Thực tập sinh hóa Bài 4_Công nghệ sinh học

Viện CNSH_ĐHCT Phúc trình thực tập Sinh hóa Bài 4 Thí nghiệm I: Khảo sát tinh bột a. Cho màu với iod b. Không có tính khử c. Phản ứng thủy phân Thí nghiệm II: Định tính monosaccharide (glucose) và tinh bột. 1. Phản ứng Molish 2. Phản ứng với thuốc thử Fehling Thí nghiệm III: Định lượng glucose

Mã HP: CS115 Nhóm: 1e Phúc trình thực tập Môn học: TT SINH HÓA CNSH Mã HP: CS115 Nhóm: Thành viên nhóm: Thí nghiệm I: Khảo sát tinh bột a Cho màu với iod: Nhận xét: - Khi cho giọt iod vào 5ml dung dịch hồ tinh bột từ màu trắng đục hồ tinh bột chuyển sang màu xanh tím - Sau đem đun cách thủy khoảng phút màu xanh tím, để nguội có lại màu xanh tím không giống ban đầu Giải thích: Nguyên nhân dạng amylose tinh bột tạo cấu trạng hình xoắn ốc nên phân tử I2 bị giữ lại ống tạo phức chất màu xanh tím, đun cách thủy cấu trạng xoắn ốc bị phá hủy nên màu, để nguội tái tạo lại dạng ống nên I2 lại bị nhốt ống có lại màu xanh tím phần cấu trúc bị biến dạng nên lượng I2 len lỏi vào mà không giống y ban đầu b Không có tính khử: Nhận xét: - Khi cho thêm 2ml dung dịch Fehling (A+B tỉ lệ 1:1) vào 2ml hồ tinh bột tượng xảy - Sau đem đun cách thủy phút từ màu xanh Fehling chuyển sang màu đỏ gạch Giải thích: Dù hồ tinh bột không cho phản ứng với Fehling (A+B tỉ lệ 1:1) đun cách thủy hồ tinh bột thủy phân cho glucose mà glucose lại phản ứng đặc trưng với Fehling CH2OH(CHOH)4CHO + 2Cu(OH)2 + NaOH → CH2OH(CHOH)4COONa + 2Cu2O↓ + 3H2O (màu xanh) (đỏ gạch) c Phản ứng thủy phân: Nhận xét: Mỗi lần nhỏ giọt dung dịch thủy phân lên giọt iod màu vàng iod chuyển sang màu xanh tím chậm chuyển màu sau 31 phút không làm iod chuyển màu Giải thích: Do hồ tinh bột có phản ứng đặc trưng với iod đem đun cách thủy hồ tinh bột bị thủy phân phải qua trải qua chặng: dextrin, erythrodextrin, achrodexxtrin, maltose tạo sản phẩm cuối glucose không phản ứng màu đặc trưng với iod Thí nghiệm II: Định tính monosaccharide (glucose) tinh bột Phản ứng Molish: Bảng Hồ tinh bột thủy phân Dung dịch 2ml 2ml 2ml Thuốc thử Molish giọt giọt giọt H2SO4 đậm đặc Vài giọt Vài giọt Vài giọt Sủi bọt khí nhanh, Sủi bọt khí chậm, Sủi bọt khí Hiện tượng xuất phức màu xuất phức màu nhanh, xuất tím tím phức màu tím Nhận xét: Tốc độ phản ứng tăng từ hồ tinh bột 1% < Glucose 1% < hồ tinh bột thủy phân Ống nghiệm Hóa chất Glucose 1% Hồ tinh bột 1% Giải thích: Các loại glucid khác cho phức màu tím với α-Naphthol 2% dung dịch H2SO4 đậm đặc Do hồ tinh bột 1% có vòng cạnh bền nên môi trường H2SO4 đậm đặc khó bị vỡ vòng nên cho phản ứng màu chậm Còn glucose 1% có vòng cạnh bền nồng độ thấp nên cho phản ứng màu chậm hồ tinh bột thủy phân Hình: Phản ứng tạo phức màu tím với α-Naphthol dung dịch H2SO4 đậm đặc Hồ tinh bột thủy phân thủy phân tạo nhiều glucose Do glucose có vòng cạnh môi trường acid sunfuric đậm đặc dễ bị vỡ vòng sau tạo furral, sau furral kết hợp với α-Naphthol cho phức màu tím Ý nghĩa: - Phân biệt glucose với chất khác - Phân biệt loại glucid khác Phản ứng với thuốc thử Fehling Bảng Ống nghiệm Hóa chất Glucose 1% 2ml Tinh bột thủy phân (đã trung hòa) 2ml Fehling (A: B =1: 1) 3ml 3ml Kết tủa xanh Kết tủa đỏ gạch Kết tủa xanh Kết tủa đỏ gạch Hiện tượng + Trước đun cách thủy + Sau đun cách thủy Nhận xét: Khi cho thuốc thử Fehling vào dung dịch glucose 1% tinh bột thủy phân (đã bão hòa) xuất kết tủa màu xanh Đem đun cách thủy hai dung dịch chuyển sang kết tủa đỏ gạch Giải thích: Hình: Phản ứng tạo kết tủa đỏ gạch với thuốc thử Fehling Thuốc thử CuSO4 với dung dịch kiềm đậm đặc tartrate kép natri kali Trong môi trường kiềm đun nóng, monosaccharide dạng enediols (chất khử) không bền, dễ dàng khử kim loại nặng Cu2+, Ag+, Hg+ Monosaccharide khử Cu2+ dung dịch Fehling thành Cu2+ tạo kết tủa đỏ gạch Các monosaccharide có nhóm - OH glycoside tự có tính khử Cơ chế: Cu2+ OH+ to Monosaccharide + Base mạnh → enediols → Cu → CuOH → Cu2O↓ (đỏ gạch) Thí nghiệm III: Định lượng glucose Thí nghiệm Sau cho 15ml ZnSO4.KI vào Sau cho 10ml CH3COOH vào Định phân Na2S2O3 N/50 - Dung dịch sau đun sôi để nguội có - Kết tủa tan dần  Dung dịch nhạt Nhận màu vàng nhạt  Cho ZnSo4.KI vào màu dần chuyển thành màu vàng xét có màu cam sữaKết tủa dần tạo rơm nhạt lớp dung dịch phía có màu nâu đỏ, - Cho hồ tinh bột vào dung dịch lớp kết tủa có màu vàng chuyển thành màu xanh - Tốc độ kết tủa chậm dần từ ống đến - Cho tiếp Na2S2O3 vào dung dịch ống màu xanh  màu trắng sữa đục Giải Kết tủa Ferocyanua Kali tác dụng với - Sản phẩm tạo từ phương trình (3) có Iod nên cho hồ tinh bột vào thích ZnSO4 tạo hóa hợp kẽm không tan dd có màu xanh Và Fericianua Kali thừa tác dụng với KI - Na2S2O3 khử I2 tạo thành sau phản tạo kết tủa màu vàng K4Fe(CN)6 ứng (3) thành NaI nên không làm hồ tinh bột chuyển màu xanh xám -2K NaFe(CN) + 2ZnSO  Phương 2Na2S2O3 + I2  Na2S4O6 + 2NaI trình 2K2ZnFe(CN)6↓ + Na2SO4 + K2SO4 (2) -K3Fe(CN)6 + KI  K4Fe(CN)6↓ + 1/2I2 (3) Kết luận Cho ống nghiệm chứa Glucose với nồng độ khác nhau, sau phản ứng với Fericianua Kali tiếp tục tác dụng với ZnSO4.KI để phản ứng xảy chiều đồng thời để định phân lượng Fericianua Kali thừa phản ứng - - Cốc thứ glucose mà có Fericianua Kali, nên lượng Na2S2O3 dùng để định phân cần dùng nhiều ống nghiệm (do lượng Iod tạo sau phản ứng với KI nhiều hơn) Các cốc lại lượng Fericianua ban đầu phản ứng phần với Glucose, nên lượng Na2S2O3 cần dùng để định phân K3Fe(CN)6 thừa tăng dần từ cốc đến cốc Kết định phân: Ống nghiệm Nồng độ dd (mg/ml) 1,6 1,2 0,8 0,4 X DD Na2S2O3 N/50 (mg/ml) 25,2 25,5 26 28 29,7 27,6 31,1 Δ V=V0 – V 5,9 5,6 5,1 3,1 1,4 3.5 Đồ thị biểu diễn ΔV=f(C) mg/ml: Từ phương trình: y = 3,15x + 0,366 Với y = ΔV6 = 3,5  x6 = (3,5 – 0,366)/3,15 = 0,995 mg/ml Vậy nồng độ ống nghiêm X= 0,995 mg/ml