Công nghệ sản xuất Vaccine phần 2

CN sản xuất vaccine phần 2 chi tiết. Nhận làm thuê slide cực đẹp, chuyên nghiệp, giá cực rẻ và nhanh chóng tại Hà Nội: 0966.839.291. Công Ty Cổ Phần Công Nghệ Tài Nguyên Và Môi Trường. Nhận đào tạo về Powerpoint.

VACXIN V MIN DCH HC NG DNG I LCH S PHT HIN V DANH PHP Vacxin cú chc nng to dch cho c th ngi v ng vt chng li cỏc bnh truyn nhim T xa xa, ngi ó nhn thy cú nhng bnh truyn nhim ch gp mt s loi ng vt v cựng mt v dch cú th cú cỏ th mc nng, cú cỏ th mc nh Mt khỏc, cú trng hp sau b bnh qua thỡ vnh vin khụng b mc li, tc l ngi ó bit ti nhng gỡ m ngy chỳng ta gi dch i vi cỏc bnh truyn nhim nguy him, ngi ó cú mt quỏ trỡnh u tranh phũng chng ginh git ly s sng phũng chng bnh di, nh khoa hc ni ting nht ngi Hy Lp (384 322 trc Cụng nguyờn) ó ngh cht b t chc b di cn u tranh phũng chng bnh u mựa, ngi ta ó bit ly vy mn u phi khụ, tỏn nh cho ngi lnh hớt gõy bnh nh, to nờn mt tỡnh trng dch Phng phỏp ny mang li nhng hiu qu nht nh nhng iu nguy him nht l khụng kim soỏt c liu lng nờn cú th gõy cht ngi hoc to dch cng ng Nm 1798, Edward Jenner, mt thy thuc vựng Gloucestershire (thuc Anh) ó dựng dch m mn u bũ chng cho ngi to trng thỏi dch chng bnh u õy l phỏt minh quan trng s phỏt trin ca dch hc, tc l m u cho s nghiờn cu v kh nng bo v c hiu ca c th chng li cỏc tỏc nhõn gõy bnh 1.2 Lch s phỏt trin ca vacxin Giai on Jenner: (t 1796) S dng cỏc virus cng c ca ng vt gõy dch cho ngi Sau ú, Luis Pasteur, trờn c s ny ó thnh cụng vic ch to vacxin phũng bnh nhit thỏn, bnh t huyt trựng gia cm v bnh di ghi nhn s kin ny, mt hi ngh v danh phỏp quc t ngi ta ngh gi tt c cỏc ch phm sinh hc cú nguyờn lý phũng bnh nh vy vi mt tờn chung l vacxin, xut phỏt t t vaccinia tờn ca virus u bũ Danh phỏp gm t ghộp: t u: vacxin t sau: tờn bnh Hin cỏc thut ng v cỏc sn phm sinh hc dựng thỳ y thay i gia cỏc quc gia Giai on Pasteur: (t 1900) S dng cỏc mm bnh nhc c ắ Vớ d: M: Thut ng vacxin c dựng ch nhng sn phm cha virus hoc nguyờn trựng sng hay nhc c, vi khun sng hoc cỏc axit nucleic Cỏc sn phm cha vi khun cht v cỏc vi sinh vt khỏc c gi tờn nh bacterin, cht chit ca vi khun (bacterial extract), cỏc cht di n v (sub units), c t vi khun (toxoid) Chõu u: Cỏc sn phm dựng thỳ y c gi l cỏc sn phm s dng cho ng vt nhm to dch ch ng hoc b ng hoc chn oỏn tỡnh trng dch Trong chng ny, thut ng vacxin bao gm tt c cỏc sn phm to kớch thớch sinh dch ch ng cho c th ng vt chng li bnh, vic s dng ny phự hp vi thut ng quc t, khụng liờn quan n cỏc sn phm sinh hc sinh dch th ng, cht kớch thớch dch, cht iu tr d ng hoc chn oỏn bnh Vacxin c coi l thnh tu v i nht ca y hc hin i Cụng tỏc tiờm chng ó c thc hin tt c cỏc quc gia v ó thc s tr thnh tm lỏ chn phũng chng nhiu bnh truyn nhim ngi v ng vt Tuy nhiờn cũn nhiu bnh truyn nhim him nghốo cỏc vi sinh vt, c bit l virus gõy cha tỡm c vacxin d phũng Hin nay, vic nghiờn cu ci to cỏc vacxin hin cú, ch to cỏc vacxin mi ang l mc tiờu phn u ca cỏc nh khoa hc 1.2 Khỏi nim v vacxin Vacxin l mt ch phm sinh hc ú cha chớnh mm bnh hoc khỏng nguyờn ca mm bnh gõy mt bnh truyn nhim no ú cn phũng (nu l mm bnh thỡ phi c git hoc lm nhc c bi cỏc yu t vt lý, húa hc v sinh vt hc) Khi s dng cho ng vt, vacxin to mt ỏp ng dch ch ng giỳp ng vt chng li c s xõm nhim ca mm bnh tng ng 1.3 Nguyờn lý Vacxin to c th sng mt ỏp ng dch H thng dch ca c th hot ng, sinh khỏng th dch th c hiu hoc khỏng th t bo chng li nhng nhúm quyt nh khỏng nguyờn ca yu t gõy bnh C th đợc s dng vacxin xut hin trng thỏi dch thu c ch ng nhõn to cú kh nng chng li s xõm nhim ca yu t gõy bnh tng ng 1.4 c tớnh c bn ca mt vacxin Vacxin phi m bo c tớnh c bn l: n Tớnh sinh dch (immunogenicity) ú l kh nng gõy ỏp ng dch dch th hoc dch t bo hay c hai Tớnh sinh dch ph thuc vo khỏng nguyờn v c th nhn kớch thớch ca khỏng nguyờn Ngha l ph thuc vo tớnh l v ng a vo ca khỏng nguyờn v c a (trng thỏi c th) ca mi cỏ th (ngi v ng vt) o Tớnh khỏng nguyờn hay tớnh sinh khỏng th (antigenicity) Mt vacxin a vo c th phi cú kh nng kớch thớch c th sinh khỏng th Cỏc yu t gõy bnh cú th cú nhiu epitop khỏng nguyờn khỏc Trong ú cú th cú protein quỏ nh bỏn khỏng nguyờn (hapten) khụng cú tớnh sinh khỏng th nu nguyờn cu trỳc khụng kt hp vi loi khỏc Mun hapten sinh khỏng th chng li mm bnh cn bin i chỳng thnh loi cú tớnh khỏng nguyờn, thng kt hp chỳng vi mt protein mang (carrier) vụ hi p Tớnh hiu lc (efficacy) Tớnh hiu lc núi lờn kh nng bo h ng vt sau c s dng vacxin Khi mt vacxin a vo c th, cú nhiu khỏng th c to nhng khụng phi loi no cng cú hiu lc tc l tiờu dit c yu t gõy bnh Do yu t gõy bnh cú nhiu khỏng nguyờn khỏc nờn bo ch vacxin trc tiờn phi lm cho ỏp ng dch chng li nhng nhúm quy nh khỏng nguyờn thit yu, ngha l nu b vụ hiu ú thỡ yu t gõy bnh b tiờu dit hoc ớt cng khụng cũn kh nng sinh hi na Vỡ th, nghiờn cu sn xut vacxin hin i, ngi ta ang cú nhng c gng phõn lp nhng khỏng nguyờn hay nhúm quy nh khỏng nguyờn thit yu lm cho vacxin c thun khit v tin ti cú th tng hp c chỳng Vớ d: Vi virus gõy bnh Gumboro g thỡ protein VP2 l khỏng nguyờn thit yu; Virus cỳm gia cm thỡ khỏng nguyờn HA (H5) v NA (N1) l thit yu; Virus viờm gan B ngi thỡ khỏng nguyờn b mt HBsAg l thit yu Tớnh hiu lc hay kh nng bo v ca vacxin c ỏnh giỏ qua thc nghim nhng ch yu phi l ỏnh giỏ trờn thc a sau tiờm chng cỏc cỏ th v mc dch qun th, cú th thụng qua hm lng khỏng th trung bỡnh huyt v t l bo h qun th Trờn ng vt thớ nghim: ỏnh giỏ mc ỏp ng dch sau tiờm chng vacxin v ỏnh giỏ hiu lc bo h l ng vt qua th thỏch cng c Th nghim thc a: Vacxin c tiờm chng cho mt qun th ng vt hay ngi, theo dừi thng kờ cỏc phn ng ph, ỏnh giỏ kh nng bo h dch ti, ng thi tin hnh th thỏch cng c mt nhúm ngu nhiờn qun th Vacxin cú hiu lc l vacxin gõy c dch mc cao, t l bo h cao (trờn 80%) v bo v lõu bn (thi gian di: thỏng, nm) Tuy nhiờn, hiu lc ca mt vacxin ph thuc vo nhiu yu t nh bo qun, chuyn v k thut tiờm phũng Vỡ vy, ngi ta ó xõy dng mt mụn khoa hc mi gi l vacxin hc (vaccinology) m mc ớch l nghiờn cu mi bin phỏp t lỳc sn xut n lỳc tiờu dựng tng tớnh hiu lc ca vacxin q Tớnh an ton: õy l c tớnh rt quan trng (safety) Sau sn xut vacxin phi c c quan kim nh nh nc kim tra cht ch v mt vụ trựng, thun khit v vụ c Vụ trựng: Khụng c nhim cỏc vi sinh vt khỏc Thun khit: Khụng c ln cỏc thnh phn khỏng nguyờn khỏc cú th gõy cỏc phn ng ph Vụ c: Liu s dng phi thp hn rt nhiu so vi liu gõy c Sau sn xut, vacxin phi c th tớnh an ton phũng TN, thc a, quy mụ nh v i tr Tn sut v mc nng nh ca cỏc phn ng ph (nu cú) phi c xỏc nh trc c em dựng ph bin, nhng phi c theo dừi ht sc cn thn 1.5 Cỏc loi vacxin Cú th chia vacxin lm loi sau: Vacxin cht (vụ hot) Vacxin sng Vacxin di n v Vacxin th h mi sn xut bng cụng ngh gen Qua vật chủ không cảm thụ (host range mutants) Vacxin nhợc độc Vacxin sống Vacxin vô độc Vacxin ** nguyên độc Hình 1: Sơ đồ phân loại vacxin dựa vào nguyên lý sản xuất hớng sử dụng loại vacxin Ghi chú: Dấu (*) giới thiệu loại hình vacxin mà trình tạo giống sản xuất có sử dụng kỹ thuật gen Dấu (**) loại vacxin cờng độc với loài nhng đợc sử dụng nh loại vacxin vô độc cho loài khác Nhạy cảm nhiệt độ (temperature-sensitive mutants) Thích ứng nhiệt độ thấp (cold-adapted mutants) Xoá gen độc (deletion mutants) * Tái tổ hợp gen (vacxin vector * truyền vacxin axit nucleic) (recombinant vaccines) Vacxin Vacxin nguyên thể Tinh chế từ nguồn vi sinh vật chủ thiên nhiên Vacxin vô hoạt Vacxin phân tử Sản xuất, tinh chế kỹ thuật gen * Chứa protein kháng nguyên tổng hợp kỹ thuật gen * 10 1.5.3 Vacxin di n v L vacxin sn xut cha nhng khỏng nguyờn tng i tinh khit phõn lp t virus hay vi khun sinh bnh Mt s vk gõy bnh bng c t nh Cl tetani, Co diphtheriae, ngi ta nuụi cy vi khun, chit tỏch c t, gii c bng yu t húa hc hoc vt lý theo nguyờn lý ca vacxin cht Cỏc c t mt hot tớnh c gi l gii c t (anatoxin) v c dựng lm vacxin Phy khun t gõy bnh nh Enterotoxin, c t ny gm di n v A rt c v di n v B khụng c, nhng B li cú kh nng sinh khỏng th bo v nờn ngi ta nuụi vi khun, tinh lc Enterotoxin, tỏch di n v B dựng lm vx chng bnh th t Cn lu ý rng vic tng tinh khit cú th dn n mt tớnh sinh dch hoc s b cỏc enzym phỏ hy trc kớch thớch dch Vỡ vy loi vacxin ny ũi hi phi cú protein mang hay cht b tr, vớ d nh mui nhụm Vacxin di n v cú mc thun nht v tinh khit hn ton b vi sinh cho nờn cỏc tớnh mn cm, tớnh sinh khỏng th v tớnh hiu lc u m bo mt s bnh virus gõy ra, vacxin khụng dựng ton b ht virus m ch dựng mt vi thnh phn ca virus nh protein capxit hoc glycoprotein v ngoi, ú vacxin cũn c gi l vacxin di ht (subvirion) S d khụng dựng virus nguyờn l do: Nhiu loi virus khụng cú kh nng nhõn lờn cỏc t bo nuụi cy (virus viờm gan B) Mt s virus c coi l rt nguy him nờn khụng m bo an ton sn xut k c vacxin sng hoc cht (HIV) Mt s vacxin nu sn xut t virus nguyờn cú th nh hng n c th gõy phn ng ph (vacxin cỳm) Cỏc protein capxit hoc glycoprotein v ngoi thng gn vo receptor trờn b mt mt s loi t bo ký ch, hoc thu c t huyt tng bnh nhõn, sau ú lm bt hot (khỏng nguyờn b mt ca virus viờm gan HBSAg) hoc cú th sn xut bng k thut tỏi t hp ADN Cỏc vacxin subvirion nh: vacxin HA chng virus cỳm typ A, B vacxin HBsAg chng virus viờm gan B 16 1.5.4 Vacxin th h mi sn xut bng cụng ngh gen 1.5.4.1 Khỏi nim Nhng tin b v KH - KT lnh vc vi sinh vt, dch hc, sinh húa protein, c bit l k thut gen hc v cụng ngh sinh hc phõn t ó m mt hng ng dng mi ú l nghiờn cu sn xut cỏc loi hỡnh vacxin bng cụng ngh gen Nhng loi vacxin to bng phng phỏp ny trờn gi l vacxin th h mi nhm phõn bit vi cỏc loi vacxin ó cú c nghiờn cu sn xut bng phng phỏp cụng ngh truyn thng Mt vacxin c gi l vacxin th h mi phi l thnh phm ca mt quy trỡnh cú s can thip, s dng, thao tỏc ca cụng ngh gen Hin nhiu loi vacxin th h mi ó v ang c a vo s dng cú hiu qu, gúp phn vo vic phũng chng bnh tt cho ngi v ng vt 1.5.4.2 Nguyờn lý Trong mt loi vacxin, yu t quyt nh tớnh sinh dch chớnh l thnh phn protein c bit cú trờn b mt ca VSV gõy bnh Thnh phn protein ny c gi l khỏng nguyờn v mt gen hay mt s gen cú h gen ca VSV gõy bnh quyt nh tng hp nờn Nhng gen chu trỏch nhim v vic tng hp (hay sn xut) protein KN c gi l gen KN Nu tỏch gen KN vt liu di truyn ca VSV ri ghộp vo mt h thng plasmid vector thớch ng no ú thỡ gen khỏng nguyờn ny hot ng nh tn ti h gen ca VSV ch v phõn t protein khỏng nguyờn c tng hp cú th cú chc nng nh c, tc l cú tớnh sinh dch Ch phm protein khỏng nguyờn c to bng kỹ thuật gen nh th c gi l vacxin tỏi t hp gen hay vacxin th h mi vacxin cụng ngh gen 17 1.5.4.3 Phõn loi Vacxin th h mi cú nhiu loi Cn c vo ngun khỏng nguyờn nhõn lờn c hay khụng nhõn lờn c th ng vt, ngi ta chia vacxin th h mi lm loi: a Vacxin cú khỏng nguyờn sng c nhõn lờn, bao gm: c Vacxin tỏi t hp cú vector dn truyn d Vacxin axit nucleic (vacxin ADN) e Vacxin xúa gen c b Vacxin cú ngun gc khỏng nguyờn khụng nhõn lờn, bao gm: c Vacxin cha khỏng nguyờn l protein sn xut bng k thut gen d Vacxin n c e Vacxin peptit tng hp a Vacxin cú KN sng c nhõn lờn, bao gm: c Vacxin tỏi t hp cú vector dn truyn Loi vacxin ny cha thnh phn chớnh: - on ADN cha gen mó húa cho khỏng nguyờn chớnh c tỏch t vi sinh vt gõy bnh - H gen ca vector dn truyn - Ngi ta tỏch ri gen khỏng nguyờn t vi sinh vt gõy bnh ri ghộp vo h gen ca vector dn truyn l plasmid hay vi sinh vt ri a vo vt ch L vi sinh vt sng nờn gõy nhim, chỳng s nhõn lờn ú ngun gen khỏng nguyờn v sn phm ca gen khỏng nguyờn l protein khỏng nguyờn luụn c sn xut to dch lõu bn cho c th 18 Cỏc vector dn truyn Hin cỏc vector dn truyn c chn thng l nhng sinh vt (vi khun, virus, nm men, thc vt) thụng dng cú th nhõn lờn c nhiu loi ng vt v ó c lm gim c hoc vụ c bng k thut gen + Vi khun S typhimurium: õy l loi VK c chn lm vector dn truyn vỡ cú cỏc u im: D s dng qua ng tiờu húa Cú th tn ti v nhõn lờn t chc Lympho ng tiờu húa, cung cp protein khỏng nguyờn bn vng gõy ỏp ng dch ton din: dch th, t bo v dch cc b Vic nuụi cy vi khun tỏi t hp gen ny d thc hin v thi gian sn xut rỳt ngn Hin S typhimurium c s dng ph bin lm vector dn truyn sn xut cỏc vacxin: cỳm, viờm gan B, st xut huyt, th t, liờn cu khun, KST st rột Ngoi S typhimurium, ngi ta cũn s dng vi khun E coli v mt s loi nm men nh Pichia pastoris hoc Sacharomyces cerevisiae lm vector dn truyn + Virus u bũ vaccinia: thuc nhúm Orthopoxvirus ó c s dng mt thi k di lm vacxin phũng bnh u H gen ca vaccinia cú 200.000 nucleotit v cú kh nng tip nhn nhiu gen ngoi lai cú di 25.000 nucleotit ặ l vector lý tng sn xut vacxin a giỏ 19 Sơ đồ tạo vacxin tái tổ hợp vectơ dẫn truyền vị trí cắt vùng khởi động khởi phát ATG kết thúc TAA gen vacxin Plasmid cắt điểm mầm gen vacxin nối virus đậu vectơ Plasmid tái tổ hợp Nuôi cấy tế bo chọn lọc virus đậu tái tổ hợp Mt khỏc virus vaccinia cú kh nng gõy nhim vo nhiu loi vt ch nhng khụng gõy bnh, cú th nhõn lờn nhiu loi t bo nuụi cy, thm nhiu dũng t bo m ú chỳng khụng hon thin c chu trỡnh nhõn lờn ặ khụng b dung bo ặ thun tin lm vector Virus vaccinia tỏi t hp cú th biu hin gen KN sm v sn xut protein KN gõy ỏp ng dch ton din Cỏc vacxin s dng virus vaccinia lm vector dn truyn nh: Vacxin Newcastle vi gen mó húa khỏng nguyờn F Vacxin cỳm vi gen mó húa khỏng nguyờn H v N Vacxin viờm gan B vi gen mó húa b mt HBsAg (Hepatitis B surface Antigen) 20 d Vacxin axit nucleic (vacxin ADN) õy l vacxin cú thnh phn chớnh l ADN ca plasmid tỏi t hp cha gen khỏng nguyờn Gen mó húa cho khỏng nguyờn ca vi sinh vt gõy bnh c to dũng ri gn vo plasmid a plasmid tỏi t hp vo c th bng cỏch vi tiờm hoc bng sỳng bn gen Vacxin thng c tiờm vo c th a gen trc tip vo mt s t bo c Khi vo t bo, ADN ca plasmid tỏi t hp c nhõn lờn, protein khỏng nguyờn c sn sinh trc tip bi t bo vt ch, chỳng s kớch thớch c th sn sinh dch Minh hoạ Chiến lợc thiết kế vacxin ADN cúm g ATG Ton phân đoạn 4: gen HA HA1 ATG pHA TGA; TAA HA2 gen NA TGA; TAA pNA ADN GEN KHáNG NGUYÊN (cần tái tổ hợp vào vectơ) pCUMGA (5,5kbp) Vacxin hệ 21 u im ca vacxin ADN: - Gen khỏng nguyờn biu th mnh, thi gian sn xut khỏng nguyờn lõu ú to dch mnh v lõu bn nờn khụng cn tiờm nhc li - Vacxin ADN rt an ton vỡ gen c ó c loi tr, hiu lc n nh, d bo qun, thun tin cho vic s dng, cú ý ngha kinh t - - To dch tt nhng c th b suy gim dch v c th suy nhc - Cú th thit k mt vacxin a giỏ trờn cựng mt plasmid gn nhiu gen mó húa hoc trn nhiu loi plasmid cú cha ADN mó húa cho cỏc loi protein khỏng nguyờn khỏc m hn hp vacxin ADN ny khụng b nh hng ln nhau, nh th s n gin húa c tin trỡnh tiờm chng Nhc im Thc nghim cho thy a vacxin ADN vo c th ng vt, s phõn b ADN vacxin t bo khụng t c mc ti a Mt khỏc, nu ADN vacxin hũa nhp vo h gen ca ng vt ch s gõy hu qu v di truyn cỏc th h tip theo hoc cú th t bin t bo gõy ung th hoc c ch s hot ng ca gen chng ung th, gõy bin i t bo dn n trng thỏi t dch Vacxin ADN thuc th h mi nht, c coi l loi vacxin cú trin vng ln Hin ti vacxin ny mi c nghiờn cu th nghim trờn ng vt nh: Vacxin ADN cha gen HBsAg Vacxin ADN cha gen khỏng nguyờn ch yu ca HIV Vacxin ADN cha gen H v N chng cỳm 22 e Vacxin xúa gen c L vacxin cha yu t gõy bnh c lm nhc c bng k thut gen ct b gen c Vớ d: to ging gc sn xut vacxin cỳm gia cm, hin ti B Y t v Vin Hn lõm Khoa hc cụng ngh Vit Nam nhp ngoi chng virus vacxin NIBRG-14 t Vin Tiờu chun v kim nghim sinh phm quc gia Vng quc Anh thụng qua WHO Chng NIBRG-14 c to bng k thut di truyn ngc thụng qua vic ghộp gen ca chng A/PR8/34 (H1N1) vi gen H5N1 ca chng A/Vietnam/1194/2004 (H5N1) Riờng gen H5 b loi 12 nucleotit mó húa axit amin thuc vựng c cho phộp chng virus ny cú th nuụi cy trờn phụi g Vacxin Aujeski cng l mt vacxin nhc c kiu ny Di truyền ngợc (reverse genetic technique) Vacxin hệ 23 b Vacxin cú ngun gc khỏng nguyờn khụng nhõn lờn õy l cỏc loi vacxin vụ hot sn xut bng k thut gen bao gm: c Vacxin cha khỏng nguyờn l protein sn xut bng k thut gen Loi vacxin ny c sn xut bng cỏch tỏch gen khỏng nguyờn t tỏc nhõn gõy bnh, ghộp vo h gen ca mt loi vi sinh vt lm vector dn truyn (vi khun, virus, nm men) Nuụi cy vi sinh vt tỏi t hp ny mụi trng thớch ng nh h thng bioreactor hoc thit b lờn men ln, lng protein s c sn xut vi s lng nhiu sau ú Chit tỏch protein khỏng nguyờn lm vacxin HBsAg polypeptide vaccine Kháng nguyên bề mặt HBsAg HBsAg thể ngời bệnh HBsAg tái tổ hợp 24 d Vacxin n c Dựng thc vt l bioreactor sn xut dc cht protein l mt xu th phỏt trin ca cụng ngh sinh hc Nhiu gen mó húa khỏng nguyờn virus c chuyn vo thc vt v ó biu hin vi hiu qu cao Vỡ vy, sn xut vacxin n c l hng nghiờn cu cú trin vng, vacxin n c cú hot tớnh tng t vacxin thụng thng, ch khỏc l vacxin ny c thc vt sn xut nhng phn n c nh lỏ, c, qu v ht N lc sn xut vacxin n c t thc vt u tiờn c ghi nhn vo nm 1990 bi nh khoa hc Curtiss v Cardineu biu hin thnh cụng protein khỏng nguyờn b mt A ca vi khun Streptococcus mutans cõy thuc lỏ Sau ú nhiu thnh cụng khỏc v vacxin thc vt ó c cụng b sn xut trờn nhiu loi cõy khỏc nh rau dip, c chua, khoai tõy, lỳa mỡ, u tng v ngụ Mt khỏc, gi l vacxin n c l cp n s chp nhn ca c th ng vt, tc l vacxin bn vng dch tiờu húa, sau n vo, vacxin khụng b phõn hy v cú kh nng kớch thớch ỏp ng dch mnh Ngi ta dựng thut ng Plant edible vaccine ch loi vacxin n c sn xut t thc vt bin i gen ny Nguyờn lý sn xut vacxin n c: Vacxin n c l loi vacxin tiu phn bao gm mt hoc nhiu chui polypeptit ca protein khỏng nguyờn vi sinh vt gõy bnh, ngi ta chn lc nhng gen mó húa cho cỏc thnh phn ny, a vo vector (plasmid hoc vi khun, vớ d Agrobacterium tumefaciens), da vo h thng di truyn thc vt khuych i gen v biu hin thnh cỏc protein khỏng nguyờn mong mun cỏc b phn n c ca thc vt 25 gen ngoi lai gi vo plasmid Chuyn np t bo To nờn cõy mi Ct-ni gen gen ngoi lai nhp vo h gen ch V trớ a gen ngoi lai vo (gen khỏng sõu bnh) Cõy mi mang tớnh trng mi Cỏc thnh tu nghiờn cu vacxin n c ó c cụng b gm: Ngun protein Protein/Peptit i tng thc vt ỏp ng dch Tỏc gi, nm bỏo cỏo E.coli Tiu phn B c t kộm chu nhit LT-B Thuc lỏ Khoai tõy Khỏng th dch th v khỏng th t bo theo ng ung v n Hagetal, 1995 Vibrio cholerac c t t Tiu phn B Khoai tõy Cho n Arakawa, 1998 Virus viờm gan B HBs-Ag Thuc lỏ Cha th nghim Mason etal, 1992 Virus di Glycoprotein C chua Cl.tetani Ngoi c t Lc lp thuc lỏ McGarvey etal 1995 Cho n Tregoing etal, 2003 26 e Vacxin peptit tng hp: L vacxin thnh phn ch cha nht polypeptit khỏng nguyờn (8 20 axit amin) Do ch cú cỏc epitop khỏng nguyờn nờn khụng cú kh nng kớch thớch sinh dch vỡ vy sau cỏc peptit c tng hp, ngi ta phi gn chỳng vo cỏc giỏ ú l cỏc ht polyme cú kh nng hp ph cao Vớ d: vacxin peptit phũng bnh l mm long múng, vic bo h t c bng cỏch tiờm cho ng vt mt hp cỏc chui peptit khỏng nguyờn gm 20 axit amin Vacxin peptit cú u im: Sn xut v kim soỏt cht lng n gin Khụng cú cỏc thnh phn khụng cn thit nh nucleic, protein ngoi lai ú ớt c Cú th thay i theo s bin i t nhiờn i vi nhng virus khụng n nh nh virus cỳm Cú tớnh kh thi thm trng hp khụng nuụi cy c virus n nh, giỏ thnh h Nhc im ca loi vacxin l: Sinh dch cú th kộm so vi cỏc vacxin vụ hot truyn thng Bt buc phi cú cht b tr Yờu cu tiờm nhc li 27 S túm tt phõn loi vacxin Vacxin sng Vacxin Vacxin vụ hot Vacxin sng nguyờn c Vacxin sng vụ c Vacxin nhc c húa Vacxin n c Vacxin di n v Vacxin nguyờn t Cha protein KN tng Tinh ch bng Tinh ch bng ngun hp bng k thut gen k thut gen VSV ch t nhiờn Xúa gen c Thớch ng nhit thp Nhy cm nhit Qua vt ch trung gian khụng cm th Tỏi t hp gen vacxin ADN Vacxin vector di truyn Vacxin ADN 1.6 Cht b tr (adjuvant) Khỏi nim: Cht b tr l nhng hp cht húa hc c thờm vo vacxin nhm lm tng kh nng kớch thớch dch v tng hiu lc ca vacxin Nm 1930, Ramon l ngi u tiờn nghiờn cu v cht b tr ễng ó chng minh bng thc nghim rng b sung cht b tr vo vacxin thỡ hiu lc ca vacxin cao hn * Cỏc cht b tr: Gm loi chớnh: 28 a Cht b tr vụ c: L nhng ht mn ca mui silicat hoc mui sunfat, mui phosphat hoc ht bt talk, than hot tớnh Vớ d nh: Alumin hydroxit Al(OH)3 Sunfat alumin kali AlK(SO4)2.12H2O Phosphat aluminum Al(PO4) Trong thỳ y, ngi ta hay dựng cht b tr l AlK(SO4)2.12H2O (gi l keo phốn) cỏc vacxin vi khun vụ hot b Cht b tr hu c: Dựng cỏc hp cht hu c trn vo vacxin s cú tớnh cht huyn phự trụng nh sa nờn gi l nh du Vớ d: Du khoỏng, saponin Du thc vt, m ng vt Freund (du khoỏng paraphin + BCG cht) Nhng Freund ớt dựng vỡ hay gõy mng m kộo di hoc viờm khp i vi nhng khỏng nguyờn phõn t lng nh ngi ta cú th gn vi protein mang ti tng hp hoc cht mang t nhng ht m nh gi l liposom c B tr l sinh vt: Thng dựng l xỏc ca mt s loi vi khun nh M tubercullosis hay Sal typhimurium Cng cú th dựng ni c t ca vi khun nh Lypopolysaccarit 29 * Tỏc dng ca cht b tr - Kớch thớch dch bn thõn cht b tr gõy phn ng viờm nh, kộo cỏc i thc bo v cỏc t bo cú thm quyn dch khỏc - Hp ph KN, khoanh vựng KN, lm chm quỏ trỡnh gii phúng KN ti v trớ tiờm, ú KN tn ti lõu c th, kộo di s trỡnh din KN - Kớch thớch s hot ng ca t bo trỡnh din KN quỏ trỡnh phõn tớch, trỡnh din khỏng nguyờn t hiu qu - Cht b tr sinh vt cú tỏc dng kớch thớch t bo dch Xỏc vi khun lao lm tng tng tỏc gia t bo lympho v i thc bo, ú lm tng ỏp ng dch t bo; LPS tỏc ng n t bo lympho B lm tng quỏ trỡnh phõn bo to plasmocyte ú tng hm lng khỏng th dch th c hiu 30 [...]... vo vacxin thỡ hiu lc ca vacxin cao hn * Cỏc cht b tr: Gm 3 loi chớnh: 28 a Cht b tr vụ c: L nhng ht mn ca mui silicat hoc mui sunfat, mui phosphat hoc ht bt talk, than hot tớnh Vớ d nh: Alumin hydroxit Al(OH)3 Sunfat alumin kali AlK(SO4 )2. 12H2O Phosphat aluminum Al(PO4) Trong thỳ y, ngi ta hay dựng cht b tr l AlK(SO4 )2. 12H2O (gi l keo phốn) trong cỏc vacxin vi khun vụ hot b Cht b tr hu c: Dựng... t Tiu phn B Khoai tõy Cho n Arakawa, 1998 Virus viờm gan B HBs-Ag Thuc lỏ Cha th nghim Mason etal, 19 92 Virus di Glycoprotein C chua Cl.tetani Ngoi c t Lc lp thuc lỏ McGarvey etal 1995 Cho n Tregoing etal, 20 03 26 e Vacxin peptit tng hp: L vacxin thnh phn ch cha duy nht polypeptit khỏng nguyờn (8 20 axit amin) Do ch cú cỏc epitop khỏng nguyờn nờn khụng cú kh nng kớch thớch sinh min dch vỡ vy sau... thụng qua vic ghộp 6 gen ca chng A/PR8/34 (H1N1) vi 2 gen H5N1 ca chng A/Vietnam/1194 /20 04 (H5N1) Riờng gen H5 b loi 12 nucleotit mó húa 4 axit amin thuc vựng c cho phộp chng virus ny cú th nuụi cy trờn phụi g Vacxin Aujeski cng l mt vacxin nhc c kiu ny Di truyền ngợc (reverse genetic technique) Vacxin thế hệ mới 23 b Vacxin cú ngun gc khỏng nguyờn khụng nhõn lờn õy l cỏc loi vacxin vụ hot sn xut... tip bi t bo vt ch, chỳng s kớch thớch c th sn sinh min dch Minh hoạ Chiến lợc thiết kế vacxin ADN cúm g 1 ATG Ton bộ phân đoạn 4: gen HA HA1 2 ATG pHA TGA; TAA HA2 gen NA TGA; TAA pNA ADN GEN KHáNG NGUYÊN (cần tái tổ hợp vào vectơ) pCUMGA (5,5kbp) Vacxin thế hệ mới 21 u im ca vacxin ADN: - Gen khỏng nguyờn biu th mnh, thi gian sn xut khỏng nguyờn lõu do ú to min dch mnh v lõu bn nờn khụng cn tiờm nhc... cỳm 22 e Vacxin xúa gen c L vacxin cha yu t gõy bnh c lm nhc c bng k thut gen ct b gen c Vớ d: to ra ging gc sn xut vacxin cỳm gia cm, hin ti B Y t v Vin Hn lõm Khoa hc cụng ngh Vit Nam nhp ngoi chng virus vacxin NIBRG-14 t Vin Tiờu chun v kim nghim sinh phm quc gia Vng quc Anh thụng qua WHO Chng NIBRG-14 c to ra bng k thut di truyn ngc thụng qua vic ghộp 6 gen ca chng A/PR8/34 (H1N1) vi 2 gen...1.5.1 Vacxin cht (inactivated vaccine) L loi kinh in nht, nguyờn tc l lm cht hay vụ hot yu t gõy bnh (virus hoc vi khun) nhng vn gi c tớnh mn cm v tớnh khỏng nguyờn Vacxin loi ny ch yu gõy min dch kiu dch th Phng phỏp lm cht yu t gõy bnh Cú 2 phng phỏp: húa hc v vt lý - Phng phỏp húa hc: Dựng cỏc húa cht nh formol git cht vi khun Vớ... vacxin bi lit vụ hot nhng khụng trit 1.5 .2 Vacxin sng L loi vacxin c sn xut nh chng virus hay vi khun cũn sng, hu nh khụng cú tớnh gõy bnh cho ng vt c tiờm phũng nhng cú kh nng gõy ỏp ng min dch mnh, chỳng nhõn lờn trong c th vt ch v tip tc to ra s kớch thớch ca khỏng nguyờn trong mt khong thi gian Vacxin sng bao gm: Vacxin nguyờn c; Vacxin vụ c; Vacxin nhc c 12 Vacxin nguyờn c: Dựng chng virus nguyờn... sinh vt Gim c bng nhit : VSV gõy bnh thng nhy cm vi yu t nhit , nu nuụi cy chỳng nhit khụng phự hp, vi sinh vt s gim c lc nhng vn gi c tớnh khỏng nguyờn Vớ d: Vacxin nhit thỏn: nuụi nhit 42 430C t 15- 20 ngy, vk mt kh nng hỡnh thnh giỏp mụ, c lc gim, s dng lm ging gc sn xut vacxin Vacxin Sabin dng ung chng bi lit: Chn cỏc chng virus bi lit ó t bin, cho nhõn lờn nhiu ln trong t bo thn kh, nuụi... trng thớch ng nh h thng bioreactor hoc thit b lờn men ln, lng protein s c sn xut vi s lng nhiu sau ú Chit tỏch protein khỏng nguyờn lm vacxin HBsAg polypeptide vaccine Kháng nguyên bề mặt HBsAg HBsAg trong cơ thể ngời bệnh HBsAg tái tổ hợp 24 d Vacxin n c Dựng thc vt l bioreactor sn xut dc cht protein l mt xu th phỏt trin ca cụng ngh sinh hc Nhiu gen mó húa khỏng nguyờn virus c chuyn vo thc vt v... mi lm 2 loi: a Vacxin cú khỏng nguyờn sng c nhõn lờn, bao gm: c Vacxin tỏi t hp cú vector dn truyn d Vacxin axit nucleic (vacxin ADN) e Vacxin xúa gen c b Vacxin cú ngun gc khỏng nguyờn khụng nhõn lờn, bao gm: c Vacxin cha khỏng nguyờn l protein sn xut bng k thut gen d Vacxin n c e Vacxin peptit tng hp a Vacxin cú KN sng c nhõn lờn, bao gm: c Vacxin tỏi t hp cú vector dn truyn Loi vacxin ny cha 2 thnh