Xây dựng phương pháp định lượng rivaroxaban trong viên nén bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG RIVAROXABAN TRONG VIÊN NÉN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT Mã sinh viên: 1501534 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG RIVAROXABAN TRONG VIÊN NÉN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Thuận Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa Dược, Đại học Dược Hà Nội Viện công nghệ Dược phẩm Quốc Gia HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Thuận – giảng viên mơn Hóa Dược, Đại học Dược Hà Nội dành nhiều thời gian tâm huyết để giảng dạy giúp đỡ q trình nghiên cứu khoa học mơn Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn chân thành đến PGS TS Nguyễn Ngọc Chiến toàn thể giảng viên, cán bộ, kỹ thuật viên Viện Cơng Nghệ Dược phẩm Quốc Gia, Bộ mơn Hóa Dược - Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành tốt khóa luận Cuối xin cảm ơn động viên, giúp đỡ từ gia đình bạn bè suốt thời gian thực đề tài Do lực thân có hạn, đề tài khơng tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận ý kiến đóng góp để hồn thiện nghiên cứu Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2020 Sinh viên Nguyễn Thị Ánh Tuyết MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Rivaroxaban 1.1.1 Cơng thức hóa học tính chất hóa lí 1.1.2 Đặc điểm dược động học [14] 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Chỉ định, chống định 1.1.5 Một số chế phẩm chứa hoạt chất Rivaroxaban lưu hành Việt Nam………………………………………………………………………… 1.2 Các phương pháp phân tích cơng bố 1.3 Sơ lược phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Các kiểu sắc ký lỏng hiệu cao 1.3.3 Cơ sở lý thuyết việc lựa chọn điều kiện sắc ký 1.3.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 1.4 Vài nét thẩm định phương pháp phân tích 10 1.4.1 Tính đặc hiệu 10 1.4.2 Độ 10 1.4.3 Độ xác 10 1.4.4 Độ tuyến tính 11 1.4.5 Khoảng xác định 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị đối tượng nghiên cứu 12 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 2.1.2 Nguyên vật liệu, dung mơi, hóa chất 12 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ 12 2.2 Nội dung nghiên cứu 13 2.2.1 Khảo sát xây dựng phương pháp phân tích 13 2.2.2 Thẩm định phương pháp phân tích 13 2.2.3 Ứng dụng phương pháp thẩm định để kiểm tra chất lượng viên nén bao phim Rivaroxaban 15 mg 13 2.3 Phương pháp nghiên cứu 13 2.3.1 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 13 2.3.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 14 2.3.3 Thẩm định quy trình phân tích 14 2.3.4 Ứng dụng thực tế 16 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 16 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 17 3.1 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 17 3.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 17 3.2.1 Khảo sát bước sóng phát 17 3.2.2 Khảo sát pha động 18 3.3 Thẩm định phương pháp định lượng Rivaroxaban HPLC 20 3.3.1.Độ phù hợp hệ thống 20 3.3.2 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 20 3.3.3 Độ đặc hiệu 21 3.3.4 Độ 22 3.3.5 Độ xác (độ lặp lại độ xác trung gian) 23 3.4 Áp dụng kiểm nghiệm viên nén Rivaroxaban 15 mg 25 3.4.1 Định lượng 25 3.4.2 Thử độ hòa tan 25 3.5 Bàn luận 27 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 29 4.1 Kết luận 29 4.2 Đề xuất 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC 32 DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Chú thích ACN Acetonitril ATC Hệ thống phân loại giải phẫu - điều trị - hoá học C18 Octadecylsilan C max Nồng độ cực đại DMSO Dimethyl sulfoxide DVT Huyết khối tĩnh mạch sâu ELSD Detector tán xạ bay HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC–MS/MS Sắc ký lỏng ghép đầu dò khối phổ HPTLC Sắc kí lớp mỏng hiệu cao Log P Hệ số phân bố dầu nước MeOH Methanol NOAC PE Thuốc chống đông đường uống không kháng vitamin K Thuyên tắc phổi r Hệ số tuyến tính RSD Độ lệch chuẩn tương đối RXN Rivaroxaban TLC Sắc ký lớp mỏng TLTK tR Tài liệu tham khảo Thời gian lưu v/v Thể tích/thể tích Vss Thể tích phân bố DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Một số chế phẩm chứa hoạt chất Rivaroxaban đượợc lưu hành Việt Nam Bảng 1.2 Các phương pháp phân tích Rivaroxaban sắc ký lỏng hiệu cao Bảng 3.1 Kết độ phù hợp hệ thống Bảng 3.2 Kết khảo sát độ tuyến tính Bảng 3.3 Độ thu hồi Rivaroxaban Bảng 3.4 Kết độ xác ngày (ngày thứ nhất) Bảng 3.5 Kết độ xác khác ngày (ngày thứ 2) Bảng 3.6 Kết độ xác khác ngày (ngày thứ 3) Bảng 3.7 Giá trị RSD độ xác ba ngày Bảng 3.8 Kết định lượng viên nén bao phim Rivaroxaban 15 mg Bảng 3.9 Kết định lượng Rivaroxaban dung môi MeOH:H2O (50:50, v/v) mơi trường thử độ hịa tan Bảng 3.10 Kết thử độ hòa tan viên nén bao phim Rivaroxaban 15 mg DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Rivaroxaban Hình 3.1 Phổ xác định bước sóng hấp thụ mẫu chuẩn Rivaroxaban Hình 3.2 Phổ xác định bước sóng hấp thụ mẫu thử Rivaroxaban Hình 3.3 Sắc ký đồ Rivaroxaban chạy pha động ACN : H2O (55:45, v/v) Hình 3.4 Sắc ký đồ Rivaroxaban chạy pha động MeOH : H2O (55:45, v/v) Hình 3.5 Sắc ký đồ Rivaroxaban chạy pha động MeOH : H2O(50:50, v/v) Hình 3.6 Sắc ký đồ placebo Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ Rivaroxaban Hình 3.8 Sắc ký đồ thẩm định tính đặc hiệu Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu thử độ hòa tan ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện thuốc chống đơng máu kê đơn rộng rãi phịng điều trị bệnh tim mạch máu như: Nhồi máu tim, huyết khối tĩnh mạch sâu thun tắc phổi… Các nhóm thuốc chống đơng truyền thống bao gồm: Heparin chất đối kháng vitamin K (Coumarin), Wafarin thuốc sử dụng rộng rãi Tuy nhiên Wafarin có số điều trị hẹp, tỷ lệ chảy máu cao cần theo dõi đông máu thường xuyên, dẫn đến nhu cầu phát triển thuốc chống đông máu hiệu Các thuốc chống đông đường uống không kháng vitamin K (NOAC) đời giải nhược điểm Thuốc khởi phát tác dụng nhanh hơn, hiệu hơn, tác dụng chống đơng dự đốn tốt không cần theo dõi thường xuyên chỉnh liều Wafarin Các đại diện nhóm bao gồm: Rivaroxaban, Edoxaban, Epixaban… Rivaroxaban cấp phép lưu hành Mỹ vào năm 2011 [12] Hiện Việt Nam có số cơng ty tiến hành nghiên cứu, làm thủ tục đăng ký để phép sản xuất thuốc generic với hoạt chất rivaroxaban Trong trình nghiên cứu, để đánh giá chất lượng thuốc, việc xây dựng phương pháp định lượng cần thiết Từ thực đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng Rivaroxaban viên nén sắc ký lỏng hiệu cao” với mục đích: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Rivaroxaban sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Áp dụng phương pháp thẩm định, định lượng đánh giá độ hòa tan viên nén bao phim Rivaroxaban 15 mg Viện công nghệ dược phẩm Quốc gia nghiên cứu sản xuất PHỤ LỤC Sắc ký đồ mẫu đường chuẩn Sắc ký đồ độ xác Sắc ký đồ thử độ hòa tan viên nén Rivaroxaban 15 mg Sắc ký đồ định lượng viên nén Rivaroxaban 15 mg Phụ lục Sắc ký đồ mẫu đường chuẩn Phụ lục Sắc ký đồ độ xác Phụ lục Sắc ký đồ thử độ hòa tan viên nén Rivaroxaban 15 mg Phụ lục Sắc ký đồ định lượng viên nén Rivaroxaban 15 mg ... phương pháp định lượng Rivaroxaban viên nén sắc ký lỏng hiệu cao? ?? với mục đích: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Rivaroxaban sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Áp dụng phương pháp thẩm định, định. .. tĩnh Có nhiều loại kỹ thuật sắc ký khác sắc ký giấy, sắc ký khí, sắc ký lỏng , sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký trao đổi ion sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid... đơn giản độ nhạy cao phương pháp Trong nghiên cứu này, nghiên cứu phương pháp định lượng Rivaroxaban sắc ký lỏng hiệu cao Các phương pháp phân tích Rivaroxaban sắc ký lỏng hiệu cao nghiên cứu sơ