Nghiên cứu lý thuyết về phương pháp tách chiết hợp chất terpenoid

hướng dẫn đọc toàn văn báo cáo KQNC ! ! Bạn muốn đọc nhanh thông tin cần thiết ? Hy đọc qua Mục lục bên tay trái bạn trước đọc báo cáo ( với Acrobat 4.0 trở lên, cho trỏ chuột vào đề mục để đọc toàn dòng bị che khuất ) ! Chọn đề mục muốn đọc nháy chuột vào ! ! Bạn muốn phóng to hay thu nhỏ trang báo cáo hình ? Chọn, nháy chuột vào kích th thưước có sẵn Menu , ! Mở View Menu, Chọn Zoom to ! Chọn tỷ lệ có sẵn hộp kích th thưước muốn,, Nhấn OK tự điền tỷ lệ theo ý muốn Chúc bạn hài lòng với thông tin đđưược cung cấp TRNG I HC QUNG BèNH KHOA KHOA HC T NHIấN NGUYN TH LOAN Nghiờn cu lý thuyt v phng phỏp tỏch chit hp cht Terpenoid" KHểA LUN TT NGHIP MC LC A M U Lý chn ti Mc tiờu nghiờn cu i tng, phm vi nghiờn cu Nhim v nghiờn cu 5 Phng phỏp nghiờn cu úng gúp ca khúa lun Cõu truc khúa lun B NI DUNG CHNG I TễNG QUAN V TERPENOID 1.1 Gii thiu v Terpenoid 1.2 Khỏi nim v phõn loi CHNG II MT S TERPENOID TRONG T NHIấN 11 2.1 Monoterpenoid 11 2.1.1 Monoterpenoid khụng vũng 11 2.1.2 Monoterpenoid n vũng 13 2.1.3 Monoterpenoid vũng 14 2.2 Sesquiterpenoid 15 2.2.1 Sesquiterpen khụng vũng 15 2.2.2 Sesquiterpen vũng 16 2.2.3 Sesquiterpen hai vũng 16 2.2.4 Sesquiterpen ba vũng 16 2.3 Diterpenoid 16 2.3.1 Phytol 17 2.3.2 Vitamin A 17 2.3.3 Colophan 17 2.4 Serterterpenoid 17 2.5 Triterpenoid 18 2.6 Tetraterpenoid 22 2.7 Polyterpenoid 23 CHNG III PHNG PHP TCH CHIT TERPENOID 23 3.1 Cỏc phng phỏp chit tỏch 23 3.1.1 Phng phỏp ho tan dung mụi hu c 24 3.1.2 Cỏc phng phỏp chng ct 24 3.1.2.1 Chng ct n gin 24 3.1.2.2 Chng ct phõn on 24 3.1.2.3 Chng ct di ỏp sut thp 25 3.1.2.4 Chng ct lụi cun hi nc 25 3.1.3 Phng phỏp chit 25 3.1.3.1 Gii thiu chung 25 3.1.3.2 Chit soxhlet 26 3.2 Tỏch chit monoterpenoid v sesquiterpenoid 27 a>Tỏch methol 27 b> Tỏch citral 28 c> Tỏch Eugenol 28 d>Tỏch cedrol 29 e> Tỏch methyl chavicol 29 3.3 Tỏch chit cỏc hp cht lacton terpenoid 30 3.3.1 Phõn lp cỏc sesquiterpen lacton 30 a> Chit bng CHCl3 30 b> Chit bng cn v nc núng 31 c> Chit bng cn: (EtOH hoc MeOH) 31 d> Chit bng dung dch kim núng 31 3.3.2 Tỏch chit cỏc monoterpen glycosid (iridoid) 32 3.4 Tỏch chit hp cht saponin triterpenoid 35 CHNG IV PHNG PHP TCH CHIT CAROTENOID 39 TRONG MNG QU GC 39 4.1 Gii thiu v Carotenoid 39 4.2 Quy trỡnh tỏch chit 40 4.2.1 Nguyờn liu 40 4.2.1.1 Chn nguyờn liu 40 4.2.1.2 X lớ nguyờn liu 41 4.2.2 Xỏc nh mt s tớnh cht vt lý 41 4.2.2.1 Xỏc nh m 41 4.2.2.2 Xỏc nh hm lng tro 41 4.2.3 Kho sỏt cỏc iu kin chit du gc 42 4.2.3.1 Kho sỏt dung mụi chit 42 4.2.3.2 Kho sỏt thi gian chit 42 4.2.3.3 Kho sỏt t l rn-lng 42 4.2.4 Tỏch chit du gc 42 4.3.6 Tỏch chit Carotenoid t du gc 45 C KT LUN 45 D TI LIU THAM KHO 47 A M U Lý chn ti Ngy khụng cú th ph nhn c tm quan trng ca cụng ngh sinh hc i vi nn kinh t quc dõn nc ta núi riờng v th gii núi chung Th k 21 c coi l th k ca ngnh cụng ngh sinh hc, c coi l thi im lch s m tau v tr mang tờn cụng ngh sinh hc ó ri b phúng bay n tm cao mi Vit Nam la nc nhit i cú khớ hu núng m, rõt thun li cho s phỏt trin ca thc vt va õy c coi l mt kho tng vụ giỏ v ngun hp chõt t nhiờn v ngun nguyờn liu phỏt trin ngnh cụng ngh sinh hc nc nh Trong nhng nm gn õy, cụng ngh tỏch chit cỏc hp chõt t thc vt ó khụng ngng phỏt trin va bc u t c nhng thnh qu ỏng k Trờn th gii t rõt lõu ngi ta ó ng dng nhng cụng ngh sn xuõt cỏc chõt cú hot tinh sinh hc, phc v cho nghiờn cu, sn xuõt v phc v li ớch ca ngi Nhng nghiờn cu v hp chõt cú hot tinh sinh hc thc vt phỏt trin t nhng nm 1950 va ó cú khong hn 30.000 hp chõt c chit xuõt t thc vt cú hot tớnh v rõt cú giỏ tr i vi cuc sng Nhng hp chõt nh cỏc alcaloid, terpenoid, phenolic c bit n nh la cỏc hp chõt th cõp Cỏc hp chõt thng ch c to mt s loi t bo nhõt nh nh cỏc t bo r t, biu mụ, hoa, lỏ Mc dự, húa hc tng hp hu c t nhiu thnh tu quan trng nhng nhiu hp chõt cú hot tinh sinh hc (thng gi l cỏc chõt th cõp) cũn khú tng hp hoc cú th tng hp c nhng chi phi rõt t Ngy nay, nhng hp chõt t nhiờn cú hot tớnh sinh hc c phõn lp t cõy c ó c ng dng rõt nhiu ngnh cụng nghip, nụng nghip va chm súc sc kho ngi Chung c dựng sn xuõt thuc cha bnh, thuc bo v thc vt, lm nguyờn liu cho ngnh cụng nghip thc phm v m phm v.v Hin nay, cựng vi s phỏt trin mnh m ca cỏc ngnh cụng nghip thỡ cỏc nguy c bnh tt ca ngi ngy cng b e da hn S xuõt hin ca nhiu cn bnh l cng nh s gia tng s lng ngi mc cỏc bnh nan y ang la mt mi quan tõm ln khụng ch ca nghanh y dc m l ca c xó hi Chớnh vỡ vy vic nghiờn cu tỡm cỏc phng thuc mi, cú hiu qu xuõt phỏt t thiờn nhiờn luụn l u tiờn ca nhiu nh khoa hc trờn th gii nghiờn cu tng hp cỏc loi thuc t cõy c thỡ trc tiờn l phi tỏch c cỏc thnh phn cú ớch t chỳng Vỡ vy, cỏc phng phỏp tỏch chit hp chõt thiờn nhiờn l mt võn ang thu hut s quan tõm ca nhng yờu thớch húa hc Xuõt phỏt t mc tiờu ú, tụi chn ti: Nghiờn cu lý thuyt v phng phỏp tỏch chit hp cht Terpenoid Mc tiờu nghiờn cu - Tỡm hiu v terpenoid, cõu to húa hc v phõn loi ca terpenoid - Cỏc phng phỏp tỏch chit mt s hp chõt terpenoid - a mt s quy trỡnh tỏch chit hot chõt cú bn chõt l terpenoid i tng, phm vi nghiờn cu - i tng nghiờn cu: C s lớ thuyt, phng phỏp tỏch chit hp chõt terpenoid - Phm vi nghiờn cu: Cỏc phng phỏp tỏch chit cỏc hp chõt terpenoid Nhim v nghiờn cu Trong khúa lun ny nhim v nghiờn cu c th: - Nghiờn cu ti liu, giỏo trỡnh liờn quan n phng phỏp tỏch chit cỏc hp chõt terpenoid - Nghiờn cu vớ d cho phng phỏp tỏch chit hp chõt terpenoid Phng phỏp nghiờn cu - Phng phỏp nghiờn cu lớ lun: c cỏc giỏo trỡnh, ti liu tham kho liờn quan n phng phỏp tỏch chit cỏc hp chõt terpenoid v vớ d v phng phỏp tỏch chit hp chõt terpenoid - Phng phỏp lõy ý kin chuyờn gia: Lõy ý kin ca giỏo viờn trc tip hng dn va cỏc giỏo viờn khỏc lnh vc ti hon thin ni dung v hỡnh thc ca khúa lun ny - Phng phỏp hc hi v tng kt: Hc hi kinh nghim ca cỏc anh, ch khúa trc, sau ú rut kinh nghim cho bn thõn v tng kt nhng kin thc ó tỡm hiu hon thnh khúa lun úng gúp ca khúa lun - Gii thiu v terpenoid gm khỏi nim, cõu trỳc, phõn loi, ng dng Giỳp chỳng ta nhn c tm quan trng ca cỏc hp chõt terpenoid i sng - a c phng phỏp tỏch chit cỏc hp chõt terpenoid, hp chõt cú tm quan trng i sng Cu truc khúa lun - Ngoai phn m u, kt lun, danh mc tai liu ni dung khúa lun gm chng: Chng I: Tng quan v Terpenoid Chng II: Mt s Terpenoid t nhiờn Chng III: Phng phỏp tỏch chit Chng IV: Phng phỏp tỏch chit Carotenoid mang qu gõc B NI DUNG CHNG I TễNG QUAN V TERPENOID 1.1 Gii thiu v Terpenoid Trong thiờn nhiờn, terpenoid ch yu cú cỏc loi thc vt Chỳng cú vai trũ quan trng i vi c ch bo v cng nh vic sinh sn ca nhiu loi cõy, vỡ phỏt mựi hng va dn d cụn trựng th phõn Cỏc terpenoid tham gia vo nhng quỏ trỡnh trao i chõt nh cỏc vitamin, cú tỏc dng nh cỏc tỏc nhõn iu tit va úng vai trũ bo v nh nhng chõt khỏng oxy húa Con ngi s dng terpenoid di dng cỏc dch chit t hoa, qu v cỏc b phn khỏc ca cõy, chung c bit n nh nhng tinh du, chõt thm ca thc vt Vao nm 1818 ngi ta ó tỡm c mt s hp chõt va xỏc nh c rng t l nguyờn t C:H tinh du l 5:8 Tip thep ú la mt s hp chõt hidrocacbon khụng no, khụng vũng hoc cú vũng ó c tỏch Chỳng cú cụng thc tng quỏt l (C5H8)n , (n2) va c t tờn l Terpen Phõn t ca cỏc hp chõt ny cú cỏc mch nhỏnh l cỏc nhúm CH3- xuõt hin mt cỏch cú chu kỡ mch cacbon Terpen v terpenoid gi chung la terpen, ụi cũn gi la isoprenoid nhõn mnh rng nú gm cỏc mt xớch cú khung cacbon ging vi isoprene Terpenoid l cỏc dn xuõt cha Oxi ca tecpen nh: ancol terpen, andehit v xeton terpen, este tecpen v c cacboxylic, peoxit terpen cng c tỏch t tinh du Chung thng cú mựi thm hõp dn hn la cỏc hydrocacbon terpen Terpenoid cú nhiu tinh du tho mc nh tinh du s, chanh, cam, thụng, cõy linh sam, cõy long nóo, bc h, hoa hng, qu S Cam Cõy thụng Cõy linh sam Bc h V cỏc dn xuõt ca chung (cỏc terpenoid) c ng dng nhiu trong: - Cụng nghip dc phm: Thuc cha bnh, bng dỏn cỏ nhõn, du xc + Squalen (C30H50) cú du gan cỏ + Retinol (vitamin A, C20H29OH) cú lũng trng, du gan cỏ - Cụng nghip thc phm: Bỏnh ko, du n, sa, nc gii khỏt - Caroten v licopen (C40H56) l sc t mau ca c rt v c chua chin - Cụng nghip m phm: nc hoa, kem ỏnh rng - Cụng nghip sn xuõt dc phm, du bụi trn, chõt tuyn ni, thuc tr sõu, vv Du bụi trn Dc phm * Cu trỳc ca terpenoid - Phõn t terpenoid cú cõu to mch h hoc mch vũng v cú cha cỏc liờn kt ụi C=C - Cõu trỳc ca terpenoid c to thnh isoprene kt hp vi theo kiu u ni vi uụi, hoc uụi ni vi uụi Phõn t terpenoid cú th cú vũng hoc nhiu vũng, cú th l vũng h hay vũng kớn v cỏc liờn kt phi tuõn theo qui tc isopren - Vớ d: Myrcene Ocimene -Selinene - Pinene 1.2 Khỏi nim v phõn loi Khỏi nim - Terpen l loi hp chõt hu c ma cõu trỳc húa hc da trờn c s cỏc phõn t isopren liờn kt li vi nhau, cú cụng thc tng quỏt l (C5H8)n + Iridoid cú aglycol 8C: trng hp khỏ him Vớ d: Unedosid HO O O O--D-glucoz + Iridoid cú aglycol trờn 10C: COOCH3 COOCH3 O O O O O CH3 O CH3 Plumericin Fulvoplumierin + Secoiridoid: O COOCH3 O O O OHC O O O CH2 O-glucoz CH2 CH2 O-glucoz Secologanin (Gp h Caprifoliaceae) Swerosid (Gp h Cornaceae, Dipsaceae, Loganiaceae) O-glucoz Gentiopicrim (Gp long m, Gentiana lutea) + Dimeric iridoid: cú trng hp la bis iridoid, iridoid-secoiridoid, bissecoiridoid + Cỏc iridoid v secoiridoid phc tp: gm cỏc iridoid hoc secoiridoid liờn kt vi cỏc n v terpenoid khỏc, liờn kt vi lignan 33 d> Tớnh cht - nh tớnh - sc ký - quang ph - Tớnh cht: + Iridoid glycosid thng d tan nc, cn loóng Cn 50% hay dựng chit xuõt Butanol cng la dung mụi chit hn ch bt chõt + Di tỏc dng ca enzym cú sn cõy, iridoid glycosid b bin i cỏc sn phm mau en ú ta hiu vỡ sinh a, huyn sõm quỏ trỡnh ch bin thỡ cú mau en Mt s trỏi cõy, lỏ cng chuyn mau en rng vi d trỏi thụng thiờn, lỏ m lụng + Ngoai enzym, iridoid glycosid cng d b thy phõn bng axit + Di tỏc dng ca kim NaOH, Ba(OH)2 thỡ cỏc nhúm este b ct - nh tớnh: mun phỏt hin iridoid glycosid, ngi ta thng dựng thuc th Trim-Hill: 10ml axit axetic + 1ml CuSO4 0,2% + 0,5ml HCl Dc liu ti 2gam ct nh, cho vao ng nghim, thờm 5ml nc, thnh thong lc Sau vai gi gn lõy 0,1ml dch chit, thờm 1ml thuc th, un núng s xuõt hin mau xanh dng hoc tim Cng cú mt s chõt iridoid õm tinh vi thuc th trờn - Sc ký: cú th tin hanh sc ký giõy hoc sc ký lp mng Dch chõm sc ký: dc liu c un sụi phut vi metanol, lc, dch lc chõm sc ký Cỏc thuc th phỏt hin: + T1 Antimoin triclorat: SbCl3 (27g) hũa tan 100ml etanol 40-500C Thờm 5-10g Na2SO4 khan, lc Gn lõy lp trờn dựng Sõy phut 1000C + T2 Anisandehit-axit sunfuric: 1ml H2SO4 m c thờm vao dung dch mi ch gm 0,5ml anisandehit 50ml axit axetic Quan sỏt sau phun 0,5-1 gi + T3 5-10% H2SO4 etanol: sõy phut 1000C + T4 Benzidin-axit tricloaxetic: benzidin (0,5g) hũa tan 10ml axit axetic ri trn vi 10ml dung dch axit tricloaxetic 40% nc va 80ml etanol Sõy phut 1000C + T5 p-dimetylaminobenzandehit1% etanol cú cha 1%HCl Sõy phut 1000C - Mt s h dung mụi cú th dựng cho sc ký: + Sc ký giõy (Schleicher v Schull 2043b): 34 S1= n-butanol axit axetic nc (4:1:5) S2= isopentanol axit axetic nc n-hexan (3:3:3:1) S3= isopropanol nc (6:4) S4= n-butanol bóo hũa nc S5= metanol nc (1:1) + Sc ký lp mng Slicagel G: S6= etanol chloroform (1:1) S7= etanol chloroform (3:7) S8= etanol etylaxetat (1:1) - Quang ph: phn ln cỏc hp chõt iridoid cú nhúm mang mu OC=CCOOnờn th hin bng hõp th vựng t ngoi 233-238 nm vi log khong 3,8 e> Chit xut: cú th chit xuõt iridoid bng cn hoc nc núng Dc liu ti xay vi it nc va chit núng bng nc (hoc cn) Dc liu khụ xay bt va chit hi lu vi cn Dch chit cõt thu hi dung mụi, cao thu c hũa tan vao it nc, lng, lc b cn Dch lc loi bng cỏch lc vai ln vi benzen hoc EtOAc f> Tỏc dng v cụng dng: - Mt s dn chõt iridoid cú tỏc dng khỏng khun nh plumericin, aucubin, axit genipic; mt s khỏc cú tỏc dng nhun nh geniposid, verbenalin, asperulosid; thụng tiu nh catalposid; lam h ng huyt nh catalpol R cõy Valerian Valeriana offcinalis L la mt dc liu rõt thụng dng chõu u cú tỏc dng an thn la cỏc phn iridoid Long m tho Gentiana lutea L cú tỏc dng b ng Nhng dc liu dựng y hc c truyn ca ta nh lỏ m lụng, lỏ kim ngõn, c roi nga cha l, mn nht u cú phn cỏc iridoid 3.4 Tỏch chit hp cht saponin triterpenoid - Saponin la mt nhúm hp chõt thiờn nhiờn thng gp thc vt Saponin cú mt s tinh chõt c trng nh sau: Lam gim sc cng b mt, to bt Lam v hng cu c vi cỏ Kich ng niờm mc To phc vi cholesterol hoc dn chõt 3--hydroxysteroid a s cú v ng 35 Tan nc, cn, rõt it tan aceton, ether, hexan Khú b thm tich Phn genin d kt tinh - Chit xut saponin: + Thụng thng hp chõt saponin cú tinh phõn cc mnh nờn dung mụi dựng chit saponin la cỏc dung mụi phõn cc nh nc, cn, metanol + Nc la dung mụi hũa tan rõt tt saponin nhng cú nhc im: ngoai saponin nc cũn hũa tan nhiu chõt cõy nh chõt mau, nha, tinh bt, tanin, ng, mui vụ cDo ú s gõy khú khn tong quỏ trỡnh tinh ch Ngoai mụi trng nc s cú mt s saponin phõn hy men (vi d: saponin ca Hedera helix, Gypsophyla paniculata) + Dung mụi thng dựng chit saponin la cn t 40-90% Hu ht cỏc saponin u tan tt cn va mụi trng khng ch c s hot ng ca cỏc men Tuy nhiờn, dựng cn lam dung mụi chit cn lu ý mt s trng hp ca cỏc saponin axit phõn t cú cha nhúm cacboxyl, di tỏc dng ca cn s chuyn dn xuõt ankyl este + Saponin trung tớnh v axit: + Saponin kim: 36 - Tinh ch: + Tinh ch bng than hot tinh: dung dch cn saponin c un vi than hot tinh, sau ú lc lõy dch lc Bng phng phỏp cú th loi c mt s chõt mau, nha + Tinh ch bng ct trao i ion: cho hn hp saponin thụ qua ct trao i ion s loi c cỏc chõt vụ c + Tinh ch bng phng phỏp to bt: dựng lung tr sc vao dung dch nc ca saponin thụ, sau ú tỏch riờng lp bt bn trờn mt dung dch, lp bt bn s cha mt lng ln saponin + Da vo hũa tan: da vao hũa tan khỏc gia cỏc saponin va chõt i kốm tỏch chung Vi d, cỏc chõt ng t do, mui vụ c tan nhiu nc, saponin tan nhiu n-butanol Da vao tinh chõt hũa tan saponin thụ vao nc va lc dch nc vi n-butanol, lp butanol s cha saponin + Phng phỏp kt ta: tinh ch hn hp saponin thụ, ngi ta dựng phng phỏp hũa tan saponin thụ metanol, sau ú ta vi dietyl ete theo t l 1:10 Lp li quỏ trỡnh nhiu ln thu c saponin tinh khit + To phc vi cholesterol: cho saponin tỏc dng vi cholesterol etanol núng (50-600C) s to phc dng ta Lc lõy ta, phỏ phc bng cỏch hũa tan ta pyridin, thu hi dch pyridin n cn Hũa cn metanol, sau ú ta dch metanol bng dietyl ete s thu c hn hp saponin tinh khit + Phng phỏp to dn xut: tinh ch saponin ngi ta cú th to cỏc dn xuõt ca hp chõt (vi d: metyl húa, etyl húa) sau ú li dng tinh chõt c trng ca cỏc dn xuõt tỏch chung hn hp Metyl húa Axetyl húa 5mg saponin 5mg saponin 37 + 5ml MeOH + 2ml diazometan + 5ml pyridin khan + 0.2ml anhydric axetic Dch phn ng Dch phn ng yờn 39h t0 phũng +10ml nc ỏ lnh Thu hi yờn 1h t0 phũng Thu hi Cn Cn Kt tinh li Ra ta bng nc cho ht axit Kt tinh li bng CHCl3-MeOH (1:1) Dn xuõt metyl saponin Dn xuõt axetyl saponin + Phng phỏp kt tinh li: Thụng thng cỏc hp chõt saponin cú chui ng dai nờn rõt khú kt tinh Tuy nhiờn cng cú mt s it saponin cú kh nng kt tinh c, c bit la cỏc este sapogenin, trng hp cú th dựng phng phỏp kt tinh + Phng phỏp sc ký ct: - õy la phng phỏp hu hiu tinh ch hn hp saponin Phng phỏp sc ký ct khụng nhng thich hp tinh ch ma cũn hiu qu vic tỏch cỏc n chõt, c bit nú c s dng nhiu tỏch saponin triterpen - Mt s chõt nhi ct va dung mụi thng dựng tinh ch va tỏch saponin: Chõt nhi ct: silicagel, axit alumin, xenluloz, polyamit Dung mụi ct: tựy theo bn chõt ca saponin chn dung mụi phõn cc hay kộm phõn cc Mt s hn hp dung mụi thng dựng la: n-butanol bóo hũa nc n-butanol EtOH NH4OH 20% (7:2:5) n-butanol EtOH H2O (10:2:5) isopropanol H2O axit formic (70:24:6) n-butanol pyrydin H2O (3:1:3) CHCl3 MeOH H2O (61:32:7) EtOAc MeOH H2O (100:17:13) Ngoi cỏc ct da trờn nguyờn tc hõp ph, sau ngi ta cũn dựng cỏc ct da trờn nguyờn tc lc gel tỏch chõt 38 CHNG IV PHNG PHP TCH CHIT CAROTENOID TRONG MNG QU GC 4.1 Gii thiu v Carotenoid Trong qu Gõc cú cha cỏc chõt chng oxy húa vi ham lng cao, cao gõp hang chc ln ca chua Mt cỏc phn húa hc chinh cú qu Gõc la Carotenoid, quan trng hn c Beta-caroten chim mt lng ln cú vai trũ quan trng vic chuyn húa vitamin A, cú tỏc dng lam sỏng mt, chng li mt, phũng nga cỏc bnh tim mch, ngn chn cỏc bnh ung th, giup c th tng trng Vi nhng li ich ú, vic nghiờn cu chit tỏch Caroten la vic cú ý ngha va cn thit Cõy gõc Qu gõc b ụi Hoa gõc 39 Hỡnh 4.1: Mt s hỡnh nh cỏc b phn ca cõy gõc Carotenoid Hu ht cỏc Carotenoid thiờn nhiờn u l tetraterpenoid bao gm n v isopren Chỳng l nhng chõt mau vang, da cam, , phõn b rng rói gii thc vt va ng vt Carotenoid khỏ quen thuc vi chung ta la -caroten hay cũn gi l tin chõt ca vitamin A.Trong c th ng vt, Carotenoid c ho tan m hoc hoỏ hp protein pha nc Trong cỏc thc vt, Carotenoid c tỡm thõy cỏc lỏ cựng vi clorophyl Chỳng l nhng chõt mu chớnh ca mt s hoa qu mu vng, da cam, va -caroten ng dng ca Carotenoid Caroten l hp chõt cú nhiu cỏc loi rau qu nh ca rt, u , gõc va nhiu ng vt nh cỏ, tht, L hp chõt cú nhiu vai trũ i vi s phỏt trin ca ngi bi nú cú cha Lycopen, ,, - Caroten Carotenoid cú nhng ng dng: Cú tỏc dng tng sc khỏng cho c th ci thin trớ nh, tỏc ng n b nóo ng oxy hoỏ, cú tỏc dng chng cỏc bnh tim mch nhng ngi khụng hỳt thuc Gii c, bo v gan, c bit l chng ung th gan, ung th vu, ung th c t cung cú nguy c cao ph n tui 30- 45 Lycopen cú tỏc dng cc k quan trng i vi sc p Giỳp quỏ trỡnh chuyn hoỏ chõt t bao lam p da, túc, tng sc khỏng cho da, chng lóo hoỏ da 4.2 Quy trỡnh tỏch chit 4.2.1 Nguyờn liu 4.2.1.1 Chn nguyờn liu - Gõc c thu nhn l loi Gõc np, trỏi to, nhiu ht, it gai nhng gai to, bờn cm va mang bao bc ht mau ti rõt m 40 Hỡnh 4.6 Qu gc b ụi 4.2.1.2 X lớ nguyờn liu - Ch ụi qu gõc, tỏch ht, cm va mang phi khụ di nng n khụng cũn dớnh tay Tỏch b ht, thu cm va mang thỏi nh, sõy khụ n lng khụng i, tip theo cho vo mỏy xay sinh t, xay nh Kớch thc ht phi tng i ng u khụng nh hng n quỏ trỡnh tip xỳc ca dung mụi vi nguyờn liu, ng thi kớch thuc ht cng khụng quỏ nh, mn vỡ nh vy s gõy khú khn chit Soxhlet 4.2.2 Xỏc nh mt s tớnh cht vt lý 4.2.2.1 Xỏc nh m - xỏc nh m ca mang ht gõc, tin hnh thớ nghim nh sau: Chun b chộn s cú ký hiu sn, sch v sõy t sõy n nhit > 1000oC Sau sõy xong, lõy chộn v cho vo bỡnh hỳt m cho n t nhit phũng ri cõn lng cỏc chộn s n khụng i m1 Cho vo mi chộn s m2 g mang gõc Tin hnh sõy t sõy 500oC, c sau gi li lõy cho vo bỡnh hỳt m n bng nhit phũng, ri em cõn, c nh vy n khi lng m3 ca mu v chộn khụng i m ca mi mu tớnh theo cụng thc sau: %W [(m1 m ) m3 ] x 100 m2 Trong ú: m1: Khi lng chộn s (g) m2: Khi lng mang gõc (g) m3: Khi lng chộn v mu sau sõy (g) 4.2.2.2 Xỏc nh hm lng tro - T mu va c xỏc nh m thớ nghim trờn, em i tro húa 6000oC 6h cho n tro cú mu trng Lõy mu lm ngui mu bỡnh hỳt m v cõn li mu va xỏc nh ham lng tro theo cụng thc: 41 %Tro (m1 m ) x 100 mo Trong ú : m1: Khi lng chộn v mu sau xỏc nh m (g) m2: Khi lng chộn s v mu sau tro húa (g) m0: Khi lng mang gõc (g) 4.2.3 Kho sỏt cỏc iu kin chit du gc 4.2.3.1 Kho sỏt dung mụi chit - la chn dung mụi chit thớch hp, tin hnh ngõm bt gõc xay mn cỏc dung mụi cú phõn cc khỏc cựng iu kin nhit v thi gian Dựng phng phỏp trng lng xỏc nh tng lng cỏc chõt hũa tan dung mụi Dung mụi nao hũa tan c nhiu lng chõt nhõt thỡ s c chn 4.2.3.2 Kho sỏt thi gian chit - Cõn chớnh xỏc 10g bt gõc cho mi ln chit Tin hnh chit soxlet vi dung mụi cỏc khong thi gian ln lt l 8h, 10h, 12h, 14h, 16h Thu dch chit ri em o UV-VIS, da trờn mt quang chn thi gian chit ti u 4.2.3.3 Kho sỏt t l rn-lng - Tin hnh chit soxlet vi dung mụi v thi gian c chn vi s thay i th tớch theo t l 1/10, 1/15, 1/20, 1/25 Thu dch chit ri em o UV-VIS, th tớch dung mụi chit ti u la th tớch nh nhõt m bo cho lng chõt chit c l ln nhõt 4.2.4 Tỏch chit du gc Tin hnh: Cõn lng mang gõc ó x lớ cho vo giõy lc gúi k va dựng ch buc bờn ngoai gúi khụng b bung ra, khụng gúi cht quỏ s lm cho dung mụi khú tip xỳc vi cỏc ht bờn trong, sau ú cho gúi mu vo ng chit Soxhlet Chit soxhlet bt nguyờn liu vi dung mụi, thi gian, t l ó la chn 42 S tỏch chit Thu nguyờn liu Phi, sõy, xay m, ham lng tro Nguyờn liu ó x lý Ham lng kim loi Kho sỏt dung mụi, t l, thi gian chit iu kin chit tỏch ti u Chit soxlet Du gõc thụ ui dung mụi Du gõc 43 Chit tỏch Carotenoid 44 4.3.6 Tỏch chit Carotenoid t du gc - T du gõc ta tin hnh tỏch chit - Caroten nh sau: Trong bỡnh cu dung tớch 250ml cú ng lnh hi lu, cõn 5g du gõc ri thờm 100ml etanol v 4ml NaOH bo hũa un cỏch thu sụi 30 phut, thu c du x phũng húa Thờm 10ml nc cõt vo du x phũng hoỏ cho vo bỡnh gn (250ml) chit bng 100ml ete (chia lm ln: 40 - 30 - 30ml) Sau gn ete ra, ete bng ln ì 20ml nc cõt Gn ete lm khan bng Na2SO4 khan Cụ chõn khụng thu hi ete Hũa tan cn cũn li 20ml ete du v 20ml metanol 95% sau lc u tỏch riờng thnh hai lp, gn lp dung dch metanol ra, dung dch ete du cũn li Ra loi metanol cũn dớnh bng ln ì 20 ml nc Gn dung dch ete du lam khan nc bng Na2SO4 khan Cụ quay chõn khụng thu hi ete du ha, sau ú hũa tan Caroten ete du mi thnh dung dch m c em dung dch o ph hõp th phõn t UV-VIS Quy trỡnh tỏch chit Carotenoid t du gc Du gõc Etanol + NaOH un sụi H2O Du x phũng húa Dch chit x phũng Chit bng ete Lm khan bng Na2SO4 Dch chit x phng ete Ete du + metanol DD ete du Ra metanol bng nc + Na2SO4 Chy ph UV - VIS 45 Caroten ete du C KT LUN Sau mt thi gian tỡm tũi va nghiờn cu em ó thu c mt s kt qu sau: - Khỏi quỏt nhng hiu bit v terpenoid: khỏi nim, phõn loi, cõu truc va nhng ng dng - a mt s terpenoid ph bin thiờn nhiờn i kốm vi dc liu cha nú - Trỡnh bay phng phỏp tỏch chit cỏc loi terpenoid ph bin va cú nhiu ng dng - a c phng phỏp va quy trỡnh tỏch chit Carotenoid mang qu gõc Do iu kin v thi gian cng nh nng lc nghiờn cu ca bn thõn cũn nhiu hn ch nờn khúa lun ca em chc chn khụng th trỏnh nhng thiu sút Vỡ vy, bn thõn em rõt mong nhn c nhng ý kin úng gúp ca cỏc thy cụ va cỏc bn tai c hoan thin hn Em xin chõn thnh cỏm n! 46 D TI LIU THAM KHO Trnh ỡnh Chinh, Nguyn Th Bich Tuyt, Giỏo trỡnh hp cht t nhiờn, Trng i hc S phm, i hc Hu, 2008 Ngụ Vn Thu, Bi ging Dc liu, Trng i hc Dc Ha Ni Phm Thanh K, Dc liu hc - II, NXB Y hc, 2007 Nguyn Khang, Phm Vn Khin, Khai thỏc tinh du lm thuc v xut khu, NXB Y hc Ha Ni, 2001 Phm Trng Th Th, Giỏo trỡnh húa hc cỏc hp cht t nhiờn, Trng i hc S phm Quy Nhn, 1997 Nguyn Kim Phi Phng, Phng phỏp cụ lp hp cht hu c, NXB i hc Quc gia ph H Chi Minh, 2007 47 [...]... khác 2.7 Polyterpenoid - Tiêu biểu là cao su thiên nhiên (chuỗi isopren cis) và Guttapercha (chuỗi isopren trans) Cao su thiên nhiên Gutapecha (các nối đôi C=C có cấu hình Z) (các nối đôi C=C có cấu hình E) CHƯƠNG III PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT TERPENOID 3.1 Các phương pháp chiết tách 23 Các hợp chất thiên nhiên khi mới được tách thường ở dưới dạng không tinh khiết, vì vậy muốn nghiên cứu, phân tích... bệnh * Dựa vào số đơn vị isopren người ta chia terpenoid thành các loại sau: N Công thức phân tử 1 C5 H8 Hemiterpenoid 2 C10 H16 Monoterpenoid 3 C15 H24 Serterterpenoid 4 C20 H32 Diterpenoid 5 C25 H8 Sesquiterpenoid 6 C30H45 Triterpenoid 8 C5 H8 Tetraterpenoid >8 (C5H8)n Politerpenoid 10 Loại terpenoid CHƯƠNG II MỘT SỐ TERPENOID TRONG TỰ NHIÊN 2.1 Monoterpenoid - Monoterpen là những chất lỏng dễ bay... lá, rau quả hoặc mẫu đất như ví dụ trên 3.2 Tách chiết monoterpenoid và sesquiterpenoid - Hầu hết các monoterpenoid và sesquiterpenoid có nhiều trong tinh dầu của các loại thực vật - Phương pháp cổ điển để tách các thành phần có trong tinh dầu là tiến hành cất phân đoạn ở áp suất giảm hoặc áp suất thường Cột cất phân đoạn phải có số lượng đĩa tách nhiều Các hydrocacbon béo và monoterpen... hổn hợp cần chiết tách (thường gói trong giấy lọc), nó sẽ hoà tan chất rắn cần tinh chế và nhờ một ống xiphông, dung dịch chảy xuống bình cầu bên dưới, dung môi nguyên chất lại tiếp tục được cất lên Phương pháp này tiết kiệm được dung môi và hiệu quả tương đối cao 3.1.3.2 Chiết soxhlet  Nguyên tắc : Chiết soxhlet là một kiểu chiết liên tục đặc biệt thực hiện nhờ một trang bị riêng của nó Kiểu chiết. .. để chiết tách chất hữu cơ nằm trong pha rắn hay bột hay mảnh nhỏ, hay các vật liệu khô (lá cây), vì thế nên nó là hệ chiết dị thể Ví dụ: Chiết soxhlet thường lấy một số hoá chất bảo vệ thực vật từ mẫu rau quả: Lấy 10g mẫu đã được nghiền nhỏ và trộn đều vào cốc chiết của hệ chiết Thêm 25- 30 g Na2SO4 khan, 30 ml dung môi chiết n- hexan có 20% Cl2H2 Sau đó tiến hành chiết trong 180 phút Kỹ thuật chiết. .. benzen, cloroform, etyl axetat, n- hexan, ete dầu hoả… hoặc đôi khi là hỗn hợp giữa chúng Khi cần tách hai hay nhiều chất chứa trong hỗn hợp với những lượng tương đương nhau, người ta dùng phương pháp kết tinh phân đoạn 3.1.2 Các phương pháp chưng cất 3.1.2.1 Chưng cất đơn giản Trong trường hợp cần tinh chế một chất lỏng, tách nó ra khỏi tạp chất rắn không bay hơi, ta chỉ cần tiến hành chưng cất... dầu húng quế Đức, Pháp, Nhật, có trong tinh dầu thông, tinh dầu thì là, tinh dầu nguyệt quế - Công dụng: dùng để pha chế tinh dầu tổng hợp, điều chế estragon 29 - Có thể phân lập methyl chavicol từ tinh dầu bằng cách cất phân đoạn (t0s của methyl chavicol là 213-2150C) 3.3 Tách chiết các hợp chất lacton terpenoid 3.3.1 Phân lập các sesquiterpen lacton - Trong các terpenoid các hợp chất có vòng lacton... sang bình ngưng (về số mol) sẽ bằng tỷ lệ áp suất hơi riêng phần của chúng ở nhiệt độ sôi của hổn hợp Nhờ vậy ta có thể tính toán được lượng nước cần thiết để lôi cuốn hết chất cần tinh chế Sau khi đã dùng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước, thường ta phải chiết tách các chất cần tinh chế ra khỏi nước bằng một dung môi thích hợp, rồi lại tiến hành chưng cất phân đoạn để tách dung môi Cuối... chế 3.1.3 Phương pháp chiết 3.1.3.1 Giới thiệu chung Chiết là dùng dung môi thích hợp có khả năng hoà tan chất đang cần tách và tinh chế để tách chất đó ra khỏi môi trường rắn hoặc lỏng khác Thường người ta dùng một dung môi sôi thấp và ít tan trong nước (vì các chất hữu cơ cần tinh chế thường ít tan 25 trong nước), chất đó sẽ chuyển phần lớn lên dung môi và ta có thể dùng phểu để tách riêng... Triterpenoid - Các triterpenoid thường gặp dưới dạng este, glycozit hoặc ở trạng thái tự do + Triterpen điển hình là Squalen: C30 H35 - Các triterpenoid đáng chú ý là khi chúng ở dưới dạng glycosid (saponin triterpenoid) 18 - Saponin triterpenoid: Phần genin của loại này có 30 cacbon cấu tạo bởi 6 nhóm Hemiterpen Người ta chia làm 2 loại: + Saponin triterpenoid pentacylic + Saponin triterpenoid