PHÂN TÍCH TÍNH đa DẠNG DI TRUYỀN và THÀNH PHẦN hợp CHẤT ALKALOID của một số cây THUỘC họ THỦY TIÊN (AMARYLLIDACEAE)

Tiểu ban SINH HỌC CÔNG NGHỆ SINH HỌC IV-O-1.1 PHÂN TÍCH TÍNH ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ THÀNH PHẦN HỢP CHẤT ALKALOID CỦA MỘT SỐ CÂY THUỘC HỌ THỦY TIÊN (AMARYLLIDACEAE) Văn Hồng Thiện, Trần Thị Thu Ngân, Trịnh Ngọc Nam Trường ĐH Cơng nghiệp Tp HCM Tóm tắt Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium L.) thuốc quý, sử dụng phổ biến y học để điều trị bệnh u sơ Hiện Việt Nam, giống Trinh nữ hoàng cung dùng làm dược liệu cịn nhiều lồi khác chi Crinum, giống hình thái thực vật khơng có dược tính dễ gây nhầm lẫn, ảnh hưởng đến sức khỏe người tiêu dùng Trong nghiên cứu này, phân tích tính đa dạng di truyền thành phần hợp chất alkaloid 11 mẫu Trinh nữ hoàng cung thu thập 11 tỉnh thành miền Trung miền Nam Khuếch đại vùng ITS1- 5,8S- ITS2 từ DNA tổng số với cặp mồi ITS1, ITS4 giải trình tự, chúng tơi xây dựng phát sinh loài mẫu Trinh nữ hoàng cung Kết phân tích cho thấy tất mẫu thuộc họ Amaryllidaceae, có mẫu Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium L.), mẫu Náng hoa trắng (Crinum asiaticum L.) mẫu Bạch trinh biển (Hymenocallis littoralis) Phân tích định tính alkaloid thuốc thử sắc ký mỏng với thuốc màu ammonium cerium (VI) sulfate xác định alkaloid đặc trưng vincristine, vinblastine, vidoline ajmalincine có số mẫu Trinh nữ hồng cung Tóm lại, kết nghiên cứu góp phần xây dựng phương pháp chuẩn nhận diện, xác định thuốc Việt Nam STUDIES GENETIC VARIATION AND ALKALOID COMPONENTS OF SOME MEDICINAL PLANTS IN AMARYLLIDACEA FAMILY Abstract Crinum latifolium are widely used in folk medicine as an anticancer in different geographical regions around the world In Vietnam, many species of Amaryllidacea family have strong phenotypic similarities to Crinum latifolium but not have pharmaceutical value for tumor treatment In this study, we examined the genetic variation and analyzed alkaloid components of eleven medicinal plant samples, which was collected at eleven Provinces in Middle- and South Vietnam Amplification and sequencing of ITS1-5.8S-ITS2 region from total DNA extracted from the plant samples by using ITS1 and ITS4 primer, we built phylogenetic tree of the medicinal plant samples The result indicated all the plant samples are belong Amaryllidaceae family, in which nice samples are Crinum latiforlium, one sample is Crinum asiaticum and the other is Hymenocallis littoralis Qualitative analysis of alkaloid components by thin-layer chromatography with ammonium cerium (VI) sulfate reagent, we determined some specific alkaloids as vincristine, vinblastine, vidoline and ajmalincine in some medicinal plant samples Taken together, these results may provide a method for determination medicinal plant in Vietnam _ Email liên hệ: vanhongthien2014@gmail.com IV-O-1.2 NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO LAN HỒ ĐIỆP PHALAENOPSIS AMABILIS VÀ NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT LÊN KHẢ NĂNG TÁI SINH HUYỀN PHÙ Trịnh Thị Lan Anh(1), Dương Tấn Nhựt(1), Võ Thị Bạch Mai(2), Đặng Thị kim Phụng(1), Phạm Mai Linh(1) (1) Khoa CNSH-Thực Phẩm-Môi Trường, Trường ĐH Công Nghệ Tp HCM (3) Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Nghiên cứu thiết lập nhằm tìm thể tích mơi trường MS khối lượng mẫu cấy mơ sẹo thích hợp cho ni cấy sinh khối tế bào tăng khả hình thành tế bào đơn từ huyền phù tế bào lan Hồ điệp Sau sử dụng nguồn sinh khối huyền phù cho nghiên cứu tái sinh ảnh hưởng dịch chiết chuối, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà chua điều kiện nuôi cấy tối Việc cấy 1,5 g mẫu cấy mơ sẹo vào bình thủy tinh 100 ml chứa 30 ml môi trường MS cho kết tăng sinh tạo tế bào đơn huyền phù tế bào tốt Khi sử dụng dịch chiết hữu có nguồn gốc từ thực vật việc bổ sung 40 g/l dịch chiết chuối vào môi trường tái sinh huyền phù cho hiệu tốt nhất; dịch chiết khoai tây, việc bổ sung 40 – 50 g/l cho kết tối ưu; sử dụng dịch chiết cà chua 30 g/l cho thích hợp cho phơi phát triển Từ khóa: huyền phù tế bào, lan Hồ điệp Phalaenopsis amabilis, dịch chiết, phát sinh phôi vô tính, huyền phù tế bào, tế bào đơn CELL SUSPENSION CULTURES OF PHALAENOPSIS AMABILIS AND STUDY EFFECT OF SOME EXTRACT ON REGENERATION OF CELL SUSPENSION Abstract This study was established to find out the weight of callus explant and the volume of MS media suitable for cell culture biomass and increase the ability to form single cells from cell suspension of Phalaenopsis orchid Then use this biomass suspension for regeneration study The implantation of 1.5 g callus in 100 ml glass flasks containing 30 ml MS media of results generated cell proliferation and cell suspension application best When using organic extracts derived from plants, then the addition of 40 g/l banana extract to regenerative suspensions media for best performance; for potato extract, a supplement to 40 – 50 g/l for optimal results; Use the tomato extract 30 g/l for proper embryo development Keywords: cell suspension, Phalaenopsis amabilis, extract, somatic embrygenesis, suspension cells, single cells _ Email liên hệ: lananh0110@yahoo.com IV-O-1.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH REAL-TIME PCR PHÁT HIỆN GEN CPTI (COWPEA TRYPSIN INHIBITOR GENE) TRONG GẠO BIẾN ĐỔI GENE CÓ NGUỒN GỐC TỪ TRUNG QUỐC Nguyễn Thị Mỹ Linh Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Việc dán nhãn xác định nguồn gốc trồng biến đổi gene cần thiết cho việc thương mại kiểm soát trồng giới Việt Nam Gen CpTi mã hóa cho nhân tố ức chế trypsin, nguyên nhân dẫn đến tính kháng nhiều loại trùng Do CpTi sử dụng nhiều trồng chuyển gene đặc biệt loại lúa gạo chuyển gen có nguồn gốc từ Trung Quốc Trong nghiên cứu này, xây dựng qui trình realtime PCR nhằm phát gạo chuyển gen CpTi Qui trình real-time PCR với cặp mồi CpTi-F CpTi-R, nồng độ mồi 300 nM, nồng độ SYBR Green 0,5X, nhiệt độ bắt cặp 62oC cho thấy phát chuyên biệt CpTi Hiệu khuếch đại qui trình đạt 94,6%, giới hạn phát 50 Bên cạnh sản phẩm khuếch đại gen CpTi dịng hóa plasmid pBluescript để làm chứng dương cho qui trình Từ khóa: CpTi (Cowpea Trypsin Inhibitor), Real-time PCR, GMO, chuyển gien, kháng côn trùng A REAL-TIME PCR METHOD FOR DETECTION OF CPTI (COWPEA TRYPSIN INHIBITOR) GENE IN THE GENETICALLY MODIFIED RICE ORIGATING FROM CHINA Abstract Labeling and traceability genetically modified organisms (GMO) are necessary for trade and regulation in the world and Vietnam Cowpea Trypsin Inhibitor (CpTi) gene encodes a trypsin inhibitor which considered as a suitable candidate for developing insect-resistant transgenic plants, especially transgenic rice lines origating from China In this study, we established a real-time PCR protocol to detect CpTi gene in transgenic rice The protocol with CpTi-F and CpTi-R primers, 300nM primers, 0.5X SYBR Green I, annealing temperature at 620C showed the best results Amplification efficiency is 94.64% and the limit of detection is 50 copies Moreover, PCR product of CpTi gene was cloned into pBluescript plasmid using as a positive control Key words: CpTi (Cowpea Trypsin Inhibitor), Real-time PCR, GMO, transgene, insect resistant rice _ Email liên hệ: ntmylinh.khtn@gmail.com IV-O-1.4 NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CÂY CỎ LẠC (ARACHIS PINTOI KRABOV & W.C.GREGORY) LÀM NGUỒN NGUYÊN LIỆU THU NHẬN RESVERATROL Vũ Thị Bạch Phượng(1), Trần Quốc Tân(1), Phạm Công Thủy Tiên(2), Quách Ngô Diễm Phương(1), Bùi Văn Lệ(1) (1) Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM (2) Trường ĐH Công nghiệp, Tp HCM Tóm tắt Resveratrol hợp chất biến dưỡng thứ cấp thuộc nhóm phytoalexin, biết đến với hoạt tính sinh học bật kháng oxy hóa, kháng viêm, ngăn ngừa ung thư, bệnh tim mạch lão hóa Nhu cầu sử dụng thương mại hóa resveratrol ngày tăng hàm lượng resveratrol tự nhiên lại thấp Vì vậy, việc tìm kiếm phát triển nguồn nguyên liệu có chứa resveratrol việc cần thiết quan trọng Hiện nay, Cỏ lạc (Arachis pintoiKrabov & W C Gregory) trồng trang trí tạo thảm công viên, đồng ruộng Cỏ lạc chi với Đậu phộng (Arachis hypogaea L.)-một nguồn nguyên liệu để thu nhận resveratrol nghiên cứu Chen cộng (2001) Trong nghiên cứu này, rễ Cỏ lạc chứng minh rõ ràng có diện resveratrol thông qua phương pháp sắc ký mỏng, đo độ hấp thu UV 308nm HPLC-UV Với hàm lượng resveratrol rễ tương đối cao, Cỏ lạc sử dụng nguồn nguyên liệu để thu nhận resveratrol Ngoài ra, để tăng sinh nguồn nguyên liệu rễ, kỹ thuật cảm ứng rễ tơ từ mẫu cấy lớp mỏng in vitro từ cá thể in vivo kết hợp thủy canh thực thông qua khai thác khả tạo rễ tơ vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes ATCC 15834 STUDY ON USING PINTO PEANUT (ARACHIS PINTOI KRABOV & W.C.GREGORY) AS A MATERIAL SOURCE FOR RESVERATROL PRODUCTION Abstract Resveratrol, a compound belonging to the group of secondary metabolites-phytoalexin, is best known for the oustanding biological activities such as antioxidant, anti-inflammatory, prevent cancer, heart disease and aging The demand of use and commercialize resveratrol increasing everyday while the amount of resveratrol extract from natural is very low So finding and developing new sources of materials containing resveratrol is a necessary and important Currently, Pinto peanut (Arachis pintoi Krabov & WC Gregory) is only growing and creating decorative rugs in parks, fields, to be same family with Groundnuts (Arachis hypogaea L.)-a resource to obtain resveratrol has been studied by Chen et al (2001) In this research, roots of Pinto peanut are clearly demonstrated the presence of resveratrol through the Thin Chromatography, UV 308nm absorbance measurements and HPLC-UV With resveratrol content is relatively high in roots, Pinto peanut can be using as a material to obtain resveratrol Also, to actively proliferate materials are roots, hairy roots induction technique from thin layer explants in vitro and in vivo from individual hydroponic was done through the exploitation of the ability to produce hairy roots of Agrobacterium rhizogenes ATCC 15834 _ Email liên hệ: vtbphuong@hcmus.edu.vn IV-O-1.5 TĂNG TRƯỞNG CHỒI CÂY LƯỠI RẮN (HEDYOTIS CORYMBOSA (L.) LAM) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO Phan Ngô Hoang, Lê Anh Tuấn Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Cây Lưỡi rắn (Hedyotis corymbosa (L.) Lam), loài thảo dược nghiên cứu sử dụng y học cổ truyền nhằm điều trị rắn cắn, viêm gan ung thư Đặc biệt, Ursolic acid Oleanolic acid hợp chất có hoạt tính sinh học cao Lưỡi rắn có khả kháng viêm, kháng khuẩn, chống oxi hố chống virus HIV (Babalola IT et al 2013) Trong nghiên cứu này, khúc cắt thân mang chồi nách nuôi cấy môi trường MS (Murashige Skoog 1962) bổ sung BA 1mg/l IAA 0,2mg/l cho số chồi phát sinh nhiều Chồi phát sinh thông qua mô sẹo xuất phát từ nhu mơ biểu bì thân Trong điều kiện nuôi cấy thay đổi (tăng hàm lượng sacarose môi trường nuôi cấy, tăng cường độ chiếu sáng, hay bổ sung PEG 3%), cụm chồi tăng trưởng mạnh cường độ ánh sáng 500lx, đặc biệt điều kiện nuôi cấy lượng Ursolic acid Oleanolic acid gia tăng cao Cường độ hô hấp vai trò chất điều hòa tăng trưởng nội sinh tái sinh chồi trình đáp ứng chồi với điều kiện ni cấy khác phân tích thảo luận GROWTH OF HEDYOTIS CORYMBOSA (L) LAM IN VITRO CULTURE Abstract Hedyotis corymbosa is one of weedy herb belong to Rubiaceae family It has been studied and used as a traditional medicine for treatment of snakebite, anti-hepatotoxic and cancer Notably, Ursolic acid and Oleanolic acid, compounds presented high biological activity, in H corymbosa were reported having anti-inflammatory, antibacterial, antioxidant and anti-HIV abilities (Babalola IT et al 2013) In the present study, the fragment of stem containing a axillary bud are cultured on MS medium (Murashige & Skoog, 1962) supplemented with 1mg /l BA and 0.2mg/l IAA is the best condition which give highest number of shoot formation These shoot is come from the callus of cortex In different culture conditions (increase sucrose concentration in medium culture, increase light intensity, supplemented 3% PEG), shoots grow up strongly under 7.500lx light intensity, especially in the this culture condition the concentration of ursolic acid and oleanolic acid are highest The respiratory changes and role of endogenous hormones in the shoot generation and response of shoots with different culture conditions has been analyzed and discussed _ Email liên hệ: pnhoang@hcmus.edu.vn IV-O-1.6 PHOSPHORYLATION EVENTS INVOLVED IN EARLY PERCEPTION OF SOYBEAN RHIZOBIAL SYMBIONT BRADYRHIZOBIUM JAPONICUM Nguyen Thanh Hai, Gary Stacey, Katalin Toth, Laurent Brechenmacher, Tran Nguyen University of Missouri-Columbia, USA Abstract Legume plants establish beneficial symbiosis with nitrogen-fixing soil bacteria, called rhizobia Root hairs serve as a main entry point for rhizobial invasion of the plant host root A phospoproteomic study performed on soybean root hairs in response to its symbiont Bradyrhizobium japonicum revealed significant changes in phosphorylation events at the very early stages of the symbiotic interaction Nod factors (NF), signaling molecules secreted by rhizobia and perceveid by plant host, are recognized, by receptor-like kinases (RLK) NFR1 and NFR5 located at the plasma membrane NF perception triggers downstream signaling cascades, as well as other responses (such as ion changes, calcium oscillation, cytoskeleton reorganization, gene expression, etc), leading to bacterial invasion and nodule formation where nitrogen fixation takes place Based on our phosphoproteomic data, we designed a peptide library which we applied in a so-called Kinase-Client Assay, in order to identify putative interactor candidates and/or substrates of kinases We used the NORK kinase, which acts downstream of the NF receptors (NFR1 and NFR5), to establish the assay and to validate the peptide library We identified a putative interaction partner of NORK, a putative cytosolic kinase RNAimediated gene silencing of this kinase and its closest homolog resulted in a significant reduction in nodule formation on soybean transgenic roots We are investigating the interaction between NORK and the putative interactor, as well as examining the phosphorylation event _ Email liên hệ: htnb6f@mail.missouri.edu IV-O-1.7 NHÂN NHANH CHỒI CÂY KIWI ACTINIDIA DELICIOSA BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY LÁT MỎNG TẾ BÀO Vũ Hồng Nhung, Hồng Vũ Thúy Uyên, Bùi Văn Lệ Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Nhằm mục đích tiết kiệm nguồn vật liệu ban đầu nhân nhanh chồi kiwi Actinidia deliciosa, nghiên cứu sử dụng vật liệu lát mỏng lá, đốt thân lóng thân in vitro Mẫu nuôi cấy môi trường MS bổ sung kết hợp loại hormone cytokinin BA, kinetin, TDZ auxin NAA; cấy chuyền qua môi trường tương tự ban đầu, môi trường MS MS bổ sung 1,0 mg/l BA vào ngày thứ 15 29 Kết tối ưu đạt sử dụng lát mỏng lóng thân, ni cấy mơi trường MS bổ sung 2,0 mg/l BA 0,5 mg/l NAA cho tỷ lệ mẫu tạo chồi 10,0 ± 0,0 mẫu, diện tích chồi 1,24 ± 0,02 cm2, 4, ± 0,3 chồi/mẫu vào ngày thứ 56 Cụm chồi tăng trưởng môi trường MS Sau đó, chồi tạo rễ mơi trường MS để tạo hồn chỉnh RAPID KIWIFRUIT ACTINIDIA DELICIOSA SHOOT PROLIFERATION USING THIN CROSS SECTION CULTURE Abstract A rapid micropropagation of kiwifruit (Actinidia deliciosa) which based on thin cross sections (TCS) of leaves, nodes and stems Culture was established using Murashige and Skoog (MS) medium with combination of cytokinins are BA, kinetin, TDZ and auxin is NAA The explants were subcultured on the same medium, MS medium or MS medium supplemented with 1.0 mg/l BA on 15th day or 29th day The best result was noticed in 2.0 mg/l BA and 0.5 mg/l NAA, using thin cross section of stem with shoot regeneration rate is 10.0 ± 0.0 exlplants, area of shoot is 1.24 ± 0.02 cm2 and a shoot number of 4, ± 0,3 per explants on the 56th day of culture The shoot developed on MS medium and then were rooted on MS _ Email liên hệ: hvtuyen@hcmus.edu.vn medium IV-O-1.8 ẢNH HƯỞNG CỦA N, P, K, CYTOKININ VÀ STRESS NƯỚC LÊN THỜI GIAN RA HOA CỦA DENDROBIUM SONIA Trần Hà Tường Vi, Nguyễn Du Sanh Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Lan Dendrobium Sonia thường sử dụng hoa cắt cành trồng chậu màu sắc đẹp nhiên trình tăng trưởng thường kéo dài 13 tháng sau trồng vườn Các tỷ lệ N: P: K khác nhau, kết hợp với BA (benzyladenin) ngưng tưới nước khảo sát để rút ngắn thời gian hoa Dendrobium Sonia Những lan sau trồng tháng với phân N,P,K theo nồng độ tăng P rút ngắn thời gian hoa sớm đối chứng khơng nhiều Với phân có chứa N 50 mg/l + P 100 mg/l + K 50 mg/l, phun BA 100 mg/l lan cho chồi hoa sớm (sau 30 ngày xử lý) nhiên tỷ lệ mang chồi hoa thấp (20%) Với phân có chứa N 50 mg/l + P 100 mg/l + K 50 mg/l, kết hợp xử lý ngưng tưới nước tuần phun BA 100 mg/l, hoa sớm (sau 30 ngày xử lý) tỷ lệ mang chồi hoa cao ( 3,3%) Những đối chứng phun N, P, K theo nồng độ N 50 mg / l + P 100 mg / l + K 50 mg / l cho 13,3% chồi hoa sau 120 ngày xử lý EFFECT OF N, P, K, CYTOKININ AND WATER STRESS ON THE FLOWERING TIME OF DENDROBIUM SONIA Abstract Dendrobium Sonia is commonly used as flowers cutting and planted in pots because of beautiful color, however the process of growth usually lasts 13 months after planting at garden Different ratio N: P: K, in combination with benzyl adenine (BA) and stress water were investigated to shorten flowering time of Dendrobium Sonia Dendrobium Sonia plants (planted at garden months), which treated with N, P, K with high concentration of P, could shorten flowering time but not much earlier than control plants Dendrobium Sonia which sprayed N 50 mg/l + P 100 mg/l + K 50 mg/l and BA 100 mg/l had flower buds early (after 30 days), however the rate of flowering plant was low (20%) Orchids, which were stopped watering in weeks, sprayed the N 50 mg/l + P 100 mg/l + K 50 mg/l and BA 100 mg/l, had flower buds early (after 30 days) and the rate of flowering plant was high (73,3%) Control plants which sprayed N, P, K at 50 mg/l N+ 100 mg/l P+ 50 mg/l K had 13,3% flowering plants after 120 days _ Email liên hệ: ndsanh@hcmus.edu.vn IV-O-1.9 VI NHÂN GIỐNG CÂY BẪY KẸP DIONAEA MUSCIPULA Hồng Vũ Thúy Uyên(1), Bùi Văn Lệ(1), Nguyễn Hữu Trọng(1), Trần Hoàng Phúc(2) (1) Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM (2) Trung tâm Kỹ thuật Công nghệ Sinh học Tiền Giang Tóm tắt Dionaea muscipula, tên tiếng Anh thơng dụng Venus trap, loài ăn thịt có nguồn gốc từ Bắc Nam bang Carolina, Hoa Kỳ Trong tự nhiên, chúng bị đe doạ tuyệt chủng ô nhiễm khai thác mức người để phục vụ nhu cầu chơi cảnh thương mại Quy trình vi nhân giống lồi chúng tơi xây dựng hồn thiện dựa khảo sát giai đoạn: nhân chồi, hình thành hồn chỉnh vườn ươm Trên mơi trường MS (Murashige Skoog, 1962) với hàm lượng khoáng đa lượng giảm nửa bổ sung Kinetin 0.5mg/l cho hiệu nhân chồi cao (20.44 ± 2.14 chồi/mẫu); sử dụng NAA 0.5mg/l giúp tạo rễ tốt (5.33 ± 0.44 rễ/chồi) Những hoàn chỉnh đạt kích thước - 5cm chọn để bước vào giai đoạn chuyển tiếp 14 ngày: trồng giá thể gồm dớn đá perlite tỉ lệ 1:1, đặt điều kiện chiếu sáng nhân tạo, chế độ tưới ngày/lần Sau đó, chuyển vườn ươm, giữ nguyên giá thể chế độ tưới Tỉ lệ sống sót đạt gần 100% MICROPROPAGATION OF VENUS FLYTRAP DIONAEA MUSCIPULA Abstract Dionaea muscipula, also known as Venus flytrap, is an endangered carnivorous plant which has origin from North and South Carolina, USA An efficient protocol for large-scale multiplication of this species has been set up through stages: shoot multiplication, root induction and moving plant to the natural environment On the half-strength Murashige and Skoog (MS) medium, supplementing with 0.5mg/l kinetin gave the highest shoot proliferation of 20.44 ± 2.14 shoots/explant; adding 0.5mg/l α - naphthaleneacetic acid (NAA) induced the best rooting 5.33 ± 0.44 roots/shoot The 4-5cm plantlets were then transplanted on the rooting medium including 50% peat and 50% perlite In the first 14 days, they were placed in the light room with the application of an anti-transpirant film, irrigated times/day and after that all moved to the garden The rate of successful transfer process reached nearly 100% _ Email liên hệ: hvtuyen@hcmus.edu.vn TẠO DÒNG VÀ KHẢO SÁT BIỂU HIỆN PHIÊN BẢN GFP (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) CHO KHẢ NĂNG BIỂU HIỆN TỐT TRONG BACILLUS SUBTILIS Nguyễn Hoài Nam, Phan Thị Phượng Trang, Nguyễn Đức Hoàng, Trần Linh Thước PTN CNSH Phân tử, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Gfp mã hóa cho protein GFP (Green Fluorescent Protein) có nguồn gốc từ sứa Aequorea Victoria protein thị sử dụng phổ biến, (i) biểu nhận biết dễ dàng thông qua khả phát huỳnh quang, (ii) không cần chất hay cofactor, (iii) ảnh hưởng đến protein mục tiêu dung hợp Nhiều biến thể GFP nghiên cứu cải tiến, đó, superfolder GFP với đặc tính có lợi gấp cuộn nhanh, cấu trúc ổn định phát huỳnh quang mạnh cho thấy khả ứng dụng lớn protein Tuy nhiên, supperfolder GFP phát triển Escherichia coli, việc ứng dụng phiên cho chủng chủ khác gặp nhiều khó khăn tần suất sử dung codon khả gấp cuộn sau dịch mã chủng chủ Trong nghiên cứu này, với mục tiêu phát triển phiên superfolder GFP phù hợp cho Bacillus subtilis, tiến hành tạo đột biến điểm gen gfp+ nhằm loại bỏ vị trí enzym cắt thơng dụng BamHI, XhoI giúp thuận lợi cho việc dịng hóa; đồng thời thay đổi trình tự codon Y39N, N105T, I171V cho tương thích với B subtilis Kết cho thấy phiên GFP sau đột biến cho khả phát huỳnh quang tốt vị trí enzyme cắt giới hạn nêu loại bỏ CLONING AND INVESTIGATING GFP (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) ALLOWING HIGHER EXPRESSION IN BACILLUS SUBTILIS Abstract Gfp coding for protein GFP (Green Fluorescent Protein) from the jellyfish Aequorea Victoria is the most popular indicator protein, due to (i) easy to recognize the expression through the fluorescent ability, (ii) without substrate or cofactor, (iii) less impact on the fusion protein target form A lot of modifications of GFP have been studied and improved, in which GFP superfolder containing beneficial properties such as rapid folding, structural stability and strong fluorescence showed great applicability However, GFP superfolder has just developed in Escherichia coli, it is difficult to apply this version for all other strains since codon usage and the folding ability of each host species In this study, with the aim of developing a version superfolder GFP which is suitable for Bacillus subtilis, we mutated in the gene gfp+ to delete general BamHI, XhoI restriction enzyme site for facilitating in cloning step; as well as modified Y39N, N105T, I171V codon that is compatible with B subtilis The results showed that the mutations have made the new version of GFP stronger in fluorescence and sequence of restriction enzymes have also been removed _ Email liên hệ: nhnam@hcmus.edu.vn IV-O-6.3 TẠO TẾ BÀO VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI BIỂU HIỆN TÁI TỔ HỢP ENZYM ACYL THIOESTERASE (ALT2) CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP CÁC 2-METHYLKETONE CHUỖI CARBON NGẮN VÀ TRUNG BÌNH Khuất Lê Uyên Vy, Nguyễn Thị Hồng Thương, Đỗ Phương Thảo Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt 2-Methylketone (trong báo cịn gọi tắt methylketone) nhóm hợp chất hữu có nhiều ứng dụng rộng rãi cơng nghiệp thực phẩm mỹ phẩm với vai trò chất tạo mùi, tạo hương Một số 2methylketone tìm thấy thực vật có vai trị chất dẫn dụ sinh học thuốc trừ sâu tự nhiên Đặc biệt, gần 2-methylketone xem nguồn hợp chất hứa hẹn cho viêc sản xuất lượng sinh học tương lai chúng có số kích nổ cetane cao, có tính ưa nước nhiệt độ nóng chảy thấp axit béo sử dụng nhiều sản xuất dầu diesel sinh học Thêm vào đó, methylketone có chuỗi carbon ngắn có nhiệt độ nóng chảy thấp so với methylketone chuỗi carbon dài Trong nghiên cứu này, tạo dòng biểu tế bào vi khuẩn Escherichia coli C41(DE3) gen mã hóa enzym acyl thioesterase (ALT2) phân lập từ Arabidopsis thaliana Khi biểu tái tổ hợp tế bào vi khuẩn E coli C41(DE3), enzyme ALT2 chủ yếu sử dụng chất 3-ketoacyl-ACP, hợp chất trung gian đường chuyển hóa axit béo diễn tế bào vi khuẩn, để tổng hợp 3-ketoacid 3-Ketoacid hợp chất không bền, tự decarboxyl hóa thành hợp chất 2-methylketone tương ứng có chiều dài chuỗi carbon ngắn nguyên tử carbon Các hợp chất 2-methylketone thoát từ dịch môi trường nuôi cấy thu nhận phân tích thành phần kỹ thuật vi chiết pha rắn (SPME) kết hợp sắc ký khí ghép khối phổ (GCMS) Kết cho thấy nuôi cấy cảm ứng với IPTG 0.25mM nhiệt độ oC 3.5 tế bào vi khuẩn E coli C41(DE3) biểu tái tổ hợp enzym ALT2 có khả sản sinh hợp chất 2-methylketone chuỗi carbon ngắn trung bình bao gồm 2-nonanone (9C), 2-undecanone (11C) 2-tridecanone (13C) CLONING AND EXPRESSION OF ACYL THIOESTERASE (ALT2) GENE IN ESCHERICHIA COLI FOR PRODUCING SHORT- AND MEDIUM-CHAIN 2METHYLKETONES Abstract 2-Methylketones (and here, for short, methylketones) are organic compounds that are more widely used in the food industry and cosmetics Some of methylketones found in plants act as pheromones and natural insecticides Recently, methylketones have been recognized as a strong candidate for the production of renewable energy as they have not only favourable cetane numbers but also lower hydrophilicity and melting points than fatty acids which have been used in biodiesel production In addition, short chain methylketones have much lower melting points than long chain methylketones In this study, we cloned and expressed in Escherichia coli C41(DE3) a gene for acyl thioesterase (ALT2) isolated from Arabidopsis thaliana The ALT2 enzyme could hydrolyze 3-ketoacyl-ACP (also called β-ketoacyl-ACP) intermediates in the fatty acid biosynthetic pathway into the corresponding 3-ketoacid The resulting 3-ketoacids are unstable compounds that will be decarboxylated to give rise to n-1 methylketones Methylketones released in the growth medium of E coli expressing ALT2 were analyzed by solid-phase microextraction (SPME) coupled to gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) The results showed that the E coli C41(DE3) cells expressing ALT2 recombinantly produced 2-nonanone (9C), 2-undecanone (11C) 2-tridecanone (13C) in the spent medium when induced with 0.25mM IPTG at 37oC for 3.5 hours _ Email liên hệ: khuatvy@gmail.com IV-O-6.4 TẠO DÒNG, BIỂU HIỆN VÀ TINH CHẾ PROTEIN INLA TÁI TỔ HỢP TRONG BACILLUS SUBTILIS Nguyễn Lê Tuấn Anh, Phan Thị Phượng Trang, Nguyễn Đức Hoàng PTN CNSH Phân tử, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Listeria monocytogenes vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm người động vật kèm theo triệu chứng nguy hiểm dẫn đến tử vong Do đó, chúng có tác hại lớn kinh tế sức khỏe cộng đồng Việc phát triển cơng cụ chẩn đốn, chẩn đốn huyết học nhằm phát sớm loài vi khuẩn thực phẩm trở thành nhu cầu cấp thiết quan tâm nghiên cứu Internalin A (InlA) kháng nguyên bề mặt L monocytogenes có hoạt tính gây đáp ứng miễn dịch cao nên nhận định có tiềm lớn việc sản xuất kháng thể đặc hiệu nhằm phát triển kit chẩn đoán dựa ELISA Tuy nhiên, hiệu thu nhận protein InlA trực tiếp từ L monocytogenes không cao, đồng thời khơng an tồn cho người thao tác, hạn chế việc ứng dụng rộng rãi protein Để giải vấn đề trên, tiếp cận hướng nghiên cứu sản xuất InlA tái tổ hợp chủng chủ an toàn Cụ thể, chúng tơi tiến hành tạo dịng chủng B subtilis có khả biểu protein InlA dạng dung hợp với His-tag cảm ứng IPTG, sử dụng hệ thống vector pHT Đây chủng chủ có nhiều đặc điểm sinh hóa di truyền tương đồng với L monocytogenes nên có nhiều thuận lợi biểu InlA Các điều kiện nuôi cấy cảm ứng biểu protein mục tiêu khảo sát Protein InlA tinh thu nhận sau tinh chế qua cột sắc kí lực chứa Ni2+ cắt bỏ đuôi dung hợp Kết tiền đề quan trọng cho việc thu nhận hiệu protein InlA nhằm phát triển công cụ chẩn đốn sớm L monocytogenes thực phẩm, góp phần làm giảm tác hại vi khuẩn gây cộng đồng CLONING, EXPRESSION AND PURIFICATION OF INLA IN BACILLUS SUBTILIS Abstract Listeria monocytogenes is the bacterium causing food poisoning in human and animal that relates to some dangerous and fatal symptoms Therefore, they enormously impact the economy as well as public health The development of diagnostic tools, especially the serological diagnosis, for early detection of this bacterium in food becomes urgent and contemporary concern Internalin A (InlA) is one of the surface proteins of L monocytogenes that serves as high-immune-response-activity antigen So, it could be considered to be high potential for the production of specific antibodies to develop diagnostic kits based on ELISA However, the protein acquisition directly from L monocytogenes was not effective and unsafe, thus limiting the broad application of this protein To solve this problem, we approached the research of recombinant InlA production in safer host strains Specifically, we have cloned a B subtilis strain that is capable of expressing InlA as a fusion protein with His-tag under the induction of IPTG, using the pHT vector system This is the host strain having many biochemical and genetic features alike L monocytogens, which is the advantage for InlA expression The induction conditions for the highest level of target protein expression was examined Purified InlA was obtained after purification via Ni2+ affinity chromatography and remove the fusion tag by TEV cleavage This result is an important prerequisite for efficient InlA acquisition to develop tools for early diagnosis of L monocytogenes in food, contributing to reduce the harms caused by this bacteria to the community _ Email liên hệ: nltanh@hcmus.edu.vn IV-O-6.5 XÂY DỰNG CHƯƠNG TRÌNH TỐI ƯU HĨA GENE CHO ESCHERICHIA COLI VỚI HÀM TÍNH ĐIỂM ĐƯỢC XÂY DỰNG DỰA TRÊN THUẬT GIẢI DI TRUYỀN Võ Trí Nam(1), Bùi Quang Huy(2), Trần Tuấn Anh(2), Đặng Thị Hằng(2), Nguyễn Mạnh Tùng(2), Vũ Quốc Hồng(2), Phạm Thế Bảo(2), Nguyễn Đình Thúc(2), Trần Linh Thước(2), Nguyễn Đức Hoàng(1) (1) TT KH&CN Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM (2) Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Trong ngành sản xuất protein tái tổ hợp, việc sử dụng trực tiếp gene tự nhiên để biến nạp vào hệ thống biểu làm giảm hiệu suất biểu protein mục tiêu khơng tương thích đặc điểm di truyền hệ thống biểu chủng chủ mang gene tự nhiên Nhiều chương trình tối ưu hóa gene đời GeneOptimizer, Jcat, Eugene để khắc phục khó khăn cách thay codon gene codon ưa thích với hệ thống biểu hiện, điều chỉnh tỉ lệ GC gene, hạn chế xuất motif trình tự Shine-Dalgarno, trình tự nhận biết enzyme cắt hạn chế, trình tự poly-nucleotide, polycodon Để thực tối ưu hóa đồng thời nhiều tiêu chí trên, chương trình sử dụng hàm tính điểm tổng kết hợp với trọng số quy định mức độ ảnh hưởng tiêu chí để đánh giá tìm trình tự tối ưu Tuy nhiên, trọng số sử dụng chưa khảo sát cách có hệ thống làm ảnh hưởng đến khả đánh giá mức độ biểu thực tế gene dẫn đến ảnh hưởng khả tối ưu hóa gene chương trình Trong báo này, chúng tơi đề xuất phương pháp để khảo sát trọng số cho hàm tính điểm cách áp dụng thuật giải di truyền liệu biểu gene thực tế Hàm tính điểm xây dựng thơng số khảo sát sử dụng để xây dựng chương trình tối ưu hóa gene cho E coli với tiêu chí tối ưu hóa: xu hướng sử dụng codon, thành phần GC trình tự nhận biết enzyme cắt giới hạn Kết thu hai trọng số ứng dụng vào xây dựng chương trình tối ưu hóa gene cho kết tối ưu hóa cao Jcat Eugene tiêu chí xu hướng sử dụng codon (CAI) Các kết từ chương trình kiểm tra thực tế trước phát triển tiếp hệ thống biểu khác CONSTRUCTING GENE OPTIMIZE PROGRAM FOR ESCHERICHIA COLI WITH SCORING FUNCTION BUILT UP FROM GENETIC ALGORITHM Abstract In producing recombinant protein, using natural genes which obtained from wild type organism usually lead to low effectiveness because of the differences in genetic characteristics between expression system and source of original gene Many gene optimize programs such as GeneOptimizer, Jcat, Eugene have been constructed to overcome these difficulties by replacing rare codons of expression system in natural gene by high frequency codons, adjusting GC content or removing undesirable DNA motifs such as Shine-Dalgarno sequence, restriction enzyme site, poly-nucleotide, poly-codon However, disadvantage of these programs is that the weights in scoring function which is used for optimizing many criteria at the same time are not surveyed systematically In this paper, we propose a new method to survey the weights for scoring function by using genetic algorithm on experiment data Scoring function will then be applied for constructing a gene optimize program for E.coli with codon usage, GC content and restriction site counted on As the result, we obtained two sets of weights for two scoring functions and successfully applied to construct a gene optimize program for E.coli which presented better than Jcas and GeneOptimizer in CAI optimize ability The optimize ability of this program will be evaluated by expressing the optimized gene along with wild type gene before developed in other expression systems _ Email liên hệ: vtnam@hcmus.edu.vn IV-O-6.6 SÀNG LỌC IN VITRO CÁC BIẾN DỊ CHỊU MẶN CỦA CÂY MÍA (SACCHARUM OFFICINARUM L.) BẰNG XỬ LÝ ETHYL METHANE SULPHONATE (EMS) TRÊN MÔ SẸO PHÁT SINH PHƠI Phạm Cao Khải, Đồn Thị Quỳnh Hương (1) Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao Tp HCM Tóm tắt Nhằm tạo giống mía có suất cao, phẩm chất tốt có khả chịu mặn, mơ sẹo giống mía (POJ28 8) xử lý hóa chất EMS (Ethyl methane sulphonate) chọn lọc môi bổ sung muối NaCl Môi trường cảm ứng tạo mô sẹo phát sinh phôi từ khoanh mía MS + 1,5 mg/l 2,4-D + 30 g/l sucrose + 8,0 g/l agar pH 5,8 Nồng độ EMS thích hợp gây biến dị mơ sẹo phát sinh phôi 40mM Nồng độ muối NaCl thích hợp cho q trình chọn lọc biến dị chịu mặn 120mM 160mM Mô sẹo xử lý nồng độ EMS 40mM chọn lọc theo quy trình thích hợp IN VITRO SCREENING OF SALT-TOLERANT VARIANTS OF SUGARCANE (SACCHARUM OFFICINARUM L.) BY TREATING ETHYL METHANE SULPHONATE (EMS) ON EMBRYOGNIC CALLUS Abstract To create sugarcane varieties with high yield, good quality and salt-tolerance, embryogenic callus of sugarcane (POJ2878) was treated with EMS (ethyl methane sulphonate) and that was selected on NaClsupplemented medium Embryogenic callus induction medium of young leaves of sugarcane was MS + 1.5 mg/l 2,4-D + 30 g/l sucrose + 8.0 g/l agar and pH 5.8 Proper concentration of EMS causing mutation on embryogenic callus was 40mM for hours Appropriate concentrations of NaCl for the selection process of salt-tolerant mutants was 120mM and 160mM Callus treated with EMS 40 mM for four hours and selected salt-tolerant variants of sugarcane according to the process was the most appropriate _ Email liên hệ: pcaokhai@gmail.com IV-O-6.7 TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN PROTEIN HGM-CSF (HUMAN GRANULOCYTEMACROPHAGE COLONY STIMULATING FACTOR) TRÊN TẾ BÀO CHO-K1 Ngơ Thị Kim Hằng, Trương Hồng Phụng, Trần Văn Hiếu Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt hGM-CSF nhân tố kích thích tạo cụm bạch cầu hạt đại thực bào Cytokine có phổ tác dụng rộng thể, từ tế bào tiền thân tạo máu, tế bào tua, đến tế bào trơn, tế bào biểu mô số tế bào thần kinh Sự glycosyl hóa, dù khơng đóng vai trị tương tác với thụ thể glycoprotein có tác dụng làm tăng độ bền hGM-CSF điều kiện in vivo Những sản phẩm hGM-CSF tái tổ hợp sử dụng rộng rãi chủ yếu sản xuất từ Echerichia coli Saccharomyces cerevisiae, loại tế bào chủ khơng có máy biến đổi sau dịch mã giống người Trong nghiên cứu này, gene hgm-csf mã hóa cho protein hGMCSF chuyển vào tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc (CHO-K1 cells) đánh giá khả biểu protein Trước tiên, gene chèn vào plasmid pcDNA3.1+ sau promoter CMV vị trí EcoRI XhoI Vector tái tổ hợp sáng lọc PCR khuẩn lạc với cặp mồi đặc hiệu, cắt hạn chế giải trình tự Vector tái tổ hợp sau trình kiểm tra đặt tên pcDNA-hGM Sau đó, vector tái tổ hợp đưa vào tế bào CHOK1 phương pháp biến nạp sử dụng cationic lipid nuôi chọn lọc kháng sinh Geneticin Kết cho thấy gene hgm-csf dịng hố vào vector pcDNA3.1+ vị trí EcoRI XhoI Mơi trường ni tế bào CHO-K1/pcDNA-hGM kích thích tăng sinh dòng tế bào TF-1, dòng tế bào sống phụ thuộc hGMCSF Như vậy, vector tái tổ hợp pcDNA-hGM cấu trúc thành cơng dịng tế bào mang gene tái tổ hợp CHO-K1/pcDNA-hGM biểu protein hGM-CSF có hoạt tính Đây sở cho bước khảo sát điều kiện thu nhận tinh chế hGM-CSF tiếp sau CLONING AND EXPRESSING HGM-CSF (HUMAN GRANULOCYTE-MACROPHAGE COLONY STIMULATING FACTOR) IN CHO-K1 CELL LINE Abstract _x000C_GM-CSF (granulocyte-macrophage colony stimulating factor) is a cytokine with wide affects, not only on hematopoietic precursor cells, dendritic cells, but also on smooth muscle cells, epithelial cells and even neurons Although, it does not play role in hGM-CSF biological functions, glycosylation enhances the protein in vivo stability Therapeutic drugs containing recombinant hGM-CSF are mostly produced in Escherichia coli or Saccharomyces cerevisiae, which not have post-translation modification mechanisms similar to humans In this present study, the gene encoding for human (h)GM-CSF was transfected into the Chinese Ovary Cell (CHO)-K1 and expression of the protein was evaluated Firstly, gene was inserted after early promoter CMV at EcoRI and XhoI restriction sites Recombinant vectors are screened by colony PCR, restriction enzyme digestion and sequencing The recombinant vector was termed pcDNA-hGM and was transfected into CHO-K1 cells using cationic lipid method Transformants was selected and maintained using antibiotic Geneticin The results showed that the gene encoding for hGM-CSF was indeed cloned into pcDNA3.1+ vector at EcoRI and XhoI restriction sites The conditioned medium collected from CHOK1/pcDNA-hGM stimulated the proliferation of TF-1, an hGM-CSF-dependent cell line In summary, the recombinant vector pcDNA-hGM was cloned and the recombinant cell line CHO-K1/pcDNA-hGM expressed active hGM-CSF This provides evidence for further investigation on isolation and purification of hGM-CSF afterward _ Email liên hệ: ntkhang@hcmus.edu.vn IV-O-6.8 TỔNG HỢP VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH SINH MIỄN DỊCH CỦA EPITOPE KHƠNG LIÊN TỤC ĐƯỢC DỰ ĐỐN TỪ KHÁNG NGUN HA VIRUS CÚM A/H5N1 Trần Thị Hồng Kim, Trần Linh Thước Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Nhằm phát triển vắc-xin có hiệu lực ổn định virus dễ biến đổi virus cúm A/H5N1, sử dụng công cụ Tin Sinh học để dự đoán epitope bảo tồn từ kháng nguyên virus dùng làm vật liệu để phát triển vắc-xin đa giá phòng chủng virus cúm Với cách tiếp cận này, chúng tơi dự đốn epitope khơng liên tục nhận diện tế bào B, peptide gồm 14 axit amin, chứa axit amin gần cấu trúc vùng bảo tồn kháng nguyên HA virus cúm A/H5N1 Để làm tăng tính sinh miễn dịch đặc hiệu epitope tế bào B này, sử dụng kỹ thuật tái tổ hợp gen với chủng chủ vi khuẩn Escherichia coli để tổng hợp epitope tế bào B dạng protein có trình tự peptide lặp lại lần dung hợp với kháng nguyên flagellin H:1,2 Salmonella Typhimurium Tính sinh miễn dịch dạng epitope tổng hợp hóa học epitope tái tổ hợp tổng hợp E coli kiểm tra cách gây miễn dịch chuột Bằng phương pháp ức chế ngưng kết hồng cầu (Hemagglutination inhibition - HI), chứng minh hai loại kháng huyết thu nhận từ chuột tiêm epitope tái tổ hợp dạng dung hợp với kháng nguyên flagellin H:1,2 S Typhimurium chuột tiêm epitope tổng hợp hóa học có khả nhận diện ức chế đặc hiệu hoạt tính ngưng kết hồng cầu kháng nguyên virus cúm A/Vietnam/CL26/2004(H5N1) A/H5N1/Chicken13/Vietnam/LA/2006 phân lập từ bệnh phẩm người gà Việt Nam SYNTHESIS AND IMMUNOGENICITY EVALUATING OF A DISCONTINOUS B-CELL EPITOPE PREDICTED FROM INFLUENZA VIRUS A/H5N1 HA ANTIGEN Abstract To develop vaccine with stable efficiency against easily transforming virus such as influenza H5N1 virus, bioinformatic tools have been used to predict conserved epitopes from viral antigens to be used as materials for the development of polyvalent vaccine against this virus Using this approach, we have successfully predicted one discontinuous B-cell epitope, a peptide of 14 aminoacids on conserved domains of HA antigen from H5N1 influenza A virus In this sudy, we report results of the preparation of this discontinuous B-cell epitope as the recombinant fusion form with H:1,2 flagellin from Salmonella Typhimurium to increase the immunogenicity of this epitope using genetic manipulating techniques with Escherichia coli as host cell The immunogenicity of the chemically synthesized predicted epitope and the recombinant epitope was examined by immunization of each of these epitopes to mice Using hemagglutination inhibition (HI) method, we successfully demonstrated that both anti-sera from mice immunized either with chemically synthesized peptide or with recombinant flagellin H:1,2 fused epitope could recognize and inhibit the agglutination of inactivated influenza H5N1 virus strains, such as A/H5N1/Chicken13/Vietnam/LA/2006 and A/Vietnam/CL26/2004 (H5N1) isolated from infected chicken and human in Vietnam _ Email liên hệ: tthkim@hcmus.edu.vn IV-O-7.1 STAGE-SPECIFIC APOPTOSIS BY IONIZING IRRADIATION DURING Drosophil OOGENESIS Eun-Mi Lee and Young-Han Song Isong Institute of Life Science, Hallym University, Anyang, Gyeonggi-do, Republic of Korea Abstract Normal metazoan cells undergo apoptosis upon ionizing radiation (IR) treatment that induces DNA double strand breaks The signal transduction pathway of this response has been studied mostly in mitotically dividing somatic cells In response to the same dose of irradiation, some cells are resistant to radiation induced apoptosis Mechanisms underlying distinct cell fates upon IR is also mostly studied in somatic cells In order to understand radiation response during germ cell development, we utilized Drosophila oogenesis as a model system Radiation response in Drosophila has been studied mostly in larval somatic cells and requires Drosophila Chk2, p53, and proapoptotic genes such as reaper, hid, and grim Drosophila ovary consists of germarium and developing egg chambers containing germline and somatic cells Interestingly IR-induced apoptosis was specifically increased in the germarium region where pro-oocytes are undergoing meiotic recombination Similar to somatic cells, IR-induced apoptosis was not increased in Chk2, p53, and hid mutants In order to understand the mechanism of stage-specific apoptosis following IR, we tested the phosphorylation of histone H2Av, one of the first signaling events after IR Phosphorylation of histone H2Av was increased in germarium region and 3, suggesting that the downstream events might occur stage-specific way Next, we tested the level of hid transcripts after IR and found that it was uniformly increased in the whole germarium Since Hid is known to induce apoptosis by activating caspase, we tested caspase activation Active cleaved caspase staining showed that caspase activation occurs only in region of the germarium These results and previous report showing that MAPK suppresses apoptosis by inhibiting Hid suggest that stage-specific apoptosis by IR may occur by regulation of Hid function In summary, we found that Chk2, p53, and hid dependent apoptosis was induced in irradiated Drosophila ovary and the apoptosis occurs in stage-specific way probably by regulation of Hid protein _ Email liên hệ: yhsong@hallym.ac.kr IV-O-7.2 TRAIL-INDUCED APOPTOSIS OF GASTRIC CANCER CELLS Hang Thi Thuy Bui, Nak-Mi Song, Sooho Lee and Dongchul Kang Ilsong Institute of Life Science, Hallym University, Anyang, Kyonggi-do, 431-060, Republic of Korea Abstract TRAIL is known to induce apoptosis preferentially in cancer cells with little to no toxicity to normal cells, which has prompted research into its application to cancer treatment However, sensitivity to TRAIL-mediated apoptosis is widely divergent depending on type of cancer and cancer cells The TRAIL sensitivity of four gastric cancer cell lines was ranked in the following order: SNU-16 ≈ SNU-620 > SNU-5 >> SNU-1 Examination of the expression of signaling components in TRAIL-mediated apoptosis revealed that both mRNA level and surface expression of DR4 were critically decreased in SNU-1 compared to the other ones Bid cleavage and XIAP degradation were much greater in SNU-16 and SNU-620 than in SNU-5 and SNU-1, while expression and degradation of FLIP upon TRAIL treatment was independent of TRAIL sensitivity Differential response to TRAIL was further investigated in an extended panel of gastric cancer cell lines including SNU-216, 484, 601, 638, 668 and 719 Expression of apoptosis-related genes was higher in TRAIL-sensitive cells than in TRAIL-resistant cells in general TRAIL response in these cells can be enhanced by co-treatment with doxorubicin, daunorubicin and bortezomib Pretreatment of TRAIL did not escalate either daunorubicin- or bortezomib-induced cell death Daunorubicin pretreatment was effective in enhancing TRAIL-induced cell death Bortezomib could not potentiated TRAIL response by pretreatment, but by co-treatment Daunorubicin appeared to prime the gastric cancer cells to respond to TRAIL treatment In summary, lack of death receptor expression emerged as an indicator of TRAIL response of the gastric cancer cells However, since TRAIL-induced apoptosis requires orchestrated activation of multiple signaling components, caution should be taken in ruling out the other components from the possible list of indicators conclusively Cooperation of TRAIL with conventional and target-based cancer therapeutics overcame TRAIL and/or drug-resistance and increased efficacy of the medications in the gastric cancer cells, which holds promise in the treatment of the disease _ Email liên hệ: dckang@hallym.ac.kr IV-O-7.3 TÁC ĐỘNG GÂY BIỆT HOÁ TẾ BÀO GỐC UNG THƯ VÚ CỦA 5-AZA-2’DEOXYCYTIDINE Trịnh Vạn Ngữ, Phan Lữ Chính Nhân PTN Nghiên cứu Ứng dụng Tế bào gốc, Trường ĐH KHTN, ĐHQG-HCM Tóm tắt Tế bào gốc ung thư vú với protein bề mặt CD44+/CD24- chứng minh nguyên nhân hình thành khối u, kháng thuốc, di tái phát khối u Làm biệt hoá tế bào gốc ung thư chiến lược tiềm điều trị ung thư vú 5-Aza-2’-deoxycytidine (DAC) loại thuốc ngoại di truyền (epigenetic) sử dụng điều trị số bệnh nan y có ung thư Nghiên cứu nhằm đánh giá khả gây biệt hoá tế bào gốc ung thư vú 5-Aza-2’-deoxycytidine Tế bào xử lý với DAC đánh giá tăng trưởng, tính nhạy cảm với thuốc RTCA Hiệu gây biệt hoá tế bào gốc ung thư vú đánh giá Flow cytometry biểu gen real-time PCR Kết cho thấy DAC làm giảm tăng trưởng tế bào 15-23% Tỉ lệ quần thể tế bào gốc ung thư vú giảm 3-21% Việc kết hợp DAC với thuốc kháng u Doxorubicin Tamoxifen cho thấy tế bào nhạy cảm 1.48 lần DAC làm tái biểu gen p53 làm tăng biểu gen BRCA1, BRCA2, P15, P16 Qua nghiên cứu kết luận 5-Aza-2’deoxycytidine có khả làm biệt hố quần thể tế bào gốc ung thư vú làm tăng hiệu thuốc kháng u EFFECTS OF 5-AZA-2'DEOXICITIDINE ON DIFFERENTIATION OF BREAST CANCER STEM CELLS Abstract Breast cancer stem cells (BCSCs), characterized by the CD44+/CD24-/low marker, are demonstrated that the cause of tumor growth, multiple drug resistance, metastases, and recurrence of tumor Inducing the differentiation of Cancer stem cell is the potential strategy for cancer treatment Being used to treat some malignant disease involves cancers, 5-Aza-2’-deoxycytidine (DAC) is an epigenetic drug which based on demethylation In this study, 5-Aza-2’-deoxycytidine was applied at 1.25µm, 2.5 µm, µm, 10 µm and cell proliferation, drug sensitive on the cell when combines DAC with other anti-cancer drug was measured using RTCA system The effect of 5-Aza-2’-deoxycytidine on the BCSCs marker was measured by flow cytometry fluorescence and gene expression of tumor suppressor genes such as BRCA1, BRCA2, P16, P53, PTEN was an analysis by real-time PCR Treatment with 5-Aza-2’-deoxycytidine reduced proliferation capacity by 15-23% and resulted in 2.97-21.34% down-regulation of breast cancer stem cell marker (CD24, CD44) Drug-sensitive of BCSCs increase when combines DAC with Doxorubicin, Tamoxifen are 1.48 and 3.7 fold At the genes expression level, the results show a re-expression of P53, and increasing of expression of P15, P16, BRCA1, BRCA2 It is concluded that 5-Aza-2’-deoxycytidine reduces breast cancer cell survival and induces differentiation of stem/progenitor cell subpopulations with in breast cancer cell lines and increases effectiveness of antitumor drugs _ Email liên hệ: tvngu@hcmus.edu.vn IV-O-7.4 SỰ METHYL HÓA VƯỢT MỨC TẠI ĐẢO CpG THUỘC VÙNG PROMOTER CỦA GEN GSTP1 LÀ MỘT ĐẶC TÍNH ĐẶC TRƯNG CỦA BỆNH UNG THƯ VÚ NGƯỜI VIỆT NAM Trương Kim Phượng1, Lao Đức Thuận1, Đoàn Thị Phương Thảo2, Lê Huyền Ái Thúy1* Khoa Công nghệ Sinh học, Trường ĐH Mở Tp HCM Khoa Y, Trường ĐH Y Dược Tp HCM Tóm tắt Nhu cầu việc có dấu chứng sinh học (biomarker) nhằm ứng dụng việc tiên lượng, chẩn đoán sớm, dự đoán và/hoặc theo dõi điều trị xác định tính tái phát của bệnh ung thư đòi hỏi cấp thiết nhân loại Một dấu chứng sinh học giới tập trung nghiên cứu, dựa tính chất methyl hóa bất thường đảo CpG thuộc vùng promoter gen có liên quan đến hình thành phát triển bệnh ung thư Trong nghiên cứu này, gen đích lựa chọn GSTP1 (Glutathion-S-transferase pi gene) với chức đặc biệt quan trọng giải độc (detoxification) Với chức mà gen GSTP1 (với thơng số methyl hóa bất thường) chọn thử nghiệm lâm sàng nhằm dự đốn tính đáp ứng với dòng thuốc giải methyl nhiều loại ung thư, có ung thư vú, cho kết khả quan Chúng tơi tập trung khảo sát tính chất methyl hóa bất thường gen GSTP1 kỹ thuật MSP (Methylation specific PCR) từ 115 mẫu sinh thiết mô vú có 95 mẫu bệnh nhân mắc ung thư vú 20 mẫu mơ vú lành tính (của bệnh nhân mắc bệnh khác vú mà ung thư) bệnh viện Đại học Y Dược, TP HCM cung cấp, ghi nhận 41 95 mẫu mơ ung thư (43.2%) bị methyl hóa bất thường khơng có trường hợp phát có methyl hóa 20 mẫu mơ lành tính (p