Nghiên cứu tổng hợp và khảo sát hoạt tính sinh học của alphitonin, maesopsin và một số dẫn xuất của chúng

IH TR ỜN U GI H Ọ O I Ọ T N N  N UYỄN T Ị N UẾ N ỨU TỔN MỘT SỐ DẪN XUẤT N TR L Ủ VÀ M ESOPS N VÀ O T TÍN ỢP URONOL LP SN Ọ Ủ ÚN hu n ng nh: Ho hữu s : 60440114 TÓM TẮT LUẬN VĂN T G IH G SĨ H H TS gu ễn u c Vượng GS.TS gu ễn ình Th nh H i – 2015 Ó TON N Ọ Ớ T ỆU LUẬN ÁN ặt vấn đề Cùng với phát triển khoa học kỹ thuật nói chung hoá học nói riêng, việc tìm kiếm, phát nghiên cứu tổng hợp hợp chất có nguồn g c thiên nhiên có hoạt tính sinh học cao để ứng dụng y dược m t nhiệm vụ quan trọng đ v nhà khoa học nước qu c tế quan tâm Các hợp chất ngày trở n n có ý nghĩa quan trọng áp dụng v o lĩnh vực y học chữa trị c c bệnh hiểm nghèo nhằm nâng cao sức khỏe cho người Hai hợp chất alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (TAT6) maesopsin-4-O-β-D-glucop ranoside (T T2) đ nhóm GS Trần Văn Sung phân lập từ dịch chiết butanol Chay Bắc b (Artocarpus tonkinensis A Chev.) có hoạt tính ức chế miễn dịch t t Hoạt tính ức chế miễn dịch hai hợp chất n cyclosporin A yếu c closporin đ so sánh với không gâ t c dụng phụ Cyclosporin A m t loại thu c ức chế miễn dịch sử dụng phổ biến ca phẫu thuật cấy ghép, giá thành cao có nhiều tác dụng phụ gâ đ c cho c c quan n i tạng, gan, thận, tiêu hóa, thần kinh… Hoạt tính auronol glucoside giả thiết phần đường phân tử có khả thấm qua màng tế b o ph t hu tác dụng aglycone Phát hoạt tính t c đ ng đến hệ miễn dịch của hợp chất TAT6 TAT2 đ mở định hướng cho nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất hợp chất auronol có hoạt tính đ i với hệ miễn dịch Mặt khác, hoạt chất dược chứa nhóm nitrile đ v quan tâm nghiên cứu ngày có nhiều thu c đưa v o sử dụng lâm s ng Tương tự phần đường auronol glucoside, nhóm nitrile phân tử có khả tạo liên kết hydro với protein hay axit amin phát huy tác dụng phân tử Với mục tiêu tìm kiếm hợp chất có hoạt tính đ i với hệ miễn dịch Chúng chọn đề tài: “Nghiên cứu tổng hợp số dẫn xuất nitrile hai auronol alphitonin maesopsin hoạt tính sinh học chúng” ối tượng nghiên cứu nhiệm vụ luận án i tượng nghi n cứu: Hai auronol Alphitonin Maesopsin c nhiệm vụ luận n * Tổng hợp hai auronol alphitonin maesopsin * Tổng hợp m t s dẫn xuất nitrile hai auronol alphitonin maesopsin * X c định cấu trúc phân tử chất tổng hợp phương ph p phổ đại phổ c ng hưởng từ hạt nhân (1H NMR 13C NMR) kết hợp kĩ thuật phổ hai chiều (COSY, HSQC HMBC) phổ MS * Thử hoạt tính kích thích tế bào lympho hoạt tính đ c tế bào chất đ tổng hợp Ý nghĩa khoa học đóng góp luận án 3.1 Ý nghĩa khoa học luận án ề t i đ nghi n cứu tổng hợp v khảo s t hoạt tính sinh học auronol lớp chất gặp v có h m lượng thấp tự nhi n 3.2 Những đóng góp luận án ây l công trình đầu ti n đ nghi n cứu th nh công c c n i dung: B n tổng hợp th nh công lphitonin qu mô lượng gam ổn định với hiệu suất cao ~ 65% iều chế aesopsin qu mô lượng gam ổn định với hiệu suất 75% Lần đầu ti n, đ nghi n cứu tổng hợp c c dẫn xuất -acetonitrile c c auronol alphitonin v maesopsin vị trí C-4 (chất , chất 6) vị trí -4 C-6 (chất 7, chất 8) vòng ; c điều kiện phản ứng đ nghi n cứu v cấu trúc c c sản phẩm tổng hợp đ x c định c c phương ph p phổ hồng ngoại, phổ kh i, phổ c ng hưởng từ hạt nhân m t chiều, chiều v kết hợp với c c t i liệu Hoạt tính kích thích tế b o l mpho v hoạt tính đ c tế b o tr n c c dòng tế b o thường IH/3T3 v dòng tế b o ung thư F7, LU-1, B v HepG2 c c sản phẩm tổng hợp lần đầu ti n khảo s t, kết khảo s t cho thấ : Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 5) có hoạt tính kích thích tế b o l mpho mạnh với S 50 = 11,07 µg/mL, c c hợp chất lại l không x c định Hầu hết c c hợp chất thu gâ đ c tế b o ếu không gâ đ c tế b o đ i với tế b o thường v dòng tế b o ung thư với I 50 > 100 µg/mL c dẫn xuất nhóm nitrile (chất 7, chất 8) có hoạt tính đ c tế b o mạnh m t chút với I 50 < 100 µg/mL lphitonin có hoạt tính đ c tế b o trung bình với I 50 l 50,90 µg/mL (NIH/3T3), 51,41 µg/mL (MCF7), 44,90 µg/mL (LU-1), 55,60 µg/mL (KB) 30,77 µg/mL (HepG2) Bố cục luận án Luận n gồm 75 trang với bảng s liệu, 48 hình, 73 t i liệu tham khảo phân b sau: đầu (2 trang), hương Tổng quan (23 trang), hương i tượng, mục ti u v phương ph p nghi n cứu (5 trang), hương Thực nghiệm (12 trang), hương t v thảo luận (31 trang), ết luận v kiến nghị (2 trang) Ngoài có c c công trình đ công b li n quan đến luận án (1 trang), 73 Tài liệu tham khảo v phụ lục phổ B NỘ DUN LUẬN ÁN ƠN TỔN QU N Tr n sở nghi n cứu t i liệu, phần tổng quan luận n trình b c c n i dung sau: - c hợp chất flavonoid - c hợp chất auronol - Hợp chất chứa nitrile hóa dược v phương ph p tổng hợp dẫn xuất nitrile ƠN Ố T ỢN , MỤ T U VÀ P ƠN P ÁP N N ỨU 2.1 ối tượng nghiên cứu Maesopsin (4) Alphitonin (3) 2.2 Mục tiêu Tổng hợp m t s dẫn xuất nitrile hai auronol alphitonin v maesopsin, v hoạt tính sinh học chúng ƠN T N ỆM 3.1 Tổng hợp hai auronol lphitonin Maesopsin 3.1.1 Bán tổng hợp alphitonin Alphitonin (3) đ nghi n cứu tổng hợp theo phương ph p ielhmann phản ứng đồng phân hóa taxifolin t c dụng nhiệt Phương ph p n thể nhiều ưu điểm l ngu n liệu từ nguồn thực vật nước, phản ứng có bước v sử dụng dung môi nước thân thiện với môi trường Hợp chất đầu taxifolin điều chế từ astilbin có h m lượng cao (~ 1%) rễ Thổ phục linh (S glabra) c bước phân lập astilbin, điều chế taxifolin v phản ứng đồng phân hóa taxifolin trình b sơ đồ sau: Hình 3.3 Sơ đồ tổng qu t b n tổng hợp alphitonin (3) Astilbin (1) FT-IR max (cm-1): 3427, 3263, 2912, 1640, 1603, 1519, 1476, 1363, 1301, 1177, 1070, 977 H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,98 (1H, d, J = 2,0 Hz, H2′), 6,86 (1H, dd, J = 8,0, 2,0 Hz, H-6′), 6,83 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 5,92 (1H, d , J = 2,0 Hz, H-8), 5,10 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-2), 4,60 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-3), 4,28 (1H, dq, J = 6,0, 9,6 Hz, H-5′′), 4,07 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-1′′), 3,68 (1H, dd, J = 3,0, 9,6 Hz, H-3′′), 3,56 (1H, dd, J = 1,5, 3,0 Hz, H-2′′), 3,3 (1H, m, H-4′′), 1,21 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6′′) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,0 (C=O), 168,5 (C-7), 165,5 (C-5), 164,1 (C-9), 147,4 (C-4′), 146,5 (C-3′), 129,2 (C-1′), 120,5 (C-6′), 116,3 (C-5′), 115,5 (C-2′), 102,5 (C-10), 102,1 (C-1′′), 97,4 (C6), 96,2 (C-8), 83,9 (C-2), 78,5 (C-3), 73,8 (C-4′′), 72,2 (C-3′′), 71,8 (C-2′′), 70,5 (C-5′′), 17,8 (C-6′′) Taxifolin (2) FT-IR: νKBr (cm-1): 3416, 3195, 2854, 1644, 1614, 1479, 1267, 1169 ESI-MS (m/z ): 303 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,98 (1H, d, J = 2,0 Hz, H2′), 6,87 (1H, dd, J = 2,0, 8,0 Hz, H-6′), 6,82 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 5,90 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 4,93 (1H, d, J = 11,5 Hz, H-2), 4,52 (1H, d, J = 11,5 Hz, H-3) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 198,4 (C=O), 168,7 (C-5), 165,3 (C-7), 164,5 (C-9), 147,2 (C-3′), 146,3 (C-4′), 129,9 (C-1′), 120,9 (C-6′), 116,1(C-5′), 115,9 (C-2′), 101,9 (C-10), 97,3 (C-6), 96,3 (C-8), 85,1 (C-2), 73,7 (C-3) Alphitonin (3) FT-IR: νKBr (cm-1): 3623, 3488, 3311, 3076, 2856, 1685, 1617, 1456, 1158, 1107, 831, 567, 451 ESI-MS (negative): m/z = 303 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, Acetone-d6): δ (ppm) 9,65 (2H, br s, × OH), 7,70 7,66 (2H, × br s, × OH), 6,72 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′), 6,61 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,54 (1H, d, J = 2,0, 8,0 Hz, H-6′), 6,43 (1H, br s, OH-2), 5,86 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5), 5,82 (1H, d, J = 1,5 Hz, H7), 3,05 (1H, d, J = 13,5 Hz, Hb-10), 3,02 (1H, d, J = 13,5 Hz, Ha-10) 13 C-NMR (125 MHz, Acetone-d6): δ (ppm) 195,4 (C=O), 172,5 (C8), 169,6 (C-6), 158,8 (C-4), 145,3 (C-3′), 144,7 ( -4′), 126,3 ( -1′), 122,9 (C-6′), 118,5 ( -2′), 115,5 ( -5′), 107,0 ( -2), 102,7 (C-9), 96,7 (C-5), 91,4 (C-7), 41,8 (C-10) 3.1.2 iều chế maesopsin ết phân lập hai hợp chất auronol glucoside alphitonin-4-O-βD-glucopyranoside (125) maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside (116) từ l câ Bắc b (A Tonkinensis) cho thấ hợp chất auronol glucoside maesopsin-4-O-β-D-Glc (116) có h m lượng kh lớn l câ Bắc b (> 0,07%) Vì vậ hợp chất maesopsin-4-O-β-D-Glc (116) đ sử dụng l nguồn cung cấp auronol maesopsin (98) Hình 3.2 Sơ đồ tổng hợp maesopsin (4) Maesopsin (4) ESI-MS (m/z): 286,9 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 7,02 (2H, d, J = 9,0 Hz, H2′, H-6′), 6,59 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 5,78 (1H, br s, H-7), 5,74 (1H, br s, H-5), 3,08 (2H, brs, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,8(C=O), 173,7 (C-8), 171,0 (C-6), 159,7 (C- 4), 157,2 (C- 4′), 132,5 ( -2′, -6′), 125,9 ( -1′), 115,7 (C-3′, -5′), 107,4 ( -2), 103,1 (C-9), 96,8 (C-5), 91,1 (C-7), 42,1 (C-10) 3.1.3 Tổng hợp dẫn xuất nitrile auronol maesopsin, alphitonin maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside Hình 3.9 Sơ đồ tổng hợp c c dẫn xuất nitrile chất hất 5: Alphitonin-4-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 342 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 8,65 (2H, br s, OH), 7,51 (1H, br s, OH), 6,54 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′), 6,49 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,36 (1H, dd, J = 2,0, 8,0 Hz, H-6′), 5,98 (1H, br s, H-5), 5,96 (1H, br s, H-7), 5,19 5,13 (2H, × d, J = 16,0 Hz, OCH2-CN), 2,90 2,82 (2H, × d, J = 14,0 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 192,4 (C=O), 172,3 (C8), 169,4 (C-6), 155,5 (C-4), 144,4 (C-3′), 143,8 ( -4′), 124,6 ( -1′), 121,2 (C-6′), 117,8 ( -2′), 116,0 ( ), 115,0 ( -5′), 105,9 ( -2), 101,3 (C-9), 94,4 (C-5), 92,3 (C-7), 53,5 (O-CH2-CN), 40,7 (C-10) hất 6: Maesopsin-4-O-acetonitrile FT-IR: νKBr (cm-1): 3590, 3509, 3453, 3311, 3094, 2926, 2827, 2294, 1738, 1687, 1610, 1554, 1456, 1117, 831, 541, 478 ESI-MS (negative): m/z = 326 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 9,12 (1H, br s, OH), 7,49 (1H, br s, OH), 6,91 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2′, H-6′), 6,53 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 5,91 (1H, br s, H-5), 5,87 (1H, br s, H-7), 5,17 5,12 (2H, × d, J = 16,5, O-CH2-CN), 2,93 2,87 (2H, × d, J = 13,5 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 191,8 (C=O), 172,2 (C-8), 170,5 (C-6), 155,8 (C-4′), 155,5 (C-4), 131,2 (C-2′, -6′), 124,1 ( -1′), 116,1 (CN), 114,6 (C-3′, -5′), 105,8 ( -2), 100,6 (C-9), 94,9 (C-5), 92,4 (C-7), 53,4 (O-CH2-CN), 40,5 (C-10) hất 7: Alphitonin-4,6-di-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 417 [M+2H2O-H]ˉ, 381 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,64 (1H, d, J = 2,0 Hz, H2′), 6,55 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,51 (1H, dd, J = 2,0, 8,0 Hz, H-6′), 6,38 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-7), 6,24 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-5), 5,00 – 5,12 (4H, m, × O-CH2-CN), 3,10 3,06 (2H, d, J = 13,5, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,6 (C=O), 174,7 (C-8), 168,4 (C-6), 157,0 (C-4), 145,6 (C-3′), 145,2 ( -4′), 125,9 ( -1′), 123,1 (C-6′), 118,7 ( -2′), 116,0, ( ), 115,9 ( -5′, ), 108,1 ( -2), 106,1 (C-9), 95,9 (C-5), 92,7 (C-7), 55,0 (O-CH2-CN), 54,8 (O-CH2-CN), 42,2 (C-10) hất 8: Maesopsin-4,6-di-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 365 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 7,01 (2H, d, J = 8,5 Hz, H2′, H-6′), 6,58 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 6,39 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-7), 6,24 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-5), 5,00 – 5,10 (4H, m, × O-CH2CN), 3,16 3,11 (2H, d, J = 14,0 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,5 (C=O), 174,6 (C-8), 168,4 (C-6), 157,3 (C-4′), 157,0 ( -4), 132,5 (C-2′, -6′), 125,2 ( -1′), 115,9 (CN), 115,8 (C-3′, -5′, ), 108,1 ( -2), 106,1 (C-9), 96,01 (C5), 92,7 (C-7), 55,0 (O-CH2-CN), 54,8 (O-CH2-CN), 41,9 (C-10) 3.2 hảo sát hoạt tính sinh học chất tổng hợp hảo s t hoạt tính kích thích tế b o l mpo v hoạt tính đ c tế b o dòng tế b o thường IH/3T3 v dòng tế b o ung thư: ung thư vú F7, ung thư phổi LU-1, ung thư biểu mô B v ung thư gan HepG2 thực phòng thử nghiệm sinh học - Viện ông nghệ sinh học - Viện h n lâm hoa học v công nghệ Việt am ƠN ẾT QUẢ VÀ T ẢO LUẬN 4.1 Tổng hợp hai auronol lphitonin Maesopsin 4.1.1 Bán tổng hợp alphitonin * iều chế taxifolin từ astilbin Taxifolin (C15H22O7, 2) thu từ thủ phân astilbin l nguồn ngu n liệu cho việc nghi n cứu b n tổng hợp alphitonin Từ astilbin tương đ i đạt tr n 95% đ thủ phân H l/ e H theo phương ph p thông thường Sản phẩm thủ phân đ phân lập kết hợp S v kết tinh thu taxifolin ấu trúc sản phẩm đ x c định c c phương ph p phổ phù hợp với cấu trúc phân tử v c c liệu phổ taxifolin đ công b * Phản ứng đồng phân hóa taxifolin cho alphitonin húng đ khảo s t c c điều kiện nhiệt đ , dung môi v thời gian ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng đồng phân hóa taxifolin ết cho thấ phản ứng đồng phân hóa taxifolin cho hiệu suất cao ổn định điều kiện dung môi l 1mmol taxifolin/7ml H với thời gian phản ứng l 95 nhiệt đ dầu cấp nhiệt l 155 o , hiệu suất alphitonin đạt 65% ết n hữu ích cho việc nghi n cứu b n tổng hợp alphitonin từ taxifolin lượng cân lớn đ p ứng c c nhu cầu nghi n cứu chu ển hóa v thử hoạt tính alphitonin Tương tự maesopsin (4), phổ R hợp chất 82 cho tín hiệu c c proton v carbon khung auronol, c c s liệu phổ phù hợp với cấu trúc phân tử v với c c s liệu đ công b 1, ặc biệt tín hiệu tù v thấp nhóm H δH 9,65, 7,70 7,66 ppm, chứng tỏ nhóm n không tạo cầu với nhóm 3-C=O Phổ kh i ion hóa phun mù điện tử cho pic ion phân tử đề proton hóa [ -H]ˉ với m/z = 303 phù hợp với công thức phân tử 15H12O7 4.1.2 iều chế auronol maesopsin Thủ phân (5 g) H l lo ng điều kiện đun hồi lưu nhẹ methanol thu maesopsin với hiệu suất 75% Paul W Elsinghorst, Taner Cavlar, Anna Muller, Annett Braune, Michael Blaut, and Michael Gutschow, "The Thermal and Enz matic Taxifolin− lphitonin Rearrangement", J Nat Prod., 2011, 74, 2243−2249 E iehlmann et al., “Isomerization of dih droquercetin”, J Nat Prod., 1995, 58 (3), 450-455 Phổ R auronol cho c c tín hiệu c c proton v carbon khung auronol v không c c tín hiệu phần đường v ta không thấ xuất c c tín hiệu kép phổ R Ở vùng trường thơm, phổ H-NMR cho cặp doublet H 7,01 (H-2′, H-6′) v 6,59 (H-3′, H-5′) với s tương t c Jortho = 8,5 Hz, trường cao l tín hiệu singlet tù H 5,78 (1H, H-5) 5,74 (1H, H-7) Phổ 13CNMR cho 15 tín hiệu 15 carbon khung auronol: gồm 12 carbon thơm vòng v B, tín hiệu carbon thơm li n kết với ox C 173,9 (C-8), 171,0 (C-6), 159,9 (C-4), 157,2 (C-4′); tín hiệu carbon methine thơm C 132,5 (C-2′, -6′), 115,7 ( -3′, -5′) v C 96,8, 91,1 (C-5, C-7), tín hiệu carbon thơm bậc C 125,9 (C-1′) v 103,1 (C-9); tín hiệu carbon vòng C 196,8 (3-C=O) v m t carbon hemicetal C 107,0 (C-2); ngo i trường cao l tín hiệu carbon meth lene -10 C 42,1 Phổ HS cho c c tương tác C-H trực tiếp v H B cho c c tương t c xa proton H2-10 (3,08 ppm)/C-2 (107,0 ppm)/C-1′(125,9 ppm)/ -2′,6′ (132,5 ppm)/ -3 (196,8 ppm), với đ chu ển dịch thấp bất thường carbon -8 (173,9 ppm) ảnh hưởng sức căng vòng (vòng ) đ chứng minh cấu trúc khung auronol chất Phổ kh i ESI-MS chất cho pic ion âm giả phân tử m/z = 287 [M-H]ˉ phù hợp với s kh i công thức phân tử 15H12O6 4.2 Tổng hợp số dẫn xuất nitrile alphitonin, maesopsin Phản ứng tổng hợp c c dẫn xuất nitrile c c auronol tiến hành môi trường kiềm nhiệt đ o cho c c sản phẩm lần v lần phụ thu c v o tỉ lệ mol chất v c c t c nhân Ở tỉ lệ mol c c t c nhân l auronol/chloroacetonitrile/NaOH (1/1,1/1,1; mol/mol/mol) ta thu sản phẩm lần v o vị trí -4 chất hi tăng tỉ lệ mol xúc t c base v chloroacetonitrile l n gấp lần lượng mol chất phản ứng (3 4) ta thu sản phẩm lần v o vị trí -4 C-6 l chất ếu ta tiếp tục tăng tỉ lệ mol xúc t c base v chloroacetonitrile l n gấp lần 10 lượng mol c c auronol ta thu sản phẩm lần v o vị trí -4 C-6 Sự ưu ti n v o vị trí 4-OH 6- H giả thiết l ảnh hưởng nhóm = vòng đ hoạt hóa c c nhóm 4-OH 6- H qua c c n i đôi li n hợp lượng t c nhân phản ứng dư ta thu c c sản phẩm c c vị trí n Ở tỉ lệ mol tác nhân auronol/chloroacetonitrile/NaOH (1/1,1/1,1; mol/mol/mol) ta thu sản phẩm lần v o vị trí -4 kết hợp hiệu ứng –C –I nhóm 3- = go i hiệu ứng –C, nhóm 3- = có hiệu ứng –I l m bền ion phenolate 4-C-Oˉ nên khả phản ứng nucleophine nhóm n tạo sản phẩm -4 thuận lợi so với -6 v cho ta sản phẩm -4 trước Kết thực nghiệm đ cho thấ phản ứng ưu ti n v o vị trí -4 m t lần chứng tỏ li n kết cầu h dro nhóm 4-OH (vòng ) với nhóm 3-C=O (vòng C) đ khẳng định tín hiệu r ng v thấp nhóm OH hai vòng A, B 10 ppm tr n phổ 1HR alphitonin ết thu sản phẩm ưu ti n v o nhóm 4- H khung auronol thú vị đ chứng minh bắt gặp auronol glucoside (chất 5, 6) với nhóm đường gắn v o vị trí -4 tự nhi n ấu trúc c c sản phẩm đ chứng minh c c phương ph p phổ Phổ R c c hợp chất ngo i c c tín hiệu khung auronol / auronol glucoside cho thêm tín hiệu c c nhóm acetonitrile Phổ kh i ion hóa phun mù điện tử cho pic ion âm phân tử đề proton hóa [ -H]ˉ với m/z= 342 [M-H]ˉ phù hợp với công thức phân tử 17H13NO7 (5); tương tự m/z = 326 [M-H]ˉ (C17H13NO6 6); m/z = 381 [M-H]ˉ (C19H14N2O7 7); m/z = 365 [M-H]ˉ (C19H14N2O6 8) ặc biệt, phổ H B c c tương t c xa proton nhóm methylene (OCH2CN) với carbon khung auronol cho biết vị trí c c nhóm gắn v o khung auronol như: chất [5,19 - 5,13 ppm (OCH2CN)/155,5 ppm (C-4)]; chất [5,17 - 5,12 ppm (OCH2CN)/155,5 ppm (C-4)]; chất [5,19 - 5,12 ppm (OCH2CN)/157,0 11 ppm (C-4)/168,4 ppm (C-6)]; chất [5,00 - 5,10 ppm (-OCH2CN)/157,0 ppm (C-4)/168,4 ppm (C-6)] Hình 4.51 Phổ H B 126 Hình 4.56 Phổ HMBC 128 4.2 oạt tính sinh học hợp chất tổng hợp c chất 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 khảo s t hoạt tính kích thích tế b o l mpo v hoạt tính đ c tế b o ết quả: - Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 5) có hoạt tính kích thích tế b o l mpho mạnh với S 50 = 11,07 µg/mL, c c hợp chất lại l không x c định - Hầu hết c c hợp chất thu gâ đ c tế b o ếu không gâ đ c tế b o đ i với tế b o thường v dòng tế b o ung thư với I 50 > 100 µg/mL c dẫn xuất nhóm nitrile (chất 7, chất 8) có hoạt tính đ c tế b o mạnh m t chút với 12 IC50 < 100 µg/mL Alphitonin có hoạt tính đ c tế b o trung bình với I 50 50,90 µg/mL (NIH/3T3), 51,41 µg/mL (MCF7), 44,90 µg/mL (LU-1), 55,60 µg/mL (KB) 30,77 µg/mL (HepG2) - 13 ẾT LUẬN VÀ ẾN N Ị I Kết luận Luận văn đ đạt kết sau: b n tổng hợp auronol alphitonin maesopsin từ nguồn thực vật phong phú nước: - Hợp chất alphitonin thu với hiệu suất cao (65%) từ phản ứng đồng phân hóa taxifolin (hiệu suất 65%) hợp chất phân lập từ rễ Thổ phục linh (Smilax glabra Wall ex Roxb.) - Hợp chất maesopsin thu từ phân maesopsin-4-O-β-Dglucopyranoside (TAT2, 9) m t auronol glucoside phân lập từ Chay Bắc b (Artocarpus tonkinensis A Chev.) với hiệu suất tách cao (~0,07% trọng lượng khô) Lần đầu ti n, đ nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất O-acetonitrile auronol alphitonin maesopsin vị trí C-4 (chất , chất 6) vị trí C-4 C-6 (chất 7, chất 8) vòng ; c điều kiện phản ứng đ nghiên cứu cấu trúc sản phẩm tổng hợp đ x c định c c phương ph p phổ hồng ngoại, phổ kh i, phổ c ng hưởng từ hạt nhân m t chiều, chiều kết hợp với tài liệu Hoạt tính kích thích tế bào lympho hoạt tính đ c tế bào dòng tế b o thường NIH/3T3 dòng tế b o ung thư F7, LU-1, KB HepG2 sản phẩm tổng hợp lần đầu ti n khảo sát, kết khảo sát cho thấy: - - Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 5) có hoạt tính kích thích tế bào lympho mạnh với SC50 = 11,07 µg/mL, hợp chất lại l không x c định Hầu hết hợp chất thu gâ đ c tế bào yếu không gâ đ c tế b o đ i với tế b o thường dòng tế bào 14 ung thư với IC50 > 100 µg/mL Các dẫn xuất nhóm nitrile (chất 7, chất 8) có hoạt tính đ c tế bào mạnh m t chút với IC50 < 100 µg/mL Alphitonin có hoạt tính đ c tế bào trung bình với IC50 50,90 µg/mL (NIH/3T3), 51,41 µg/mL (MCF7), 44,90 µg/mL (LU-1), 55,60 µg/mL (KB) 30,77 µg/mL (HepG2) II Kiến nghị Các hợp chất auronol alphitonin, maesopsin, dẫn xuất Oacetonitrile chúng chất có tiềm hoạt tính sinh học cao nghiên cứu ề nghị tiếp tục nghiên cứu tổng hợp chúng với quy mô lượng lớn cho việc đ nh gi hoạt tính sinh học sâu chúng 15 Á ÔN TRÌN Ã ÔN BỐ L N QU N ẾN LUẬN ÁN Phuong Diep Thi Lan, Quoc Vuong Nguyen, Van Chien Vu, Tuan Nguyen Le, Thi Hue Nguyen, Thi Hang Pham, Van Minh Chau and Van Cuong Pham, "Synthesis of Auronol Derivatives and Their Immunostimulating Activity", Natural Product Communication, 2015, 10(4), 591 [...]... nghiên cứu tổng hợp các dẫn xuất O-acetonitrile của các auronol alphitonin và maesopsin ở 1 vị trí C-4 (chất 5 , chất 6) hoặc ở cả 2 vị trí C-4 và C-6 (chất 7, chất 8) của vòng ; c điều kiện phản ứng đ được nghiên cứu và cấu trúc của các sản phẩm tổng hợp đ được x c định bằng c c phương ph p phổ hồng ngoại, phổ kh i, phổ c ng hưởng từ hạt nhân m t chiều, 2 chiều và kết hợp với các tài liệu 4 Hoạt tính. .. Hình 4.51 Phổ H B của 126 Hình 4.56 Phổ HMBC của 128 4.2 oạt tính sinh học của các hợp chất tổng hợp được c chất 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 được khảo s t hoạt tính kích thích tế b o l mpo v hoạt tính đ c tế b o ết quả: - Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 5) có hoạt tính kích thích tế b o l mpho mạnh nhất với S 50 = 11,07 µg/mL, c c hợp chất còn lại l không x c định - Hầu hết c c hợp chất thu được... µg/mL (HepG2) II Kiến nghị Các hợp chất auronol alphitonin, maesopsin, và các dẫn xuất Oacetonitrile của chúng là những chất có tiềm năng hoạt tính sinh học cao còn ít được nghiên cứu ề nghị được tiếp tục nghiên cứu tổng hợp chúng với quy mô lượng lớn cho việc đ nh gi hoạt tính sinh học sâu hơn của chúng 15 Á ÔN TRÌN Ã ÔN BỐ L N QU N ẾN LUẬN ÁN 1 Phuong Diep Thi Lan, Quoc Vuong Nguyen, Van Chien Vu,... thích tế bào lympho và hoạt tính đ c tế bào trên các dòng tế b o thường NIH/3T3 và 4 dòng tế b o ung thư F7, LU-1, KB và HepG2 của các sản phẩm tổng hợp lần đầu ti n được khảo sát, kết quả khảo sát cho thấy: - - Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 5) có hoạt tính kích thích tế bào lympho mạnh nhất với SC50 = 11,07 µg/mL, các hợp chất còn lại l không x c định Hầu hết các hợp chất thu được đều... cho pic ion âm giả phân tử m/z = 287 [M-H]ˉ phù hợp với s kh i công thức phân tử 15H12O6 4.2 Tổng hợp một số dẫn xuất nitrile của alphitonin, maesopsin Phản ứng tổng hợp c c dẫn xuất nitrile của c c auronol được tiến hành trong môi trường kiềm ở nhiệt đ 0 o cho c c sản phẩm thế 1 lần v 2 lần phụ thu c v o tỉ lệ mol của chất nền v c c t c nhân Ở tỉ lệ mol của c c t c nhân l auronol/chloroacetonitrile/NaOH... thường và cả 4 dòng tế bào 14 ung thư với IC50 > 100 µg/mL Các dẫn xuất thế 2 nhóm nitrile (chất 7, chất 8) có hoạt tính đ c tế bào mạnh hơn m t chút với IC50 < 100 µg/mL Alphitonin có hoạt tính đ c tế bào trung bình với IC50 là 50,90 µg/mL (NIH/3T3), 51,41 µg/mL (MCF7), 44,90 µg/mL (LU-1), 55,60 µg/mL (KB) và 30,77 µg/mL (HepG2) II Kiến nghị Các hợp chất auronol alphitonin, maesopsin, và các dẫn xuất. .. 100 µg/mL c dẫn xuất thế 2 nhóm nitrile (chất 7, chất 8) có hoạt tính đ c tế b o mạnh hơn m t chút với 12 IC50 < 100 µg/mL Alphitonin có hoạt tính đ c tế b o trung bình với I 50 là 50,90 µg/mL (NIH/3T3), 51,41 µg/mL (MCF7), 44,90 µg/mL (LU-1), 55,60 µg/mL (KB) và 30,77 µg/mL (HepG2) - 13 ẾT LUẬN VÀ ẾN N Ị I Kết luận Luận văn đ đạt được các kết quả sau: b n tổng hợp 2 auronol là alphitonin và maesopsin. .. trí 4-OH và 6- H có thể được giả thiết l do ảnh hưởng của nhóm = vòng đ hoạt hóa c c nhóm 4-OH và 6- H qua c c n i đôi li n hợp vì thế khi lượng t c nhân phản ứng dư ta sẽ thu được c c sản phẩm thế ở c c vị trí n Ở tỉ lệ mol của các tác nhân là auronol/chloroacetonitrile/NaOH (1/1,1/1,1; mol/mol/mol) ta thu được sản phẩm 1 lần thế v o vị trí -4 có thể do sự kết hợp của 2 hiệu ứng –C và –I của nhóm... vị trí -4 là chất 5 và 6 hi tăng tỉ lệ mol của xúc t c base v chloroacetonitrile l n gấp hơn 2 lần lượng mol của chất phản ứng (3 hoặc 4) ta thu được sản phẩm thế 2 lần v o 2 vị trí -4 và C-6 l chất 7 và 8 ếu ta tiếp tục tăng tỉ lệ mol của xúc t c base v chloroacetonitrile l n gấp hơn 3 ha 4 lần 10 lượng mol của c c auronol ta cũng chỉ thu được sản phẩm thế 2 lần v o 2 vị trí -4 và C-6 Sự ưu ti n thế...Phổ R của auronol 4 cho c c tín hiệu của c c proton v carbon khung auronol v không còn c c tín hiệu của phần đường v ta cũng không thấ xuất hiện c c tín hiệu kép trong phổ R của nó Ở vùng 1 trường thơm, phổ H-NMR cho 2 cặp doublet ở H 7,01 (H-2′, H-6′) v 6,59 (H-3′, H-5′) với hằng s tương t c Jortho = 8,5 Hz, ở trường cao hơn l 2 tín hiệu singlet tù ở H 5,78 (1H, H-5) và 5,74 (1H, H-7)