Nghiên cứu phát hiện và định lượng một số đột biến của hội chứng động kinh, giật cơ với sợi cơ không đều MERRF ở người việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Bùi Thị Khánh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ ĐỘT BIẾN CỦA HỘI CHỨNG ĐỘNG KINH, GIẬT CƠ VỚI SỢI CƠ KHÔNG ĐỀU – MERRF Ở NGƯỜI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2015 iii ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Bùi Thị Khánh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ ĐỘT BIẾN CỦA HỘI CHỨNG ĐỘNG KINH, GIẬT CƠ VỚI SỢI CƠ KHÔNG ĐỀU – MERRF Ở NGƯỜI VIỆT NAM Mã số: 60420114 Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Phan Tuấn Nghĩa Hà Nội – 2015 iv LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Phan Tuấn Nghĩa, thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện cho suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Thị Hồng Loan, ThS Nguyễn Văn Minh CN Phùng Bảo Khánh anh chị em làm việc phòng Protein tái tổ hợp thuộc Phòng Thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Enzyme Protein, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên giúp đỡ trình thực nghiệm Tôi xin chân thành cám ơn Ban giám hiệu Trường Cao đẳng Y tế Thái Bình, Trưởng khoa Y học sở anh em môn Y học sở tạo điều kiện thuận lợi cho học nâng cao trình độ Tôi xin chân thành cảm ơn đến toàn thể thầy, cô giáo Bộ môn Sinh lý thực vật Hóa sinh, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu, Phòng Sau Đại học, Ban Chủ nhiệm Khoa Sinh học Phòng chức Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện cho học tập, hoàn thành chương trình học Cao học Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình bạn bè động viên, khích lệ hoàn thành khóa học Hà Nội, tháng 12 năm 2015 HVCH: Bùi Thị Khánh v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN … ………………………………………………………… ii MỤC LỤC … …………………………………………………………………… iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT….……………….…….vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH……………………………………………… .xii CÁC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CẤU TRÚC VÀ CHỨC NĂNG CỦA TY THỂ NGƯỜI .3 1.1.1 Cấu trúc ty thể 1.1.2 Chức ty thể .6 1.1.2.1 Ty thể hoạt động nhà máy lượng tế bào 1.1.2.2 Ty thể trình lão hóa 1.1.2.3 Ty thể trình tự chết tế bào 1.1.3 Hệ gen ty thể đặc điểm di truyền hệ gen ty thể 10 1.1.3.1 Hệ gen ty thể 10 1.1.3.2 Đặc điểm di truyền hệ gen ty thể .12 1.1.3.3 Tính chất dị tế bào chất tốc độ đột biến ty thể 12 1.2 ĐỘT BIẾN GEN TY THỂ VÀ CÁC BỆNH LIÊN QUAN 13 1.2.1 Các loại đột biến gen ty thể 13 1.2.1.1 Đột biến điểm 14 1.2.1.2 Đột biến cấu trúc mtDNA 15 1.2.2 Các bệnh đột biến gen ty thể .15 1.2.2.1 Hội chứng gây đột biến điểm phổ biến gen mã hóa tRNA .17 1.2.2.2 Các hội chứng liên quan đến đột biến điểm phổ biến gen mã hóa protein 19 1.2.2.3 Các bệnh liên quan đến đột biến gen mã hóa rRNA 21 1.2.2.4 Bệnh gây nên đột biến khác mtDNA 22 1.3 HỘI CHỨNG ĐỘNG KINH, GIẬT CƠ VỚI SỢI CƠ KHÔNG ĐỀU (MERRF) 24 vi 1.3.1 Các đột biến hội chứng MERRF 25 1.3.1.1 Đột biến A8344G 25 1.3.1.2 Đột biến T8356C 26 1.3.1.3 Đột biến G8363A 26 1.3.2 Những tác động hội chứng MERRF người bệnh 27 1.3.3 Các phương pháp phát đột biến MERRF 29 1.3.3.1 Phát đột biến thuộc hội chứng MERRF PCR kết hợp với RFLP ………………………………………………………………29 1.3.3.2 Phân tích đột biến thuộc hội chứng MERRF xác định trình tự gen … …………………………… 30 1.3.3.3 Kỹ thuật đa dạng cấu hình sợi đơn SSCP (single-stranded conformational polymorphism) ……………………………………… 30 1.3.3.4 Định lượng đột biến gen ty thể phương pháp real-time PCR ……………… …………………………………………………………31 1.3.3.5 Phát đột biến DNA ty thể hệ thống cảm biến sinh học .31 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 NGUYÊN LIỆU 33 2.1.1 Mẫu bệnh phẩm .33 2.1.2 Các hóa chất, nguyên liệu khác 33 2.2 MÁY MÓC VÀ TRANG THIẾT BỊ 33 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.3.1 Tách chiết DNA tổng số 34 2.3.2 Kiểm tra định lượng DNA tách chiết .34 2.3.3 Nhân đoạn gen ty thể kỹ thuật PCR 35 2.3.4 Kỹ thuật PCR kết hợp với kỹ thuật đa hình chiều dài đoạn phân cắt giới hạn (PCR-RFLP) 36 2.2.5 Điện di gel agarose 36 2.2.6 Điện di gel polyacrylamide 37 2.2.7 Kỹ thuật real-time PCR sử dụng mẫu dò huỳnh quang dạng khóa cầu axit nucleic (LNA-locked nucleic acid) 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 vii 3.1 THU THẬP MẪU MÁU BỆNH NHÂN VÀ TÁCH CHIẾT DNA TỔNG SỐ 42 3.1 Một số đặc điểm mẫu phân tích 42 3.2 Tách chiết DNA tổng số mẫu .42 3.2 SÀNG LỌC CÁC ĐỘT BIẾN GEN THUỘC HỘI CHỨNG MERRF Ở NGƯỜI VIỆT NAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP PCR-RFLP 43 3.2.1 Sàng lọc đột biến A8344G 43 3.2.1.1 Nhân đoạn gen từ 8155 - 8366 PCR 43 3.2.1.2 Phân tích có mặt đột biến A8344G PCR-RFLP 44 3.2.2 Sàng lọc đột biến T8356C 46 3.2.1.1 Nhân đoạn gen từ 8166 - 8358 PCR 46 3.2.2.2 Phân tích có mặt đột biến T8356C PCR-RFLP 47 3.2.3 Sàng lọc đột biến G8363A 48 3.2.1.1 Nhân đoạn gen từ 8342 - 8582 48 3.2.2.2 Phân tích có mặt đột biến G8363A PCR-RFLP 50 3.3 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG ĐỘT BIẾN A8344G BẰNG KỸ THUẬT REAL-TIME PCR .52 3.3.1 Thiết kế mẫu dò huỳnh quang Taqman LNA 52 3.3.1.1 Thiết kế mẫu dò huỳnh quang Taqman LNA 52 3.3.1.2 Đánh giá tính đặc hiệu mẫu dò đột biến A8344G 54 3.3.2 Xây dựng đường chuẩn đánh giá độ tin cậy phương pháp real-time PCR để định lượng đột biến A8344G .56 3.3.2.1 Định lượng số plasmid mang đoạn gen đột biến không đột biến A8344G .56 3.3.2 Kết xây dựng đường chuẩn đột biến A8344G 56 3.2.4 Thử nghiệm khả phát định lượng đột biến A8344G 60 3.4 SÀNG LỌC ĐỘT BIẾN GEN THUỘC HỘI CHỨNG MERRF BẰNG PHƯƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỰ TRỰC TIẾP .61 3.4.1 Kết giải trình tự vùng gen mang đột biến MERRF 8155-9292 hệ gen ty thể 61 KẾT LUẬN 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC ………………………………………………………………………… 79 viii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT APS Ammonium persulfate ANT Adenine nucleotide translocase ADP Adenosine diphosphate ATP Adenosine triphosphate bp Base pair (cặp bazơ) BFQ Black fluorescence quencher (chất hấp phụ huỳnh quang) CoQ Coenzyme Q CPEO Chronic progressive external ophthalmoplegia (Bệnh liệt mắt tiến triển kinh niên) Cyt c Cytochrome c Cyt b Cytochrome b D-loop Vòng chuyển vị dNTP Deoxyribonucleoside triphosphate ddH2O Deionized distilled H2O (nước cất loại ion, khử trùng) EtBr Ethidium bromide FAD + Flavin adenine dinucleotide (dạng oxi hóa) FADH2 Flavin adenine dinucleotide (dạng khử) IPTG Isopropyl-β-D-Thiogalactopyranoside kb Kilobase KSS Kearns-Sayre syndrome (Hội chứng KSS) LB Luria Bertani LHON Leber’s hereditary optic neuropathy (Bệnh liệt thần kinh thị giác di truyền theo Leber) LNA Locked nucleic acid (nucleotide dạng khóa) MELAS Mitochondrial encephalopathy, lactic acidosis, stroke-like Episodes (Hội chứng não giật cơ, tăng acid lactic máu giả tai biến mạch) MERRF Myoclonic epilepsy with ragged-red fibres (Hội chứng động kinh, giật với sợi không đều) ix MIDD Maternally inherited diabetes and deafness (Bệnh tiểu đường câm điếc di truyền theo mẹ) MRI Magnetic resonance image (Hình ảnh chụp cộng hưởng từ) mtDNA Mitochondrial DNA (DNA ty thể) nDNA Nuclear DNA (DNA nhân) NAD + Nicotinamide adenine dinucleotide (dạng oxi hóa) NADH Nicotinamide adenine dinucleotide (dạng khử) NARP Neuropathy, ataxia and retinitis pigmentos (Hội chứng gây liệt, điều hòa viêm võng mạc OD Optical density (Mật độ quang học) PCR Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) PEO Progressive external ophthalmoplegia (Bệnh liệt mắt tiến triển) RFLP Restriction fragment length polymorphism (Sự đa hình đoạn phân cắt giới hạn) ROS Reactive oxygen species (dạng oxy phản ứng) SDS Sodium dodecylsulphate TAE Tris -Acetate-EDTA TBE Tris -Borate-EDTA TEMED N, N, N’, N’- Tetramethyl-Ethylenediamine Tm Melting temperature (Nhiệt độ tách chuỗi) x DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Các biểu triệu chứng lâm sàng 62 bệnh nhân MERRF 28 Bảng 2.1: Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR đoạn gen mang đột biến MERRF 35 Bảng 2.2: Thành phần gel polyacrylamide 12% .37 Bảng 2.3: Trình tự mồi mẫu dò dùng cho real-time PCR .40 Bảng 3.1: Trình tự mồi nhân đoạn gen 8155 - 8366 43 Bảng 3.2: Trình tự sản phẩm cắt enzyme BanII 45 Bảng 3.3: Trình tự mồi cho phản ứng PCR đoạn gen 8166 - 8358 46 Bảng 3.4: Trình tự mồi cho PCR đoạn gen 8342 - 8582 49 Bảng 3.5: Trình tự mẫu dò dùng cho real-time PCR 53 Bảng 3.6: Tương quan nồng độ DNA plasmid mang đột biến không đột biến A8344G ban đầu số chu kỳ ngưỡng xác định real-time PCR 57 Bảng 3.7: Tỷ lệ phần trăm plasmid đột biến 8344G pha sẵn 58 Bảng 3.8: Kết thực nghiệm tỷ lệ phần trăm đột biến mẫu chuẩn 59 xi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc ty thể Hình 1.2 Cấu tạo màng ty thể Hình 1.3 Hệ gen ty thể 10 Hình 2.1 Cấu trúc nucleotide cải biến dạng LNA 38 Hình 2.2 Nguyên lý hoạt động mẫu dò Taqman 39 Hình 3.1 Điện di sản phẩm DNA tổng số từ mẫu máu bệnh nhân 42 Hình 3.2 Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen 8155 - 8366 .44 Hình 3.3 Điện di sản phẩm PCR-RFLP đoạn gen 8155 - 8366 bệnh nhân45 Hình 3.4 Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen 8166 - 8385 .47 Hình 3.5 Điện di sản phẩm PCR-RFLP đoạn gen 8166 - 8385 bệnh nhân48 Hình 3.6 Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen 8342 - 8582 .49 Hình 3.7 Điện di sản phẩm PCR-RFLP đoạn gen 8166 - 8385 bệnh nhân50 Hình 3.8 Kết kiểm tra mẫu dò ……………………………………… 60 Hình 3.9 Biểu đồ khuếch đại đoạn gen mang đột biến không mang đột biến A8344G real-time PCR 57 Hình 3.10 Sự tương quan tỷ lệ đột biến thực tế tỷ lệ đột biến lý thuyết 59 Hình 3.11 Thử nghiệm định lượng mẫu bệnh phẩm không mang đột biến A8344G real-time PCR 60 Hình 3.12 Kết blast trình tự 29 mẫu bệnh với trình tự chuẩn J01415.2 62 xii 32 Nguyễn Thị D 14 th Nữ 33 Vũ Thủy T 4t Nữ 34 Lê Thị H th 35 Dương Thị Yến N 36 Việt N 37 Co giật cơn, không sốt, BN032 10,31 1,91 x Bệnh RICH chất khoáng BN033 87,25 1,77 x Nữ Co giật BN034 122,53 1,79 x 3t Nữ Chậm phát triển BN035 43,86 1,45 x 15 th Nam Bại não BN036 101,61 1,73 x Nguyễn Phương A 3t Nữ Động kinh BN037 48,92 1,85 x 38 Vũ Thảo V 11 t Nữ Động kinh BN038 54,2 1,9 x 39 Lại Thanh H 8t Nữ Chậm phát triển BN039 68,7 1,86 x 40 Hoàng Kim C 6t Nữ Động kinh BN040 86,58 1,85 x 41 Phí Thu T th Nữ Co giật BN041 71,02 1,9 x 42 Nguyễn Thảo N th Nữ Co giật BN042 108,62 1,73 x 43 Nguyễn Tấn D 4t Nam Động kinh BN043 67,27 1,77 x 44 Trần Tuấn H 6t Nam Động kinh BN044 27,88 1,85 x 45 Đỗ Hà L 4t Nữ Chậm phát triển BN045 29,01 1,77 x 46 Phạm Thị Anh T 7t Nữ Động kinh BN046 12,34 1,89 x 47 Lương Quang Đ 8t Nam Nôn nhiều, đau đầu, đau BN047 43,86 2,03 x 48 Lê Phú T 2t Nam Tật đầu nhỏ BN048 88,42 2,05 x 49 Trần Công H 12 th Nam Co giật BN049 27,86 1,93 x 50 Nguyễn Phương A 6t Nữ Bệnh RICH chất khoảng BN050 42,49 1,91 x 51 Trần Xuân A 5t Nam Chậm phát triển BN051 21,44 1,93 x chậm phát triển 75 52 Trần Văn S th Nam Co giật BN052 29,63 1,9 x 53 Lê Ánh D th Nữ Co giật BN053 83,88 1,93 x 54 Nguyễn Hoàng S 12 th Nam Co giật BN054 59,78 1,92 x 55 Phí Thu T 4t Nữ Chậm phát triển BN055 20,18 1,97 x 56 Quách Thị Kim O th Nữ Co giật BN056 30,44 1,88 x 57 Nguyễn Quốc C 6t Nam Động kinh BN057 87,25 1,93 x 58 Hoàng Thị Quỳnh A 4t Nữ Động kinh BN058 20,53 1,97 x 59 Đặng Vy Hà A 8t Nữ Bệnh RICH Tyroxin BN059 37,42 1,93 x 60 Nguyễn Trần Đăng N 9t Nam Động kinh toàn thể BN060 19,72 1,95 x 61 Lê Nhật L 13 th Nữ Co giật BN061 34,73 1,94 x 62 Nguyễn Thị Dương Q th Nữ Co giật BN062 25,64 1,95 x 63 Phạm Ngọc S th Nam Ống sọ hầu BN063 57,53 1,9 x 64 Nguyễn Đình T 4t Nam Động kinh BN064 27,85 1,92 x 65 Lương Đình Q 5t Nam Chậm phát triển BN065 88,42 1,9 x 66 Hoàng Minh N 7t Nam Bệnh RICH chất khoáng BN066 32,56 1,92 x 67 Nguyễn Hoàng K 3t Nam Động kinh BN067 13,62 1,93 x 68 Vũ Văn P 4t Nam Động kinh BN068 45,93 1,89 x 69 Lê Minh P 5t Nữ Chậm phát triển BN069 20,44 1,91 x 70 Nguyễn Thị Phương N 3t Nữ Động kinh BN070 23,53 1,94 x 71 Nguyễn Đan K 4t Nam BN071 60,07 1,95 x Chậm phát triển tinh thần vận động 76 72 Trần Hoàng A 3t Nam Động kinh BN072 59,1 1,94 x 73 Trần Xuân H 6t Nam Bệnh RICH axit amin BN073 77,48 1,98 x 74 Đặng Minh H 6t Nam Bệnh RICH BN074 57,79 1,93 x 75 Nguyễn Hoàng Chí T 4t Nam Bệnh RICH BN075 42,82 1,93 x 76 Trương Anh T 4t Nữ Chậm phát triển thần kinh BN076 87,25 1,98 x 77 Nguyễn Duy K 8t Nam Bệnh Rich BN077 78,22 1,97 x 78 Đỗ Ánh L 6t Nữ BN078 85,12 1,93 x 79 Phạm Thị Minh C th Nữ Bại não BN079 106.00 1,97 x 80 Lương Đình Q 5t Nam Động kinh BN080 120,84 1,97 x 81 Phạm Trần Phương L 3t Nữ Nhược chưa rõ nguyên nhân BN081 74,3 1,93 x 82 Phạm Văn K 13 th Nam Co giật không rõ nguyên nhân BN082 94,1 1,96 x 83 Xa Thị Hồng H 4t Nữ Động kinh BN083 89,17 1,94 x 84 Nguyễn Kim O 8t Nữ Chậm phát triển BN084 89,43 1,96 x 85 Nguyễn Thị N th Nữ Co giật BN085 73,45 1,94 x 86 Nguyễn Quang Đ th Nam Tăng áp lực sọ BN086 134,66 1,85 x 87 Phạm Thị Vân A 10 t Nữ Động kinh BN087 112,97 1,75 x 88 Nguyễn Ninh Kh 5t Nam Bệnh Rich BN088 38,12 1,69 x 89 Đỗ Mỹ A 6t Nữ Động kinh BN089 83,49 1,72 x 90 Lê Văn T 4t Nam Động kinh BN090 42,98 1,84 x 91 Nguyễn Thị Thảo V 3t Nữ Chậm phát triển, co giật BN091 46,3 1,82 x Chậm phát triển thần kinh vận động 77 92 Hoàng Trọng N 4t Nam Chậm phát triển, co giật BN092 39,38 1,91 x 93 Nguyễn Thị Thùy L 5t Nữ Chậm phát triển chất BN093 21,34 1,86 x 94 Nguyễn Bích N 8t Nữ Chậm phát triển chất BN094 19,99 1,9 x 95 Phùng Ngọc T 4t Nam Chậm phát triển BN095 37,36 1,86 x 96 Hà Việt Anh T 4t Nữ Động kinh BN096 33,93 1,8 x 97 Đoàn Nông Thảo M th Nữ Co giật BN097 33,29 1,64 x 98 Trần Thị Bích L th Nữ Co giật BN098 28,92 1,75 x 99 Lưu Quang T 2t Nam Sốt, giảm vận động BN099 24,84 1,69 x 100 Nguyễn Thu N th Nữ Co giật BN100 53,95 1,67 x 101 Trần Quang M th Nam Viêm phế quản phải BN101 32,23 1,98 x 102 Bùi Đức T 4t Nam Chậm phát triển BN102 12,86 1,65 x 103 Đỗ Đức Anh Q 9t Nam Bại não BN103 20,42 1,63 x 104 Trần Lê Cát L th Nữ Co giật BN104 13,72 1,68 x 105 Đoàn Việt B 2t Nam Sốt, giảm vận động BN105 90,66 1,64 x 106 Tạ Thị An B 4t Nữ Wilson BN106 25,77 1,84 x 107 Phan Đình T 5t Nam Động kinh BN107 16,21 1,72 x 108 Phạm Việt C 6t Nam Bệnh RICH BN108 28,63 1,76 x 109 Nguyễn Quỳnh N th Nữ Co giật BN109 23,81 1,76 x 110 Kim Văn T 6t Nam Chậm phát triển thần kinh BN110 17,51 1,6 x 111 Lý Thị Huyền T 18 th Nữ Động kinh BN111 30,57 2,73 x 112 Nông Thị Kiều O th Nữ Co giật BN112 20,1 1,62 x 78 113 Đào Nguyên S 8t Nam Chậm phát triển thần kinh BN113 10,31 1,68 x 114 Phạm Minh L 4t Nam Động kinh BN114 88,42 1,63 x 115 Nguyễn Minh K 4t Nam Động kinh BN115 66,84 1,98 x 116 Phạm Việt Y th Nam Co giật BN116 57,32 1,61 x 117 Tạ Thị Minh H 5t Nữ Chậm phát triển thần kinh BN117 20,42 1,71 x 118 Đỗ Minh K 6t Nam Đau đầu BN118 34,51 1,64 x 119 Cao Bảo M 4t Nam Chậm phát triển BN119 56,84 1,44 x 120 Trần Khánh L 4t Nữ Viêm màng não Listeria BN120 40,71 1,93 x 121 Phan Minh H th Nam Viêm tiểu phế quản BN121 11,34 1,75 x 122 Phàng Thị A 4t Nữ Chấn động não BN122 25,42 1,97 x 123 Bùi Minh Đ 4t Nam Co giật/ RICH BN123 30,51 1,93 x 124 Triệu Bảo L 5t Nam Chậm phát triển BN124 30,45 1,97 x 125 Lê Văn T 3t Nam Động kinh BN125 20,46 1,97 x 126 Phạm Quỳnh C th Nữ Co giật BN126 43,33 1,93 x 127 Lý Thị Huyền T 3t Nữ Động kinh BN127 23,56 1,96 x 128 Nguyễn Thị Thu U 4t Nữ Động kinh BN128 17,42 1,94 x 129 Lê Nhân A 5t Nam Bệnh RICH BN129 12,37 1,96 x 130 Trần Minh H 4t Nam Bệnh RICH/Nhồi máu não BN130 14,77 1,94 x 131 Thân Minh Q 3t Nam Viêm màng não BN131 30,63 1,85 x x x 132 Nguyễn Huệ H 5t Nữ Chậm phát triển BN132 47,82 1,75 x x x 133 Mai Thị Thu H 4t Nữ Động kinh BN133 34,87 1,69 x x x 79 134 Vũ Thành L 3t Nam Bệnh cơ, co giật BN134 47,2 1,72 x x x 135 Vũ Khánh L 6t Nữ Chậm phát triển BN135 32,64 1,84 x x x 136 Đoàn Đức D 3t Nam Chậm phát triển tiểu não BN136 31,75 1,82 x x x 137 Cao Đình H th Nam Co giật BN137 27,88 1,91 x x x 138 Trần Đức Q 15 th Nam Động kinh BN138 21,45 1,86 x x x 139 Phạm Thiên H 3t Nữ Động kinh kháng trị BN139 29,63 1,9 x x x 140 Nguyễn Hà T th Nữ Co giật BN140 30,47 1,93 x x x 141 Phí Thu T 21 th Nữ Động kinh BN141 13,69 1,98 x x x 142 Hoàng Ngọc L 3t Nam Tật đầu nhỏ BN142 45,96 1,97 x x x 143 Đỗ Đức Anh Q 18 th Nam Động kinh BN143 23,94 1,93 x x x 144 Ngô Thị Thanh D th Nữ Não úng thủy BN144 26,91 1,97 x x x 145 Nguyễn Thị Kim N th Nữ Co giật BN145 22,53 1,97 x x x 146 Chu Hải P 13 th Nam Loạn dưỡng não chất trắng BN146 31,72 1,93 x x x 147 Nguyễn Đình P 4t Nam RICH axit amin thơm BN147 27,84 1,96 x x x 148 Nguyễn Thành V 6t Nam Động kinh, điếc BN148 20,58 1,94 x x x 149 Lê Trọng Đăng K 8t Nam BN149 37,49 1,96 x x x 150 Lê Trường Duy K th Nam Não úng thủy bẩm sinh BN150 19,74 1,94 x x x 151 Nguyễn Vinh G th Nam Não úng thủy bẩm sinh BN151 32,55 1,85 x x x 152 Trần Văn K 8t Nam Chậm phát triển tâm thần BN152 34,73 1,75 x x x 153 Phạm Ngọc Linh A th Nữ Động kinh BN153 25,65 1,69 x x x Chậm phát triển tâm thần trung ương 80 154 Lê Tuấn Đ 8t Nam Chậm phát triển tâm thần BN154 27,88 1,72 x x x 155 Nguyễn Thị Quỳnh A 22 th Nữ Xuất huyết não BN155 31,99 1,84 x x x 156 Nguyễn Anh T 11 th Nam Co giật BN156 24,9 1,82 x x x 157 Đoàn Bảo N 14 th Nữ Co giật BN157 46,9 1,93 x x x 158 Trần Trọng N 20 th Nam Động kinh BN158 33,23 1,98 x x x 159 Vũ Văn T 4t Nam Động kinh BN159 18,55 1,97 x x x 160 Trần Mộc S 7t Nam Chậm phát triển BN160 33,07 1,93 x x x 161 Bùi Thị T 15 th Nữ Động kinh BN161 29,03 1,97 x x x 162 Nguyễn Sỹ P 19 th Nam Động kinh BN162 44,22 1,97 x x x 163 Phan Thị Quỳnh N 3t Nữ Động kinh BN163 27,14 1,93 x x x 164 Phạm Thị Lâm C 9t Nữ Teo cơ, không phì đại bắp BN164 33,8 1,96 x x x 165 Nguyễn Mạnh T 4t Nam Tật đầu nhỏ BN165 15,23 1,94 x x x 166 Nguyễn Thị T 26 th Nữ Động kinh BN166 16,6 1,96 x x x 167 Đặng Thanh T th Nam Não úng thủy BN167 27 1,94 x x x 168 Hồ Diên P th Nữ Co giật BN168 28,4 1,85 x x x 169 Trần Ngọc T 6t Nam Loạn dưỡng não chất trắng BN169 30,6 1,75 x x x 170 Hồ Văn H 8t Nam RICH axit amin thơm BN170 22,2 1,93 x x x 171 Lê Quang M 7t Nam Động kinh, điếc BN171 29,3 1,98 x x x 172 Lê Văn Ngọc B 5t Nam BN172 21,2 1,97 x x x 173 Trần Khánh L th Nữ BN173 26,33 1,93 x x x Chậm phát triển tâm thần trung ương Não úng thủy bẩm sinh 81 174 Phạm Đức A th Nam Não úng thủy bẩm sinh BN174 30,63 1,97 x x x 175 Nguyễn Thị L 3t Nữ Chậm phát triển tâm thần BN175 16,67 1,97 x x x 176 Nguyễn Hà Việt D 14 th Nam Động kinh BN176 24,36 1,93 x x x 177 Lương Thu H 8t Nữ BN177 19,65 1,96 x x x 178 Nguyễn Khoa Thủy T 5t Nữ Chậm phát triển BN178 41,9 1,94 x x x 179 Loan Thanh Duy K 4t Nam Chậm phát triển tiểu não BN179 21,8 1,96 x x x 180 Trần Duy M th Nam Co giật BN180 22,91 1,94 x x x 181 Phạm Duy A 25 th Nam Động kinh BN181 38,45 1,85 x x x 182 Lê Thị V 4t Nữ Động kinh kháng trị BN182 44,3 1,75 x x x 183 Trần Thị Tố U th Nữ Co giật BN183 28,1 1,69 x x x 184 Vằng Thị Q 17 th Nữ Co giật BN184 18,94 1,72 x x x 185 Lê Đức M th Nam Co giật BN185 30,4 1,84 x x x 186 Ngô Khánh V 20 th Nam Động kinh BN186 33,6 1,82 x x x 187 Nguyễn Văn C 3t Nam BN187 20,34 1,91 x x x 188 Phạm Văn T 12 t Nam Co giật BN188 32,57 1,86 x x x 189 Đỗ Thị Hồng N 15 th Nữ Động kinh BN189 49,04 1,93 x x x 190 Trần Thị Bảo N 3t Nữ Động kinh BN190 30,8 1,98 x x x 191 Trần Phương M 4t Nữ Chậm phát triển BN191 14,1 1,97 x x x 192 Nguyễn Hải N 15 th Nam Co giật BN192 40,2 1,93 x x x Chậm phát triển tâm thần trung ương Chậm phát triển tâm thần vận động 82 193 Diền Thị S 4t Nữ 194 Trịnh Thị Lan P 12 th Nữ 195 Lê Thị P 20 th Nữ 196 Lê Văn Q 4t Nam 197 Hà Anh V th Nam 198 Phạm Thị Kiều T 3t Nữ 199 Hoàng Khánh V th Nữ 200 Hồ Diên T 16 th Nữ 201 Đỗ Hải P 3t 202 Trần Văn T 203 Hoàng Khánh G 204 Chậm phát triển tâm thần vận BN193 39,85 1,97 x x x Co giật BN194 44,76 1,97 x x x Động kinh BN195 28,54 1,93 x x x BN196 26,6 1,96 x x x BN197 15,6 1,94 x x x BN198 17,71 1,96 x x x Động kinh BN199 32 1,94 x x x Động kinh BN200 103,62 1,85 x x x Nam Chậm phát triển BN201 16,39 1,75 x x x 3t Nam Động kinh BN202 24,99 1,93 x x x 4t Nam BN203 30,73 1,98 x x x Nguyễn Thị H 15 th Nữ Động kinh BN204 26,2 1,97 x x x 205 Phạm Khánh L 3t Nữ Hội chứng não BN205 39,97 1,93 x x x 206 Lê Thanh T 17 th Nam Động kinh BN206 36,39 1,97 x x x 207 Nguyễn Thanh T 3t Nam BN207 33,05 1,97 x x x 208 Mầu Anh T th Nữ BN208 36,1 1,93 x x x động Chậm phát triển tâm thần vận động Cơn tím tái trẻ sơ sinh Chậm phát triển tâm thần vận động Chậm phát triển tâm thần vận động Chậm phát triển tâm thần vận động, gan to Sốt cao, co giật 83 209 Phạm Thành T 2t Nam Viêm não Nhật Bản BN209 25,36 1,96 x x x 210 Nguyễn Văn Thái B 13 th Nam Co giật BN210 22,3 1,94 x x x 211 Phạm Thu H 16 th Nữ Động kinh BN211 29,54 1,96 x x x 212 Phạm Thị Huyền T 3t Nữ BN212 46,8 1,94 x x x 213 Nguyễn Văn Đ 18 th Nam BN213 55,9 1,85 x x x 214 Nguyễn Minh K 2t Nam BN214 24,3 1,75 x x x 215 Nguyễn Thanh B 4t Nam BN215 27,62 1,69 x x x 216 Đỗ Văn Q 19 th Nam Động kinh BN216 24,6 1,72 x x x 217 Nguyễn Văn Đ 20 th Nam Liệt nửa người BN217 22,29 1,84 x x x 218 Hoàng Lê Vũ L th Nam Viêm phế quản BN218 19,6 1,82 x x x 219 Phạm Cao S 20 th Nam Bại não loại vận động BN219 37,8 1,91 x x x 220 Nguyễn Ánh D 20 th Nam Động kinh giật BN220 69,03 1,93 x x x 221 Trần Gia B th Nam Co giật BN221 62,9 1,98 x x x 222 Lê Phúc T 26 th Nam Chậm phát triển BN222 25,68 1,97 x x x 223 Trần Duy B th Nam BN223 21,7 1,93 x x x 224 Trần Thị Thu H th Nữ Co giật BN224 45,3 1,97 x x x 225 Lê Thúy T 15 th Nữ Động kinh BN225 34,3 1,97 x x x Co giật toàn thân, nhồi máu não, nghe Co giật chi nhiều ngày Động kinh Chậm phát triển, phát triển trương lực Suy hô hấp, phát triển trương lực 84 226 Vũ Xuân P th Nam Sốt cao co giật BN226 42,9 1,93 x x x 227 Nguyễn Đức V 3t Nam Viêm não BN227 33,25 1,96 x x x 228 Phan Văn M 2t Nam Tổn thương não, bệnh cơ, co giật BN228 49,8 1,94 x x x 229 Hoàng Huy H 13 th Nam Suy hô hấp cấp BN229 40,47 1,96 x x x 230 Hoàng Ngọc H 3t Nam Nhược chưa rõ nguyên nhân BN230 45,5 1,94 x x x 231 Hoàng Tuấn M th Nam Các dị tật bẩm sinh BN231 23,9 1,85 x x x 232 Lê Lan A th Nữ Động kinh, não phẳng BN232 38,3 1,75 x x x 233 Đỗ Thị H 14 th Nữ Động kinh BN233 37,9 1,69 x x x 234 Nguyễn Văn K 18 th Nam Bệnh RICH chất trắng BN234 34,8 1,72 x x x 235 Cao Thị Lê N 2t Nữ Tổn thương não, bệnh cơ, co giật BN235 33,3 1,84 x x x 236 Nguyễn Minh N 17 th Nam Động kinh BN236 28,18 1,93 x x x th Nữ Co giật BN237 25,7 1,98 x x x BN238 36,5 1,97 x x x 237 Nguyễn Ngọc Tường V Động kinh, chậm phát triển tinh 238 Lý Thị Ngọc V th Nữ 239 Đồng Thị Ngọc A 3t Nữ Động kinh BN239 18,3 1,93 x x x 240 Hoàng Đỗ Kim A 17 th Nữ Động kinh BN240 22,39 1,97 x x x 241 Giàng Anh D 4t Nam Động kinh BN241 21,44 1,97 x x x 242 Lý Hà V 8t Nữ Bệnh RICH BN242 17 1,93 x x x 243 Trần Quốc K 6t Nam Bệnh RICH BN243 35,5 1,96 x x x 244 Nguyễn Vũ Hoàng A 3t Nam Động kinh BN244 35,8 1,94 x x x thần vận động 85 245 Phan Thị L th Nữ Co giật BN245 42,5 1,96 x x x 246 Giáp Văn T th Nam Viêm phế quản BN246 30 1,94 x x x 247 Nguyễn Tuệ L th Nam Co giật BN247 27,9 1,85 x x x 248 Lê Kim Bảo N th Nữ Bại não, rối loạn chuyển hóa BN248 37,5 1,75 x x x 249 Cao Thị Kim O th Nữ Động kinh BN249 16,3 1,69 x x x 250 Ngô Ngọc K 3t Nam Teo BN250 33,6 1,72 x x x 251 Nguyễn Đức V 5t Nam Chậm phát triển BN251 15,9 1,84 x x x 252 Hồ Thị X 4t Nữ RICH BN252 15,2 1,82 x x x 253 Trần Minh T 15 th Nam Co giật BN253 15,5 1,93 x x x 254 Nguyễn Mạnh H th Nam BN254 44,2 1,98 x x x 255 Lê Tất Anh K 4t Nam Bệnh RICH BN255 24,8 1,97 x x x 256 Ngô Trường T th Nam Teo tủy BN256 13 1,93 x x x 257 Đặng Ngọc A th Nữ Não úng thủy BN257 24,1 1,97 x x x 258 Bùi Thị Thùy D th Nữ Xuất huyết não BN258 33,9 1,97 x x x 259 Trần Mộc S th Nam Co giật BN259 2,6 1,93 x x x 260 Ngô gia H th Nam Bệnh RICH bẩm sinh BN260 16,26 1,96 x x x 261 Cao Nhật M th Nam Bại não BN261 19 1,94 x x x 262 Tạ Thị T 15 th Nữ Động kinh BN262 25,9 1,96 x x x 263 Nguyễn Anh T 2t Nữ Động kinh BN263 47,82 1,94 x x x 264 Trần Thị Thùy D th Nữ Viêm phế quản phải BN264 34,87 1,85 x x x Hội chứng não, màng não, co giật 86 265 Viên Đức T th Nam Co giật BN265 25,68 1,75 x x x 266 Nguyễn Thị Hà G 3t Nữ Chấn thương sọ não BN266 32,64 1,69 x x x 267 Phạm Mai L 9t Nữ Đau đầu BN267 31,75 1,72 x x x 268 Đoàn Trung H 5t Nam Hội chứng thận hư BN268 29,63 1,84 x x x 269 Nguyễn Trọng Q 4t Nam Vận động không tự chủ BN269 35,2 1,82 x x x 270 Vũ Diệu L 4t Nữ BN270 13,69 1,93 x x x 271 Mùa A S 20 th Nam Co giật BN271 45,96 1,98 x x x 272 Đặng Tuệ K th Nam Viêm phổi BN272 23,94 1,97 x x x 273 Trần Văn Quốc D 13 th Nam Viêm phế quản phải BN273 26,91 1,93 x x x 274 Nguyền Thùy C 16 th Nữ Tiêu chảy kéo dài BN274 22,53 1,97 x x x 275 Thân Văn H 25 th Nam Bệnh RICH BN275 31,72 1,97 x x x 276 Hà Phạm An N 25 th Nữ Run chi BN276 27,84 1,93 x x x 277 Vũ Diệp C th Nữ Phù bào thai BN277 93,1 1,96 x x x 278 Hoàng Yến N th Nữ BN278 132,2 1,94 x x x 279 Nguyễn Ngọc B th Nữ BN279 20,5 1,96 x x x 280 Hoàng Hữu H th Nam BN280 32,5 1,94 x x x 281 Đinh Nho Việt H th Nam Teo não BN281 40,1 1,85 x x x 282 Nguyễn Thị Thúy C th Nữ Viêm phế quản BN282 37,9 1,75 x x x Chậm phát triển tâm thần vận động Co giật sơ sinh, rối loạn chuyển hóa Xuất huyết não, tiểu đường typ Đái nhạt, chậm phát triển tinh thần vận động 87 283 Nguyễn Quang K 14 th Nam Rối loạn chuyển hóa BN283 71,2 1,69 x x x 284 Đinh Ngọc M th Nam Rối loạn chuyển hóa BN284 16,1 1,72 x x x 285 Nguyễn Thị T th Nữ Rối loạn chuyển hóa BN285 16,5 1,84 x x x 286 Triệu Thu N th Nữ Động kinh, bại não BN286 31,9 1,82 x x x 287 Lăng Thị L 9t Nữ BN287 105,3 1,93 x x x 288 Lê Minh An P 3t Nam Co giật chưa phân loại BN288 47,82 1,98 x x x 289 Hoàng Anh Đ th Nam Co giật BN289 34,87 1,97 x x x 290 Đỗ Quỳnh T th Nữ Co giật sơ sinh BN290 25,68 1,93 x x x 291 Nguyễn Đức M th Nam Co giật không đặc hiệu BN291 32,64 1,97 x x x 292 Nguyễn Anh D 16 th Nam Động kinh BN292 31,75 1,97 x x x 293 Đinh Quốc V th Nam Bại não, liệt co cứng BN293 29,63 1,93 x x x 294 Lê Ứng Trang A 12 th Nữ Co giật chưa phân loại BN294 30,47 1,96 x x x 295 Đinh Xuân N 18 th Nam Động kinh BN295 13,69 1,94 x x x 296 Chỉn Minh Q 6t Nam Di chứng bại liệt BN296 45,96 1,93 x x x 297 Ngô Bảo N th Nữ Não úng thủy bẩm sinh BN297 47,82 1,98 x x x 298 Ngô Quang L 3t Nam BN298 34,87 1,97 x x x 299 Phùng Thị H 23 th Nữ Động kinh BN299 25,68 1,93 x x x 300 Đặng Nhật A th Nam Động kinh BN300 32,64 1,97 x x x 301 Phạm Thế A 3t Nam Động kinh BN301 31,75 1,97 x x x Cơn ngừng thở chưa rõ nguyên nhân Chậm phát triển tâm thần vận động 88 302 Lê Anh V 5t Nam Xuất huyết não BN302 29,63 1,93 x x x 303 Lê Đức T 2t Nam Động kinh, bại não BN303 47,82 1,96 x x x 304 Đỗ Thái Huyền A 8t Nữ BN304 34,87 1,94 x x x 305 Hà Minh P 6t Nữ BN305 25,68 1,96 x x x 306 Tản văn T 15 th Nam Động kinh, bại não BN306 32,64 1,94 x x x 307 Đặng Gia B 18 th Nam Động kinh, bại não BN307 31,75 1,85 x x x 308 Hà Văn H 2t Nam Yếu tứ chi, chưa rõ nguyên nhân BN308 29,63 1,75 x x x 309 Nguyễn Đại D th Nam Rối loạn chuyển hóa BN309 30,47 1,69 x x x 310 Lê Kim L th Nữ Viêm phế quản BN310 13,69 1,72 x x x 311 Trịnh Hồng T th Nam Động kinh theo dõi bệnh ty thể BN311 45,96 1,84 x x x 312 Lê Tài Đ 2t Nam BN312 45,2 1,82 x x x Chậm phát triển tinh thần vận động Chậm phát triển tinh thần vận động Điếc, Ngọng Động kinh, theo dõi rối loạn chuyển hóa 89 [...]... quả Ở Việt Nam, gần như chưa có công trình nào đi sâu nghiên cứu phát hiện và định lượng đột biến MERRF ở người Việt Nam Nhằm góp phần vào việc chẩn đoán, điều trị và tư vấn di truyền đối với các bệnh nhân, gia đình bệnh nhân mang hội chứng MERRF chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu phát hiện và định lượng một số đột biến của hội chứng động kinh, giật cơ với sợi cơ không đều - MERRF ở người Việt Nam ... gen ty thể người đã được xác định, trong đó có hơn 250 đột biến có khả năng gây bệnh và kèm theo nhiều hội chứng khác nhau MERRF (myoclonic epilepsy with ragged-red fibres) là hội chứng động kinh giật cơ với sợi cơ không đều, ảnh hưởng đến hệ thần kinh và cơ xương cũng như các hệ thống khác của cơ thể, gây nên bởi những đột biến trên gen MT-TK của DNA ty thể Ngoài ra, người mang hội chứng MERRF có thể... bị ảnh hưởng bởi thiếu chuỗi hô hấp dẫn đến sự tiến triển các triệu chứng của bệnh ty thể [30] Mặc dù được mô tả với các triệu chứng lâm sàng cơ bản của hội chứng MERRF bao gồm rung giật cơ, mất điều hoà, động kinh và sợi cơ màu đỏ rách nham nhở nhưng đột biến A8344G có những biểu hiện kiểu hình không đồng nhất Một nghiên cứu ở người phụ nữ 42 tuổi, ngoài các tính năng chính của hội chứng MERRF còn... xác định vào năm 1988 Kể từ đó, hơn 250 đột biến mtDNA gây bệnh đã được phát hiện và nghiên cứu, bao gồm hai loại đột biến chính là đột biến điểm và đột biến cấu trúc Các đột biến mtDNA có tính không đồng nhất về biểu hiện lâm sàng và tuổi khởi phát bệnh, do đó việc xác định tỷ lệ của bệnh đột biến gen ty thể là rất khó khăn Ước tính ở phía Đông Bắc nước Anh có tỷ lệ 1/10.000 người đã có biểu hiện. .. xứng và các bệnh đầu múi cơ [30] 1.3.1.2 Đột biến T8356C Hội chứng MERRF thường được biết đến với đột biến A8344G, nhưng không quan sát thấy trong khoảng 10 - 20% số bệnh nhân có triệu chứng lâm sàng tiêu biểu của hội chứng MERRF Một nghiên cứu giải trình tự gen tRNAlys của năm bệnh nhân có triệu chứng lâm sàng được xác định là rung giật cơ (hoặc động kinh), mất điều hòa và sợi cơ đỏ bị rách nham nhở,... [15, 37] Hội chứng lần đầu tiên được mô tả là do đột biến A8344G trên gen mã hóa cho tRNALys của ty thể [13, 20, 42] Nguyên nhân phổ biến của hội chứng MERRF là do đột biến A8344G, T8356C và G8363A nằm trên gen MT-TK mã hóa cho tRNALys gây ra, tất cả đột biến đều tồn tại ở dạng không đồng nhất Đột biến A8344G là phổ biến nhất, chiếm 80-90% số ca mang hội chứng MERRF [9, 42] MERRF cũng được mô tả ở bệnh... cao của gen ND1 có vai trò quan trọng trong việc gắn ubiquinone 1.3 HỘI CHỨNG ĐỘNG KINH, GIẬT CƠ VỚI SỢI CƠ KHÔNG ĐỀU (MERRF) Năm 1973, một nhóm bệnh nhân mắc bệnh ty thể có triệu chứng lâm sàng liên quan đến động kinh, giật cơ lần đầu tiên được mô tả Sau đó các trường hợp khác tiếp tục được mô tả, Fukuhara và cộng sự [28] đã đưa ra các tính năng cơ bản của bệnh bao gồm: giật cơ, động kinh kết hợp với. .. sàng bệnh ty thể và 1/6000 người có nguy cơ mắc bệnh Một nghiên cứu gần đây đã cho thấy tần số đột biến là 0,14% 13 đối với đột biến A3243G và 0,2% đối với đột biến A1555G liên quan đến MTRNR1 aminoglycoside gây ra mất thính giác, điều này chứng tỏ rằng những hiểu biết về đột biến gen ty thể còn nhiều hạn chế [31, 56] 1.2.1.1 Đột biến điểm Đột biến điểm là đột biến thay thế, mất hoặc thêm một nucleotide... phân bố của gen đột biến cũng rất khác nhau, kết quả phân tích trên 1 bệnh nhân mang đột biến trong cơ là 100% còn trong máu là 47% Triệu chứng lâm sàng của bệnh nhân mang đột biến này cũng khá phức tạp, có bệnh nhân xuất hiện triệu chứng rung giật cơ, động kinh, điếc và đột quỵ giả tai biến giống như hội chứng MELAS [6] 1.3.1.3 Đột biến G8363A Năm 1996, nhóm nghiên cứu Filippo M Santorelli và cộng... Các hội chứng gối nhau với đặc điểm MELAS /MERRF đã được báo cáo ở đột biến T7572C và T8356C trên tRNASer [18] 24 1.3.1 Các đột biến của hội chứng MERRF 1.3.1.1 Đột biến A8344G Đột biến A8344G là phổ biến nhất, chiếm 80 - 90% số ca mang hội chứng MERRF Sự thay đổi nucleotide A thành G tại vị trí 8344 trên gen MT-TK của ty thể làm thay đổi bộ ba mã hóa trên tRNAlys, do đó giảm khả năng tương tác với