Nghiên cứu tách kháng nguyên bề mặt glycoprotein của trypanosoma evansi, ứng dụng trong chẩn đoán bệnh tiên mao trùng ở trâu bò tại huyện phổ yên tỉnh thái nguyên bằng phản ứng ELISA

1 I HC THI NGUYấN TRNG I HC NễNG LM TRN C HNH NGHIấN CU TCH KHNG NGUYấN B MT GLYCOPROTEIN CA TRYPANOSOMA EVANSI, NG DNG TRONG CHN ON BNH TIấN MAO TRNG TRU Bề TI HUYN PH YấN TNH THI NGUYấN BNG PHN NG ELISA Chuyờn ngnh: TH Y Mó s : 60 - 62 - 50 LUN VN THC S KHOA HC NễNG NGHIP Hng dn khoa hc: PGS.TS NGUYN QUANG TUYấN Th.S NGUYN TH GIANG THANH THI NGUYấN - 2008 LI CAM OAN Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu tụi trc tip thc hin cựng vi s cng tỏc, giỳp ca PGS.TS Nguyn Quang Tuyờn v Th.S Nguyn Th Giang Thanh ti Vin Thỳ y Quc gia Cỏc s liu, hỡnh nh v kt qu lun l trung thc v cha tng c cụng b bt k mt cụng trỡnh nghiờn cu no khỏc Tụi xin m bo rng cỏc thụng tin, trớch dn lun ó c ch rừ ngun gc Tỏc gi lun Trn c Hnh LI CM N Tụi xin chõn thnh cm n s giỳp ca cỏc thy cụ giỏo Khoa Sau i hc - Trng i Hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn, B mụn Ký Sinh Trựng - Vin Thỳ Y Quc gia cựng cỏc thy cụ giỏo ó ging dy v giỳp tụi sut quỏ trỡnh hc v nghiờn cu c bit, tụi xin by t lũng bit n PGS.TS Nguyn Quang Tuyờn v Ths Nguyn Th Giang Thanh ó tn tỡnh hng dn, giỳp tụi hon thnh lun ny Xin chõn thnh cm n gia ỡnh, anh em, bn bố ng nghip ó to iu kin v ng viờn giỳp tụi sut quỏ trỡnh nghiờn cu Thỏi Nguyờn, thỏng nm 2008 Tỏc gi lun Trn c Hnh MC LC Phn 1: T VN Phn 2: TNG QUAN TI LIU 2.1 Tiờn mao trựng (T Evansi) v bnh tiờn mao trựng 2.2 Mt s c im ca tiờn mao trựng (Trypanosoma evansi) 2.3 Bnh Tiờn Mao Trựng (Trypanosomiasis) 2.4 Triu chng v bnh tớch bnh Tiờn mao trựng 13 2.5 Cỏc phng phỏp chn oỏn bnh TMT 14 2.5.1 Cỏc phng phỏp ký sinh trựng hc .14 2.5.2 Cỏc phng phỏp huyt hc 17 2.5.3 Phng phỏp sinh hc phõn t (PCR - Polymerase Chain Reaction) 19 2.6 Tỡnh hỡnh nghiờn cu TMT v bnh TMT v ngoi nc .19 2.6.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii 19 2.6.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu nc 22 Phn 3: NI DUNG, NGUYấN LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 24 3.1 Ni dung ng hiờn cu 24 3.2 i tng nghiờn cu 24 3.3 a im nghiờn cu 25 3.4 Thi gian nghiờn cu 25 3.5 Nguyờn liu 25 3.5.1 ng vt thớ nghim .25 3.5.2 Nguyờn liu sinh hc 25 3.6 Mỏy v cỏc dng c phũng thớ nghim 26 3.7 Hoỏ cht v dung dch .26 3.8 Phng phỏp nghiờn cu 30 3.8.1 Phng phỏp ly mu .30 3.8.2 Tiờm truyn TMT qua chut bch theo phng phỏp thng quy 30 3.8.3 Gõy nhim bnh TMT cho bờ, nghộ phũng thớ nghim 31 3.8.4 Tỏch TMT t mỏu chut gõy nhim theo phng phỏp ca Lanham 31 3.8.5 Tỏch khỏng nguyờn b mt VSG ca TMT 32 3.8.6 o protein tng s s dng quang ph k cú di bc súng rng .32 3.8.7 Phng phỏp chy in di trờn gel Poly Acrylamide 12% 33 3.8.8 Thit lp quy trỡnh chn oỏn huyt hc ELISA bnh TMT dựng khỏng nguyờn b mt 34 3.9 Phng phỏp x lý s liu .34 Phn 4: KT QU V THO LUN 35 4.1 Kt qu nghiờn cu phũng thớ nghim 35 4.1.1 Kt qu tiờm truyn Tiờn mao trựng cho ng vt thớ nghim 35 4.1.2 Kt qu tỏch khỏng nguyờn b mt glycoprotein t Tiờn mao trựng phõn lp c 40 4.1.3 Thit lp phn ng chn oỏn dch hc ELISA cho bnh TMT trờn trõu, bũ .43 4.2 Kt qu nghiờn cu bnh tiờm mao trựng Ph Yờn - Thỏi Nguyờn 46 4.2.1 Kt qu thu thp mu huyt a phng 46 4.2.2 Kt qu chn oỏn bnh TMT cho trõu, bũ huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn bng phng phỏp huyt hc ELISA 49 4.2.3 Kt qu iu tr bnh TMT trõu bũ ti Ph Yờn 55 Phn 5: KT LUN V NGH 58 5.1 Kt lun .58 5.2 ngh 59 TI LIU THAM KHO 60 DANH MC CC BNG BIU Bng 4.1 Tng cng, n nh v nhõn ging TMT trờn chut bch 36 Bng 4.2 Cỏc triu chng lõm sng xut hin bờ, nghộ sau gõy nhim 37 Bng 4.3 Bng theo dừi nhit v s xut hin TMT mỏu bờ 38 Bng 4.4 Bng theo dừi nhit v s xut hin TMT mỏu nghộ 39 Bng 4.5 Kt qu tỏch khỏng nguyờn b mt (VSG) 41 Bng 4.6 Kt qu o hm lng protein ca khỏng nguyờn b mt .42 Bng 4.7 Xỏc nh pha loóng ca khỏng nguyờn, huyt v Conjugate .43 Bng 4.8 Bng thit lp giỏ tr ngng ca bũ, trõu .45 Bng 4.9 ỏnh giỏ mu huyt dng v õm tớnh cu huyt xột nghim 45 Bng 4.10 Kt qu thu thp mu huyt trõu v bũ cỏc xó thuc huyn Ph Yờn .47 Bng 4.11 ỏnh giỏ th trng, sc kho ca trõu, bũ ly mu 48 Bng 4.12 Kt qu ly mu theo la tui bờ nghộ v trõu bũ 49 Bng 4.13 Kt qu chn oỏn bnh TMT bng phng phỏp ELISA huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn 49 Bng 4.14 Kt qu t l nhim TMT ca tng xó huyn Ph Yờn .51 Bng 4.15 Kt qu t l trõu bũ huyn Ph Yờn nhim TMT theo cỏc yu t th trng .52 Bng 4.16 Kt qu t l nhim TMT trõu bũ thuc huyn Ph Yờn theo la tui 53 Bng 4.17 Kt qu iu tr bnh TMT trõu, bũ ti huyn Ph Yờn Thỏi Nguyờn 55 Bng 4.18 Kt qu s dng thuc phũng bnh ký sinh trựng ng mỏu cho trõu, bũ Ph Yờn - Thỏi Nguyờn 56 CC T VIT TT TRONG LUN VN àg àl l ml mg g mA b Vol C VSG VATs Da kDNA g-RNA GP PLC DA 52 SDS - PAG PBS PBST 0.05 PSG LSA FA WH TMT T evansi NST Microgam Microlitre Littre Mililittre Miligam Gam Miliampe Bite Voltage Degree centigrate Variant surface glycoprotein Variant Antigenic Types Dalton Kinetoplast Doxyribose Nucleic Acid Guide Ribonucleic acid Glycosyl- phosphatidyl-nositol Phospholipase C Dithylaminoethyl- 52-cellulose Sodium Dodecyl Sulphate Poly Acrylamine Gel lectrophoresis Phosphate Saline Buffer Phosphate Saline Buffer - Tween 0.05% Phosphate Saline glucose buffer nzyme Linked mmunosorbent Assay Food and Agricultre ganization World Health ganization Tiờn mao trựng Trypanosoma evansi Nguyờn sinh cht Phn T VN Trong nhng nm gn õy, cựng vi s phỏt trin ca nn kinh t quc dõn, ngnh chn nuụi núi chung v ngnh chn nuụi trõu bũ núi riờng ó cú nhng bc phỏt trin, ó tr thnh ngnh sn xut quan trng gúp phn cung cp thc phm cho xó hi v tỏc ng tớch cc nõng cao i sng cho ngi dõn Huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn ngnh chn nuụi trõu bũ ó thc s tng trng khỏ mnh vi tc tng bỡnh quõn - 9%/ nm, tng n trõu bũ t trờn 2,7 Ngi dõn õy chn nuụi trõu bũ ngoi mc ớch ỏp ng nhu cu cy kộo sn xut nụng nghip, cũn cung cp thc phm cú giỏ tr cho xó hi nh tht, sa ng thi cung cp ging cho cỏc vựng lõn cn phỏt trin àn trõu, bũ mt cỏch bn vng, cụng tỏc thỳ y cng phi c chỳ trng thụng qua cụng tỏc phũng chng bnh truyn nhim cng nh bnh ký sinh trựng Hin nay, cỏc bnh vi trựng v siờu vi trựng ó c phn no phũng nga bng cỏc loi vc xin nhng bnh ký sinh trựng gp nhiu khú khn khụng cú vc xin phũng cho nờn cụng tỏc phũng bnh mang tớnh quan trng, phc hn da trờn cỏc yu t dch t hc, chn oỏn sm hn ch bnh xy gõy thit hi kinh t cho ngnh chn nuụi Mt nhng bnh ký sinh trựng ph bin gõy thit hi cho ngnh chn nuụi trõu, bũ l bnh tiờn mao trựng (Trypanosomasis) gõy bi loi n bo Trypanosoma, gia sỳc mc bnh u suy yu dn v gim sc khỏng, rt d mc cỏc bnh truyn nhim v mt s bnh khỏc ó cú nhiu cụng trỡnh nghiờn cu v bnh tiờn mao trựng (TMT) trõu bũ trờn th gii v Vit Nam, phn ln cỏc tỏc gi u trung nghiờn cu cỏc bin phỏp chun oỏn phỏt hin bnh sm kp thi a nhng phng phỏp phũng v tr bnh hiu qu Nhng TMT cú c tớnh luụn thay i khỏng nguyờn b mt ln trỏnh s ỏp ng dch ca vt ch nờn ó gõy khụng ớt khú khn cho cụng tỏc chn oỏn bnh Thỏi Nguyờn l mt tnh a dng v a lý bao gm nhng vựng t bng phng, vựng i v vựng nỳi ỏ, thung lng v rng xen k ú l iu kin thun li cho cỏc loi cụn trựng phỏt trin ú cú rui mũng l vt ch trung gian truyn bnh TMT Huyn Ph Yờn thuc tnh Thỏi Nguyờn l mt huyn nm vựng dch t ca bnh TMT, qua thc t theo dừi tỡnh hỡnh dch bnh trờn n trõu bũ, chỳng tụi thy bnh TMT trõu bũ xy khỏ ph bin, gõy nhiu thit hi cho ngi chn nuụi Do vy chỳng tụi ó tin hnh nghiờn cu ti: Nghiờn cu tỏch khỏng nguyờn b mt glycoprotein ca Trypanosoma evansi, ng dng chn oỏn bnh tiờn mao trựng trõu bũ ti huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn bng phn ng ELISA" Mc ớch ca ti Nghiờn cu tỏch khỏng nguyờn b mt Glycoprotein ca chng T.evansi Xỏc nh thnh phn v c tớnh khỏng nguyờn ca khỏng nguyờn b mt T.evansi Thit lp quy trỡnh chn oỏn huyt hc ELISA ng dng quy trỡnh ELISA chn oỏn bnh TMT cho trõu, bũ ti huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn iu tr trõu, bũ cú khỏng th khỏng T evansi huyt ó phỏt hin Phn TNG QUAN TI LIU 2.1 TIấN MAO TRNG (T EVANSI) V BNH TIấN MAO TRNG * Phõn loi ca T evansi Theo Kashiwazaki, (1998) [40], T evansi c xp theo h thng phõn loi sau Ngnh: Protozoa Phõn ngnh: Sarcomastigophora Lp: Zoomastigophora B: Kinetoplastida Phõn b: Trypanosomatina H: Trypanosomatidae Ging: Trypanosoma Loi: Trypanosoma evansi 2.2 MT S C IM CA TIấN MAO TRNG (TRYPANOSOMA EVANSI) c im hỡnh thỏi T evansi c xp vo loi n bo, c th ch l mt t bo, chiu di dao ng t 18 - 34àm, chiu rng t 1.5 2àm Ton b c th cú hỡnh sut ch mnh hoc hỡnh thoi, cui thõn nhn Tiờn mao trựng (TMT) cú mt roi chy dc theo chiu di ca c th, bt ngun t th Kinetoplast v di Hình Hình thái tiên mao trùng máu động vật nhiễm bệnh 55 4.2.3 Kt qu iu tr bnh TMT trõu bũ ti Ph Yờn Bng 4.17 Kt qu iu tr bnh TMT trõu, bũ ti huyn Ph Yờn Thỏi Nguyờn Yu t khỏc S trõu bũ iu Tờn Liu lung Cỏch dựng tr thuc Trypadium Bio-Zen 12 Azidin Tng s 29 g/kg th trng/ngy ngy Tiờm tnh mch Tiờm tnh mch Tiờm tnh mch Hi phc, Hi phc, ht ht biu hin biu hin lõm sng sau lõm sng sau 30 ngy Hi phc 60 ngy Hi T l phc (%) Kim tra Phn TMT ng thuc mỏu 0,01g 100 0,05g 11 91,6 0,05g 0 0 Tt c cỏc thuc trờn u c tiờm tnh mch, theo dừi sau tiờm thuc, chỳng tụi thy khụng cú trõu bũ no b phn ng thuc, hu ht gia sỳc sau iu tr u cú kt qu kh quan, a s trõu, bũ c ci thin v sc kho rt nhiu, cỏc triu trng lõm sng ht dn i vi thuc Trypadium chỳng tụi tiờm cho trõu bũ cú phn ng dng tớnh vi liu trung bỡnh 0,01g/ kg th trng ngy, sau 60 ngy kim tra thy c u hi phc v ht cỏc triu chng lõm sng, ly huyt chn oỏn ELISA khụng cũn phn ng dng tớnh t t l bnh 100% i vi thuc Bio-Zen tiờm iu tr cho 12 trõu bũ vi liu 0,05g/kg th trng ngy, sau thỏng cho kt qu 11/12 trõu bũ bỡnh phc chim 91,6%, sau thỏng ly huyt chn oỏn ELISA cú trõu, bũ cũn phn ng dng tớnh chim 8,4% i vi thuc Azidin tiờm iu tr cho trõu bũ vi liu 0,05g/kg th trng ngy, sau thỏng cú c trõu bũ bỡnh phc th trng v khụng cũn trõu bũ no cú phn ng dng tớnh Cũn mt trõu, bũ gi nguyờn th trng cú 56 th hin tng khỏng thuc hoc cỏc nguyờn nhõn khỏc nờn iu tr khụng cũn hiu qu thi im hin ti thỡ thuc Trypadium cho hiu qu iu tr bnh TMT trõu, bũ ti huyn Ph Yờn cao nht - Nhúm II: Trong s 47 trõu bũ cú phn ng dng tớnh nhng ớt cú biu hin triu chnh lõm sng, hoc cú biu hin triu chng khụng in hỡnh ca bnh TMT, chỳng tụi tin hnh tiờm phũng cho trõu bũ bng hai loi thuc sn cú trờn th trng l Azidin v Bio-Zen, tiờm mt mi nht v thy c kt qu t hin bng sau: Bng 4.18 Kt qu s dng thuc phũng bnh ký sinh trựng ng mỏu cho trõu, bũ Ph Yờn - Thỏi Nguyờn S trõu bũ tiờm Tờn thuc phũng s dng Khụng Cỏch dựng Liu dựng Hi phc g/kg TT sau 30 ngy Bio-zen 19 Tiờm Khụng Hi phc sau 60 l T (%) Phn ng thuc ngy 0,025 10,53 0,025 11 9,23 bp Azidin 26 Tiờm bp Tng s 47 Qua bng trờn chỳng ta thy s 47 trõu, bũ cú phn ng dng tớnh thỡ cú 19 trõu bũ c tiờm phũng bng thuc Bio-Zen tiờm bp vi liu trung bỡnh 0,025g/kg th trng, hu ht s trõu bũ c tiờm phũng c bỡnh phc dn, gim v ht dn cỏc triu trng lõm sng, sau 30 ngy ly mu chn oỏn ELISA cú trõu, bũ cú phn ng dng tớnh chim 10,53% i vi thuc Azidin tin hnh tiờm phũng 26 mu, tiờm bp vi liu trung bỡnh l 57 0,025g/kg th trng, sau 30 ngy ly huyt chn oỏn ELISA cú trõu, bũ cú phn ng dng tớnh chim 9,23% Qua ú thy c rng thuc BioZen phũng bnh hiu qu hn thuc Azidin, nhiờn hiu qu ú khụng khỏc nhiu Vn cũn mt vi cỏ th trõu, bũ gi nguyờn th trng cú th cỏc nguyờn nhõn khỏc ngoi bnh ký sinh trựng ng mỏu hoc hin tng khỏng thuc 58 Phn KT LUN TN TI V NGH 5.1 Kt lun Bnh Tiờn mao trựng l mt bnh ký sinh trựng ng mỏu Trypanosoma evansi gõy nờn vi s phõn b a lý rng ch yu cỏc nc cú khớ hu nhit i Huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn l vựng nỳi v trung du ni cú mt ca cỏc loi rui mũng, vecto truyn bnh Vic phũng bnh Tiờn mao trựng ch yu da vo cụng tỏc chn oỏn sm kt hp vi tiờm thuc phũng bnh ti: Nghiờn cu tỏch khỏng nguyờn b mt glycoprotein ca Trypanosoma evansi, ng dng chun oỏn bnh tiờn mao trựng trõu bũ ti huyn Ph Yờn tnh Thỏi Nguyờn bng phn ng ELISA" c thc hin ti b mụn Ký sinh trựng - Vin Thỳ y kt hp vi ng dng chn oỏn bnh TMT ti a phng, huyn Ph Yờn- Thỏi Nguyờn ó cú nhiu kt qu tt, thụng qua quỏ trỡnh thc hin ti ny chỳng tụi cú nhng kt lun sau: - Tiờm truyn tip i ging TMT cho chut bch tng cng kh nng trỡ ging phũng thớ nghim - Gõy nhim bnh TMT thnh cụng trờn bờ, nghộ thc nghim vi nhng biu hin triu chng in hỡnh ca bnh: St hi quy, au mt, gy yu - Tỏch TMT t mỏu ca ng vt thớ nghim theo phng phỏp ca Laham, 1970 - Tỏch thnh cụng khỏng nguyờn b mt glycoprotein v xỏc nh trng lng phõn t ca protein 55 kDa, thnh phn chớnh ca khỏng nguyờn - Thit lp c quy trỡnh chn oỏn ELISA dựng khỏng nguyờn b mt (VSG) chn oỏn bnh TMT cho trõu, bũ vi: + Nng khỏng nguyờn ph a: g/ml + Nng huyt pha loóng: 1/400 59 + Nng pha loóng conjugate: 1/40000 - ng dng chn oỏn xỏc nh t l nhim TMT trờn trõu, bũ huyn Ph Yờn - Thỏi Nguyờn ú trõu nhim: 15,06%; bũ: 17,48% T l nhim TMT liờn quan ti th trng sc kho v tui ca gia sỳc - Trõu, bũ cú hm lng khỏng th khỏng TMT mỏu kt hp vi th trng c th kộm ó c tiờm thuc ký sinh trựng ng mỏu, kt qu hi phc sc kho tt 5.2 Tn ti v ngh - Tn ti + Do thi gian nghiờn cu ngn, phm vi ly mu cũn hp, vỡ vy kt qu nghiờn cu ch thc hin c quy mụ nh + Do iu kin trang thit b phũng thớ nghim v trỡnh chuyờn mụn cũn hn ch nờn kt qu nghiờn cu cha mang tớnh c trng cho quy mụ rng - ngh Qua kt qu nghiờn cu ca ti, chỳng tụi cú nhng ngh sau: + Cn tip tc nghiờn cu ti vi quy mụ rng, phỏt trin ti ng dng vo thc tin sn xut + Tip tc ng dng phng phỏp chn oỏn huyt hc ELISA cho n trõu, bũ cỏc huyn khỏc tnh Thỏi Nguyờn nhm ỏnh giỏ thc trng bnh TMT ng thi nghiờn cu thờm v dch t bnh hc ca bnh TMT vi c thự riờng ca tnh Thỏi Nguyờn xõy dng k hoch phũng bnh cú hiu qu + Nõng cao nhn thc ca ngi dõn v bnh TMT cú k hoch chm súc n trõu, bũ mt cỏch hp lý 60 TI LIU THAM KHO Ti liu Ting Vit Phan Vn Chớnh (1999), Kt qu iu tra bnh Tiờn mao trựng vt nuụi KHKTTY (s3) Nguyn Quc Doanh (1999), Mt s c tớnh sinh hc ca T.evansi (Steel, 1885), bnh hc chỳng gõy nờn, quy trỡnh bo qun v s dng Trypanosoma evansi chn oỏn bnh TMT, Lun ỏn Tin s Nụng Nghip on Vn Phỳc, Phm S Lng, Nguyn Quc Doanh (1997), Kt qu nghiờn cu kh nng gõy bnh ca Trypanosoma evansi, KHKTTY (tp IV, s 2) Phm S Lng v Nguyn Quc Doanh (1997), Bo qun ging T.evansi nhit thp, KHKTTY (s 3) Phm S Lng, o Trng t (1990- 1991), a tin b k thut vo phũng chng bnh TMT trõu bũ Vit Nam, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut Phm Vn Khuờ v cs (1996), Giỏo trỡnh ký sinh trựng thỳ y- Trng i hc Nụng nghip I - H Ni, NXB Nụng Nghip Nguyn Ngc Hựng (2002), Nghiờn cu ch khỏng nguyờn Trypanosoma evansi cho phn ng ELISA chn oỏn bnh Tiờn mao trựng trờn trõu Vit Nam, Lun thc s khoa hc nụng nghip Phan ch Lõn (1985), H mũng Tabanidae vecto truyn bnh c hc Tiờn mao trựng Trypanosoma evansi cho n trõu bũ Vit Nam, Khoa hc v k thut Vin Thỳ Y Quc Gia, 6Tr: 22- 24 Phan Lc v Nguyn Vn Th (1995), n bo ký trõu, bũ mt s im thuc cỏc tnh phớa Bc K yu kt qu nghiờn cu KHKTTY 10 Phm S Lng (2000), Bnh Tiờn mao trựng trõu bũ NXB Nụng Nghip 61 11 Phm S Lng (1983), Mt s c im dch t hc bnh TMT trõu T.evansi cỏc tnh phớa Bc Vit Nam, Lun ỏn phú tin s KHKT 12 Lờ Ngc M v cs (2002), Nghiờn cu s bin i khỏng nguyờn ca TMT thu thp phớa Bc Vit Nam, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut- Vin Thỳ Y Quc Gia 13 Lờ Ngc M v cs (2002), Nghiờn cu khỏng nguyờn TMT ho tan chn oỏn TMT ln bng phn ng ELISA, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut - Vin Thỳ Y Quc Gia 14 Lờ Ngc M v cs (1990- 1991), Kt qu bc u thit lp phn ng ELISA chn oỏn bnh TMT, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut 15 Lờ Ngc M v cs (2002), S thay i khỏng nguyờn b mt, Tp hun k thut: Chn oỏn v khng ch bnh ký sinh trựng 16 Lờ Ngc M v cs (2002), Phỏt hin khỏng th TMT bng phng phỏp ELISA Tp hun k thut: Chn oỏn v khng ch bnh ký sinh trựng 17 Lờ Ngc M v cs (1997), nhy ca T evansi vi Naganol, Veriben, Trypamidium", KHKTTY, IV (s 2) 18 Lờ Ngc M v cs (1999- 2000), Khỏng nguyờn ho tan Trypanosoma evansi phn ng ELISA chn oỏn Tiờn mao trựng trờn bũ, Bỏo cỏo khoa hc Chn nuụi thỳ y - phn thỳ y 19 Lờ Ngc M, Wicher Holland, Phm th Tõm, Nguyn Th Giang Thanh, on hu Hon (1996 - 2000), "Cỏc phng phỏp kớ sinh trựng chn oỏn bnh TMT trõu gõy nhim thc nghim T.evansi, Kt qu nghiờn cu KHTY 20 Lờ c Quyt v cs (1995), V tỡnh hỡnh trõu bũ nhim Tiờn mao trựng (Trypanosoma sp.) mt s tnh duyờn hi Trung v Tõy Nguyờn, KHKTTY, II (s 3) 62 21 Vng Th Lan Phng v cs (1999), ỏnh giỏ cỏc phn ng huyt hc phỏt hin khỏng th ca T evansi trõu, bũ, dờ sa Bỏo cỏo khoa hc chn nuụi thỳ y ti Hu, Trypanosoma p 331- 339 22 Vng Th Lan Phng (2003), Tiờn mao trựng v dch t bnh Tiờn mao trựng T evansi 23 Lng T Thu (1990 - 1991), Kt qu nghiờn cu phng phỏp huyt dch phỏt hin khỏng th chng Trypanosoma evansi trõu Vit Nam, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut 24 Nguyn c Tõn v cs (2002), iu tra tỡnh hỡnh nhim ký sinh trựng ng mỏu v ng dng bin phỏp phũng tr thớch hp cho n bũ mt s tnh Nam trung b v Tõy Nguyờn, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut 25 Trnh Vn Thnh v Dng Thỏi (1982), Cụng trỡnh nghiờn cu ký sinh trựng Vit Nam, NXB Nụng Nghip 26 Trnh Vn Thnh (1982), Cụng trỡnh nghiờn cu ký sinh trựng Vit Nam, Nh xut bn KH v KT H Ni 27 Vng Xuõn Thch (2000), V tỡnh hỡnh bnh Tiờn mao trựng trờn n trõu bũ Súc Sn v bin phỏp phũng tr, KHKTTY, VII, (s 4) 28 Nguyn c Tõn v cs (2002) iu tra tỡnh hỡnh nhim ký sinh trựng ng mỏu v ng dng bin phỏp phũng tr thớch hp cho n bũ mt s tnh Nam trung b v Tõy Nguyờn, Cụng trỡnh nghiờn cu khoa hc k thut Ti liu Ting Anh 29 A.G Luckin (1988), Parasitology Today, vol 4, No.5, 1988 30 A.G Luckins (1995), Methods for diagnosis of tripanosomiasis in livestock 31 Chen Qijun (1992), Trypanosoma evansi in China, Seminar Paris, 10:200 63 32 D Verloo, W Holland, L.N.My, N.G.Thanh, P.T.Tam, B.goddeeris, J.Vercruysse, P Byxscher, Comparison of serological tests for Trypanosoma evansi natural infections in water buffaloes from North Viet Nam 33 Davison (1999), Evaluation of diagnostic test for T evansi and their application in epdemiologycal studies in Indonesia, PhD thesis Eliburgh 34 Donelson, J.E and Allison (1985), Molecular Biology of Trypanosoma antigen variation American Sciety for Microbiology, p.107- 125 35 Donelson, J.E., Hill, K.L and El- sayed, N.M.A (1998), Multyple mechanisms of immune evasion by African Trypanosomes, Mol Biochem Parasitol., 91: 51- 56 36 Evan, G Report on surra disease in the dera Ismal khan diatris Punjab gov millit- depart, 1880, p 493- 4467 37 Ferguson, M.A.J.; Homans, S.W.; Dwek, R.A and Rademacher, T.W (1998) Glycosil- Phosphatidylinositol moiety that anchors Trypanosome brucei variant surface glycoprotein to the mambrane Science 239: 753- 759 38 Gill, B.S., Singh, G., Gill, J.S (1987), Trypanosoma evansi infection in pigs in India, Veterinary record 39 Gill, B.S., Singh, G., Gill, J.S (1987), Trypanosoma evansi infection in pigs in India, Veterinary record 40 Kashiwazaki, Y and et al (1998), Haemoparasite infections in newly introduction dairy cattle in Thailand, Trypanosoma evansi antigen levels by ELISA referring to abortion Vet, parasitology, p.80 41 Laham, S.M and Godfrey, P.G (1970), Isolation of salivariant Trypanosome from man and mammals using DEAE- Cellulose, Experimental Parasitology 28, p.512533 42 Lapage (1968) G Parasitology of medical and Veterinary, London 64 43 M.F.Manuel, Sporadic Outbreak of Surra in the Philippines and its Economic Impact, College of Veterinary Medicine, University of the Philippines Los Banos, Laguna, Philippines 44 P Indrakamhang, Trypanosoma evansi Infection in Livestock in Thailand, Immuno-serology section, National Instutide of Animal Health, Kasetklang, Chatuchak Bangkok, Thailand 45 Schnaufer, A., Domingo, G.J Stuart, K., (2002), Natural and induced dyskinetoplastic trypanosomatids: how to live without mitochondria DAN Inter, J Parasitol 32: 1071- 1084 46 Stephan, L.E (Ed), (1986), Trypanosomiasis: A Veterinary Perspective Pergamon Press, Oxford, pp 184- 125 47 Tuner, M.J and et al (1982), Biochemistry to the variant surface glycoprotein in salivarial Trypanosome, Veterinary to day, p 68- 142 48 Touratier, L., 1999, The office International des Epizootics and Group Non- Tsetse animal Trypanosomes: Its origin, scope and perspectives Memorias Instituto Oswaldo Cruz 94: 191- 194 49 W.G Holland, N.G.Thanh, L.N My, E Magnus, D Verloo, P Bscher, B Goddeeris, J Vercruysse, Evaluation of whole fresh blood and dried blood on filter paper disc in serologycal tests for Trypanosoma evansi in experimentally infected water buffaloes 50 Vickerman, K., (1969), On the surface coat and flagellar adhesion in trypanosomes, J.Cell Sci 5: 163-193 Một số hình ảnh t liệu thực đề tài Hỡnh 1: V trớ a lý huyn Ph Yờn trờn bn Hỡnh 2: Tng cng n nh v nhõn ging TMT nh 1, 2: Bờ v ghộ gõy nhim TMT nh 3: Bũ b nhim TMT cú triu chng in hỡnh nh 4: Git chut ly mỏu cú mt TMT cao nh 5, 6: Mu trõu, bũ ti a phng c ly tõm cht huyt nh 7: Tỏch TMT mỏu chut nh 8: a phn ng ELISA quỏ trỡnh chun oỏn bnh TMT [...]... c phỏt hin thụng qua mỏy c ELISA bc súng khỏc nhau thuc c cht ó dựng 19 Cỏc loi phn ng min dch ELISA - Phn ng ELISA trc tip (Direct ELISA) - Phn ng ELISA giỏn tip (Indirect ELISA) - Phn ng Bỏnh mỡ kp ch (Sandwich ELISA) - Phn ng ELISA cnh tranh (Competitive ELISA) Phn ng cnh tranh khỏng nguyờn (Antigen Competitive ELISA) Phn ng cnh tranh khỏng th (Antibody Competitive ELISA) 2.5.3 Phng phỏp sinh... th hin qua th hỡnh sin Trong sut pha lờn (ascending phase), TMT cú type khỏng nguyờn ging nhau (c gi l homotype) 8 H thng min dch ca vt ch s nhn dng homotype ny v sn sinh ra khỏng th, s tng lờn ca khỏng th tng ng vi s trit tiờu v s lng TMT ca VAT ny, quỏ trỡnh ny c biu hin th hỡnh sine bt u i xung (pha xung descending phase) Tuy Hình 5 VAT và sự biến đổi kháng nguyên bề mặt của TMT nhiờn, mt phn VAT... ú gii thớch ti sao trong vũng i phỏt trin ca mỡnh, T.evansi khụng cú kh nng nhõn lờn trong vt ch trung gian truyn bnh c) Lp v Phn ngoi cựng l lp v cú chiu dy khong 10 - 15nm, v c chia lm 3 lp Trong ú, lp ngoi v lp trong cựng (lp tip giỏp vi nguyờn sinh cht) dy hn lp gia Lp v ngoi cựng c cu to t cỏc phõn t Glycoprotein luụn bin i (VSG=Variant Surface Glycoprotein) Tip giỏp vi lp trong cựng l 9 cp vi... TMT TRONG V NGOI NC 2.6.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii Nm 1843, c coi l mc lch s ca nhng nghiờn cu v Tiờn mao trựng Gruby ln u tiờn phỏt hin thy tiờn mao trựng trong mỏu ch, ụng t tờn l Trypanosoma sanguisis Sau ú, nhiu loi TMT khỏc ln lt c cỏc nh khoa hc phỏt hin trong mỏu ca cỏc loi ng vt khỏc cú xng sng (theo Nguyn c Tõn v cs (2002) [28] 20 n nm 1880, Griffilt Evans tỡm thy loi TMT gõy bnh trong. .. chung cu trỳc c bn ca T evansi cng ging nh cu trỳc ca nhng loi tiờn mao trựng (TMT) khỏc thuc h Trypanosomatidae, chia lm 3 phn chớnh: a) Nhõn Phn trong cựng l nhõn (hỡnh 2.2) nhõn TMT cú cha DNA, hỡnh bu dc hoc hỡnh trng Nhõn thng nm v trớ trung tõm hoc gn v trớ trung tõm ca c th c bit v phớa u, TMT cũn cú Hình 2 Cấu trúc tế bào tiên mao trùng 5 Kinetoplast cha DNA (kDNA), t Kinetoplast cú mt roi chy... khi Gruby phỏt hin thy TMT trong mỏu ch v t tờn l Trypanosoma sanguinis T ú tr i mt lot cỏc TMT khỏc c phỏt hin trong mỏu cỏc loi ng vt khỏc Trong cỏc loi TMT ó c nghiờn cu thỡ T evansi luụn luụn c ỏnh giỏ l loi gõy bnh trờn din rng, gõy ra rt nhiu thit hi cho ngnh chn nuụi núi riờng v nn kinh t nụng nghip núi chung Nm 1880, Evan l ngi u tiờn mụ t v mt loi TMT gõy bnh cú trong mỏu la, nga, lc n ... phõn lp c nhiu ln qua chut bch, theo dừi s xut hin tiờn mao trựng v m tiờn mao trựng trong mỏu chut - Gõy nhim ng vt thớ nghim (bờ, nghộ di mt nm tui) vi chng phõn lp c Ly huyt thanh trc v sau gõy nhim mt tun mt ln lm huyt thanh dng chun - Tỏch v ỏnh giỏ khỏng nguyờn b mt Glycoprotein ca TMT phõn lp c - Thit lp quy trỡnh chn oỏn huyt thanh hc ELISA bng khỏng nguyờn b mt t ch to - ng dng chn oỏn bnh... cú th s dng trong chn oỏn i tr, (ngun Lng T Thu (1990- 1991) [23], Phng phỏp ngng kt trờn bng (CATT - Card Agglutination Trypanosomiasis Test) Phng phỏp ngng kt trc tip gia khỏng nguyờn v khỏng th trờn bng nha dựng phỏt hin khỏng th lu ng cú trong mỏu ng vt nhim bnh Khỏng nguyờn dựng trong phn ng ny c nhum bng Commassie Blue sau ú em ụng khụ Phng phỏp ny n gin, nhanh, chớnh xỏc, d s dng trong chn oỏn... nguyờn TMT gm: khỏng nguyờn b mt (khỏng nguyờn v) v khỏng nguyờn thõn Trong ú khỏng nguyờn b mt cú ý ngha quan trng trong tớnh cht phc tp ca bnh TMT ng thi cng mang tớnh khỏng nguyờn cao c ng dng dựng trong chn oỏn bnh bng cỏc phng phỏp min dch hc Khỏng nguyờn b mt ca TMT cú bn cht l protein c kt hp vi ng glyco cú kh nng t bin i (Variant Glycoprotein Surface-VSG) Lp khỏng nguyờn v ny bao ph ton b b mt TMT,... Dolenson v Allisons, 1985) [34] Theo Tuner 1982) [47], cho rng lp v ngoi cựng ca mt TMT cú khong 1,5.107 phõn t glycoprotein, chim khong 5% tng s lng protein ca ton c th Cu trỳc phõn t ca VSG Khỏng nguyờn TMT cú bn cht l protein c cu to t cỏc Hình 3 Cấu trúc phân tử của VSG phõn t Glycoprotein Mi phõn t Glycoprotein c cu to t 450-500 axit amin, cỏc axit amin liờn kt vi nhau to thnh chui v phõn b thnh 4 vựng