Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn (tetradium glabrifolium(benth ) hartl )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HOÁ HỌC TRƯƠNG THỊ THU HIỀN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÂY DẤU DẦU LÁ NHẴN (Tetradium glabrifolium (Benth.) Hartl.) LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC HÀ NỘI, 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HOÁ HỌC TRƯƠNG THỊ THU HIỀN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÂY DẤU DẦU LÁ NHẴN Tetradium glabrifolium (Benth.) Hartl LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC Chuyên ngành: Hoá học hữu Mã số: 62.44.27.01 Hướng dẫn khoa học: PGS TS Phan Văn Kiệm GS TS Nguyễn Văn Tuyến HÀ NỘI, 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án công trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học PGS.TS Phan Văn Kiệm GS.TS Nguyễn Văn Tuyến Các số liệu, kết luận án trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả Trương Thị Thu Hiền i LỜI CẢM ƠN Luận án hoàn thành Viện Hóa sinh biển Viện Hoá học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Trong trình nghiên cứu, tác giả nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô, nhà khoa học, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc, cảm phục kính trọng tới PGS TS Phan Văn Kiệm GS TS Nguyễn Văn Tuyến - người Thầy tận tâm hướng dẫn khoa học, động viên, khích lệ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Hóa sinh biển Ban lãnh đạo Viện Hóa học tập thể cán hai Viện quan tâm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn phòng Nghiên cứu cấu trúc - Viện Hóa Sinh biển, đặc biệt TS Hoàng Lê Tuấn Anh, TS Nguyễn Xuân Nhiệm, TS Phạm Hải Yến, TS Nguyễn Văn Thanh CN Đan Thị Thúy Hằng ủng hộ to lớn, lời khuyên bổ ích góp ý quý báu việc thực hoàn thiện luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn Phòng Hợp chất tự nhiên, Đại học Osaka, Nhật Bản giúp đỡ việc sàng lọc thử hoạt tính kháng lao Tôi xin chân thành cảm ơn tới đồng nghiệp Bộ môn Độc học phóng xạ quân - Học viện Quân Y Ban Giám đốc Học viện Quân y ủng hộ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian làm nghiên cứu sinh Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới toàn thể gia đình, bạn bè người thân luôn quan tâm, khích lệ, động viên suốt trình học tập nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn! Tác giả Trương Thị Thu Hiền ii MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH x MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CHI TETRADIUM .3 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Tetradium 1.1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học chi Tetradium .4 1.1.2.1 Các hợp chất alkaloid 1.1.2.2 Các hợp chất triterpenoid 10 1.1.2.3 Các hợp chất limonoid .11 1.1.2.4 Các hợp chất flavonoid 13 1.1.2.5 Các hợp chất coumarin 14 1.1.2.6 Các hợp chất benzenoid .15 1.1.2.7 Các hợp chất sterol .16 1.1.2.8 Các hợp chất khác 16 Kết luận 17 1.1.3 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học chi Tetradium .18 1.1.3.1 Tác dụng kháng ung thư 18 1.1.3.2 Tác dụng với hệ tim mạch 19 1.1.3.3 Tác dụng hệ thần kinh 21 1.1.3.4 Tác dụng kháng viêm, giảm đau 21 1.1.3.5 Các tác dụng khác 22 Kết luận 26 1.2 Giới thiệu dấu dầu nhẵn 27 1.2.1 Đặc điểm thực vật 27 1.2.2 Công dụng chữa bệnh 27 1.2.3 Tình hình nghiên cứu giới 28 1.2.4 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 29 Kết luận .29 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Mâu thực vật 30 2.2 Phương pháp phân lập hợp chất .30 iii 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa hoc 31 2.4 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học .32 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 39 3.1 Phân lập hợp chất từ dấu dầu nhẵn 39 3.1.1 Phân lập hợp chất từ mẫu dấu dầu nhẵn 39 3.1.2 Phân lập hợp chất từ mẫu vỏ thân dấu dầu nhẵn .41 3.2 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ dấu dầu nhẵn 44 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .50 4.1 Phân lập hợp chất từ dấu dầu nhẵn 50 4.2 Xác định cấu trúc hợp chất .51 4.2.1 Hợp chất TG1 (chất mới): Tetraglabrifolioside 51 4.2.2 Hợp chất TG2: 6-Acetonyl-N-methyldihydrodecarine 58 4.2.3 Hợp chất TG3: 6-Acetonyldihydrochelerythrine 64 4.2.4 Hợp chất TG4: Decarine 66 4.2.5 Hợp chất TG5: Iwamide 68 4.2.6 Hợp chất TG6: Rutaecarpine 72 4.2.7 Hợp chất TG7: 12α-Hydroxyevodol 74 4.2.8 Hợp chất TG8: Rutaevine .79 4.2.9 Hợp chất TG9: Lupeol 83 4.2.10 Hợp chất TG10: Friedelan-3-one 85 4.2.11 Hợp chất TG11: Phellamurin 90 4.2.12 Hợp chất TG12: Epimedoside C 95 4.2.13 Hợp chất TG13: Astragalin 97 4.2.14 Hợp chất TG14: Nicotiflorin 98 4.2.15 Hợp chất TG15: Trifoline 104 4.2.16 Hợp chất TG16: Quercetin 105 4.2.17 Hợp chất TG17: α-Tocopherol 106 4.2.18 Hợp chất TG18: (2E,4E) N-Isobutyltetradeca-2,4-dienamide 110 4.2.19 Hợp chất TG19: (2E,4E)-N-Isobutyldeca-2,4-dienamide 115 4.2.20 Hợp chất TG20: (2E,4E,8E)-N-Isobutyltetradeca-2,4,8-trienamide 117 4.2.21 Hợp chất TG21: Syringin 119 4.2.22 Hợp chất TG22: Saikolignannisode A 120 4.2.23 Hợp chất TG23: Picraquassioside D 122 iv 4.2.24 Hợp chất TG24: Stigmatsterol 123 4.2.25 Hợp chất TG25: Daucosterol 125 4.2.26 Hợp chất TG26: 5-Hydroxymethylfurfural 127 Kết luận: 128 4.3 Kết thử hoạt tính sinh học .131 4.3.1 Kết kiểm tra hoạt tính gây độc tế bào in vitro 131 4.3.2 Kết kiểm tra hoạt tính kháng lao 132 4.3.3 Kết kiểm tra hoạt tính chống oxi hóa .133 4.3.4 Kết kiểm tra hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định .134 Kết luận: 135 KẾT LUẬN .137 KIẾN NGHỊ 138 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 139 TÀI LIỆU THAM KHẢO .140 PHỤ LỤC I Phụ lục Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG3 II Phụ lục Phổ NMR TG4 V Phụ lục Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG6 VIII Phụ lục Phổ NMR TG9 XII Phụ lục Phổ NMR TG12 XV Phụ lục Phổ khối lượng phổ NMR TG13 XVIII Phụ lục Phổ khối lượng phổ NMR TG15 XXII Phụ lục Phổ NMR TG16 .XXVI Phụ lục Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG19 XXVII Phụ lục 10 Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG20 XXXI Phụ lục 11 Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG21 XXXIV Phụ lục 12 Phổ NMR TG22 XXXVII Phụ lục 13 Phổ NMR TG23 XLI Phụ lục 14 Phổ khối lượng phổ NMR TG24 XLIV Phụ lục 15 Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG25 XLVI Phụ lục 16 Phổ khối lượng phân giải cao phổ NMR TG26 XLIX Phụ lục 17 Kết xác định hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định LII v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu 13 C-NMR c.c CCR CGRP Tiếng Anh Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 5-hydroxytryptamine (hay Serotonin) Column chromatography CC chemokine receptor Calcitonin gene related peptide COX Cyclooxygenase DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Dimethyl sulfoxide 1,1- diphenyl -2-picrylhydrazyl Effective concentration at 50% H-NMR 5-HT DMSO DPPH EC50 ESI-MS Fl Gal GI50 Electron Spray Ionization Mass Spectra Fibril sarcoma of Uteus Galactopyranoside Grow inhibitory at 50% Glc HeLa HepG2 HMBC Glucopyranoside Henrietta lacks Human hepatocellular carcinoma Heteronuclear mutiple Bond Connectivity HR-ESI-MS High Resolution Electronspray Ionization Mass Spectrum HPLC High Performance Liquid Chromatography HSQC Heteronuclear Single-Quantum Coherence IC50 Inhibitory concentration at 50% ID50 iNOS Inhibitory dose at 50% Inducible nitric oxide synthase KB Human epidemoid carcinoma vi Diễn giải Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 5-hydroxytryptamine Sắc kí cột Thụ thể CC chemokine Đối kháng thụ thể peptid liên hệ đến gen calcitonin Enzyme hình thành chất trung gian sinh học prostanoid Phổ DEPT Nồng độ gây tác động sinh học cho 50% đối tượng thử nghiệm Phổ khối lượng ion hóa phun mù điện tử Ung thư màng tử cung Khả ức chế tăng trưởng 50 % Ung thư cổ tử cung Ung thư gan người Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ khối lượng phân giải cao phun mù điện tử Sắc ký lỏng hiệu cao Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử nghiệm Liều ức chế tối thiểu 50% Một enzyme tạo nitric oxide từ amino L-arginine acid Ung thư biểu mô người KH LNCaP LU MIC NOS OD Rha ROS RD RP18 PGE2 TCA TGF-β TLC TMS TNF-α TPH SC SW480 Xyl UCP-1 Ký hiệu Human prostatic carcinoma Ung thư tiền liệt tuyến người Human Lung Carcinoma Ung thư phổi người Minimum Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu, hay nồng độ kiềm khuẩn tối thiểu Nitric oxide synthases Các enzyme tổng hợp nitric oxide Optical density Mật độ quang học Rhamnopyranoside Reactive oxygen species Các gốc tự ôxy hóa Rhabdo sarcoma Ung thư màng tim Reserve phase C-18 Silica gel pha đảo RP-18 Prostaglandin E2 Có tác dụng giãn mạch trực tiếp, giãn trơn Trichloracetic acid Trichloracetic acid Yếu tố chuyển dạng tăng trưởng Transforming growth factor β β kiểm soát tăng sinh, biệt hóa tế bào Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng Tetramethylsilane Tumor necrosis factor α Yếu tố hoại tử khối u α Enzyme tryptophan hydroxylase Enzyme thủy phân tryptophan Scavenging capacity Khả bẫy gốc tự Human colon adenocarcinoma cell Ung thư tuyến đại tràng người line Xylopyranoside Uncoupling protein-1 Protein tách cặp -1 vii DANH MỤC BẢNG Bảng Các hợp chất alkaloid phân lập từ số loài chi Tetradium .7 Bảng Các hợp chất triterpenoid phân lập từ số loài chi Tetradium .10 Bảng Các hợp chất limonoid phân lập từ số loài chi Tetradium 12 Bảng Các hợp chất flavonoid phân lập từ số loài chi Tetradium 13 Bảng Các hợp chất coumarin phân lập từ số loài chi Tetradium 14 Bảng Các hợp chất benzenoid phân lập từ dấu dầu nhẵn 15 Bảng Các hợp chất sterol phân lập từ số loài chi Tetradium 16 Bảng Số liệu phổ NMR TG1 hợp chất tham khảo 53 Bảng Số liệu phổ NMR TG2 hợp chất tham khảo 59 Bảng 10 Số liệu phổ NMR TG3 hợp chất tham khảo 66 Bảng 11 Số liệu phổ NMR TG4 hợp chất tham khảo 67 Bảng 12 Số liệu phổ NMR TG5 hợp chất tham khảo 69 Bảng 13 Số liệu phổ NMR TG6 hợp chất tham khảo 73 Bảng 14 Số liệu phổ NMR TG7 hợp chất tham khảo 75 Bảng 15 Số liệu phổ NMR TG8 hợp chất tham khảo 83 Bảng 16 Số liệu phổ NMR TG9 hợp chất tham khảo 84 Bảng 17 Số liệu phổ NMR TG10 hợp chất tham khảo 86 Bảng 18 Số liệu phổ NMR TG11 hợp chất tham khảo 91 Bảng 19 Số liệu phổ NMR TG12 hợp chất tham khảo 96 Bảng 20 Số liệu phổ NMR TG13 hợp chất tham khảo 98 Bảng 21 Số liệu phổ NMR TG14 hợp chất tham khảo 99 Bảng 22 Số liệu phổ NMR TG15 hợp chất tham khảo 105 Bảng 23 Số liệu phổ NMR TG16 hợp chất tham khảo 106 Bảng 24 Số liệu phổ NMR TG17 hợp chất tham khảo 107 Bảng 25 Số liệu phổ NMR TG18 hợp chất tham khảo 111 Bảng 26 Số liệu phổ NMR TG19 hợp chất tham khảo 116 Bảng 27 Số liệu phổ NMR TG20 hợp chất tham khảo 118 Bảng 28 Số liệu phổ NMR TG21 hợp chất tham khảo 120 viii Bảng 29 Số liệu phổ NMR TG22 hợp chất tham khảo 121 Bảng 30 Số liệu phổ NMR TG23 hợp chất tham khảo .123 Bảng 31 Số liệu phổ NMR TG24 hợp chất tham khảo 124 Bảng 32 Số liệu phổ NMR TG25 hợp chất tham khảo 126 Bảng 33 Số liệu phổ NMR TG26 hợp chất tham khảo .127 Bảng 34 Thống kê hợp chất phân lập từ phận dấu dầu nhẵn 130 Bảng 35 Kết xác định hoạt tính gây độc tế bào in vitro 131 Bảng 36 Hoạt tính kháng lao chủng M bovis M smegmatis .133 Bảng 37 Kết xác định hoạt tính chống oxi hóa .134 ix DANH MỤC HÌNH Hình Mẫu thực vật mẫu tiêu khô dấu dầu nhẵn 30 Hình Sơ đồ phân lập hợp chất từ mẫu dấu dầu nhẵn 40 Hình Sơ đồ phân lập hợp chất từ mẫu vỏ dấu dầu nhẵn .43 Hình Cấu trúc tương tác HMBC hợp chất TG1 51 Hình Phổ HR-ESI-MS TG1 51 Hình Phổ 1H-NMR TG1 .54 Hình Phổ 1H-NMR giãn (a) TG1 54 Hình Phổ 1H-NMR giãn (b) TG1 55 Hình Phổ 13C-NMR TG1 55 Hình 10 Phổ DEPT TG1 56 Hình 11 Phổ HSQC TG1 56 Hình 12 Phổ HMBC TG1 57 Hình 13 Sắc kí đồ dẫn xuất TMS D-glucose, L-Glucose TG1 57 Hình 14 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG2 58 Hình 15 Phổ HR-ESI-MS hợp chất TG2 .60 Hình 16 Phổ 1H-NMR TG2 .61 Hình 17 Phổ 1H-NMR giãn TG2 .61 Hình 18 Phổ 13C-NMR TG2 62 Hình 19 Phổ DEPT TG2 62 Hình 20 Phổ HSQC TG2 63 Hình 21 Phổ HMBC TG2 63 Hình 22 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG3 64 Hình 23 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG4 66 Hình 24 Cấu trúc hoá học tương tác HMBC TG5 68 Hình 25 Phổ 1H-NMR TG5 .69 Hình 26 Phổ 1H-NMR giãn TG5 .70 Hình 27 Phổ 13C-NMR TG5 70 Hình 28 Phổ DEPT TG5 71 Hình 29 Phổ HSQC TG5 71 Hình 30 Phổ HMBC TG5 72 x Hình 31 Cấu trúc hoá học tương tác HMBC TG6 72 Hình 32 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG7 74 Hình 33 Phổ 1H-NMR TG7 .76 Hình 34 Phổ 1H-NMR giãn TG7 .77 Hình 35 Phổ 13C-NMR TG7 77 Hình 36 Phổ DEPT TG7 78 Hình 37 Phổ HSQC TG7 78 Hình 38 Phổ HMBC TG7 79 Hình 39 Cấu trúc hoá học tương tác HMBC TG8 79 Hình 40 Phổ 1H-NMR TG8 .80 Hình 41 Phổ 13C-NMR TG8 80 Hình 42 Phổ 1H-NMR giãn TG8 81 Hình 43 Phổ HSQC TG8 81 Hình 44 Phổ HMBC TG8 82 Hình 45 Cấu trúc hóa học hợp chất TG9 .83 Hình 46 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG10 85 Hình 47 Phổ 1H-NMR TG10 87 Hình 48 Phổ 1H-NMR giãn TG10 87 Hình 49 Phổ 13C-NMR TG10 88 Hình 50 Phổ DEPT TG10 88 Hình 51 Phổ HSQC TG10 89 Hình 52 Phổ HMBC TG10 89 Hình 53 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG11 90 Hình 54 Phổ 1H-NMR TG11 .92 Hình 55 Phổ 1H-NMR giãn TG11 .92 Hình 56 Phổ 13C-NMR TG11 .93 Hình 57 Phổ DEPT TG11 93 Hình 58 Phổ HSQC TG11 94 Hình 59 Phổ HMBC TG11 94 Hình 60 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG12 95 Hình 61 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG13 97 Hình 62 Cấu trúc tương tác HMBC TG14 98 xi Hình 63 Phổ 1H-NMR TG14 100 Hình 64 Phổ giãn 1H-NMR TG14 (a) 101 Hình 65 Phổ giãn 1H-NMR TG14 (b) .101 Hình 66 Phổ 13C-NMR TG14 102 Hình 67 Phổ DEPT TG14 102 Hình 68 Phổ HSQC TG14 103 Hình 69 Phổ HMBC TG14 103 Hình 70 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG15 104 Hình 71 Cấu trúc hóa học TG16 105 Hình 72 Cấu trúc hóa học hợp chất TG17 106 Hình 73 Phổ 1H-NMR TG17 108 Hình 74 Phổ 1H-NMR giãn TG17 .108 Hình 75 Phổ 13C-NMR TG17 109 Hình 76 Phổ DEPT TG17 109 Hình 77 Cấu trúc tương tác HMBC TG18 110 Hình 78 Phổ HR-ESI-MS TG18 112 Hình 79 Phổ 1H-NMR TG18 112 Hình 80 Phổ 1H-NMR giãn TG18 113 Hình 81 Phổ 13C-NMR TG18 113 Hình 82 Phổ DEPT TG18 114 Hình 83 Phổ HSQC TG18 114 Hình 84 Phổ HMBC TG18 115 Hình 85 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG19 115 Hình 86 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG20 117 Hình 87 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG21 119 Hình 88 Cấu trúc tương tác HMBC TG22 120 Hình 89 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG23 122 Hình 90 Cấu trúc hóa học hợp chất TG24 123 Hình 91 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC TG25 125 Hình 92 Cấu trúc hóa học TG26 .127 Hình 93 Các hợp chất phân lập từ dấu dầu nhẵn 129 Hình 94 Kết thử hoạt tính hợp chất phân lập từ dấu dầu nhẵn 136 xii MỞ ĐẦU Thế giới thực vật nguồn tài nguyên phong phú vô quý giá hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học Không nước phương đông mà nước phương tây tiêu thụ lượng lớn dược liệu Theo thống kê, nước có công nghiệp phát triển, phần tư số thuốc kê đơn có chứa hoạt chất có nguồn gốc từ thảo mộc Nhiều hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học tốt phân lập đưa vào sử dụng với mục đích chữa bệnh Xu hướng sâu nghiên cứu tìm kiếm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao từ loài thực vật làm dược phẩm chữa bệnh ngày thu hút quan tâm nhà khoa học ưu điểm chúng độc tính thấp, dễ hấp thu chuyển hóa thể so với dược phẩm tổng hợp Việt Nam nước nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nên có hệ thực vật đa dạng phong phú Theo ước tính, nước ta có khoảng gần 13000 loài thực vật bậc cao có khoảng 4000 loài sử dụng làm thuốc Việc sử dụng nguồn tài nguyên để phòng, chữa bệnh nâng cao sức khoẻ cho người có trình lịch sử hàng nghìn năm ngày trở nên quan trọng Ngoài đa dạng thành phần chủng loại, nguồn dược liệu Việt Nam có giá trị to lớn chỗ chúng sử dụng rộng rãi cộng đồng để chữa nhiều loại bệnh khác Các thuốc sử dụng hình thức độc vị hay phối hợp với tạo nên thuốc quý giá Ngoài ra, hàng trăm thuốc khoa học y - dược đại chứng minh giá trị chữa bệnh chúng Cây dấu dầu nhẵn (Tetradium glabrifolium (Benth.) Hartl.) thuốc thuộc họ Cam quýt (Rutaceae) thường sử dụng trị số bệnh như: trị tổn thương ngã, gãy xương, thấp khớp Thân dùng để trị viêm thận, phù thũng, dùng chữa chấn thương, ngứa, eczema Lá dùng nấu nước tắm cho bà đẻ nấu nước đặc để rửa vết thương, tắm ghẻ lở Lá giã chưng với giấm để đắp chống sưng, tắc tia sữa Quả vỏ dùng sắc uống để lợi tiểu đại tiểu, chữa kiết lị, táo bón thấp khớp Các nghiên cứu thành phần hóa học loài có mặt lớp chất alkaloid, triterpenoid, benzenoid coumarin Nhiều hợp chất số thể nhiều hoạt tính tốt evomeliaefolin, rutaevinexic acid, isolimonexic acid Nhằm mục đích nghiên cứu làm rõ thành phần hóa học hoạt tính sinh học dấu dầu nhẵn (Tetradium glabrifolium), lựa chọn đề tài: ‘‘Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học dấu dầu nhẵn Tetradium glabrifolium (Benth.) Hartl.” Mục tiêu luận án: Nghiên cứu để làm rõ thành phần hoá học chủ yếu dấu dầu nhẵn nhằm tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học, làm sở khoa học cho nghiên cứu để tạo sản phẩm chăm sóc sức khỏe cộng đồng góp phần giải thích tác dụng chữa bệnh vị thuốc Nội dung luận án bao gồm: Phân lập hợp chất từ vỏ thân dấu dầu nhẵn phương pháp sắc ký; Xác định cấu trúc hoá học hợp chất phân lập phương pháp vật lý hóa học; Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào, hoạt tính kháng lao, hoạt tính chống oxi hóa hoạt tính kháng vi sinh vật hợp chất phân lập CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CHI TETRADIUM 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Tetradium Họ Cam quýt (Rutaceae) hay gọi họ Cửu lý hương họ thực vật Bồ Hòn (Sapindales) với khoảng 161 chi với 2070 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới ôn đới ấm, đặc biệt Nam Phi, châu Úc châu Á [1] Chi Tetradium chi họ Cam quýt (Rutaceae), phân bố từ vùng núi Himalaya đến vùng nhiệt đới Đông Nam Á Trong tài liệu cũ, loài chi Tetradium thường bị xếp vào chi Euodia (nhiều tài liệu viết Evodia), năm 1981, chi Euodia chia thành chi: Tetradium, Euodia Melicope [1, 2] Theo phân loại thực vật học, chi Tetradium bao gồm 12 loài, số có loài chấp nhận tên: - Tetradium austrosinense (Handel-Mazzetti) T G Hartley, 1981; - Tetradium calcicolum (Chun ex C C Huang) T G Hartley, 1981; - Tetradium daniellii (Bennett) T G Hartley, 1981; - Tetradium fraxinifolium (Hooker) T G Hartley, 1981; - Tetradium glabrifolium (Champion ex Bentham) T G Hartley, 1981; - Tetradium ruticarpum (A Jussieu) T G Hartley, 1981; - Tetradium sambucinum (Blume) T.G Hartley, 1981; - Tetradium trichotomum (Loureiro) Fl Cochinch, 1790 Các loài chi Tetradium thường có thân bụi thân gỗ, dài khoảng 14-38 cm hình lông chim hình elip, cưa, sáng bóng màu xanh đậm trên, nhạt màu có lông bên Hoa gồm nhỏ, đơn tính, cụm, màu trắng với bao phấn màu vàng Cánh hoa màu xanh cây, vàng trắng Chùm hoa từ 8-16 cm, phân nhánh cuối cành nhỏ Hoa có mùi thơm xuất vào đến cuối mùa hè, dễ nhận thấy, hấp dẫn với ong Trái màu hồng gần màu đen, có mỏ cụm lớn sặc sỡ Hạt màu đen sáng bóng, chín vào cuối mùa hè tồn qua mùa đông [1, 2] 1.1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học chi Tetradium Hiện nay, theo thống kê, loài công nhận tên chi Tetradium, có loài công bố thành phần hóa học, bao gồm: T daniellii, T glabrifolium, T ruticarpum, T sambucinum T trichotomum Các nghiên cứu thành phần hóa học chi Tetradium cho thấy có mặt nhiều lớp chất, như: alkaloid, triterpenoid, flavonoid, coumarin, benzenoid, amide, tannin, sterol Năm 1988, nhà khoa học Nhật Bản phân lập từ loài Evodia rutaecarpa (tên khác loài T ruticarpum) hai mươi hợp chất có chín hợp chất gồm bốn limonoid: 12α-hydroxylimonin (73), 12α-hydroxyevodol (65), 6α-acetoxy-5-epilimonin (70) 6β-acetoxy-5-epilimonin (71); năm quinolone alkaloid: 1-methyl-2-[(Z)-6′-undecyl]-4(1H)-quinolone (37), 1-methyl-2[(Z)-6′-pentadecenyI]-4(1H)-quinolone (38), 1-methyl-2-[(Z)-10′-pentadecenyl] -4(1H)quinolone (40), 1-methyl-2-[(4′Z,7′Z)-4,7-tridecadienyl]-4(1H)-quinolone (41), 1- methyl-2-[(6′Z,9′Z)-6,9-pentadecadienyl]-4(1H)-quinolone (42) bảy limonoid biết là: evodol (66), rutaevine (67), rutaevine acetate(68), graucin A (69), limonin (72), obacunone (78) jangomolide (79); bốn hợp chất quinolone alkaloid biết: 1-methy1-2-undecyl-4(1H)-quinolone (28), dihydroevocarpine (31), 1-methyl-2pentadecyl-4(1H)-quinolone (33) evocarpine (39) [3] Năm 1990, Abdul Quader đồng nghiệp Khoa Dược, Đại học Strathclyde, Vương quốc Anh phân lập từ thân vỏ T trichotomum hai alkaloid là: α-allocryptopine (6), dictamnine (17) ba limonoid là: calodendrolide (56), limonexic acid (64) limonin (72) [4] Năm 1991, Miyake cộng Viện nghiên cứu Sinh học nông nghiệp Wakayama, Momoyama, Nhật Bản phân lập ba hợp chất limonoid từ loài T rutacarpum, gồm: limonin 17β-D-glucopyranoside (74), limonin diosphenol 17-O-β-D-glucopyranoside (75), 6β-hydroxy-5-epilimonin 17-O-β-Dglucopyranoside (76) ba hợp chất limonoid biết là: limonin diosphenol (62), rutaevine (67) limonin (72) [5] Năm 2002, nhóm nghiên cứu GS Trần Văn Sung cộng Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam phân lập hợp chất alkaloid từ Tứ chẻ ba (T trichotomum) là: rutaecarpine (7), evodiamine (10) nauclefin (13) [6] Năm 2003, Stevenson đồng nghiệp thuộc Trung tâm Nghiên cứu quốc tế Jealott's Hill, Vương quốc Anh phân lập từ phần dịch chiết sấy khô loài T daniellii furanocoumarin 5-(6-hydroxy-3,7-dimethylocta-2,7dienyloxy) psoralen (97) sáu hợp chất furanocoumarin biết xanthotoxin (94), bergapten (95), isopimpinellin (96), 5-(7-hydroxy-3,7-dimethylocta-2,5dienyloxy) psoralen (98), 5-geranyloxypsoralen (99) 8-geranyloxypsoralen (100) Các hợp chất thể hoạt tính tốt ngăn chặn phát triển ấu trùng Spodoptera littoralis Heliothis virescens [7] Năm 2006, nhóm nghiên cứu Komala Ismiarni trường Đại học Putra, Malaysia nghiên cứu thành phần hóa học loài T sambucinum, phân lập bốn hợp chất, bao gồm: decarine (1), rutaecarpine (7), aurantiamide acetate (15) umbelliferone (7-hydroxycoumarin) (92) [8] Năm 2007, nhà khoa học Hàn Quốc phân lập từ dịch chiết loài T ruticarpum sáu hợp chất quinolone alkaloid gồm: 1-methyl-2-nonyl-4(1H)quinolone (27), 1-methyl-2-undecyl-4(1H)-quinolone (29), dihydroevocarpine (31), 1-methyl-2-[(Z)-6′-undecenyl]-4(1H)-quinolone (37), evocarpine (39) 1-methyl2-[(6′Z,9′Z)-6′,9′-pentadecadienyl]-4(1H)-quinolone (42) [9] Vào năm 2010, Tzu-Ying Wang đồng nghiệp Đại học Y khoa Đài Trung, Đài Loan phân lập từ loài T ruticarpum quinolone alkaloid là: 1-[(6′Z,9′Z)- 6′,9′-pentadecadienyl]-4(1H)-quinolin (42) mười hợp chất biết gồm sáu hợp chất alkaloid: rutaecarpine (7), evodiamine (10), 14formyldihydrorutaecarpine (11), skimmianine (20), dihydroevocarpine (31) evocarpine (39); hợp chất limoloid evodol (66); bốn hợp chất sterol là: βsitosterol (121), stigmasterol (123), 3β-hydroxystigmast-5-en-7-one (124) 3βhydroxystigmasta-5,22-dien-7-one (125) [10] Năm 2012, nhóm nhà khoa học thuộc Khoa Thuốc tự nhiên Mô sinh học, Khoa Dược, Đại học Bắc Kinh, Trung Quốc phân lập từ loài T ruticarpum mười bảy hợp chất, có ba quinolone alkaloid 1-methyl-2-[7′-hydroxy-(E)-9′-tridecenyl]-4(1H)-quinolone (43), 1-methyl-2[(Z)-4′-nonenyl]-4(1H)-quinolone (34) 1-methyl-2-[(1′E,5′Z)-1′,5′-undecadienyl] -4(1H)-quinolone (45); hợp chất phân lập từ tự nhiên 1-methyl-2-[(E)1′-undecenyl]-4(1H)-quinolone (46) với mười ba hợp chất quinolone alkaloid biết là: 1-methyl-2-nonyl-4(1H)-quinolone (27), 1-methyl-2-decyl-4(1H)quinolone (28), 1-methyl-2-undecyl-4(1H)-quinolone (29), 1-methyl-2-dodecyl4(1H)-quinolone (30), dihydroevocarpine (31), 1-methyl-2-tetradecyl-4(1H)quinolone (32), 1-methyl-2-pentadecyl-4(1H)-quinolone (33), 1-methyl-2-[(Z)-6′undecenyl-4(1H)-quinolone (37), 1-methyl-2-[(Z)-6′-pentadecenyl]-4(1H)-quinolone (38), evocarpine (39), 1-methyl-2-[(Z)-10′-pentadecenyl]-4(1H)-quinolone (40), 1methyl-2-[(4′Z,7′Z)- 4′,7′-tridecadienyl]-4(1H)-quinolone (41), 1-methyl-2- [(6′Z,9′Z)- 6′,9′-pentadecadienyl]-4(1H)-quinolone (42) Tuy nhiên, 43 hợp chất không ổn định môi trường tự nhiên nên biến đổi thành hợp chất nhân tạo 1-methyl-2-[7′-cacbonyl-(E)-9′-tridecenyl]-4(1H)-quinolone (44) [11] Gần nhất, năm 2013, nhà khoa học Trung Quốc nghiên cứu dịch chiết từ loài T ruticarpum thu thập tỉnh Chiết Giang (Trung Quốc), phân lập hai mươi alkaloid có chín hợp chất mới, gồm năm quinolone alkaloid euocarpine A-E (47-51) bốn hợp chất là: 1methyl- 2-ethyl-4(1H)-quinolone (23), 1-methyl-2-octyl-4(1H)- quinolone (26), 1methyl-2-[(Z)-5′-dodecenyl]-4(1H)-quinolone (35), 1-methyl-2-[(Z)-5′-pentadecenyl] -4(1H)-quinolone (36), mười hợp chất biết là: 1-methyl-2-pentyl-4-(1H)quinolone (24), 1-methyl- 2-heptyl-4(1H)-quinolone (25), 1-methyl-2-nonyl-4(1H)quinolone (27), 1-methyl-2-decyl-4(1H)-quinolone (28), 1-methyl-2-undecyl4(1H)-quinolone (29), 1-methyl-2-dodecyl-4-(1H)-quinolone (30), dihydroevocarpine (31), 1-methyl-2-tetradecy-4-(1H)-quinolone (32), 1-methyl-2-pentadecenyl-4(1H)quinolone (33), evocarpine (39) 1-methyl-2-[(6′Z, 9′Z)-6′, 9′-pentadecadienyl]4(1H)-quinolone (42) [12] Dựa theo việc phân loại lớp hợp chất tự nhiên, 135 hợp chất phân lập từ loài thuộc chi Tetradium thống kê theo lớp chất sau đây: [...]... hoạt tính sinh học của cây dấu dầu lá nhẵn (Tetradium glabrifolium), chúng tôi lựa chọn đề tài: ‘ Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn Tetradium glabrifolium (Benth .) Hartl. ” Mục tiêu của luận án: Nghiên cứu để làm rõ thành phần hoá học chủ yếu của cây dấu dầu lá nhẵn nhằm tìm kiếm các hợp chất có hoạt tính sinh học, làm cơ sở khoa học cho những nghiên cứu tiếp theo... vitro 131 Bảng 36 Hoạt tính kháng lao trên chủng M bovis và M smegmatis .133 Bảng 37 Kết quả xác định hoạt tính chống oxi hóa .134 ix DANH MỤC HÌNH Hình 1 Mẫu thực vật và mẫu tiêu bản khô của cây dấu dầu lá nhẵn 30 Hình 2 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ mẫu lá cây dấu dầu lá nhẵn 40 Hình 3 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ mẫu vỏ cây dấu dầu lá nhẵn .43 Hình 4 Cấu trúc và các tương tác HMBC... khỏe cộng đồng và góp phần giải thích được tác dụng chữa bệnh của vị thuốc này Nội dung luận án bao gồm: 1 Phân lập các hợp chất từ lá và vỏ thân cây dấu dầu lá nhẵn bằng các phương pháp sắc ký; 2 Xác định cấu trúc hoá học các hợp chất phân lập được bằng các phương pháp vật lý và hóa học; 3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào, hoạt tính kháng lao, hoạt tính chống oxi hóa và hoạt tính kháng vi sinh vật của... dihydroevocarpine (3 1), 1-methyl-2pentadecyl-4(1H)-quinolone (3 3) và evocarpine (3 9) [3] Năm 1990, Abdul Quader và đồng nghiệp tại Khoa Dược, Đại học Strathclyde, Vương quốc Anh đã phân lập từ thân cây và vỏ cây T trichotomum hai alkaloid là: α-allocryptopine ( 6), dictamnine (1 7) và ba limonoid là: calodendrolide (5 6), limonexic acid (6 4) và limonin (7 2) [4] Năm 1991, Miyake và cộng sự tại Viện nghiên cứu Sinh học. .. 1-methyl-2-undecyl-4(1H)-quinolone (2 9), 1-methyl-2-dodecyl4(1H)-quinolone (3 0), dihydroevocarpine (3 1), 1-methyl-2-tetradecyl-4(1H)quinolone (3 2), 1-methyl-2-pentadecyl-4(1H)-quinolone (3 3), 1-methyl-2-[(Z)-6′undecenyl-4(1H)-quinolone (3 7), 1-methyl-2-[(Z)-6′-pentadecenyl]-4(1H)-quinolone (3 8), evocarpine (3 9), 1-methyl-2-[(Z)-10′-pentadecenyl]-4(1H)-quinolone (4 0), 1methyl-2-[(4′Z,7′Z)- 4′,7′-tridecadienyl]-4(1H)-quinolone... (2 4), 1-methyl- 2-heptyl-4(1H)-quinolone (2 5), 1-methyl-2-nonyl-4(1H)quinolone (2 7), 1-methyl-2-decyl-4(1H)-quinolone (2 8), 1-methyl-2-undecyl4(1H)-quinolone (2 9), 1-methyl-2-dodecyl-4-(1H)-quinolone (3 0), dihydroevocarpine (3 1), 1-methyl-2-tetradecy-4-(1H)-quinolone (3 2), 1-methyl-2-pentadecenyl-4(1H)quinolone (3 3), evocarpine (3 9) và 1-methyl-2-[(6′Z, 9′Z)-6′, 9′-pentadecadienyl]4(1H)-quinolone (4 2). .. 1-methyl-2-[(Z)-10′-pentadecenyl] -4(1H)quinolone (4 0), 1-methyl-2-[(4′Z,7′Z)-4,7-tridecadienyl]-4(1H)-quinolone (4 1), 1- methyl-2-[(6′Z,9′Z)-6,9-pentadecadienyl]-4(1H)-quinolone (4 2) và bảy limonoid đã biết là: evodol (6 6), rutaevine (6 7), rutaevine acetate(6 8), graucin A (6 9), limonin (7 2), obacunone (7 8) và jangomolide (7 9); bốn hợp chất quinolone alkaloid đã biết: 1-methy1-2-undecyl-4(1H)-quinolone (2 8), ... Quả và vỏ được dùng sắc uống để lợi tiểu hoặc đại tiểu, chữa kiết lị, táo bón và thấp khớp Các nghiên cứu về thành phần hóa học của loài này đã chỉ ra sự có mặt của các lớp chất alkaloid, 1 triterpenoid, benzenoid và coumarin Nhiều hợp chất trong số đó đã thể hiện nhiều hoạt tính tốt như evomeliaefolin, rutaevinexic acid, isolimonexic acid Nhằm mục đích nghiên cứu làm rõ thành phần hóa học và hoạt tính. .. tương tác HMBC chính của TG25 125 Hình 92 Cấu trúc hóa học của TG26 .127 Hình 93 Các hợp chất được phân lập từ cây dấu dầu lá nhẵn 129 Hình 94 Kết quả thử hoạt tính các hợp chất phân lập từ cây dấu dầu lá nhẵn 136 xii MỞ ĐẦU Thế giới thực vật là nguồn tài nguyên phong phú và vô cùng quý giá về những hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học Không chỉ các nước phương đông mà các nước phương... 5-(7-hydroxy-3,7-dimethylocta-2,5dienyloxy) psoralen (9 8), 5-geranyloxypsoralen (9 9) và 8-geranyloxypsoralen (10 0) Các hợp chất này đều thể hiện hoạt tính tốt ngăn chặn sự phát triển ấu trùng Spodoptera littoralis và Heliothis virescens [7] Năm 2006, nhóm nghiên cứu của Komala Ismiarni tại trường Đại học Putra, Malaysia đã nghiên cứu thành phần hóa học lá loài T sambucinum, đã phân lập được bốn hợp chất, bao gồm: decarine ( 1), rutaecarpine