Nghiên cứu phát hiện và định lượng một số đột biến của hội chứng động kinh giật cơ với sợi cơ không đều MERRF ở người Việt Nam

Nghiên cứu phát hiện và định lượng một số đột biến của hội chứng động kinh giật cơ với sợi cơ không đều MERRF ở người Việt Nam Nghiên cứu phát hiện và định lượng một số đột biến của hội chứng động kinh giật cơ với sợi cơ không đều MERRF ở người Việt Nam luận văn tốt nghiệp thạc sĩ

KẾT LUẬN - Trên chuộí cống ĐTĐ typ thực nghiệm, thân chuối tiêu có tác dụng làm giam nồng độ glucose máu, cholesterol toàn phần, ỉriglycerid huyết thanh, ức chế hoạt độ G6Pase gan không làm thay đổl đáng kề nồng độ insulin huyết Lô chuột điều trị hỗn dịch thử có dấu hiệu hồi phục tiểu đảo tụy - Dự đoán chế tác dụng thân chuối tiêu là: ức chế tân tạo đường thông qua ức chế G6Pase có thề làm tăng nhạy cảm mơ đích với insulin, cải thiện tinh trạng kháng insulin ĐTĐ typ TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt nam, Nhà xuất Y học, Tr.467,468 Nguyễn Thị Đông (2013), "Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết địch chiết phân đoạn chloroform thâii Ý dĩ động vật thực nghiệm", Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, Trung ỉâm thơng íin thư viện trường Đại học dược Hà Nội, Tr.20-40 Đỗ Thị Nậuyệt Quế (2013), "Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyễt cua rễ cay choc mau Nam (salasia cochinchinensis L., Celasíraceae) thực nghiệm", Luận án ỉiến sĩ dược học, Trung tâm Thư viện Quốc gia, Viện Dược iiệu, tr.7, 28 -32 Enechi c Odo c E Agosi p o (2014), "Antioxidant vitamins, phytochemicals and proximate composition of the ethanol extract of the leaves of Musa paradisiaca", African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 8(18), pp 464-468 IDF (2013), Diabes Aiias, International diabetes federation, pp 7-15, 27 Latha M Pari L (2003), "Antihyperglycemic effect of Cassia auricuiata in experimental diabetes and its effect on key metabolic enzymes invoved in cacrbohydraie metabolism", Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology 30, pp 38-43 Virginia D, Kappei !, H Luisa (2013), "Beneficial effects of banana leaves (Musa xparadisiaca) on glucose homeostasis: multiple sites of action", Revista Brasileira de Farmacognosia, 23(4), pp 706-715 NGHIÊN c ứ u PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ ĐỘT BIẾN CỦA HỘJ CHỨNG ĐỘNG KINH, GIẠT c VỚI SỢI c KHÔNG ĐỀU - MERRF Ở NGỮỜI VIỆT NAM Người ỉhực hiên: Bùi Thị Khánh Khoa Y học s - Trường Cao đắng Y tế Thái Bình Người hướng dẫn: GS.TS Phan Tuấn Nghĩa Phịng thí nghiệm trọng điểm Protein - Enzyme, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Ha Nội TÓM TÁT Đặt vẩn đề: MERRF (myoclonic epilepsy with ragged-red fibres) hội chứng động kinh giật với sợi không đều, gây nên đột biến gen MT-TK DNA ty thề Mục tiêu: Sàng lọc phát đột biến MERRF bệnh nhân nghi mắc bệnh não ty thể Việt Nam, xây dựng phương pháp định lượng đột biến MERRF Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Sàng lọc đột biến thuộc hội chứng MERRF mẫu máu ngoại vi cùa 312 bệnh nhân nghi mắc bệnh não ty the, lấy từ bệnh viện Nhi Trvng ương với phương pháp PCRRFLP, real-time PCR giải trình tự đoạn gen nghi ngờ mang đột biến nghiên cứu Kết quả: Không phát trường hợp mang đột biến 312 bệnh nhân lấy mẫu nghiên cứu, thiết kế thành cồng mẫu dị Taqman mang nucleotide dạng khóa cầu methyl thiết lập điều kiện đề phân tích định lượng đột biến A8344G cửa hội chứng MERRF real-time PCR Kết nghiên cứu tái khẳng định ỹiài trình tự vùng gert quan tâm cho kết âm tính cho đột biến A8344G, T8356C, G8363A Kết luận: Tuy không phát đột biển, chúng tồi hy vọng với phương pháp sàng lọc định lượng thiết lập cồng cụ hữu ích cho nghiên cứu sau đọt biến Từ khóa: MERRF, động kính giật cơ, sợi khơng SUMMARY Background: MERRF - syndrome myoclonic epilepsy with ragged-red fibres, affecting the nervous system and skeletal muscles as well as other systems o f the body, caused by mutations in (he genes MT-TK o f mitochondrial DNA Screening and quantitative some mutations o f myoclonic epilepsy with ragged-red fibers - MERRF in Việt Nam patients Materials and method: We conduct mutation screening o f MERRF syndrome peripheral blood form o f 312 patients with suspected brain mitochondrial myopathy, was taken from the Central Pediatrics Hospital by PCRRFLP, real-time PCR and sequencing nucleic acid fragments suspected mutated gene research Results: Do not detected any cases o f mutation A8344G, T8356C, G8363A under MERRF syndrome in 312 patients studied, by PCR-RFLP Designing successful Taqman probes by bridge methyl nucleotides to detect and quantify the degree o f heterogeneity o f mutations A8344G under syndrome by real-time PCR MERRF Develop 521 successful baseline mutation A8344G MERRF syndrome, baseline is established, can bs applied to quantitative analysis A8344G mutation in patients with the mutation pattern with a detection limit to 0.1%, R2 = 0.997 confidence Conclusion: still undetected mutations, but we hope with the screening methods and quantitative tool set will be useful for future research on those mutations Keywords: MERRF, myoclonic epilepsy, ragged-red fibres ĐẶT VẮN ĐỀ MERRF (myoclonic epilepsy with ragged - red fibres) hội chứng động kinh giật với sợi không đều, anh hưởng đển hệ thần kinh xương hệ thống khác thể, gây nên bời đột biến gen MT-TK DNA ty thể Ngoài ra, người mang hội chứng MERRF cỏ thê kèm theo động kinh, điều hịa vận động, suy nhược trí nhớ Triệu chứng thường khởi phát trẻ em sau giai đoạn phát triển bỉnh thường, kết hay gặp íà điếc, thấp bé, thối hóa thần kinh thị giác, quan sát u mỡ khu trú da Tế bào bát thường xuất sợi màu đỏ bị xé rách nham nhở nhuộm với Gomori trichrome quan sát kính hiển vi Hiện nay, giới có nhiều cơng trinh nghiên cứu hội chứng MERRF để xác đính nguyên nhân, chế biểu bệnh tính di truyền bệnh Tuy nhiên, tính phức tạp tác động !âm sàng, mô bệnh học, chể phát sinh biểu bệnh nên việc chẩn đoán phương pháp thăm khám lâm sàng hay xét nghiệm thường quy khó khăn, nhiều bệnh nhân MERRF Các cặp mồi mẫu dò (Integrated DNA Technologies); Thang chuẩn DNA, hỗn hợp dNTP (Enzynomics); Enzyme giới hạn (Thermoscientitics); Kapa probe fast qPCR, Master Mix (Kapabiosystems) Các hóa chất cịn lậi mua từ hãng tin cậy (Sigma, Merk) đạt độ tinh khiếỉ cằn thiết cho nghiên cứu sinh học phân tử; Mảy móc trang thiết bị Các máy móc dừng nghiên cứu bao gồm: máy NanoDropTM 8000, máy PCR gradient (Eppendorf), máy real-time PCR ỈQTM cycler (Biorad), máy ly tâm iạnh 5417 R (Eppendorf), thiết bị điện di ngang, điện di đứng (Biorad) vả hệ thong chụp ảnh điện di Geldoc (Biorad) Phương pháp nghiên cứu 3.1 Tách chiết DNA tổng số: DNA tổng số tách tinh từ máu ngoại vi bệnh nhân theo QIAamp DNA Mini Kit Qiagen 3.2 Kiểm tra định lượng DNA tách chiểt: Sự có mặt DNA kiểm tra điện di gei agarose 1% Nồng độ DNA tách chiết định lượng cách đo mật độ háp thụ ánh sáng tư ngoại acid nucleic bước sóng 260 nm (A260) chưa phát khơng có phương pháp điều máy Nano-Drop trị hiệu 3.3 Nhân đoạn gen ty thể kỹ thuật PCR: • Việt Nam, gần chưa có công trinh Đoạn gen ty thề mang đột bien MERRF khuếch sâu nghiên cứu phát định lượng đột biến đại phản ứng chuỗi polymerase (PCR) với MERRF người Việt Nam cặp mồi đặc hiệu thiết kế chế độ nhiệt Nhằm góp phần vào việc chẩn đốn, điều trị tư thích hợp vấn di truyền bệnh nhân, gia đình bệnh 3.4 Kỹ thuậí PCR kết hợp với kỹ thuật đa hình nhân mang hội chứng MERRF chúng tôỉ tiến hành đề chiều dài đoạn phân cắt giới hạn (PCR-RFLP): tài: “Nghiên cứu phát định lượng số đột Sản phẩm PCR sau kiểm tra gel agarose biến cua hội chưng động kinh, giật với sợi % cắt trực tiếp enzyme giới hạn không - MERRF người Việt Nam" đệm tương ứng (reaction buffer) Phản ứng cắt NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯỚNG PHÁP NGHIÊN thực với thành phần sau: ụì đẹm enzyme cứu giới hạn 10X; 0,5 pi enzyme giới hạn (50 đơn ví/Ịji); Nguyên liệu 7,5 ụị sản phẩm PCR 6,25 Mi ddH20 cho tồng ihe 1.1 Mấu bệnh phẩm tích 15 ụl, hỗn hợp phản ứng giữ 37°c, tư 12Mâu máu ngoại vi cùa 312 bệnh nhân người Việt 16 Sau đó, sản phầm cắt điện di geí Nam nghi bị bệnh ty thể lẩy từ Bệnh viện Nhi polyacrylamide 12 % đột biến phát dựa Trung ương, bệnh nhân nghi ngờ mắc hội vào tính đa hình đoạn cắt quan sát chứng MERRF dựa có mặt cùa hai ánh sáng tử ngoại ba đặc điểm sau: 2.5 Kỹ thuật real-time PCR sử dụng mẫu dò huỳnh Tác động lâm sàng liên quan đến nhiều quang dạng khóa cầu acid nucleic (LNA - locked quan: hệ thần kỉnh trung ương, xương nucleic acid): Trong thí nghiệm này, đột biến A8344G tỉm, tuyến nội tiết, mắt hệ tiêu hóa định ỉứợng bang phương pháp real-time PCR sừ Tăng acid lactic máu dịch não tủy dụng mẫu dị huỳnh quang có trình tự bồ sung với Hình ảnh chụp cộng hưởng từ não khơng bình trinh tự đặc hiệu DNA đích, đầu 5' mẫu dị có thường gắn chất phát huỳnh quang (reporter) FAM (495/520 1.2 Các hóa chắt, nguyên liệu khác: nm) cho mẫu dị đặc hiệu VỚ! trinh tự khơng đột biến Plasmid chèn đoạn gen 8155 - 8366 có khơng HEX (535/556 nm) cho mẫu dò đặc hiệu với trình tự mang đột biến A8344G íà sản phẩm cùa đề tài đột biến, cịn đầu 3’của mẫu dị có gắn chất hấp phụ tương ứng (quencher) IBFQ (Iowa black KC.04.10/11-15 Kit tách chiết DNA tổng số (Qiagen); 522 fluorescence quencher) mẫu sản phẩm PCR bệnh nhân bị cắt 2.6 Giải trình íự đoạn gen chứa đột biến: Trình tự thành đoạn DNA 220 bp 21 bp, chứng íỏ mẫu đoạn gen xác định dựa theo phương pháp bệnh nhân nghiên cứu không mang đột bien G8363A Sanger (kết thúc đầu tận chứa Hiện có nhiều phương pháp áp dụng dideoxynucleotide - ddNTP) để phát có mặt đọt biến gen ty thể KẾT QUẢ VÀ TH AO LUẬN PCR-RFLP, SSCP, xác định írỉnh tự gen, DGGE, real­ Tách chiết DNA tổng số mẫu time PCR Tuy nhiên, PCR-RFLP kỹ thuật Kết điện di sản phẩm DNA tổng số từ mẫu phân tử đơn giản, hiệu quả, phù hợp cho việc sang lọc máu bệnh nhân cho thấy che phẩm DNA thông dụng iượng mẫu lớn Trương Thị Huệ tổng số từ mẫu máu bệnh nhân có tập thể nghiên cứu 106 bệnh nhân Việt Nam, băng DNA rõ nét, chứng tỏ DNA tổng số tách không phát bệnh nhân nguyên vẹn mang đột biến A8344G T8356C Trên íhế giới có Kết đo mậí độ hấp ìhụ ốnh sáng tử ngoại nhiều công bố sàng lọc đột biến A8344G bệnh 260 nm chế phẫm DNA tổng số có tỷ số nhân não ty thể với kết quà đáng ý nahiên A260/A280 nằm khoảng 1,8-2,0; chứng tỏ chế cứu Qi cộng điều tra đột biến gen ty the phẩm DNA íẫn protein hay RNA Như vậy, 552 bệnh nhân Trung Quốc, phát bệnh nhân thu sản phẩm DNA tổng số đạt yêu cẩu mang đột biến A8344G (chiềm 0,72%); Cũng đề tiến hành bước thí nghiệm nghiên cứu khác 124 bệnh nhân Trung Quốc, Sàng lọc đột biên gen thuộc hội chứng Zhang cộng phát bệnh nhân mang MERRF người V ỉẹt Nam phương pháp đột biến A8344G (1,61%); Kwon tập thể, nghiên PCR-RFLP cứu đột biến gen ty thể 65 bệnh nhân Hàn Quốc, 2.1 Sàng lọc đột biến A8344G phát trường hợp mang đột biến Để xác định thay đổi nucleotide G thành A vị A8344G (4,6%) Như vậy, thấy tần suầt phát trí 8344 míDNA chúng tơi tiến hành nhân bàn đột biến A8344G nghiên cứu ỉà khác đoạn gen có kích thước 212 bp kỹ thuật PCR với Theo chúng tôi, khác Hên cặp mồi đặc hiệu Kết điển kiểm tra sản phẩm quan nhiều đến cách lấy mẫu điều tra ban đầu có PCR gel agarose 2% cho thấy sản pham DNA thể nguyên nhân khác cần íàm khuếch đại cùa đoạn gen có kích thước tính tốn rỗ lý thuyết (212 bp), điều chứng tị chúng íơi Xây dựng đường chuẩn để định lượng đột nhân thành cong đoạn gen 8155 - 8366 từ mâu biến A8344G bẫng kỹ th u ậ t real-time PCR DNA ĩổng sổ bệnh nhân Sản phẩm PCR 3.1 Thiết kế mẫu dò huỳnh quang Taqman LNA cắí trực tiếp enzyme giới hạn Banll, điện di Việc íhiếí kế mồi cho real-time PCR dùng Taqmarì sản phẩm cắỉ gel polyacrylamide 12 % phát probe thực theo nguyên tắc độí biến dựa vào khác kích thước ihiết kế mồi chung cho PCR Đột biến điểm A8344G phổ băng DNA ánh sáng tử ngoại Kết điện (MERRF) nghiên cứu định lượng di sản phầm PCR-RFLP cho thấy cac mẫu DNA nhân kỹ thuật real-time PCR sử dụng mẫu dổ Taqman khóa bệnh nhân xuát băng có kích câu methyl thước tương ứng 99 bp, 72 bp 41 bp, giống với Bảng: Trình tự cùa mẫu dò dùng cho real-time sản phẩm cắt cùa plasmid không mang đột biến PCR Chứng iỏ mẫu bệnh nhân sàng lọc khơng Vị trí DNA Mẩu dò/Mồi Trỉnh tự mang độỉ biến A8344G ty thể 2.2 Sàng lọc đột biến T8356C 5' AGC CCA CTG TAA AGC RT8344-FW 8291 -8309 TAAC3’ Đoạn gen chưa đột biến T8356C phải 5’ GGC ATT TCA CTG TAA khuếch đại kỹ thuật PCR với cặp moi đặc hiệu, RT8344-RV 8370-8350 AGA GGT 3’ Sản phẩm PCR cắt trực tiếp enzyme Wt-8344A6 FAM-AGA T+TA +A+GA giới hạn Drai Điện di sản phảm cắt gel 8332 - 8346 FAM +GA+A +CC-IBFQ polyacrylamide 12 % xuất băng có kích MÍ-8344GHEX-GAT +TA+A +GAG 8333 - 8346 thước khoảng 192 28 bp, chứng tỏ mẫu bệnh HEX +A+GC C-IBFQ nhân nghiên cứu không mang đột bien T8356C Ghi chú: dau + ch? nucleotide LNA 2.3 Sàng lọc đột biến G8363A 3.2 Đánh giâ tính đặc hiệu mẫu dị đột biến ^ Chủng dùng kỹ thuật PCR với cặp mồi bắt cặp A8344G đặc hiệu với sợi XUÔI sợi ngược đoạn mtDNA Kết phân tích real-time PCR cho thấy chạy nghiên cứu Kiểm tra sản pham PCR phương real-time PCR với píasmid mang đột biến 8344G tín pháp điện di gel agarose % cho kết ỉà hiệu huỳnh auang lên vởi kênh HEX phản băng DNA n h lt có kích thước 220 bp nhân ứng chứa đồng thời mẫu dò MỈ-8344G-HEX lên Sản phẩm PCR cắt trực tiểp Wt-8344A-FAM Tương tự, với plasmid không mang enzyme giới hạn Niallỉ Sản phẩm cắt điện di đột biến (tức A8344), có tín hiệu FAM Kết gel polyacrylamide 12 % phát đột biến dựa khẳng định mẫu dò mà chúng tơi thiết kế có vào khác kích thước phổ băng DNA khả phân biệt đặc hiệu mẫu đột biến mẫu ánh sáng tử ngoại Phổ băng điện di cho thấy tất không đột biến 523 3.3 Xây dụng đường chuẩn đánh giá độ tin cậy phường pháp real-time PCR để đĩnh lừợng đột biến A8344G Để xây dựng đường chuẩn đoạn gen mang đột biến A8344G thuộc hội chứng MERRF bang real-time PCR, píasmid mang DNA đột biến khơng đột biến A8344G pha lỗng nịng độ ià X 1010 sao/ụi sau pha lỗng theo hẹ số 10 dùng cho thí nghiệm Sử dụng khuôn ià hỗn hợp plasmid đột biến khơng đột biến theo tỷ íệ 1:1 có nồng độ 5x107 - 5x102 sao/ịil Kết qua phân tích real-time PCR cho thấy đường chuẩn DNA không mang đột biến DNA mang đột biến, tạo việc sư dụng tỷ lệ nồng độ khác plasmid chứa đoạn gen ty thể mang đột biến A8344G khơng mang đột biến có độ tuyến tính cao, giá trị cùa hệ số tương quan R2 sổ DNA ty thề số chu kỳ ngưỡng với mẫu dị w t8344A-FAM (khơng mang đột biến) ià 0,999 Mt8344G-HEX (mang đột biên) íà 0,999, hiệu PCR nằm khoảng 94-100% Slope probe w t8344A-FAM -3,458, probe MÍ-8344G-HEX -3,317 Nhằm kiểm tra độ nhạy độ tin cậy phương pháp chủng tiến hành xây dựng đường chuẩn ty lệ đột biến cách pha mẫu chuẩn có tỷ lệ đột biến iả 0,01 % - 100% đột biến cách trộn piasmid mang đột biến khổng đột biến với thể tích nồng độ tương ứng Sau chúng tơi tiến hành định lượng mẫu chuẩn xây dựng đồ thị tương quan tuyến tính phần trăm ty lẹ độ biền thực te lỉ thuyết Kểt cho thấy giới hạn phát ổộí biến phương pháp thiết iập !à 0,1 % tương quan tuyến tĩnh gíưa tỷ iệ đột biến thực tế lý thuyết có độ tin cậy cao (R2 - 0,997) Thí nghiệm lặp lại lần cho kết giống Như đường chuẩn chúng tơi thiết lập có độ tin cậy độ nhạy tương đương với nghiên cứu cua Trương Thị Huệ tập th i (2012 ) việc xây dựng đường chuẩn định lượng đột biến A3243G phương pháp real-time PCR sư đụng mẫu dò Taq man LNA (độ nhạy đạt 0,1%, R2 = 0,997) 3.4 Thử nghiệm khả phát định lượng đột biến A8344G Trong 312 mẫu bệnh phẫm sàng lọc phương pháp PCR-RFLP, không phát trường hợp mang đột biến A8344G Để khẳng định thêm kết nàỹ chủng lựa chọn ngẫu nhiên mẫu bệnh phẩm (kí hiệu BN1, BN2, BN3, BN4, BN5) thử nghiệm phương pháp real­ time PCR thiet lập Kết định lượng cho thấy mẫu bệnh phẩm thử nghiệm thu tín hiệu FAM, tín hiệu khơng đột biển tin hiệu HEX ià tín hiệu đột biến không phát Đường chuẩn xây dựng có độ tuyến tỉnh cao (R2 > 0,995) Thí nghiệm lặp lại lần cho kết giống Vì chúng tồi lần khẳng định mẫu bệnh phẩm không mang đột biến A8344G, phù hợp kết hai phương pháp PCR-RFLP real-time PCR sử dụng mẫu dò huỳnh quang LNA Sàng lọc đột biến gen thuộc hội chứng MERRF phương pháp giải trình tự trực tiếp Đề lan khằng đỉnh kết qua nghiên cứu PCR-RFLP íà xác chúng tơi lựa chọn 29 mẫu bệnh nhân nghi ngờ mắc hội chửng MERRF với triệu chứng rõ nhat ổể giải trình tự đoạn gen 8155 9292 thuộc vùng đột biến Đoạn gen ty thể 8155 - 9292 dài 1137 bp cùa 29 bệnh nhân nghi bị MERRF nhân gen từ phản ứng PCR với khuôn mẫu DNA bệnh phẩm nhân lên PCR giải trình tự nucleotide sử dụng mồi theo cồ hai chiều Kết phân tích trình tự thu cho thấy khơng có trường hợp mang đột biến Ấ8344G, T8356C G8363A cùa hội chứng MERRF Như vậy, kết xác định trinh tự rnột lần khẳng định kết phân tích PCR-RFLP íà xác đáng tin cậy KẾT LUẬN Đã sàng lọc đột biến thuộc hội chứng MERRF, írên bệnh nhân nghi mắc bệnh ty thể (312 bệnh nhân đột biến A8344G 182 bệnh nhân đột biển T8356C G8363A) phương pháp PCRRFLP nhưnp không phát trường hợp mang đột bien Đã thiết kể thành cơng mẫu dị Taqman mang nucleotide dạng khỏa cầu methyi thiết lập điều kiện để phân tích định lượng đột biến A8344G cùa hội chứng MERRF real-time PCR vởi giới hạn phát đến 0,1% với độ tin cậy cao (hệ số R2 = 0,997) Đã giải trình tự trực tiếp đoạn gen ty thể 8155 9292 (1137 bp) 29 mẫu bệnh nhân số bệnh nhân có biểu bệnh íhần kinh cho kết âm tính đột biến A8344G, T8356C, G8363A PCR-RFLP tái khẳng định íất bệnh nhân không mang đột biến vừa nêu KIẾN NGHỊ Tiếp tục sàng lọc để phát đột biến MERRF bệnh nhân nghi mac bệnh thần kinh, não Việt Nam Xâỵ dựng phương pháp phát hiện, định lượng đột biến gen ty thể khác nham hỗ trợ việc chần đoán lâm sàng nghiên cứu mối liên quan mức độ biểu bệnh với tỷ !ệ đột biến TÀI LIỆÙ THAM KHẢO Blakêly L E., Alston L c., Lecky B., Chakrabart B-, Falkous G Turnbull M D., Taylor w R., Gorman s G (2014), “Distal weakness with respiratory insufficiency caused by the m.8344A > G "MERRF" mutation”, Science Direct, 24, pp 533-536 Kwon S J., Park s s., Kim J M., Ahn T B., Kim s H., Kim S., Lee S H.,Ha c K.,Ahn M Y., Jeon B s (2004), "Investigation of common mitochondrial point mutations In Korea”, Genes and apoptosis to aging and disease, 1011, pp 339-344 Lorenzoni p J., Scola R H., Kay c s K., Silvado c E S., Werneck L c (2014), “When should MERRF (myoclonus epilepsy associated with ragged-red fibers) be the diagnosis?”, Arquivos Neuro-psiquiatria, 72(10), pp 524 803-881 Qi Y., Zhang Y.,W ang z., Yang Y., Yuan Y., Niu S., Pei P., Wang s., Ma Y., Bu D., Zou L., Fang F., Xiao J.,Sun F., Zhang Y.,Wu Y.,Wang s., Xiong H.,Wu X (2006), “Screening of common mitochondrial mutations in Chinese patients with mitochondria! encephaiomyopathies", Mitochondrion, 7, pp 147-150 Szuhai K., Ouweiand J M., Dirks R w , Lemaĩtre M., Truffert J c., Janssen J M., Tanke H J., Holme E., Maassen J A., Raap A K (2001), “Simultaneous A8344G heteroplasmy and mitochondrial DNA copy number quantification in Myoclonus Epilepsy and RaggedRed Fibers (MERRF) syndrome by a multiplex Molecular Beacon based reai-time fluorescence PCR , Nucleic Acids Research, 29(3), pp 1-6 Truong T H., Nguyen T V A., Nguyen V L„ Pham V A., Phan T N (2014), “Screening of common pointmutations and discovery of new T14727C change in mitochondrial genome of Vietnamese encephaiomyớpaihy patients”, Mitochondrial DNA, 27, pp 441-448 Virgilio R., Ronchi D., Bordoni A., Fassone E., Bonato s., Donadoni c Torgano G., Moggio M , Corti S., Bresolin N., Comi G p (2009), “Mitochondria! DNA G8363A mutation in the tRNA Lys gene: clinical, biochemical and pathological study", Journal Neurol Science, 281(1-2), pp 85-92 Zhang Y., Yang Y L , Sun F., Cai X., Qian N., Yuan Y., Wang z X.,Qị Y.,Xiao J X.,Wang X Y., Zhang Y H., Jiang Y w „ Qin J.,W u X R (2007), “Clinical and molecular survey in 124 Chinese patients with Leigh or Leigh-like syndrome", Journal of Inherited Metabolic Disease, 30(2), pp 265-267 NGHIÊN CỨU CHÁN ĐỐN DI TRUYỀN TRƯỚC CHUYẺN PHƠI BỆNH TEO c TỦY Ths Nguyễn Thị Thanh Nga (Bộ môn Sinh học Di truyền Yhọc, Học viện Quânỵ) ' sv Trần Van Tuấn, SV Đồng Phú cấu (Sinh viên năm thứ hai, Học viện Quân y) BS Đào Hải Yên (Bênh viện Than khoáng sản) Hướng dắn: PGS.TS Trần Văn Khoa (Bộ môn Sinh học Di truyền Y học, Học viện Quân y) TÓM TẲT Đặt vấn đề: Bệnh teo tủy bệnh thần kinh ơo bị đồng hợp exon gen SMNt nhiễm sắc thể số Trẻ bị bệnh' teo tủy thường có tiên luựng xấu từ vong sơm Vì vậy, vẩn đề phòng tránh chủ động bệnh teo tủy phải ưu tiên hàng đầu Mục tiêu: mục tiêu nghiên cứu xây dựng quy trình chẩn đốn di truyền trước chuyền phơi bệnh teo tủy Đối tượng phương pháp nghiên cưu: 17 bệnh nhi chần đoán bị bệnh teo tủy đồng hợp tử exon gen SMNt va bố mẹ họ; 30 mẫu té bào phôi sính thiết từ phơi dư ngày 3; 04 gia ơình sinh bị bệnh SMA tự nguyện tham gia chẩn đôn di truyền trước chuyền phơi bệnh teo tủy Kỹ thuật PCR- RFLP minisequencing đế phát đột biến gen SMNt gây bệnh teo tủy Phương phâp nhân toàn bộ gen nhằm khuếch đại gen lên hàng nghìn lần Kết quả: Kỹ thuật PCR- RFLP chuẩn hóa để phát đột biến gen SMNt từ mấu toàn phần với hiệu suất la 100% Kỹ thuật có hiệu nhân exon gen SMNt từ tế bào phôi sinh thiết 93,33% Xây dựng đuực quỵ trình chẩn đốn di truyền trước chuyển phơi bệnh teo tủy kết hợp sử dụng hai kỹ thuật PCR-RFLP va minisequencing Áp dụng quy trình xây dựng 04 cặp vợ chồng tự nguyện tham gia chẩn đoàn di truyền bệnh teo tủy trước chuyển phơi có 03 phôi chuyển, cặp vợ chồng sinh em bé khỏe mạnh, cặp mang thai Kết luận: Lần Việt Nam, xây dựng áp dụng quy trình chần ổoốn di truyền trước chuyển phơi bệnh teo tủy cách sử dụng đồng thời hai kỹ thuật PCR-RFLP minisequencing Từ khóa: Bệnh teo tủy SUMMARY PREIMPLANTATION GENETIC DIAGNOSIS OF SPINAL MUSCULAR ATROPHY Nga Nguyen Thi Thanh*, Tuan Tran Van*, Cau Dong Phu* Yen Dao Hai** (*: Military medical university; **: Coal and Mineral Hospital) Background: Spinal muscular atrophy (SMA) is a severe neurodegenerative autosomal recessive disorder Most o f patients are caused by the homozygous absence o f exon o f the telomeric copy o f the SMN gene (SMNt) on chromosome Until now, no specific treatment for SMA, only to treat the complications o f the disease IS crucial SMA usually presents severe, high mortality rate So, the SMA prevention issues should be top priority Denved from practical needs, we conducted the project “Preimplantation Genetic Diagnosis o f spinal muscular atrophy" with the following objective setting up a preimplantation genetic diagnosis assay o f SMA Materials and Method: This study was earned out on 17 patients and their parents, 30 blastomeres were obtained from surplus 525 ... (PCR-RFLP): tài: ? ?Nghiên cứu phát định lượng số đột Sản phẩm PCR sau kiểm tra gel agarose biến cua hội chưng động kinh, giật với sợi % cắt trực tiếp enzyme giới hạn không - MERRF người Việt Nam" đệm tương... PCR: • Việt Nam, gần chưa có cơng trinh Đoạn gen ty thề mang đột bien MERRF khuếch sâu nghiên cứu phát định lượng đột biến đại phản ứng chuỗi polymerase (PCR) với MERRF người Việt Nam cặp mồi... Keywords: MERRF, myoclonic epilepsy, ragged-red fibres ĐẶT VẮN ĐỀ MERRF (myoclonic epilepsy with ragged - red fibres) hội chứng động kinh giật với sợi không đều, anh hưởng đển hệ thần kinh xương