KIỂM ĐỊNH QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VAC XIN DỊCH tả vịt NHƯỢC độc ĐÔNG KHÔ sản XUẤT TRÊN môi TRƯỜNG tế bào sơ PHÔI gà

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HẢI PHÒNG VIỆN SINH-NÔNG HỌ VÀ TÊN: ĐỖ THÀNH NHÂN Lớp: Đại Học Công Nghệ Sinh Học Khóa: K13 TÊN ĐỀ TÀI: KIỂM ĐỊNH QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VACXIN DỊCH TẢ VỊT NHƯỢC ĐỘC ĐÔNG K

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HẢI PHÒNG

VIỆN SINH-NÔNG

HỌ VÀ TÊN: ĐỖ THÀNH NHÂN

Lớp: Đại Học Công Nghệ Sinh Học Khóa: K13

TÊN ĐỀ TÀI: KIỂM ĐỊNH QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VACXIN DỊCH TẢ VỊT NHƯỢC ĐỘC ĐÔNG KHÔ SẢN XUẤT TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO SƠ PHÔI GÀ

BÁO CÁO

ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP

Hải Phòng, năm 2016

PHẦN 1: ĐẶTVẤNĐỀ

1 Tính cấp thiết của đềtài

Bệnh Dịch tả vịt là một bệnh truyền nhiễm cấp tính của loài vịt, ngỗng

và thiên nga Bệnh không gây nhiễm cho các loài gia cầm khác, động vật có

vú và người Nguyên nhân gây bệnh là do Herpesvirusthuộc họ

Herpesviridaegây ra.

Bệnh gây ra cho vịt ở mọi lứa tuổi với những triệu chứng chủ yếu là sốtcao, sưng túi mật, chảy nước mắt, sưng đầu, liệt chân, ỉa chảy phân xanh Sau khi nhiễm bệnh 3 – 7 ngày vịt chết, tỉ lệ chết cao, có thể lên đến 100%,gây tổn thất lớn về kinh tế cho người chănnuôi

Để phòng bệnh Dịch tả vịt, biện pháp an toàn, hiệu quả và kinh tế nhất

là tiêm phòngvacxin

Vacxin nhược độc dịch tả vịt chủng C là một trong những sản phẩmvacxin của Công Ty TNHH MTV AVAC Việt Nam được sản xuất bằng cáchgây nhiễm virus nhược độc dịch tả vịt chủng C trên phôi vịt Mỗi năm công tysản xuất và cung ứng hang triệu liều vacxin Vacxin có hiệu lực rất tốt và cóthể tiêm thẳng vào ổ dịch Tuy nhiên, đây là loại vacxin sản xuất bằng côngnghệ truyền thống Do vậy, sản phẩm vẫn còn một số khiếm khuyết nhỏ đó làvacxin được sản xuất bằng cách gây nhiễm trên phôi vịt, mà trong điều kiệnViệt nam trứng vịt SPF vẫn chưa sản xuất được do vậy chỉ tiêu thuần khiết rấtkhó đạt được yêu cầu như mong muốn

Để khắc phục những vấn đề tồn tại trên, thạc sỹ Nông nghiệp Trần ThịThanh Xuân đã tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nuôi cấy virus Dịch tả vịt chủng

C trên môi trường tế bào xơ phôi gà 1 lớp để sản xuất vacxin nhược độc dịch

tả vịt đông khô”, đã bước đầu thành công và xây dựng được quy trình sảnxuất vacxin Dịch tả vịt bằng virus Dịch tả vịt chủng C gây nhiễm trên tế bào

xơ phôi gà 1 lớp

Công nghệ sản xuất vacxin bằng phương pháp nuôi cấy tế bào là công

nghệ tiên tiến hiện đang được nhiều nước, cũng như nhiều công ty sản xuất

quốcgiasửdụngđểchếtạocácvacxinphòngbệnhchogiasúc,giacầm.Vacxinsảnxuất theo công nghệ này đảm bảo tạo ra sản phẩm đạt đầy đủ các chỉ tiêu chấtlượng như: độ thuần khiết, tính vô trùng, tính an toàn, tính hiệu lực đặc biệt làchỉ tiêu về độ thuần khiết của vacxin Bên cạnh đó với công nghệ này có thểứng dụng vào việc sản xuất vacxin theo quy mô công nghiệp, có thời gian sảnxuất nhanh, số lượng lớn và giá thànhhạ

Để khẳng định chất lượng vacxin nhược độc dịch tả vịt đông khô nuôicấy trên môi trường tế bào nói trên, tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài:

“Kiểm định quy trình kiểm nghiệm vacxin dịch tả vịt nhược độc đông khô sảnxuất trên môi trường tế bào tại công ty AVAC Việt Nam”

2 Mục đích của đềtài

Xác định được một số chỉ tiêu của vacxin Nhược độc dịch tả vịt khisản xuất trên môi trường tế bào

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đềtài

Kết quả nghiên cứu của đề tài cung cấp các thông tin cần thiết trongsản xuất nhược độc dịch tả vịt sản xuất trên môi trường tế bào

Là cơ sở khoa học cho việc xây dựng quy trình sử dụng, bảo quảnvacxin góp phần phòng chống bệnh Dịch tả vịt đạt hiệu quả cao

Phần 2: TỔNG QUAN TÀILIỆU

1 Giới thiệu chung về bệnh dịch tả vịt

Bệnh dịch tả vịt (Pestisanatum): là một bệnh truyền nhiễm cấp tính, lâylan mạnh của loài thuỷ cầm do một loại Herpesvirus thuộc họ Herpesvirideaegây ra với triệu chứng chủ yếu: sốt cao, chảy nước mắt, sưng đầu, liệt chân, ỉachảy phân xanh Bệnh tích đặc trưng thường thấy ở đường tiêu hóa: thựcquản, ổ nhớp xuất huyết, dạ dày tuyến, cơ xuất huyết, gan sưng hoại tử(Nguyễn Như Thanh và Cs, 2001)

1.1 Lịch sử và phân bố bệnh trên thế giới và tại Việt Nam.

 Trên thế giới

Bệnh dịch tả vịt xuất hiện vào năm 1923 tại Hà Lan, vịt có triệu chứngsốt cao, ủ rũ, khát nước và chết sau 4 -5 ngày Sau đó, bệnh xuất hiện ởnhiều nước như Pháp, Trung Quốc, Bỉ, Ấn Độ, Mỹ… Bệnh dịch tả vịt là mộtbệnh lây lan mạnh, gây tử vong cao đến 80% - 100% các đàn thủy cầm mẫncảm Đối với các đàn vịt đẻ, sản lượng trứng có thể giảm từ 25- 40%

Baudet (1923) khi nghiên cứu về bệnh này không tìm thấy vi khuẩnnhưng đã gây được bệnh cho vịt khỏe bằng nước chiết phủ tạng của vịt ốm saukhi qua nến lọcChamberland L3 Sau đó ông tiếp tục gây bệnh cho thỏ và gànhưng không thành công

Năm 1930, tại Hà Lan, De Zeeuw mô tả một trường hợp bệnh tương tựxảy ra ở một đàn vịt 150 con Năm 1942, dịch tái phát ở đất nước này làmchết 2600 trong tổng số 5700 vịt Vịt ốm, ỉa phân xanh, mổ khám khi vịtchết thấy xuất huyết cơ tim, dạ dày tuyến, tá tràng, viêm kiểu bạch hầu ởcuống họng và lỗ huyệt Lần này, Boss (1943) đã phân lập ra virus và cấytruyền 18 đời trên vịt

Năm 1949, tại Hội nghị thú y thế giới lần thứ XIV, căn cứ vào những kếtquả nghiên cứu của mình về chủng virus do Boss (1943) phân lập được, Jansen

và Kunst đã đề nghị gọi tên bệnh là Duck virus enteritis (DVE) (OIE, 2000).Bệnh dịch tả vịt còn có những tên gọi khác nhau như: Endenpest (Hà Lan), Pets

du canard (Pháp), Enteupest (Đức) (Nguyễn Xuân Bình, 2006).

Vào tháng giêng và tháng hai năm 1973, tại Mỹ, bệnh dịch tả vịt xuấthiện lần đầu ở đàn vịt hoang dại, thuộc vùng lân cận hồ Andes, miền namDakota Từ hồ Andes, dịch bệnh lan mạnh và nhanh chóng phá hủy đàn vịt.Khoảng 40% trong tổng số 100.000 vịt hoang dại, phần lớn là vịt trời đã bịchết trong đợt dịch này Cao điểm của đợt dịch, mỗi ngày đã làm chết hơn

1000 chim, Brand, C J

Tại Việt Nam

Năm 1963, bệnh được phát hiện ở Cao Bằng làm chết 3000 vịt (ĐặngTrầnDũng, 1963), sau đó bệnh lây lan và có mặt ở hầu hết các tỉnh thành trong

cả nước Theo thống kê mới nhất của OIE (2006), Việt Nam là một trongnhững nước bị bệnh dịch tả vịt gây thiệt hại nặng nề nhất Năm 1999, bệnh đãlàm chết 51.752 trong tổngsố123.851 vịt Năm 2000 có 2.964 con, năm 2002 có15.680 con và năm 2004 có 22447 con vịt chết vìbệnh

Vào năm 1969, bệnh được phát hiện trên các đàn vịt nuôi ở Hà Nội, từ

ñó xuất hiện rộng rãi ở nhiều tỉnh thuộc đồng bằng Bắc bộ và các tỉnh Nambộ

Năm 1971, dịch lại phát ra ồ ạt ở các tỉnh Ninh Bình, Quảng Ninh,Lạng Sơn, Hà Bắc (cũ) và thành phố Hải Phòng

Đến năm 1980, dịch phát ra mạnh mẽ ở Hà Nam Ninh (cũ), Thanh Hóa

và đồng bằng sông Cửu Long Từ đó dịch lan ra tới tận Nghệ Tĩnh, KiênGiang, Hậu Giang, ĐồngTháp

Bệnh dịch tả vịt thường truyền lây do tiếp xúc trực tiếp giữa đàn vịtbệnh và vịt khỏe, hoặc có thể do tiếp xúc gián tiếp qua môi trường có mầmbệnh như các nguồn nước, người chăn nuôi, dụng cụ chăn nuôi, Virus dịch

tả vịt có trong máu, phủ tạng và các chất bài tiết như phân, nước mũi, nướcmắt từ vịt bệnh hoặc từ các loài thủy cầm hoang dã di trú theo mùa có mangtrùng virus dịch tả vịt được bài thải ra và tồn tại trong các nguồn nước ao, hồ.Những đàn vịt cảm thụ khác đến sinh sống trên các nguồn nước này sẽ bị

nhiễm bệnh Ở đồng bằng sông Cửu Long, bệnh dịch tả vịt thường xảy raquanh năm nhưng cao nhất từ tháng 3 đến tháng 7.

Vì vậy, bệnh dịch tả vịt rất cần được quan tâm nghiên cứu nhiều hơnnhằm tìm ra giải pháp giảm thiệt hại cho người chăn nuôi

1.2 Virus dịch tảvịt

1.2.1 Phânloại

Virus dịch tả vịt thuộc họ Herpesvirideae dưới họ Alphaherpesvirinae,giống Herpesvirus nhóm Herpes Virus chỉ có một serotyp được biết đếnnhưng có nhiều chủng có độc lực khác nhau tồn tại trong tự nhiên Viruskhông có đặc tính gây ngưng kết hồngcầu

1.2.2 Hình thái, cấu trúc virus dịch tả vịt

Nhìn qua kính hiển vi điện tử thấy: Virus hoàn chỉnh có hình thái gầntròn, bên ngoài là một lớp vỏ bọc và có một lõi ở giữa Ở những tế bào đượcgây nhiễm virus, sau 24 giờ có thể thấy các hạt virus trong nhân và nguyênsinh chất Thể vùi trong nhân là những tập hợp không có hình thù, trônggiống như bụi Trong nhân của những tế bào có hoặc không có thể vùi xuấthiện những khoảng trống, ở đó có những virus hoặc tập hợp virus có capxithình cầu hoặc sáu cạnh Nucleocapxit có đường kính 93,5 nm, sau khi đi quamàng nhân vào nguyên sinh chất, đường kính của hạt virus tăng lên có thể

đo được 136 nm Khi vào khôngbào thì virus thành thục và có đường kínhkhoảng 250 nm

Virus qua được lọc Chamberland, Berkefeld nhưng không qua đượcmàng lọc Seitz Bằng phương pháp lọc qua màng lọc, Hessdardiri (1968) đãnhận xét, virus nhược độc dịch tả vịt chủng Jansen và virus cường độc có

250nm.Nhưvậychúngthuộcnhómviruscókíchthướctrungbình

Virus dịch tả vịt có hệ gen là AND sợi đôi gồm 180 Kbp Trọnglượng phân tử 19 x 106Dalton Virus có vỏ bọc ngoài

Hình 2.1: Herpes virus

1.2.3 Đặc tính nuôi cấy của virus dịch tả vịt

 Nuôi cấy virus trên phôitrứng

Theo Jansen (1968) virus dịch tả vịt sau khi đã tiêm truyền trên phôi vịt

sẽ dễ dàng thích nghi trên phôigà

Virus dịch tả vịt có thể nuôi cấy vào phôi trứng vịt Bắc Kinh được ấp ởnhiệt độ 39,5 – 41,5oC, hay tế bào xơ phôi gan hoặc thận vịt và trên màngniệu đệm củaphôi vịt ấp 9 – 14 ngàytuổi

Theo tác giả Trần Minh Châu (1980) cho rằng màng nhung niệu làđường tiêm truyền tốt nhất Nguyễn Như Thanh (2001), có thể nuôi cấy virustrên màng niệu đệm hoặc xoang niệu mô (alantoid) của thai vịt ấp 12 ngàytuổi Sau 4 – 6 ngày thai chết với các bệnh tích: xuất huyết trên da vùng lưng,rìa cánh, đầu, gan, quả tối có điểm xuất huyết và hoại tử, màng nhung niệusưng dày lên Nếu tiếp truyền 12 đời liên tiếp trên phôi gà, virus có thể thíchnghi, từ đời truyền thứ ba phôi gà chết sau 4 – 5 ngày khi tiêm vào màngniệu đệm và chết sau 6 – 7 ngày khi tiêm vào xoang niệumô

Qua nhiều lần cấy truyền virus trên phôi vịt và phôi gà, độc lực củavirus giảm dần đối với vịt Từ đó, người ta sử dụng chủng virus nhược độc

qua phôi vịt, phôi gà để chếvacxin.

 Nuôi cấy virus trên môi trường tế bào xơ phôi một lớp

Virus dịch tả vịt có thể nuôi cấy trên môi trường tế bào xơ phôi vịt, phôi

gà một lớp và gây ra biến đổi bệnh lý cho tế bào (Jansen, 1968)

Burgess (1981) đã công bố virus dịch tả vịt có khả năng nhân lên trênloại tế bào xơ phôi vịt, xơ phôi ngan, gan phôi ngan, xơ phôi gà Theo RonaldAtlanasio thì không quan sát thấy biến đổi bệnh lý tế bào khi nuôi cấy virustrên tế bào thận lợn dòng PK 15, tế bào WI – 38, RD Hela, Hep – 2, Vero,LleMK, BGM và BD (Trần Minh Châu, 1987)

Theo nghiên cứu của tác giả Trần Minh Châu (1980), khi đem chủngvirus T nuôi cấy trên tế bào phôi vịt, sau khi cấy virus vào 36 giờ, tế bào bắtđầu có biến đổi, co tròn và phồng lên Đến 48 giờ trên mặt lớp tế bào đã cónhững ổ thoái hóa, tế bào rụng ra khỏi thànhbình

Theo Nguyễn Như Thanh (2001), có thể nuôi cấy virus dịch tả vịt trênmôi trường tế bào xơ phôi gà và phôi vịt một lớp Virus gây hủy hoại tế bàosau 48 giờ gây nhiễm Quan sát Plague của virus dịch tả vịt, người ta nhậnthấy: sau 48 giờ gây nhiễm các Plague bắt đầu hình thành và phát triển tối đasau 6 ngày Với các chủng virusnhượcđộc,Plaqueđềugọnvàsángrõ,ởngàythứ3cóđườngkính3mm,sau6 ngày là 4 – 7 mm và sau 14 ngày là 10 mm TheoDardini và Hess (1968), Plague của virus dịch tả vịt cường độc hình tròn, tonhỏ không đều, có đường kính từ 1 – 8 mm Plaque của virus nhược độc dịch

tả vịt thì đều hơn, có bờ gọn và sáng, đường kính là 3 – 4 mm

Theo tác giả Nguyễn Lân Dũng (1972), sau 36 giờ gây nhiễm viruscường độctrên tế bào xơ phôi vịt đã xuất hiện bệnh tích tế bào: tế bào co trònlại, thoái hóa vàrụng khỏi thànhbìnhtạo thành khoảng trống, xung quanh lànhững sợi bào(synciticum) như những dải đăng ten Lớp tế bào này sẽ bị pháhủy hoàn toàn vào ngàythứ 4 Trong các bình nuôi cấy ở các nồng độ pha loãng,

có thể phát hiện được Plague

Trên các môi trường nuôi cấy khác nhau, sự xuất hiện của Plague cũng

khác nhau Sự nhân lên và hình thành các Plague của virus cường độc đẹpnhất ở môi trường tế bào xơ phôi ngan và uyên ương, sau đó đến xơ phôi vịtBắc Kinh, vịt đen và vịt đầu đỏ, còn Plague trên tế bào xơ phôi vịt mốc và vịtbãi là kém nhất Virus nhược độc dịch tả vịt của Hà Lan lại có thứ tự các môitrường thích hợp khác: tế bào xơ phôi vịt Bắc Kinh, tế bào xơ phôi gà, trĩMông Cổ, cun cút (Ronald Atlanasio, Robert Olson, James, C Johnson,1980) (Trần Minh Châu, 1987).

Đối với virus nhược độc dịch tả vịt chủng Jansen, theo nghiên cứu của

bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm – Bệnh lý, trường ĐHNNHN nhận thấyvirus rất thích ứng trên môi trường nuôi tế bào xơ phôi gà Chỉ sau 24 giờ cấyvirus, tế bào đã bắt đầu có hiện tượng hủy hoại, bệnh tích tế bào chủ yếu thểhiện là hiện tượng tế bào bị biến dạng, co tròn, phình to ra, tập trung thànhtừng đám, có thể nhìn rõ dưới kính hiển vi quanghọc

 Nuôi cấy trên động vật cảmthụ

Có thể dùng vịt con 1 ngày tuổi để nuôi cấy virus Sau 3 – 12 ngày gâynhiễm, vịt chết với triệu chứng, bệnh tích điển hình của bệnh dịch tả vịt.Ngoài vịt con có thể dùng ngan con, ngỗng con, gà con mới nở để gây bệnh

1.2.4 Độc lực của virus dịch tả vịt

Đã xác định được một số chủng virus dịch tả vịt có độc lực khác nhau:

Hà Lan có chủng O độc lực mạnh nhất, sau đó đến các chủng W59,W60 (Jansen, 1968)

Ở Việt Nam có chủng 769, 880 có độc lực mạnh nhất, sau đó là cácchủng NH, NB, C, T (Trần Minh Châu, 1987)

Theo Nguyễn Đức Hiền (2005) đã phân lập một chủng virus gây bệnhdịch tả vịt ở Cần Thơ và cho biết chủng virus này có độc lực cao, có khả nănggây bệnh và gây chết vịt ở phòng thí nghiệm khi tiêm bắp với liều 103ELD50/ml

Năm 2005, tác giả Nguyễn Ngọc Điểm (2005) [8] cũng đã phân lập

sát đặc tính sinh học của chủng virus này, tác giả cho biết virus dịch tả vịt

VG – 2004 có độc lực mạnh hơn virus dịch tả vịt chủng 769 do tác giả TrầnMinh Châu phân lập

1.2.5 Sức đề kháng của virus dịch tả vịt

Virus nhạy cảm với ête và chloroform (Hess, 1968) Cồn 75oC diệtvirus trong 5 – 30 phút, axit phenic 0,5% diệt virus sau 30 phút Ở 22oCNaOH 2%, NH4OH 0,5% cũng giết chết virus sau 30 phút

Với nhiệt độ: virus mất khả năng gây nhiễm ở nhiệt độ 56oC sau 10phút hoặc 50oC sau 90 – 120 phút Ở nhiệt độ phòng (22oC) virus có thể tồntại 30 ngày (Hess, 1968) Trong điều kiện lạnh -10oC ñến -20oC virus có thểtồn tại hàng năm Làm đông khô các chất chứa virus như máu, tim, gan, màngnhung niệu của phôi trứng vịt có thể giữ virus nhiều năm mà không mất độclực

Virus ổn định ở độ pH từ 5 – 10 và bị bất hoạt khi pH < 3 và pH >10

1.3 Bệnh dịch tảvịt

1.3.1 Loài mắcbệnh

Bệnh dịch tả vịt là bệnh của nhiều loài vịt: vịt trời, vịt mỏ nhọn, vịt đầuđỏ, Các loài thủy cầm khác như ngan, ngỗng, thiên nga và một số loài chimhoang dã cũng cảm nhiễm bệnh (Friend, 1973), (Docherty, D E và Franson,

C J.,1992) Vịt là loài cảm nhiễm nhất, các giống vịt ở mọi lứa tuổi đều cóthể mắc bệnh Tỷ lệ vịt mắc bệnh và chết trong khoảng 5 – 100% Mức ñộcảm nhiễm có thể khác nhau tùy theogiốngvịt Loài vịt nhọn đuôi được coi làloài ít mẫn cảm nhất với bệnh (Sandhu, T S và Leibovitz, L., 2003) Cácđộng vật khác như bồ câu, công, động vật có vú và con người không cảm thụvớibệnh

Theo Friend (1973), trong một báo cáo về bệnh dịch tả vịt xảy ra ở hồAndes, miền nam Dakota vào năm 1973, ước tính có 43,000 vịt và ngỗng

trong tổng số 100,000 con đã bị chết.

Trong phòng thí nghiệm, nhiều nghiên cứu được thử nghiệm trên vịt đểđánh giá độ mẫn cảm với virus dịch tả vịt (Van Dorssen, 1955) Vịt nuôi cùngvới vịt trời, vịt Châu Âu, vịt trời Bắc Âu, vịt biển, ngỗng trắng, chim thiênnga được thử thách với chủng virus cường độc Vịt trời ít mẫn cảm vớichủng virus cường độc hơn các loài vịt khác vì chúng được cho rằng có miễndịch tự nhiên

Shawky, S., Schat, K A (2002) cho biết virus dịch tả vịt có thể tiềm tàngtrong cơ thể vịt và có khả năng tái hoạt động trở lại Sau 3 tuần gây nhiễmkhông tìm thấy virus dịch tả vịt trong lỗ huyệt nhưng 7 – 9 tuần sau gây nhiễm,bằng phản ứng PCR, tác giả đã phát hiện thấy DNA virus dịch tả vịt trong thầnkinh trung ương, hạch lâm ba ngoại vi, lách, tuyến ức và túi Bursa

1.3.4 Đường xâm nhập và cách lâylan

Trong thí nghiệm, có thể gây bệnh bằng cách tiêm dưới da, bắp thịt,tiêm tĩnhmạch hoặc nhỏ mũi

Trong tự nhiên, đường xâm nhập chủ yếu của virus dịch tả vịt là đườngtiêu hóa Những vịt mắc bệnh Dịch tả vịt sẽ thải virus qua phân, chúng sống

trong những ao hồ ô nhiễm và tù đọng Vịt mắc bệnh khi bơi lội, uống nước ởnhững hồ ao ô nhiễm hoặc do ăn phải thức ăn nhiễm khuẩn Virus thâm nhậpvào các vịt mẫn cảm qua đường miệng, mũi, da và hậu môn Trong điều kiện

tự nhiên vịt là loài cảm nhiễm nhất với virus dịch tả vịt ở tất cả các lứa tuổi vàcác giốngvịt

Jansen (1964) cho biết, nguồn nước và các động vật thủy sinh trong đócũng đóng vai trò nhất định trong việc truyền lây căn bệnh Bệnh lây lan rấtnhanh và mạnh theo phương thức truyền lây gián tiếp nhưng phương thứctruyền lây trực tiếp từ mẹ sang con cũng có thể xảy ra (Burgess, E C và T

M Yuill, 1981)

1.3.5 Triệu chứng lâmsàng

Thời gian nung bệnh từ 3 – 4 ngày

Ở đàn vịt con khi bị bệnh thường bắt đầu bằng những dấu hiệu: nhiềucon tự nhiên lờ đờ, không thích vận động, không muốn xuống nước Ở vịt lớnkhi lùa đi ăn một số con rớt lại sau đàn Bắt xem thấy chân liệt, thân nhiệt lêntới 43 – 44oC Ở đàn vịt đẻ khi bệnh xuất hiện sản lượng trứng giảm xuống,

có khi ngừng đẻ hẳn

Vịt bệnh thường ủ rũ, bỏ ăn, đứng một chân, đầu rúc vào cánh Trongđàn vịt, nhiều con có tiếng kêu khản đặc Vịt thường sưng mí mắt, niêm mạcmắt đỏ Lúc đầu chảy nhiều nước mắt trong làm ướt cả vùng lông dưới mimắt Sau nước mắt đặc lại có màu vàng như mủ đóng đầy khóe mắt và cókhi làm hai mí mắt dính lại với nhau Vịt bệnh có khi khó thở, tiếng thở khòkhè, từ mũi chảy ra chất niêm dịch lúc đầu trong, sau đặc lại Nước mũi khô,quánh lại quanh khóe mũi Nhiều con đầu sưng to, sờ nắn có cảm giác mềmnhư quả chuối Hầu, cổ cũng có thể bị sung do tổ chức liên kết dưới da bị phùthũng Lúc mới bị bệnh vịt khát nên uống nhiều nước Sau một vài ngày vịt ỉachảy, phân rất loãng, có mùi khắm và có màu trắng xanh Hậu môn bẩn, lôngdính bết đầyphân

Hình 2.2: Vịt ỉa chảy và bại liệt

Hình 2.3: vịt bại liệt sau khi mắc bệnh dịch tả vịt

Ngoài đường tiêu hóa, các cơ quan phủ tạng khác cũng bị xuất huyết.Gan hơi sưng, tụ máu, có điểm hoại tử trắng to bằng đầu đinh ghim, túi mậtcăng to Lách cũng bị tụ máu có khi xuất huyết Bao tim viêm, xoang baotim tích nước vàng Ngoại tâm mạc xuất huyết thành điểm, thành vệt Niêm

mạc khí quản xuất huyết đỏ chứa nhiều dịch nhớt lẫn bọt Phổi tụ máu, viêm.Mặt trong xương ức xuất huyết Màng não viêm, xuấthuyết…

Hình 2.5: Tim sưng, xuất huyết vỡ vành tim

Hình 2.6: Dạ dày tuyến xuất huyết

Hình 2.7: Gan sưng, hoại tử.

Hình 2.8: xuất huyết ở lỗ huyệt

1.3.7 Chẩnđoán

Cần chẩn đoán phân biệt bệnh dịch tả vịt với các bệnhtụ huyết trùng giacầm, bệnh viêm gan do virus ở vịt, bệnh Newcastle và bệnh cúm gia cầm Ởvịt trưởng thành, bệnh tụ huyết trùng thể cấp tính qua mổ khám đôi khi cóbệnh tích rất giống dịch tảvịt

Bệnh viêm gan vịt do virus: Bệnh chỉ tập trung ở vịt con từ 1 – 3 tuầntuổi.Gan chủ yếu bị viêm, xuất huyết thành điểm, thành vệt, ít có hiện tượng

hoại tử.

Bệnh tụ huyết trùng và phó thương hàn: Do Pasteurella và Salmonellagây nên Đây là những vi khuẩn thường trú trong cơ thể vịt, ngay cả trong cơthể vịt khỏe Cho nên bệnh dịch tả vịt dễ ghép với hai bệnh này và gây khó

việcchẩnđoánbệnh.Tuynhiên,nếulàổdịchtụhuyếttrùnghoặcphóthươnghàn đơnthuần thì khi điều trị bằng kháng sinh đặc hiệu có thể nhanh chóng dập tắtdịch

 Phân lập trên trứng vịt có phôi: Tiêm 0,2 ml huyễn dịch bệnh phẩm

đã xử lý vào xoang niệu mô hoặc màng nhung niệu của phôi vịt ấp 11 – 12ngày tuổi Virus dịch tả vịt gây chết phôi sau 4 – 10 ngày với bệnh tích đặctrưng: xuất huyết lanrộng

 Phân lập trên tế bào xơ phôi vịt: Gây nhiễm bệnh phẩm vào các chai

tế bào đã được nuôi cấy Quan sát bệnh tích tế bào (CPE) sau khi gây nhiễm:Hình thành các đám tế bào to, tròn và trở nên hoại tử sau 2 – 4 ngày

Để giám định virus, bằng phương pháp trung hòa trên trứng vịt có phôisau đó tính toán chỉ số trung hòa NI (Neutralization index) Nếu kết quả phânlập và giám định dương tính với kháng huyết thanh chuẩn (bằng phương pháptrung hòa VN), kết luận có virus dịch tả vịt Đối với phương pháp trung hòatrên tế bào xơ phôi vịt, tính toán chỉ số trung hòa NI (Neutralization index).Nếu thủy cầm chưa tiêm phòng, phát hiện có kháng thể dịch tả vịt(bằngphương pháp trung hòa SN), kết luận thủy cầm đã nhiễm virus dịch

1.3.7.2 Chẩn đoán bằng phương pháp PCR

Kỹ thuật PCR có khả năng phát hiện ADN của virus dịch tả vịt có trongcác mô bào đã pha loãng1:500

Năm 1999, Pritchard L I và cs đã phát triển phương pháp PCR để phục

vụ cho việc phân lập virus dịch tả vịt ở Việt Nam Phương pháp này cho phépphân biệt nhanh và chính xác giữa bệnh dịch tả vịt với một số bệnh do

cầmkhácgâynênnhưbệnhMarek,bệnhviêmthanhkhíquảntruyềnnhiễmvàbệnh doHerpes virus gây ra ở ngỗng

1.3.7.3 Một số phương pháp chẩn đoán bệnh dịch tả vịt khác

Các kỹ thuật chẩn đoán nhanh để phát hiện virus và kháng thể dịch tảvịt đã được phát triển Để phát hiện kháng thể, các kỹ thuật trung hòa huyếtthanh và kỹ thuật kháng thể gián tiếp đã được ứng dụng rộng rãi Các khángthể đa dòng và đơn dòng kháng virus dịch tả vịt đã được sản xuất và đã được

sử dụng để tạo ra một loạt kỹ thuật chẩn đoán để phát hiện virus và khángnguyên dịch tả vịt

Các kỹ thuật nhuộm miễn dịch huỳnh quang và miễn dịch peroxydasecho phép phát hiện nhanh kháng nguyên dịch tả vịt trên tiêu bản phết mô,canh tế bàovà các lát cắt tổ chức học Kỹthuật ELISA bắt giữ kháng nguyên

đã được phát triển để phát hiện nhanh kháng nguyên dịch tả vịt từ bệnh

-làloạibệnhphẩmkhósửdụngcáckỹthuậtphânlậpviruschuẩnhóa

Một phương pháp ELISA xác định kháng nguyên virus dịch tả vịt cũng

đã được ứng dụng tại Việt Nam Ngưỡng giá trị OD đã được thiết lập từ cácmẫu huyết thanh âm tính thu thập ở Việt Nam Các mẫu bệnh phẩm thích hợpnhất đã được xác định từ vịt gây nhiễm bệnh thực địa Thực quản và ổ nhớp lànhững mẫu thích hợp nhất Virus được phát hiện sớm ở các mẫu bệnh phẩmphủ tạng sau 48 giờ gây nhiễm, trong khi bề ngoài vịt có vẻ bình thường

Phương pháp ELISA được đánh giá là thích hợp trong chẩn đoán thường quybệnh dịch tả vịt từ các ổ dịch (Dang Hung,2004).

1.4 Lịch sử phát triển và khái niệm về vacxin.

1.4.1 Lịch sử phát triển của vacxin

Các nguyên tắc sử dụng vacxin đã được hình thành hơn 200 năm qua Những thử nghiệm sớm nhất về nguyên lý vacxin được thực hiện bởi Bernardo ramazzini vào năm 1711 Ông đã sử dụng một sợi chỉ đã nhiễm mầm bệnh dịch tả trâu bò gây nhiễm vào trâu bò khoẻ mạnh và đã bảo vệ được con vật không bị nhiễm bệnh Vào cuối thế kỷ đó, người ta đã biết sử dụng các sợi dây mỏng thấm ướt dịch tiết mũi của những con trâu bò bị nhiễm bệnh dịch tả trâu bò và gây nhiễm và vết khía trên

da yếm của con trâu bò khoẻ mạnh khác, gây ra hiện tượng ốm nhẹ và giúp con vật chống lại bệnh dịch tả trâu bò

Người kế tục và phát triển nguyên lý cho ngành vacxin học chính là Edward Jenner, một bác sĩ người Anh Ông đã quan sát thấy rằng những người phụ nữ vắt sữa bò khi tiếp xúc với những con bò cái bị đậu bò thì hầu như không bị nhiễm bệnh đậu mùa, một bệnh dịch tràn lan khắp các châu lục và gây chết nhiều người ở thời

kỳ đó Từ những quan sát này, Jenner đã tiêm chủng cho một cậu bé khoẻ mạnh bằng virus đậu bò, sau 6 tuần ông gây nhiễm lại cho cậu bé đó dung dịch được pha loãng từ mụn đậu mùa của người, kết quả là cậu bé đó hoàn toàn khoẻ mạnh, không

bị nhiễm bệnh đậu mùa và từ đó kỷ nguyên của ngành vacxin học được bắt đầu.

Những phát hiện của Jenner là nguồn gốc cho sự phát triển của vaccine và giúp con người thanh toán được các bệnh như bệnh đậu mùa, bệnh bại liệt và khống chế giảm bớt các bệnh khác như bệnh cúm, bệnh viêm phổi do vi khuẩn, bệnh ho

gà, bệnh Rubella, bệnh dại, bệnh viêm màng não, bệnh viêm gan B,

Một trăm năm sau, Louis Pasteur đã xây dựng và phát triển lý thuyết vacxin học dựa trên nền tảng của Edward Jenner Ông đã định nghĩa vacxin là một chế phẩm sinh học được chế từ vi sinh vật, dùng gây miễn dịch cho con vật để phòng các bệnh truyền nhiễm Vào cuối thế kỷ XIX, Louis Pasteur đã ứng dụng được miễn dịch chủ động bằng cách sử dụng vi khuẩn dịch tả gà giảm độc, môi trường nuôi cấy vi khuẩn nhiệt thán, tuỷ sống của thỏ đã gây nhiễm virus dại và đã tạo ra miễn dịch chủ động cho người và động vật phòng chống dịch bệnh Từ đó, sự phát triển các loại vacxin và lý thuyết về vacxin học được phát triển cho đến ngày nay.

Năm 1890, Behring và Kitasato đã phát hiện được rằng nếu nuôi cấy vi

khuẩn bạch hầu hoặc uốn ván trong môi trường lỏng, các vi sinh vật này sẽ tiết ngoại độc tố vào trong môi trường Những độc tố này sau khi xử lý formone, độc tố

sẽ bị giải độc nhưng vẫn giữ tính kháng nguyên Những độc tố này bị mất độc lực được gọi là các giải độc tố và nguyên lý để chế tạo các vacxin giải độc tố.

Phát triển ý tưởng của Pasteur, Haffkine đã chế được vacxin nhược độc phòng bệnh tả

Năm 1896, Wilhelm Kolle đã làm bất hoạt vi khuẩn tả bằng nhiệt để gây miễn dịch Cùng năm đó, Richard Pfeiffer làm bất hoạt vi khuẩn thương hàn bằng nhiệt và bảo quản trong phenol để chế vacxin Đến năm 1915, vaccine thương hàn

vô hoạt đã được sử dụng cho binh lính Châu Âu và Châu Mỹ.

Năm 1924, Calmette – Guerin đã chế tạo thành công vacxin BCG.

Như vậy, trong giai đoạn đầu, các nhà khoa học sản xuất vacxin chủ yếu dựa trên nguyên lý sử dụng các vi sinh vật toàn khuẩn sau đó làm bất hoạt hoặc giảm độc để gây miễn dịch

Vào những năm 20 của thế kỷ XX, Max Theiler đã phát hiện được một chủng virus sốt vàng không độc bằng cách cấy chuyển nhiều lần virus đó trên trứng gà có phôi và đã tạo ra được một chủng virus nhược độc ký hiệu là 17D sử dụng để sản xuất vacxin sốt vàng Từ đó, rất nhiều vacxin được chế tạo từ những chủng vi sinh vật giảm độc nhân tạo được ra đời như vacxin bại liệt, vacxin quai bị,

Ngày nay, do sự phát triển của khoa học, kỹ thuật công nghệ gen phát triển mạnh, người ta có thể đã cắt bỏ được những gen gây độc của vi sinh vật để tạo ra những chủng vi sinh vật không độc hoặc gắn gen trên những vi sinh vật khác ra những vector dẫn truyền từ đó sản xuất ra các loại vacxin tái tổ hợp, vacxin ADN.

Như vậy, lịch sử phát triển của vacxin có thể chia thành ba giai đoạn:

- Giai đoạn Jenner: Sử dụng các vi sinh vật nguyên độc, dị chủng để gây miễn dịch cho người.

- Giai đoạn Pasteur (1860 – 1990): Sử dụng các mầm bệnh nhược độc và các

tế bào vi sinh vật toàn khuẩn được làm bất hoạt để chế tạo vacxin.

- Giai đoạn vacxin ADN (từ 1996 đến nay): Đánh dấu một cuộc cách mạng trong công nghệ sản xuất vacxin, có rất nhiều hướng để tạo ra những chủng vi sinh vật sử dụng trong sản xuất vacxin đạt hiệu quả cao.

1.4.2 Khái niệm vacxin

Khái niệm “Vacxin” được bắt nguồn từ chữ latin “Vacca” có nghĩa là

“bò cái” Nhờ có vacxin phòng bệnh đã cứu hàng triệu người không chết vìbệnh đậu mùa, bệnh dại, bệnh lao, Nhiều bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm đốivới con người và động vật được khống chế và từng bước được loại trừ Tuynhiên, cuộc đấu tranh với bệnh tật, đặc biệt là bệnh truyền nhiễm để bảo vệsức khoẻ của con người và động vật vẫn còn khá gay go, phức tạp, cho nênviệc nghiên cứu, chế tạo các loại vacxin mới và cải tiến nâng cao hiệu lựcphòng bệnh các loại vacxin đã có, vẫn còn đòi hỏi các nhà khoa học phải quantâm

Ngày nay, không chỉ có vacxin phòng bệnh truyền nhiễm mà còn cóvacxin phòng bệnh ký sinh trùng, vì vậy thuật ngữ vacxin được hiểu rộnghơn, đó là một chế phẩm sinh học chứa vật chất của mầm bệnh được gọi là

“kháng nguyên” khi đưa vào cơ thể người và động vật sẽ kích thích cơ thể tạo

ra trạng thái miễn dịch giúp cơ thể chống lại mầm bệnh

Có thể hiểu một cách khái quát: Kháng nguyên là những chất được hệ thống miễn dịch của cơ thể nhận biết một cách đặc hiệu.

Những phân tử đơn giản, chung cho nhiều loài như nước, muối khoáng, creatinin, đường đơn hay đường đôi, không phải là kháng nguyên

Bằng chứng nói lên một chất đúng là một kháng nguyên khi chứng minh được có đáp ứng miễn dịch chống lại nó

Trước đây, kháng nguyên được quan niệm là một chất lạ có bản chất là Protein, khi đưa vào cơ thể, kích thích cơ thể sản sinh kháng thể đặc hiệu Kháng thể đặc hiệu sẽ trung hoà kháng nguyên đó

Ngày nay, nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của cơ thể thấy rằng, khi cơ thể nhận được kháng nguyên không chỉ sản sinh kháng thể đặc hiệu (đáp ứng miễn dịch dịch thể) mà còn tạo ra một lớp tế bào mẫn cảm, tế bào này cũng có khả năng tạo phản ứng với kháng nguyên (miễn dịch tế bào)

Vì vậy, theo Đỗ Trung Phấn (1980), Phan Thanh Phượng (1994) kháng nguyên được hiểu là chất khi đưa vào cơ thể sẽ kích thích cơ thể sản sinh kháng thể

và tế bào mẫn cảm đặc hiệu chống lại sự xâm nhập và gây bệnh của mầm bệnh Khả năng kích thích sinh miễn dịch dịch thể và miễn dịch tế bào của kháng nguyên gọi

- Khả năng tích điện của các phân tử kháng nguyên

Một kháng nguyên tạo miễn dịch phòng vệ tốt cho cơ thể, ngoài tính kháng nguyên mạnh cần phải có tính đặc hiệu cao

Tính đặc hiệu của kháng nguyên phụ thuộc vào tính chất và cấu trúc của các nhóm quyết định kháng nguyên Tính đặc hiệu của kháng nguyên cao không chỉ đặc trưng đối với loài mà còn đặc trưng đối với cả type và subtype.

Do vậy chất bổ trợ của vacxin là những chất có hoạt tính kích thích miễn dịch không đặc hiệu dùng bổ sung vào vacxin để nâng cao hiệu lực và độ dài miễn dịch

Chất bổ trợ của vacxin có 3 tác dụng

- Hấp thu và lưu giữ kháng nguyên trong cơ thể lâu hơn, không bài thải nhanh kháng nguyên.

- Tạo kích thích đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu của cơ thể

- Giảm kích thích phản ứng của độc tố nếu có trong vacxin đối với cơ thể.

b Phân loại:

Căn cứ vào bản chất, thành phần cấu tạo của chất bổ trợ, người ta chia chất

bổ trợ đang được dùng trong chế tạo vacxin hiện nay thành các nhóm sau đây:

- Chất bổ trợ vô cơ: Bao gồm Hydroxit nhôm (Al(OH) 3 ), Phốt phát nhôm AlPO 4 , sulfat nhôm Kali AlK(SO 4 ) 2 , các loại thuốc nhuộm, than hoạt tính Các chất

bổ trợ vô cơ thường hấp phụ kháng nguyên lên bề mặt để tăng cường độ kích thích đáp ứng miễn dịch của cơ thể, đồng thời giải phóng kháng nguyên từ từ vào hệ bạch huyết để kéo dài thời gian kích thích đáp ứng miễn dịch của cơ thể Với mầm bệnh

có sản sinh độc tố, sau khi đã được vô hoạt (giải độc tố) cũng được chất bổ trợ hấp thu và giải phóng từ từ để hạn chế tác động gây phản ứng cục bộ và toàn thân.

- Chất bổ trợ hữu cơ: Bao gồm các loại dầu thực vật như dầu hướng dương, dầu lạc, dầu oliu, mỡ động vật, các sản phẩm của dầu khoáng hoặc montanide ISA50, ISA70 của Pháp Các chất bổ trợ hữu cơ khi hỗn hợp với kháng nguyên sẽ tạo thành dạng nhũ tương nước trong dầu Dạng nhũ tương này có kháng nguyên nằm trong huyễn dịch dầu

Để khắc phục các nhược điểm của vacxin nhũ dầu trong nước dễ phân lớp, rít kim khi tiêm, người ta đã nghiêm cứu chế tạo loại vacxin nhũ tương kép nước trong dầu trong nước.

Khi vacxin nhũ có chứa xác vi khuẩn (thường dùng xác vi khuẩn thuộc họ Mycobacterium, đặc biệt là M.tubecullosis) được gọi là vacxin nhũ hoàn toàn, vacxin nhũ không chứa xác vi khuẩn được gọi là vacxin nhũ không hoàn toàn

Tác dụng của chất bổ trợ dầu trong vacxin cũng tương tự như tác dụng của chất bổ trợ vô cơ

Nhờ các phức hợp nhũ kháng nguyên – dầu – nước mà kháng nguyên tự do được giải phóng từ từ vào cơ thể để kích thích sản sinh kháng thể và tế bào miễn dịch đặc hiệu kéo dài Đồng thời các hạt nhũ cũng di chuyển từ chỗ tiêm vào hạch lympho hoặc đến các cơ quan có thẩm quyền miễn dịch để kích thích miễn dịch phi

c Tác dụng của chất bổ trợ.

- Đưa kháng nguyên vào môi trường cơ thể thích hợp.

- Hoạt hoá bổ thể và đưa đến tổng hợp, giải phóng và liên kết các cytokin.

- Hấp phụ kháng nguyên, khoanh vùng kháng nguyên, làm chậm quá trình giải phóng kháng nguyên tại vị trí nơi tiêm, do đó kháng nguyên tồn tại lâu trong cơ thể, kéo dài sự trình diện kháng nguyên.

- Kích thích sự hoạt động của APC để quá trình phân tích, trình diện kháng nguyên đạt hiệu quả.

1.4.4 Phân loại vacxin

Có thể chia vacxin thành 4 loại như sau:

- Vacxin chết (vô hoạt)

Vacxin chết có ưu điểm độ an toàn cao, nhưng tạo miễn dịch phòng hộ chậm (14 - 21 ngày), thời gian miễn dịch ngắn, hiệu lực phòng vệ hạn chế, liều tiêm vacxin lớn Để khắc phục các nhược điểm trên, căn cứ vào tính chất kháng nguyên, mục đích sử dụng mà người ta bổ sung vào vacxin chất bổ trợ để giảm tỷ lệ phản ứng, nâng cao và kéo dài thời gian khả năng tạo miễn dịch phòng vệ của vacxin Vacxin chết có thể có chất bổ trợ hoặc không có chất bổ trợ.

 Vacxin chết không có chất bổ trợ được gọi là vacxin Bacterin Thành phần của vacxin Bacterin chỉ chứa kháng nguyên tạo miễn dịch

Ưu điểm của vaccine bacterin là công nghệ chế tạo đơn giản phù hợp với các nước có công nghệ thấp, giá thành rẻ

Hạn chế của loại vacxin này là thời gian tạo miễn dịch ngắn (2 – 3 tháng), hiệu lực miễn dịch phòng vệ không cao (60-70%), tỷ lệ gây phản ứng khi tiêm cao Thường dùng chế tạo vaccine phòng các bệnh không đòi hỏi thời gian miễn dịch kéo dài, vacxin chế từ các chủng vi sinh vật độc lực thấp không sản sinh độc tố, vacxin cho qua đường miệng Hiện tại, vacxin bacterin còn tồn tại rất ít như vacxin E.coli cho uống phòng bệnh phân trắng và tiêu chảy lợn con.

 Vacxin chết có chất bổ trợ là loại vacxin trong thành phần của nó ngoài kháng nguyên đã vô hoạt còn được bổ sung chất bổ trợ

cơ thể, đồng thời giảm kích thích gây phản ứng của độc tố có trong vacxin chưa được

vô hoạt triệt để

Vacxin chết có chất bổ trợ ưu điểm rất an toàn Tuy hiệu lực được nâng cao hơn (80- 90%) và thời gian duy trì miễn dịch kéo dài hơn (4 - 6 tháng với bổ trợ vô cơ) và (9 -12 tháng với bổ trợ hữu cơ) so với vacxin bacterin, nhưng vẫn kém vacxin nhược độc Thời gian tạo miễn dịch phòng vệ chậm Thường dùng chế tạo vacxin phòng các bệnh đã được khống chế hoặc thanh toán, dùng tiêm phòng cho các vùng

an toàn dịch bệnh, các cơ sở chăn nuôi gia súc, gia cầm giống

Vacxin chết đang được dùng ngày càng rộng rãi trong nước và phát triển thay thế vacxin sống, đặc biệt là vacxin chết có chất bổ trợ hữu cơ (vacxin nhũ hoá) như: vacxin phòng bệnh tụ huyết trùng gia súc, gia cầm, vacxin đóng dấu lợn vô hoạt, vacxin phòng bệnh phù đầu lợn con.

b Vacxin sống

- Vacxin sống là loại vacxin chứa kháng nguyên là mầm bệnh còn sống đã được làm nhược độc hoặc vô độc, nhưng không làm thay đổi tính kháng nguyên

- Các vacxin sống tạo miễn dịch phòng hộ nhanh (7- 14 ngày), hiệu lực miễn dịch cao và kéo dài Tuy vậy, vaccine sống có thể gây phản ứng ở động vật được tiêm phòng với tỷ lệ cao, thậm chí có thể gây nên những ổ dịch địa phương sau khi tiêm vacxin do mầm bệnh trong vacxin tăng cường độc lực hoặc làm trỗi dậy các bệnh thể mãn tính, thể bệnh ẩn, thể mang trùng ở động vật được tiêm phòng Thường dùng chế tạo các loại vacxin phòng các bệnh do virus gây ra, sử dụng phòng các bệnh thường lưu hành, khi phòng chống dịch khẩn cấp Vacxin này ngày càng hạn chế sử dụng ở nước phát triển

Ở Việt Nam vacxin sống đang được sử dụng rộng rãi Phần lớn vacxin phòng bệnh do virus gây ra ở nước ta đang dùng đều là vacxin nhược độc như: vacxin phòng bệnh dịch tả lợn, các loại vacxin phòng bệnh Newcatle, vacxin phòng bệnh dịch tả vịt, vacxin phòng bệnh Gumboro, vacxin phòng bệnh do Parovirus ở lợn…

Vacxin sống bao gồm: Vacxin nguyên độc, vacxin vô độc và vacxin nhược độc.

Tuy nhiên sản xuất vacxin theo phương pháp này đòi hỏi quy trình chế tạo phức tạp, công nghệ hiện đại, nên giá thành vacxin cao và mất nhiều thời gian Đặc biệt, trong quá trình sản xuất vacxin, việc nuôi cấy mầm bệnh in vitro luôn tiềm tàng những rủi ro cho người sản xuất Để khắc phục những hạn chế trên, các nhà nghiên cứu đã sử dụng công nghệ gen để sản xuất loại vacxin này.

Hiện nay, trên thế giới vacxin tiểu phần đang được ứng dụng rộng rãi như: vacxin chứa các loại kháng nguyên bám dính F4, F5, F6, F18 dùng phòng bệnh tiêu chảy ở gia súc do vi khuẩn E.coli gây ra Vacxin phối hợp kháng nguyên O và

kháng nguyên K của vi khuẩn Pastuerella multocida phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò,…

Việt Nam đang bắt đầu nghiên cứu chế tạo vacxin tiểu phần dùng phòng bệnh phù đầu lợn con và bệnh Gumboro ở gà.

d Vacxin thế hệ mới sản xuất bằng công nghệ gen

Những tiến bộ về khoa học kỹ thuật trong lĩnh vực vi sinh vật, miễn dịch học, đặc biệt là kỹ thuật gen và công nghệ sinh học phân tử đã mở ra một hướng ứng dụng mới đó là nghiên cứu sản xuất các loại vacxin bằng công nghệ gen.

Hiện nay, các vacxin được sản xuất bằng công nghệ gen được sử dụng rất có hiệu quả và góp phần rất lớn trong công tác phòng chống dịch bệnh cho người và động vật.

Các vacxin thế hệ mới có nhiều loại Căn cứ vào nguồn kháng nguyên nhân lên được hay không nhân lên được trong cơ thể động vật, người ta chia ra làm hai loại:

 Vaccine có kháng nguyên sống nhân lên được trong cơ thể sống

- Vacxin tái tổ hợp có vector dẫn truyền:

Vacxin này chứa hai thành phần chính là:

+ Đoạn ADN chứa gen mã hoá cho kháng nguyên chính được tách ra từ vi sinh vật gây bệnh.

+ Hệ gen của vector dẫn truyền.

Nguyên lý sản xuất loại vacxin này là, người ta tách rời gen kháng nguyên của

vi sinh vật gây bệnh rồi ghép vào hệ gen của vector dẫn truyền là plasmid hay vi sinh vật rồi đưa vào vật chủ Những vi sinh vật mang gen kháng nguyên là những vi sinh vật sống, vì thế khi vào cơ thể vật chủ chúng sẽ nhân lên và làm tăng nguồn gen kháng nguyên tạo ra miễn dịch lâu bền cho cơ thể.

Các vi sinh vật thường được sử dụng làm vector dẫn truyền là: Vi khuẩn Salmonella typhimurium, vi khuẩn E, coli, nấm men Pichia pastoris, Sacharomyces cerevisiae, virus đậu bò vaccinia,

- Vacxin axit nucleic (Vacxin ADN)

Đây là vacxin có thành phần chính là ADN của plasmid tái tổ hợp chứa gen kháng nguyên.

Gen mã hoá cho kháng nguyên của vi sinh vật gây bệnh được tạo dòng rồi gắn

vào plasmid Đưa plasmid tái tổ hợp vào cơ thể bằng cách vi tiêm hoặc bằng súng bắn gen.

Vacxin thường được tiêm vào cơ thể để đưa gen trực tiếp vào một số tế bào cơ Khi vào trong tế bào, ADN của plasmid tái tổ hợp được nhân lên, protein kháng nguyên được sản sinh trực tiếp bởi tế bào vật chủ, chúng sẽ kích thích cơ thể sản sinh miễn dịch.

Nhược điểm:

Thực nghiệm cho thấy khi đưa vacxin ADN vào cơ thể động vật, sự phân bố ADN vacxin trong tế bào không đạt được mức tối đa Mặt khác, nếu ADN vacxin hoà nhập vào hệ gen động vật chủ sẽ gây hậu quả về di truyền ở các thế hệ tiếp theo hoặc

có thể đột biến tế bào gây ung thư hoặc ức chế sự hoạt động của gen chống ung thư, gây biến đổi tế bào dẫn đến trạng thái tự miễn dịch.

- Vacxin hoá gen độc.

Là vacxin chứa yếu tố gây bệnh được làm nhược độc bằng kỹ thuật cắt bỏ gen độc.

Ví dụ: Vacxin cúm A/H5N1 đang được sản xuất thử nghiệm tại Việt nam từ chủng virus cúm NIBRG-14 Chủng virus cúm này được tạo ra bằng kỹ thuật di truyền ngược thông qua việc ghép 6 gen của chủng PR8/34 (H1N1) với 2 gen H5N1 của chủng A/Vietnam/1194/2004 Riêng gen H5 bị loại 12 nucleotid mã hoá 4 axit amin thuộc vùng độc Chủng virus này được gây nhiễm trên trứng gà có phôi.

 Vaccine có nguồn gốc kháng nguyên không nhân lên

Là những vaccine vô họat được sản xuất bằng công nghệ gen.

- Vacxin chứa kháng nguyên là protein sản xuất bằng kỹ thuật gen.

Là loại vacxin này được sản xuất bằng công nghệ tách gen kháng nguyên

từ các tác nhân gây bệnh, ghép vào hệ gen của một loại vi sinh vật làm vector dẫn truyền (vi khuẩn, nấm men, virus, ) nuôi cấy vi sinh vật tái tổ hợp này trong môi trường thích hợp như hệ thống bioreator hoặc hệ thống lên men fermentor, lượng kháng nguyên sẽ được sản xuất với số lượng nhiều Sau đó chiết tách protein kháng nguyên để làm vacxin.

- Vacxin ăn được

Vacxin ăn được là loại vacxin tiểu phần bao gồm một hoặc nhiều chuỗi polypeptid của protein kháng nguyên trong vi sinh vật gây bệnh, người ta chọn lọc những gen mã hoá có các thành phần này đưa vào vector (plasmid hoặc vi khuẩn), dựa vào hệ thống di truyền thực vật để khuyếch đại gen và biểu hiện thành các protein kháng nguyên mong muốn trong các bộ phận ăn được của thực vật.

Ưu điểm:

- Sản xuất và kiểm soát chất lượng đơn giản.

- Không có các thành phần không cần thiết như nucleic, protein ngoại lai Do

- Sinh miễn dịch có thể kém so với các vaccine vô hoạt truyền thống.

 Vacxin nhược độc: Vacxin nhược độc dịch tả vịt thường cho đápứng miễn dịch mạnh, ổn định và thời gian miễn dịch kéo dài, có thể được mộtnăm

Năm 1969, chủng virus nhược độc dịch tả vịt thích nghi trên phôi vịt đãđược sử dụng để sản xuất vacxin phòng bệnh dịch tả vịt ở Việt Nam Khi nuôicấy trên phôi vịt, virus gây bệnh tích phôi ổn định, thời gian chết phôi trungbình là 10 - 24 giờ Trong nước niệu nang, hàm lượng virus có ELD50 lúc 72giờ là 10 -4,75/0,2 ml Vacxin khi sử dụng pha 1/200 tiêm vào dưới da cho vịtcon với liều 0,2 ml/con và tiêm cho vịt lớn với liều 1 ml/con Vacxin tạo được

con1ngàytuổisaukhitiêmvacxinđượcbảohộchắcchắn100%đến45ngàytuổi,vịtlớn kéo dài miễn dịch tới 9 tháng

Trần Minh Châu (1987) đã nghiên cứu chủng vacxin nhược độc dịch tảvịt thích nghi trên phôi gà Tác giả cho biết, chủng virus này gây chết phôi gàrất ổnđịnh, thời gian chết phôi 72-120 giờ Virus vacxin có ELD50 từ 10-3,31/0,2 ml đến 10- 4,5/0,2 ml Vacxin khi sử dụng an toàn cho vịt nhưng vềhiệu lực cần nghiên cứu thêm

Lê Văn Lãnh (1991) nghiên cứu đặc tính sinh học của virus vacxin dịch

tả vịt chủng Jansen và cho biết virus vacxin có tính ổn định khi nuôi cấy trênphôi gà vàtếbàoxơphôigà1lớp;chỉsốELD50 biếnđộngtrongkhoảngtừ10-3,31/0,2mlđến10-3,36/0,2 ml; CPE50 biến động từ 10-4,36 đến

10-4,54 Vacxin an toàn cho mọi lứa tuổivịt, hiệu lực của vacxin cao Vacxinđược chế biến dưới 2 dạng là vacxin tươi và vacxin đông khô

Vacxin tươi thường được đóng ở ampoul 100 liều, chỉ bảo quản tối đa

là 4 tháng ở kho lạnh và phải dùng không quá 6 giờ khi đã pha loãng vacxinbằng nước sinh lý

Vacxin đông khô thì thời gian bảo quản dài hơn (khoảng 1 năm) và ít bịmất hiệu lực khi gặp điều kiện bất lợi Vacxin đông khô có thể đóng ampoul

100 liều hoặc chai có từ 500-1000 liều (Nguyễn Như Thanh, 2001) Tuỳtheo liều đóng vacxin mà pha loãng với nước sinh lý đủ cho 0,2ml/vịt con và0,3-0,5ml/vịt lớn Đường tiêm chủ yếu là dưới da hoặc bắplườn

Nguyễn Đức Hiền (1999) nghiên cứu và kết luận phương pháp nhỏ mắthoặc tiêm bắp hoặc kết hợp cả hai đều cho ñáp ứng miễn dịch tương đối giốngnhau và đạt tỷ lệ bảo hộ hơn70%

Nguyễn Ngọc Huân (2006) khuyến cáo sử dụng vacxin dịch tả vịt đôngkhô của Navetco trong quy trình thú y an toàn dịch bệnh áp dụng cho vịt nuôi ởnông hộ

Vacxin Dịch tả vịt do công ty TNHH MTV AVAC Việt Nam sản xuấtbằng công nghệ cấy virus dịch tả vịt chủng C vào tế bào sơ phôi gà một lớp.Vacxin được sử dụng để phòng bệnh dịch tả vịt cho vịt ở mọi lứatuổi Mỗiliều vacxin chứa tối thiểu 104EID50 virus Vacxin an toàn và có hiệu lực cao.Ngoài ra, khi dịch xảy ra dùng vacxin có khả năng dập tắt bệnh nhanh chóng

và bảo vệ ñàn vịt với tỷ lệcao

Hiện nay, trên thế giới đang sử dụng rộng rãi vacxin dịch tả vịt dùngvirus nhược độc dịch tả vịt thích nghi trên phôi vịt, phôi gà và môi trường tế