Xác định hàm lượng nitrat trong sữa bột bằng phương pháp khử bằng cadimi và đo phổ

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRATE TRONG SỮA 2.1 Phạm vi áp dụng TCVN 6839:2001 quy định phương pháp sàng lọc để xác định hàm lượng nitrate trong sữa bột bằng cách khử bằng cadimi và đo phổ. 2.2 Nguyên tắc Hòa tan sữa bột trong nước, làm kết tủa chất béo và protein rồi lọc. Dùng bột kẽm và ion cadimi để khử nitrat trong phần dịch lọc về nitrite. Cho sunfanilamid và N1naphtyl etylendiamin dihidro clorua vào phần chất lỏng nổi phía trên để hiện màu đỏ và đo phổ ở bước sóng 538 nm. 2.3 Thuốc thử Chỉ sử dụng các thuốc thử loại tinh khiết phân tích. Chỉ sử dụng nước cất hoặc nước đã loại ion không chứa nitrate và nitrite. 2.3.1 Dung dịch để làm kết tủa protein và chất béo. 2.3.1.1 Dung dịch kẽm sunfat Hòa tan trong nước 267,5 g kẽm sunfat ngậm 7 nước (ZnSO4.7H2O) và pha loãng đến 500 ml. 2.3.1.2 Dung dịch kali hexaxyanoferat (II). Hòa tan trong nước 86 g kali hexaxyanoferat (II) ngậm 3 nước (K4Fe(CN)6.3H2O) và pha loãng đến 500 ml. 2.3.2 Dung dịch cadimi axetat Hòa tan trong nước 0,5 g cadimi axetat ngậm 2 nước (CH3COO2)Cd.2H2O, thêm 1 ml axit axetic (CH3COOH) và pha loãng đến 100 ml. 2.3.3 Kẽm, dung dịch huyền phù. Ngay trước khi dùng, cho 10 ml nước và 2 g bột kẽm vào một cốc nhỏ có mỏ. Dùng máy khuấy từ để duy trì kẽm ở dạng huyền phù. 2.3.4 Dung dịch hiện màu 2.3.4.1 Dung dịch I Dùng nước để pha loãng 450 ml axit clohidric đậm đặc (P20 = 1,19 gml) đến 1000 ml. 2.3.4.2 Dung dịch II Hòa tan trong hỗn hợp của 75 ml nước và 5 ml axit clohidric đậm đặc (P20 = 1,19 gml) 0,5 g sunfanilamit (NH2C6H4SO2NH2) bằng cách đun nóng trên nồi cách thủy. Làm nguội đến nhiệt độ phòng và pha loãng bằng nước đến 100 ml. Lọc, nếu cần. 2.3.4.3 Dung dịch III Hòa tan trong nước 0,1 g N1naphtyl etylendiamin dihidro clorua (C10H7NHCH2CH2NH2.2HCl). Pha loãng bằng nước đến 100 ml. Lọc, nếu cần. Dung dịch này có thể bảo quản được đến 1 tuần trong chai màu nâu đậy kín để trong tủ lạnh. 2.3.5 Kali nitrate. Dung dịch hiệu chuẩn tương ứng với 0,03g NO3 trên lít. 2.3.5.1 Dung dịch gốc Sấy khô vài gam kali nitrat (KNO3) ở 110oC đến 120oC đến khối lượng không đổi, nghĩa là đến khi chênh lệch giữa hai lần cân liên tiếp không vượt quá 1 mg. Hòa tan trong nước 489,2 mg kali nitrat đựng trong bình định mức một vạch 1 000 ml. Pha loãng bằng nước đến vạch và lắc. 2.3.5.2 Chuẩn bị dung dịch tiêu chuẩn Dùng pipet chuyển 10 ml dung dịch gốc (2.3.5.1) vào bình định mức một vạch 100 ml. Pha loãng bằng nước đến vạch và lắc. Chuẩn bị dung dịch tiêu chuẩn này trong ngày sử dụng. 1 ml dung dịch tiêu chuẩn này chứa 30,0 g NO3. 2.3.6 Dung dịch đệm, pH từ 9,6 đến 9,7. Cho 17 ml axit sunfuric đậm đặc p20 = 1,84 gml; dung dịch khoảng 98%(mm) H2SO4 vào khoảng 600 ml nước đựng trong bình định mức một vạch 1 000 ml. Làm mát đến nhiệt độ phòng và lắc. Cho thêm 100 ml dung dịch amoniac đậm đặc p20 = 0,91 gml; dung dịch khoảng 25%(mm) NH3. Pha loãng bằng nước đến vạch và lắc. Chỉnh pH đến 9,6 – 9,7, nếu cần.

Trường Đại Học Thủ Dầu Một Khoa Khoa Học Tự Nhiện ĐỀ TÀI NHÓM XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT TRONG SỮA BỘT VŨ DUY HẢI HOÀNG XUÂN ÁI L/O/G/O DÙNG PHƯƠNG PHÁP KHỬ BẰNG CADIMI VÀ ĐO PHỔ HUỲNH QUỐC MINH NGUYỄN THANH BÌNH www.trungtamtinhoc.edu.vn NỘI DUNG Phần I Phần II GIỚI THIỆU CHUNG XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRATE NITRATE Hàm lượng nitrat sữa bột: Hàm lượng chất xác định phương pháp quy định TCVN biểu thị theo miligam ion nitrat (NO3 ) kilogam www.trungtamtinhoc.edu.vn PHẦN I: GIỚI THIỆU CHUNG GIỚI THIỆU VỀ NITRATE Phần I TÁC ĐỘNG CÓ HẠI ĐỐI VỚI CƠ THỂ NGƯỜI HÀM LƯỢNG CHO PHÉP TRONG THỰC PHẨM www.trungtamtinhoc.edu.vn 1.1 GIỚI THIỆU VỀ NITRAT TRONG THỰC PHẨM SALTPETER (MUỐI DIÊM) MUỐI DIÊM (Curing Salt) PINK CURING SALT   Trên thị trường có dạng muối nitrite, nitrate dùng bảo quản thực phẩm sau : KNO , NaNO2 , KNO3 , NaNO3 Trong dân gian gọi muối diêm (tiếng Anh Saltpeter) www.trungtamtinhoc.edu.vn 1.1 GIỚI THIỆU VỀ NITRAT TRONG THỰC PHẨM Dùng bảo quản Nhóm chất có chức sữa , phomat , chế biến thịt ổn định màu nước giải khát Tạo màu cho cá thịt Ngăn chặn phát clostridium, triển vi khuẩn botulium , loại vi khuẩn Trong thực phẩm Trong phụ gia thực Ứng dụng muối Nitrate phẩm www.trungtamtinhoc.edu.vn 1.2 TÁC ĐỘNG CÓ HẠI ĐỐI VỚI CƠ THỂ NGƯỜI  Các muối nitrate có độc tính không cao độc tính tăng lên chuyển thành nitrite nhờ hệ vi khuẩn có miệng  Muối nitrate có khả oxy hóa hemoglobin máu thành methemoglobin Do làm cản trở trình vận chuyển oxy hemoglobin nuôi thể làm cho thể bị thiếu oxy  Người bị thiếu oxy nặng biểu toàn thân tím tái năng, thở nhanh, tim nhanh Sau hôn mê, tử vong nhanh không điều trị kịp thời tượng đặc biệt thường xuyên thấy trẻ em  Nitrate tác động với acid amin ( có từ việc thoái hóa protein ) tạo thành nitrosamine hợp chất có khả gây đột biến sinh ung thư www.trungtamtinhoc.edu.vn 1.3 HÀM LƯỢNG CHO PHÉP TRONG THỰC PHẨM TÊN MẪU  HÀM LƯỢNG NO3 TỐI ĐA CÓ THỂ SỬ DỤNG  Giá đỗ  580 mgNO3 /kg Củ cải  300 mgNO3 /kg Phomat 50 mgNO3 /kg Sữa bột  1 gNO3 /kg Sản phẩm thịt không qua xử lý nhiệt  150 mgNO3 / kg Nước uống  45 mgNO3 / l www.trungtamtinhoc.edu.vn PHẦN II XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT (TCVN 6839 : 2001 ) Phạm vi áp dụng Nguyên tắc Thuốc thử Phần II Kết Thiết bị dụng cụ Cách tiến hành 8/29/16 Nhóm _D13HPT01 www.trungtamtinhoc.edu.vn 2.1 Phạm vi áp dụng (TCVN 6839 : 2001 ) Tiêu chuẩn quy định phương pháp sàng lọc để xác định hàm lượng nitrat sữa bột cách khử cadimi đo phổ www.trungtamtinhoc.edu.vn 2.2 Nguyên tắc • • • Hòa tan sữa bột nước, làm kết tủa chất béo protein lọc Dùng bột kẽm ion cadimi để khử nitrat phần dịch lọc nitrit Cho sunfanilamid N-1-naphtyl etylendiamin dihidro clorua vào phần chất lỏng phía để màu đỏ đo phổ bước sóng 538 nm 10 www.trungtamtinhoc.edu.vn 2.3 2.3 Thuốc Thuốc thử thử 2.3.2 Dung dịch khử Nitrate Nitrite a) Dung dịch cadimi axetat Hòa tan nước 0,5 g cadimi axetat ngậm nước [(CH3COO2)Cd.2H2O], thêm ml axit axetic (CH3COOH) pha loãng đến 100 ml b) Kẽm, dung dịch huyền phù Ngay trước dùng, cho 10 ml nước g bột kẽm vào cốc nhỏ có mỏ Dùng máy khuấy từ để trì kẽm dạng huyền phù 12 www.trungtamtinhoc.edu.vn 2.3 2.3 Thuốc Thuốc thử thử 2.3.3 Dung dịch màu  Dung dịch I Dùng nước để pha loãng 450 ml axit clohidric đậm đặc (P20 = 1,19 g/ml) đến 000 ml  Dung dịch II Hòa tan hỗn hợp 75 ml nước ml axit clohidric đậm đặc (P 20 = 1,19 g/ml) 0,5 g sunfanilamit (NH2C6H4SO2NH2) cách đun nóng nồi cách thủy Làm nguội đến nhiệt độ phòng pha loãng nước đến 100 ml Lọc, cần  Dung dịch III Hòa tan nước 0,1 g N-1-naphtyl etylendiamin dihidro clorua (C10H7NHCH2CH2NH2.2HCl) Pha loãng nước đến 100 ml Lọc, cần, dung dịch bảo quản đến tuần chai màu nâu đậy kín để tủ lạnh www.trungtamtinhoc.edu.vn 13 2.4 2.4 Thiết Thiết bị, bị, dụng dụng cụ cụ Bình định mức vạch Phổ kế Máy ly tâm, ống ly tâm Thiết bị, dụng cụ Giấy lọc Bình nón Pipet 14 www.trungtamtinhoc.edu.vn 2.5 CÁCH TIẾN HÀNH 2.5.1 CHUẨN BỊ MẪU THỬ ( TCVN 6839 : 2001 ) TRỘN CHIẾT VÀ KHỬ PROTEIN KHỬ NITRAT VỀ NITRIT 15 2.5.1.1 CHUẨN BỊ MẪU THỬ ( TCVN 6839 : 2001 ) TRỘN MẪU MẪU THÔ THÔ Lắc Đồng nhất  MẪU THỬ Đảo chiều hộp LƯU Ý  Hộp đựng có dung tích lớn khoảng gấp đôi lượng mẫu , có nắp đậy kín khí  16 2.5.1.2 CHUẨN BỊ MẪU THỬ ( TCVN 6839 : 2001 ) CHIẾT VÀ KHỬ PROTEIN 0 136ml nước ấm (50 C – 55 C)  0,1ml silicon chống tạo bọt 12ml ZnSO4.7H2O , 12ml  K4[Fe(CN)6].3H2O Mẫu thử Khuấy hoặc lắc bình  Dịch Lọc 17 40ml  đệm Dung dịch trong suốt 2.5.1.2 CHUẨN BỊ MẪU THỬ ( TCVN 6839 : 2001 ) CHIẾT VÀ KHỬ PROTEIN LƯU Ý  Cho hóa chất theo thứ tự :   12ml dung dịch kẽm sulfat   12ml dung dịch kali hexaxyanoferat   40ml dung dịch đệm  Xoay bình sau mỗi lần thêm hóa chất vào   Dung dịch lọc phải trong suốt và do đó có thể cần phải để dung dịch một lúc để thỏa mãn yêu cầu này    18 2.5.1.3 CHUẨN BỊ MẪU THỬ ( TCVN 6839 : 2001 ) KHỬ NITRAT VỀ NITRIT 0,5 ml  [(CH3COO2)Cd.2H2O]  20 20 ml ml Dịch Dịch Lọc Lọc  0,5 ml huyền phù kẽm Tránh để lẫn không khí vào trong ống  Nếu cần, ly tâm ống trong 5 min ở gia tốc tương đối ít nhất là 200g 19 xoay ống ,  LƯU Ý  5 phút lại lộn  ngược ống Dung dịch thử  2.5.2 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT ( TCVN 6839 : 2001 ) ĐỒ THỊ HIỆU CHUẨN 10 10 G G SỮA SỮA BỘT BỘT GẦY, GẦY, KHÔNG KHÔNG CHỨA CHỨA o o  nước ấm (50  C đến 55 C) , khuấy hoặc lắc  NITRAT NITRAT VÀ VÀ NITRIT NITRIT 20 0,1 ml  kali nitrat silicon  Đo phổ  chống tạo  bọt bước bước sóng sóng 538 538 nm nm 2.5.2 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT ( TCVN 6839 : 2001 ) ĐỒ THỊ HIỆU CHUẨN LƯU Ý  o o Cho vào bình tương ứng 136 ml, 131 ml, 126 ml, 121 ml 116 ml nước ấm (50 C đến 55 C)  Cho vào bình tương ứng ml, ml, 10 ml, 15 ml 20 ml dung dịch kali nitrat  Dựng đồ thị độ hấp thụ đo theo khối lượng nitrat bổ sung vào, tính microgam (0 µg; 150 µg; 300 µg; 450 µg 600 µg tương ứng) 21 2.5.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT ( TCVN 6839 : 2001 ) MẪU TRẮNG 5 ML ML DUNG DUNG DỊCH DỊCH I, I, 5 ML ML DUNG DUNG 2 ml dung dịch III Trộn , để yên dung dịch 5 phút  DỊCH DỊCH II II Đo phổ  MẪU TRẮNG 22 Trộn , để yên dung dịch 5 phút ,  định mức đến vạch   bước bước sóng sóng 538 538 nm nm 2.5.4 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT ( TCVN 6839 : 2001 ) MẪU THỬ Trộn , để yên dung dịch 5 phút  5 ml dung dịch I,     5 ml dung  10 10 ML ML DUNG DUNG DỊCH DỊCH THỬ THỬ MẪU THỬ Lưu Ý  Trộn cẩn thận và để yên dung dịch 5 phút ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng mặt trời chiếu thẳng.   Nếu độ hấp thụ thu được lớn hơn 1,5 ;  thì lặp lại phép xác định sau khi pha loãng dung dịch  23 2 ml  Trộn , để yên dung dịch 5 phút , định mức đến vạch   dun Đo phổ  g  III bước bước sóng sóng 538 538 nm nm dịch  dịch II 2.5.5 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT ( TCVN 6839 : 2001 ) CÔNG THỨC TÍNH Hàm lượng nitrat của mẫu được biểu thị bằng miligam ion nitrat (NO ) trên kilogam:   Trong  m0 là khối lượng phần mẫu thử, tính bằng gam;  m1 là khối lượng của nitrat tương ứng với độ hấp thụ đo được, đọc từ đồ thị hiệu chuẩn , tính bằng microgam; Báo cáo kết quả chính xác đến 1 mg/kg 24 Tài liệu tham khảo  TCVN 6839 : 2001 SỮA BỘT – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITRAT – PHƯƠNG PHÁP KHỬ CADIMI VÀ ĐO PHỔ (PHƯƠNG PHÁP SÀNG LỌC)  TCVN 6400 : 2010 SỮA – SẢN PHẨM CỦA SỮA HƯỚNG DẪN LẤY MẪU QUYẾT ĐỊNH SỐ 867 / 1998 QĐ – BYT DANH MỤC TIÊU CHUẨN VỆ SINH ĐỐI VỚI LƯƠNG THỰC, THỰC PHẨM 25 26