Nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng chống viêm cấp của cây xăng sê (sanchezia speciosa leonard)

MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIÊU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 3 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Sanchezia 1.2 Tổng quan loài xăng sê 1.2.1 Mô tả 1.2.2 Đặc điểm vi phẫu 1.2.3 Đặc điểm bột 1.2.4 Phân bố 10 1.2.5 Thành phần hóa học 10 1.2.6 Tác dụng dược lý 12 1.2.7 Công dụng 14 1.3 Tổng quan bệnh lý viêm 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Nhóm dược liệu có tác dụng chống viêm CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên vật liệu 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu thành phần hóa học 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp mô hình thực nghiệm Winter 14 14 15 17 17 17 17 18 18 21 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Hóa học 3.1.1 Định tính thành phần hóa học Xăng sê 3.1.2 Chiết xuất 3.1.3 Phân lập hợp chất phương pháp sắc ký 3.1.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 3.2 Đánh giá tác dụng chống viêm cấp 23 24 24 24 31 32 36 CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN 41 43 4.1 Về thành phần hóa học 43 4.2 Về tác dụng chống viêm cấp 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT H-NMR CHCl3 (CH3CO2)O 13 C-NMR DEPT DMSO EtOH FeCl3 HCl IC50 IR MeOH MS Na2CO3 Na2SO4 NMR Pb(CH3COO)2 PG SKC SKC – RP SKLM STT TLTK TT UV Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton nuclear magnetic resonance) Clorofom Axetic anhydrid Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C (Carbon (13) nuclear magnetic resonance) Detortionless Enhancement by Polarization Transfer Dimethyl sulfosid Ethanol Sắt (III) clorua Axit cloric Nồng độ ức chế 50% (Half maximal inhibitory concentration) Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) Methanol Phổ khối (Mass spectrometry) Natri cacbonat Natri sulfat Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resource) Chì axetat Prostaglandin Sắc ký cột Sắc ký cột pha đảo Sắc ký lớp mỏng Số thứ tự Tài liệu tham khảo Thuốc thử Ánh sáng tử ngoại (Ultra violet) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu phương pháp hóa học Bảng 3.2 Số liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT chất S1 Trang 30 Bảng 3.3 Số liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT chất S2 39 Bảng 3.6 Tác dụng chống viêm cấp dịch chiết Xăng sê mô hình gây phù chân chuột 42 37 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Hình 1.1 Tên hình Trang Vi phẫu Hình 1.2 Vi phẫu thân Hình 1.3 Đặc điểm bột Hình 1.4 Đặc điểm bột thân 10 Hình 1.5 Công thức cấu tạo hợp chất phân lập từ 12 Xăng sê Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ Xăng sê 32 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập từ cắn ethyl acetat 33 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất S1 36 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất S2 39 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với phát triển khoa học kỹ thuật, nhiều dược phẩm tạo với đa dạng dược chất dạng bào chế Tuy nhiên, giá thành tân dược thường cao so với thu nhập người dân Nhiều trường hợp thuốc hóa dược gây tác dụng phụ, tác dụng không mong muốn Do đó, ngày nay, nhiều người có xu hướng dung thảo dược để chữa bệnh Xu hướng ngày nhận nhiều quan tâm nhà khoa học giới Việt Nam Hơn nữa, Việt Nam vốn nước có thảm thực vật phong phú, nguồn tài nguyên thuốc dồi đặc biệt y học cổ truyền lâu đời, việc sử dụng cỏ chữa bệnh nước ta hoàn toàn phù hợp có điều kiện để phát triển Trong năm gần đây, nhà nước ta có nhiều sách phát triển ngành dược, có dược liệu y học cổ truyền quan tâm đầu tư, phát triển nhằm làm tăng dần thị phần thuốc có nguồn gốc từ dược liệu thuốc y học cổ truyền Các thuốc dân gian, thuốc đặc biệt rau ăn hàng ngày nhân dân sử dụng việc phòng điều trị nhiều bệnh tật ngày nhà khoa học quan tâm Cây Xăng sê có tên khoa học Sanchezia speciosa, chi Sanchezia (họ Ô rô Acanthaceae) [2] Trên giới, xăng sê nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa gây độc tế bào invitro [28] Còn Việt Nam,dân gian ta truyền sử dụng xăng sê ‘‘vị cứu tinh” chữa bệnh viêm dày, cách chữa bệnh cần lấy vài tươi rửa ăn với chút muối cắt đau, dùng thời gian khỏi sắc khô thay nước chè uống ngày Thiết nghĩ, xăng sê thuốc có tác dụng chống viêm nhanh, chưa có nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Xăng sê Việt Nam Nó sử dụng theo kinh nghiệm dân gian chưa lý giải góc nhìn khoa học.Những nghiên cứu thành phần tính chữa bệnh góp phần bổ sung kho tàng tri thức thuốc loài người giải thích kinh nghiệm dân gian Chính vậy,chúng tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng chống viêm cấp Xăng sê (Sanchezia speciosa Leonard)’’ với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hai hợp chất từ Xăng sê Đánh giá tác dụng chống viêm cấp Xăng sê CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại Theo “Hệ thống phân loại ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)” tác giả A.Takhtajan, chi Sanchezia có vị trí phân loại sau [31]: Giới Thực vật: Plantae Ngành Ngọc lan: Magnolipphyta Phân lớp Mộc lan: Magnoliidae Novák ex Takht Bộ Hoa môi: Lamiales Họ Ô rô: Acanthaceae Chi: Sanchezia 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Sanchezia Cây bụi hay cỏ, rễ lông, hoa mọc đơn độc hợp lại thành chùm, thường lớn, có màu vàng, cam, đỏ tím, mọc ngọn, có bắc thường có màu, đài thùy, tràng 5, dính thành hình ống, nhị 4, nhị lép nhị thò ra, bao phấn ô Quả nang, 6-8 hạt, hạt hình cầu [22] Chi Sanchezia chủ yếu phân bố phía Tây Nam Mỹ Trung tâm đa dạng loài thuộc chi nằm Peru Ecuador Một số loài phân bố vùng phía bắc đông Bắc Mỹ, Trung Mỹ vùng biển Caribbean.Chi Sanchezia mô tả lần mô tả Ruiz Pavón vào năm 1794 với hai loài Đến năm 1964, chi sửa đổi Leonard Smith, với 59 loài 26 loài mô tả lần khoa học, đồng thời công bố khóa phân loại cho 59 loài Năm 2015, Tripp Koenemann thống kê lại lịch sử phát triển chi Sanchezia, lập danh lục 55 loài [32] Theo nhà khoa học thuộc dự án The Plant List xác định có 75 tên loài thuộc chi Sanchezia Trong có 54 tên khoa học chấp nhận (72,0%), tên xác định tên đồng nghĩa (12,0%) 12 tên chưa xác định xác thông tin (16,0%) Ở Việt Nam, chi có loài Xăng sê Sanchezia speciosa, Phạm Hoàng Hộ mô tả liệt kê Danh lục loài thực vật Việt Nam 1.2 Tổng quan loài Xăng sê Tên khoa học: Sanchezia speciosa Leonard Sanchezia nobilis Hook F [2] Tên Việt Nam: Xăng sê, Săng xê, Lá ngũ sắc [2] 1.2.1 Mô tả Cây bụi, cao 0,5-1,5m, thân gân có màu lục, đỏ vàng, gân bên màu trắng [9] Lá đơn mọc đối hình chữ thập;cuống ngắn, hình trụ; phiến hình mũi mác, dài 10-25 cm, rộng 3-7 cm, nhẵn, mép lượn sóng, mặt có màu xanh đậm, mặt xanh nhạt; hệ gân lông chim, có 9-12 đôi gân bên [11], [21] Hoa mọc thành cụm hoa gồm nhỏ trở lên, ngọn; cuống ngắn; có bắc màu lục hay đỏ, hình trứng, đỉnh tù, nhẵn, ôm lấy cụm hoa [9], [11], [21] Hoa lưỡng tính, màu xanh lục mờ, mùi nhạt đặc trưng [11] Đài nhiều, hình vảy, dài 1,5-1,8 cm,rộng 3-5 mm, tròn đỉnh [21] Tràng hình ống tròn, màu vàng có sáp, cao 4-5 cm, rộng 7-8 cm phía trên, thu hẹp dần xuống đến mm, nhẵn, thùy dài3-4 mm, tròn, có khía; nhị dài, nhị có nhị phát triển dài 4-4,5 cm, có lông nhị tiêu giảm [9], [21] Quả nang có hạt [9] 1.2.2 Đặc điểm vi phẫu  Lá Vi phẫu gân lồi lên hai mặt Biểu bì biểu bì cấu tạo hàng tế bào đa giác xếp đặn Mô dày mô dày cấu tạo nhiều lớp tế bào thành dày lên góc Mô mềm cấu tạo tế bào thành mỏng, gần tròn bên có chứa tinh thể canxi oxalat hạt tinh bột, rải rác có bó mạch phụ Libe gỗ xếp thành hình vòng cung gồm libe phía gỗ phía Một số tế bào biểu bì thành lông che chở, lông tiết [11] Vi phẫu phiến lá: Gồm biểu bì biểu bì cấu tạo hàng tế bào đa giác xếp đặn Mô giậu biểu bì cấu tạo hai hàng tế bào hình chữ nhật xếp đặn Mô khuyết cấu tạo tế bào hình gần tròn xếp lộn xộn [11] Vi phẫu cuống hình chén, có đặc điểm tương tự gân lá, nhiên có thêm lớp mô dày sát lớp biểu bì [11] Vi phẫu thể hình 1.1 [11]: PHỤ LỤC 2: PHỔ CỦA HỢP CHẤT S2 (HYPEROSID)  MS  1H-NMR  13C-NMR  DEPT OH 3' OH 2' HO O 6' 10 OH 5' 1' 4' O O OH '' '' '' O 5'' '' '' HO OH OH PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC 4: THỬ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CẤP Lô 1: Lô chứng NaCl 0,9% Thể tích (ml) V0 0.82 0.83 0.78 0.86 0.85 0.86 0.87 0.88 0.85 Vt(2h) 1.02 1.12 1.06 1.14 1.05 1.16 1.08 1.2 1.14 Vt(4h) 1.18 1.20 1.13 1.25 1.21 1.22 1.23 1.26 1.20 Độ tăng thể tích (%) Vt(6h) 1.14 1.16 1.10 1.21 1.17 1.18 1.19 1.22 1.16 Vt(24h) 1.01 0.99 0.95 1.02 1.02 1.04 1.02 1.03 1.01 Xtb(%) SD X2 24.39 34.94 35.90 32.56 23.53 34.88 24.14 36.36 34.12 31.20 5.50 X4 43.41 44.22 45.38 45.29 42.06 41.63 41.21 43.18 40.82 43.02 1.71 X6 39.32 40.10 41.23 41.14 38.00 37.58 37.17 39.09 36.08 38.94 1.79 X24 23.17 19.28 21.79 18.60 20.00 20.93 17.24 17.05 18.82 19.65 2.04 Lô 2: Indomethacin Thể tích (ml) V0 0.85 0.75 0.77 0.88 0.85 0.79 0.82 0.92 0.86 Vt(2h) 0.95 0.82 0.9 0.98 0.98 0.89 0.92 1.05 1.01 Vt(4h) 1.06 0.92 0.95 1.02 1.08 0.96 1.01 1.15 1.08 Độ tăng thể tích (%) Vt(6h) 1.05 0.98 0.92 1.00 1.05 0.92 0.95 1.08 1.03 Vt(24h) 0.98 0.8 0.84 0.94 0.89 0.85 0.88 0.99 0.93 Xtb(%) SD I(%) p X2 11.76 9.33 16.88 11.36 15.29 12.66 12.20 14.13 17.44 13.59 2.69 56.43 < 0,001 X4 24.71 22.67 23.38 15.91 27.06 21.52 23.17 25.00 25.58 23.22 3.21 46.08 < 0,001 X6 23.53 30.67 19.22 13.59 23.53 16.46 15.85 17.39 19.79 20.02 5.21 48.59 < 0,001 X24 15.29 6.67 9.09 6.82 4.71 7.59 7.32 7.61 8.14 8.14 2.94 58.41 < 0,001 Lô 3: DC 3g/kg ttc Thể tích (ml) V0 0.87 0.88 0.85 0.86 0.85 0.86 0.77 0.8 0.75 Vt(2h) 1.08 1.20 1.16 1.14 1.13 1.06 1.06 1.08 0.98 Vt(4h) 1.25 1.22 1.19 1.23 1.16 1.17 1.09 1.11 1.17 Độ tăng thể tích (%) Vt(6h) 1.10 1.21 1.18 1.14 1.16 1.19 1.04 1.07 1.03 Vt(24h) 1.02 0.98 0.95 0.92 0.89 0.98 0.88 0.92 0.93 Xtb(%) SD I(%) p X2 24.14 36.36 36.47 32.56 32.94 23.26 37.66 35.00 30.67 32.12 5.26 -3.03 > 0,05 X4 43.68 38.64 40.00 43.02 36.47 36.05 41.56 38.75 56.00 41.57 6.02 3.17 > 0,05 X6 26.44 37.50 38.82 32.56 36.47 38.37 35.06 33.75 37.33 35.15 3.88 1.69 > 0,05 X24 17.24 11.36 11.76 6.98 4.71 13.95 14.29 15.00 24.00 13.25 5.64 32.45 < 0,01 Lô 4: DC 1,5g/kg ttc Thể tích (ml) V0 0.78 0.86 0.85 0.86 0.87 0.76 0.8 0.82 0.84 Vt(2h) 1.08 1.14 1.19 1.18 1.15 1.10 1.18 1.19 1.20 Vt(4h) 1.16 1.28 1.24 1.26 1.25 1.12 1.10 1.28 1.23 Độ tăng thể tích (%) Vt(6h) 1.13 1.20 1.18 1.22 1.22 1.03 1.10 1.15 1.18 Vt(24h) 0.95 0.98 0.95 1.02 0.99 0.95 0.96 0.9 0.93 Xtb(%) SD I(%) p X2 38.46 32.56 40.00 37.21 32.18 44.74 47.50 45.12 42.86 40.07 5.47 -28.42 > 0,05 X4 48.72 48.84 45.88 46.51 43.68 47.37 37.50 56.10 46.43 46.78 4.90 -8.72 > 0,05 X6 44.87 39.53 38.82 41.86 40.23 35.53 37.50 40.24 40.48 39.90 2.63 -2.34 > 0,05 X24 21.79 13.95 11.76 18.60 13.79 25.00 20.00 9.76 10.71 16.15 5.37 17.83 < 0,05 [...]... đến viêm Nhóm dược liệu có tác dụng chống viêm  Nhóm dược liệu chứa flavonoid Flavonoid là nhóm dược chất lớn có mặt trong nhiều dược liệu.Chúng có nhiều tác dụng sinh học quan trọng Một số tác dụng của flavonoid liên quan đến tác dụng chống viêm là:  Chống nhiễm trùng khi dùng liều cao, làm mất hoạt tính của virus theo cơ chế chống sao chép  Giảm tính thấm thành mạch máu  Tác dụng chống viêm của. .. quản và các thành phần tế bào và huyết tương của máu [10], luôn luôn thay đổi, có tính chất bảo vệ nhằm duy trì sự thăng bằng của cơ thể Viêm cấp là hiện tượng huyết quản-huyết là chủ yếu gồm: xung huyết, phù, gỉ viêm, xuất ngoại bạch cầu Các loại viêm cấp như: viêm thanh huyết, viêm tơ huyết, viêm chảy máu, viêm huyết khối và viêm mủ Tiến triển có thể là 14 thực sự cấp tính và tiêu biến trong vài giờ... coumarin có tác dụng kháng khuẩn chống viêm Cơ chế chống viêm là do khả năng dọn sạch gốc anion superoxyd ở vị trí hoạt hóa của 15 bạch cầu trong quá trình viêm Những coumarin thiếu nhóm thế dihydroxy thì không có tác dụng trên superoxyd 9 ví dụ calophyllolid có trong cây mù u có tác dụng chống viêm bằng một phần ba oxyphenbutazon [3]  Tinh dầu Tinh dầu có tác dụng kháng khuẩn dùng trong viêm nhiễm... thực sự cấp tính và tiêu biến trong vài giờ hoặc trở thành mạn tính theo nhiều đợt [5] 1.3.2 Nhóm dượu liệu có tác dụng chống viêm Để kiểm soát viêm một cách hiệu quả và an toàn hơn, những năm gần đây trong nước và trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu và tác dụng chống viêm của những dược liệu, vị thuốc, những bài thuốc đông dược Những nghiên cứu này cho thấy đông dược mang lại những tiềm năng... họng, viêm nhiễm đường hô hấp qua các đường xông, hít, uống,tiêm [8] Một số dược liệu có tác dụng chống viêm là: Kim ngân, Hòe hoa, Núc nác 16 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên vật liệu Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu là lá cây Xăng sê Sanchezia speciosa Leonard, họ Ô Rô (Acanthaceae) được thu hái vào tháng 10/2015 tại xã Bình Nhân, huyện Chiêm Hóa, ... (Merck) (silica gel, 0,25 mm) và bản mỏng pha đảo RP-18 F254 (Merck, 0,25 mm) - Hóa chất dùng trong đánh giá tác dụng chống viêm cấp: indomethacin, NaCl 0,9%, dung dịch carrageenin 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu thành phần hóa học 18 2.2.1.1 Phương pháp định tính các nhóm chất hữu cơ Định tính sơ bộ một số nhóm chất hữu cơ trong dược liệu bằng các phản ứng hóa học đặc trưng [4] - Định tính... có tác dụng gây độc tế bào chọn lọc hơn so với doxorubicin [28]  Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm Năm 2014, Abu Shuaib và cộng sự đã đánh gi tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm và diệt côn trùng của cây Xăng sê bằng phương pháp khuếch tán đĩa, trên 15 chủng vi khuẩn Gram (+) và Gram (-), sáu chủng nấm và một Tribolium castaneum Kết quả cho thấy trong 3 phân đoạn thu được từ dịch chiết ethanol Xăng sê, ... dụng dược lý  Tác dụng chống oxy hóa In vitro,dịch chiết methanol có chỉ số ORAC là 55,77± 1,73 µM TE/100 µg.mL-1,trong khi đó chỉ số ORAC của quercetin là 63,07 ±0,93 µM TE/100 µg.mL-1, cho thấy lá Xăng sê có hoạt tính chống oxy hóa mạnh [28]  Tác dụng gây độc tế bào Năm 2013, Paydar và cộng sự đã nghiên cứu hoạt tínhgây độc tế bàoin vitro của dịch chiết methanol từ lá Xăng sê Bằng phương pháp MTT... bản của Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật – HN (số hiệu Vũ Đức Lợi 01) Giấy chứng nhận mẫu lưu tiêu bản được đính kèm ở Phụ lục Nguyên liệu sau khi thu hái được tách riêng phần trên mặt đất và dưới mặt đất, sau đó sấy ở 50°C tới khô, bảo quản trong túi PE và bao bì kín, trước khi chiết xuất được xay thành bột thô Chuẩn bị cao ethanol 80% để đánh giá tác dụng chống viêm cấp: Mẫu lá cây Xăng sê (1,5kg)... từ Peru, Ecuador [2] 1.2.5 Thành phần hóa học Kết quả nghiên cứu sơ bộ của Abu S R và cộng sự năm 2015 cho thấy lá Xăng sê có chứa các hợp chất thuộc nhóm alcaloid, glycosid, flavonoid, carbohydrat, steroid, phenolic, saponin và tannin [27] Trong khi đó kết quả định tính của Seline Omondi và J C Omondi năm 2015 cho thấy lá Xăng sê có chứa các nhóm chất anthraquinon và saponin, chưa thấy có các hợp ... có tác dụng chống viêm nhanh, chưa có nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Xăng sê Việt Nam Nó sử dụng theo kinh nghiệm dân gian chưa lý giải góc nhìn khoa học. Những nghiên cứu thành. .. dụng chống viêm cấp Xăng sê (Sanchezia speciosa Leonard) ’ với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hai hợp chất từ Xăng sê Đánh giá tác dụng chống viêm cấp Xăng sê CHƯƠNG 1: TỔNG... bệnh tật ngày nhà khoa học quan tâm Cây Xăng sê có tên khoa học Sanchezia speciosa, chi Sanchezia (họ Ô rô Acanthaceae) [2] Trên giới, xăng sê nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa gây độc tế bào invitro