nghiên cứu khả năng tăng trưởng của một số vi sinh vật trên bề mặt cellulose vi khuẩn (bc-bacterial cellulose).

Kết quả và biện luận KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 1. Nhân giống A. xylinum để thu cellulose vi khuẩn (BC) - Giống A. xylinum từ ống thạch nghiêng được hoạt hóa trong 5ml môi trường MT4 trong ống nghiệm. Sau 24 giờ A. xylinum tạo một lớp màng mỏng tại bề mặt tiếp xúc giữa không khí và môi trường lỏng. - Trong nhân giống cấp 2 và 3 A. xylinum cũng tạo một lớp màng tương tự như trong nhân giống cấp 1. Hình 4.1: Hoạt hóa A. xylinum sau 24 giờ Hình 4.2: Nhân giống cấp 2 (hình trái), nhân giống cấp 3 (hình phải) SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 45 Kết quả và biện luận - Tạo miếng BC trong hộp nhựa ở điều kiện lên men tĩnh. Sau 4 ngày thu nhận miếng BC có màu vàng, đục và dai. Hình 4.3: Miếng BC sau 4 ngày lên men tĩnh, chưa xử lý  Xử lý BC tươi sau khi thu hoạch Bảng 4.1: Xử lý miếng BC STT Phương pháp xử lý BC Tính chất cảm quan 1 Đun với NaOH 3% (30 phút), trung hòa lại bằng HCl 5% Sau 3 ngày BC màu vàng chuyển sang màu trắng đục, không mùi. 2 Ngâm với NaOH 3% (12 giờ), trung hòa lại bằng HCl 5% Sau 3 ngày BC màu vàng chuyển sang màu trắng trong, không mùi. 3 Ngâm nước (24 giờ, thay nước 4 lần), vắt lần 1 (độ ẩm sau khi vắt 50 – 55%). Ngâm nước cho trương nở trở lại (24 giờ, thay nước 4 lần). Lặp lại 2 lần Sau 2 ngày BC màu vàng dần dần chuyển sang màu trắng trong, không mùi 4 Ngâm với NaOH 3% (2 giờ), trung hòa bằng HCl 5%. Lặp lại phương pháp 3 Sau 3 ngày BC màu vàng chuyển sang màu trắng trong, không mùi SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 46 Kết quả và biện luận - Tất cả các phương pháp trên đều cho kết quả là miếng BC có màu trắng và thích hợp cho các thí nghiệm sau này. Tuy nhiên chúng tôi chọn phương pháp 3 để xử lý BC vì đơn giản, ít tốn kém, thời gian xử lý ngắn và hiệu quả. Hình 4.4: Miếng BC đã qua xử lý 2. Khảo sát khả năng tăng trưởng của các chủng nấm men trên giá đỡ BC 2.1. Xác định mật độ tế bào ban đầu của các chủng nấm men - Bảng 4.2: Mật độ tế bào nấm men ban đầu và sau khi pha loãng : Chủng Phương pháp đếm hồng cầu (x10 6 tế bào/ml) Số lần pha loãng Sau khi pha loãng (x10 6 tế bào/ml) Phương pháp đếm khuẩn lạc (x10 6 tế bào/ml) S. cerevisiae 55,25 2 lần 27,625 22,6625 Rhodotorul a 27,45 1 lần 27,45 21,9125  Nhận xét: - Khi đếm bằng buồng đếm hồng cầu thì mật độ tế bào ban đầu của các chủng nấm men không bằng nhau. Do vậy cần pha loãng bằng dung dịch Hansen để điều chỉnh lại. - Kết quả ghi nhận được bằng phương pháp đếm khuẩn lạc để xác định mật độ tế bào sống ta nhận thấy mật độ tế bào sống của chúng tương đối bằng nhau. SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 47 Kết quả và biện luận 2.2. Khảo sát tỉ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích môi trường (MT) rỉ đường thích hợp cho sự tăng trưởng của các chủng nấm men 2.2.1. Chủng Saccharomyces cerevisiae - Nhân sinh khối nấm men S. cerevisiae trên BC với tỉ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích MT rỉ đường là 1:2, 1:2,5, 1:3. Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 3, 4, 5, 6, 7 và kết quả thu đuợc như sau: Hình 4.5: Sinh khối S.cerevisiae ở tỉ lệ 1:2 sau 5 ngày. Hình 4.6: Sinh khối S.cerevisiae ở tỉ lệ 1:2,5 sau 5 ngày. Hình 4.7: Sinh khối S.cerevisiae ở tỉ lệ 1:3 SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 48 Kết quả và biện luận sau 5 ngày. Bảng 4.3: Sinh khối S. cerevisiae khô (g) thu được trên BC với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy. Thời gian thu nhận (ngày) Tỉ lệ phối hợp m BC : V MT rỉ đường 1:2 1:2,5 1:3 3 0.1058 0.2738 0.2060 4 0.2277 0.4614 0.3913 5 0.3612 0.5644 0.5122 6 0.3639 0.5648 0.5129 7 0.3660 0.5651 0.5133 Biểu đồ 4.1: Sinh khối S. cerevisiae khô (g) thu được trên BC với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy  Nhận xét: • Dựa vào đồ thị 4.1, kết quả bảng 4.3 và phụ lục 19, ta có nhận xét: - Ngày thứ 5 sinh khối thu được là tốt nhất (tỉ lệ 1:2 là 0,3612g; tỉ lệ 1:2,5 là 0,5644g; tỉ lệ 1:3 là 0,5122g), những ngày về sau lượng sinh khối có tăng nhưng không đáng kể (sự khác biệt này không có ý nghĩa về mặt thống kê). Vậy ngày thu sinh khối thích hợp đối với S. cerevisiae là ngày thứ 5. - Tỉ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích MT rỉ đường 1:2,5 là tốt nhất (lượng sinh khối khô của tỉ lệ 1:2,5 là 0,5644g). SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 49 Kết quả và biện luận Đối chứng (MT rỉ đường có sục khí): nhân sinh khối nấm men S. cerevisiae với các tỉ lệ như trên. Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 3, 4, 5, 6, 7 và kết quả thu đuợc như sau: Hình 4.8: Hệ thống nhân sinh khối nấm men trong MT rỉ đường sục khí. Bảng 4.4: Sinh khối S. cerevisiae khô (g) thu được trong MT rỉ đường sục khí với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy. Thời gian thu nhận (ngày) Tỉ lệ 1:2 1:2,5 1:3 3 0.2272 0.3046 0.2861 4 0.2867 0.3979 0.3361 5 0.2871 0.3984 0.3367 6 0.2882 0.3993 0.3374 7 0.2885 0.3996 0.3386 SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 50 Kết quả và biện luận Biểu đồ 4.2: Sinh khối S. cerevisiae khô (g) thu được trong MT rỉ đường sục khí với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy Biểu đồ 4.3: Sinh khối S. cerevisiae khô (g) giữa trên BC và trong MT rỉ đường sục khí  Nhận xét: • Dựa vào biểu đồ 4.2, kết quả bảng 4.4 và phụ lục 21, ta có nhận xét: - Thời gian thu sinh khối thích hợp nhất là ngày thứ 4 (tỉ lệ 1:2 là 0,2867g; 1:2,5 là 0,3979g; 1:3 là 0,3361g), những ngày về sau lượng sinh khối có tăng nhưng không đáng kể (sự khác biệt này không có ý nghĩa về mặt thống kê) - Lượng sinh khối khô thu được ở tỉ lệ 1:2,5 là tốt nhất (0,3979g) SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 51 Kết quả và biện luận • Dựa vào biểu đồ 4.3, kết quả bảng 4.3, 4.4 và phụ lục 23, ta có nhận xét: - Lượng sinh khối nấm men khô thu được trên BC ở tỉ lệ phối hợp 1:2,5 (0,5644g) cao hơn trên MT sục khí ở cùng tỉ lệ (0,3979g). Vậy nhân sinh khối S. cerevisiae trên BC chứa MT rỉ đường cho hiệu quả tốt hơn nhân sinh khối trong MT rỉ đường sục khí. 2.2.2. Chủng Rhodotorula - Nhân sinh khối nấm men Rhodotorula trên BC với tỉ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích MT rỉ đường là 1:2, 1:2,5, 1:3. Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 3, 4, 5, 6, 7 và kết quả thu đuợc như sau: Hình 4.9: Sinh khối Rhodotorula ở tỉ lệ 1:2 sau 4 ngày. Hình 4.10: Sinh khối Rhodotorula ở tỉ lệ 1:2,5 sau 4 ngày. Hình 4.11: Sinh khối Rhodotorula ở tỉ lệ 1:3 sau 4 ngày. SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 52 Kết quả và biện luận Bảng 4.5: Sinh khối Rhodotorula khô (g) thu được trên BC với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy. Thời gian thu nhận (ngày) Tỉ lệ phối hợp m BC : V MT rỉ đường 1:2 1:2,5 1:3 3 0.6672 0.7219 0.6118 4 0.7016 0.7868 0.6724 5 0.7037 0.7882 0.6732 6 0.7050 0.7893 0.6748 7 0.7054 0.7904 0.6762 Biểu đồ 4.4: Sinh khối Rhodotorula khô (g) thu được trên BC với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy  Nhận xét: • Dựa vào biểu đồ 4.4, kết quả bảng 4.5 và phụ lục 20, ta có nhận xét: - Ngày thứ 4 sinh khối thu được là tốt nhất (tỉ lệ 1:2 là 0,7016g; tỉ lệ 1:2,5 là 0,7868g; tỉ lệ 1:3 là 0,6724g), những ngày về sau lượng sinh khối có tăng nhưng không đáng kể (sự khác biệt này không có ý nghĩa về mặt thống kê). Vậy ngày thu sinh khối thích hợp đối với Rhodotorula là ngày thứ 4. - Tỉ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích MT rỉ đường 1:2,5 là tốt nhất (lượng sinh khối khô của tỉ lệ 1:2,5 là 0,7868g). SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 53 Kết quả và biện luận Đối chứng (MT rỉ đường có sục khí): nhân sinh khối nấm men Rhodotorula với các tỉ lệ như trên. Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 3, 4, 5, 6, 7 và kết quả thu đuợc như sau: Bảng 4.6: Sinh khối Rhodotorula khô (g) thu được trong MT rỉ đường sục khí với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy. Thời gian thu nhận (ngày) Tỉ lệ 1:2 1:2,5 1:3 3 0.2741 0.3240 0.2770 4 0.3569 0.4455 0.3229 5 0.3588 0.4473 0.3242 6 0.3610 0.4496 0.3273 7 0.3617 0.4508 0.3282 Biểu đồ 4.5: Sinh khối Rhodotorula khô (g) thu được trong MT rỉ đường sục khí với các tỉ lệ theo thời gian nuôi cấy SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 54 [...]... vậy cả hai chủng Azotobacter đều có khả năng tăng trưởng tốt trên BC 3.3 Thử nghiệm khả năng tăng trưởng của các chủng Azotobacter trên BC tái sử dụng 3.3.1 Chủng A1 - Sau khi thu sinh khối A1 trên BC, tiếp tục bổ sung MT Ashby với các tỉ lệ như trên, bổ sung 2% giống Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 5, 6, 7, 8 và kết quả thu đuợc như sau: Hình 4.33: Sinh khối A1 trên BC tái sử dụng lần 1 ở tỉ lệ 1:1... 0,5644g) 2.3 Thử nghiệm khả năng tăng trưởng của các chủng nấm men trên BC tái sử dụng 2.3.1 Chủng S cerevisiae SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 56 Kết quả và biện luận - Sau khi thu sinh khối S cerevisiae trên BC, tiếp tục bổ sung MT rỉ đường với các tỉ lệ như trên, bổ sung 2% giống Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 3, 4, 5, 6, 7 và kết quả thu đuợc như sau: Hình khối 4.12: Sinh S.cerevisiae trên BC tái sử dụng... sinh khối S cerevisiae trên BC tái sử dụng lần 1, tiếp tục bổ sung MT rỉ đường với các tỉ lệ như trên, bổ sung 2% giống Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 3, 4, 5, 6, 7 và kết quả thu đuợc như sau: Hình 4.15: Sinh khối S.cerevisiae trên BC tái sử dụng lần 2 ở tỉ lệ 1:2 sau 4 ngày Hình 4.16: Sinh khối S.cerevisiae trên BC tái sử dụng lần 2 ở tỉ lệ 1:2,5 sau 4 ngày Hình 4.17: Sinh khối S.cerevisiae trên. .. sau: - Chủng A1 có khả năng tăng trưởng trên miếng BC tái sử dụng Sự khác biệt giữa khối lượng sinh khối khô trên miếng BC lần đầu tiên và tái sử dụng lần 1 không có ý nghĩa về mặt thống kê Hay nói cách khác là khối lượng sinh khối khô của hai lần này là tương đương nhau Tuy nhiên sự khác biệt giữa khối lượng sinh khối khô trên miếng BC lần đầu tiên và tái sử dụng lần 2 là có ý nghĩa về mặt thống kê Hay... biện luận Biểu đồ 4.7: Sinh khối khô (g) giữa chủng S cerevisiae và Rhodotorula trên BC  Nhận xét: • Dựa vào biểu đồ 4.7 và phụ lục 25, ta có nhận xét như sau: - Cả hai chủng nấm men đều có khả năng tăng trưởng tốt trên BC - Chủng Rhodotorula rất thích hợp khi nuôi trên BC (khối lượng sinh khối khô ở tỉ lệ phối hợp 1:2,5 sau 4 ngày là 0,7868g) cao hơn S cerevisiae (khối lượng sinh khối khô ở tỉ lệ... là 0,4281g) và ngày thứ 4 lượng sinh khối khô đạt cao nhất (0,5253g), càng về sau lượng sinh khối càng giảm Do vậy chọn ngày thứ 4 là ngày thu sinh khối thích hợp 3 Xác định khả năng tăng trưởng của các chủng Azotobacter trên giá đỡ BC 3.1 Xác định mật độ tế bào ban đầu của các chủng Azotobacter Bảng 4.11: Mật độ tế bào Azotobacter ban đầu và sau khi pha loãng : Chủng Số lần Sau khi pha Phương pháp... Biểu đồ 4.10: Sinh khối S cerevisiae khô (g) ở tỉ lệ 1:2,5 giữa các lần sử dụng Biểu đồ 4.11: Sinh khối S cerevisiae khô (g) ở tỉ lệ 1:3 giữa các lần sử dụng  Nhận xét: • Dựa vào biểu đồ 4.8, 4.9, 4.10, 4.11, bảng 4.7, 4.8 và các phụ lục 26, 27, 28, 29, ta có nhận xét như sau: - Nấm men S cerevisiae vẫn có khả năng tăng trưởng trên BC tái sử dụng Tuy nhiên sự khác biệt giữa khối lượng sinh khối khô... - Rhodotorula vẫn có khả năng tăng trưởng trên BC tái sử dụng Tuy nhiên sự khác biệt giữa khối lượng sinh khối khô lần đầu tiên và hai lần tái sử dụng là có ý nghĩa về mặt thống kê Hay nói cách khác là khối lượng sinh khối khô của hai lần tái sử dụng giảm so với lần đầu tiên nhưng tái sử dụng lần 1 giảm ít hơn so với tái sử dụng lần 2 - Tái sử dụng BC lần 1, lượng sinh khối khô của tỉ lệ phối hợp giữa... biện luận - Sau khi thu sinh khối A1 trên BC tái sử dụng lần 1, tiếp tục bổ sung MT Ashby với các tỉ lệ như trên, bổ sung 2% giống Tiến hành thu sinh khối ở ngày thứ 5, 6, 7, 8 và kết quả thu đuợc như sau: Hình 4.37: Sinh khối A1 trên BC tái sử dụng lần 2 ở tỉ lệ 1:1 sau 6 ngày Hình 4.38: Sinh khối A1 trên BC tái sử dụng lần 2 ở tỉ lệ 1:2 sau 6 ngày Hình 4.39: Sinh khối A1 trên BC tái sử dụng lần 2... về sau lượng sinh khối có tăng nhưng không đáng kể (sự khác biệt này không có ý nghĩa về mặt thống kê) - Lượng sinh khối khô thu được ở tỉ lệ 1:2 là tốt nhất (0,4527g) • Dựa vào biểu đồ 4.21, kết quả bảng 4.14, 4.15 và phụ lục 39, ta có nhận xét: - Lượng sinh khối A2 khô thu được trên BC ở tỉ lệ phối hợp 1:2 (0,5548g) cao hơn trên MT sục khí ở cùng tỉ lệ (0,4527g) Vậy nhân sinh khối A2 trên BC chứa