Nghiên cứu đặc điểm sinh học và tính kháng kháng sinh của neisseria meningitidis

Đặt vấn đề Viêm màng não bệnh lý nhiễm trùng nghiêm trọng, tỷ lệ tử vong cao không nghĩ đến, không chẩn đoán điều trị kịp thời Sự hiểu biết tác nhân gây bệnh thường gặp, hỗ trợ cho công tác điều trị xây dựng chương trình phòng chống bệnh tật Quốc gia Hầu hết liệu dịch tễ viêm màng não mủ người lớn xuất phát từ quốc gia phát triển, tác nhân gây bệnh thường gặp là: Streptococcus pneumoniae (30%-60%), Neisseria meningitidis (13-37%), Listeria monocytogenes Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae type b (Hib) Streptococcus pneumoniae loại vi khuẩn có vỏ (polysaccharide-encapsuleated) nguyên nhân quan trọng gây bệnh tử vong giới Nhằm nâng cao chất lược, hiệu việc phát tác nhân sở xác định đặc điểm kiểu hình kiểu gene Neisseria meningitidis quan trọng giúp tiên lượng, dự báo dịch đề xuất phác đồ dự phòng, điều trị nhằm hạn chế tỷ lệ nhiễm N meningitidis, mắc bệnh cộng đồng Với đề tài nghiên cứu: “ Nghiên cứu đặc điểm sinh học tính kháng kháng sinh Neisseria meningitidis ổ dịch lưu hành quân đội Với mục tiêu: Xác định đặc điểm sinh học cấu nhóm huyết Neisseria meningitidis phân lập số đơn vị tân binh quân đội Xác định tính nhạy cảm kháng sinh chủng Neisseria meningitidis phân lập từ người mang mầm bệnh không triệu chứng TỔNG QUAN 1.1 Một số đặc điểm dịch tễ học bệnh viêm màng não Neisseria meningitidis N meningitidis cư trú đường hô hấp người, tỷ lệ gây bệnh chiếm 1/100.000 người tỷ lệ người mang mầm bệnh 1/10 người Não mô cầu tồn đường hầu họng nhờ pili gắn vào thụ thể người Bệnh xảy não mô cầu vượt qua biểu mô đường hô hấp để vào máu Chúng nguyên nhân gây nhiễm khuẩn huyết (nhiễm trùng máu) vi khuẩn vượt qua hàng rào máu não gây viêm màng não Bệnh nhân nhiễm khuẩn huyết hội chứng màng não có tỷ lệ tử vong 20%, kèm theo sốc tỷ lệ tử vong chiếm đến 50% N meningitidis vi khuẩn Gram (-), cần phải điều trị tích cực kháng sinh penicillin, ampicillin chloramphenicol Nếu không điều trị tỷ lệ tử vong bệnh viêm màng não 100% Sau giai đoạn cấp viêm màng não bệnh nhân điều trị rifampin để làm vi khuẩn hầu họng người tiếp xúc gần với bệnh nhân điều trị dự phòng rifampin 1.1.1.Dịch tễ học bệnh viêm màng não Sự lưu hành bệnh viêm màng não có khác toàn cầu, qui mô dịch tễ học bệnh ranh giới quốc gia gần khác biệt dịch tễ học bệnh, xét lịch sử bệnh viêm màng não có vụ dịch lớn mang tính chất toàn cầu ảnh hưởng tới số nước khoảng thời gian 1.1.2.Dịch tễ học người mang mầm bệnh không triệu chứng Người mang mầm bệnh không triệu chứng cao tỷ lệ mắc bệnh Tỷ lệ người mang Mỹ Châu Âu khoảng 10% , cao gấp 10.000 lần tỷ lệ mắc bệnh Tuy nhiên nhà khép kín cộng đồng sinh hoạt khép kín tỷ lệ mang mầm bệnh cao hơn: đơn vị quân đội, trường học, nhà tù tỷ lệ người mang mầm bệnh đạt 50%, tỷ lệ người mang mầm bệnh cao phản ánh nguy dịch lớn, lên tới 70% số bệnh gây dịch ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng Thu thập 205 mẫu nhầy họng (lấy ngẫu nhiên trung đoàn 30 người, với tiêu chuẩn: tuổi quân tháng, ưu tiên người có hội chứng viêm đường hô hấp cấp, loại trừ trường hợp dùng kháng sinh thời gian 01 tháng, tính đến thời điểm giám sát) bệnh nhân thu thập từ bệnh viện quân đội 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp dịch tễ học mô tả cắt ngang - Công thức tính cỡ mẫu: n = Z12−α / p × (1 − p ) d2 Trong đó, α = 0,05 Z1 – α/2 = 1,96, p = 16,42 (theo kết nghiên cứu năm 2012)[3] Số mẫu lý thuyết: n = 206, số mẫu thực tế: N = 209 2.3.2 Phương pháp thực nghiệm phòng thí nghiệm: Sơ đồ nghiên cứu Hình 2.1 : Thiết kế nghiên cứu đặc điểm sinh học N meningitidis KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Đặc điểm sinh học cấu nhóm huyết Neisseria meningitidis phân lập số đơn vị tân binh quân đội 3.1.1 Đặc điểm sinh học chủng Neisseria meningitidis phân lập đơn vị tân binh quân đội Tổng số mẫu thu thập đơn vị tân binh 209 mẫu, trình nuôi cấy, phân lập định danh xác định 61 chủng Neisseria meningitidis Dưới số kết đặc điểm chuyển hóa 30 loại đường, axit amin chủng phân lập Bảng 3.1 Đặc điểm chuyển hóa axit amin N.meningitidis theo nguồn gốc chủng thẻ định danh NH TT Ngu Số ồn chủng ArgA GGT LysA LeuA gốc (n) (+/-) (+/-) (+/-) 04 1/3 4/0 57 26/31 61 27/61 Tính chất chuyển hóa axit amin ELLM PheA ProA PryA (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) 0/4 4/0 3/1 54/3 0/57 57/0 58/3 0/61 61/0 (+/-) TryA( APPA +/-) (+/-) 4/4 0/4 g Bệnh 4/0 4/0 0/4 26/31 57/0 51/6 0/57 42/15 5/52 29/32 61/0 55/12 0/61 46/19 5/56 nhân Người mang mầm bệnh Tổng Ghi chú: ArgA: Arginine ARYLAMIDASE ; GGT: GAMMA-GLUTAMYLTRANSFERASE; LysA: L-Lysineh-ARYLAMIDASE Bảng 3.1 hàu hết khác chuyển hóa acid NMC người bệnh người lành mang mầm bệnh nhiên bệnh nhân chủng chuyển hóa L-Proline Arylamidase, người mang mầm bệnh có 6/57 chủng không chuyển hóa axit amin L-Proline Arylamidase Bảng 3.2 Đặc điểm chuyển hóa đường N.meningitidis theo nguồn gốc chủng thẻ định danh NH TT Nguồn Số gốc Tính chất chuyển hóa đường dGAL dGLU (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) 04 0/4 4/0 0/4 57 0/57 57/0 61 0/61 61/0 chủng chủng Bệnh GLYG dMNE dMAL SAC D-RIBOSE D-XYLOSE (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) 0/4 4/0 0/4 0/4 0/4 0/57 0/57 55/2 0/57 0/57 0/57 0/61 0/61 59/2 0/61 0/61 0/61 nhân Người mang mầm bệnh Tổng Ghi chú: dGAL: D-GALACTOSE; dGLU: D-GLUCOSE;GLYG: GLYCOGENE ; dMNE: D-MANNOSE ; dMAL: D-MALTOSE; SAC: ACCHAROSE/SUCROSE Bảng 3.2 : Đặc điểm sinh học chẩn đoán theo kiểu hình bệnh nhân người lành mang mầm bệnh hầu hết giống hệt tính chất chuyển hóa đường, y tế hướng dẫn, chẩn đoán NMC xác định tính chất lên men đường: glucose (+), maltose (+), lactose (-), schaccarose (-) nhiên số chủng khoảng 10% chủng NMC không sử dụng Glocose 13% không sử dụng maltose (tính chất quan trọng phân biệt với lậu cầu) Như sử dụng phương pháp đơn giản tỉ lệ bỏ sót chiếm đến 10% Ở nghiên cứu cho thấy có chủng NMC không lên men đường Maltose Bảng 3.3 Đặc điểm chuyển hóa axit amin N.meningitidis theo nhóm huyết B C thẻ định danh NH TT Nhóm Số Tính chất chuyển hóa axit amin huyết g (n) Nhóm B Nhóm C Tổng ArgA GGT LysA LeuA ELLM PheA ProA PryA TryA APPA (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) 56 29/27 54/2 0/56 56/0 28/28 56/0 49/7 0/56 43/13 4/52 05 2/3 4/1 0/5 5/0 2/3 5/0 5/0 0/5 4/1 5/0 61 31/30 8/3 0/61 61/0 30/31 61/0 54/7 0/61 47/14 9/52 Ghi chú: ArgA: Arginine ARYLAMIDASE ; GGT: GAMMA-GLUTAMYLTRANSFERASE; LysA: L-Lysine-ARYLAMIDASE Bảng 3.3 cho thấy chuyển hóa acid amin nhóm huyết B nhóm huyết C có khác chuyển hóa axit amin Không chuyển hóa axit amin L-Proline ARYLAMIDASE tập chung chủ yếu nhóm huyết B Bảng 3.4 Đặc điểm chuyển hóa đường N.meningitidis theo nhóm huyết B C thẻ định danh NH Nhóm Số huyết chủ dGAL dGLU GLYG ng (+/-) (+/-) (+/-) Nhóm B 56 0/56 56/0 0/56 0/56 Nhóm C 05 0/5 5/0 0/5 61 0/61 61/0 0/61 TT Tổng Tính chất chuyển hóa đường SAC D-RIBOSE D-XYLOSE (+/-) (+/-) (+/-) 54/2 0/56 0/56 0/56 0/5 5/0 0/5 0/5 0/5 0/61 59/2 0/61 0/61 0/61 dMNE (+/-) dMAL (+/-) Ghi chú: dGAL: D-GALACTOSE; dGLU: D-GLUCOSE;GLYG: GLYCOGENE ; dMNE: D-MANNOSE ; dMAL: D-MALTOSE; SAC: SACCHAROSE/SUCROSE Bảng 3.4 cho thấy có chủng NMC không lên men đường Maltose (tính chất quan trọng phân biệt với lậu cầu) tập chung chủ yếu nhóm huyết B, (nhóm huyết chủ yếu gây nhiễm đơn vị quân đội) Đây vấn đề quan trọng để xác định nhóm huyết chọn kháng sinh dự phòng 3.1.2 Cơ cấu nhiễm Neisseria meningitidis nhóm huyết chủng Neisseria meningitidis phân lập đơn vị tân binh quân đội phương pháp PCR Bảng 3.5: Tỷ lệ nhiễm N meningitidis nhóm huyết lưu hành 03 đơn vị giám sát Đơn Số mẫu NMC (+) vị XN (%) X (1) 89 Y (3) Cơ cấu nhóm huyết B C A/W135/Y Khác 42 (47,19 %) 34 (80,95%) (11,90%) (11,90%) 90 29 (32,22 %) 29 (100%) 0 (0%) Z (2) 30 (23,33 % ) (57,14%) 0 (42,85%) Tổng 209 78 (37,32 %) 05 (6,41%) (7,69%) 67 (85,90%) p (1;2) < 0,05; p (1;3) ≥ 0,05; p (1;3) < 0,01; p (1b;1c) < 0,01 Bảng 3.5 cho thấy: Tỷ lệ nhiễm N meningitidis đơn vị là: 37,32 %, thấp Z (23,33%) cao X (47,19%) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p (1;2) < 0,01 Tỷ lệ nhiễm N meningitidis đợt giám sát cao so với đợt giám sát trước đây: Năm 2012, vào mùa huấn luyện 16,42%; Năm 2013, đối tượng tân binh 13,73% Trong cộng đồng tỷ lệ chiếm khoảng 5-15%, tập thể chật trội, tỷ lệ tăng lên 30 – 50 %, vụ dịch lên tới 70% Tỷ lệ nhóm huyết gây bệnh (gồm B C) đơn vị 80,76% Thấp Y (57,14%), cao X (88,10%) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P (1;2) < 0,01) Cơ cấu nhiễm nhóm huyết B tập chung đơn vị chiếm tỷ lệ cao (74,35%), thấp Y (57,14%) cao X (75,86%) Z (76,19%) Nhóm huyết C phát thấy đơn vị Z (11,90%) Nhóm huyết B đơn vị X Y cao so với đợt giám sát năm 2012: nhóm huyết B (64,40%), nhóm huyết C (8,47%) Bảng 3.6: Tần suất nhiễm N meningitidis nhóm huyết theo trung đoàn Đơn vị Mẫu NMC (n) (%) Nhóm huyết B C A/W13 Khác /Y X e141 (1) 30 13 (43,33%) 13 (100%) 0 e165 (2) 30 11 (36,66%) (54,55%) 5(45,45% 0 (0%) ) Y Z e209 (3) 29 18 (62,06%) 15(83,33%) 0 (16,67%) e101(4) 30 13 (43,33%) 13(100%) 0 (0%) e18 (5) 30 (26,66%) 8(100%) 0 e95 (6) 30 (26,66%) 8(100%) 0 d11 (7) 30 7(23,33%) (57,14%) 0 (42,86%) P(3;1) ≥ 0,05; P (3;2) < 0,05; P (1b;3b) ≥ 0,05; P (2;1) ≥ 0,05 ; P (4,5,6,7) ≥ 0,05 P (1b;3bvà 2b;4b;5b;6b;7b) < 0,05 Bảng 3.6 cho thấy: Tỷ lệ người mang mầm bệnh cao trung đoàn thuộc đơn vị X (thấp là: 36,66%, cao là: 62,06%) Tỷ lệ người mang mầm bệnh trung đoàn thuộc Y (thấp 26,66%, cao là: 43,33%).Tuy nhiên, thấy e141 e18, e95 100% chủng nhóm huyết B gây bệnh, vậy, đơn vị cần phải đề phòng nguy dịch xảy Tuy nhiên, tỷ lệ không nhỏ 53,84% 28,57% có lưu hành nhóm huyết khác Trong giám sát sử dụng kỹ thuật multiplex PCR xác định nhóm huyết gây bệnh chủ yếu Bảng 3.7: Tỷ lệ nhiễm N meningitidis nhóm huyết theo địa phương nhập ngũ Nhóm huyết 10 Quê quán Số mẫu NMC B C W135/Y Khác (n) ( %) Hưng Yên 59 20 (33,89%) 20 0 Nam Định 54 28 (51,85%) 25 Ninh Bình 22 (36,36%) Hà Nam 14 (50,00%) Hải Dương 14 (21,42%) 0 Hải Phòng 10 (50,00%) 0 Khác 36 10 (27,77%) 0 Tổng 209 78 67 Ghi chú: Các tỉnh khác bao gồm Bắc Giang, Bắc Ninh, Hà Nội, Nghệ An, Quảng Ninh, Thái Bình, Thanh Hoá Vĩnh Phúc Tỷ lệ quân nhân nhập ngũ từ địa phương thuộc tỉnh đồng Bắc Bộ từ 27,77% - 51,85% Cơ cấu nhóm huyết B lại phổ biến quân nhân có nguồn gốc từ Nam Định Hưng Yên (42,59% 65,00%) Kết không phản ánh xác tỷ lệ nhiễm niên địa phương, phần gợi ý đến lưu hành N meningitidis với nhóm huyết mang tính chất địa phương Để trả lời câu hỏi cần giám sát niên trước nhập ngũ Kết kiểm tra chủng N meningitidis NH cấu nhóm huyết kỹ thuật Multiplex-PCR Kết định danh vi khuẩn gram (-), với Oxidase (+) NH với 30 tính chất chuyển hóa axit amin đường cho phép chẩn đoán N.meningitidis với độ tin cậy từ 95% - 99% Kỹ thuật định danh NH áp dụng vi khuẩn lây nhiễm đường hô hấp máy Vitex có độ xác cao kỹ thuật kinh điển trước xác định tính chất lên men đường: glucose (+), maltose (+), lactose schaccarose (-) ngưng kết 11 với kháng huyết kháng polysacchride N meningitidis cho phép chẩn đoán sơ Nhận định kết dương tính hay âm tính với loài phụ thuộc nhiều vào chất lượng kháng huyết công ty sản xuất với độ tinh khác 3.1.3 Khảo sát đặc điểm sinh học phân tử chủng N.meningitidis phân lập cặp mồi đặc hiệu loài nhóm N.meningitidis thông qua phản ứng PCR Lựa chọn 32 tổng số 61 chủng phân lập tiến hành khảo sát đặc điểm sinh học phân tử cặp mồi đặc hiệu cho loài nhóm N.meningitidis Khảo sát cặp mồi phát loài N meningitidis - Vùng gene ctrA vùng gene có tính bảo thủ cao thường sử dụng phản ứng PCR realtime-PCR để xác định N.meningitidis, vùng gene mã hóa vỏ capsule, nhiên người mang mầm bệnh không triệu chứng, tỷ lệ gene lên đến 16% Dưới số thông tin cặp mồi, quy trình PCR lựa chọn nghiên cứu số kết khảo sát xuất gene ctrA chủng N.meningitidis phân lập + Cặp mồi W135663/W139969 Kết Blast NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih gov/Blast.cgi) AF315863.1 (Query ) GU391296.1 (Sbjct) có số khác trình tự, vào vị trí bắt cặp mồi Neisseria meningitidis strain M4440 CtrA gene Cặp mồi Wl35663/ Wl38969 + Tiến hành phản ứng PCR 32 chủng N meningitidis phân lập + Kết PCR 12 M 10 11 12 1314151617 18 18 19 20 21 22 23 24 25 M 26 27 28 29 30 31 32 257bp Hình 3.1: Khảo sát gene CtrA 32 chủng N Meningitidis Kết cho thấy 32 chủng N meningitidis phân lập cho kết dương tính Chưa tìm thấy chủng N meningitidis thiếu gene ctrA Khảo sát cặp mồi phát nhóm N Meningitidis Khảo sát cự có mặt gene siaDc phát nhóm A N meningitidis +Tiến hành phản ứng PCR 32 chủng N meningitidis phân lập 10 M 11 12 13 14 15 1617 18 19 20 21 22 23 24 25 26 M 27 28 29 30 31 32 470bp Hình 3.7 : Khảo sát gene siaDc phát N meningitidis nhóm huyết A, Bằng việc chạy PCR với cặp mồi phát N meningitidis nhóm A 32 chủng phân lập cho thấy mẫu não dương tính với N meningitidis nhóm A Khảo sát có mặt gene siaDb phát nhóm B N meningitidis + Kết so sánh ngân hàng gene [phụ lục 7] 13 + Thực phản ứng PCR: 18 19 20 21 22 2324 M 25 26 27 28 29 30 31 M 10 11 12 13 14 15 16 17 555bp Hình 3.8: Khảo sát gene siaDb phát N meningitidis nhóm B Kết bảng cho thấy: khảo sát xuất gene siaDb tổng số 32 chủng N meningitidis 10 dương tính với N meningitidis nhóm B Khảo sát cự có mặt gene siaDc phát nhóm huyết C N meningitidis + Thực phản ứng PCR + Kết phản ứng PCR 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 Hình 3.9: Khảo sát gene siaDc phát N meningitidis nhóm C Loại trừ chủng dương tính với N.meningitidis nhóm B, tất chủng lại sử dụng để khảo sát có mặt gene siaDc phát nhóm C N.meningitidis, kết cho thấy có chủng dương tính với N.meningitidis nhóm B 14 3.2 Đánh giá nhậy cảm với kháng sinh chủng N meningitidis nhóm huyết B C Bảng 3.9: Xác định MIC chủng Neisseria meningitidis, nhóm huyết B (n=23) Kháng sinh Nhạy cảm (S) Trung gian (I) Kháng (R) Số chủng % Số chủng % Số chủng % Ampicillin 03 13% 20 87% 0 Ciprofloxacin 23 100 % 0 0 Ceftriaxone 23 100 % 0 0 Rifampin 22* 100 % 0 0 12 52,17% 11 47,83% 0 13 56,52% Benzyl Penicillin Chloramphenicol 10 43,47 % Ghi chú: MIC: minimum inhibator concentration Kết bảng 3.13 cho thấy: Thử nghiệm MIC Ampicillin Benzyl penicillin thuộc nhóm ß- Lactam (cùng nhóm với Amoxicllin sử dụng dự phòng cho đơn vị) invitro cho thấy: + Ampicillin: Chủng N meningitidis, nhóm huyết B có biểu nhậy cảm (giới hạn trung gian-I) 87% chủng phân lập + Benzyl Penicillin: nhóm huyết B trung gian 52,17% kháng là: 47,83% Thử nghiệm MIC với nhóm quinolon hệ II (Ciprofloxacin) Rifampin (Rifamicin) Ceftriaxon thuộc nhóm Cephalosporin hệ III: 100% chủng NMC nhóm huyết B nhậy cảm Bảng 3.10: Kết thử nghiệm in vivo người nhiễm N meningitidis, nhóm huyết B Phác đồ Số người Kết xét nghiệm (%) P(1;2) 15 điều trị dự phòng điều trị Amoxicillin (1) 15 Còn khuẩn (46,66%) Sạch khuẩn (53,33%) (2g/ ngày x ngày) Ciprofloxacin (2) ≥ 0,05 18 (27,77 %) 13 (72,22%) (0,5 g/ngày, liều nhất) Tổng 33 12 (36,36%) 21 (63,63%) Bảng 3.14 cho thấy: Các quân nhân nhiễm NMC, nhóm huyết B điều trị dự phòng với 02 phác đồ 1) Đang áp dụng dự phòng cho người tiếp xúc đơn vị quân đội, 2) Phác đồ hướng dẫn dự phòng cho người tiếp xúc Bộ Y tế Việt Nam Kết giám sát cho thấy 02 phác đồ tỷ lệ khuẩn đạt 72,22% Ciprofloxacin 53,33% với nhóm dung phác đồ Amoxicillin Bảng 3.11 : Xác định MIC (in vitro) chủng Neisseria meningitidis, nhóm huyết C (n=4) Kháng sinh Ampicillin Ciprofloxacin Ceftriaxone Rifampin Benzyl Penicillin Chloramphenicol Nhạy cảm (S) Số % chủng 0 0 100 100 0,00 100 Trung gian (I) Số % chủng 100 0 0 0 0,00 0 Kháng (R) Số % chủng 0 100 0 0 100 0 Đối với Benzyl Penicillin, chủng NMC kháng 4/4 chủng (100%) Đối với Ciprofloxacin, chủng kháng toàn chủng, kết phù hợp với kết Bệnh viện Bệnh nhiệt đới Trung ương năm 2012, chủng phân lập từ bệnh nhân nhiễm NMC, nhóm huyết C 16 d11/f363 Kháng sinh Rifampin Ceftriaxon chủng NMC, nhóm huyết C hoàn toàn nhậy cảm Bảng 3.12: Kết thử nghiệm in vivo người nhiễm N meningitidis, nhóm huyết C Phác đồ điều trị dự phòng Amoxicillin (1) (2g/ ngày x ngày) Ciprofloxacin (2) (0,5 g/ngày, liều nhất) Tổng Số người điều trị Kết xét nghiệm (%) Còn khuẩn Sạch khuẩn P (1;2) ≥ 0,05 Mặc dù thử ngiệm in vitro cho thấy chủng NMC, nhóm huyết C nhậy cảm với Ampicillin, thực nghiệm in vivo phát NMC hầu họng, điều giải thích liên quan tới chuyển hóa, hấp phụ Amoxicillin không đạt nồng độ tối ưu, người uống thuốc dự phòng không dùng phác đồ Đối với trường hợp dự phòng Ciprofloxacin, thử nghiệm in vitro toàn nhóm huyết C kháng, thử nghiệm in vivo lại khuẩn Đối với quân đội Mỹ sử dụng chiến thuật điều trị tuyến trước phác đồ Benzyl Penicillin sau điều trị bệnh viện phác đồ Ceftriaxon, không dùng nhóm Cephalosphorin sớm vi khuẩn giải phóng nội độc tố gây sốc cho bệnh nhân Thực tế thử nghiệm in vitro in vivo giám sát đợt 2014 cho thấy hiệu nhóm ß lactam (Ampicillin, Bezyl Penicillin) Chloramphenicol với NMC giảm nhậy cảm, theo phác đồ trước sử dụng Amoxiclin có đến 46,66% không khuẩn với nhóm huyết B (in vivo) có đến 100% chủng NMC giảm nhậy thử nghiệm in vitro với kháng sinh 17 tương đương, nhóm Ampicillin Đối với kháng sinh Ciprofloxacin chủng thuộc nhóm huyết B nhậy cảm, nhóm huyết C lại kháng (in vitro) Vì vậy, theo cần xem xét phác đồ điều trị dự phòng áp dụng cho tuyến đơn vị Ca bệnh sau điều trị giai đoạn cấp tính cần làm vi khuẩn đường hô hấp Rifampin, phác đồ áp dụng cho người tiếp xúc với ca bệnh, người gia đình có người mắc bệnh KẾT LUẬN Đặc điểm sinh học cấu nhóm huyết NMC phân lập số đơn vị tân binh quân đội: - 02 chủng NMC không lên men đường Maltose tập chung nhóm huyết B - 100% NMC nhóm C có gene SiaDc 01 chủng Gene CtrA - Cơ cấu nhóm huyết thanh: tỷ lệ nhiễm NMC chung 37,32 %, nhóm huyết B chiếm 85,90% Tính nhạy cảm kháng sinh chủng NMC phân lập từ người mang mầm bệnh không triệu chứng: - Amoxicilin: in vitro nhóm hyết B,C nhạy cảm giới hạn trung gian (87%-100%) in vivo nhóm huyết B,C tỉ lệ khuẩn lần lượt(53,33%-50%) - Ciprofloxacin: in vitro nhóm huyết B nhạy cảm 100%,trên nhóm huyết C kháng 100% 18 in vivo nhóm huyết B khuẩn 72,22%, nhóm huyết C khuẩn 100% KHUYẾN NGHỊ  Bộ Y tế cần có chương trình giám sát Não mô cầu 19 20 [...]... 4 tính chất lên men đường: glucose (+), maltose (+), lactose và schaccarose (-) và ngưng kết 11 với kháng huyết thanh kháng polysacchride của N meningitidis mới cho phép chẩn đoán sơ bộ Nhận định kết quả dương tính hay âm tính với loài phụ thuộc rất nhiều vào chất lượng của kháng huyết thanh do các công ty sản xuất với độ tinh sạch khác nhau 3.1.3 Khảo sát đặc điểm sinh học phân tử của các chủng N .meningitidis. .. được sử dụng để khảo sát sự có mặt của gene siaDc phát hiện nhóm C của N .meningitidis, kết quả cho thấy có 5 chủng dương tính với N .meningitidis nhóm B 14 3.2 Đánh giá sự nhậy cảm với kháng sinh của các chủng N meningitidis nhóm huyết thanh B và C Bảng 3.9: Xác định MIC của chủng Neisseria meningitidis, nhóm huyết thanh B (n=23) Kháng sinh Nhạy cảm (S) Trung gian (I) Kháng (R) Số chủng % Số chủng % Số... bằng các cặp mồi đặc hiệu loài và nhóm N .meningitidis thông qua phản ứng PCR Lựa chọn 32 trong tổng số 61 chủng đã phân lập được ở trên tiến hành khảo sát đặc điểm sinh học phân tử bằng các cặp mồi đặc hiệu cho loài và nhóm N .meningitidis Khảo sát bằng các cặp mồi phát hiện loài N meningitidis - Vùng gene ctrA là vùng gene có tính bảo thủ cao và thường được sử dụng trong các phản ứng PCR và realtime-PCR... sự xuất hiện của gene siaDb trên tổng số 32 chủng N meningitidis 10 dương tính với N meningitidis nhóm B Khảo sát cự có mặt của gene siaDc phát hiện nhóm huyết thanh C của N meningitidis + Thực hiện phản ứng PCR + Kết quả của phản ứng PCR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 Hình 3.9: Khảo sát gene siaDc phát hiện N meningitidis nhóm C Loại trừ những chủng đã dương tính với N .meningitidis. .. quả dương tính Chưa tìm thấy chủng N meningitidis thiếu gene ctrA Khảo sát bằng các cặp mồi phát hiện nhóm N Meningitidis Khảo sát cự có mặt của gene siaDc phát hiện nhóm A của N meningitidis +Tiến hành phản ứng PCR trên 32 chủng N meningitidis đã phân lập 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 1617 18 19 20 21 22 23 24 25 26 M 27 28 29 30 31 32 470bp Hình 3.7 : Khảo sát gene siaDc phát hiện N meningitidis. .. vitro và in vivo trong giám sát đợt 2014 cho thấy hiệu quả của nhóm ß lactam (Ampicillin, Bezyl Penicillin) và Chloramphenicol với NMC đã giảm nhậy cảm, nếu theo phác đồ trước đây sử dụng Amoxiclin thì có đến 46,66% không sạch khuẩn với nhóm huyết thanh B (in vivo) và có đến 100% chủng NMC giảm nhậy trên thử nghiệm in vitro với kháng sinh 17 tương đương, cùng nhóm là Ampicillin Đối với kháng sinh Ciprofloxacin... huyết thanh C lại kháng (in vitro) Vì vậy, theo chúng tôi cần xem xét phác đồ điều trị dự phòng đang áp dụng hiện nay cho tuyến đơn vị Ca bệnh sau điều trị giai đoạn cấp tính thì cần làm sạch vi khuẩn ở đường hô hấp bằng Rifampin, phác đồ áp dụng cho cả người tiếp xúc với ca bệnh, người trong cùng gia đình có người mắc bệnh KẾT LUẬN 1 Đặc điểm sinh học và cơ cấu nhóm huyết thanh của NMC phân lập tại... Thanh Hoá và Vĩnh Phúc Tỷ lệ quân nhân nhập ngũ từ các địa phương thuộc các tỉnh đồng bằng Bắc Bộ từ 27,77% - 51,85% Cơ cấu nhóm huyết thanh B lại khá phổ biến ở quân nhân có nguồn gốc từ Nam Định và Hưng Yên (42,59% và 65,00%) Kết quả này không phản ánh chính xác tỷ lệ nhiễm của thanh niên tại địa phương, nhưng phần nào gợi ý đến sự lưu hành của N meningitidis với nhóm huyết thanh mang tính chất địa... các đơn vị quân đội, 2) Phác đồ hướng dẫn dự phòng cho người tiếp xúc của Bộ Y tế Việt Nam Kết quả giám sát cho thấy 02 phác đồ trên tỷ lệ sạch khuẩn chỉ đạt 72,22% đối với Ciprofloxacin và 53,33% với nhóm dung phác đồ Amoxicillin Bảng 3.11 : Xác định MIC (in vitro) của chủng Neisseria meningitidis, nhóm huyết thanh C (n=4) Kháng sinh Ampicillin Ciprofloxacin Ceftriaxone Rifampin Benzyl Penicillin Chloramphenicol... 0 0 0 0 0 0 0,00 0 0 Kháng (R) Số % chủng 0 0 4 100 0 0 0 0 4 100 0 0 Đối với Benzyl Penicillin, các chủng NMC đã kháng 4/4 chủng (100%) Đối với Ciprofloxacin, các chủng đã kháng toàn bộ ở cả 4 chủng, kết quả này phù hợp với kết quả của Bệnh viện Bệnh nhiệt đới Trung ương năm 2012, trên chủng phân lập từ bệnh nhân nhiễm NMC, nhóm huyết thanh C tại 16 d11/f363 Kháng sinh Rifampin và Ceftriaxon các chủng