Khảo sát tình hình nhiễm giun đũa chó tại thường tín, hà nội, định loại bằng sinh học phân tử và biện pháp phòng trị

Và cho đến nay, cả trong nước và trên thế giới đều có nhiều nghiên cứu đã phát hiện được rất nhiều loài ký sinh trùng ký sinh và gây bệnh cho chó với nhiều đặc điểm như bệnh âm ỉ, kéo dà

MỤC LỤC

Trang

Lời cam đoan i

Lời cảm ơn ii

Mục lục iii

Danh mục bảng v

Danh mục hình và ảnh vi

Danh mục chữ viết tắt vii

MỞ ĐẦU 1

1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục tiêu nghiên cứu 2

3 Ý nghĩa khoa học của đề tài 3

4 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài 3

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

1.1 Khái quát chung về vị trí địa lý, điều kiện tự nhiên, kinh tế huyện Thường Tín 4

1.2 Khái quát chung về đặc điểm và vòng đời phát triển của giun đũa chó 5

1.2.1 Lịch sử phát hiện 5

1.2.2 Đặc điểm sinh học 5

1.2.3 Vòng đời phát triển của giun đũa chó 7

1.2.4 Dịch tễ học và phân bố 11

1.2.5 Tác hại 12

1.3 Tình hình nghiên cứu về giun đũa chó 13

1.3.1 Những nghiên cứu trong nước 13

1.3.2 Những nghiên cứu ở nước ngoài 16

1.4 Biện pháp phòng trị 19

1.4.1 Điều trị bệnh 19

1.4.2 Phòng bệnh 22

CHƯƠNG 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23

2.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 23

2.2 Nội dung nghiên cứu 23

2.3 Phương pháp nghiên cứu 23

2.3.1 Phương pháp thu mẫu phân 23

2.3.4 Phương pháp mổ khám toàn diện Skjabin 25

2.3.6 Phương pháp phỏng vấn điều tra 25

2.3.7 Phương pháp định loại giun đũa chó bằng sinh học phân tử 25

2.3.8 Phương pháp xác định độ an toàn của thuốc 27

2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 27

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29

3.1 Tình hình nhiễm giun đũa chó tại huyện Thường Tín, Hà Nội 29

3.1.1 Thành phần các loại giun tròn ký sinh ở đường tiêu hóa chó 29

3.1.2 Tỷ lệ, cường độ nhiễm giun đũa chó tại huyện Thường Tín, Hà Nội qua phương pháp mổ khám và xét nghiệm phân 32

3.1.3 Tỷ lệ nhiễm giun đũa ở chó qua xét nghiệm phân theo lứa tuổi 34

3.1.4 Tỷ lệ nhiễm giun đũa ở chó theo tính biệt 35

3.1.5 Tỷ lệ nhiễm giun đũa ở chó theo mùa vụ 36

3.2 Định loại bằng sinh học phân tử 37

3.2.1 Định loại sơ bộ bằng hình thái để định loại bằng sinh học phân tử 37

3.2.2 Kết quả thực hiện PCR thu nhận gen atp6 của Toxocara spp 37

3.2.3 Kết quả giải trình tự gen atp6 38

3.2.4 Biện pháp điều trị 46

3.2.5 Biện pháp phòng 48

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50

1 Kết luận 50

2 Đề nghị 51

TÀI LIỆU THAM KHẢO 52

PHỤ LỤC 59

DANH MỤC BẢNG

Bảng 2.1 Thành phần PCR và chu trình nhiệt 26

Bảng 3.1 Thành phần loại giun tròn ở đường tiêu hóa chó 30

Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm giun đũa chó tại huyện Thường Tín 32

Bảng 3.3 Tỷ lệ nhiễm giun đũa ở chó qua xét nghiệm phân theo lứa tuổi 34

Bảng 3.4 Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó theo tính biệt 36

Bảng 3.5 Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó theo mùa vụ 36

Bảng 3.6 Danh sách chuỗi gen atp6 của các chủng thuộc họ Toxocaridae của Việt Nam và thế giới sử dụng trong nghiên cứu này 39

Bảng 3.7 Hiệu lực của một số loại thuốc tẩy giun tròn cho chó 46

Bảng 3.8 Một số chỉ tiêu sinh lý của chó trước và sau khi dùng thuốc 47

Bảng 3.9 Tỷ lệ chó có phản ứng sau khi dùng thuốc 48

Thường Tín 30 Hình 3.3 Trứng các loại giun tròn ký sinh ở đường tiêu hóa chó tại

huyện Thường Tín 31

Hình 3.4 Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm gen atp6 của Toxocara spp

trên gel agarose 1% Ghi chú: M: Marker Lamda cắt bằng

enzyme HindIII; 38 Hình 3.5 So sánh đối chiếu trình tự nucleotide gen atp6 các mẫu

Toxocara spp trong nghiên cứu với các chuỗi đăng ký trong Ngân hàng gen 44

Hình 3.6 Xây dựng cây phả hệ dựa trên trình tự nucleotide của gen atp6

bằng chương trình MEGA6.06 (phương pháp kết nối liền kề

NJ – Neighbour Joining, với hệ số kiểm định tin cậy đã thử

1000 bootstrap) Các mẫu được đánh dấu (♦) là chỉ dẫn các mẫu được phân tích trong nghiên cứu này 45

PCR Polymerase Chain Reaction (phản ứng chuỗi Polymerase)

T leonina Toxocara leonina

T canis Toxocara canis

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Ngày nay, việc nuôi chó trong các hộ gia đình ngày càng trở nên phổ biến Cùng với sự phát triển của xã hội, chúng cũng được quan tâm chăm sóc nhiều hơn bởi lúc này chúng không chỉ là vật nuôi nữa mà chiếm vị trí là một người bạn, một thành viên trong gia đình hay còn là người đồng nghiệp khi được huấn luyện để đảm nhiệm những công việc như dẫn đường cho người mù, cứu hộ cứu nạn, tìm kiếm điều tra tội phạm.v.v

Tuy nhiên, chó là loài động vật rất mẫn cảm với các tác nhân gây bệnh Bệnh truyền nhiễm do vi khuẩn, vi rút và bệnh do ký sinh trùng đã và đang làm ảnh hưởng đến vẻ đẹp, sức khỏe, thậm chí gây chết đối với nhiều chó, mèo Hơn nữa, nước ta là một nước nằm trong khu vực khí hậu nhiệt đới gió mùa (Phạm Ngọc Toàn và Phan Tất Đắc,1993), nóng ẩm, mưa nhiều, cùng với các thói quen

ăn uống, sinh hoạt không đảm bảo vệ sinh an toàn đã tạo điều kiện thuận lợi cho giun sán phát triển quanh năm, người và động vật luôn tự nhiễm với số lượng chủng loại ký sinh trùng nhiều và cường độ nhiễm cao (Trịnh Văn Thịnh, 1967) Theo Vũ Triệu An và Jean Claude Homberg (1977), những bệnh ký sinh trùng rất phổ biến, đã và đang gây ra nhiều tử vong hơn bất cứ dạng nhiễm trùng nào khác, đặc biệt ở các vùng nhiệt đới và các nước đang phát triển Và cho đến nay,

cả trong nước và trên thế giới đều có nhiều nghiên cứu đã phát hiện được rất nhiều loài ký sinh trùng ký sinh và gây bệnh cho chó với nhiều đặc điểm như bệnh âm ỉ, kéo dài, làm chó suy dinh dưỡng, giảm sức đề kháng và suy giảm miễn dịch khiến cho chúng dễ mắc các bệnh kế phát, trong đó đáng kể nhất là những ký sinh trùng ký sinh ở đường tiêu hóa như giun đũa, giun móc và sán dây Các nghiên cứu trong nước về ký sinh trùng và bệnh ký sinh trùng ở chó đã được một số tác giả như Trịnh Văn Thịnh (1963), Đỗ Hài (1972,1975), Phạm Sỹ Lăng và cs (1993), Phạm Văn Khuê và cs (1993), Lê Hữu Khương và cs (1999), Ngô Huyền Thúy (1998) và gần đây là Võ Thị Hải Lê và Nguyễn Văn Thọ (2009, 2011) tiến hành điều tra ở một số tỉnh như Hà Nội, Hải Phòng, Huế, Thành phố Hồ Chí Minh, Thanh Hóa, Nghệ An

Đặc biệt, theo Nguyễn Văn Đề và Phạm Văn Khuê (2009) cho biết, một

số ký sinh trùng như giun đũa (Toxocara canis), giun móc (Ancylostoma caninum) ở chó còn có khả năng truyền lây và gây bệnh cho người Năm 2012,

theo Nguyễn Quốc Doanh và cs., tình hình nhiễm giun đũa ở chó khá cao, đây là nguồn dự trữ và phát tán mầm bệnh ra ngoài môi trường xung quanh dẫn đến nguy cơ nhiễm ấu trùng giun đũa chó sang người là khá cao Và cho đến nay,

người ta cũng mới xác định được trên người nhiễm Toxocara canis (có thể từ chó, mèo) và Toxocara cati (từ mèo) mà chưa thấy có loại giun đũa chó khác có

khả năng lây truyền sang người

Tuy nhiên việc chẩn đoán giám định và phân loại giun đũa chó cho đến nay chủ yếu vẫn dựa vào đặc điểm hình thái học và nuôi cấy Mặc dù dựa vào hình thái trong phân loại là rất thông dụng và đã có những thành tựu hết sức to lớn, nhưng rất khó để định danh chính xác các loài Do tiêu tốn thời gian và khó tìm kiếm đúng môi trường nuôi thích hợp hay vật chủ cho ký sinh trùng, bệnh phẩm đòi hỏi phải hoàn chỉnh hoặc phải ở trạng thái sống, nên các phương pháp chẩn đoán dựa trên nuôi cấy và hình thái học có rất nhiều hạn chế (Mori and Notomi, 2009) Các phương pháp chẩn đoán truyền thống áp dụng trong lâm sàng và dịch tễ học như xét nghiệm tìm trứng/ấu trùng hay các sản phẩm của ký sinh trùng đều có những sai số nhất định, ở nước ta lại chưa có nhiều nghiên cứu

về định loại giun đũa chó bằng sinh học phân tử để có thể khẳng định loại chắc chắn mà mới chỉ chủ yếu dừng lại ở định loại bằng hình thái

Xuất phát từ tình hình thực tế trên, chúng tôi tiến hành đề tài:

“Khảo sát tình hình nhiễm giun đũa chó tại Thường Tín, Hà Nội, định loại bằng sinh học phân tử và biện pháp phòng trị”

2 Mục tiêu nghiên cứu

- Xác định tình hình nhiễm giun đũa ký sinh ở đường tiêu hoá của chó nuôi ở Hà Nội

- Định loại được giun đũa chó bằng phương pháp sinh học phân tử

- Xác định hiệu lực thuốc tẩy trừ giun đũa cho chó

- Đề xuất biện pháp phòng trị bệnh giun đũa cho chó có hiệu quả

3 Ý nghĩa khoa học của đề tài

Kết quả của đề tài là những thông tin khoa học bổ sung và hoàn thiện thêm các nghiên cứu về đặc điểm dịch tễ của bệnh giun đũa ký sinh ở đường tiêu hoá của chó trong điều kiện chăn nuôi hiện nay ở nước ta

4 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài

Kết quả nghiên cứu của đề tài là những minh chứng về tác hại của giun đũa ký sinh ở đường tiêu hoá của chó, đồng thời là những khuyến cáo có ý nghĩa cho những hộ gia đình nuôi chó ở Hà Nội và các địa phương khác

Kết quả nghiên cứu có thể ứng dụng để chẩn đoán và phòng trừ bệnh giun tròn đường tiêu hóa, góp phần khống chế bệnh trong thực tiễn

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Khái quát chung về vị trí địa lý, điều kiện tự nhiên, kinh tế huyện Thường Tín

Huyện Thường Tín có diện tích 127,59 km2, phía đông giáp tỉnh Hưng Yên với ngăn cách tự nhiên là sông Hồng, phía nam giáp huyện Phú Xuyên, phía tây giáp huyện Thanh Oai, ngăn cách bởi sông Nhuệ, phía bắc giáp huyện Thanh Trì Huyện Thường Tín có 01 thị trấn huyện lị và 28 xã, dân số là 230.000 người

Về đất đai đa: phần diện tích đất đai là đồng bằng được bồi đắp bởi hai 2 dòng sông chính là sông Hồng và sông Nhuệ Về giao thông, Thường Tín có hệ thống đường giao thông thuận lợi với hai tuyến đường bộ chạy dọc huyện là quốc lộ 1A dài 17,2 km và đường cao tốc Pháp Vân - Cầu Giẽ dài 17 km đến cầu Vạn Điểm đoạn giao cắt với đường 429 (73 cũ)

Về cơ cấu kinh tế: Công nghiệp - xây dựng chiếm tỷ trọng lớn nhất là 53,4%; Thương mại dịch vụ: 32,5%; Nông nghiệp: 14,1% Thường Tín là huyện

có nhiều làng nghề lâu đời với những sản phẩm nổi tiếng như: Đan lưới ở trần phú, xã minh cường, Tiện gỗ ở Nhị Khê, Sơn mài ở Duyên Thái, Thêu ở Quất Động, Thêu ở xã Dũng Tiến, Làm bánh dày ở Quán Gánh, Mây tre đan ở Bằng

Sở, Ninh Sở, Sản xuất vàng mã ở Văn Bình, Điêu khắc gỗ đá ở Nhân Hiền - Hiền Giang, Một số nghề mới phát triển mấy chục năm trở lại đây như: Xương sừng Thuỵ Ứng - xã Hoà Bình, Bông len ở Trát Cầu - Tiền Phong, Mộc cao cấp ở Vạn Điểm, Nghề trông cây cảnh ở Hông Vân, Vân Tảo, Tự Nhiên, Thư Phú

Huyện Thường Tín cũng như nhiều địa phương khác thuộc đồng bằng Bắc

Bộ, chịu ảnh hưởng trực tiếp của khí hậu nhiệt đới, gió mùa Thuận lợi cho sản xuất nông nghiệp Nhiệt độ trung bình năm 23,80C, nhiệt độ trung bình cao nhất

350C - 370C (tháng 6 - tháng 8), thường kèm theo mưa to Nhiệt độ trung bình thấp nhất có năm xuống dưới 100C (tháng 12 đến tháng 1), có khi kèm theo sương muối Hướng gió chủ đạo: gió Đông Nam về mùa hè, gió Đông Bắc về mùa đông Vận tốc gió trung bình 2m/s Huyện ít chịu ảnh hưởng trực tiếp của bão, chủ yếu ảnh hưởng gây mưa lớn, hàng năm thường có 5-7 cơn bão gây mưa

lớn Lượng mưa trung bình hàng năm thường từ 1600- 1800 mm Độ ẩm không khí trung bình năm là 83%, thấp nhất trung bình là 80% ( tháng 1), cao nhất trung bình là 88% (tháng 3) Tổng số giờ nắng trong năm khoảng 1600 - 1800 giờ/năm Nhìn chung, huyện Thường Tin, Hà Nội cũng mang đặc điểm chung của vùng nhiệt đới gió mùa nên là môi trường cho các bệnh về ký sinh trùng phát triển

1.2 Khái quát chung về đặc điểm và vòng đời phát triển của giun đũa chó

1.2.1 Lịch sử phát hiện

Werner (1782) lần đầu tiên phát hiện giun tròn Toxocara canis (T canis)

và Toxascaris leonina (T leonina) ký sinh ở ruột non của chó và chó sói Linstow (1902) phát hiện và mô tả loài T leonina Năm 1941, Petrov đã nghiên cứu thành công vòng đời và phương thức nhiễm vào ký chủ của loài T canis (Đỗ Dương Thái và cs., 1978) Năm 1942, Watkins đã phát hiện T canis ở chó và cáo

đỏ Năm 1977, Petrov đã nghiên cứu tiếp về con đường xâm nhập của T leonina

vào cơ thể vật chủ và bổ sung hoàn chỉnh cho vòng phát triển của chúng

1.2.2 Đặc điểm sinh học

+ Vị trí của giun đũa chó:

Vị trí của giun đũa chó trong hệ thống phân loại theo Phan Thế Việt và cs (1977) như sau:

Lớp giun tròn Nemấu trùng oda

Phân lớp Secernentea Linstow, 1905

Bộ Spirurida Chitwood, 1933

Phân bộ Ascaridấu trùng a Skrjabin et Henry, 1915

Họ Ascarididae Baird, 1853

Loài Toxascaris leonina Linstow, 1902 Tên đồng vật: Ascaris canis (Clause, 1909)

Giống Toxxocara Stiles, 1905

Loài là Toxocara canis Werner, 1782

+ Đặc điểm hình thể:

Những nghiên cứu của Trần Minh Châu và cs (1988), Phạm Văn Khuê, Phan Lục (1996), Phan Địch Lân và cs (2005), Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân (2001), Nguyễn Thị Lê và cs (1996), Nguyễn Thị Lê (1996), Trịnh Văn Thịnh

(1963), Bowman (1996) đều cho biết: T canis có kích thước lớn, màu vàng nhạt,

đầu hơi cong về phía bụng, có cánh đầu rộng Đầu có 3 môi, trên mỗi môi đều có các răng nhỏ, không có môi trung gian Thực quản hình trụ, đặc biệt giữa thực quản và ruột có đoạn phình to như dạ dày Giun đực dài 50 - 100mm, đầu có cánh dài, hẹp, hơi giống mũi giáo Có hai gai giao cấu bằng nhau, dài 0,75 - 0,95mm Cánh đuôi hẹp hoặc không có, có nhiều nhú trước và sau hậu môn Cuối đuôi giun đực hình thành dạng mũi khoan Giun cái dài 90 - 180mm, đuôi thẳng, lỗ sinh dục ở nửa trước cơ thể, âm môn ở vào khoảng giữa 1/4 phía thân trước, có 2 tử cung

Phạm Sỹ Lăng và cs (2009), Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân (2001) cũng

cho biết: T leonina là giun tròn, nhỏ, dài, có màu vàng nhạt, đầu có 3 lá môi, thực quản đơn giản, hình trụ, không có đoạn phình to như ở T canis Giun đực

dài 4 - 8cm, đuôi thon đều, không có phần phụ hình chóp đầu có cánh hẹp như mũi giáo Giun cái dài 65 - 100mm, lỗ sinh dục ở nửa trước cơ thể Mỏm đầu của

T leonina cũng giống như mỏm đầu của T canis, có 3 lá môi Mỏm cuối đuôi

của giun đực thon nhỏ, không có cánh đuôi Gai giao hợp dài gần bằng nhau, dài 0,9 - 1,5mm, không có màng cánh và bánh lái giao hợp Âm môn của giun cái ở vào khoảng 1/3 phía trước thân Trứng có vỏ dày, tròn nhẵn

+ Trứng và ấu trùng

Trứng giun đũa T canis gần tròn, đường kính 0,068 - 0,075mm, vỏ ngoài

dày, gồm 4 lớp khác nhau, có nhiều chỗ lồi lõm như tổ ong giúp trứng chống lại tác động của nhiệt độ cao, hóa chất và ánh sáng trực tiếp Chính vì vậy, trứng giun đũa có sức đề kháng cao với các điều kiện bất lợi của môi trường Trứng của

T leonina có vỏ ngoài nhẵn, phôi xếp không kín vỏ, đường kính 0,075 - 0,085mm, dễ phân biệt được trứng của T canis và T leonina để có khả năng gây

nhiễm thì trứng giun đũa phải trải qua giai đoạn phát triển thành ấu trùng cảm

nhiễm ở ngoài môi trường Theo Sally Gardiner (2007) thì ấu trùng của T canis

ở giai đoạn hai dài 0,335 - 0,444mm, ký sinh trong các mô cơ thể của chó Ấu trùng lột xác lần thứ hai ở phổi, tim hoặc ở dạ dày Ấu trùng giai đoạn 3 dài 0,66 - 1,19mm, lột xác ở phổi và dạ dày thành ấu trùng giai đoạn 4, có chiều dài 1,2 - 7,4mm

1.2.3 Vòng đời phát triển của giun đũa chó

+ Ký chủ, nơi ký sinh

Ở nước ta, các tài liệu điều tra của một số tác giả như Phạm Sỹ Lăng và

cs (1989), Phạm Văn Khuê, Phan Lục (1996), Houdemer (1938), Trịnh Văn

Thịnh (1966), Phan Thế Việt và cs (1977), Bowman (1999) đều xác định: T canis, T leonina ký sinh ở dạ dày hoặc ruột non của chó nhà, hổ, báo, sư tử, mèo

rừng, chó fox, cáo, chó Nhật, chó Berger

+ Vòng phát triển

Khi chó mẹ nuốt phải trứng có phôi của giun đũa chó, trứng nở trong dạ dày và ruột non, trứng giải phóng ấu trùng giai đoạn 2 xâm nhập vào thành ruột rồi theo đường máu di chuyển khắp nơi trong cơ thể Khoảng một tuần sau, tất cả

ấu trùng giai đoạn 2 đã có mặt trong nhu mô gan, phổi, thận, não Vì vậy, không

có giun trưởng thành ở ruột chó cái (tuy nhiên một số tác giả đã chứng minh rằng chó cái có giun trưởng thành ở ruột, song cơ địa của chó con mới thực sự thích hợp cho sự sống, tăng trưởng và trưởng thành của giun đũa chó) Ấu trùng có thể tồn tại trong các mô của chó mẹ trên hàng tháng hay hàng năm mà không phát triển thêm nữa Nếu chó cái có thai, ấu trùng di chuyển qua bánh rau, tới mô gan

và phổi của thai Sự xâm nhập vào thai không xảy ra trước ngày thứ 42 của thai

kỳ và cũng không thể xảy ra khi chó mẹ mới bị nhiễm khoảng nửa tháng Ấu trùng xâm nhập vào thai thường do chó mẹ bị nhiễm từ các năm trước Lúc sinh

ra, ấu trùng giai đoạn 3 được tìm thấy chủ yếu trong mô phổi của chó con Từ đó,

ấu trùngdi chuyển đến khí quản, lọt vào thực quản đến dạ dày, phát triển thành ấu trùng giai đoạn 4 vào khoảng 3 ngày tuổi Khoảng từ ngày tuổi thứ 11 đến ngày thứ 21, số giun trưởng thành tăng trong ruột non và sau 3 tuần, trứng bắt đầu xuất

hiện trong phân chó con Lúc này, chó mẹ có thể nuốt phân chó con, nếu trứng chưa có phôi thì chính chó mẹ lại thải cơ học một lượng lớn trứng trong phân Khi tiếp xúc với không khí, với môi trường ngoài, trứng phát triển đến ấu trùng giai đoạn 1, kế đó là ấu trùng giai đoạn 2 nằm trong vỏ trứng Thời gian này mất khoảng 12 ngày hoặc hơn tùy điều kiện môi sinh Song ở giai đoạn phát triển đủ

độ, thời gian trứng có khả năng gây nhiễm kéo dài hàng năm Chó con có thể nuốt trứng có phôi suốt 3 tuần sau sinh, sẽ cho ra giun trưởng thành sau này trong ruột Tuy nhiên, chỉ có một số ít ấu trùng phát triển thành giun trưởng thành trong ruột, còn số còn lại vẫn ở dạng ấu trùng lưu hành trong máu Ấu trùng giai đoạn 2 có thể tìm thấy trong mô của chó con và chó ở mọi lứa tuổi, cũng có trong

mô của chuột và những loài khác được coi là ký chủ tương đồng Mối quan hệ giữa trứng giun và chó đực được báo cáo trong các nghiên cứu Sự nuốt trứng có phôi của chó cái trưởng thành nếu không gây nên sự trưởng thành của giun ở ruột, sẽ tồn tại mãi dưới dạng ấu trùng, chờ đợi gây nhiễm cho phôi thai kể cả lúc chó mẹ có thai nhiều lần kế tiếp

Tuy nhiên, chu kỳ sinh học của ấu trùng phụ thuộc vào lứa tuổi của chó Trên những con chó con (< 3 tháng tuổi) trứng sẽ nở ra ấu trùng trong tá tràng và xuống ruột non Tại ruột non, ấu trùngchui qua thành ruột xâm nhập vào hệ bạch huyết và hệ mao-tĩnh mạch rồi theo đường máu đến gan, tim, phổi Ở đây, ấu trùng sẽ phát triển và thoát vỏ Tiếp đó, ấu trùng sẽ xuyên qua khí quản vào thực quản và đến ruột non Những trứng đầu tiên xuất hiện trong phân là vào thời điểm 4-5 tuần sau khi nhiễm Trên những con chó lớn tuổi hơn, ấu trùnghiếm khi xuyên qua phổi đến khí quan Hầu hết chúng vào trong máu rồi phân tán trong cơ thể chó, đặc biệt chúng vẫn giữ nguyên dạng ấu trùng không phát triển thành giun trưởng thành, cho đến khi chúng đến mô

Ở chó, chu trình phát triển của giun đũa chó tương tự như giun đũa ở người, trứng được thải ra trong phân của chó, các trứng này phát triển thành trứng có phôi và tồn tại rất lâu ở môi trường bên ngoài và có thể lây nhiễm cho

ký chủ khác trong nhiều tháng, người bị nhiễm do nuốt một cách ngẫu nhiên

trứng có phôi của giun đũa chó trong đất, nước hay thức ăn bẩn do sự thải trứng giun đũa có phôi từ các chó, nhất là chó con Ấu trùng được phóng thích trong ruột non, đi theo đường máu di chuyển đến các nội tạng khác nhau, nơi đây chúng có thể sống sót nhiều năm, tự do hay hóa kén, nhưng không bao giờ phát triển thành con trưởng thành, chúng kích thích tạo ra phản ứng hóa hạt ở mô ký chủ nhất là những trường hợp nhiễm tái đi tái lại

Các loài giun đũa thuộc bộ phụ Ascarid ấu trùng có vòng phát triển trực tiếp, không qua vật chủ trung gian, tuy nhiên có sự khác nhau ở các loài giun đũa, đặc biệt là ở cách chúng xâm nhập vào cơ thể vật chủ cuối cùng Theo Phạm

Sỹ Lăng và cs (2009) thì T canis trưởng thành ký sinh ở dạ dày hoặc ruột non,

đẻ trứng, trứng theo phân ra ngoài, gặp điều kiện nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng thích hợp sẽ phát triển thành ấu trùng cảm nhiễm Trường hợp lây nhiễm qua đường tiêu hoá, ấu trùng được giải phóng khỏi trứng, bắt đầu quá trình di hành trong cơ thể ký chủ Ấu trùng xuyên qua niêm mạc ruột, vào máu, theo hệ thống tuần hoàn đến gan, về tim, lên phổi vào khí quản, lên miệng rồi trở lại ruột non, phát triển tới dạng giun trưởng thành Ở những con chó con thì ấu trùng di chuyển qua phổi

và phế quản và thực quản Con trưởng thành sẽ phát triển và thải trứng ở ruột non Ở những con chó già thì ấu trùng ký sinh chủ yếu ở các mô hơn Một số ấu trùng sau khi vào phổi tiếp tục theo hệ thống tuần hoàn về các tổ chức cư trú làm thành kén và có khả năng lây nhiễm tiếp cho động vật cảm nhiễm khác, nếu chúng ăn phải các kén này Các ký chủ không chuyên biệt như chuột đồng, chuột

nhà nuốt phải trứng T canis chứa ấu trùng cảm nhiễm thì ấu trùng nở ra, chui

qua thành ruột và theo máu đến các cơ quan vào mô và đóng kén tại đó Ấu trùng

đã đóng kén không phát triển nhưng cấu tạo giải phẫu thay đổi Chó ăn phải các

ký chủ chứa kén này thì ấu trùng sẽ giải phóng khỏi kén, tới ruột và phát triển tới dạng trưởng thành Một số ấu trùng xâm nhập qua hệ tuần hoàn của chó mẹ vào bào thai Do đó chó con sau khi sinh đã mang sẵn mầm bệnh, đến 21 ngày tuổi, giun đã có thể gây bệnh nặng cho chó Phạm Sỹ Lăng và cs (2009) cho biết, thời

gian hoàn thành vòng đời của T canis hết 26 - 28 ngày Quá trình phát triển của

T canis được trình bày qua sơ đồ ở hình 1.1

KÝ CHỦ CUỐI CÙNG Giun trưởng thành

Trứng

Hình 1.1 Vòng phát triển của T canis

Hiện nay, bệnh giun đũa chó được xếp vào loại bệnh truyền lây từ động vật sang người (Theo Okulewicz và cs.,2012) Tuy nhiên, cũng theo Okulewicz

và cs.(2012) cho biết mới chỉ khẳng định được giun đũa chó do Toxocara canis

là có khả năng lây truyền sang người, còn các loài khác thì chưa có nghiên cứu nào khẳng định Con người là những vật chủ tình cờ bị nhiễm do ăn phải thức ăn trồng nơi đất bị ô nhiễm có chứa trứng (hoặc ấu trùng) giun đũa chó hoặc ăn phải chính các vật chủ của giun đũa chó Sau khi ăn xong, ấu trùng di hành qua thành ruột và đến các mô (tim, phổi, gan, não, cơ bắp và mắt) Tại đây thì chúng không phát triển hơn nữa mà gây ra những tổn thương nghiêm trọng ở vùng đó, biều hiện lớn nhất là di hành nội tạng và di hành đến mắt

Phan Địch Lân và cs (2005), Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008), Phạm

Sỹ Lăng và cs (2009), Bowman (1996) xác nhận giun trưởng thành T leonina ký

sinh ở ruột non hoặc dạ dày của ký chủ cuối cùng Giun cái đẻ trứng, trứng theo phân ra ngoài, gặp điều kiện thuận lợi, sau 3 ngày phát triển thành trứng có ấu

Kén trong tổ chức

Bào thai

Trứng gây nhiễm

trùng gây nhiễm Trứng lẫn trong thức ăn, nước uống rồi đi vào đường tiêu hóa,

ấu trùng được giải phóng, chui qua niêm mạc ruột và dừng lại ở đó, sau một thời gian biến thái rồi trở về xoang ruột phát triển thành dạng trưởng thành Như vậy

quá trình phát triển và hoàn thành vòng đời của T leonina đơn giản hơn so với vòng phát triển của T canis đặc biệt ấu trùng di hành của T canis không qua

tuần hoàn máu về bào thai, nên mầm bệnh không truyền từ chó mẹ sang chó con Thời gian hoàn thành vòng đời khoảng 21 - 28 ngày.

Quá trình phát triển của T.leonina được trình bày qua sơ đồ ở hình 1.2

KÝ CHỦ CUỐI CÙNG Giun trưởng thành

Trứng

Trứng gây nhiễm

Hình 1.2 Vòng phát triển của T.leonina 1.2.4 Dịch tễ học và phân bố

Theo Nguyễn Phước Tương (2000), Soulsby (1974), Sieczko và Patrzalek

(1992), Fok et al (1988), Agudelo et al (1990), Beaver et al (1952), Giraldo et

al (2005), Dubná S et al (2007); Aguilar et al (2005), De Castro et al (2005), Woodruff A.W (1970) thì T canis, T leonina được phát hiện ký sinh ở chó thuộc

nhiều nước trên thế giới, phổ biến ở các nước thuộc vùng nhiệt đới nóng ẩm hoặc

ôn đới như: Anh, đức, Colombia, Hungari, Mỹ, Tây Ban Nha, Mexico, Brazil, Thổ Nhĩ Kỳ, Australia, Negeria Ở Việt Nam, các nghiên cứu của Trần Minh Châu và cs (1988), Đào Huyền Giang (1995) , Đỗ Hài (1972, 1975) ; Phan Địch Lân và cs (2005) , Lê Hữu Nghị và cs (2000), Đỗ Dương Thái và cs (1978) ,

Trịnh Văn Thịnh (1963) cũng cho biết, T canis và T leonina phân bố rất rộng ở

hầu hết các vùng sinh thái khác nhau trong cả nước, đặc biệt là các tỉnh vùng

đồng bằng sông Hồng và một số tỉnh miền núi phía Bắc Trong đó T canis là một loài giun tròn phổ biến ở động vật ăn thịt và phân bố nhiều nơi trên thế giới Bệnh do giun đũa có ở chó, chó săn, chó nghiệp vụ ở mọi lứa tuổi, nhưng chó con dưới 6 tháng tuổi có tỷ lệ nhiễm cao hơn chó trưởng thành

1.2.5 Tác hại

Trần Minh Châu và cs (1988), Phạm Sỹ Lăng (1989), Đỗ Dương Thái và

cs (1978) thì bệnh giun đũa chủ yếu ở súc vật non Giun lấy thức ăn của ký chủ

và giải phóng những sản phẩm trao đổi chất và độc tố, gây bần huyết, gầy mòn, sản phẩm độc tác động vào hệ thần kinh trung ương của ký chủ gây bại liệt, co giật Giun tác động cơ giới cùng những chất độc kích thích gây viêm cấu trùng a ruột Ấu trùng giun đũa chó di hành khắp cơ thể, sau 1 lần biến thái thứ 3 chúng

đi vào dạ dày, từ đó vào xoang ruột Trong khi di hành chúng vào tử cung, vào hệ tuần hoàn của bào thai khiến cho sự nhiễm giun trong tử cung là phổ biến đối với

T canis

Theo Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân, (2001), Phạm Sỹ Lăng và cs (2009) thì bệnh giun đũa chủ yếu phát ra và gây tác hại cho chó con từ 20 ngày đến 3 tháng tuổi Chó con nhiễm bệnh sớm thì 15 đến 21 ngày tuổi qua xét nghiệm

phân đã thấy có trứng giun đũa T canis Những nghiên cứu của Phạm Sỹ Lăng

(1989), Phạm Sỹ Lăng và cs (1989, 2009) , Trịnh Văn Thịnh (1967) cho thấy, chó nhiễm giun đũa thường gầy còm, suy dinh dưỡng do giun chiếm đoạt chất dinh dưỡng, đồng thời trong quá trình ký sinh chúng còn gây tác động cơ học: chướng bụng, tắc ruột, nôn mửa, ỉa lỏng, phân tanh Đặc biệt chó 1 - 4 tháng tuổi thường rên rỉ, lăn lộn và thải giun một cách tự nhiên khi chưa dùng thuốc Theo Đào Huyền Giang (1995), Đỗ Dương Thái và cs (1978), Trịnh Văn Thịnh (1971) khi mắc bệnh giun đũa, chó thường gầy còm, lông xù, bụng to, ăn uống bất thường, đi tả hoặc đi táo, có khi có triệu chứng như động kinh, nôn mửa Khi bội nhiễm giun đũa, chó có triệu chứng thần kinh như run rẩy, thỉnh thoảng lên cơn

co giật, giẫy dụa, chảy nước dãi Chó 3 tháng tuổi nhiễm giun đũa có biểu hiện viêm phúc mạc, xoang bụng tích nước Thời kỳ ấu trùng giun đũa di hành qua phổi gây viêm phổi, tắc ống dẫn mật điều quan trọng là trứng giun đũa cảm

nhiễm T canis có thể gây nhiễm cho người Trịnh Văn Thịnh (1967), Phạm Văn Khuê, Phan Lục (1996) xác nhận: chó nhiễm T canis do ăn phải trứng chứa ấu

trùng gây nhiễm, ăn phải thịt ký chủ dự trữ có chứa ấu trùng , hoặc bị nhiễm qua

bào thai Chó trưởng thành nhiễm ít hơn chó non, T canis gây bệnh nặng cho chó

con dưới 2 tháng tuổi

Giun đũa T canis còn là nguyên nhân gây bệnh ở người Khi nghiên cứu

về bệnh do T canis truyền lây sang người, tác giả Trần Thị Hồng, Trần Vinh Hiển (1997) , Bouchard et al (1994), Roig et al (1992) cho biết, ấu trùng được

phóng thích trong ruột non, đi theo đường máu di chuyển đến các nội tạng khác nhau, ở đó chúng có thể sống sót nhiều năm, tự do hay hóa kén, nhưng không bao giờ phát triển thành trưởng thành Dạng ấu trùng này kích thích tạo ra phản ứng hóa hạt ở mô ký chủ, nhất là những trường hợp bội nhiễm Các triệu chứng lâm sàng dù rất điển hình cũng dễ nhầm lẫn với bệnh khác Người nhiễm bệnh do

nuốt một cách ngẫu nhiên trứng gây nhiễm của T canis trong đất, nước hay thức

ăn bẩn có chứa ấu trùng cảm nhiễm, khi chẩn đoán ELISA với kháng nguyên có

thể phát hiện được T canis Trần Xuân Mai (1992) thông báo, đã gặp 2 trường

hợp bệnh do Toxocara ở nội tạng và một trường hợp bệnh ở mắt người Ở Ba Lan, Sieczko và Patrzalek (1992) ghi nhận một trường hợp bé trai 10 tuổi mắc

bệnh do giun đũa rất nặng và ấu trùng xâm lấn nhiều cơ quan Villano et al (1992) phát hiện một trường hợp T canis ở màng nhện thuộc vùng cổ của người thuộc Italia Ở Mỹ, Bouchard et al (1994); Roig (1992) phát hiện thấy một người

bị viêm phổi, trong dịch nước phế nang có 64% bạch cầu toan tính, huyết thanh

chẩn đoán ELISA với kháng nguyên T canis dương tính Nghiên cứu của Kutdang et al (2010) cũng chỉ ra rằng, T canis là loài phổ biến ở chó, trứng

thường xuyên được thải ra ngoài theo phân và có thể tồn tại nhiều năm trong đất

và là nguồn lây nhiễm tiềm tàng

1.3 Tình hình nghiên cứu về giun đũa chó

1.3.1 Những nghiên cứu trong nước

Bệnh giun sán là bệnh nội ký sinh trùng phổ biến và gây nhiều tác hại ở nhiều loài động vật và cả ở người Đây là một trong những vấn đề quan ngại của

các nhà chức trách vì có nhiều loại giun sán có khả năng truyền lây trực tiếp sang cho con người thông qua các sự tiếp xúc gần gũi của con người và các loại thú cảnh, đặc biệt là chó Một số loài giun sán có khả năng truyền lây trực tiếp sang

cho con người như: Ancylostoma caninum, Ancylostoma ceylanicum, Ancylostoma braziliense, Toxocara canis,…Vì vậy, trên thế giới nói chung và

nước ta nói riêng đã có nhiều công trình nghiên cứu về bệnh do ký sinh trùng gây nên ở vật nuôi, trong đó có các công trình nghiên cứu về bệnh giun sán chó Ở nước ta, vào những năm đầu thế kỷ 20, nghiên cứu về ký sinh trùng ở chó còn rất

ít, chủ yếu là nghiên cứu của một số tác giả người Pháp như Houdemer, Noc, Bauche

Kết quả nghiên cứu bước đầu xác nhận; chó ở Việt Nam nhiễm 26 loài

giun sán, trong đó chó nhiễm Ancylostoma caninum với tỷ lệ cao nhất

(75,87%) (dẫn theo Đỗ Dương Thái, Trịnh Văn Thịnh 1978) Houdemer

(1938) đã phát hiện ra loài Ancylostoma braziliense ký sinh ở ruột non chó, Ancylostoma caninum ký sinh trên chó ở Sài Gòn, Huế và Bắc Bộ. Tại thành phố

Hồ Chí Minh, theo một nghiên cứu của Lê Hữu KhuFoFng và cs (1998) thì chó

nhiễm 3 loài giun tròn là A caninum, A braziliense và U stenocephala Trong

đó nhiễm A caninum với tỷ lẹF cao nhất 79, 84% Tại Huế tỷ lệ nhiễm giun móc

khi kiểm tra 130 chó là khá cao với 40,67% (Lê Hữu Nghị và cs., 2000).Tại Việt

Nam một số trường hợp nhiễm ấu trùng Ancylostoma caninum đã được ghi nhận,

có hội chứng ấu trùng di chuyển ngoài da ở nhiều vị trí trên cơ thể như bàn tay, bàn chân, lưng, bụng, mặt ( Lê Thị Cẩm Ly và Trần Phù Mạnh Siêu, 2012) Công tác điều tra cơ bản về giun sán ở chó đã được các tác giả nghiên cứu hệ thống và liên tục với những phương pháp và kỹ thuật kinh điển sử dụng cho ký sinh trùng học Đó là các tác giả: Trịnh Văn Thịnh (1963), Đặng Văn Ngữ (1963-1974), Bùi Lập (1965), Phạm Sĩ Lăng (1985), Phan Địch Lân, Đoàn Văn Phúc, (1989), Phạm Văn Khuê (1993), Ngô Huyền Thuý (1996)

Đỗ Hài 1970 - 1972 đã kiểm tra 174 mẫu phân chó săn Tác giả cho biết: chó dưới 1 tháng tuổi đã thấy nhiễm trứng giun đũa, cho đến khi hơn 1 tháng tuổi hầu như tất cả chó đều nhiễm giun đũa và sau khi cai sữa toàn bộ

chó đều nhiễm giun đũa và giun móc Từ 3-5 tháng tuổi trở lên, tỷ lệ nhiễm giun đũa có giảm, nhưng chó lớn tỷ lệ nhiễm giun móc là 100% và tồn tại cho đến khi chó già và chết Tác giả cho biết, chó mẹ nuôi con nhiễm giun tóc 93.7%, giun đũa 73,7%, giun móc 100% Trịnh Văn Thịnh (1978) cho biết: chó

nhiễm 11 loài giun tròn gồm: Toxocara canis, Toxascaris leonina, Ancylostoma caninum, Strongyloides sp, Trichocephalus sp, Uncinaria stenocephala, Ancylostoma braziliense, Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens, Dipetallonema dracunculoides, Spirocerca lupi

Phan Thế Việt, Nguyễn Thị Kỳ, Nguyễn Thị Lê (1977) cho biết: chó nhiễm 16 loài giun tròn Phạm Sĩ Lăng (1985) xét nghiệm 1718 mẫu phân chó và

cho biết, tỷ lệ nhiễm giun móc Ancylostoma caninum là 74,8% Phạm Sĩ Lăng

(1993) mổ khám 23 chó chết và xét nghiệm phân của 574 chó cảnh ở vườn thú

Thủ Lệ, đã phát hiện 5 loài giun tròn ký sinh ở chó với tỷ lệ nhiễm: Ancylostoma caninum 72%, Toxocara canis 20,4%, Toxascaris leonina 29,4 %, Trichocephalus vulpis 17,1%, Strongyloides canis 14,2%

Phạm Văn Khuê và cs (1993) xét nghiệm 187 mẫu phân chó và mổ khám một số chó nuôi tại 4 quận nội thành Hà Nội và huyện Gia lâm đã tìm thấy 5 loài

giun tròn ký sinh ở đường tiêu hoá của chó với tỷ lệ nhiễm là: Ancylostoma caninum 59,7 % ,Toxocara canis 20,2 %, Toxascaris leonina 29,4 % Trichocephalus vulpis 17,1% Spirocerca lupi 14,2%

Ngô Huyền Thuý và cs (1994) xét nghiệm phân chó ở Hải Phòng và

Hà Nội thấy nhiễm 5 loài giun tròn, tỷ lệ lần lượt là: Toxocara canis 27,8% và 27% Toxascaris leonina; 17,8% và 21,9% Ancylostoma caninum; 67,7% và 62,3% Uncinaria stenocephala; 66,1% và 64,9% Trichocephalus vupis; 3,4% và

12,4% Đào Huyền Giang (1995) xét nghiệm phân chó Nhật, chó Fok, chó lai và

chó nội, cho biết cả 4 giống chó đều nhiễm 2 loài giun Toxocara canis từ 15,39%

- 20% và Toxascaris leonina từ 30,7% - 37,5 % (dẫn theo Ngô Huyền Thuý,

1996) Ngô Huyền Thuý (1996) xét nghiệm mẫu phân chó nuôi tại Hà Nội thấy nhiễm 12 loài thuộc 12 giống giun sán, mổ khám 516 chó thấy tỷ lệ nhiễm giun tròn, sán dây, sán lá, lần lượt là 98,5%, 36,8% và 10,4%, trong đó

tỷ lệ nhiễm giun móc Ancylostoma caninum là cao nhất 70,5% - 81,65%, tỷ lệ nhiễm giun thực quản Spirocerca lupi là 6,9%

Lê Hữu Khương, Lương Văn Huấn (1998) mổ khám ruột non của 253 chó và xét nghiệm 753 mẫu phân chó nuôi tại thành phố Hồ Chí Minh Tác giả cho biết, tỷ lệ nhiễm giun móc lần lượt là 90,51% và 61,62%, Tác giả phát

hiện được 3 loài giun móc là: Ancylostoma caninum, Uncinaria stenocephala, Ancylostoma brazillense

Lê Hữu Nghị và cs (2000) kiểm tra 130 chó ở thành phố Huế, cho

biết tỷ lệ nhiễm Toxocara canis là 58,46%

Võ Thị Hải Lê và Nguyễn Văn Thọ (2011) mổ khám 177 chó nuôi tại một

số địa điểm thuộc tỉnh Thanh Hóa, tác giả đã phát hiện thấy 6 loài giun tròn ký

sinh ở đường tiêu hóa của chó là Ancylostoma caninum, Ancylostoma braziliense, Uncinaria stenocephala, Toxocara canis, Toxascaris leonina, Trichuris vulpis

Tỷ lệ nhiễm A.caninum ở cả 3 vùng: núi, đồng bằng khá cao, dao động từ 43,85 – 53,33% T.canis có tỷ lệ nhiễm 10-25% T.leonina 3,33 – 20,0%, T.vulpis 5%

Từ thống kê trên cho thấy, chó ở nước ta nhiễm nhiều loài giun tròn, trong

đó số lượng loài ký sinh ở đường tiêu hoá là phổ biến Những loài giun tròn

gây tác hại nhiều cho chó và khả năng lây sang người là Toxocara canis, Toxascaris leonina, Trichocephalus vulpis và đặc biệt là loài giun móc

Ancylostoma caninum

1.3.2 Những nghiên cứu ở nước ngoài

Werner (1782) lần đầu tiên phát hiện ra giun Toxocara canis kí sinh ở ruột

non chó và chó sói Petrov A.M (1941) và Sprent (1959) nghiên cứu và phát hiện

ra vòng đời, phương thức nhiễm vào vật chủ của loài Toxocara canis Skrjabin K.I và Petrov A.M (1963) cho biết: chó nhiễm Toxocara canis do nuốt phải trứng chứa ấu trùng gây nhiễm và bệnh nặng ở chó con

dưới 2 tháng tuổi Đặc biệt Toxocara canis có khả năng nhiễm qua bào thai

Vì vậy chó con mới sinh ra kiểm tra phân đã thấy trứng giun đũa

Linstow (1902) đã mô tả loài giun đũa Toxascaris leonina mà tác giả

phát hiện ra Tiếp đó Petrov A.M (1941) đã nghiên cứu và bổ sung về vòng

đời phát triển của Toxascaris leonina

Wấu trùng kins và Havey (1942) đã tìm thấy ở ruột non chó, cáo vùng tây

nam nước Anh và vùng Shorophier loài Toxocara canis (dẫn theo Ngô Huyền Thuý, 1996)

Nghiên cứu về thành phần các loài giun, sán ký sinh ở chó nuôi tại miền

Tây Pomerania, tác giả Agniezka Tylkowska et al., (2010) cho biết, có 5 loài giun tròn đường tiêu hóa được phát hiện, đó là U stenocephala, T.canis, T leonina, T vupis và Acylostoma spp, trong đó T canis thường gặp nhất và T.vulpis ít gặp nhất.Frohlich (1798) phát hiện trong manh tràng của chó có loài giun Trichocephalus vulpis, sau đó được Skrjabin và Orlov (1957) nghiên cứu

sâu hơn về đặc điểm và vòng đời phát triển của loài giun này Năm 1884, Railliet

phân loại và tìm thấy loài giun Uncinaria stenocephala gây ra bệnh

Ancylostomấu trùng osis và được Petrov A.M chỉ ra vòng đời và đường xâm nhập của ấu trùng vào cơ thể vật chủ

P Aguilar, A Reyes, J J Maya, 2005 đã mổ khám ruột non của 120 chó ở Thành phố Mexicocyti thuộc Mexico, các tác giả đã thấy A caninum chiếm tỷ lệ 62,5% Tỷ lệ nhiễm A caninum tăng dần theo tuổi của chó

Tỷ lệ nhiễm Ancylostoma ceylanicum ở chó, mèo tại khu vực Tây Bắc Ấn

Độ theo số liệu điều tra là 62% (Traub et al., 2007), 53–92% tại Thái Lan (Setasuban et al., 1976; Traub et al., 2008), 38–88% tại Malaysia (Yoshida et al., 1973; Amin-Babjee, 1978; Ngui et al., 2012), 69% tại Lào (Scholz et al., 2003), 24–37% tại Indonesia (Margono et al., 1979) và 24% in Sri Lanka (Dis- sanaike,

Rud (1809) phát hiện ra giun Spirocerca lupi, sau đó Skrjabin K.L,

R.Schulz (1937) nghiên cứu phương thức lây nhiễm và vòng đời hoàn chỉnh Theo Soulsby E.JL (1965), bệnh này đã tìm thấy nhiều ở vùng nam Châu

Âu, nhưng không được coi là bệnh ký sinh trùng chính và loài tương tự được tìm thấy nhiều ở Liên xô cũ

Ngoài những loài giun tròn ký sinh chủ yếu ở chó, các tác giả đã tìm thấy rất nhiều loài giun tròn khác ở trong bộ máy tiêu hoá, tuần hoàn của các

loại chó như: Owen (1835) phát hiện ra giun bao Trichinella ở chó Leiz năm (1856) tìm thấy giun chỉ Dirofilaria immitis ký sinh ở tim chó (theo Đỗ Dương

Thái, Trịnh Văn Thịnh, 1978)

Những năm gần đây, nhiều tác giả ở các nước Châu Âu, Châu Mỹ và trên thế giới đã công bố những kết quả về tỷ lệ nhiễm giun tròn ở chó Coebenberg (1977) kiểm tra 387 chó ở Mỹ cho biết tỷ lệ nhiễm

Toxocara canis là 18,9%, Toxascaris leonina 18,9% Miloyet (1978) kiểm tra

474 chó, tỷ lệ nhiễm Toxocara canis 26,6%, Toxascaris leonina 2,3%

Mile và Hansbory (1982) kiểm tra 1720 chó tại Leipzia (Đức) cho biết tỷ lệ

nhiễm Toxocara canis 5,4%, Toxascaris leonina 38%

Uknown (1987) kiểm tra 2086 chó cho biết tỷ lệ nhiễm Toxocara canis 8,05%, Toxascaris leonina 0,48% (dẫn theo Ngô Huyền Thuý 1996) Eva Fok,

Takas Schilla (1988) kiểm tra 1674 mẫu phân chó và 200 mẫu lấy của chó ở

công viên Budapet cho biết: tỷ lệ nhiễm Toxocara canis 30%, Toxascaris leonina 35%, chó nhiễm Toxocara canis giảm dần theo tuổi; chó 1-3 tháng tuổi

nhiễm 35%, 4-6 tháng tuổi nhiễm 28,6%, 7-12 tháng tuổi nhiễm 6,5%, trên 12

tháng tuổi tỷ lệ nhiễm thấp (4%); tỷ lệ nhiễm giun móc Ancylostoma caninum là 50,1% Aguilar et al (2005) đã mổ khám ruột non của 120 chó ở thành phố

Mexico, các tác giả phát hiện 102 chó bị nhiễm giun sán, trong đó 75 chó nhiễm

Ancylostoma caninum, chiếm tỷ lệ 62,5% Giun đũa Toxocara canis nhiễm phổ

biến ở chó non và chủ yếu nhiễm vào mùa khô

Tại Braxin, DeCastro et al (2005) kiểm tra phân chó ở những luống hoa,

cỏ hướng ra phía bờ biển của Praia Grande, Sao paulo cho biết: tỷ lệ nhiễm

đã và đang được áp dụng để điều trị cho động vật

Piperazin

Sloan (1954) dùng cho chó với liều 200mg/kg TT và mèo với liều 100mg/kg đều có hiệu lực tẩy giun đũa Sprent và English (1958) nói rằng: Piperazin adipấu trùng e liều 200mg/kg tẩy được giun đũa trưởng thành Chó con

1 -2 tuần tuổi, khi điều trị có thể ngăn ngừa sự sinh sản của giun, từ đó phòng sự phát tán trứng ra môi trường Tuy nhiên, thuốc này không ngăn được chó con bị nhiễm trước khi sinh Theo (Hayes và Medaniel, 1959), hợp chất Piperazin được dung nạp tốt (dẫn theo Soulsby E.J.L, 1965)

Mebendazol

Biệt dược của Mebendazol là vermox, là một loại hoá dược an toàn, có thể tẩy được nhiều loại giun tròn ở chó, mèo với liều 60-100mg/kg TT, hiệu lực đạt 93% (Phan Địch Lân, Phạm Sĩ Lăng, Đoàn văn Phúc, 1989)

Thymol

Dùng để tẩy giun tóc Trichuris vulpis cho thú ăn thịt với liều 0,2g/kgTT

pha với nước ấm 420c, cho uống hoặc thụt trực tràng cho hiệu lực tốt

Mebenvet

Là chế phẩm chứa 10% hoạt chất Mebendazol, liều dùng 0,6-1gam/ kgTT, chia thuốc làm 2 liều tẩy vào 2 buổi sáng, có tác dụng tẩy giun móc, giun đũa, giun lươn (Trần Minh Châu và cs., 1988) Những loại thuốc trên dùng

để điều trị giun tròn cho chó, tẩy định kỳ 3-6 tháng một lần

Fenbendazol

Nghiên cứu ở Mỹ, Burke et al (1982) nhận xét: thuốc Fenbendazol có

khả năng chống lại giun tròn, liều 50mg/kgTT, dùng liên tục trong 3 ngày(dẫn theo Arundel, H.J 2000)

Disophenol

Nghiên cứu ở Australia, Arundel (2000) cho biết: thuốc Disophenol

liều 10mg/kgTT có hiệu quả tẩy trừ cao đối với loài Ancylostoma caninum và Uncinaria stenocephala

Ivermectin

Là thuốc trị ký sinh trùng do công ty cổ phần dược và vật tư Thú y (Hanvet) sản xuất Thuốc có nguồn gốc từ nấm, thuộc nhóm các Imidazol thiazol, dẫn xuất của Imidazole

Tính chất: thuốc có dạng bột kết tinh màu trắng, ngà vàng, không hoà tan trong nước Là sản phẩm lên men của nấm mốc Streptomyces avermitilis Thuốc dung nạp khá tốt, được bào chế dưới dạng dung dịch tiêm

Thuốc tác động bằng cách phong bế sự dẫn truyền xung động thần kinh của ký sinh trùng do tăng hiệu quả phóng thích axit gamma aminobutyric Chất trung gian hóa học này can thiệp chủ yếu vào các loại giun tròn Phổ

hoạt lực rộng đối với các loại giun tròn Jackson R.F et al (1981) đã thử nghiệm tẩy

giun đường tiêu hoá chó với liều 0,2mg/kgTT, cho biết thuốc có hiệu lực với giun

tóc Trichocephalus vulpis, Toxascaris leonina (dẫn theo Arundel, H.J, 2000)

Levamisol injectable

Là thuốc trị giun tròn Chế phẩm là dung dịch trong, chứa Levamisol hydroclorit với các chất làm ổn định và các chất bổ sung để chế phẩm thích hợp cho việc tiêm Thuốc phân tán nhanh trong cơ thể, phổ hoạt lực rộng với các loài giun tròn dạng trưởng thành và chưa trưởng thành

Albendazol có hoạt tính trên cả giai đoạn trưởng thành và giai đoạn ấu trùng của các giun đường ruột và diệt được trứng của giun đũa và giun tóc Dạng chuyển hóa chủ yếu của albendazol là albendazol sulfoxid vẫn còn tác dụng và giữ vị trí quan trọng về tác dụng dược lý của thuốc

Cơ chế tác dụng của albendazol cũng tương tự như các benzimidazol khác Thuốc liên kết với các tiểu quản của ký sinh trùng, qua đó ức chế sự trùng hợp hóa các tiểu quản thành các vi tiểu quản của bào tương là những bào quan cần thiết cho hoạt động bình thường của tế bào ký sinh trùng

Sanpet

Thuốc trị ký sinh trùng do Công ty cổ phần dược và vật tư Thú y (Hanvet) sản xuất Là hỗn hợp của 2 loại thuốc Pyrantel và Praziquantel, liều chỉ định 25mg/kgTT

Praziquantel là dẫn chất của pyrazinisoquinolone Thuốc dựa trên đặc tính làm co cứng, tê liệt cơ và phá hủy vỏ của giun sán Thuốc được dung nạp tốt và không gây tác dụng phụ

Pyrantel: công thức hoá học 1,4,5,6 - tetrahydro - metyl - (thienyl) vinyl pirimidine, thuốc ở dạng tấu trùng rấu trùng được hấp thu nhanh, đạt

nồng độ hữu hiệu trong huyết tương sau 2-3 giờ, thuốc có tác dụng đối với các loài giun tròn

- Không để chó nhà tiếp xúc với chó thả rông

- Tẩy giun cho chó chưa trưởng thành theo kế hoạch lần đầu vào lúc 70-

80 ngày tuổi, sau đó 2 tuần phải xét nghiệm phân đối với súc vật non, và tẩy lần 2 đối với tất cả chó và thú vật khác

- Diệt ký chủ trung gian và các động vật gặm nhấm khác Một số tác giả trong nước như Đỗ Hài (1972), Phan Địch Lân, Phạm Sĩ Lăng (1989), Phạm Văn Khuê, Đoàn Văn Phúc (1993) đề ra một số biện pháp phòng bệnh giun sán cho chó như sau:

- Sử dụng thuốc tẩy giun sán định kỳ đối với chó nhiễm giun: 3 tháng tẩy một lần bằng các loại thuốc Piperazinadipate, Mebenvet, Mebendazol

- Thực hiện vệ sinh Thú y, tẩy uế chuồng nuôi 1 lần/tháng bằng thuốc sát trùng Crêzin 1%, đun nước sôi dội chuồng, vệ sinh khu vực xung quanh chuồng,

ủ phân bằng vôi bột để diệt trứng giun và ấu trùng, diệt ký chủ trung gian và các loài gặm nhấm là ký chủ dự trữ

CHƯƠNG 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu: Giun đũa ở chó

- Phạm vi nghiên cứu: Chó tại huyện Thường Tín, Hà Nội

o 252 mẫu phân chó tại huyện Thường Tín, Hà Nội

o 62 mẫu ruột chó được lấy từ các chó bị giết mổ tại các quán thịt chó nhỏ thu mua chó tại huyện Thường Tín, Hà Nội

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Xác định tình hình nhiễm giun đũa chó tại huyện Thường Tín

o Thành phần các loài giun tròn ký sinh ở đường tiêu hóa chó qua phương pháp xét nghiệm phân và qua phương pháp mổ khám

o Tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm giun đũa chó qua phương pháp xét nghiệm phân và phương pháp mổ khám

o Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó theo mùa vụ qua phương pháp xét nghiệm phân và phương pháp mổ khám

o Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó theo lứa tuổi

o Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó theo tính biệt

- Định loại giun đũa chó bằng sinh học phân tử

- Biện pháp phòng trị giun đũa chó

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp thu mẫu phân

Phân chó được lấy trực tiếp từ trực tràng vào túi nilon có dán nhãn, nhỏ 2-3 giọt formol 10% để trứng giun không thể nở thành ấu trùng và không bị vi khuẩn, nấm mốc phá hủy

Các túi bảo quản phân được cho vào thùng mát để vận chuyển về phòng thí nghiệm

2.3.2 Phương pháp xét nghiệm Fulleborn

Phương pháp phù nổi Fulleborn là phương pháp chủ yếu để phát hiện trứng các loài giun tròn (Nematoda) và trứng các loài sán dây có trong phân vật nuôi (Theo N.Levine,1985; Nguyễn Thế Khánh và Nguyễn Tử Dương, 2001)

Chuẩn bị dung dịch NaCl bão hòa gồm 1 lít nước và 400g muối ăn (đun sôi, lọc qua gạc; khi nguội, dưới đáy chai phải có ít muối kết tinh) Cho khoảng 10g phân vào một cốc thủy tinh (dung tích trên 200ml), thêm 200ml nước muối bão hòa Quấy đều, lọc qua một rây có mặt đường kính 0,2mm để lắng khoảng 30 phút Trứng giun tròn có tỷ trọng nhẹ hơn dung dịch muối bão hòa sẽ nổi lên mặt Lấy cái vòng dây thép đường kính 0,5cm để chạm nhẹ vào mặt nước, lấy cái màng nước trong vòng thép lên (lấy 1- 3 màng), khẽ lắc cho rơi trên phiến kính (sau khi dùng, phải tiêu độc vòng dây thép trên đèn cồn) Đậy lá kính, cho vào kính hiển vi, dùng vật kính có độ phóng đại thấp (10 x 10 hoặc 10 x 20) để quan

sát, tìm trứng giun tròn

2.3.3 Phương pháp xét nghiệm Mc Master

Xác định cường độ nhiễm trứng các loại giun tròn ký sinh ở chó qua số lượng trứng/gram phân theo phương pháp Mc Master (Phan Lục và cs., 1990) Lấy 3g phân cho vào bình thủy tinh hay lọ nhựa có chia độ ml Cho thêm nước muối bão hòa đến vạch 30ml, trộn đều bằng đũa thủy tinh hay viên bi, lọc qua dây lọc có mắt đường kính 0,2 mm Sau đó cho nước muối bão hòa đến vạch 45ml, trộn đều và hút dung dịch cho lên 2 buồng đếm Mc Master Để yên 2- 5 phút, sau đó đưa lên kính hiển vi và đếm số trứng trong 2 buồng đếm Số trứng

có trong 1g phân được tính theo công thức N= (X x 45)/ (0,15 x 2 x 3) ; với X là

số trứng đếm được trong 2 buồng đếm Mc.Master

Xác định cường độ nhiễm giun đũa trưởng thành ký sinh ở đường tiêu hóa chó thông qua số lượng từng loài giun sán ký sinh trong cơ quan tiêu hóa thu được qua mổ khám toàn diện đường tiêu hóa của chó Toàn bộ số liệu được ghi chép đầy đủ vào sổ mổ khám

2.3.4 Phương pháp mổ khám toàn diện Skjabin

Tiến hành mổ khám theo phương pháp mổ khám toàn diện Skjabin (1944)

để thu giun trưởng thành trong đường tiêu hóa của chó

Để phát hiện mức độ lưu hành của các loài giun sán đường tiêu hóa tiến hành mổ khám toàn diện cơ quan tiêu hóa Sau khi mổ lấy toàn bộ cơ quan tiêu hóa, dùng dao nhọn hay kéo rạch dọc từng cơ quan để tìm giun tròn trưởng thành ký sinh trong đường tiêu hóa Giun tròn được sau khi được tìm thấy được bảo quản trong dung dịch cồn 700 và trong dung dịch Formol 10%, quan sát dưới kính hiển vi và định loại căn cứ vào hình thái theo khóa định loại của Skryabin (1963)

2.3.5 Phương pháp định loại bằng hình thái

Giun trưởng thành thu được được tiến hành định loại bằng hình thái theo khóa định loại của Phan Thế Việt và cs (1977)

2.3.6 Phương pháp phỏng vấn điều tra

Để xác định tỷ lệ nhiễm theo lứa tuổi và tính biệt, chúng tôi thực hiện điều tra phỏng vấn các chủ hộ nuôi chó đồng thời khi tiến hành lấy mẫu phân bằng Bảng thông tin vật nuôi

2.3.7 Phương pháp định loại giun đũa chó bằng sinh học phân tử

* Phương pháp tách chiết DNA tổng số

Sử dụng bộ sinh phẩm tách DNA tổng số QIAamp DNA Mini kit (hãng QIAGEN Inc, USA), theo hướng dẫn của nhà sản xuất Phương pháp tiến hành phản ứng PCR:

Toàn bộ gen atp6 được thu nhận, với các cặp mồi đã công bố (Wickramasinghe et al., 2009b) và được thiết kế theo phân tích chuỗi gen ty thể

của chúng tôi, sử dụng bộ kit PCR Master mix (hãng Fermentas) Thành phần của phản ứng PCR được trình bày ở Bảng 2 Phản ứng PCR thực hiện trên máy

MJ Thermal Cycler PCT-100 (MJ Research, USA), sản phẩm PCR được điện di trên thạch agarose 1%, nhuộm bằng ethidium bromide (EtBr) và quan sát sản phẩm, chụp ảnh trên máy soi gel Wealtec (Mỹ) Tinh sạch sản phẩm PCR bằng

bộ hóa chất của hãng Qiagen (Mỹ) (PCR Purification Kit), tiến hành theo hướng dẫn của nhà sản xuất

Bảng 2.1 Thành phần PCR và chu trình nhiệt

Thành phần Thể tích (µl) Chu trình nhiệt

35

Tổng 50 40C Nhiệt độ bảo quản sản phẩm

* Phương pháp giải trình tự và xử lý số liệu

Sản phẩm PCR sau khi tinh sạch sẽ được giải trình tự trực tiếp trên máy giải

trình tự tự động ABI3100 Avant Genetic Analyzer

Trình tự các chuỗi nucleotide được xử lý bằng các phần mềm tin-sinh học, bao gồm: SeqEd1.03, AsemblyLIGNv1.9c và hệ chương trình MacVector8.2 (Accelrys Inc) trên máy tính Macintosh So sánh đối chiếu và xử lý số liệu các chuỗi thu nhận và truy cập (Blast) để thu nhận các chuỗi đã đăng ký trong Ngân

hàng gen (GenBank), so sánh đối chiếu trình tự gen atp6 của các mẫu trong nghiên

cứu với các chuỗi của thế giới đã công bố bằng chương trình GENEDOC2.7, phân tích mối quan hệ và xác định nguồn gốc phát sinh chủng loại, sử dụng chương

trình MEGA6.06, phương pháp ‘kết nối liền kề’ NJ (Neighbor-JoiningNJ) với hệ

số tin tưởng (bootstrap) 1000 lặp lại (Tamura et al., 2013)

Gen atp6 (có thể viết tắt là MT-ATP6) tên đầy đủ là Mitochondrially encoded ATP synthase 6 là một loại gen nằm trong DNA ty thể Gen atp6 là 1 phân đoạn của gen ty thể là gen mã hóa tham gia quá trình tổng hợp enzyme quan trọng trong dẫn truyền điện tử và sản sinh năng lượng ATP cho tế bào, là một trong những gen có tính bảo tồn cao do đó được lựa chọn là chỉ thị phân tử

di truyền

2.3.8 Phương pháp xác định độ an toàn của thuốc

Độ an toàn được đánh giá bằng kết quả theo dõi trạng thái cơ thể, sự vận động, ăn uống và một số chỉ tiêu sinh lý (nhịp tim, thân nhiệt, tần số hô hấp) của chó trước và sau khi dùng thuốc từ 1 -3 giờ

Cường độ nhiễm (%) = Số chó nhiễm (+), (++), (+++) hoặc (++++) Tổng số chó nhiễm x 100

Độ an toàn của thuốc (%) = Số chó có kết quả (-) sau tẩy 15 ngày Số chó được tẩy x 100

Độ an toàn của thuốc (%) = Số chó không bị phản ứng x 100

Số chó được tẩy

Các số liệu về một số chỉ tiêu sinh lý máu được sử lý theo phương pháp nghiên cứu trong chăn nuôi của Nguyễn Văn Thiện và cs (2002), sử dụng phần mềm của chương trình excel