Viện CNSH_ĐHCT Phúc trình thực tập Sinh hóa Bài 7:Protein 1. Sơ đồ vô cơ hóa mẫu 2. Sơ đồ phân tích N tổng 3. Phân tích N tổng bằng hệ thống Kjeldahl truyền thống 4. Thao tác phân tích NH3 bằng hệ thống chưng cất truyền thống và thao tác định phân 5. Công thức tính: (mẫu rắn): N = (%) 6. Kinh nghiệm 7. Những vấn đề cần tìm hiểu
Trang 1Phúc trình thực tập Môn học: TT SINH HÓA CNSH
Mã HP: CS115 Nhóm:
Thành viên nhóm:
Trang 2Bài 7: PROTEIN Câu hỏi phúc trình:
1 Sơ đồ vô cơ hóa mẫu
Thêm 5ml H2SO4,đđvà ½ muỗngchấtxúctác Se:K2SO4:CuSO4
Cân 0.5gr mẩuđậuxanhchov àoốngKejdahlvà 0.5ml nướcvào(mỗimẫu
1 ống)
Chuẩnbịhệthốngvô
cơhóa(đểổngvàokh
ây,
kiểmtrasựhoạtđộng
củahệthống)
Cho khâyđựngố ngKajdahlv àohệthốngv ôcơhóa
Bậthệthống FOSS 2
Khinhiệtđộl ên420oC thìbậthệthốn gtủhútvàhệt hốnghỗtrợ
Thờigianvô cơhóatrong
60 phútvà
15 phútđểhúth ếtkhóitrắng
Sau 1h đểnguộiố ngnghiệ
m
Tắttủhútvà
hệthống
FOSS 2
Trang 32 Sơ đồ phân tích N tổng
3 ốngđốichứngchứa 50mlnướccất + 1 muỗngvungMgO.3 ốngchứa 50ml nướccất+múc 1 muỗngvung MgO+1ml mẫunướcmắmGiaHỷ 60
N mới 3 ốngchứa 50ml nước cất+1 muỗngvung
MgO+1ml mẫunướcmắmGiaHỷ
60Ncũ
Đổnướcđầybình
cầuđếnvạchmàu
đỏtrênthànhbình
vàmởnguồn
Lắpốngđốic hứngvàohệt hống
Cho 20ml AB vàobình tam giácvàđặt vàonơith
u NH3
Đợinướct rongbình cầusôi
Khithểtícht rongbình tam giácđạtkho ảng 70ml thìđemchuẩ nđộ
Trángbur
et 1 lầnvớinư ớccất, 1 lầnvới
H2SO4 0,05N
Cho H2SO4 0,05N vàoburetđến vạchsố 0 (mặtcongph íadưới)
tayphảicầ
mbình
tam giác,
taytráicho
àng qua
buretmởk
hóacho
H2SO4
0,05N
nhỏtừngg
iọtvàobìn
h tam
giác
Tayphảilắc
đềubình
tam giác
Tiếptụcđến khi dung dịchchuyể ntừmàuxan
h sang màuđỏnâut hìdừnglại
Ghilạithểtí
ch H2SO4 0,05N đãdùng
Thựchiệnt ươngtựđối vớicácống Kejdahlcò nlại
Trang 43 Phân tích N tổng bằng hệ thống Kjeldahl truyền thống:
Chưng cất đạm: Châm nước vào bình cầu (ngay vạch đỏ)→ Cắm phích, vặn nút đến
số 10→ Mở vòi nước→ Chờ nước trong bình cầu sôi thì vặn nút về số 5→ Đặt bình tam giác (250ml) đã chứa sẵn 30ml thuốc thử acid boric vào vị trí thu NH3→ Cho mẫu vào phễu từ từ (khoá ở phễu đóng sẵn)→ Mở cho mẫu chảy xuống từ từ, đóng khoá lại, thêm một ít nước cất vào phễu→ Cho 50ml NaOH 40% vào phễu từ từ→ Mở khoá cho NaOH chảy xuống từ từ, đóng khoá lại, thêm một ít nước cất vào phễu→ Chờ bình tam giác chứa khoảng 125ml dung dịch thì đem đi định phân→ Đặt cốc thay chỗ bình tam giác để hứng dung dịch chảy xuống→ Mở chốt, bóp ống dẫn qua bình thu hồi chất thải→ Mở khoá (ở bình rửa) xả hết chất thải, đóng khoá lại→ Tiếp tục như vậy với mẫu tiếp theo
Định phân: Mẫu sau khi thu hồi → định phân bằng H2SO4 0,1N từ từ đến khi dung dịch xuất hiện màu đỏ nâu thì ngừng → đọc số ml trên buret
4 Thao tác phân tích NH3 bằng hệ thống chưng cất truyền thống và thao tác định phân:
Đổ nước đầy bình cầu đến vạch màu đỏ trên thành bình Mở nguồn chuẩn bị 9 ống Kejdahl ( 3 ống đối chứng chứa 50ml nước cất, múc 1 muỗng vung MgO ; 3 ống chứa 50ml nước cất,múc 1 muỗng vung MgO và 1ml mẫu nước mắm Gia Hỷ
60 N mới; 3 ống chứa 50ml nước cất,múc 1 muỗng vung MgOvà 1ml mẫu nước mắm Gia Hỷ 60N cũ lắp ống đối chứng vào hệ thống cho 20ml AB vào bình tam giác và đặt vào nơi thu NH3đợi nước trong bình cầu sôi khi thể tích trong bình tam giác đạt khoảng 70ml thì đem chuẩn độ tráng buret 1 lần với nước cất, 1 lần với H2SO4 0,05N cho H2SO4 0,05N vào buret đến vạch số 0 (mặt cong phía dưới) tay phải cầm bình tam giác, tay trái choàng qua buret mở khóa cho H2SO4 0,05N nhỏ từng giọt vào bình tam giác tay phải lắc đều bình tam giác tiếp tục đến khi dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu đỏ nâu thì dừng lại ghi lại thể tích H2SO4 0,05N đã dùng thực hiện tương tự đối với các ống Kejdahl còn lại
5 Công thức tính: (mẫu rắn): N =
m
100 V(H2SO4) 0014
,
(%) N: Hàm lượng nitơ tổng số
m: Trọng lượng mẫu đem phân tích (g)
0,0014: Số g N tương đương với 1ml H2SO4 0,1N
K = 6,25: Hệ số đặc trưng cho protein
Bảng số liệu thí nghiệm phân tích N tổng:
Trang 5Nhận xét:
Kết quả thí nghiệm chênh lệch không đáng kể, cụ thể là:
- Mẫu đối chứng:
+ Lớn nhất (0,36%) và ít nhất (0,22%) nên chênh lệch cũng chỉ 0,364- 0,224 =
0,14%
+ Sai số rất nhỏ: của hàm lượng N tổng là 0,042%, còn của protein tông số là
0,2625%
- Mẫu thật:
+ Lớn nhất (2,277%) và ít nhất (2,008%) nên chênh lệch cũng chỉ có 2,277- 2,008 = 0,269%
+ Sai số nhỏ nhưng lớn rất nhiều lần (khoảng 2,2 lần) so với sai số của mẫu đối
chứng dù là về hàm lượng nitơ tổng (0,09275%, 00,09275,042 ≈ 2,2) hay về protein tổng số (0,5795, 00,,26255795 ≈ 2,2)
Thảo luận:
So với tài liệu tham khảo thì kết quả thí nghiệm rất hợp lí Vì thí nghiệm này dùng lượng lớn hơn NaOH 40% (50ml thay vì 30ml) và thuốc thử acid boric (30ml thay vì 20ml) nên kết quả có lớn hơn là hợp lí (hàm lượng nitơ tổng trung bình là 2,18225 thay vì 1,18)
Kết quả thí nghiệm 2:
Công thức tính: Nitơ ammoniac = (0,0007*(V-V0)*1000)/M = (0,7*(V-V0))/m
Trong đó: V là số ml H2SO4 0,05N dùng chuẩn độ mẫu
V0 là số ml H2SO4 0,05N dùng chuẩn độ mẫu thử không
m là số ml mẫu đem phân tích
Mẫu Lần Khối lượng
mẫu (g)
Thể tích H2SO4 (ml)
Hàm lượng tổng (%)
Protein tổng số (%)
Đối
chứng
Trung
Thật
Trung
Trang 66 Kinh nghiệm:
- Tránh trường hợp chung nhóm mà chỉ có vài người làm, chí ít cũng nên tập trung vào thí nghiệm xem cần cái gì chứ không phải lúc nào cũng đợi có người phân công mới chịu làm Đôi khi chỉ có một người thao tác nhưng nhiều người cùng thảo luận thì làm việc sẽ hiệu quả hơn, tốt cho nhóm cũng tốt cho bản thân vì biết rõ vấn đề hơn
- Nên chuẩn bị 9 bình tam giác đã được đánh số và mực cần thu hồi tránh làm mất thời gian
- Không nên đong acid boric trước tránh làm acid bị oxy hóa
7 Những vấn đề cần tìm hiểu:
a Vì Mg(OH)2 là một chất kiềm mạnh hơn ammoniac có thể đẩy NH3 từ muối amon (NH4)2SO4 ra thể tự do Nếu dùng những chất kiềm khác mạnh hơn Mg(OH)2 thì sẽ ảnh hưởng đến thực phẩm
b Về việc sử dụng H2SO4 0,05M để chuẩn độ trong thí nghiệm phân tích
ammoniac vì hàm lượng đạm trong mẫu thấp, còn trong mẫu phân tích đạm tổng thì hàm lượng đạm cao hơn nên sử dụng H2SO4 0,1N Tùy theo hàm lượng đạm trong mẫu mà ta sử dụng H2SO4 với nồng độ thích hợp để việc chuẩn độ sẽ được chính xác hơn
c Vì khi chưng cất hơi nước đi qua ống dẫn sẽ kéo theo một lượng chất như NH3, nếu nhiệt độ cao quá sẽ dẫn đến hơi nước bốc lên quá nhanh lôi cuốn theo cả MgO vào ống dẫn, nên ống dẫn sẽ đọng lại một lượng chất nhất định, để rửa sạch hệ thống chưng cất đạm phải bóp ống dẫn khí qua bình thu hồi để thu hồi và tái sử dụng hóa chất
d Quá trình ngưng tụ NH3 trong quá trình chưng cất đạm:
Khi đốt nóng mẫu phân tích với H2SO4 đậm đặc, các hợp chất hữu cơ bị oxy hóa.Các hợp chất carbon và hydro tạo thành CO2 và H2O.Còn gốc nitơ sau khi được giải phóng ra dưới dạng NH3 sẽ kết hợp với H2SO4 tạo thành muối (NH4)2SO4 Trong quá trình chưng cất, (NH4)2SO4 sẽ tác dụng với NaOH và giải phóng NH3 NH3 bị hơi nước đẩy qua hệ thống làm lạnh và ngưng tụ lại thành giọt Sau đó sẽ được hấp thu bằng dung dịch acid Boric có chứa chất chỉ thị màu tạo thành tetraborat amon Không còn NH3 trong ống sinh hàn vì trong ống sinh hàn NH3 đã chuyển thành NH4OH
e Sự chuyển màu của dung dịch acid Boric trong quá trình chưng cất:
Khi cho Methyl Red và Bromcresol Green vào AB thì dung dịch có màu đỏ
Trang 7nâu do trong môi trường acid yếu thì Methyl Red có màu đỏ và Bromcresol Green có màu xanh nên tạo ra hỗn hợp màu đỏ nâu Khi ngưng tụ NH3 vào thì dung dịch có màu xanh lá vì trong môi trường base thì Methyl Red có màu vàng và Bromcresol Green vẫn là màu xanh nên tạo ra hỗn hợp màu xanh lá Khi chuẩn độ bằng H2SO4 thì giọt acid dư sẽ làm cho dung dịch có màu đỏ nâu (môi trường acid)