00 Điều đó cho thấy các thông số môi trường tương đối ổnđịnh không có biến động đặc biệt trong ngày và giữa các ngày

Mặt khác, theo Allen (1999), ngoài tự nhiên điều kiện sống thích hợp của

D.trimaculatus là nhiệt độ: 26-280C, độ mặn: 32-35o/oo, pH: 7.9-8.6 Như vậy có thểthấy các thông số môi trường nuôi tại cơ sở là thích hợp cho loài cá này.[13]

Nhìn chung do nuôi trong nhà nên các thông số môi trường ít chịu tác độngcủa các yếu tố bên ngoài nên tương đối ổn định và thuận lợi cho cá

3.2 Kết quả thu mẫu

Trong thời gian nghiên, 15 mẫu cá bệnh đã được thu với những dấu hiệu bấtthường đặc trưng là: lồi mắt, mòn cụt các vây, xuất huyết dưới da và gốc vây Cá cónhững dấu hiệu trên thường kèm theo màu sắc thân nhợt nhạt, yếu, mắt lồi, thủytinh thể đục trắng làm cho cá không bắt được mồi Cuối cùng mắt bị nổ, loét vàchết Giải phẫu quan sát dấu hiệu nội quan thường thấy: gan nhợt nhạt, có nhiềuchấm đen li ti hoặc có đám bầm tím trên gan, một só mẫu mật sưng, gan và các nộiquan khác nhão, tích dịch Hầu hết cá có những dấu hiệu trên đều gặp ở cá cỡ lớnvới khối lượng trung bình: 47±2 g và chiều dài trung bình: 11.5± 1.5 cm Khônggặp ở cá cỡ nhỏ

Hình 3.1: Một số hình ảnh cá thia bệnh