BÀI GIẢNG PHÁT HIỆN BIẾN DỊ

 Trình bày khái niệm biến dị di truyền  Trình bày nguyên lý kỹ thuật sinh học phân tử bản: Điện di protein điện di ADN, kỹ thuật PCR, Southern blot, xác định trình tự ADN  Phân tích ưu điểm, nhược điểm, ứng dụng y học kỹ thuật  Jkkhkhk  jkjkjk  Điện di chuyển động phân tử điện trường  Thành phần tích điện âm di chuyển cực dương ngược lại  Phân tử tích điện nhiều di chuyển nhanh  Phân tử lớn di chuyển chậm  Sự khác biệt acid amin phân tử protein gây nên khác biệt điện tích protein  Bệnh hồng cầu hình liềm: Glutamic (2 nhóm carboxyl) bị thay Valine (1 nhóm carboxyl)  NHƯỢC ĐiỂM: Không phát loại đột biến - Đột biến im lặng - Đột biến làm đổi nghĩa codon nhưngacid amin thay không thay đổi điện tích - Đột biến xảy đoạn ADN không mã hóa  Các phân tử ADN mang điêên tích âm sẽ di chuyển từ cực âm đến cực dương gel agarose polyacrylamide đăêt điêên trường  Phát băng ADN: - Nhuôêm ethidium bromide: đọc đèn UV - Có thể nhuộm bạc, xanh methylene  Nhanh,  Rất dễ thực nhạy  Có thể khuếch đại ADN mô, tế bào giáng hoá, tế bào môi trường đặc biệt, mô cố định formalin, ADN giáng hoá (nếu trình tự ngắn)  Dễ phát sản phẩm  Phải biết trình tự ADN đầu (flanking)  Có thể nhiễm ADN từ phòng thí nghiệm (khắc phục được)  Chỉ thực với đoạn ADN cần khảo sát có kích thước ngắn  Chẩn đoán đột biến gene bệnh lý di truyền - Mơ hồ giới tính: xác định gen SRY - Mất đoạn nhỏ NST Y người vô tinh, thiểu tinh trùng - Teo Duchene: đoạn gen dystrophin  Ứng dụng pháp y  Tạo dòng nhanh chóng, phương tiện giúp nghiên cứu gen, genome  Là kỹ thuật lai phân tử probe ADN với ADN đích để nhận dạng gen đặc hiệu  Thực dựa việc chuẩn bị đoạn DNA cắt enzym cắt hạn chế phân tách cách điện di gel  Các đoạn ADN biến tính, chuyển lên màng để lai phân tử  Nguồn gốc: enzym vi khuẩn, có nhiệm vụ cắt ADN virus, nhằm hạn chế xâm nhập virus  Có vị trí nhận biết đặc hiệu ADN Là trình tự ADN lặp lại đảo ngược 4-8 nu  Enzym cắt thông dụng: EcoRI Vị trí nhận biết đặc hiệu là: GAATTC CTTAAG  Đột biến thêm nucleotide mà có kích thước 50-100 bp  Đột biến thay nucleotide làm vị trí cắt tạo vị trí cắt enzym cắt hạn chế biến GAG → GTG codon  Làm vị trí cắt MstII (CCTNAGG) CCTGAGG → CCTGTGG  Đột  Mất nhiều thời gian, nhiều công đoạn phức tạp  Phụ thuộc vào kỹ thuật tạo dòng (bằng pp tế bào PCR) để tạo probe  Cần nhiều ADN từ bệnh phẩm (5-10 µg) → cần nhiều máu để tách chiết ADN  Không thực từ ADN thô  Phương pháp hóa học: Maxam Gilbert  Phương pháp enzym (pp dideoxy) Frederick Sanger  Dùng dideoxynucleotide thay phần deoxynucleotide trình tổng hợp mạch ADN bổ sung