Nghiên cứu một số đặc tính hoá sinh dược của lá cây roi đỏ (Syzygium Samarangensen (Blume) Merr Et perry) ở Việt Nam

Luận văn Thạc sĩ sinh học BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI HÀ VIẾT CƢỜNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HOÁ SINH DƢỢC CỦA LÁ CÂY ROI ĐỎ (SYZYGIUM SAMARANGENSE (BLUME) MERR ET PERRY) Ở VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH : SINH HỌC THỰC NGHIỆM MÃ SỐ : 60.42.30 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC HÀ NỘI - 2010 Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Xã hội đại với phát triển mạnh kinh tế khoa học kỹ thuật khiến cho sống người ngày đáp ứng đầy đủ vật chất tinh thần Nhiều bệnh tật xuất hiện, lan rộng khó kiểm soát điều trị triệt để Đồng thời, xu hướng ăn uống thiên thức ăn chế biến sẵn, giàu chất dinh dưỡng, chất xơ dẫn đến số bệnh rối loạn trao đổi lipit, gluxit Đó nguyên nhân dẫn đến nhiều bệnh chuyển hóa, đặc biệt beosp phì đái tháo đường Béo phì, đái tháo đường có tất vùng, lãnh thổ giới Tổ chức Y tế giới (WHO) : số người béo phì giới lên đến 1,7 tỷ người Hàng loạt loại thuốc tổng hợp có tác dụng nhanh, hiệu sản xuất chúng thường có nhiều tác dụng phụ Xuất phát từ thực tế đó, Ủy ban chuyên gia WHO khuyến nghị nên phát triển sản xuất thuốc có nguồn gốc từ thảo dược nguồn dược liệu có sẵn, có giá thành rẻ, dễ sử dụng, tác dụng phụ độc Việt Nam quốc gia nằm vùng khí hậu nhiệt đới, hệ thực vật đa dạng phong phú Nhiều loài giá trị kinh tế mà có tác dụng dược lý, sử dụng lâu đời y học dân gian bưởi, cam, chanh, đinh hương, hương nhu… Việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hóa học tác dụng y dược thuốc Việt Nam trở thành hướng đáng quan tâm Trong công trình nghiên cứu gần đây, giá trị dược liệu số loài thuộc họ Sim (Myrtaceae) mãng cầu, hạt điều đỏ, đinh hương… ý Roi đỏ (Syzygium samarangence (Blume) Merr et Perry) thuộc họ Sim (Myrtaceae) ăn quen thuộc phổ biến Việt Nam Cây trồng chủ yếu lấy Quả chín ngọt, dùng ăn tươi, làm mứt ngâm Thành phần hóa học chứa 90% nước khoáng, cacbonhydrat, xơ, vitamin A, B1, B2, C, tannin Do phận sử dụng y học cổ truyền có tác dụng kháng khuẩn Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học Trước đây, Roi đỏ biết đến ăn chữa số bệnh liên quan đến kháng khuẩn Song kết nghiên cứu thành phần hóa học Roi lại thấy hợp chất tự nhiên từ lá, vỏ loài thực vật có khả tác động tích cực lên trình trao đổi gluxit, lipit tính hoạt động bệnh “gut” [7] Tuy nhiên nghiên cứu khả chống béo phì tiểu đường loài thực vật chưa cụ thể Vì lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu đặc tính sinh hóa dƣợc Roi đỏ (Syzygium samarangense (Blume) Merr.et Perry) Việt Nam” Mục tiêu nghiên cứu + Nghiên cứu số đặc tính hóa sinh dược Roi đỏ (Syzygium samarangence (Blume) Merr et Perry) + Nghiên cứu tác dụng phân đoạn dịch chiết Roi đỏ đến trọng lượng số số hóa sinh chuột béo phì thực nghiệm (BPTN) + Nghiên cứu tác dụng phân đoạn dịch chiết Roi đỏ đến số glucose huyết chuột đái tháo đường mô type Nhiệm vụ nghiên cứu + Tách chiết phân đoạn từ roi đỏ qua dung môi hữu + Khảo sát thành phần hoá học Roi đỏ (định tính, định lượng polyphenol) + Gây mô hình chuột BPTN, chuột ĐTĐ type + Đánh giá tác dụng phân đoạn dịch chiết đến trọng lượng, số số lipid máu chuột BPTN, nồng độ glucose huyết mô hình chuột ĐTĐ mô type Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 4.1 Đối tƣợng 4.1.1 Mẫu thực vật Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học Lá Roi đỏ (Syzygium samarangence (Blume) Merr et Perry) lấy vào tháng 11 năm 2009 Hiệp Hòa, Bắc Giang Phân loại theo tài liệu Võ Văn Chi 4.1.2 Mẫu động vật Chuột nhắt trắng chủng Swiss tuần tuổi (14-16g) thức ăn chuẩn Viện Vệ sinh Dịch tễ TW cung cấp 4.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu đặc tính sinh dược học số phân đoạn dịch chiết từ Roi đỏ (Syzygium samarangence (Blume) Merr et Perry) mô hình chuột BPTN, chuột béo phì gây ĐTĐ mô theo type Phƣơng pháp nghiên cứu 5.1 Phương pháp định tính thành phần hoá học Roi đỏ 5.2 Phương pháp phân lập hợp chất kĩ thuật sắc kí lớp mỏng 5.3 Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin- Ciocalteau 5.4 Gây mô hình chuột thí nghiệm: Chuột BPTN, chuột ĐTĐ type 5.5 Phương pháp định lượng số số hoá sinh 5.6 Phương pháp xử lý thống kê Những đóng góp đề tài: + Đưa quy trình chiết, tách phân đoạn dịch chiết từ Roi đỏ + Phân lập số hợp chất sắc kí lớp mỏng, định tính định lượng số hợp chất tự nhiên từ Roi đỏ + Đánh giá tác dụng số phân đoạn dịch chiết từ Roi đỏ đến trọng lượng, số số hoá sinh chuột BPTN tác dụng hạ glucose huyết phân đoạn dịch chiết mô hình chuột béo phì ĐTĐ mô theo type chất độc STZ liều thấp Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Các hợp chất thứ sinh thực vật 1.1.1 Một số khái niệm hợp chất thứ sinh thực vật Hợp chất thứ sinh thực vật sản phẩm trình trao đổi chất sinh thực vật Chúng chất hoá học tổng hợp chuyển hoá từ chất trao đổi bậc axit amin, axit nucleic, carbonhydrate, lipid, peptid, từ sản phẩm trung gian chu trình đường phân, chu trình pentosephosphate, chu trình axit citric v.v Khác với chất trao đổi bậc nhất, giữ vai trò trung tâm tham gia trực tiếp vào trình trao đổi chất thể, hợp chất thứ sinh thực vật yếu tố đặc biệt cần thiết cho trình sinh trưởng, phát triển, quang hợp sinh sản [11] Chúng tạo tế bào chuyên biệt với vai trò điều hoà mối quan hệ qua lại tế bào thể hợp chất phòng thủ giúp thực vật chống chịu lại với bệnh xâm nhiễm thực vật môi trường sống xung quanh [35] Tuỳ thuộc vào cấu trúc hoá học thuộc tính lý học chúng mà hợp chất thứ sinh thực vật phân loại thành nhóm là: nhóm tecpen, nhóm hợp chất phenolic nhóm alkaloid 1.1.1.1 Nhóm hợp chất terpen Terpen nhóm hydrocacbon thực vật lớn đa dạng nhất, hình thành từ trình polyme hoá tiểu đơn vị isoprene cacbon (C5H8), có công thức cấu tạo chung (C5H8)n Trong thực vật terpen tổng hợp thông qua đường trao đổi chất acetate/mevanolate đường glyceraldehyde - phosphate/pyruvate Hầu hết terpen thuộc nhóm hydrocacbon, nhiên chúng bị khử bị oxi hóa để hình thành hợp chất terpenoid khác alcohol, ketone, acid aldehyde Vì vậy, số tác giả sử dụng thuật ngữ “terpen” để chung nhóm lớn hợp chất bao gồm terpen terpenoid Terpen thành phần tinh dầu, dùng công nghệ mỹ phẩm, Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học thực phẩm dược phẩm Những terpen bậc cao thường chất có hoạt tính sinh học quan trọng 1.1.1.2 Nhóm hợp chất phenolic Hợp chất phenolic nhóm lớn hợp chất thực vật thứ sinh tạo thông qua sản phẩm đường trao đổi chất shikimic acid, có chứa vòng thơm mang nhiều nhóm hydroxyl, phân bố rộng rãi thực vật có mặt khắp nơi tự nhiên [26] Hiện có tới 8000 loại nhận biết từ nguồn khác tự nhiên Các hợp chất phenolic tồn dạng aglycon tự do, dạng ether, ester, dạng glycoside, dạng phức hợp với protein, dạng carbohydrate dạng khác Về phương diện hoá học, nhóm hợp chất phenolic phân chia thành nhóm lớn nhóm phenol đơn giản (simple phenol) nhóm polyphenol Nhóm phenol đơn giản lại chia thành nhóm nhóm phenolic acid nhóm coumarin Nhóm polyphenol chia thành nhóm nhóm flavonoid nhóm tannin [23] ♦ Phân nhóm phenolic acid Khái niệm phenolic acid thực vật để tất hợp chất thực vật thứ sinh có tối thiểu nhóm hydroxyl phenolic, gần nhà khoa học thường giới hạn phân nhóm phenolic acid gồm chất dẫn xuất acid benzoic (C6-C1) acid cinamic (C6-C3) [9] Gallic acid Procatechuic acid Hình 1.1 Một số phenolic acid điển hình Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học ♦ Phân nhóm coumarin Coumarin dẫn chất -pyrone có cấu trúc C6-C3, dị vòng chứa oxy có nhiều loại Coumarin chất kết tinh không màu, có màu vàng nhạt, vị đắng, số lớn dễ thăng hoa, có mùi thơm giống mùi thơm valinin hay cỏ khô [6] Về hoá học, coumarin tồn dạng aglycon tan nhiều dung môi hữu phân cực dạng kết hợp với đường glucose tạo thành glycoside dễ tan nước Hiện có 1500 loại coumarin khác tồn tự nhiên 800 loài thực vật nhận dạng [5] Trong cây, coumarin coi số chất “phòng thủ hoá học hữu hiệu” giúp thực vật tránh bất lợi môi trường dịch bệnh gây Trong đời sống ngày, coumarin sử dụng làm nước hoa, hương liệu, bán tổng hợp chất hoá học khác nhau, đặc biệt chất chống đông máu chất diệt loài gặm nhấm Trong y học, tác dụng đáng ý dẫn chất coumarin tác dụng chống co thắt, làm giãn nở động mạch vành, làm bền bảo vệ thành mạch Nhiều chất coumarin có tính kháng khuẩn, số khác có tác dụng kháng viêm, kháng nấm, kháng khối u, trừ giun sán, giảm đau hạ nhiệt Hình 1.2 Cấu trúc Coumarin ♦ Phân nhóm Flavonoid Flavonoid nhóm hợp chất phenolic thường gặp tự nhiên, chúng thường sắc tố, phần lớn có màu vàng (flavon, flavonol, chancol), không màu (izoflavon, catechin), anthocyane thường có màu đỏ vàng Màu sắc flavonoid thay đổi theo pH môi trường (Anthocyane có màu đỏ môi trường acid, màu xanh môi trường kiềm) Trong cây, flavonoid tồn dạng tự (aglycon) tan nhiều dung môi hữu ether, ethanol, acetone…, không tan nước dạng liên kết với Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học đường gọi glycoside tan nhiều nước không tan dung môi hữu Về hoá học, khung carbon flavonoid C6-C3-C6, gồm 15 nguyên tử carbon, vòng benzene A B nối với qua vòng pyran C, A kết hợp với C tạo thành khung chroman [21,22] 2' 10 B 1' 4' C A 3' O 6' 5' Hình 1.3 Flavan (2-phenyl chroman) Flavonoid tham gia vào nhiều phản ứng hoá học khác phản ứng nhóm hydroxyl (OH), phản ứng vòng thơm (diazo hoá), phản ứng nhóm cacbonyl (phản ứng shinoza) phản ứng tạo phức với kim loại [11 Hiện có 4500 loại flavonoid khác tồn thực vật nhận dạng Trong cây, flavonoid giữ nhiều vai trò mang chức sinh lý, sinh thái có ý nghĩa sống như: điều chỉnh phân bố lượng ánh sáng (flavonol, anthocyane), làm tăng hiệu quang hợp, bảo vệ tránh xạ sóng ngắn, có tính kháng khuẩn, kháng nấm, giúp tránh bệnh tật, hấp dẫn động vật thụ phấn cho hoa…Trong y học, Flavonoid sử dụng làm thuốc để chữa trị nhiều loại bệnh khác như: thuốc làm bền thành mạch, thuốc chống oxy hoá, thuốc kháng viêm, chống nấm, chống dị ứng, chống ung thư v.v Ngoài nhiều ứng dụng tiện ích khác phục vụ cho đời sống dân sinh Tuỳ theo mức độ oxy hoá mạch carbon, có mặt hay mặt nối đôi C2, C3 nhóm cacbonyl C4 mà Flavonoid chia thành nhiều phân nhóm phụ khác [38] Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học Hình 1.4 Một số nhóm flavonoid ♦ Phân nhóm Tannin Tannin hợp chất phenolic phổ biến thực vật bậc cao Horvath (1981) đưa khái niệm tannin sau: “Tannin hợp chất phenolic có trọng lượng phân tử cao, có chứa nhóm hydroxyl nhóm chức khác (như cacboxyl), có khả tạo phức với protein phân tử lớn khác điều kiện môi trường đặc biệt” 6] Về hoá học, tannin cấu tạo dựa acid tannic acid gallic, phổ biến dạng tự dạng glycoside kết hợp với đường Tannin thường hợp chất vô định hình, có màu trắng, màu vàng nhạt gần không màu, có hoạt tính quang học, có vị chát, dễ bị oxy hoá đun nóng để ánh sáng có trọng lượng phân tử dao động từ 5.000 đến 20.000 [38] Tannin tan nhiều nước (tốt nước nóng), tan dung môi hữu ethanol, hoà tan phần axetone, etylaxetat không tan dung môi phân cực chloroform, benzene …Tannin tạo phức màu đặc trưng với kim loại nặng, tạo phức với protein, tinh bột, cellulose muối khoáng Về tác dụng sinh học, tannin chất Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ sinh học 10 bảo vệ cho trước công vi sinh vật gây bệnh, loài động vật côn trùng ăn [33 Về tác dụng y học, tannin sử dụng làm thuốc cầm máu, thuốc chữa ngoài, chữa ngộ độc kim loại nặng, thuốc chống ung thư, thuốc chữa trĩ, viêm miệng, viêm xoang, điều trị cao huyết áp chứng đột quỵ Procyanidin Quebracho Hình 1.5 Cấu trúc hoá học tanin 1.1.1.3 Nhóm hợp chất alkaloid Alkaloid hợp chất chứa nitơ, có thực vật mà có động vật Nguyên tử nitơ phần, phần hệ thống dị vòng Chúng có cấu trúc phân tử phức tạp, có hoạt tính Sinh-dược rõ rệt phân bố hạn chế giới thực vật Hiện có 12000 loại alkaloid khác phân lập Trong cây, alkaloid tồn dạng: dạng tự do, dạng muối axit phổ biến citric, lactic, oxalic, axetic, malic…và dạng oxit nitơ Alkaloid không phổ biến rộng tất loài thực vật mà tập trung số loài, chủ yếu tìm thấy loài thực vật có hoa, có khoảng 20% số loài thực vật có hoa sản sinh alkaloid Đa số alkaloid mùi, vị đắng, số có vị cay, dạng chất rắn có màu trắng, trừ vài chất có màu vàng (berberin, palmatin) Về vai trò sinh học, alkaloid coi “hàng rào phòng thủ hoá học hữu hiệu” bảo vệ trước công vi sinh vật gây bệnh loại côn trùng, sâu bệnh ăn [38] Về y học, alkaloid sử dụng đa dạng: làm thuốc gây ức chế, kích thích hệ thần kinh trung ương, dùng làm thuốc điều hoà huyết áp, chữa loạn Hà Viết Cường - K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 44 3.5.2.2 Chỉ số triglycerid Bảng 3.10 Hàm lƣợng triglycerid (mmol/l) chuột béo phì trƣớc sau 21 ngày điều trị Lô chuột Trƣớc điều trị Sau 21 ngày điều trị % thay đổi BP + KĐT 1,72 ± 0,09 1,69 ± 0,13 ↑ 1,8%*** BP + EtOH 1,72 ± 0,09 1,36 ± 0,19 ↓ 21,5%** BP + n-hexan 1,72 ± 0,09 1,31± 0,12 ↓ 23,8%** BP + EtOAc 1,72 ± 0,09 1,11 ±0,17 ↓ 35,5%** BP + Met 1,72 ± 0,09 1,09 ± 0,15 ↓ 36,6%* Hàm lƣợng TG (mmol/l) (***): p> 0,05; (**): p 0,05; (**): p< 0,05; (*): p=18mmol/l, phân thành lô, lô để bắt đầu điều trị: + Lô 1: chuột ĐTĐ không điều trị (cho uống nước muối sinh lý) + Lô 2: chuột ĐTĐ điều trị cao PĐ EtOAc (liều 1000mg/kg thể trọng) + Lô 3: chuột ĐTĐ điều trị Metformin (liều 500mg/kg thể trọng) Sau 21 ngày điều trị, thu kết sau: Bảng 3.14 Nồng độ glucose chuột trƣớc sau tiêm STZ Lô chuột Trƣớc tiêm STZ Sau 48h tiêm Sau 72h tiêm STZ + KĐT 8,0 ± 0,5 19,1 ± 2,2 21,7 ± 2,4 STZ + EtOAc 8,4 ± 0,4 18,7 ± 1,2 24,9 ± 1,9 STZ + Met 8,7 ± 0,6 18,3 ± 2,1 25,6 ± 2,0 p < 0,05 Sau 72h, tiến hành chia lô để điều trị Chỉ có nồng độ glucose huyết 18mmol/l dùng để để điều trị Kết điều trị trình bày bảng 3.15 hình 3.11 Bảng 3.15 Nồng độ glucose huyết chuột ĐTĐ trƣớc sau điều trị Lô chuột STZ + KĐT STZ + EtOAc STZ + Met Trƣớc tiêm STZ 8,0 ± 0,5 8,4 ± 0,4 8,7 ± 0,6 Sau 72h (G0) 21,7 ± 2,4 24,9 ± 1,9 25,6 ± 2,0 ngày (G4) 21,9 ± 1,3 19,8 ± 1,3 21,3 ± 1,5 Hà Viết Cường – K12.SHTN ngày (G7) 22,1 ± 0,4 17,6 ± 0,7 18,4 ± 0,5 (p< 0,05) 14 ngày (G14) 22,3 ± 1,2 15,8 ± 0,9 16,7 ± 0,7 21 ngày (G21) 22,8 ± 1,7 15,7 ± 1,3 13,3 ± 0,8 Mức % thay giảm đổi lớn 2,1 ↑ 5,1% - 9,2 -12,3 ↓ 36,9% ↓ 48% Luận văn Thạc sĩ Sinh học 50 Trong đó: G0: đường huyết đo thời điểm 72h sau tiêm, đồng thời thời điểm ban đầu trước điều trị G4, G7, G14, G21: đường huyết chuột đo thời điều sau 4, 7, 14, Nồng độ glucose máu (mmol/l) 21 ngày điều trị 30 25.6 24.9 25 21.7 22.8 20 15.7 13.3 15 10 STZ + KĐT STZ + EtOAc Trƣớc điều trị STZ + Met Sau 21 ngày điều trị Hình 3.11 Nồng độ glucose huyết chuột ĐTĐ trƣớc sau 21 ngày điều trị Theo số liệu trên, ta thấy rằng: Sau 21 ngày điều trị, nồng độ glucose huyết lô chuột ĐTĐ không điều trị có xu hương tăng lên (từ 21,7 đến 22,8 – tăng 5,1%, p< 0,05) Trong đó, hai lô chuột ĐTĐ điều trị giảm mạnh so với trước điều trị Giảm mạnh lô chuột ĐTĐ điều trị Metformin (giảm 48%) Lô chuột điều trị cao EtOAc giảm mạnh (giảm 39,6%) so với trước điều trị Tuy nhiên, mức giảm lớn nồng độ glucose huyết chuột ĐTĐ điều trị nằm khoảng từ 13,3 – 15,7, năm giới hạn đường huyết cho phép thông thường Điều thời gian điều trị chưa đủ, liều điều trị thấp nên không đủ khả đưa nồng độ glucose huyết ngưỡng bình thường Mặc dù tác dụng cao phân đoạn EtOAc không Metformin so sánh với lô chuột không điều trị khả giảm glucose huyết chuột ĐTĐ cao phân đoạn EtOAc Roi đỏ có ý nghĩa Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 51 3.6.2 Tác dụng phân đoạn dịch chiết từ Roi đỏ đến số lipid máu chuột ĐTĐ type Bảng 3.16 Tác động phân đoạn dịch chiết từ Roi đỏ đến số lipid chuột ĐTĐ type Chỉ số lipid sau 21 ngày điều trị Lô điều trị Trước điều trị STZ + KĐT STZ + EtOAc STZ + Met TC TG HDLc LDLc (mmol/l) (mmol/l) (mmol/l) (mmol/l) 3,42 ± 0,17 1,72 ± 0,09 1,43 ± 0,07 1,01 ± 0,04 3,32±0,15 1,69±0,12 1,45±0,06 0,97±0,06 (↓ 2,93%) (↓ 1,74%) (↑1,4%) (↓ 3,96%) 2,87±0,12 1,31±0,09 1,63±0,09 0,85±0,07 (↓16,08%)** (↓23,84%) (↑13,99%)* (↓15,84%)* 2,29±0,11 1,25±0,05 1,69±0,04 0,81±0,04 (↓21,35%)** (↓ 27,32%)* (↑18,18%)** (↓19,8%)** Hàm lƣợng (mmlo/l) 3.5 3.42 3.32 2.87 2.69 2.5 1.5 1.72 1.43 1.69 1.45 1.63 1.31 1.69 1.01 0.97 0.85 0.81 1.25 0.5 Trƣớc điều trị STZ + KĐT TC TG STZ + EtOAc HDLc STZ + Met LDLc Hình 3.12 Tác động phân đoạn dịch chiết từ Roi đỏ đến số lipid chuột ĐTĐ type Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 52 Kết bảng 3.16 hình 3.12 cho thấy, chuột ĐTĐ có thay đổi trình trao đổi lipit Cụ thể là: lô chuột ĐTĐ không điều trị, số TC, TG LDLc giảm 2,93%; 1,74%; 3,96%; số HDLc lại tăng 1,4% Như lô không điều trị có thay đổi theo xu hướng tích cực, thay đổi tương đối nhỏ, không nghĩa mặt thống kê Ở lô chuột ĐTĐ điều trị thay đổi có tính khả quan Lô điều trị cao phân đoạn EtOAc có mức thay đổi đáng kể: số TC, TG, LDLc giảm 16,08%; 23,84% 15,84%; đồng thời số HDLc tăng lên 13,99% Sự thây đổi chưa tốt sử dụng Metformin (các số là: TC giảm 21,35%, TG giảm 27,32, HDLc tăng 18,18% LDLc giảm 19,8%) có ý nghĩa Metformin loại thuốc tinh khiết chuyên dùng điều trị ĐTĐ béo phì Có điều nhận thấy mức thay đổi số lipit máu chuột ĐTĐ điều trị không tốt mức thay đổi số điều trị chuột béo phì Điều có lẽ chuột mắc lúc hai bệnh béo phì tiểu đường khả chữa trị khó mắc béo phì Với phân tích trên, khẳng định dịch chiết từ Roi đỏ có nhiều thành phần hợp chất có tác dụng tốt điều trị chuột béo phì ĐTĐ Điều mở khả dùng Roi đỏ nguồn nguyên liệu sẵn có, giá rẻ điều trị cho bệnh nhân béo phì ĐTĐ Ảnh: Chuột béo phì Chuột bình thƣởng mô hình gây BPTN Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu thu được, đưa kết luận sau: 1.1 Thành phần hoá học Roi đỏ (Syzygium samarangence) hợp chất polyphenols có flavonoids Hàm lượng hợp chất phenolics tổng số cao phân đoạn ethylaxetate lớn (5,59%) 1.2 Đã gây thành công mô hình chuột béo phì thực nghiệm Sau tuần nuôi với hai chế độ ăn khác nhau, chuột nuôi béo có trọng lượng thể tăng so với ban đầu 234,9% tăng so với chuột nuôi thường 65,8% Các tiêu lipid máu thay đổi: TC tăng 38,4%; TG tăng 49,6%; LDLc tăng 29,5% HDLc giảm 22,3%; nồng độ glucose máu tăng 57,4% so với lô chuột nuôi thức ăn thường Điều phù hợp với quy luật rối loạn trao đổi lipid – gluxit chuột béo phì 1.3 Không xác định liều độc cấp LD50 dịch chiết Roi đỏ chuột bạch chủng Swiss với liều thử cao 12000mg/kg thể trọng Điều chứng minh rằng: dịch chiết phân đoạn từ Roi đỏ hoàn toàn không độc 1.4 Dịch chiết phân đoạn từ Roi đỏ dạng cô đặc có khả chống béo phì rối loạn trao đổi chất chuột béo phì sau 21 ngày điều trị Trong đó, cao phân đoạn EtOAc có tác dụng tốt nhất: giảm trọng lượng 17,7%, giảm hàm lượng TC máu 20,18%, giảm hàm lượng TG huyết 35,5%, tăng hàm lượng HDLc 19,6%, giảm hàm lượng LDLc 21,8% Sau 21 ngày, nồng độ glucose máu giảm 31,8% 1.5 Cao EtOAc có khả giảm nồng độ glucose máu chuột béo phì, tiêm STZ liều thấp (110mg/kg thể trọng) sau 21 ngày điều trị (mức giảm 36,9%), thấp mức giảm điều trị thuốc Metformin (giảm 48%) khả quan Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 54 Kiến nghị 2.1 Cần tiếp tục sâu nghiên cứu, tìm hiểu thành phần hóa học hợp chất tự nhiên có Roi đỏ, đặc biệt xác định cấu trúc hóa học số hợp chất từ phân đoạn EtOAc có tác dụng chống béo phì hạ glucose huyết chuột BPTN 2.2 Tiếp tục sâu nghiên cứu, tối ưu hóa quy trình xây dựng mô hình chuột BPTN, ĐTĐ type để nghiên cứu khả chữa ĐTĐ dịch chiết từ Roi đỏ Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Tạ Văn Bình (2007), Những nguyên lý tảng bệnh đái tháo đường tăng glucose máu, Nxb Y học, Hà Nội Võ Văn Chi (1999), Từ điển thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Quốc Khang, Đào Kim Nhung (1997), Thực tập sinh hóa, Đại học Tổng hợp Hà Nội Trương Văn Châu, Trần Hồng Quang, Đỗ Ngọc Liên (2006), “Đặc tính kháng khuẩn chất phenolic số loài thuộc chi Garcinia.L“, Tạp chí Sinh học 26(4), trang 59-62 Nguyễn Huy Cường (2005), Bệnh đái tháo đường quan điểm đại, NXB Y học Hà Nội, trang 24, 26-40,175-190 Nguyễn Thượng Dong, Bùi Thị Hằng, Nguyễn Kim Cẩn, Phạm Thanh Hằng, Nguyễn Bích Thu, Nguyễn Duy Thuần, Nguyễn Văn Thuận (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Bô Giáo dục Đào tạo-Bộ Y tế-Viện dược liệu, NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 305-311,344-370 Nguyễn Đức Hoan (2002), “ Một số hiểu biết bệnh béo phì điều trị béo phì”, công trình nghiên cứu Y học Quân sự, Học viện Quân Y số 4/2002, trang 51-63 Phùng Thanh Hương, Hồ Mai Anh, Nguyễn Xuân Thắng (2002), “Tác dụng hạn chế tăng glucose huyết thân mướp đắng (Momordica charantia L Cucubiaceae) số mô hình tăng glucose huyết thực nghiệm”, Tạp chí dược học, Bộ Y tế, 1, tr 22-25 Phùng Thanh Hương (2009), Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết ảnh hưởng lên chuyển hóa glucose dịch chiết lăng nước (Lagerstroemia speciosa L.), Luận án Tiến sĩ dược học, Hà Nội 10 J.P.Borel (2006), Hóa sinh cho thầy thuốc lâm sàng chế phân tử hóa học nguyên bệnh, NXB Y học, trang 247-269 11 Nguyễn Quốc Khang (2004-2006), Bài giảng chuyên đề cao học Các hợp chất thứ sinh, trang 1-2,11-12 Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 12 56 Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật 13 Đỗ Ngọc Liên (2007), Sinh học phân tử màng tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội 14 Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Thị Thuý Quỳnh, Nguyễn Thị Thanh Ngân (2006), “Nghiên cứu số hợp chất tự nhiên dịch chiết khế (Averrhoa carambola L.) tác động hạ đường huyết chúng chuột (Rattus spp) gây tăng đường huyết”, Tạp chí khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, 3, tr 39 – 44 15 Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Thị Thuý Quỳnh, Nguyễn Hoàng Quang, Nguyễn Thị Thanh Ngân (2006), “Tác dụng chống béo phì giảm khối lượng thể phân đoạn dịch chiết vỏ quất cảnh (Fortunella japonica) chuột béo phì thực nghiệm”, Tạp chí Đại học Quốc gia Hà Nội, 25, trang 172-187 16 Trần Thị Chi Mai (2007), Nghiên cứu tác dụng polyphenol chè xanh (Camellia sinensis) số lipid trạng thái chống oxy hóa máu chuột cống trắng đái tháo đường thực nghiệm, Luận án tiến sĩ y học 17 Chu Văn Mẫn (2000), Ứng dụng tin học sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội 18 Phan Hải Nam (2007), Một số xét nghiệm hóa sinh lâm sàng, Nhà xuất quân đội nhân dân, Hà Nội 19 Trần Đức Thọ (2002), “ Bệnh đái tháo đường”, Bài giảng bệnh học nội khoa, tập I, NXB Y học, trang 258-272 20 Đỗ Thị Tính (2001), Góp phần nghiên cứu rối loạn lipid máu bệnh nhân béo phì thông số hóa sinh, Luận án tiến sĩ Y học, Hà Nội TIẾNG ANH 21 Amos A., McCarty D., Zimmet P., (1997), “ The rising global burden of diabetes and its complication: estimates and projection to uear 2010”, Diabetes Med, Vol 14, pp 1-85 22 Anderson M (2006), Flavonoids Chemistry, Biochemistry and applications, CRC Press, Taylor & Francis Group Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 57 23 Antolovich M., Prezler P., Robards K., Ryan D (2000), “Sample preparation in determination of phenolic compounds in fruits”, analyst, 125, pp 989-1009 24 Atkintin Mark A (2000), “ Type diabetes”, Atlats of diabetes, pp 45-58 25 Bloomgarden Z T (1997), “type diabetes: its prevalence, cause and treatment”, Diabetes Care, pp 860-865 26 Buchanan B.B., Wielhelm G., Russell L.J., (2000), Biochemistry & Molecular Biology of plants American society of plant Physiology, USA Chapter 22 27 Cannell R.J.P (1998), Natural products isolation, Human Press:354 28 Felber J P., Haesler E., Jequier E (1993), “ Metabolic origin of insulin resistance in obesity without type (non-insulin dependent) diabetes mellitus”, Diabetologia, pp 1221-1229 29 Ferrannini E., Natali A., Bell P., et all (1997), Insulin resistance and hypersecretion in obesity, J, Clin, Invert, pp 1166-1173 30 Gilbert P August, Sonia Caprio, Ilene Fennoy, Michael Freemark, Francine R Kaufman, Robert H Lustig, Janet H Silverstein, Phyllis W Speiser, Dennis M Styne, and Victor M Montori, “Prevention and Treatment of Pediatric Obesity: An Endocrine Society Clinical Practice Guideline Based on Expert Opinion”, Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 31 Haslam (1989), “ Plant polyphenol-vegetable Tanins”, Revisited Chemistry and Pharmacology of Natural products, Cambridge Univesity Pres, Cambridge, pp 165 32 LifeScan INC., Johnson & Johnson company (1996), “Glucose testing and reagent chemistry”, LifeScan learning modules, pp 1-26 33 Lorke D A (1983), “A new approach to practical acute toxicity testing”, Arch Toxicol , Vol 54, pp 275-287 34 Luthria D.L and Mukhopadhyay S (2006), “Influence of sample preparation on assay of phenolic acid from Egg plant”, J Agric Food Chem, 54, pp.41-47 35 Nelson, D L & Cox, M M (2005) Lehninger Principles of Biochemistry, 4th Edition New York: W H Freeman and Company Hà Viết Cường – K12.SHTN Luận văn Thạc sĩ Sinh học 58 36 Orthofer V.L., Lamuela R.M (1999), Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagents Method Enzymol., 299,pp 152-178 37 Rajnikant, Dinesh and Kamni (2005), “Weak C-H-O hydrogen bonds in Alkaloids: An overview”, Bull Master Sci, Vol 28, No 3, pp 187-198 38 Richard J Comi (1996), “Durg-induced diabetes”, Diabetes Mellitus, Lippincott-Raven, New York, pp 491-495 39 Rodney Croteau, Toni M., Kuchan, Norman G Lewis (2002), Natural products (secondary metabolites), Chapter 24, pp 1250-1318 40 Packer L (2001), Flavonoids and other polyphenol, Methods in Enzymology, Academic Press, Vol.335 41 Sharon C Cheetham, Helen C Jackson, Steven P Vickers, Keith Dickinson, Robert B Jones, David J Heal (2004) Novel targets for the treatment of obesity: a review of progress Elsevier Cardiovascular and metabolic disease, Vol 1(2): 227-235 42 Srinivasan K., Viswanad B., Asrat L., Kaul C L., Ramarao P (2005), “Combination of hight-fat-diet-fet and low-does STZ treated rat: A model for type diabetes and pharmacological screening”, Department Pharmacological Reseach, 52, pp 313-320 43 Tan B.K.H., Tan C.H., Pushparaj P.N (2005), Anti-diabetic activity of the semi-purified fractions of Averrhoa bilimbi in high fat diet fed-streptozotocininduced diabetic rats, Life sciences 76: 2827-2839 Hà Viết Cường – K12.SHTN