Nghiên cứu phát triển và hoàn thiện quy trình PCR đa mồi để phát hiện trực tiếp streptococcus suis từ dịch não tủy của người

Style Definition: TOC 1: Space Before: pt I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - ng Th Kiu Oanh NGHIấN CU PHT TRIN V HON THIN QUY TRèNH PCR A MI PHT HIN TRC TIP Streptococcus suis T DCH NO TY NGI LUN VN THC S KHOA HC H Ni 2013 I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - ng Th Kiu Oanh NGHIấN CU PHT TRIN V HON THIN QUY TRèNH PCR A MI PHT HIN TRC TIP Streptococcus suis T DCH NO TY NGI Chuyờn ngnh: Vi sinh vt hc Mó s: 60 42 40 LUN VN THC S KHOA HC NGI HNG DN KHOA HC: PGS.TS PHAN Lấ THANH HNG H Ni - 2013 Lun thc s Vi sinh vt hc LI CM N hon thnh lun ny, tụi xin by t lũng bit n sõu sc ti PGS.TS Phan Lờ Thanh Hng, Trng Khoa Vi Khun, Trng Phũng Vi khun hụ hp, Vin V sinh dch t Trung ng ó tn tỡnh hng dn, ng viờn v to mi iu kin tụi hon thnh ti Tụi cng xin by t lũng cm n sõu sc ti TS Nguyn Thanh Thy Trng Khoa An ton sinh hc - Qun lý cht lng, Vin V sinh dch t Trung ng v th Khoa ó to mi iu kin v thi gian cho tụi thc hin ti Tụi xin cm n th Phũng Vi khun hụ hp, Vin V sinh dch t Trung ng hc ó ch bo, giỳp , chia s tn tỡnh cho tụi nhng kinh nghim chuyờn mụn quỏ trỡnh lm thc nghim Tụi xin gi li cm n chõn thnh n cỏc thy, cỏc cụ Khoa sinh hc, c bit l cỏc thy cụ B mụn Vi sinh vt hc, trng i hc Khoa hc T nhiờn, i hc Quc gia H Ni ó to iu kin cho tụi quỏ trỡnh hc Tụi xin cm n gia ỡnh v bn bố luụn luụn ng viờn tinh thn tụi hon thnh lun ny H Ni, ngy thỏng nm 2013 Hc viờn ng Th Kiu Oanh Formatted: Space After: pt ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc MC LC T VN CHNG TNG QUAN Formatted: Line spacing: single 1.1 GII THIU V S.suis 1.1.1 Gii thiu chung 1.1.2 Mt s yu t c lc chớnh ca vi khun liờn quan n chn oỏn 1.1.3 C ch gõy bnh ca S.suis 1.2 S LY NHIM TRấN NGI CA S.suis 15 1.3 BNH V TRIU CHNG 19 1.3.1 ng lõy truyn 19 1.3.2 Triu chng 19 1.3.3 Bin phỏp phũng bnh 20 1.3.4 Bin phỏp chng dch 21 1.3.5 Nguyờn tc iu tr 21 1.4 CC PHNG PHP CHN ON PHềNG TH NGHIM 22 1.4.1 Nuụi cy phõn lp 22 1.4.2 Nhum Gram 22 1.4.3 Phn ng catalase 22 1.4.4 Xột nghim nh danh, nh typ: 23 1.4.5 Phỏt hin vi khun S suis bng phn ng Realtime PCR 23 1.5 PHNG PHP PCR 24 1.5.1 Gii thiu v phng phỏp khuch i gen (polymerase chain reaction PCR) 24 1.5.2 Nguyờn lý c bn ca k thut PCR 24 1.5.3 Gii thiu v phn ng PCR a mi 28 CHNG VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 34 2.1 VT LIU NGHIấN CU 34 2.1.1 Chng vi khun s dng nghiờn cu 34 2.1.2 Dch nóo ty nn 34 2.1.3 Dch nóo ty ca bnh nhõn c chn oỏn lõm sng viờm mng nóo cp tớnh S suis ( ỏnh giỏ hiu qu ca quy trỡnh PCR a mi c xõy dng ti): 35 ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Deleted: 22 Lun thc s Vi sinh vt hc 2.1.4 Sinh phm nghiờn cu 35 2.1.5 Trang thit b, dng c 38 2.2 PHNG PHP NGHIấN CU: 38 2.2.1 Nghiờn cu to bnh phm mụ phng 38 2.2.2 Nghiờn cu la chn t hp mi i din cho S suis v mt s yu t ch yu liờn quan n c lc ca vi khun 44 2.2.3 Nghiờn cu ti u chu trỡnh nhit 46 2.2.4 Nghiờn cu ti u cỏc thnh phn tham gia phn ng 47 2.2.5 Nghiờn cu mc phỏt hin vi khun S suis v mt s yu t c lc ca vi khun bi quy trỡnh PCR a mi c xõy dng nghiờn cu Tớnh n nh ca PCR a mi 48 2.2.6 ỏnh giỏ tớnh c hiu ca cỏc cp mi (kh nng bt cp chộo) vi nhng vi khun ph bin gõy hi chng lõm sng viờm mng nóo ging S suis 48 2.2.7 Xõy dng quy trỡnh x lý bnh phm tỏch chit DNA ca S suis 49 2.3 NH GI CC GI TR HU CH CA PHNG PHP 50 2.3.1 Tiờu chun xỏc nh chn oỏn dng tớnh v õm tớnh 50 2.3.2 Cỏc ch s tớnh toỏn tin cy v giỏ tr ca phng phỏp [3, 4] 51 Deleted: 45 Deleted: 47 Deleted: 48 Deleted: 50 Formatted: Line spacing: single CHNG KT QU V THO LUN 53 3.1 XY DNG QUY TRèNH PCR A MI PHT HIN TRC TIP Streptococcus suis V MT S C LC PH BIN CA VI KHUN 53 3.1.1 To bnh phm mụ phng 53 3.1.2 La chn cỏc cp mi v t hp mi phự hp: 54 3.1.3 Xỏc nh iu kin ti u ca phn ng PCR a mi phỏt hin S suis v mt s yu t c lc ph bin 56 3.1.4 Ti u húa cỏc thnh phn tham gia phn ng PCR a mi phỏt hin vi khun S suis v mt s yu t c lc ph bin 58 3.1.5 nhy v tớnh n nh ca quy trỡnh PCR c xõy dng (kh nng lp li kt qu) 62 3.1.6 ỏnh giỏ kh nng bt cp chộo ca cỏc cp mi (tớnh c hiu) vi nhng vi khun ph bin gõy bnh cnh lõm sng ging S suis 64 ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Deleted: 52 Deleted: 52 Deleted: 52 Deleted: 53 Deleted: 55 Deleted: 57 Deleted: 61 Deleted: 63 Lun thc s Vi sinh vt hc 3.2 XY DNG QUY TRèNH X Lí BNH PHM N GIN, D THC HIN BC L DNA CA VI KHUN Streptococcus suis T HIU QU (NH GI BNG KT QU PHT HIN CA PCR A MI) 65 3.3 NH GI CC GI TR HU CH CA PHNG PHP PCR A Deleted: 64 MI KHI P DNG VI BNH PHM LM SNG 69 Deleted: 68 3.3.1 Kt qu nuụi cy phõn lp/xỏc nh c vi khun t bnh phm: 69 Deleted: 68 3.3.2 Cỏc chi s ỏnh giỏ chớnh xỏc v giỏ tr hu ớch ca cỏc phng phỏp 70 Deleted: 69 Formatted: Line spacing: single KT LUN 74 TI LIU THAM KHO 76 ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Deleted: 73 Deleted: 74 Lun thc s Vi sinh vt hc DANH MC HèNH Hỡnh 1.1: Vi khun liờn cu khun ln qua kớnh hin vi in t Deleted: liờn cu ln Hỡnh 1.2: Khun lc S suis trờn mụi trng thch mỏu cu v thch mỏu nga Hỡnh 1.3 Bnh nhõn b nhim S suis 20 Hỡnh 1.4 S phn ng PCR 25 Hỡnh 3.1 Th nghim cỏc t hp mi phự hp (t t hp n t hp 8) 54 Formatted: Line spacing: single Deleted: 53 Hỡnh 3.2.Th nghim cỏc t hp mi phự hp (t t hp n t hp 16) 55 Deleted: 54 Hỡnh 3.3 PCR a mi vi cỏc iu kin phn ng ti u phỏt hin trc tip S suis bnh phm Error! Bookmark not defined Deleted: 57 Hỡnh 3.4 Th nghim hm lng cỏc mi vi nng mi mi l 20pmol/àl 59 Hỡnh 3.5 Th nghim hm lng mi vi nng mi khỏc 60 Hỡnh 3.6 Th nghim Quy trỡnh PCR ó xõy dng trờn mu bnh phm 61 Hỡnh 3.7 Mc phỏt hin vi khun S suis v yu t c lc ca vi khun bi PCR a mi ó hon thin (kt qu vi bnh phm mụ phng) 62 Hỡnh 3.8 Kim tra tớnh c hiu ca t hp mi & quy trỡnh PCR a mi 64 0 Hỡnh 3.9 X lý mu bnh phm dch nóo ty nhit 85 C v 90 C 60 phỳt 66 Hỡnh 3.10 Hiu qu x lý dch nóo ty nhit 800C vi thi gian khỏc 67 Hỡnh 3.11 Hiu qu x lý dch nóo ty ca bnh nhõn 800C/60(ỏnh giỏ bi PCR n mi) Error! Bookmark not defined Hỡnh 3.12 Hiu qu x lý dch nóo ty bng Kit v bng nhit 800C/60 67 Hỡnh 3.13 ng dng quy trỡnh PCR a mi ó c xõy dng trờn mu bnh phm 69 Deleted: 58 Deleted: 59 Deleted: 60 Formatted: Line spacing: single Deleted: 61 Formatted: Line spacing: single Deleted: gen mi Deleted: 63 Formatted: Line spacing: single Deleted: 65 Formatted: Line spacing: single Deleted: 66 Deleted: 66 Deleted: 66 Formatted: Line spacing: single Deleted: 68 Formatted: Line spacing: single Formatted: Space After: pt ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc DANH MC BNG Bng 1.1 H gen ca mt s chng Sreptococcus suis Formatted: Font: Not Bold Deleted: Bng 2.1 Mt s trỡnh t mi ch yu (primer) c s dng nghiờn cu [11,25,39,41] 37 Formatted: Justified Bng 2.2 Cỏc t hp mi c s dng th nghim 44 Deleted: 46 Bng Cỏc chu trỡnh PCR a mi c th nghim 46 Deleted: 51 Bng 2.3 Bng s liu c bn tớnh toỏn cỏc ch s 51 Bng 2.4 Mc LR+, LR - liờn quan n kh nng mc bnh v khụng mc bnh 52 Bng 3.1 Kt qu khng nh li c tớnh ca vi khun dựng lm mu 53 Bng 3.2 Cỏc t hp mi thớch hp c la chn thớ nghim 55 Bng 3.3 nh hng ca cỏc chu trỡnh PCR n kh nng phỏt hin S.suis 56 Bng 3.4 Kh nng phỏt hin vi khun v cỏc yu t c lc thay i iu kin quy trỡnh PCR a mi 57 Bng 3.5 Thnh phn tham gia phn ng PCR a mi c kho sỏt 58 Bng 3.6 Tớnh n nh ca Quy trỡnh PCR thc hin trờn mu bnh phm63 Bng 3.7 nh hng ca cỏc phng phỏp x lý bnh phm dựng/khụng dựng kit 65 Bng 3.8 nhy v c hiu ca phng phỏp PCR a mi so vi phng phỏp nuụi cy phõn lp (chun vng) vi n = 144 70 Bng 3.9 So sỏnh kt qu ba phng phỏp: PCR n mi, a mi v NCPL71 Bng 3.10 Cỏc ch s ỏnh giỏ chớnh xỏc v s hu ớch ca phng phỏp PCR a mi v nuụi cy phõn lp (n=153) 71 ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Deleted: 37 Deleted: 44 Deleted: 51 Deleted: 53 Deleted: 55 Deleted: 56 Deleted: 57 Deleted: 58 Deleted: 63 Deleted: 65 Deleted: 70 Deleted: 71 Deleted: 71 Deleted: Bng 1.1 H gen ca mt s chng Sreptococcus suis 4ả Bng 2.1 Mt s trỡnh t mi ch yu (primer) c s dng nghiờn cu 37ả Bng 2.2 Cỏc t hp mi c s dng th nghim 44ả Bng Cỏc chu trỡnh PCR a mi c th nghim 46ả Bng 2.3 Bng s liu c bn tớnh toỏn cỏc ch s 51ả Bng 2.4 Mc LR+, LR - liờn quan n kh nng mc bnh v khụng mc bnh 51ả Bng 3.1 Kt qu khng nh li c tớnh ca vi khun dựng lm mu 52ả Bng 3.2 Cỏc t hp mi thớch hp c la chn thớ nghim 54ả Bng 3.3 nh hng ca cỏc chu trỡnh PCR n kh nng phỏt hin S.suis 55ả Bng 3.4 Kh nng phỏt hin vi khun v cỏc yu t c lc thay i iu kin quy trỡnh PCR a mi 56ả Bng 3.5 Thnh phn tham gia phn ng PCR a mi c kho sỏt 57ả Bng 3.6 Tớnh n nh ca Quy trỡnh PCR thc hin trờn mu bnh phm 62ả Bng 3.7 nh hng ca cỏc phng phỏp x lý bnh phm dựng/khụng dựng kit 64ả Bng 3.8 nhy v c hiu ca phng phỏp PCR a mi so vi phng phỏp nuụi cy phõn lp (chun vng) vi n = 144 69ả Bng 3.9 So sỏnh kt qu hai phng phỏp: PCR a mi v nuụi cy phõn lp 70ả Bng 3.10 Cỏc ch s ỏnh giỏ chớnh xỏc v s hu ớch ca phng phỏp PCR a mi v nuụi cy phõn lp (n=153) 70ả Lun thc s Vi sinh vt hc BNG Kí HIU CC CH VIT TT Deleted: b Bp Base pair C (-) Chng õm C (+) Chng dng Cps Capsular polysaccharide DNA Deoxyribonucleic acid DNT Dch nóo ty Ef Extracellular factor Mrp Muramidase-released protein NCPL Nuụi cy phõn lp PCR Polymerase chain reaction P Phn ng Sly Suilysin S.suis Streptococcus suis VMN Viờm mng nóo VK Vi khun Formatted Table Deleted: e Deleted: r Formatted: Font: Not Italic ng Th Kiu Oanh Deleted: is Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc T VN Trong nhng nm 1960s trờn th gii v vi nm gn õy ti khu vc chõu ú cú Trung Quc v Vit Nam, luụn cú s cnh bỏo v tm nghiờm trng ca vi khun Streptococcus suis (S suis) nh mt tỏc nhõn gõy bnh nguy him cho ngi v cú tim nng gõy cỏc v bựng phỏt dch Ti Vit Nam, nhim trựng cp tớnh ngi S suis ó v ang c coi l mt bnh nhim trựng mi ni, cú kh nng gõy t l t vong v di chng cao Rt nhiu trng hp mc bnh cú cỏc biu hin lõm sng rt nng nh: nhim khun huyt, viờm mng nóo cú ban xut huyt v hoi t, hi chng sc nhim trựng nhim c liờn cu S liu lõm sng s b ca mt s vin v bnh vin ln nh Vin Cỏc Bnh truyn nhim v Nhit i Quc gia, Bnh vin Ch Ry, Bnh vin Trung ng Hu ó cho thy S suis l mt nhng nguyờn nhõn ch yu gõy bnh nhim khun huyt v viờm mng nóo m ngi ln ti Vit Nam cỏc nc cú nn kinh t phỏt trin, vic chn oỏn S suis bi cỏc k thut nuụi cy phõn lp kinh in hoc phỏt hin khỏng nguyờn c hiu bng cỏc k thut dch hc, thm cỏc k thut sinh hc phõn t rt ph bin Vit Nam, vỡ s khụng ng b v c s vt cht, trang thit b cng nh s khụng n nh v k nng thc hnh chn oỏn phũng thớ ngim, nhng phng phỏp sinh hc phõn t hin i nhm chn oỏn S suis rt khú cú th ỏp dng rng rói Tuy nhiờn cỏc phng phỏp hin i, nhanh v chớnh xỏc, phng phỏp PCR a mi (nhõn gen a mi) l phng phỏp cú tớnh kh thi hn c v mt kinh t v k nng thc hin so vi phng phỏp PCR nh lng (Real time PCR) Vi phng phỏp PCR a mi, chỳng ta cú th ng thi phỏt hin c s cú mt ca vi khun S suis, xỏc nh c typ huyt (typ 2) v cú th mt hoc vi gen c lc ca vi khun Phng phỏp ny giỳp tit kim sinh phm, thi gian, cụng sc v cú c hiu cao ng Th Kiu Oanh Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc Kt qu hỡnh 3.11 cho thy tt c cỏc nng vi khun phng phỏp x lý bng kớt v phng phỏp x lý bng nhit u thy vch DNA tng ng vi sn phm ca cp mi CPS 2J, Sly v 16S rDNA Nh vy nhy cng nh hiu qu ca phng phỏp x lý bng nhit hon ton tng ng vi phng phỏp x lý bng kit chun Nh vy, nhit 800C 60 phỳt l iu kin n gin nht x lý bnh phm dch nóo ty cú cha vi khun S suis nhm mc ớch tỏch chit c DNA s dng phn ng PCR Hin nay, trờn th trng b kit dựng tỏch chit DNA cú giỏ thnh khỏ cao Vỡ vy, s thnh cụng ca nghiờn cu phng phỏp x lý mu bnh phm n gin bng nhit s gúp phn ỏng k vic lm gim giỏ thnh ca mi mu xột nghim, lm gim gỏnh nng v kinh t cho ngi bnh c bit tỡnh trng kinh t khú khn nh hin Hỡnh 3.12 Hiu qu x lý dch nóo ty ca bnh nhõn 800C/60(ỏnh giỏ bi PCR n mi) M: thang chun DNA; (+): chng dng; (-): chng õm; Sp1-Sp5: mu bnh phm lõm sng (DNT) c x lý 800C/60 ng Th Kiu Oanh 68 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc c mu bnh phm, vch DNA v trớ kớch thc 498 bp ca cp mi c hiu cho typ ca vi khun S.suis u xut hin rt rừ nột Nh vy phng phỏp x lý mu bnh phm 800C 60 phỳt thớch hp x lý mu bnh phm dch nóo ty bc l DNA ca vi khun S.suis M (+) 19 10 11 12 13 14 15 20 21 22 23 24 25 26 27 M 28 29 30 31 32 33 34 16 17 18 35 101 (-) Hỡnh 3.13 ng dng quy trỡnh PCR a mi ó c xõy dng trờn mu bnh phm M: thang chun DNA; 1, 2, 35: 35 mu bnh phm (+): chng dng; (-): chng õm 101: mu bnh phm mụ phng vi nng 10 vk/p Hỡnh 3.13 cho thy kt qu chy PCR a mi trờn 35 mu bnh phm, ú cú cỏc mu bnh phm 16, 17, 24, 25, 26, 31,32 khụng thy xut hin sn phm ca PCR a mi Trong s cỏc mu cũn li ch yu hin hoc vch sn phm, ch cú mu 8, 23, 27 v 29 l cú vch sn phm khng nh li kt qu phõn tớch, i vi nhng mu ny cú th kim tra li bng phng phỏp PCR n mi 3.3 NH GI CC GI TR HU CH CA PHNG PHP PCR A MI KHI P DNG VI BNH PHM LM SNG 3.3.1 Kt qu nuụi cy phõn lp/xỏc nh c vi khun t bnh phm: S bnh phm ca bnh nhõn c chn oỏn VMN m nghi S suis: 53 S bnh phm nuụi cy phõn lp xỏc nh l S suis : 44 mu (44/53 trng hp nhim S suis) ng Th Kiu Oanh 69 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc S bnh phm xỏc nh l S suis bng PCR a mi: 53 mu (53/53 trng hp nhim S suis ) 3.3.2 Cỏc chi s ỏnh giỏ chớnh xỏc v giỏ tr hu ớch ca cỏc phng phỏp Trong trng hp tiờu chun xỏc nh viờm mng nóo S suis l phi dng tớnh phng phỏp nuụi cy phõn lp (c coi nh chun vng) S mu c phõn tớch bao gm: tng s mu bnh phm c chn oỏn lõm sng VMN m nghi vi khun S suis l 44 mu v s mu õm tớnh thc s (100 mu): n = 44 +100 = 144 Bng 3.8 nhy v c hiu ca phng phỏp PCR a mi so vi phng phỏp nuụi cy phõn lp (chun vng) vi n = 144 Kt qu chn oỏn S suis bng nuụi cy phõn lp Dng tớnh m tớnh Phng phỏp Dng tớnh a mi PCR (phng phỏp th m tớnh nghim) Tng Ch s ỏnh giỏ chớnh xỏc Tng 44 144 100 100 44 100 144 Phng phỏp nuụi cy nhy c hiu 100% 100% Phng phỏp PCR a mi 100% 100% Kt qu Bng 3.8 cho thy, phng phỏp PCR a mi phỏt hin liờn cu khun ln so vi nuụi cy phõn lp cú nhy t 100% v c hiu t 100% Trong trng hp ny tiờu chun xỏc nh viờm mng nóo S suis l dng tớnh vi hai phng phỏp l nuụi cy phõn lp hoc PCR a mi S mu c phõn tớch bao gm: tng s mu bnh phm c chn oỏn lõm sng VMN m nghi vi khun S suis l 53 mu v s mu õm tớnh thc s (100 mu): ng Th Kiu Oanh 70 Cao hc K18 Deleted: liờn cu ln Lun thc s Vi sinh vt hc n = 53 +100 = 153 Bng 3.9 So sỏnh kt qu ba phng phỏp: PCR n mi, a mi v NCPL K thut chn oỏn Kt qu phỏt hin vi khun S suis tng s mu bnh phm nghi ng (n = 53) Dng tớnh (+) m tớnh (-) (%) (%) Nuụi cy phõn lp PCR a mi PCR a mi Bnh nhõn c chn oỏn lõm sng VMN nghi S suis 44 (83,02%) (16,98%) 53 53 (100%) 53 (100%) (0%) (0%) 53 53 Bng 3.9 cho thy kt qu phỏt hin ca PCR n mi tng t PCR a mi (cú cp mi khỏc nhau) v nhiu hn phng phỏp NCPL l 16,98%, núi cỏch khỏc t l õm tớnh gi ca NCPL l 16,98% Bng 3.10 Cỏc ch s ỏnh giỏ chớnh xỏc v s hu ớch ca phng phỏp PCR a mi v nuụi cy phõn lp (n=153) Kt qu chn oỏn S suis Tng Dng tớnh m tớnh Dng tớnh 53 53 Phng phỏp a mi PCR m tớnh 100 100 53 100 153 Tng Phng phỏp nuụi Dng tớnh 44 44 cy phõn lp m tớnh 100 109 53 100 153 Tng So sỏnh cỏc giỏ tr ca hai phng phỏp vi tng s mu = 153 Phng phỏp nuụi cy Phng phỏp PCR a mi Ch s ỏnh giỏ chớnh xỏc: nhy 83,02% 100% c hiu 100% 100% T l dng tớnh gi 0 T l õm tớnh gi 16,98% Ch s ỏnh giỏ s hu ớch: + LR - LR Giỏ tr d oỏn dng tớnh (PPV) Giỏ tr d oỏn õm tớnh (NPV) ng Th Kiu Oanh 0,17 1.00 0.917 1.00 1.00 71 Cao hc K18 Deleted: hai Deleted: nuụi cy phõn lp Lun thc s Vi sinh vt hc Kt qu Bng 3.10 cho thy, phng phỏp PCR a mi phỏt hin liờn cu khun ln cú nhy rt cao vi 100%; ú phng phỏp nuụi cy cú nhy l 83,02% T l õm tớnh gi ca phng phỏp PCR a mi l 0%, ú t l õm tớnh gi ca phng phỏp nuụi cy gn 17% (16,98%) C hai phng phỏp u cú c hiu 100% v t l dng tớnh gi l 0% Nu xột nghim PCR a mi dng tớnh vi vi khun S suis, xỏc xut mc bnh l 100%, ú nu nuụi cy õm tớnh vi S suis, xỏc xut khụng mc bnh S suis l 91,7% Núi cỏch khỏc, giỏ tr d oỏn dng tớnh ca PCR a mi v nuụi cy l 100% v giỏ tr d oỏn õm tớnh ca PCR a mi l 100% v ca nuụi cy l 91,7% Vi iu kin Vit Nam hin nay, cú nhiu lý giỏ tr õm tớnh nuụi cy cú nhiu kh nng l õm tớnh gi (do dựng khỏng sinh trc vo bnh vin, vi khun b khỏng sinh c ch khụng phỏt trin c trờn mụi trng nuụi cy, k nng nuụi cy khụng chun, mụi trng nuụi cy khụng m bo cht lng), nhng bnh phm cha DNA ca vi khun nờn cú kt qu dng tớnh s dng phng phỏp PCR, vúi lý nh vy nờn cỏc mu õm tớnh nuụi cy nhng dng tớnh PCR khụng th coi l cỏc mu õm tớnh thc ( tớnh theo cụng thc) c Cng nh vy, s khụng chớnh xỏc nu ch coi cỏc mu bnh phm phỏt hin c vi khun bng nuụi cy phõn lp l t l dng tớnh thc Chỳng tụi ó tớnh toỏn nhy, c hiu v cỏc giỏ tr hu ớch khỏc ỏp dng PCR a mi trờn 153 mu bnh phm (bao gm 53 mu ca bnh nhõn cú biu hin viờm mng nóo m nghi vi khun S suis v 100 mu DNT ca bnh nhõn viờm nóo vi rut (da trờn lõm sng v xột nghim sinh húa - t bo ca DNT) da trờn nguyờn tc nh sau: - ỏnh giỏ hiu qu phỏt hin ca PCR a mi vi qui nh l dng tớnh kt qu phỏt hin vi khun dng tớnh phng phỏp ó c coi l chun vng (nuụi cy phõn lp), khụng tớnh cỏc trng hp ch dng tớnh PCR a mi (l phng phỏp ang c ỏnh giỏ) (n=144) nhy ca mi phng phỏp xột nghim so sỏnh vi phng phỏp c coi l chun vng l t l dng tớnh thc ca mu bnh phm m xột ng Th Kiu Oanh 72 Cao hc K18 Deleted: liờn cu ln Lun thc s Vi sinh vt hc nghim cn c so sỏnh cú th phỏt hin c Vi c mu l 144, phng phỏp PCR a mi phỏt hin liờn cu khun ln so vi nuụi cy phõn lp cú nhy t 100% v c hiu t 100% Ch s LR+ cho thy t l dng tớnh thc ca c hai phng phỏp nh v nu ó phỏt hin c vi khun hay yu t di truyn ca vi khun thỡ chc chn l dng tớnh, ch s LR- cho thy t l õm tớnh gi ca PCR a mi ỏp dng vi S suis l 0% - So sỏnh hiu qu phỏt hin vi khun ca phng phỏp PCR a mi vi PCR n mi v nuụi cy phõn lp.Trong trng hp ny tiờu chun xỏc nh viờm mng nóo S suis l dng tớnh vi hai phng phỏp: nuụi cy phõn lp hoc PCR (n=153) phn phõn tớch ny, c s thit lp cỏc bng tớnh toỏn l: cỏc mu c coi l dng tớnh cú ớt nht mt hai phng phỏp dng tớnh v cỏc mu õm tớnh c hai phng phỏp u õm tớnh Trong 53 mu bnh phm t 53 bnh nhõn c chn oỏn lõm sng l VMN nghi S suis cú 44 mu nuụi cy dng tớnh, 09 mu nuụi cy õm tớnh Nu phỏt hin bng PCR a mi cú 100% s mu dng tớnh (53/53) Nu tớnh theo quy nh viờm mng nóo xỏc nh S suis l dng tớnh vi hai phng phỏp: nuụi cy phõn lp hoc PCR thỡ nhy ca phng phỏp nuụi cy l 83,02% v nhy ca PCR a mi l 100% (Bng 3.10), tớnh xỏc thc ca PCR a mi c kim chng vi PCR n mi (quy trỡnh chun ca phũng thớ nghim Liờn cu, Vin Quc gia cỏc Bnh nhim trựng, Tokyo, Nht Bn) Trong trng hp ny, c hiu ca phng phỏp PCR a mi so sỏnh vi nuụi cy phõn lp l 100% hay t l õm tớnh gi ca phng phỏp PCR a mi l 0%, ú t l õm tớnh gi phng phỏp nuụi cy xp x 17% (Bng 3.10) Ngoi ra, chỳng tụi s dng mi tham kho t ti liu khoa hc ó cụng b cho k thut PCR a mi th nghim ny nờn t hp mi ó la chn cng ó c kho sỏt tớnh c hiu ng Th Kiu Oanh 73 Cao hc K18 Deleted: liờn cu ln Lun thc s Vi sinh vt hc KT LUN Xõy dng quy trỡnh PCR a mi phỏt hin trc tip vi khun S suis (liờn cu Deleted: c Deleted: liờn cu ln khun ln) v mt s yu t c lc c bn ca vi khun bnh phm ngi t cỏc yờu cu v gii hn phỏt hin/ nhy v tớnh c hiu/ c hiu v tớnh lp li kt qu nh sau: - Vi bnh phm mụ phng (m bo ging bnh phm tht bao gm vi khun c thun nht v chun dch nóo ty ca ngi t bnh nhõn b Deleted: ( hi chng nóo cp): Deleted: + Gii hn phỏt hin t vi khun/1 ng phn ng + Tớnh c hiu: khụng cú hin tng bt cp nhm vi vi khun khỏc loi - Vi bnh phm lõm sng: + nhy: t 100% + c hiu so vi cỏc phng phỏp phỏt hin khỏc (nuụi cy phõn lp, PCR n mi): t 100% - Kh nng lp li kt qu ca PCR a mi: t 100% vi bnh phm mụ phng v bnh phm lõm sng Xõy dng c quy trỡnh x lý mu bnh phm dch nóo ty n gin khụng dựng sinh phm thng mi m t hiu qu phỏt hin bng PCR a mi: - X lý bng nhit 800C/60 phỳt - m bo cht lng (bc l DNA ca vi khun, kh cht c ch) tng ng nh tỏch chit bng b sinh phm ng Th Kiu Oanh 74 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc KIN NGH Phng phỏp PCR a mi l mt phng phỏp sinh hc phõn t chn oỏn nhanh Streptococcus suis t dch nóo ty ngi Phng phỏp PCR a mi tit kim Formatted: Justified, Indent: First line: 1,2 cm, Space Before: 12 pt Formatted: Font: Italic thi gian, cụng sc cng nh lm gim giỏ thnh xột nghim ca mu bnh phm Vỡ th, nu phng phỏp ny c trin khai ti cỏc bnh vin v Trung tõm y t d phũng tuyn tnh thỡ vic iu tr giỏm sỏt bnh S.suis gõy s t hiu qu tt Formatted: Font: Italic Formatted: Font: Not Bold Formatted: Justified, Indent: Left: 1,63 cm, First line: 1,85 cm, Space Before: 12 pt ng Th Kiu Oanh 75 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc TI LIU THAM KHO Ti liu Ting Vit B Y t - Cc Y t d phũng v mụi trng (2009), Cm nang phũng chng bnh truyn nhim, H Ni Nguyn Th Hng Lan, Trn Tnh Hin (2007), Nhim liờn cu ln ti Bnh vin Bnh nhit i t thỏng 1/2005 n thỏng 12/2006, K yu Hi tho khoa hc Thỏch thc chn oỏn v iu tr Bnh nhim trựng, Bnh vin Bnh Nhit i, Thnh ph H Chớ Minh Dng ỡnh Thin (2006), Dch t hc lõm sng, Nh xut bn y hc Nguyn Vn Tun (2008), Y hc thc chng, Nh xut bn y hc Ti liu Ting Anh Astrid de Greeff,Andrea Hamilton,Iain C Sutcliffe,Herma Buys,Loek van Alphen, Hilde E Smith (2003), Lipoprotein signal peptidase of Streptococcus suis serotype 2, Microbiology, 149, 13991407 Benga L, Goethe R, Rohde M, Valentin-Weigand P (2004), Non-encapsulated strains reveal novel insights in invasion and survival of Streptococcus suis in epithelial cells, Cell Microbioly, 6(9),867881 Berthelot-Herault F, Cariolet R, Labbe A, Gottschalk M, Cardinal JY, Kobisch M (2001), Experimental infection of specific pathogen free piglets with French strains of Streptococcus suis capsular Type Can J Vet Res, 65(3),196200 Berthelot-Herault F, Gottschalk M, Morvan H, Kobisch M (2005), Dilemma of virulence of Streptococcus suis: Canadian isolate 89-1591 characterized as a virulent strain using a standardized experimental model in pigs, Can J Vet Res., 69(3), 236240 Chang B, Wada A, Ikebe T, Ohnishi M, Mita K, Endo M, Matsuo H, Asatuma Y, Kuramoto S, Sekiguchi H, Yamazaki M, Yoshikawa H, Watabe N, Yamada H, Kurita S, Imai Y, Watanabe H (2006), Characteristics of Streptococcus suis Isolated from Patients in Japan, Jpn J Infect Dis., 59 (6), 397-399 ng Th Kiu Oanh 76 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc 10 Constance Schultsz, Ewout Jansen, Wendy Keijzers, Anja Rothkamp, Birgitta Duim, A Wagenaar, Arie van der Ende (2012), Differences in the Population Structure of Invasive Streptococcus suis Strains Isolated from Pigs and from Humans in the Netherlands,PLoS ONE, 7(5), 11 Corinne Marois, Laởtitia Le Devendec, Marcelo Gottschalk, and Marylốne Kobisch (2006), Molecular characterization of Streptococcus suis strains by 16S 23S intergenic spacer polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis, Can J Vet Res, 70(2): 94104 12 Dan Takeuchi,Anusak Kerdsin, Anupong Pienpringam, Phacharaphan Loetthong, Sutit Samerchea, Pakkinee Luangsuk, Kasean Khamisara, Nithita Wongwan, Prasanee Areeratana, Piphat Chiranairadul, Suwat Lertchayanti, Sininat Petcharat, Amara Yowang, Phanupong Chaiwongsaen,Tatsuya Nakayama, Yukihiro Akeda, Shigeyuki Hamada, Pathom Sawanpanyalert, Surang Dejsirilert, Kazunori Oishi (2012), Population-Based Study of Streptococcus suis Infection in Humans in Phayao Province in Northern Thailand, PLoS One, 7(2): e31265 13 Dang Trung Nghia Ho, Thi Phuong Tu Le, Marcel Wolbers, Quang Thai Cao,Van Minh Hoang Nguyen, Vu Thieu Nga Tran, Thi Phuong Thao Le, Hoan Phu Nguyen, Thi Hong Chau Tran, Xuan Sinh Dinh, Song Diep To, Thi Thanh Hang Hoang, Truong Hoang, James Campbell, Van Vinh Chau Nguyen, Tran Chinh Nguyen, Van Dung Nguyen, Thi Hoa Ngo, Brian G Spratt, Tinh Hien Tran, Jeremy Farrar,Constance Schultsz (2011), Risk Factors of Streptococcus suis Infection in Vietnam A Case-Control Study, PLoS One, 6(3), e17604 14 De Greeff A, Buys H, Verhaar R, Dijkstra J, Van Alphen L, Smith HE (2002), Contribution of fibronectin-binding protein to pathogenesis of Streptococcus suis serotype 2, Infect Immun,70(3),13191325 15 Esgleas M, Dominguez-Punaro Mde L, Li Y, Harel J, Dubreuil JD, Gottschalk M (2009), Immunization with SsEno fails to protect mice against challenge with Streptococcus suis serotype 2, FEMS Microbiol Lett., 294(1),8288 ng Th Kiu Oanh 77 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc 16 Esgleas M, Lacouture S, Gottschalk M (2005), Streptococcus suis serotype binding to extracellular matrix proteins, FEMS Microbiol Lett., 244(1),3340 17 Ferrando ML, Fuentes S, De Greeff A, Smith H, Wells JM (2010), ApuA, a multifunctional -glucan-degrading enzyme of Streptococcus suis, mediates adhesion to porcine epithelium and mucus, Microbiology, 156(Pt 9),28182828 18 Ge J, Feng Y, Ji H et al (2009), Inactivation of dipeptidyl peptidase IV attenuates the virulence of Streptococcus suis serotype that causes streptococcal toxic shock syndrome, Curr Microbiol, 59(3),248255 19 Gottschalk M., Karriker L, Ramirez A, Schwartz KJ, Stevenson G, Zimmerman J (Eds) (2011), Streptococcosis In: Diseases of Swine, Wiley Publishers, NJ, USA 20 Gottschalk MG, Lacouture S, Dubreuil JD.( (1995), Characterization of Streptococcus suis capsular type haemolysin, Microbiology, 141(Pt 1),189195 21 Gottschalk M, Segura M (2000), The pathogenesis of the meningitis caused by Streptococcus suis: the unresolved questions, Vet Microbiol.,76(3),259272 22 Gottschalk M, Xu J, Calzas C, Segura M (2010), Streptococcus suis: a new emerging or an old neglected zoonotic pathogen, Fut Microbiol.,5(3),371391 23 Heiman F L Wertheim, Ho Dang Trung Nghia, Walter Taylor, Constance Schultsz (2009), Streptococcus suis: An Emerging Human Pathogen, Clin Infect Dis., 48 (5): 617-625 24 Henegariu O, Heerema NA, Dlouhy SR, Vance GH, Vogt PH (1997), Multiplex PCR: critical parameters and step-by-step protocol, BioTechniques, 23(3), 504-511 25 Henk J Wisselink, Jeroen J Joosten, and Hilde E Smith (2002), Multiplex PCR Assays for Simultaneous Detection of Six Major Serotypes and Two VirulenceAssociated Phenotypes of Streptococcus suis in Tonsillar Specimens from Pigs, J Clin Microbiol., 40(8): 29222929 26 Hilde E Smith, Vincent Veenbergen, Joeke van der Velde, Marloes Damman, Henk J Wisselink,Mari A Smits (1999), The cps Genes of Streptococcus suis Serotypes 1, 2, and 9: Development of Rapid Serotype-Specific PCR Assays, J Clin Microbiol.,37 (10), 3146-3152 ng Th Kiu Oanh 78 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc 27 Ho Dang Trung Nghia, Ngo Thi Hoa, Le Dieu Linh, James Campbell, To Song Diep, Nguyen Van Vinh Chau, Nguyen Thi Hoang Mai, Tran Tinh Hien, Brian Spratt, Jeremy Farrar, Constance Schultsz (2008), Human Case of Streptococcus suis Serotype 16 Infection, Emerg Infect Dis., 14(1), 155157 28 Hongjie Yu, Huaiqi Jing, Zhihai Chen, Han Zheng, Xiaoping Zhu, Hua Wang, Shiwen Wang, Lunguang Liu, Rongqiang Zu, Longze Luo, Nijuan Xiang, Honglu Liu, Xuecheng Liu, Yuelong Shu, Shui Shan Lee, Shuk Kwan Chuang, Yu Wang, Jianguo Xu, Weizhong Yang, and the Streptococcus suis study groups2 (2006), Human Streptococcus suis Outbreak, Sichuan, China, Emerging Infectious Diseases, 12 (6), 914-920 29 Hsih-Yen Tsai, Liao CH, Liu CY, Huang YT, Teng LJ, Hsueh PR (2012), Streptococcus suis infection in Taiwan, 2000-2011, Diagnostic microbiology and infectious disease, 74(1),75-7 30 Kay R, Cheng AF, Tse CY., (1995), Streptococcus suis infection in Hong Kong., Field Code Changed QJM., 8(1), 39-47 31 Kerdsin A, Dejsirilert S, Sawanpanyalert P et al.(2011), Sepsis and spontaneous bacterial peritonitis in Thailand Lancet, 378(9794),960 32 Lalonde M, Segura M, Lacouture S, Gottschalk M (2000), Interactions between Streptococcus suis serotype and different epithelial cell lines, Microbiology, 146(Pt 8), 19131921 33 Lecours MP, Fittipaldi N, Takamatsu D, Okura M, Segura M, Goyette-Desjardins G, Van Calsteren MR, Gottschalk M (2012), Sialylation of Streptococcus suis serotype is essential for capsule expression but is not responsible for the main Field Code Changed capsular epitope, Microbes Infect., 14(11), 941-950 34 Liu LN, Hu FQ, Zhu JM, Zhao Y, Pan Q, Li M, Tang JQ (2007), Study on expression of Streptococcus suis serotype sly gene, purification and activity of its Field Code Changed product, Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi.,28(12):1198-202 ng Th Kiu Oanh 79 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc 35 Lun ZR, Wang QP, Chen XG, Li AX, Zhu XQ (2007), Streptococcus suis: an Field Code Changed emerging zoonotic pathogen, Lancet Infect Dis.,7(3):201-9 36 M Gottschalk, R Higgins, M Jacques, K R Mittal, and J Henrichsen (1989), Description of 14 new capsular types of Streptococcus suis, J Clin Microbiol., 27(12): 26332636 37 Ma E, Chung PH, So T, Wong L, Choi KM, Cheung DT, Kam KM, Chuang SK, Tsang T, ; Collaborative Study Group on Streptococcus suis infection in Hong Kong (2008), Streptococcus suis infection in Hong Kong: an emerging infectious disease?, Field Code Changed Epidemiol Infect., 136(12):1691-7 38 Markoulatos P, Mangana-Vougiouka O, Koptopoulos G, Nomikou K, Papadopoulos O (2000), Detection of sheep poxvirus in skin biopsy samples by a Field Code Changed multiplex polymerase chain reaction, J Virol Methods., 84(2):161-7 39 Marois C, Bougeard S, Gottschalk M, Kobisch M (2004), Multiplex PCR assay for detection of Streptococcus suis species and serotypes and 1/2 in tonsils of live and Field Code Changed dead pigs, J Clin Microbiol., 42(7):3169-75 40 Mohini Joshi, Dr.Deshpande J.D (2010), Polymerase chain reaction: Methods, principles and application, International Journal of Biomedical Research, 1(5), 81-97 41 M S Princivalli1, C Palmieri1, G Magi1, C Vignaroli1, A Manzin2, A Camporese3, S Barocci4, C Magistrali4, B Facinelli (2009), Genetic diversity of streptococcus suis clinical isolates from pigs and humans in Italy (2003-2007), Euro Surveill., 14(33) pii: 19310 42 Nahuel Fittipaldi, Mariela Segura1, Daniel Grenier, Marcelo Gottschalk (2012), Virulence factors involved in the pathogenesis of the infection caused by the swine pathogen and zoonotic agent Streptococcus suis, Future Microbiology, (2), 259-279 43 Nguyen Thi Hoang Mai, Ngo Thi Hoa,Tran Vu Thieu Nga,Le Dieu Linh,Tran Thi Hong Chau,Dinh Xuan Sinh, Nguyen Hoan Phu,Ly Van Chuong,To Song Diep,James Campbell,Ho Dang Trung Nghia,Tran Ngoc Minh,Nguyen Van Vinh Chau,Menno D de Jong, Nguyen Tran Chinh, Tran Tinh Hien, Jeremy Farrar, Constance Schultsz ng Th Kiu Oanh 80 Cao hc K18 Lun thc s Vi sinh vt hc (2008), Streptococcus suis Meningitis in Adults in Vietnam, Clin Infect Dis., 46 (5): 659-667 44 Norton PM, Rolph C, Ward PN, Bentley RW, Leigh JA (1999), Epithelial invasion and cell lysis by virulent strains of Streptococcus suis is enhanced by the presence of suilysin, FEMS Immunol Med Microbiol.,26(1),2535 45 P Markoulatos, N Siafakas, M Moncany (2002), Multiplex polymerase chain reaction: A practical approach, Journal of Clinical Laboratory Analysis, 16(1), 4751 46.Pan X, Ge J, Li M et al.(2009), The orphan response regulator CovR: a globally negative modulator of virulence in Streptococcus suis serotype 2, J Bacteriol., 191(8), 26012612 47 Pian Y, Gan S, Wang S, Guo J, Wang P, Zheng Y, Cai X, Jiang Y, Yuan Y (2012), " Fhb, a Novel Factor H-Binding Surface Protein, Contributes to the Antiphagocytic Ability and Virulence of Streptococcus suis, Infect Immun.,80(7):2402-13 48 R Higgins, M Gottschalk, M Boudreau,A Lebrun, J Henrichsen (1995), Description of six new capsular types (29-34) of Streptococcus suis, J Vet Diagn Invest, 7, 405-406 49 Salles MW, Perez-Casal J, Willson P, Middleton DM (2002), Changes in the leukocyte subpopulations of the palatine tonsillar crypt epithelium of pigs in response to Streptococcus suis Type infection,Vet Immunol Immunopathol., 87(12),5163 50 Samantha J King, Andrew G Allen, Duncan J Maskell, Christopher G Dowson and Adrian M Whatmore(2004), Distribution, Genetic Diversity, and Variable Expression of the Gene Encoding Hyaluronate Lyase within the Population Streptococcus suis, J Bacteriol., 186(14), 4740 51 Seong-Min Choi, Bang-Hoon Cho, Kang-Ho Choi, Tai-Seung Nam, Joon-Tae Kim, Man-Seok Park, Byeong C Kim, Myeong-Kyu Kim, Ki-Hyun Cho (2012), Meningitis Caused by Streptococcus suis, J Clin Neurol, 8, 79-82 ng Th Kiu Oanh 81 Cao hc K18 Field Code Changed Lun thc s Vi sinh vt hc 52 Smith HE, Buijs H, De Vries RR, Wisselink HJ, Stockhofe-Zurwieden N, Smits MA (2001) Environmentally regulated genes of Streptococcus suis: identification by the use of iron-restricted conditions in vitro and by experimental infection of piglets, Microbiology, 147(Pt 2),271280 53 Staats JJ, Feder I, Okwumabua O, Chengappa MM (1997), Streptococcus suis: Field Code Changed past and present, Vet Res Commun.,21(6),381-407 54 Tang Y, Zhang X, Wu W, Lu Z, Fang W (2012), Inactivation of the sodA gene of Streptococcus suis type encoding superoxide dismutase leads to reduced Field Code Changed virulence to mice, Vet Microbiol.,158(3-4), 360-6 55 Vanier G, Sekizaki T, Dominguez-Punaro MC et al (2008), Disruption of srtA gene in Streptococcus suis results in decreased interactions with endothelial cells and extracellular matrix proteins, Vet Microbiol., 127(34),417424 56 Wangkaew S, Chaiwarith R, Tharavichitkul P, Supparatpinyo K (2006), Streptococcus suis infection: a series of 41 cases from Chiang Mai University Field Code Changed Hospital, J Infect., 52(6), 455-60 57 Wu T, Chang H, Tan C, Bei W, Chen H, (2009), The orphan response regulator RevSC21 controls the attachment of Streptococcus suis serotype-2 to human laryngeal epithelial cells and the expression of virulence genes, FEMS Microbiol Lett., 292(2),170181 58 Zhang A, Chen B, Mu X et al (2009), Identification and characterization of a novel protective antigen, Enolase of Streptococcus suis serotype 2, Vaccine 27(9),13481353 59 Zhang A, Mu X, Chen B et al (2010), Identification and characterization of IgA1 protease from Streptococcus suis, Vet Microbiol., 140(12),171175 ng Th Kiu Oanh 82 Cao hc K18 [...]... vật học Chính vì vậy, chúng tôi đã thực hiện đề tài Nghiên cứu phát triển và hoàn thiện quy trình PCR đa mồi để phát hiện trực tiếp Streptococcus suis từ dịch não tủy của người với 2 mục tiêu chính sau đây: - Xây dựng quy trình PCR đa mồi phát hiện trực tiếp S suis ở bệnh phẩm người; - Xây dựng quy trình xử lý bệnh phẩm đơn giản, dễ thực hiện để bộc lộ DNA của S suis Đặng Thị Kiều Oanh 2 Cao học K18... 16 17 Vi sinh vật Vi sinh vật học Tình trạng 98HAH33 Streptococcus suis A7 Streptococcus suis D12 Streptococcus suis D9 Streptococcus suis GZ1 Streptococcus suis JS14 Streptococcus suis SC84 Streptococcus suis SS12 Streptococcus suis ST1 Streptococcus suis ST3 Streptococcus suis 05HAS68 Streptococcus suis 89/1591 Streptococcus suis R61 Streptococcus suis S735 KT GC (Mb) % Gene Protein - 2.04 2.18 2.18... dụng PCR để phát hiện một loạt các vi khuẩn trong mẫu dịch não tủy đã được báo cáo Kể từ khi quá trình nuôi cấy C pneumoniae gặp khó khăn trong hầu hết các phòng thí nghiệm lâm sàng, phương pháp PCR đã được sử dụng để xác định vi khuẩn này trong các mẫu lâm sàng Nested PCR là một trong những quy trình để phát hiện một vài vi khuẩn trong các mẫu lâm sàng PCR định tính có thể được sử dụng để phát hiện. .. trong quy trình thực hiện Phản ứng PCR đã được rất nhiều nhà khoa học trong những lĩnh vực nghiên cứu khác nhau Việc sử dụng sao chép ngược để đánh giá RNA (RT -PCR) và phương pháp PCR định lượng (Realtime PCR) là những tiến bộ lớn phát triển từ kỹ thuật PCR Phương pháp PCR cho phép xác định sự thay đổi trong biểu hiện gen đã cung cấp cho các nhà khoa học sự hiểu biết sâu sắc về quá trình mắc bệnh và tạo... tính có thể được sử dụng để phát hiện không chỉ các gen của người mà còn phát hiện gen của vi khuẩn và vi rút Một trong những ứng dụng y tế ứng dụng quan trọng nhất của PCR là phát hiện tác nhân gây bệnh Nhiều vi rút chứa RNA hơn là DNA Vì thế, RT -PCR được sử dụng để phát hiện các RNA của những loại vi rút này Phương pháp PCR có thể phát hiện DNA của vi sinh vật trong bất kỳ mẫu nào, cho Đặng Thị Kiều... thể gây bệnh cho người với các biểu hiện của viêm màng não, nhiễm trùng máu, viêm nội tâm mạc v.v Chính vì vậy, bệnh được xếp vào nhóm các bệnh chung của người và động vật S suis lần đầu tiên được báo cáo bởi các bác sĩ thú y năm 1954, sau khi bùng phát dịch viêm màng não, viêm khớp nhiễm khuẩn huyết, và có mủ xảy ra ở lợn con [23] Sau đó, vào năm 1968, bệnh do S suis được ghi nhận ở người qua mô tả... sở cho chẩn đoán và nghiên cứu khoa học cơ bản Trong vi sinh học và sinh học phân tử, PCR được sử dụng trong nghiên cứu nhân dòng DNA, phương pháp lai DNA Southern Blotte, giải trình tự DNA và công nghệ DNA tái tổ hợp Trong vi sinh học lâm sàng, PCR đóng vai trò quan trọng trong chẩn đoán nhiễm vi sinh và nghiên cứu dịch tễ học PCR cũng được sử dụng trong các phòng thí nghiệm pháp y và đặc biệt hữu... phẩm của lợn 1.5 PHƯƠNG PHÁP PCR 1.5.1 Giới thiệu về phương pháp khuếch đại gen (polymerase chain reaction – PCR) PCR là một kỹ thuật sinh học phân tử để khuếch đại một hoặc một vài bản sao của một đoạn DNA, tạo ra hàng ngàn, hàng triệu bản sao của một đoạn DNA có trình tự cụ thể Kỹ thuật PCR đã được phát triển vào năm 1984 bởi một nhà hóa sinh người Mỹ tên là Kary Mullis Mullis nhận được giải Nobel và. .. di chuyển của S suis qua hàng rào máu -dịch não tủy đã được thực hiện Sự di chuyển của S .suis qua hàng rào máu -dịch não tủy đã kích hoạt bạch cầu trung tính S suis gây ra hoại tử tế bào CPEC, mặc dù apoptosis cũng có thể đóng một vai trò quan trọng trong quá trình làm chết tế bào Suilysin đó đóng một vai trò quan trọng như là một chất độc ảnh hưởng đến chức năng hàng rào máu -dịch não tủy, tuy nhiên,... S suis phải vượt qua hàng rào máu não (BBB) và / hoặc chất dịch máu não tủy (CSF) để gây ra nhiễm trùng hệ thần kinh trung ương BBB là một rào cản duy nhất về giải phẫu và chức năng ngăn cách giữa não và nội mạch bằng cách duy trì sự cân bằng nội môi của môi trường hệ thần kinh trung ương [42] Các loại tế Formatted: Vietnamese Deleted: 42 bào chính của hàng rào máu não là tế bào nội mô vi mạch của não( BMEC)