Nghiên cứu khả năng tăng sinh của tế bào gốc mỡ và ảnh hưởng của chúng đến tế bào da nuôi cấy định hướng trong điều trị vết thương

Header Page of 148 Đ IăH CăQU CăGIAăHĨăN I TR NGăĐ IăH CăKHOAăH CăT ăNHIÊN - ĐOÀNăHOÀNGăTHU NGHIÊNăC UăKH ăNĔNGăTĔNGăSINHăC AăT ăBÀOă G CăM ăVÀă NHăH NGăC AăCHÚNGăĐ NăT ă BÀOăDAăNUỌIăC YăĐ NHăH TR ăV TăTH NGăTRONGăĐI Uă NG LU NăVĔNăTH CăSƾăKHOAăH C HƠăN iăậ 2014 Footer Page of 148 Header Page of 148 Đ IăH CăQU CăGIAăHĨăN I TR NGăĐ IăH CăKHOAăH CăT ăNHIÊN - ĐOÀNăHOÀNGăTHU NGHIÊNăC UăKH ăNĔNGăTĔNGăSINHăC AăT ă BÀOăG CăM ăVÀă NHăH NGăC AăCHÚNGăĐ Nă T ăBÀOăDAăNUỌIăC YăĐ NHăH TR ăV TăTH NGăTRONGăĐI Uă NG ChuyênăngƠnhă:ăSinhăh căthựcănghi m Mưăs ăăăăăăăăăăăăăă:ă60420114 LU NăVĔNăTH CăSƾăKHOAăH C NG IăH NGăD NăKHOAăH C TS.ăĐinhăVĕnăHơn PGS TS Ngô Giang Liên HƠăN iă- 2014 Footer Page of 148 Header Page of 148 L IC M N Trước tiên, em xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới Tiến sĩ Đinh Văn Hân PGS TS Ngô Giang Liên – người thầy tận tâm, nhiệt tình b o, hướng dẫn động viên, cổ vũ tinh thần cho em suốt trình thực đề tài luận văn th c sĩ Em xin bày tỏ lời c m ơn sâu sắc đến thầy cô giáo gi ng d y em năm qua, kiến thức mà em nhận gi ng đường hành trang giúp em vững bước tương lai Em xin chân thành c m ơn Ban Giám hiệu, Phòng Sau đ i học, Khoa Sinh học, Bộ môn Sinh học Tế bào - Trường Đ i học Khoa học Tự nhiên – Đ i học Quốc gia Hà Nội t o điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa học Xin chân thành c m ơn cô chú, anh chị b n đồng nghiệp t i Khoa Labo nghiên cứu ứng dụng điều trị Bỏng – Viện Bỏng Quốc Gia quan tâm, hỗ trợ, t o điều kiện để em thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời tri ân đến gia đình, b n bè tất c người thân yêu động viên, khích lệ, giúp đỡ em trình học tập để em hoàn thành b n luận văn này! ảà Nội, ngày 16 tháng 08 năm 2014 ảọc viên Đoàn ảoàng Thu Footer Page of 148 Header Page of 148 M CăL C Đ TăV NăĐ .1 Ch ngă1: T NGăQUANăTĨIăLI U 1.1 Cácăt ăbƠoăch ăy uăthamăgiaăli năv tăth ng 1.2.ăCôngăngh ămôăậ t ăbƠoălƠmălƠnhăv tăth ng 1.2.1 T năth ngădaăvƠănhuăcầuăch ăt oăch ăphẩmăđi uătr ăv tăth 1.2.2.ăM tăs ălo iăt ăbƠoăvƠăv tăli uăđi uătr ăv tăth 1.3.ăVaiătròăt ăbƠoăg cătrongăli năv tăth ng ngătừănuôiăc yăt ăbƠo ng 11 1.4.ăT ăbƠoăg cătrungămôătừămôăm .15 Ch ngă2: Đ IăT 2.1.ăĐ iăt NGăVĨăPH NGăPHÁPăNGHIÊNăC U 19 ng,ănguyênă- v tăli uănghiênăc u .19 2.1.1.ăăĐ iăt ngănghiênăc u 19 2.1.2.ăHóaăch tăc ăb năchoănghiênăc u 19 2.1.3.ăTrangăthi tăb ăvƠăv tăt 19 2.2 Ph ngăphápănghiênăc u: 20 2.2.1 Thu mô m ăvƠăphơnăl păt ăbƠo 20 2.2.2.ăNhơnăr ngăt ăbƠo 21 2.2.3.ăXácăđ nhăs ăl ngăt ăbƠo: 21 2.2.4.ăXácăđ nhăkh ănĕngăt oădòngă(colony)ăc aăt ăbƠo .22 2.2.5.ăPh ngăphápăđánhăgiáă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg cămôăm ăđ năt ăbƠoădaănuôiă c y 22 2.2.5.1.ăĐánhăgiáă nhăh 2.2.5.2.ăĐánhăgiáă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg cămôăm ăđ nătĕngăsinhănguyênăbƠoăs i 23 ngăc aăt măt ăbƠoăg cămôăm ălênăkh ănĕngădiăc ăc aă nguyênăbƠoăs i 24 2.2.5.3.ăĐánhăgiáă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg căm ăđ nătĕngăsinhăt ăbƠoăsừng 25 2.2.5.4.ăĐánhăgiáă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg căm ăđ năsựădiăc ăt ăbƠoăsừng 26 2.2.6.ăPh Ch ngăphápăch ăt oăt măt ăbƠoăg căm ăchoăthíănghi măđ ngănuôiăc y 28 ngă3: K TăQU ăNGHIÊNăC U .30 3.1.ăĐ căđiểmăphơnăl păvƠăhìnhătháiăt ăbƠo 30 Footer Page of 148 Header Page of 148 3.2.ăKh ănĕngăt oădòngăc aăt ăbƠoă(CFU-F) 36 3.3.ă nhăh ngăt ăbƠoăg căm ălênăsựătĕngăsinhăvƠădiăc ăt ăbƠoădaăquaăthíănghi mă đ ngănuôiăc y 40 3.3.1 Tác đ ngăc aăt ăbƠoăg căm ăđ nănguyênăbƠoăs i .40 3.3.2.ăTácăđ ngăc aăt măt ăbƠoăg căm ăđ năt ăbƠoăsừng 44 BĨNăLU N 48 4.1.ăV ăđ căđiểmăt ăbƠoăphơnăl p 48 4.2.ăTinhăl căt ăbƠo,ăđ căđiểmăhìnhătháiăvƠăkh ănĕngăt oăcolony 49 4.3.ă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg căm ălênăt ăbƠoădaănuôiăc y 50 4.3.1.ă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg cătớiănguyênăbƠoăs iăda .51 4.3.2.ă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg cămôăm ăđ năt ăbƠoăsừng 53 4.4.ăCh ăphẩmăt măt ăbƠoăg cătrênăgiáăđ 56 K TăLU N .59 KI NăNGH 60 Footer Page of 148 Header Page of 148 DANHăM CăB NG B ngă1.ăKh ănĕngăt oădòngăc aăt ăbƠoămớiătáchăraătừămôăm ă(n=5) 36 B ngă2.ăKh ănĕngăt oăCFU-Fătheoăcácăth ăh ăt ăbƠoă(n=5) 39 B ngă3.ă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg căđ nătĕngăsinhănguyênăbƠoăs i 40 B ngă4.ăTh iăđiểmănguyênăbƠoăs iăgiaătĕngăs ăl ngăkhiăcóăt măt ăbƠoăg c 42 B ngă5.ăTỷăl ăs ngăc aănguyênăbƠoăs iăsauăkhiătrypsin 43 B ngă6.ă nhăh ngăc aăt măt ăbƠoăg căđ nătĕngăsinhăt ăbƠoăsừng 44 B ngă7.ă nhăh ngăc aăt măt ăbƠoăg cătớiădiăc ăt ăbƠoăsừng 46 Footer Page of 148 Header Page of 148 DANHăM CăHỊNH Hìnhă1.ăS ăđ ăsựătĕngăsinhăc aănguyênăbƠoăs iătrongăcácăgiaiăđo năkhácănhauăc aă quáătrìnhăli năv tăth ng .5 Hìnhă 2.ă Môă ph ngă thíă nghi mă đánhă giáă nhă h ph ngă c aă t ă bƠoă g că mô m ă bằngă ngăphápăđ ngănuôiăc y 23 Hìnhă3.ăT oăv tăth ngăinăvitro .27 Hìnhă4.ăTáchămôăm ăbằngăenzymăcollagenase 30 Hìnhă5.ăĐƿaăt ăbƠoăsauă48hănuôiăc y.ă 32 Hìnhă6.ăT ăbƠoăsauă4ăvƠă10ăngƠyănuôiăc y 33 Hìnhă7.ăT ăbƠoăg căm ătrênăkínhăhiểnăviăđ oăng că50X(A)ăvƠă100X(B) 34 Hìnhă8.ăHìnhătháiăt ăbƠoăg căm ăsauăkhiănhu măGiemsa.ă(100X) 35 Hìnhă9.ăT ăbƠoăg căm ăt oăcolonyăậ ngƠyăth ă1ăvƠă5.ă(50X) 37 Hìnhă10.ăT ăbƠoăg căm ăt oăcolonyă ăngƠyăth ă10ăvƠă20.ă(50X) .38 Hìnhă11.ăCácăđƿaăcolonyăsauăkhiănhu măgiemsa .39 Hìnhă12.ăBiểuăđ ăsoăsánhăs ăl ngăt ăbƠoăthuăđ căgiữaăcácăthíănghi măđ ngănuôiă c yăt măt ăbƠoăg cămôăm ăvớiănguyênăbƠoăs iă ngƠyăth ă2 40 Hìnhă13.ăTácăđ ngăc aăt măt ăbƠoăg cămôăm ălênăsựătĕngăsinhăc aănguyênăbƠoăs iă (50X) 41 Hìnhă14.ăSựăgiaătĕngăs ăl Hìnhă15.ăSoăsánhăs ăl ngănguyênăbƠoăs iătheoăth iăgian .43 ngăt ăbƠoăthuăđ căgiữaăcácăthíănghi măđ ngănuôiăc yăt mă t ăbƠoăg căvớiăt ăbƠoăsừng 44 Hìnhă16.ăTácăđ ngăc aăt măt ăbƠoăg cămôăm ălênăsựătĕngăsinhăc aăt ăbƠoăsừng 45 Hìnhă17.ăT ăbƠoăsừngăđ ăcheăph ăđ tă100%ă,ăt ăbƠoăsừngăhìnhăovanăvƠăđaădi năm că dƠyăx păkhítănhauăngayătr ớcăkhiăt oăv tăc oăđểăđ ngănuôiăc yăvớiăt măt ăbƠoăg că m ăvƠăt mănguyênăbƠoăs iă(50X) 46 Hìnhă18.ă nhăh ngăc aăt ăbƠoăg căm ălênădiăc ăvƠăbi tăhóaăc aăt ăbƠoăsừngă(50X) 47 Hìnhă19.ăSoăsánhăhìnhătháiăt ăbƠoăg cămôăm …………………………….50 Footer Page of 148 Header Page of 148 DANHăM CăCHỮăVI TăT T AB Antibiotic/Antimycotic - Kháng sinh ADSCs Adipose-Derived Stem Cells - T bào g c m DMEM Dubeco’săModifiedăEagleăMedium EGF Epidermal Growth Factor - Y u t tĕngătr FBS Fetal Bovine Serum - Huy t bào thai bê FGF Fibroblasts Growth Factor - Y u t tĕngătr HGF Hepatocyte Growth Factor IL Interleukin ITS-X Insulin, Transferin, Selen - X KGF Keratinocyte Growth Factor - Y u t tĕngătr MCS Mesenchymal stem cells - T ăbƠoăg cătrungămô P Passage- C y chuyển PBS Phosphat Buffer Saline - Dung d chăđ m phosphat PDGF Pletelet-Derived Growth Factor TB T bào TGF Transforming Growth Factor VEGF Vessle Endothelial Growth Factor Footer Page of 148 ng biểu bì ng nguyên bào s i ng t bào sừng Header Page of 148 Đ TăV NăĐ T ăbƠoăg călƠăm tătrongănhữngălƿnhăvựcăsinhăh călôiăcu nănh tăhi nănay Từălơu,ăc yăghépăt ăbƠoăg căđưăđ căyăh căth ăgiớiălựaăch nănh ălƠăli uăphápăhữuă hi uăđểăchữaăkh iăm tăs ăcĕnăb nhăm nătính,ăhiểmănghèoăliênăquanăđ nămáu,ăt y,ă x ngăkhớp…Trênăth ăgiới,ăcóăm tăs ăngu năt ăbƠoăg căđ nh t ă bƠoă g că t yă x căđ aăvƠoă ngădụngă ngă vƠă t ă bƠoă g că máuă cu ngă r n,ă cácă t ă bƠoă g că từă ngu nănƠyăch ăy uălƠăt ăbƠoăg căt oămáuănênăđ că ngădụngătrongănghiênăc uă uătr ăcácăb nhăv ămáu,ăcònăcácăb nhăcầnăcóăsựătáiăt oăthu căh ăth ngătrungă mô đ că ngădụng.ăTrongăkhiăđó,ăcácăb nhăc aătrungămôăl iăr tăth nh cácă v tă th khác đ ngăg pă ng, v tă loét,ă b nhă lýă h m ch,ă nưo,ă tim…M tă ngu nă TB g că căkỳăv ngănhi uăchínhălƠăt ăbƠoăg căphôi,ăm cădùăcóăti mănĕngălớnă nh ngăvi cănghiênăc uăvƠăsửădụngăcònăr tăkhóăkhĕnăv ăcôngăngh ăvƠăđ căbi tălƠă b ăc nătr ăb iăv năđ ăyăđ că(sửădụngăt ăbƠoăg căphôiăđ ngănghƿaăvớiăvi căh yăđi m tăphôiăv năcóăthểătr ăthƠnhăm tăconăng i).ăGầnăđây, nhi uănghiênăc uăt pă trung khaiăthácăcácăt ăbƠoăg cătừăphầnăphụăc aăthaiănh bánhărau,ădơyăr n.ăThƠnhă côngăv ăcôngăngh ăđưăcóăthểătáchăvƠănhơnălênăcácăt ăbƠoăg cănh ngăch ăcóănhữngă b nhănhơnăcóăb oăqu nădơyăr nă ậ bánhărau…khiăsinhăraămớiăcóăhyăv ngă đ dùngăcácăngu năt ăbƠoăg cănƠy.ăHi nănay,ăch ăcóăs ăl ngăr tăítăng iăđ că căl u giữădơyăr năhayăbánhărauăsauăkhiăsinhăra,ăđ ngăth iăchiăphíăcũngăr tăt năkémăvƠă xácăsu tăng iăl uătrữămôăl iăcóăcácăb nhăcầnăđ căđi uătr ăbằngăcácăt ăbƠoăg că nƠyăcũngăkhôngăph iăcao.ă T ăbƠoăg căm ălƠăquầnăthểăt ăbƠoăv nănĕng,ăchúngăcóăthểăbi t hóa thành nhi uădòngăkhácănhau Mô m ălƠălo iămôăcóăs năvớiăs ăl ngălớnăvƠăd ădƠngăthuă h iănênăđơyălƠăngu năt ăbƠoăđầyăh aăhẹnăchoăyăh cătáiăt oătrongăt ngălaiăcóăthểă sửădụngăđểăghépătựăthơnăvƠăđ căbi tălƠăkhôngăg păph iănhữngăv năđ ăyăđ c.ăĐ iă vớiă lƿnhă vựcă nghiênă c uă li nă v tă th ngă th yă rằng,ă t ă bƠoă g că môă m ă lƠă m tă trongă nhữngă d ngă t ă bƠoă quană tr ng di c đ nă vùngă t nă th nhi uăkhơuătrongăpha tĕngăsinhăc aăquáătrìnhăli năv tăth Footer Page of 148 ng ng đểă thựcă hi nă Header Page 10 of 148 T ă bƠoă g că trungă môă đ thƠnhă phầnă t ă bƠoă đ că nghiênă c uă táchă từă môă m ă nh ng că táchă cònă nhi uă d ngă t ă bƠoă khácă nh b chă cầu,ă h ngă cầu…Tỷăl ăt bƠoăg cătrungămôăthayăđ iănênăkhóăxácăđ nhăchínhăxácăcầnăsửădụngă baoănhiêuăt ăbƠoălƠăcầnăthi tăvƠăbaoănhiêuăt ăbƠoătrongăh năd chăt ăbƠoămớiătáchă đ ăđểăchoăm tălầnăghépăđi uătr ăv tăth ng Do đó,ăcầnănghiênăc uăxơyădựngă hoƠnăch nhăquyătrìnhătáchăvƠătinhăl căt ăbƠoăg cătrungămô.ăN uănh cácăt ăbƠoă g cătrungămôătáchăraăl iăcóătácădụngăkíchăthíchătĕngăsinhăho cădiăc c aă2ălo iăt ă bƠoăch ăy uăc aădaăthìă đóăs ălƠăc s ăkhoaăh căcầnăthi tăchoăvi căti pătụcăcácă nghiênă c uă ngădụngă t ă bƠoăg că môă m ă trênă lơmă sƠngă vƠăđ nhăh ớngă choă cácă nghiênăc uăch ăt oăcácăch ăphẩmăsinhăh căphụcăvụăđi uătr ăcácăt năth h ăth ngătrungămôăđ căbi tălƠăv tăth ngăthu că ngăvƠăv tăb ng.ă NgƠyănay,ănhuăcầuăđi uătr ăv tăth ngăbằngăghépăt ăbƠoăg călƠăr tălớn,ăcụă thểăt iăMỹăvớiă260ătri uădơnăthìăhƠngănĕmăcóăkho ngă6,5ătri uăng iămangăcácă v tăth ngăm nătính.ăHƠngănĕmăt iămi nătơyăChơuăÂuăcóăkho ngă150.000ăng cầnăđ căđi uătr ăbằngădaănhơnăt o.ăRiêngăt iăĐ căcóăkho ngă3ătri uăng iă iăb ăloétă vƠăchiăphíălênătớiăh nă1ătỷăEuroădƠnhăchoăđi uătr ă T i Vi tă Namă hƠngă nĕmă ớcă tínhă kho ngă 791.000ă ng iă g pă taiă n nă v ă b ngă[8].ăTuyăch aăcóăconăs ăth ngăkêăcụăthểănh ngăch ătínhăriêngăt iăVi năB ngă Qu că Gia,ă hƠngă nĕmă cóă kho ngă 5000ă b nhă nhơnă b ngă uă tr ă nhuă cầuă v ă ghépădaăcũngăđưăchi măkho ngă2500ăb nhănhơn Xu tăphátătừănhữngăc ăs ăkhoaăh căvƠăti mănĕngă ngădụng c aăt ăbƠoăg că m , chúngătôiăti năhƠnhănghiênăc u: “Nghiên cứu kh tăng sinh tế bào gốc mỡ nh hưởng chúng đến tế bào da nuôi cấy định hư ng điều trị vết thư ng” nhằmămụcătiêuăsau: Đánh giá đặc điểm phân lập tăng sinh tế bào gốc mỡ điều kiện nuôi cấy invitro Đánh giá nh hưởng tế bào gốc mỡ đến tế bào da nuôi cấy Footer Page 10 of 148 Header Page 64 of 148 4.4 Ch ăph m t măt ăbƠoăg cătrênăgiáăđ ă Thựcăt ,ăt ăbƠoăg căm ăkhôngăch ăcóăduyănh tăch cănĕngălƠăt ăbƠoăđầuădòngă choăvi cătáiăsinhăm ăinăvivoămƠăcònăcóăkh ănĕngăsử dụngăchoănhi uămụcăđíchă khácănhau.ăGiáăđ ăchuyênăbi tăvƠăcácăh ăth ngătínăhi uăc mă ngălƠăc tălõiăchoă vi căbi tăhóaăt ăbƠoăg căthƠnhăcácăt ăbƠoăkhácătùyătheoăyêuăcầuăvƠămụcăđíchăsửă dụng.ăVớiămụcăđíchăgi iăquy tăcácăt năkhuy tămôăm ăthìăcầnăgiáăđ ă3ăchi uăđểă nuôiăc yăt ăbƠoăg căm Nhữngă viă chu iă h tă collagenă lƠă giáă đ ă thíchă h pă choă t ă bƠoă g că m ă choă phépăchúngăcóăkh ănĕngătĕngăsinhă ex vivoăvƠăbi tăhóaătừămôăcóăkíchăth ớc đ nh ă đểă cóă thểă tiêmă đ că [64].ă Ng iă taă đưă ch ngă minhă rằngă môă m ă t oă raă từă côngăngh môăvớiăt ăbƠoăg căm ăvƠăgiáăđ ălƠăcollagenătypăIăcóăthểăđ choă vi c uă tr cácă t nă khuy tă môă [49] Đi uă nƠyă cũngă đưă đ căsửădụngă că khẳngă đ nhă trongăm tănghiênăc uăkhácăgầnăđơy,ătrongăđóăt ăbƠoăg căm ăcóăkh ănĕngădính,ă tĕngătr ngăvƠătĕngăsinhăt tătrênăgiáăđ ăcollagenătypăIăv nălƠănguyênăli uăcóăbiểuă hi nătínhăt ngăh păt ăbƠoătuy tăv iăvƠăcóăthểăđ căsửădụngănh ătáăd cătrongă côngăngh ămôă[83].ăVi cănuôiăc yăinăvitroăcácăt ăbƠoăg căm ătrênăđ mămƠngă iă đưă lo iăb ă t ă bƠoăvƠăgiáă đ ă acidăhyaluronică liênă k tă chéoă cũngăđưăđ Cácăt ăbƠoăk tădínhătrênăđ mămƠngă iăđ că môă t ă căthúcăđẩyăkh ănĕngătĕngăsinhăvƠăkh ă nĕngăs ng,ătrongăkhíăđó,ăcácăt ăbƠoăkhôngăk tădínhătrongăgelăacidăhyaluronicăliênă k tăchéoăl iătĕngăkh ănĕngăbi tăhóaă[29], [30] AltmanăvƠăc ngăsựăđưămôăt ăcáchă nuôiăc yăt ăbƠoăg căm ătrênăgiáăđ ăFibrilăvƠăChitosanăvƠăchoăth yăcácăt ăbƠoăg că m ăng th iăc yătrênăcácăd ngăgiáăđ ănƠyăcóătácădụngăthúcăđẩyăquáătrìnhăli năv tă ngă vƠă chúngă tĕngă bi tă hóaă thƠnhă nguyênă bƠoă s i,ă t ă bƠoă n iă môă vƠă t ă bƠoă biểuămôăc aămôăđ căkhôiăphụcă[16] Trongăcácănghiênăc uătr ớcăđơy,ănhữngăcáchăchúngătôiăđưăsửădụngăđ iăvớiă t ăbƠoădaălƠăt oăthƠnhănhữngăt măt ăbƠoămƠă ă đóăcácăt ăbƠoăcóăsựăliênăk tăvớiă nhauăho căt oăthƠnhăt măt ăbƠoăvớiăsựăh ătr ăc aăcácălo iăgiáăđ ăkhácănhau.ăVớiă cáchăth cănƠy,ăt ăbƠoăcóăđ cătínhălƠă năđ nhăv ăkh ănĕngăs ngăvƠăphơnăchiaănh Footer Page 64 of 148 Header Page 65 of 148 chúng môi tr bào đ căghépălênăv tăth li năv tăth ngăthìăchúngăvừaăcóăkh ănĕngăthựcăhi năch cănĕng ngăvƠăvừaăcóăkh ănĕngăcheăph ăb oăv ăv tăth cũngă thu nă l iă h n cho ng đ ngănuôiăc yă labo Trong uăki năđó,ăt măt ă că ghépă trênă v tă th ng.ăCáchăth cănƠyă iă thựcă hi nă cácă thaoă tácă v ă kỹă thu tă b iă chúngă s ă ng nh m tă cu că ghépă t mă daă thôngă th ng.ă Đ iă vớiă nghiênă c uă nƠy,ă thi tă k ă nghiênă c uă v nă lƠă c yă t ă bƠoă trênă m tă s ă lo iă giáă đ ă polymer đểăxácăđ nhăkh ănĕngăt ăbƠoăg cătrungămôăphátătriểnăt tănh tănhằmăt oă raăt măt ăbƠoăphụcăvụăghépătrênăv tăth ng Đ ătƠiănghiênăc uătr ớcăđây đưăch ăt oăthƠnhăcôngăt mănguyênă bƠoăs iăbằngăcáchăc yănguyênăbƠoăs iănuôiăc yătrênălớpămƠngăv tăli uăcheăph ă v tăth ngăcóăb năch tălƠăpolyurethană[6].ăTuyănhiênăm iălo iăt ăbƠoăkhácănhauă thìăr tăcóăthểăkh ănĕngăbámăs ngăc aăchúngătrênăcácălo iăv tăli uăcũngăs ăkhácă nhau.ăVớiăthi tăk ănghiênăc uătruy năth ngăvƠănghiênăc u đ cătínhănuôiăc yăc aă t ăbƠoătrungămô,ăchúngătôiăti năhƠnhăthíănghi mătrênănhi uălo iăv tăli uăkhácănhauă vƠănh năth yăt măv tăli uăcóăb năch tălƠăpolyurethană(tegaderm)ăvƠăv tăli uăpolymeră có tráng collagen đ uăchoăphépăcácăt ăbƠoănuôiăc yăbámăvƠăphátătriểnătrênăđó Chúng đưăthíănghi măv ăxácăđ nhăkh ănĕngăbám,ăphátătriểnăc aăt ăbƠoă trênătranswell.ăTranswellălƠălo iă đƿaănuôiăc yăt ăbƠoăcóăs nălớpămƠngăcóăthểăd ă dƠngătáchăraăkh iăđƿaănuôiăc y.ăLớpămƠngănƠyăcóăcácăviăl ăchoăphépătraoăđ iădinhă d ngănh ngăkhôngăchoăphépăt ăbƠoăchuiăqua,ăvớiăđ cătínhănƠyăthìălớpămƠngănƠyă cóăkh ănĕngăcheăph ăv tăth ng Quan sát d ớiăkínhăhiểnăviăđ oăng căth yăt ă bƠoăg cătrungămôănuôiăc yătrênăđƿaătranswellăcóăth iăgianăđểăt ăbƠoăbámăs ngăsauă c yă nhanhă vƠă cũngă cóă th iă gian t nă t iă trênă đƿaă lơu.ă Chúngă tôiă thíă nghi mă đ nă ngƠyăth ă5ăthìăt ăbƠoătrênă đƿaătranswellăv năbámăt t.ăThíănghi mă đ căti pătụcă cho đ nănhi uăngƠyăti pătheoăthìăth yăkh ănĕngăs ngăvƠăphátătriểnăc aăt ăbƠoăv nă t t tớiăngƠyăth ă10-15ăsauăc y.ă Thôngăth ngăn uăt ăbƠoăg cătrungămôăphátătriểnăđ tă100%ăho căch ngălớpă lênănhau,ăthìăkh ănĕngătĕngăsinhăvƠăphátătriểnăc aăt ăbƠoăg căkémăđiăvƠăcóăthểă Footer Page 65 of 148 Header Page 66 of 148 hi năt ngăbi tăhóaăx yăra.ăĐểăđ măb oăt ăbƠoăg căm ăv nă ătìnhătr ngăch aăbi tă hóaăvƠăcóăt căđ ănhơnălênăv năgiữănguyên,ăchúngătôiăch ăch ăt oăt măt ăbƠoăvớiă m tăđ ăph ăkínăb ăm tănuôiăc yălƠă90%.ăS ăl đ căxácăđ nhălƠ:ă5,3ă±ă1,2ăxă104/cm2 Footer Page 66 of 148 ngăt ăbƠoăkhiăđ tă90%ăđ ăcheăph ă Header Page 67 of 148 K TăLU N Quaănghiênăc uăkh ănĕngătĕngăsinhăc aăt ăbƠoăg căm ăvƠă nhăh chúngă đ nă t ă bƠoă daă nuôiă c yă đ nhă h ớngă trongă uă tr ă v tă th ngăc aă ngă t iă Laboă nghiênăc uă ngădụngătrongăđi uătr ăb ngă-Vi năB ngăQu căGia,ătôiăthuăđ căk tă qu ăvƠărútăraăk tălu năsau: 1.ăChúngătôiăđưăphơnăl păthƠnhăcôngăt ăbƠoăg cătrungămôătừămôăm - S ăl ngăt ăbƠoăphơnăl păđ căđ tă2,46ă±ă1,4x106TB/gram mô - Cácă t ă bƠoă cóă kh ă nĕngă t oă colony,ă cácă colonyă c aă t ă bƠoă g că môă m ă thu căd ngăCFU-F.ăTỷăl ăt oăCFU-Făc aăt ăbƠoămớiăphơnăl păđ călƠă14,6%.ăSauă tinhăl căt ăbƠoăđ năp5,ătỷăl ăt oăCFU-F 17,3% T ăbƠoăg cătrungămôătừămôăm ăcóă nhăh ngătíchăcựcătớiăt ăbƠoădaănuôiăc y - T ă bƠoă g că môă m ă lƠmă tĕngă sinh nguyênă bƠoă s iă daă nuôiă c y NgƠyă th ă 2ă đ ngă nuôiă c yă TBGă môă m ă vớiă nguyênă bƠoă s iă daă s ă l ngă NBSă thuă đ că lƠă 6,8±0,5x104 t ăbƠo/gi ngă10cm2 Trong khiăđóălôăch ngăkhôngăcóăTBGămôăm ă đ ngă nuôiă c y,ă s ă l ngă NBSă thuă đ că ch ă từă 4.6±0,6 ậ 5,5±0,9x104 tb/gi ngă 10cm2 - T ăbƠoăg cămôăm ăkhôngă lƠmătĕngăsinhăt ăbƠoăsừngănh ngăcóătácăđ ngă tĕngăsựădiăc ăvƠăbi tăhóaăc aăt ăbƠoăsừngătrongăđi uăki nănuôiăc y Ngày th ă5,ătỷă l ă li nă v tă c oă khiă đ ngă nuôiă c yă TBGă môă m ă vớiă t ă bƠoă sừngă lƠă 98,1±4,5% Nh ngălôăch ngăkhôngăcóăTBGămôăm ătỷăl ăti năv tăc oăch ăđ tă75,0±12,4% - Tácăđ ngătíchăcựcăc aăt ăbƠoăg cătrungămôătừămôăm ăđ năcácăt ăbƠoădaănuôiă c yălƠăthôngăquaăchính kh ănĕngăs ngăc aăt ăbƠoăg căvƠăcácăy uăt ăngo iăbƠo.ă Footer Page 67 of 148 Header Page 68 of 148 KI NăNGH Ti pătụcănghiênăc uăc yăghépăTB g c m ătrongăđi uătr ăv tăth ng,ăv tăb ng Ti pă tụcă nghiênă c uă đểă ch ă t oă raă sinhă phẩmă từă TB g c vƠă ngă dụngă trongăđi uătr ăv tăth Footer Page 68 of 148 ng,ăv tăb ng Header Page 69 of 148 TÀIăLI UăTHAMăKH O A.ăTi ngăVi t Tr nhăBình,ăPh măPhanăĐ ch,ăĐ ăKínhă(2002), Mô học,ăNhƠăxu tăb năyăh c,ă HƠăN i PhùngăQu căĐ i,ăPh măM nhăHùngă(1997), “Sựăthayăđ iăcácăglobulinămi nă d chă ăb nhănhơnăb ng”,ăThông tin bỏng, 2, tr 27-28 TrầnăVĕnăHanhă(1997), “Quanăđiểmămôăh căhi năđ iătrongăquáătrìnhăli năv tă th ng”,ă Tài liệu đào t o sau đ i học – chuyên đề mô học, Đ iă h că YăHƠă N i,ătr.ă141-156 ĐinhăVĕnăHơn,ăNguy năTh ăH ngă(2014), “Nghiênăc uăch ăt oăh năd chăt ă bƠoădaătựăthơnăkhôngăquaănuôiăc yădểăđi uătr ăv tăth ngăvƠăv tăb ng”,ăT p chí y học th m học & Bỏng, 3, tr 40 - 48 ĐinhăVĕnăHơn,ăTrầnăNg căDi p,ăNguy năTi năDũngă(2013).ă“Đánhăgiáătácă dụngădungăd chăchi tănguyênăbƠoăs iădaănuôiăc yătrongăđi uătr ăv t th ngă m nătính”, T p chí y học th m ho & Bỏng, 2, tr 47 ậ 54 Nguy năVĕnăHu ,ăĐinhăVĕnăHơnăvƠăCSă(2006),ăảợp tác nghiên cứu áp dụng công nghệ nuôi cấy nguyên bào sợi điều trị vết thương vết bỏng,ăĐ ătƠiă c pănhƠăn ớcăv ăNgh ăđ nhăth ăh pătácăvới Liên Bang Nga Nguy năVĕnăHu ,ăNguy năNg căTu n,ăNguy năH iăAnă(2000),ă“Nh năxétăv ă gi măb chăcầuămáuăngo iăviă ătrẻăemăb ngăn ng”,ăT p chí thông tin y dược, 10, tr 92-96 Nguy năVi tăL ngă(2009), “Tìnhăhìnhăb ngăt iăVi tăNamătrongă3ănĕmă2005ă -2007”,ăT p chí y học th m ho & bỏng, 1, tr 26 Ph măQuangăNg că(1990), “MƠngă iăđ căđôngăkhôăvƠădi tăkhuẩnăbằngătiaă gamaă dùngă lƠmă bĕngă sinhă h că đểă uă tr ă v tă b ng”,ă T p chí Y học thực hành, (2)285, tr 23 Footer Page 69 of 148 Header Page 70 of 148 10 Ph măĐìnhăPhúă(1994), “Ghépădaăđ ngălo iă3ălầnăgópăphầnăc uăs ngă1ăb nhă nhơnăb ngăsơuădi năr ng”,ăThông tin bỏng, 2, tr 17 11 Nguy năHữuăPhùng,ăD ngăNg că(1994), “Sửădụngădaă chăvƠămƠngă iăđôngă khôătrongăđi uătr ăb ngăn ng”,ăThông tin bỏng, 2, tr 15-16 12 Đ ă Quang,ă Đ ă Quangă Hùngă (1995), “Sửă dụngă lơmă sƠngă mƠngă iă đ nă c aă ng iălƠmăbĕngăsinhăh căchữaăb ngăvƠăcácăb nhăm tăda”,ăThông tin bỏng, 1, tr 16-18 13 LêăTh ăTrungă(2003), Bỏng kiến thức chuyên ngành, NXBăYăH c 14 TrầnăNg căTu n,ăĐ ngăT tăHùngă(1996), “ ngădụngăghépădaămắtăl ớiăk tă h pădaătựăthơnăvớiădaăd ălo iătrongăb nhănhơnăb ngăsơuădi năr ng”,ăThông tin bỏng, 3, tr 17-20 B.ăTi ngăAnhăăă 15 Akinoă K,ă Minedaă T,ă Akitaă S.ă (2005),ă “Earlyă cellulară changesă ofă humană mesenchymal stem cells and their interaction with otheră cells”,ă Wound Repair Regen, 13, pp 434ậ440 16 Altmană AM,ă Yană Y,ă Matthiasă N,ă etă ală (2008).ă IFATSă Series:ă “humană adipose-derived stem cells seeded on a silk fibroin-chitosan scaffold enhance woundărepairăinăaămurineăsoftătissueăinjuryămodel”,ăStem Cells 17 Alvarez-Diaz C, Cuenca-Pardo J, Sossa-Serrano.ă Aă (2000),ă “Burnsă treatedă withă frozenă culturedă humană allogeneică epidermală sheets”,ă J Burn Care Rehabil, 21, pp 291ậ299 18 Armour.ă A,ă Scott.ă P.G,ă Tredget.ă E.E,ă (2007),ă “Cellulară andă molecular pathology of HTS: basis for treatment, Wound Repair Regen, 15 (Suppl 1), S6ậS17 19 Ayyappană T,ă Chadhaă A,ă Shaikhă MFă etă ală (2004).ă “Topicallyă appliedă autologous bone marrow in healing of chronic non-healing raw areas-a pilot Footer Page 70 of 148 Header Page 71 of 148 study”,ăIndian J Burns 2004, 12, pp 42-7 20 Barrientos S, Stojadinovic O, Golinko M.S, Brem H, Tomic-Canic M (2008),ă “Growthă factorsă andă cytokinesă ină woundă healing”,ă Wound Repair Regen, 16, pp 585ậ601 21 Bremă H,ă Golinkoă MS,ă Stojadinovică Oă etă ală (2008),ă “Primaryă culturedă fibroblasts derived from patients with chronic wounds: a methodology to produce human cell lines and test putative growth factor therapy such as GMCSF”,ăJournal of Translational Medicine 75(6) 22 Chenă L,ă Tredgetă E.E,ă Wuă P.Y,ă Wuă Y.ă (2008),ă “Paracrineă factors of mesenchymal stem cells recruit macrophages and endothelial lineage cells andăenhanceăwoundăhealing”,ăPLoS ONE 3, e1886 23 ClarkăRichardăA.F.ă(1993),ă“Basicăofăcutaneousăwoundărepaire”,ăJ Dermatol surg Oncol, 19(12), pp 116-122 24 Cohen I.K, Diegelman R.F, Crossland M.C, (1994), Wound care and wound healing, Sprnciples of Surgery, 1, pp 279-304 25 DiegelmannăR.F,ăEvansăM.C.ă(2004),ă“Woundăhealing:ăanăoverviewăofăacute,ă fibroticăandădelayedăhealing”,ăFront Biosci, 9, pp 283ậ289 26 Falanga V, Iwamoto S, Chartier M, Yufit T, Butmarc J, Kouttab N, Shrayer D,ă Carsonă P.ă (2007),ă “Autologousă boneă marrow-derived cultured mesenchymal stem cells delivered in a fibrin spray cceleratehealing in murineăandăhumanăcutaneousăwounds,ăTissueăEng”,ă13,ăpp.ă1299ậ1312 27 Falkenberg F.W, Weichert M, Krane H, Bartels I, Palme M, Nagels H.O, Fiebigă H.ă (1995),ă “Ină vitroă productionă ofă monoclonală antibodiesă ină highăă concentrationă ină aă newă andă easyă toă handleă modulară minifermenter”,ă J Immunol Meth, 179, pp 13ậ29 28 Fitzpatrickă RE,ă Rostană EFă (2003),ă “Reversală ofă photodamageă withă topicală growthăfactors:ăaăpilotăstudy”,ăJ Cosmet Laser Ther, 5, pp 25—34 Footer Page 71 of 148 Header Page 72 of 148 29 Flynnă LE,ă Prestwichă GD,ă Sempleă JL,ă etă ală (2007).ă “Adiposeă tissueă engineering with naturally derived scaffoldsăandăadiposederivedăstemăcells”,ă Biomaterials 2007, (28), pp 34-42 30 Flynn LE, Prestwich GD, Semple JL, et al (4/2008) “Proliferation and differentiation of adipose-derivedăstemăcellsăonănaturallyăderivedăscaffolds”,ă Biomaterials, (29), pp 1862-71 31 Friedenstein A.J, Chailakhyan R.K, Latsinik N.V, Panasyuk A.F (1974) “Keiliss-Borok, Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues Cloning in vitro and retransplantationăinăvivo”,ăTransplantation, 17, pp 331ậ340 32 HanăS.K,ăYoonăT.H,ăLeeăD.Găetăală(2005).ă“Potentialăofăhumanăboneămarrowă stromalăcellsătoăaccelerateăwoundăhealingăinăvitro”,ăAnn Plast Surg 2005, 55, pp 41-49 33 Hansbrough JF, Mozingo DW, Kealey GP, Davis M, Gidner A, Gentzkow GDă (1997),ă “Clinicală trialsă ofă aă biosynthetică temporaryă skină replacement,ă Dermagraft- Transitional Covering, compared with cryopreserved human cadaver skin for temporary coverage of excised burn wounds", J Burn Care Rehabi 1997 Jan-Feb, 18 (1 Pt1), pp 43-51 34 Hehenbergeră K,ă Kratză G,ă Hanssonă A,ă Brismară K.ă (1998),ă “Fibroblastsă derived from human chronic diabetic wounds have a decreased proliferation rate,ăwhichăisărecoveredăbyătheăadditionăofăheparin”,ăJ Dermatol Sci, 16, pp 144ậ151 35 Herndon D.N, Barrow R.E, Rutan R.L, Rutan T.C, Desai M.H, Abston S (1989),ă “Aă comparisonă ofă conservativeă versusă earlyă excision.ă Therapiesă ină severelyăburnedăpatients”,ăAnn Surg, 209, pp 547ậ5528 discussion 552ậ543 36 HuăR,ăLingăW,ăXuăW,ăHanăD.ă(2014),ă“Fibroblast-Like Cells Differentiated from Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells for Vocal Fold Wound Footer Page 72 of 148 Header Page 73 of 148 Healing”,ăPLoS ONE 9(3): e92676 37 Humpertă PM,ă Bastschă Uă etă ală (2005),ă “Locallyă appliedă mononuclesră boneă marrow cells restore angiogenesis and promote wound healing in a type fiabeticăpatient”,ăExp Clin Endocrinol Diabetes 2005, 113, pp 538-40 38 HuntăT.K.ă(1990),ă“Basicăprinciplesăofăwoundăhealing”,ă J Trauma ,30(12), pp 122-128 39 Hyoju Kim, Kyuseok Choi, Oh-Kyeong Kweon, Wan Hee Kim (2012), “Enhanced wound healing effect of canine adipose-derived mesenchymal stem cells with low-levelă laseră therapyă ină athymică mice”,ă Journal of Dermatological Science, 68, pp 149ậ156 40 JohnăFăHasbrough,ăHansăOliverăRennekampffă(1998),ă“Culturedăskinăcellăforă wound closure and for promoting wound healing Growth factor and wound healingă basică scienceă andă potentială clinicală application”,ă Serono Symposia USA Norwell, Massachusetts, pp 37-55 41 Jurgens WJ, Oedayrajsingh-VarmaăMJ,ăHelderăMN,ăetăală(6/2008),ă“Effectăof tissue-harvesting site on yield of stem cells derived from adipose tissue: implications for cell-basedătherapies”,ăCell Tissue Res, (26), pp 332:415 42 Khachemoune.ă A,ă Bello.ă Y.M,ă Phillips.ă T.Jă (2002),ă “Factorsă thată influenceă healing in chronic venous ulcers treated with cryopreserved human epidermal cultures”,ăDermatol Surg, 28, pp 274ậ280 43 Kim W.S, Lee JJ, Jung DY, Jeon J, Heo HS, Kang HC, et al (2006), “Profilingă ofă differentiallyă expressedă genesă ină humană stemă cellsă byă cDNAă microarray”,ăMol Cells, 21, pp 343—55 44 Kiristyă CP,ă Lynchă AB,ă Lynchă SEă (1993),ă “Roleă ofă growthă factorsă ină cutaneuosăwoundăhealing:ăaăreview”,ăCrit Rev Oral Bio Med, 4, pp 729-760 45 Lauffenburgeră D.A,ă Horwitz.ă A.Fă (1996),ă “Cellă migration:ă aă physicallyă integrated molecularăprocess”,ăCell, 84, pp 359ậ369 Footer Page 73 of 148 Header Page 74 of 148 46 Lerman O.Z, Galiano R.D, Armour M, Levine J.P, Gurtner G.C (2003), “Cellulară dysfunctionă ină theă diabetică fibroblast:ă impairmentă ină migration,ă vascular endothelial growth factor production, and response to hypoxia”,ăAm J Pathol, 162, pp 303ậ312 47 Liă Y,ă Fană J,ă Chenă M,ă Liă W,ă Woodleyă D.T.ă (2006),ă “Transformingă growthă factor-alpha: a major human serum factor that promotes human keratinocyte migration”,ăJ Invest Dermatol, 126, pp 2096ậ2105 48 Loots M.A, Lamme E.N, Mekkes J.R, Bos J.D, Middelkoop E (1999), “Culturedă fibroblastsă fromă chronică diabetică woundsă onă theă loweră extremityă (non-insulin-dependentă diabetesă mellitus)ă showă disturbedă proliferation”,ă Arch Dermatol Res, 291, pp 93ậ99 49 Lu F, Gao JH, Ogawa R, et al (2006 Dec),ă“Adiposeătissuesădifferentiatedăbyă adipose-derivedă stemă cellsă harvestedă fromă transgenică mice”,ă Chin J Traumatol, 9, pp 359-64 50 MacNeilă Să (2007),ă “Progressă andă opportunitiesă foră tissue-engineeredă skin”,ă Nature 445, pp 874ậ880 51 Martină M.Jă etă ală (2005),ă “Humană embryonică stemă cellsă expressă ană immunogenicănonhumanăsialicăacid”,ăNat Med, 11(2), pp 228-32 52 Masakazuă Ishii,ă Chikaă Koikeă etă ală (2005),ă “Moleculară markersă distinguishă bone marrow mesenchymal stem cells from fibroblasts”,ă Biochemical and Biophysical Research Communications, 332, pp 297ậ303 53 McFarlin K, Gao X, Liu Y.B, Dulchavsky D.S, Kwon D, Arbab A.S, Bansal M,ă Liă Y,ă Choppă M,ă Dulchavskyă S.A,ă Gautamă S.Că (2006),ă “Boneă marrowderived mesenchymal stem cells accelerateăwoundăhealingăinătheărat”,ăWound Repair Regen, 14, pp 471ậ478 54 MidwoodăK.S,ăWilliamsăL.V,ăSchwarzbauerăJ.E.ă(2004),ă“Tissueărepairăandă theădynamicsăofătheăextracellularămatrix”,ăInt J Biochem Cell Biol, 36, pp 1031ậ1037 Footer Page 74 of 148 Header Page 75 of 148 55 Papini R (2004),ă “Managementă ofă burnă injuriesă ofă variousă depths”,ă BMJă 329, pp 158ậ160 56 Pereiraă R.F,ăHalfordă K.W,ăO’Haraă M.D,ă LeeperăD.B,ă Sokolovă B.P,ăPollardă M.D,ăBagasraăO,ăProckopăD.J.ă(1995),ă“Culturedăadherentăcellsăfromămarrowă can serve as long-lasting precursor cells for bone, cartilage, and lung in irradiatedămice”,ăProc.ăNatl.ăAcad.ăSci.ăUSA,ă92,ăpp.ă4857ậ4861 57 PhanăTT,ăetăală(2005),ă“Evaluationăofăcellăcultureăonătheăpolyurethane-based membrane (Tegaderm): implication for tissue engineering of skin”,ă Cell Tissue Bank, 6(2), pp 91-7 58 PhinneyăD.G,ăProckopăD.J.ă(2007),ă“Mesenchymalăstem/multipotentăstromală cells; the state of transdifferentiation and modes of tissue repair — current views”,ăStem Cells, 25, pp 2896ậ2902 59 Ponec M (2002), “Skinăconstructsăforăreplacementăofăskinătissuesăforăinăvitroă testing”,ăAdv.Drug Deliv Rev, 54 (Suppl 1), S19ậS30 60 Postlethwaite A.E, Keski-Oja J, Moses H.L, Kang A.H (1987), “Stimulationă ofă theă chemotactică migrationă ofă humană fibroblastsă byă transformingăgrowthăfactorăbeta”,ăJ Exp Med, 165, pp 251ậ256 61 Purdueă G.F,ă etă ală (1997),ă “Aă Multi-center Clinical Trial of a Biosynthetic Skin Replacement, Dermagraft-TC, Compared with Cryopreserved Human Cadaver Skin for Temporary Coverage of Excised BurnăWounds”,ăJournal of Burn Care and Rehabilitation, 18(1), 52-57 62 Reckhenrich A.K, Kirsch B.M, Wahl E.A, Schenck T.L, Rezaeian F, et al (2014),ă “Surgicală Suturesă Filledă withă Adipose-Derived Stem Cells Promote WoundăHealing”,ăPLoS ONE 9(3): e91169 63 Rehman J, Traktuev D, Li J, Merfeld-Clauss S, Temm-Grove CJ, Bovenkerk JE,ăetăală(2004).ă“Secretionăofăangiogenicăandăantiapoptoticăfactorsăbyăhumană adiposeăstromalăcells”,ăCirculation, 109, 1292—8 Footer Page 75 of 148 Header Page 76 of 148 64 Rubin JP, Bennett JM, Doctor JS, et al (2007 Aug), Plast Reconstr Surg, 120:414-24 65 Sasaki M, Abe R, Fuita Y, Ando S, Inokuma D, Shimizu H (2008), “Mesenchymalăstemăcellsăareărecruitedăintoăwoundedăskinăandăcontributeătoă woundărepairăbyătransdifferentiationăintoămultipleăskinăcellătype”,ăJ Immunol, 180, pp 2581ậ2587 66 Schadeă R,ă Pfisteră C,ă Halatschă R,ă Henkleină P.ă (1991),ă “Polyclonală IgYă Antibodies from Chicken Egg Yolk—An Alternative to the Production of Mammaliană IgGă typeă Antibodiesă ină Rabbits”,ă Fund for the Replacement of Animals in Medical Experiments, ATLA, Nottingham, pp 403ậ419 67 Schafferă CJ,ă Narreyă LBă (1996),ă “Cellă biologyă ofă woundă healing”,ă Int Rev Cytol, 169, pp 151-181 68 SeiboldăJ.R,ăUittoăJ,ăDorwartăB.B,ăProckopăD.J.ă(1985),ă“Collagenăsynthesisă and collagenase activity in dermal fibroblasts from patients with diabetes and digitalăsclerosis”,ăJ Lab Clin Med, 105, pp 664ậ667 69 Sheng-Ping Huang, Chun-Hsiang Huang, Jia-Fwu Shyu, Herng-Sheng Lee4, Shyi-Gen Chen, James Yi-Hsin Chan and Shih-Ming Huang (2013), “Promotionă of wound healing using adipose-derived stem cells in radiation ulcerăofăaăratămodel”,ăJournal of Biomedical Science, pp 20-51 70 SheridanăR.L,ăTompkinsăR.Gă(1999),ă“Skinăsubstitutesăinăburns”,ă Burns 25, pp 97-103 71 Smith A.N, Willis E, Chan V.T, Muffley L.A, Isik F.F, Gibran N.S, Hocking.ă A.Mă (2010),ă “Mesenchymală stemă cellsă induceă dermală fibroblastă responsesătoăinjury”,ăExp Cell Res, 316, pp 48ậ54 72 Suppă D.M,ă Boyceă S.T.ă (2005),ă “Engineeredă skină substitutes:ă practicesă andă potentials”,ăClin Dermatol, 23, pp 403ậ412 73 Togel F, Weiss K, Yang Y, Hu Z, Zhang P, Westenfelder C (2007), Footer Page 76 of 148 Header Page 77 of 148 “Vasculotropic,ă paracrineă actionsă ofă infusedă mesenchymală stemă cellsă areă importantă toă theă recoveryă fromă acuteă kidneyă injury”,ă Am J Physiol Renal Physiol , (292), F1626ậF1635 74 Vacanti C.A, Mikos A.G (1995), Tissue Eng, 1, pp 1ậ2 75 Valbonesiă M,ă Gianniniă G,ă etă ală (2004),ă “Cordă bloodă (CB)ă stemă cellsă foră woundărepaire”,ăăTransfus Apher Sci 2004, 30:153-6 76 Wahl LM, Wahl SM (1992), Inflamation In: Cohen IK, Diegelmann RF, Lindblad WJ, et all Wound Healing Biochemical and Clinical Aspects, Philadelphia, PA: WB Saunders Company, pp 40-60 77 Wainwrightă D.J.ă (1995),ă “Useă ofă ană acellulară allograftă dermală matrixă (AlloDerm) in the management of full-thicknessăburns”,ăBurns, 21, pp 243ậ 248 78 Wallă S.J,ă Sampsonă M.J,ă Levellă N,ă Murphyă G.ă (2003),ă “Elevatedă matrixă metalloproteinase-2 and -3 production from human diabetic dermal fibroblasts”,ăBr J Dermatol, 149, pp 13ậ16 79 Werner S, Richard G (2003),ă “Regulationă ofă Woundă Healingă byă Growthă FactorsăandăCytokines”,ăPhysiol Re, 83, pp 835-870 80 Woodley D.T, Peterson H.D, Herzog S.R, Stricklin G.P, Burgeson R.E, Briggamană R.A,ă Cronceă D.J,ă O'Keefeă E.Jă (1988),ă “Burnwoundsă resurfacedă by cultured epidermal autografts show abnormal reconstitution of anchoring fibrils”,ăJAMA, 259, pp 2566ậ2571 81 Won-Serk Kim, Byung-Soon Park, Jong-Hyuk Sung, Jun-Mo Yang, SeokBeom Park, Sahng-June Kwak, Jeong-Soo Park (2007),ă “Wound healing effect of adipose-derived stem cells: A critical role of secretory factors on humanădermalăfibroblasts”.ăJournal of Dermatological Science, 48, pp 15— 24 Footer Page 77 of 148 Header Page 78 of 148 82 Wuă Y,ă Chenă L,ă Scottă P.G,ă Tredgetă E.E.ă (2007),ă “Mesenchymală stemă cellsă enhance wound healing through differentiation and angiogenesis”,ă Stem Cells, 25, pp 2648ậ2659 83 ZhangăYS,ăGaoăJH,ăLuăF,ăetăală(2007ăFeb),ăă‘‘Cellularăcompatibilityăofătypeă collagen I scaffold and human adipose-derivedăstemăcells”,ăNan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 27:223-5 84 Zuk PA, Zhu M, Ashjian P, De Ugarte DA, Huang JI, Mizuno H, et al (2002),ă “Humană adiposeă tissueă isă aă sourceă ofă multipotentă stemă cells”,ă Mol Biol Cell, 13:4279—95 85 Zuk PA, Zhu M, Mizuno H, Huang J, Futrell JW, Katz AJ, et al (2001), “Multilineageă cellsă fromă humană adiposeă tissue: implications for cell-based therapies”,ăTissue Eng, 7:211—28 Footer Page 78 of 148 ... chúng đến tế bào da nuôi cấy định hư ng điều trị vết thư ng” nhằmămụcătiêuăsau: Đánh giá đặc điểm phân lập tăng sinh tế bào gốc mỡ điều kiện nuôi cấy invitro Đánh giá nh hưởng tế bào gốc mỡ đến. .. ăbƠo da nuôi c yănƠyăđ căđánhăgiáă quaă sựă tĕngă sinh t ă bƠoă da vƠăkh ănĕngădiă c ă c aă chúng theoă cáchă th că môă t ă d ớiăđơy 2.2.5.1 Đánh giá nh hưởng tế bào gốc mô mỡ đến tăng sinh. .. ghép da cũngăđưăchi măkho ngă2500ăb nhănhơn Xu tăphátătừănhữngăc ăs ăkhoaăh căvƠăti mănĕngă ngădụng c aăt ăbƠoăg că m , chúng tôiăti năhƠnh nghiên c u: Nghiên cứu kh tăng sinh tế bào gốc mỡ nh hưởng