1. Trang chủ
  2. » Tất cả

XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI AMLODIPIN BESYLAT, HYDROCLOROTHIAZID VÀ VALSARTAN TRONG VIÊN NÉN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

74 1,7K 20
Tài liệu đã được kiểm tra trùng lặp

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 74
Dung lượng 1,04 MB

Nội dung

Xuất phát từ yêu cầu thực tế của Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Trung Ương thường xuyên phải phân tích các chế phẩm thuốc trên thị trường và có chức năng chỉ đạo tuyến, hỗ trợ về chuyên môn cho

Trang 1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN HỮU THẢO

XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI AMLODIPIN BESYLAT, HYDROCLOROTHIAZID VÀ VALSARTAN TRONG VIÊN NÉN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

HÀ NỘI 2016

Trang 2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN HỮU THẢO

XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI AMLODIPIN BESYLAT, HYDROCLOROTHIAZID VÀ VALSARTAN TRONG VIÊN NÉN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Trang 3

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện đề tài này, tôi đã nhận được sự hướng dẫn và

giúp đỡ tận tình về mọi mặt từ các thầy cô, bạn bè và đồng nghiêp

Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đoàn

Cao Sơn – Viện trưởng Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, người thầy đã

trực tiếp hướng dẫn, dành nhiều thời gian và tâm huyết giúp tôi hoàn thành luận văn này

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn tới các anh chị em, bạn bè đồng nghiệp tại Khoa Kiểm nghiệm các dạng bào chế - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương đã hết sức giúp đỡ và tạo điều kiện về mọi mặt cho tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn này

Xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu trường Đại học dược

Hà Nội, các thầy cô đã trực tiếp giảng dạy và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập tại trường

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ long biết ơn tới gia đình, bạn bè, những người luôn sát cánh động viên, ủng hộ giúp tôi hoàn thành khóa học và luận văn tốt nghiệp

Xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 30 tháng 03 năm 2016 Học viên

Nguyễn Hữu Thảo

Trang 4

MỤC LỤC

Trang

Lời cảm ơn

Mục lục

Danh mục các ký hiệu, chữ viết tắt

Danh mục các bảng, biểu

Danh mục các hình vẽ, đồ thị

ĐẶT VẤN ĐỀ……… 1

Chương 1 TỔNG QUAN……… 3

1.1 TỔNG QUAN VỀ AMLODIPIN BESYLAT, HYDROCLOROTHIAZID VÀ VALSARTAN……… 3

1.1.1 Tổng quan về Amlodipin besylat……… 3

1.1.2 Tổng quan về Hydroclorothiazid……… 6

1.1.3 Tổng quan về Valsartan……… 10

1.2 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO………… 13

1.2.1 Nguyên lý chung của sắc ký lỏng……… 13

1.2.2 Một số thông số đặc trưng……… 16

1.2.3 Ứng dụng……… 17

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU… 19

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU……… 19

2.1.1 Chất đối chiếu……… 19

2.1.2 Chế phẩm thử……… 19

2.1.3 Dung môi, hóa chất……… 20

Trang 5

2.1.4 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu………

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU………

2.2.1 Xây dựng phương pháp xử lý mẫu………

2.2.2 Khảo sát điều kiện sắc ký………

2.2.3 Thẩm định phương pháp………

2.2.4 Ứng dụng phương pháp phân tích một số chế phẩm trên thị trường 20 21 21 21 21 21 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……… 22

2.3.1 Xây dựng và thẩm định phương pháp định tính, định lượng đồng thời Amlodipin besylat, Hydrochlorothiazid và Valsartan………

2.3.1.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký thích hợp………

2.3.1.2 Thẩm định phương pháp phân tích………

22 22 23 2.3.2 Ứng dụng phương pháp phân tích một số chế phẩm trên thị trường 26 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu……… 26

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU……… 27

3.1 CHUẨN BỊ MẪU………

3.1.1 Mẫu chuẩn………

3.1.1.1 Pha dung dịch chuẩn gốc AML………

3.1.1.2 Pha dung dịch chuẩn gốc HCT………

3.1.1.3 Pha dung dịch chuẩn hỗn hợp gốc………

3.1.2 Mẫu thử………

3.1.3 Mẫu placebo tự tạo………

3.2 LỰA CHỌN DUNG MÔI PHA MẪU VÀ ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ

3.2.1 Lựa chọn dung môi pha mẫu………

3.2.2 Lựa chọn điều kiện sắc ký………

27

27

27

27

27

27

28

28

28

28

Trang 6

3.2.2.1 Bước sóng phát hiện………

3.2.2.2 Pha động ………

3.2.2.3 Cột sắc ký ………

3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP………

3.3.1 Định tính………

3.3.2 Định lượng………

3.3.2.1 Tính chọn lọc ………

3.3.2.2 Tính thích hợp hệ thống………

3.3.2.3 Độ tuyến tính………

3.3.2.4 Độ đúng………

3.3.2.5 Độ chính xác………

3.3.2.6 Độ thô………

3.4 ỨNG DỤNG TRONG ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ CHẾ PHẨM…

3.4.1 Định lượng viên nén Exforge………

3.4.2 Định lượng viên nén Co-Diovan………

3.4.3 Định lượng viên nén Normodipine………

Chương 4 BÀN LUẬN………

4.1 Về phương pháp HPLC………

4.2 Về thẩm định phương pháp phân tích………

4.3 Về ứng dụng của phương pháp………

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……… TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

28

29

31

34

34

38

38

38

39

41

44

46

50

50

51

52

55

55

56

58

59

Trang 7

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

AAB Acid acetic băng

ACN Acetonitril

AML Amlodipin

BP Dƣợc điển Anh

CH3COONH4 Amoni acetat

DĐVN Dƣợc điển Việt Nam

Trang 8

DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU

1.1 Một số nghiên cứu định lượng AML bằng HPLC 5 1.2 Một số nghiên cứu định lượng HCT bằng HPLC 8 1.3 Một số nghiên cứu định lượng VAL bằng HPLC 12 2.4 Các hóa chất dung môi sử dụng trong quá trình thí nghiệm 20

3.6 Kết quả thẩm định tính thích hợp hệ thống 38 3.7 Kết quả thẩm định độ tuyến tính 39 3.8 Kết quả thẩm định độ đúng AML 42 3.9 Kết quả thẩm định độ đúng HCT 43 3.10 Kết quả thẩm định độ đúng VAL 43 3.11 Kết quả thẩm định độ lặp lại của phương pháp 44 3.12 Kết quả thẩm định độ tái lặp của phương pháp 45 3.13 Kết quả đánh giá độ thô khi thay đổi chiều dài cột 47 3.14 Kết quả đánh giá độ thô khi thay đổi pH dung dịch đệm 48 3.15 Kết quả đánh giá độ thô khi thay đổi tỷ lệ % ACN 48 3.16 Kết quả đánh giá độ thô khi thay đổi tốc độ dòng 49 3.17 Kết quả định lượng viên nén Exforge 51 3.18 Kết quả định lượng viên nén Co-Diovan 52 3.19 Kết quả định lượng viên nén Normodipine 53

Trang 9

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Trang 10

1

ĐẶT VẤN ĐỀ

Bệnh tim mạch là nguyên nhân gây tử vong và tàn phế lớn nhất trên thế giới hiện nay và chiếm một tỷ lệ khá cao, nhất là ở những người đứng tuổi và người già Bệnh tim mạch thể hiện dưới các thể khác nhau như suy tim, tăng huyết áp, rối loạn nhịp, đau thắt ngực, rối loạn tuần hoàn não, tăng lipid – huyết …Trong đó, bệnh tăng huyết áp (THA) là yếu tố nguy cơ tim mạch quan trọng nhất và là nguyên nhân hàng đầu dẫn đến tỷ lệ tử vong và tỷ lệ mắc bệnh toàn cầu cao hơn các nguyên nhân khác như sử dụng thuốc lá hay tăng đường huyết Tại Việt Nam, tần suất bệnh THA ở người lớn ngày càng gia tăng Trong những năm 1960, tỷ lệ THA là khoảng 1%; năm 1992 là 11,2%; năm 2001 là 16,3% và năm 2005 là 18,3% Theo một điều tra gần đây nhất (2008) của Viện Tim mạch Việt Nam tiến hành ở người lớn (≥ 25 tuổi) tại 8 tỉnh và thành phố của nước ta thấy tỷ lệ THA đã tăng lên đến 25,1% [8]

Theo “Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị tăng huyết áp” của Bộ Y Tế (2010) (phụ lục 6) [5] có quy định một số loại thuốc điều trị tăng huyết áp như sau:

1 Nhóm thuốc dùng đường uống (lợi tiểu, chẹn kênh calci, tác động lên

hệ renin angiotensin, chẹn beta giao cảm, chẹn alpha giao cảm, tác động lên

hệ giao cảm trung ương, giãn mạch trực tiếp)

2 Nhóm thuốc dùng qua đường tĩnh mạch (Nitroglycerin, Nicardipine, Natri nitroprusside, Esmolol, Labetalol, Hydralazine, Enalaprilat)

Ngày nay, với sự phát triển ngày càng cao của công nghệ nghiên cứu và bào chế dược phẩm, các thuốc đa thành phần nhằm phối hợp tác dụng dược lý của các dược chất đang được sản xuất, lưu hành và sử dụng phổ biến trên thế giới và trong cả nước Một trong số đó là phối hợp thuốc tác động lên hệ renin angiotensin (Valsartan) với thuốc lợi tiểu (Hydroclorothiazid), thuốc tác động lên hệ renin angiotensin (Valsartan) với thuốc chẹn kênh calci (Amlodipin)

Trang 11

2

hoặc sự phối hợp của cả 3 loại thuốc trên Trên thị trường hiện nay có khá nhiều chế phẩm chứa các thành phần này, có thể ở dạng kết hợp 2 hoặc 3 thành phần như: viên nén Exforge, viên nén Co-Diovan, viên nén Exforge HCT (Novartis), viên nén Valzaar H (Torrent Pharm)… Trong các dạng bào chế này, thường thành phần Valsartan có hàm lượng cao (160 mg – 320 mg), các hoạt chất còn lại thường có hàm lượng thấp hơn (5 mg – 25 mg) nên trong phân tích định lượng, valsartan gây ảnh hưởng lớn đến việc phân tích các hoạt chất còn lại Hiện nay, trong các dược điển thông dụng hiện hành như USP

37, BP 2014, DĐVN 4, KP IX, JP XVI, … mới chỉ có các chuyên luận nguyên liệu, viên một hoặc hai thành phần, chưa có phương pháp chung cho việc định lượng đồng thời 3 thành phần trên Xuất phát từ yêu cầu thực tế của Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Trung Ương thường xuyên phải phân tích các chế phẩm thuốc trên thị trường và có chức năng chỉ đạo tuyến, hỗ trợ về chuyên môn cho các trung tâm kiểm nghiệm trong cả nước để đảm bảo, nâng cao năng lực quản lý chất lượng các loại thuốc và với mục đích ban hành một thường quy kỹ thuật trong hệ thống để có thể phân tích, kiểm tra các chế

phẩm có chứa các hoạt chất trên, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Xây

dựng phương pháp định tính và định lượng đồng thời Amlodipin besylat, Hydroclorothiazid và Valsartan trong viên nén bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao” với 2 mục tiêu sau:

1 Xây dựng phương pháp định tính, định lượng đồng thời Amlodipin besylat, Hydroclorothiazid và Valsartan trong viên nén bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

2 Áp dụng phương pháp đã xây dựng để kiểm nghiệm một số chế phẩm

Trang 12

3

Chương 1 TỔNG QUAN

HYDROCLOROTHIAZID VÀ VALSARTAN

1.3.1 Tổng quan về Amlodipin besylat

1.3.1.1 Cấu tạo hóa học

Hình 1.1: Công thức cấu tạo của Amlodipin besylat [32]

- Cảm quan: Bột màu trắng hoặc gần như trắng [1], [13]

- Tính tan: Dễ tan trong methanol, hơi tan trong Ethanol khan, khó tan trong nước và 2-propanol [1], [13]

- Đặc tính phổ hấp thụ UV: dung dịch AML trong dung dịch HCl 0,1N trong methanol có cực đại hấp thụ tại 360 nm (quét phổ từ 300 nm đến 400 nm) [1], [13]

- Đặc tính phổ hấp thụ hồng ngoại: Phổ hấp thụ hồng ngoại của AML có các đỉnh đặc trưng ở các số sóng sau: 561,52; 613,36; 667,66; 753,76; 996,54;

Trang 13

4

1031,94; 1090,98; 1202,19; 1263,25; 1300,93; 1364,91; 1432,65; 1468,64; 1614,45; 1672,20; 1696,53; 2979,01 và 3154,55 cm-1 [30]

- AML có tác dụng chống tăng huyết áp bằng cách trực tiếp làm giãn cơ trơn quanh động mạch ngoại biên và ít có tác dụng hơn trên kênh calci cơ tim

- AML cũng có tác dụng tốt là giảm sức cản mạch máu thận, do đó làm tăng lưu lượng máu ở thận và cải thiện chức năng thận

- AML không có ảnh hưởng xấu đến nồng độ lipid trong huyết tương hoặc chuyển hóa glucose, do đó có thể dùng AML để điều trị tăng huyết áp ở người bệnh đái tháo đường

- Tác dụng chống đau thắt ngực

b Dược động học [2]

- Sinh khả dụng của AML khi uống khoảng 60 - 80% và không bị ảnh hưởng bởi thức ăn Nồng độ đỉnh trong huyết tương đạt được sau khi uống liều khuyến cáo 6 đến 12 giờ Nửa đời trong huyết tương từ 30 - 40 giờ

- Phân bố: Thuốc liên kết với protein huyết tương cao (trên 98%)

- Chuyển hóa trong gan thành các chất mất hoạt tính và bài tiết qua nước tiểu

- Ở người suy gan, nửa đời của AML tăng, vì vậy có thể cần phải giảm liều hoặc kéo dài thời gian giữa các liều dùng

Trang 15

1.3.2 Tổng quan về Hydroclorothiazid

1.3.2.1 Cấu tạo hóa học

Hình 1.2: Công thức cấu tạo của Hydroclorothiazid [32]

- Cảm quan: Bột kết tinh màu trắng hoặc gần như trắng [1], [13]

- Tính tan: Rất ít tan trong nước, hơi tan trong Ethanol 96%, tan trong aceton, tan trong dung dịch kiềm loãng [1], [13]

Trang 16

- HCT làm tăng tác dụng của các thuốc hạ huyết áp khác

b Dược động học [2]

- Sau khi uống, HCT hấp thu tương đối nhanh, khoảng 65 - 75% liều sử dụng, tuy nhiên tỷ lệ này có thể giảm ở người suy tim Thức ăn có thể làm giảm hấp thu của thuốc HCT tích lũy trong hồng cầu 40% - 68% thuốc liên kết với protein huyết tương Thuốc thải trừ chủ yếu qua thận, phần lớn dưới dạng không chuyển hóa Nửa đời của HCT khoảng 9,5 - 13 giờ HCT đi qua hàng rào nhau thai, phân bố và đạt nồng độ cao trong thai nhi

- Tác dụng lợi tiểu xuất hiện sau khi uống 2 giờ, đạt tối đa sau 4 giờ và kéo dài khoảng 12 giờ

- Tác dụng chống tăng huyết áp xảy ra chậm hơn tác dụng lợi tiểu nhiều

và chỉ có thể đạt được tác dụng đầy đủ sau 2 tuần

Trang 17

mm; 3 µm)

- Pha động: Chương trình gradient:

Thời gian (phút)

Pha động A (% tt/t )

Pha động B (% tt/tt)

4 – 10 80 -> 20 20 -> 80

Nguyên liệu

Trang 18

9

Pha động A: 940 ml đệm phosphate pH 3,2 + 60 ml MeOH + 10 ml THF

Pha động B: 500 ml MeOH + 500 ml đệm phosphate pH 3,2 + 50 ml THF

- Detector: λ = 224 nm

- Tốc độ dòng: 1,6 ml/phút

- Thể tích tiêm: 10 µl [32] C18 (250 x 4,6

b Các phương pháp khác

HCT còn được định lượng bằng các phương pháp: Quang phổ hấp thụ [13]; Quang phổ đạo hàm [21], [27]; Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao [18]; Sắc

ký lỏng – khối phổ (LC-MS) [29]

Trang 19

10

1.3.3 Tổng quan về Valsartan

1.3.3.1 Cấu tạo hóa học

Hình 1.3: Công thức cấu tạo của Valsartan [32]

- Cảm quan: Bột màu trắng hoặc gần như trắng, dễ hút ẩm [13]

- Tính tan: Không tan trong nước, tan tự do trong ethanol khan, hơi tan trong methylene clorid [13]

- Đặc tính phổ hấp thụ hồng ngoại: Phổ hấp thụ hồng ngoại của VAL có các đỉnh đặc trưng ở các số sóng sau: 3445,98; 2963,28; 1730,51; 1603,48; 1066,13 cm-1 [16]

Trang 20

- Phân bố: VAL liên kết mạnh với protein huyết tương (khoảng 94 – 97

%), chủ yếu là albumin huyết thanh

- Chuyển hóa: VAL không được chuyển hóa đáng kể, chỉ có 20% liều tìm thấy dưới dạng chất chuyển hóa

- Thải trừ: VAL được thải trừ chủ yếu qua đường mật vào phân (khoảng 83%) nhưng cũng qua thận vào nước tiểu (khoảng 13% liều), chủ yếu dưới dạng không đổi Nửa đời của VAL khoảng 6 giờ

c Chỉ định:

- Điều trị tăng huyết áp ở người lớn và trẻ em trên 6 tuổi, có thể dùng đơn độc hoặc phối hợp với các thuốc chống tăng huyết áp loại khác

- Điều trị bệnh thận do đái tháo đường ở người tăng huyết áp

- Điều trị suy tim sung huyết, người tăng huyết áp suy tim (loạn năng tâm thu hoặc tâm trương) có triệu chứng

- Điều trị sau nhồi máu cơ tim trên bệnh nhân suy thất trái hoặc rối loạn chức năng tâm thu thất trái nhằm giảm tỉ lệ tử vong do tim mạch

d Chống chỉ định [2]

- Quá mẫn với VAL hoặc bất kỳ thành phần nào của thuốc

- Suy gan nặng, xơ gan tắc mật, ứ mật

Trang 22

13

b Các phương pháp khác

VAL còn được định lượng bằng các phương pháp: Chuẩn độ điện thế [13]; Quang phổ hấp thụ [19]; Quang phổ đạo hàm [21], [27]; Quang phổ đạo hàm tỉ đối [20]; Quang phổ huỳnh quang [28]; Điện di mao quản [11]; Sắc ký lỏng – khối phổ (LC-MS) [29]; Sắc ký lỏng sử dụng detector huỳnh quang [14]

1.4 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

1.2.1 Nguyên lý chung của sắc ký lỏng

Sắc ký lỏng là quá trình tách xảy ra trên cột tách với pha tĩnh là chất rắn

và pha động là chất lỏng (sắc ký lỏng – rắn) Mẫu phân tích được chuyển lên cột tách dưới dạng dung dịch Cơ chế của quá trình sắc ký lỏng là hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay phân loại theo kích cỡ

Trong sắc ký lỏng hiệu năng cao, mẫu phân tích được tiêm qua buồng tiêm và được đi vào cột nhờ pha động, các thành phần trong mẫu phân tích được tách ra trên pha tĩnh chứa trong cột rồi đi qua detector để phát hiện và cho các tín hiệu được ghi trên sắc đồ [1], [3], [4], [13], [32]

a Pha tĩnh trong sắc ký lỏng

Pha tĩnh hay dùng nhất trong sắc ký lỏng hiệu năng cao là pha tĩnh mà trong đó các nhóm silanol trên bề mặt hạt silicagel (chất mang) đã được liên kết với các nhóm hóa học khác nhau tạo nên các hợp chất siloxan có độ phân cực khác nhau tùy theo nhóm liên kết:

- Si-O-Si -R

Trang 23

14

Khi R là các nhóm ít phân cực như octyl (C8), octadecyl (C18), phenyl

và pha động phân cực, ta có sắc ký pha đảo (RP-HPLC)

Khi R là nhóm khá phân cực như alkylamin hay alkylnitril pha động là dung môi ít phân cực, ta có sắc ký pha thuận (NP-HPLC) Hiện nay, kỹ thuật RP-HPLC được sử dụng rộng rãi vì tách tốt được nhiều hợp chất khác nhau, thành phần chính của pha động là nước nên rất kinh tế Cột thông dụng là cột ODS (RP18), C8 với cỡ hạt 5 hay 10 m Để cải thiện khả năng tách, tiết kiệm dung môi và thời gian, gần đây người ta đã đưa sắc ký lỏng nhanh (UPLC) vào ứng dụng rộng rãi Trong UPLC, kích thước hạt chất mang nhỏ (thường

từ 1,7 – 2,2 m) và có thể sử dụng cột ngắn hơn (5 – 10 cm) [1], [3], [4]

b Pha động trong sắc ký lỏng

Pha động đóng góp một phần rất quan trọng trong việc tách các chất phân tích trong quá trình sắc ký nhất định Mỗi loại sắc ký đều có pha động rửa giải riêng cho nó để có được hiệu quả tách tốt Pha động có hai loại phân cực và ít phân cực thường dùng cho sắc ký pha đảo và sắc ký pha thuận Tuy nhiên pha động một thành phần đôi khi không đáp ứng được khả năng rửa giải, người ta thường phối hợp 2 hay 3 dung môi để có được dung môi có độ phân cực từ thấp đến cao phù hợp với phép phân tích Sự thay đổi thành phần pha động theo thời gian gọi là rửa giải gradient nồng độ [1], [3], [4]

Trang 24

15

- Detector khúc xạ: thường dùng định lượng hợp chất đường

- Detector độ dẫn: phù hợp các chất có hoạt tính điện hóa

Ngoài ra còn tán xạ ánh sáng bay hơi (ELSD), khúc xạ (RI), điện hóa, phổ khối (MS) trong đó detector chuỗi diode (DAD) cho phép thay đổi bước sóng theo chương trình đã đặt trong một quá trình sắc ký [1], [3], [4]

d Cấu tạo của hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao

Thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao gồm 3 phần chính:

- Phần đầu vào gồm pha động, bơm, hệ thống tiêm mẫu

Trang 25

W1/2: Độ rộng pic ở ½ chiều cao pic

- Để đặc trưng cho mức độ tách của hai chất trên một cột sắc ký người ta thường sử dụng độ phân giải R [1], [3], [4], [13], [32] giữa 2 píc cạnh nhau

Độ phân giải giữa 2 píc (píc số 1 và số 2) được tính theo công thức sau:

Trong đó tR: Thời gian lưu

W: Độ rộng đáy píc

W1/2: Độ rộng đáy pic ở ½ chiều cao pic

Khi: R = 0,75 hai píc không tách tốt, còn xen phủ nhau nhiều

R = 1,0 hai píc tách khá tốt, còn xen phủ nhau 4%

R = 1,5 hai píc tách gần hoàn toàn, chỉ xen phủ 0,3%

- Hệ số bất đối AF (assymetry factor) [1], [3], [4], [13], [32]

AF =

Trong đó: W1/20 là độ rộng pic ở chiều cao 1/20

a là khoảng cách từ đường cao hạ từ đỉnh pic tới đường cong phía trước của pic ở 1/20 chiều cao pic

Trang 26

17

1.2.3 Ứng dụng

a Định tính

Sự giống nhau về thời gian lưu của chất phân tích trên sắc ký đồ dung

dịch chuẩn và dung dịch thử là cơ sở của phép thử định tính Với detector DAD hệ số Match khi chồng 2 phổ của chuẩn và thử cũng đánh giá định tính chất phân tích [3], [4]

b Định lượng

Việc so sánh độ lớn tín hiệu của chất phân tích trong sắc ký đồ dung

dịch chuẩn và dung dịch thử (diện tích hoặc chiều cao píc) trong cùng một điều kiện sắc ký xác định là cơ sở của phép định lượng

Các phương pháp định lượng có thể áp dụng [3], [4]:

- Phương pháp chuẩn ngoại: là phương pháp dựa trên cơ sở so sánh mẫu chuẩn và mẫu thử trong cùng điều kiện sắc ký Kết quả hàm lượng mẫu thử được tính toán dựa trên nồng độ đã biết của mẫu chuẩn và đáp ứng của chất phân tích (diện tích hay chiều cao píc) của mẫu chuẩn và mẫu thử

- Phương pháp chuẩn nội: thêm vào mẫu chuẩn và mẫu thử những lượng bằng nhau của một chất tinh khiết, rồi tiến hành sắc ký trong cùng điều kiện Chất được thêm này gọi là chuẩn nội Từ những dữ kiện về diện tích píc (hay chiều cao píc) và nồng độ của chuẩn, chuẩn nội và mẫu thử, có thể xác định được hàm lượng của thành phần cần định lượng trong mẫu thử

- Phương pháp thêm chuẩn: chủ yếu được sử dụng trong kỹ thuật HPLC khi có vấn đề ảnh hưởng của các chất phụ (Ví dụ: tá dược) Dung dịch mẫu thử được thêm vào một lượng xác định chất chuẩn Các píc thu được của hai dung dịch mẫu thử và mẫu thử thêm chuẩn phải được tiến hành trong cùng điều kiện sắc ký Kết quả được tính toán dựa trên sự chênh lệch nồng độ (lượng chất chuẩn thêm vào) và độ tăng của diện tích píc (hoặc chiều cao píc)

Trang 27

18

- Phương pháp chuẩn hóa diện tích: nồng độ của mẫu thử được tính toán dựa trên diện tích píc tính theo tỉ lệ phần trăm diện tích píc chất thử trên tổng diện tích toàn bộ píc có trong sắc ký đồ Trong HPLC, phương pháp này chỉ đúng khi có sự đáp ứng của detector trên các chất là như nhau, nếu không như nhau thì khi đó với mỗi chất cần có một hệ số hiệu chỉnh

c Thử tạp chất

Về cơ sở cũng giống như định lượng Ngoài ra, đối với phép thử tạp chất liên quan, khi không biết tên tạp chất hoặc không có tạp chuẩn ta có thể tính tỷ lệ tạp chất dựa vào % diện tích pic của tạp so với hoạt chất [3]

Trang 28

Chất chuẩn VAL (hàm lƣợng 99,80 % C24H29N5O3; số kiểm soát: R009P0) của Hội đồng Dƣợc điển Mỹ

2.1.2 Chế phẩm thử

Lựa chọn một số chế phẩm chứa 1, 2 hoặc 3 thành phần nhƣ:

- Viên nén bao phim Exforge HCT

- Viên nén Normodipine

Amlodipin 5 mg

Trang 29

20

2.1.3 Dung môi, hóa chất

Bảng 2.4: Các hóa chất dung môi sử dụng trong quá trình thí nghiệm

chất

1 Kali dihydrophosphat Merck Tinh khiết phân tích

4 Nước cất Viện Kiểm nghiệm

thuốc Trung Ương

Dùng cho HPLC

5 Acid phosphoric Scharlau Tinh khiết phân tích

2.1.4 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Shimadzu LC 20A sử dụng phần mềm LabSolution Ver 1.25

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1260 Infinity DAD sử dụng phần mềm OpenLAB CDS ChemStation Workstation VL

- Máy quang phổ tử ngoại khả kiến Agilent 8453

- Cân phân tích Mettler Toledo AG245

- Cân kỹ thuật Mettler PE 1600

- Bể lắc siêu âm PowerSonic 410

- Máy ly tâm Eppendorf 5804

- Bộ lọc hút chân không

- Dụng cụ: các loại pipet, bình định mức, xylanh, cốc có mỏ, màng lọc mẫu 0,45 µm, các lọ tiêm mẫu (vial) …

Trang 30

21

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

2.2.1 Xây dựng phương pháp xử lý mẫu

- Lựa chọn dung môi pha mẫu: thông dụng, rẻ tiền

- Lựa chọn phương pháp xử lý: siêu âm, lắc cơ học, ly tâm…

2.2.2 Khảo sát điều kiện sắc ký

Khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký phù hợp để phân tích đồng thời AML, HCT và VAL, bao gồm:

- Pha tĩnh: Lựa chọn cột sắc ký có khả năng tách tốt và chọn lọc

- Pha động: Lựa chọn thành phần, tỷ lệ, pH và tốc độ dòng pha động cho thời gian lưu của chất phân tích vừa phải, tách tốt, sắc ký đồ đẹp

- Detector và bước sóng phát hiện: chọn bước sóng tại đó đáp ứng phân tích của AML, HCT và VAL là tối ưu

2.2.3 Thẩm định phương pháp

Thẩm định phương pháp phân tích đã lựa chọn sau khi tiến hành khảo

sát để đảm bảo phương pháp nghiên cứu là phù hợp

2.2.4 Ứng dụng phương pháp phân tích một số chế phẩm trên thị trường

- Thu thập một số chế phẩm chứa 2 hoặc 3 thành phần

- Tiến hành phân tích các thành phần trong chế phẩm theo phương pháp

đã xây dựng

Trang 31

22

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nguyên lý phân tích: Mẫu được nghiền mịn, xử lý mẫu bằng phương pháp thích hợp, lọc qua màng lọc 0,45 μm, tiêm vào hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC, ghi lại sắc ký đồ

Ý nghĩa của phương pháp nghiên cứu: Đưa ra một quy trình phân tích bằng sắc ký lỏng pha đảo (Rp-HPLC) đơn giản, thiết bị phù hợp với đa số các phòng thử nghiệm trong hệ thống kiểm nghiệm: dung môi phân tích thông dụng, dễ kiếm, ít độc hại; detector UV-VIS thông dụng; cách xử lý mẫu đơn giản, dễ tiến hành

Các số liệu đề tài thu thập từ kết quả thực nghiệm ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

2.3.1 Xây dựng và thẩm định phương pháp định tính, định lượng đồng thời Amlodipin besylat, Hydroclorothiazid và Valsartan

2.3.1.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký thích hợp:

Nhận thấy AML, HCT và VAL đều là các chất có độ phân cực tốt, do

đó chúng tôi tiến hành khảo sát hệ sắc ký lỏng pha đảo với pha tĩnh ít phân cực (cột C18) và hệ pha động phân cực để phân tích các chất

Nguyên tắc của việc lựa chọn điều kiện sắc ký là lựa chọn được loại cột

sắc ký, loại pha động, tỷ lệ pha động, tốc độ dòng và bước sóng phát hiện đảm bảo các chất tách nhau rõ rệt, píc gọn, cân đối, thời gian phân tích phù hợp, đáp ứng phân tích là tối ưu cho ba hoạt chất

- Lựa chọn cột sắc ký: khảo sát các loại cột có kích cỡ hạt khác nhau và của các hãng sản xuất khác nhau

- Lựa chọn pha động: Tham khảo các tài liệu, chúng tôi khảo sát trên dung môi pha động gồm ACN, MeOH và dung dịch đệm KH2PO4 0,05M (pH 3,0) với các tỷ lệ khác nhau

Trang 32

23

- Lựa chọn bước sóng: Tiến hành quét phổ hấp thụ UV của AML, HCT

và VAL để lựa chọn bước sóng tối ưu trong phân tích

2.3.1.2 Thẩm định phương pháp phân tích

Xử lý mẫu theo phương pháp đã lựa chọn, chạy sắc ký các dung dịch thu được theo điều kiện đã khảo sát, thẩm định phương pháp dựa trên các chỉ tiêu: tính chọn lọc (độ đặc hiệu của phương pháp), độ tuyến tính, độ đúng, độ chính xác, tính thích hợp hệ thống và độ thô

* Tính thích hợp của hệ thống [6], [7], [17]:

- Xác định tính thích hợp của hệ thống bằng cách tiêm lặp lại 6 lần lien tiếp mẫu chuẩn hỗn hợp có nồng độ nằm trong khoảng tuyến tính Ghi lại thời gian lưu và diện tích píc của các lần sắc ký

- Yêu cầu: + Số đĩa lý thuyết ≥ 3000

+ Hệ số bất đối: 0,8 – 1,5

+ Hệ số phân giải ≥ 2,0

+ Chênh lệch diện tích píc, thời gian lưu giữa các lần tiêm của cùng một mẫu, biểu thị bằng độ lệch chuẩn tương đối (RSD) ≤ 2,0 %

* Độ đặc hiệu của phương pháp [6], [7], [17]:

- Tạo mẫu placebo tự tạo với các thành phần tá dược tương tự như trong chế phẩm nhưng không có hoạt chất AML, HCT và VAL Chuẩn bị mẫu chuẩn đơn, mẫu chuẩn hỗn hợp, mẫu thử, mẫu placebo Xử lý mẫu rồi tiến hành sắc ký với các điều kiện như mẫu thử

- Dựa vào đặc tính của detector DAD, tiến hành quét và chồng phổ VIS của từng hoạt chất trong mẫu chuẩn hỗn hợp và mẫu thử, tính hệ số Match

UV Tính hệ số tinh khiết píc của các hoạt chất trong mẫu thử

Trang 33

- Tiến hành xác lập mối tương quan giữa diện tích píc đáp ứng với nồng

độ của AML, HCT và VAL Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng

độ AML, HCT và VAL tăng dần Tiến hành sắc ký theo điều kiện đã lựa chọn, xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính và xác định hệ số tương quan hồi quy r

- Yêu cầu: Phương trình hồi quy là dạng bậc 1 và giá trị r ≥ 0,999

* Độ chính xác: thể hiện mức độ phân tán kết quả giữa một loạt phép đo

từ nhiều lần tiến hành phân tích trên cùng một mẫu thử đồng nhất dưới những điều kiện xác định [6], [7], [17]

- Độ lặp lại của phương pháp: Độ lặp lại diễn tả độ chính xác của một quy trình phân tích trong cùng điều kiện thí nghiệm trong khoảng thời gian ngắn Tiến hành thí nghiệm 6 mẫu thử song song trên cùng một mẫu chế phẩm (cùng nồng độ 100%), tính hàm lượng lần lượt của AML, HCT và VAL trong mẫu thử Đánh giá sự phân tán số liệu dựa vào giá trị RSD

Yêu cầu: RSD của 6 kết quả ≤ 2,0 %

- Độ tái lặp: Bố trí thí nghiệm tương tự phần độ lặp lại của phương pháp nhưng tiến hành vào thời gian và với phòng thí nghiệm khác Đánh giá kết quả lặp lại trong ngày qua giá trị RSD và đánh giá độ chính xác của phương pháp qua phân tích t-test Microsoft office Excel 2007

Yêu cầu: + RSD của 6 kết quả ≤ 2,0 %

+ RSD của 12 kết quả ≤ 2,0 %

Trang 34

3 lần thử riêng biệt

- Tính tỉ lệ thu hồi của AML, HCT và VAL chuẩn thêm vào mẫu thử

- Yêu cầu: + Tỉ lệ thu hồi đạt 98,0 % - 102,0 %

+ Giá trị RSD ≤ 2,0 %

* Độ thô của phương pháp là khả năng của quy trình phân tích cho các kết quả có độ chính xác và độ đúng chấp nhận được dưới những điều kiện có sự thay đổi nhỏ về độ ổn định của các dung dịch phân tích, trị số pH, nhiệt độ, thành phần của hệ dung môi sắc ký, cột sắc ký do các nhà cung cấp khác nhau [6], [7], [17]

- Tiến hành xác định hàm lượng mẫu thử dưới các điều kiện có sự thay đổi nhỏ như sau:

+ Thay đổi chiều dài cột

+ Thay đổi pH dung dịch đệm: trong khoảng ± 0,2

+ Thay đổi tỉ lệ pha động: trong khoảng ± 30% nồng độ tương đối (hoặc 2% nồng độ tuyệt đối) đối với thành phần dung môi có tỉ lệ nhỏ (tùy theo giá trị nào lớn hơn)

+ Thay đổi tốc độ dòng: trong khoảng ± 50%

- Đánh giá độ thô qua phân tích thống kê ANOVA trên Microsoft office Excel 2007

- Yêu cầu: Ftn < Ftc (p-value > 0,05)

Trang 35

26

2.3.2 Ứng dụng phương pháp phân tích một số chế phẩm trên thị trường

Ứng dụng phương pháp phân tích đã lựa chọn để định lượng các chế phẩm: Viên nén bao phim Exforge HCT, viên nén Exforge, viên nén Co-diovan, viên nén Normodipine

Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) = %

* Tương quan hồi quy tuyến tính:

Phương trình hồi quy tuyến tính thể hiện quan hệ giữa diện tích pic sắc

ký và nồng độ chất phân tích: Y = aX +b

Hệ số góc a: Hàm SLOPE

Hệ số chắn b: Hàm INTERCEPT

Hệ số tương quan r: Hàm CORREL

* Phân tích ANOVA để đánh giá độ thô của phương pháp

* Phân tích t-test để đánh giá độ chính xác của phương pháp

Trang 36

27

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 CHUẨN BỊ MẪU

3.1.1 Mẫu chuẩn

3.1.1.1 Pha dung dịch chuẩn gốc AML

Cân chính xác khoảng 43,45 mg chuẩn AML vào bình định mức 50 ml Hòa tan và pha loãng bằng MeOH vừa đủ thể tích, lắc đều Được dung dịch chuẩn gốc AML có nồng độ 0,625 mg/ml

3.1.1.2 Pha dung dịch chuẩn gốc HCT

Cân chính xác khoảng 39,24 mg chuẩn HCT vào bình định mức 50 ml Hòa tan và pha loãng bằng MeOH vừa đủ thể tích, lắc đều Được dung dịch chuẩn gốc HCT có nồng độ 0,78125 mg/ml

3.1.1.3 Pha dung dịch chuẩn hỗn hợp gốc

Cân chính xác khoảng 50,1 mg chuẩn VAL vào bình định mức 25 ml Thêm chính xác 5 ml dung dịch chuẩn gốc AML và 5 ml dung dịch chuẩn gốc HCT vào bình định mức trên, hòa tan và pha loãng bằng MeOH vừa đủ thể tích, lắc đều Được dung dịch chuẩn hỗn hợp gốc có nồng độ AML, HCT và VAL tương ứng là 0,125 mg/ml 0,1562 mg/ml và 2 mg/ml

3.1.2 Mẫu thử

Cân chính xác 20 viên nén bao phim Exforge HCT, tính khối lượng trung bình viên Nghiền mịn Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng khoảng 100 mg VAL cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 30 ml MeOH, siêu âm trong 15 phút Thêm MeOH đến vạch, lắc đều Ly tâm 4000 vòng/phút trong 5 phút Hút chính xác 2 ml dịch trong ở trên cho vào bình định mức 25 ml, pha loãng bằng pha động đến vừa đủ thể tích Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm

Trang 37

28

3.1.3 Mẫu placebo tự tạo

Trộn đều các thành phần tá dược Nghiền mịn Cân chính xác một lượng tương ứng khoảng 134,5 mg cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 30 ml MeOH, siêu âm trong 15 phút Thêm MeOH đến vạch, lắc đều

Ly tâm 4000 vòng/phút trong 5 phút Hút chính xác 2 ml dịch trong ở trên cho vào bình định mức 25 ml, pha loãng bằng pha động đến vừa đủ thể tích Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm

3.2 LỰA CHỌN DUNG MÔI PHA MẪU VÀ ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ 3.2.1 Lựa chọn dung môi pha mẫu

Dung môi pha mẫu cần hòa tan tốt dược chất, nhanh chóng và đảm bảo

độ ổn định của dược chất trong thời gian phân tích

AML, HCT và VAL đều có độ phân cực tốt, do đó chúng tôi tiến hành pha chuẩn AML, chuẩn HCT và chuẩn VAL trong các dung môi: ACN, MeOH Kết quả nhận thấy các chất tan tốt trong cả hai loại dung môi Tuy nhiên, MeOH là dung môi thông dụng và rẻ tiền hơn ACN, do đó chúng tôi đã lựa chọn MeOH làm dung môi pha mẫu

3.2.2 Lựa chọn điều kiện sắc ký

Qua tham khảo các tài liệu và điều kiện sẵn có pha tĩnh, chúng tôi tiến hành khảo sát điều kiện sắc ký về cột sắc ký; thành phần, tỉ lệ pha động và bước sóng phát hiện sao cho píc của ba hoạt chất được tách riêng, píc đẹp, đồng thời có thời gian phân tích phù hợp

3.2.2.1 Bước sóng phát hiện

Tiến hành quét phổ hấp thụ UV các dung dịch chuẩn đơn có nồng độ AML, HCT và VAL trong pha động tương ứng lần lượt là 0,01 mg/ml;

Ngày đăng: 18/11/2020, 14:00

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
3. Bộ Y tế (2010), Đảm bảo chất lượng thuốc và một số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, NXB Y học, Hà Nội, tr. 158-179 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Đảm bảo chất lượng thuốc và một số phương pháp kiểm nghiệm thuốc
Tác giả: Bộ Y tế
Nhà XB: NXB Y học
Năm: 2010
6. Bộ Y tế (2014), “Hướng dẫn của Asean về thẩm định quy trình phân tích”, Thông tư 44/2014/TT-BYT Quy định việc đăng ký thuốc, tr.261-274 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Hướng dẫn của Asean về thẩm định quy trình phân tích”, "Thông tư 44/2014/TT-BYT Quy định việc đăng ký thuốc
Tác giả: Bộ Y tế
Năm: 2014
7. Cục Quản lý dược (2013), “Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc”, Quyết định số 07/QĐ-QLD về việc ban hành Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc, phụ lục 8, tr. 30-35 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc”, "Quyết định số 07/QĐ-QLD về việc ban hành Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc
Tác giả: Cục Quản lý dược
Năm: 2013
8. GS.TS. Nguyễn Lân Việt (2011), “Tăng huyết áp-Vấn đề cần được quan tâm hơn”, Dự án phòng, chống tăng huyết áp, Chương trình mục tiêu quốc gia Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tăng huyết áp-Vấn đề cần được quan tâm hơn
Tác giả: GS.TS. Nguyễn Lân Việt
Năm: 2011
9. Tạ Mạnh Hùng, Nguyễn Thị Thanh Thảo, Hà Minh Hiền, Phùng Thị Vinh và cộng sự (2010), “Nghiên cứu định lƣợng Amlodipin trong huyết tương bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC- MS/MS) và áp dụng trong đánh giá tương đương sinh học”, Tạp chí kiểm nghiệm thuốc, số 3.2010, tập 8 (29), tr. 1-5 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu định lƣợng Amlodipin trong huyết tương bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) và áp dụng trong đánh giá tương đương sinh học”, "Tạp chí kiểm nghiệm thuốc
Tác giả: Tạ Mạnh Hùng, Nguyễn Thị Thanh Thảo, Hà Minh Hiền, Phùng Thị Vinh và cộng sự
Năm: 2010
10. A. C. Moffat (1986), "Clarke's Isolation and Identification of drugs - 2 nd edition", The pharmaceutical press, pp. 664 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Clarke's Isolation and Identification of drugs - 2nd edition
Tác giả: A. C. Moffat
Năm: 1986
11. Alnajjar AO. (2011), “Validation of a capillary electrophoresis method for the simultaneous determination of amlodipine besylate and valsartan in pharmaceuticals and human plasma”, Journal of AOAC International, 94(2), pp. 498-502 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Validation of a capillary electrophoresis method for the simultaneous determination of amlodipine besylate and valsartan in pharmaceuticals and human plasma”, "Journal of AOAC International
Tác giả: Alnajjar AO
Năm: 2011
12. Anandakumar K. and Jayamariappan M. (2011), “Absorption correction method for the simultaneous estimation of Amlodipine besylate, Valsartan and Hydrochlorothiazide in bulk and in combined tablet dosage form”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(1), pp. 23-27 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Absorption correction method for the simultaneous estimation of Amlodipine besylate, Valsartan and Hydrochlorothiazide in bulk and in combined tablet dosage form”, "International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences
Tác giả: Anandakumar K. and Jayamariappan M
Năm: 2011
13. British Pharmacopoeia (2014), “Amlodipine Besilate”, “Hydrochlorothiazide”, “Hydrochlorothiazide Tablets”, “Liquid Chromatography”, “Valsartan”, vol. I, II, III, V, pp. 21, 83, 604, 783, 1071 Sách, tạp chí
Tiêu đề: British Pharmacopoeia" (2014), “Amlodipine Besilate”, “Hydrochlorothiazide”, “Hydrochlorothiazide Tablets”, “Liquid Chromatography”, “Valsartan
Tác giả: British Pharmacopoeia
Năm: 2014
14. Del Rosario Brunetto M, Contreras Y, Clavijo S, Torres D, Delgado Y, Ovalles F, Ayala C, Gallignani M, Estela JM, Martin VC (2009), “Determination of losartan, telmisartan, and valsartan by direct injection of human urine into a column-switching liquid chromatographic system with fluorescence detection”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 50(2), pp. 194-199 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Determination of losartan, telmisartan, and valsartan by direct injection of human urine into a column-switching liquid chromatographic system with fluorescence detection”, "Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis
Tác giả: Del Rosario Brunetto M, Contreras Y, Clavijo S, Torres D, Delgado Y, Ovalles F, Ayala C, Gallignani M, Estela JM, Martin VC
Năm: 2009
15. Eyad S. M. Abu-Nameh, Khalid Abu-Shandi, Munib Saket, Maher Salim, O. M. Othman, Y. Mohammad (2011), “Simultaneous Determination of Amlodipine Besylate and Valsartan in Tablets by High Performance Liquid Chromatography with UV Detection”, Jordan Journal of Pharmaceutical Sciences, 4(2), pp.105-113 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Simultaneous Determination of Amlodipine Besylate and Valsartan in Tablets by High Performance Liquid Chromatography with UV Detection”, "Jordan Journal of Pharmaceutical Sciences
Tác giả: Eyad S. M. Abu-Nameh, Khalid Abu-Shandi, Munib Saket, Maher Salim, O. M. Othman, Y. Mohammad
Năm: 2011
16. G.N.A.Lakshmi, Kumara Swamy S and Agaiah Goud B (2013), “Preparation and Characterization of Mouth Dissolving Films of Valsartan Solid Dispersion”, Journal of Advanced Pharmaceutical Sciences, 3(1), pp. 415-427 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Preparation and Characterization of Mouth Dissolving Films of Valsartan Solid Dispersion”, "Journal of Advanced Pharmaceutical Sciences
Tác giả: G.N.A.Lakshmi, Kumara Swamy S and Agaiah Goud B
Năm: 2013
18. Karunanidhi Santhana Lakshmi and Sivasubramanian Lakshmi (2012), “Simultaneous Analysis of Losartan Potassium, Amlodipine Besylate and Hydrochlorothiazide in Bulk and in Tablets by High-Performance Thin Layer Chromatography with UV- Absorption Densitometry”, Journal of Analytical Methods in Chemistry, 2012 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Simultaneous Analysis of Losartan Potassium, Amlodipine Besylate and Hydrochlorothiazide in Bulk and in Tablets by High-Performance Thin Layer Chromatography with UV-Absorption Densitometry”, "Journal of Analytical Methods in Chemistry
Tác giả: Karunanidhi Santhana Lakshmi and Sivasubramanian Lakshmi
Năm: 2012
19. K.R.Gupta, A.D.Mahapatra, A.R.Wadodkar and S.G.Wadodkar (2010), “Simultaneous UV Spectrophotometric Determination of Valsartan and Amlodipine in Tablet”, International Journal of ChemTech Research, 2(1), pp. 551-556 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Simultaneous UV Spectrophotometric Determination of Valsartan and Amlodipine in Tablet”, "International Journal of ChemTech Research
Tác giả: K.R.Gupta, A.D.Mahapatra, A.R.Wadodkar and S.G.Wadodkar
Năm: 2010
20. Kul D, Dogan-Topal B, Kutucu T, Uslu B, Ozkan SA (2010), “High- Performance Liquid Chromatographic and First Derivative of the Ratio Spectrophotometric Determination of Amlodipine and Valsartan in Their Binary Mixtures”, Journal of AOAC International, 93(3), pp. 882-890 Sách, tạp chí
Tiêu đề: High-Performance Liquid Chromatographic and First Derivative of the Ratio Spectrophotometric Determination of Amlodipine and Valsartan in Their Binary Mixtures”, "Journal of AOAC International
Tác giả: Kul D, Dogan-Topal B, Kutucu T, Uslu B, Ozkan SA
Năm: 2010
21. Mariusz Stolarczyk, Anna Maslanka, Jan Krzek and Joanna Milczarek (2008), “Application of Derivative Spectrophotometry for Determination of Enalapril, Hydrochlorothiazide and Valsartan in Complex Pharmaceutical Preparations”, Acta Poloniae Pharmaceutica, 65(3), pp. 275-281 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Application of Derivative Spectrophotometry for Determination of Enalapril, Hydrochlorothiazide and Valsartan in Complex Pharmaceutical Preparations”, "Acta Poloniae Pharmaceutica
Tác giả: Mariusz Stolarczyk, Anna Maslanka, Jan Krzek and Joanna Milczarek
Năm: 2008
23. M.Manoranjani1 and T. Bhagyakumar (2011), “Rp-HPLC method for the estimation of valsartan in Pharmaceutical dosage forms”, International Journal of Science Innovations and Discoveries, 1(2), pp. 101-108 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Rp-HPLC method for the estimation of valsartan in Pharmaceutical dosage forms”, "International Journal of Science Innovations and Discoveries
Tác giả: M.Manoranjani1 and T. Bhagyakumar
Năm: 2011
24. Moussa BA, El-Zaher AA, Mahrouse MA, Ahmed MS. (2013), “Simultaneous determination of amlodipine besylate and atorvastatin calcium in binary mixture by spectrofluorimetry and HPLC coupled with fluorescence detection”, Analytical Chemistry Insights, 8, pp. 107-115 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Simultaneous determination of amlodipine besylate and atorvastatin calcium in binary mixture by spectrofluorimetry and HPLC coupled with fluorescence detection”, "Analytical Chemistry Insights
Tác giả: Moussa BA, El-Zaher AA, Mahrouse MA, Ahmed MS
Năm: 2013
25. Nikam M.B., Dhamane H., Aligave A., Kondawar M.S. (2010), “Simultaneous estimation of valsartan, amlodipine besylate and hydrochlorothiazide by first order derivative UV Spectrophotometric method”, International Journal Of Pharmacy&amp;Technology, 2(3), pp. 642-650 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Simultaneous estimation of valsartan, amlodipine besylate and hydrochlorothiazide by first order derivative UV Spectrophotometric method”, "International Journal Of Pharmacy&Technology
Tác giả: Nikam M.B., Dhamane H., Aligave A., Kondawar M.S
Năm: 2010
26. Samya M. El-Gizawy, Osama H. Abdelmageed, Mahmoud A. Omar, Sayed M. Deryea, Ahmed M. Abdel-Megied (2012),“Development and Validation of HPLC Method for Simultaneous Determination of Amlodipine, Valsartan, Hydrochlorothiazide in Dosage Form and Spiked Human Plasma”, American Journal of Analytical Chemistry, 3, pp. 422-430 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Development and Validation of HPLC Method for Simultaneous Determination of Amlodipine, Valsartan, Hydrochlorothiazide in Dosage Form and Spiked Human Plasma”, "American Journal of Analytical Chemistry
Tác giả: Samya M. El-Gizawy, Osama H. Abdelmageed, Mahmoud A. Omar, Sayed M. Deryea, Ahmed M. Abdel-Megied
Năm: 2012

TRÍCH ĐOẠN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w