Nghiên cứu nhân giống các dòng bạch đàn lai UE35 và UE56 giữa eucaliptus urophylla và e exsertar bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào

đại học thái nguyên Trờng Đại học nông lâm - Đặng Ngọc Hùng Nghiên cứu nhân giống dòng bạch đàn lai ue35 ue56 Eucalyptus urophyla E exserta phơng pháp nuôi cấy mô Luận văn thạc sỹ Lâm sinh thái nguyên Năm 2009 đại học thái nguyên Trờng Đại học nông lâm - Đặng Ngọc Hùng Nghiên cứu nhân giống dòng bạch đàn lai ue35 ue56 Eucalyptus urophyla E exserta phơng pháp nuôi cấy mô Chuyên ngành: Lâm HọC M! số: 60.62.60 Luận văn thạc sỹ Lâm sinh Ngời hớng dẫn khoa học Gs.Ts lê đình khả Ths đoàn thị mai thái nguyên 2009 LI NểI U Nõng cao cht lng o to bng nghiờn cu khoa hc l mc tiờu quan trng vic o to cao hc ca Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn hon thnh chng trỡnh o to cao hc Lõm nghip khoỏ hc 2006-2009, c s ng ý ca Khoa sau i hc - Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn, tụi thc hin ti tt nghip Nghiờn cu nhõn ging cỏc dũng Bch n lai UE35 v UE56 gia Eucaliptus urophylla v E exsertar bng phng phỏp nuụi cy mụ t bo Sau thi gian hc v hon thnh lun tt nghip ny, tụi ó nhn c s quan tõm v giỳp tn tỡnh v nhiu mt ca Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn, c bit l khoa sau i hc, cựng cỏc thy cụ giỏo trc tip ging dy, cng nh lónh o Trung tõm nghiờn cu ging cõy rng thuc Vin khoa hc Lõm nghip H Ni, b mụn cụng ngh t bo thuc Vin khoa hc s sng - trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn Cho phộp tụi c by t lũng bit n chõn thnh n cỏc thy cụ giỏo, c bit l GS.TS Lờ ỡnh Kh, Th.s on Th Mai ó tn tỡnh hng dn, ch bo giỳp tụi hon thnh lun ny Cui cựng, tụi xin by t lũng bit n n tt c bn bố ng nghip v ngi thõn ó giỳp tụi cú c bn lun ny Nghiờn cu nhõn ging bng nuụi cy mụ t bo l mt khú nghiờn cu ng dng sn xut ging cõy lõm nghip Vic nghiờn cu nhõn ging mt s dũng Bch n lai núi trờn ti nhm gúp phn xõy dng c s hon thin quy trỡnh cụng ngh sn xut cõy vi s lng ln, ng u, cú cht lng cao vy khụng th trỏnh nhng khim khuyt, rt mong c s ch bo b sung ý kin ca cỏc nh khoa hc, cỏc bn ng nghip cụng trỡnh nghiờn cu ny c hon thin Tụi xin chõn thnh cm n! Thỏi Nguyờn, thỏng nm 2009 Tỏc gi ng Ngc Hựng MC LC Trang Li cm n Li núi u Danh mc bng Danh mc biu Danh mc hỡnh nh Danh mc cỏc ký hiu, cỏc t vit tt M U CHNG TNG QUAN VN NGHIấN CU 1.1 Khỏi nim v nhõn ging lai lõm nghip 1.2 Khỏi nim v nuụi cy mụ v nhõn ging cõy Lõm nghip 1.3 C s khoa hc ca phng phỏp nuụi cy mụ t bo 1.3.1 Tớnh ton nng ca t bo thc vt 1.3.2 S phõn hoỏ v phn phõn hoỏ ca t bo 1.4 Cỏc nhõn t nh hng ti quỏ trỡnh nhõn ging bng nuụi cy mụ t bo 1.4.1 Mụi trng nuụi cy 1.4.2 Cỏc cht iu ho sinh trng 1.4.3 Mụi trng vt lý 10 1.4.4 Vt liu nuụi cy 11 1.4.5 iu kin vụ trựng 11 1.4.6 Bung nuụi cy 12 1.5 Cỏc giai on chớnh quỏ trỡnh nhõn ging 12 1.5.1 Giai on chun b 12 1.5.2 Giai on cy ng 13 1.5.3 Giai on nhõn nhanh 13 1.5.4 To cõy hon chnh (ra r) 14 1.5.5 a cõy mụi trng t nhiờn 14 1.6 Bch n urụ (Eucalyptus urophylla) v Bch n liu (E exserta) 16 1.6.1 Bch n urụ (Eucalyptus urophylla) 16 1.6.2 Bch n liu (Eucalyptus exserta) 17 1.6.3 Bch n lai 17 1.6.4 Nhõn ging Bch n bng nuụi cy mụ 20 1.7 Mt s kt qu ni bt v nuụi cy mụ cõy thõn g v Bch n 21 1.7.1 Trờn th gii 21 1.7.2 Nhõn ging cõy g bng phng phỏp nuụi cy mụ Vit Nam 25 CHNG 2: MC TIấU, I TNG, NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 28 2.1 Mc tiờu nghiờn cu 28 2.2 i tng nghiờn cu 28 2.2.1 Mt s c im chớnh ca dũng UE35 v dũng UE56 28 2.2.2 Cõy m ly vt liu 28 2.2.3 Vt liu nuụi cy (mu cy) 29 2.3 Ni dung nghiờn cu 29 2.4 Phng phỏp nghiờn cu 30 2.4.1 Chn loi mụi trng phự hp 31 2.4.2 nh hng ca v n kh nng tỏi sinh chi ban u 31 2.4.3 nh hng ca vitamin B2 n h s nhõn chi v t l chi hu hiu 32 2.4.4 nh hng ca cht iu ho sinh trng n h s nhõn chi (HSNC) v cht lng chi (TLCHH) 32 2.4.4.1 nh hng ca nng BAP n HSNC v TLCHH 32 2.4.4.2 nh hng ca nng BAP+IAA n HSNC v TLCHH 33 2.4.4.3 nh hng ca nng BAP + NAA n HSNC v TLCHH 34 2.4.4.4 nh hng ca nng BAP + Kinetin n HSNC v TLCHH 34 2.4.4.5 nh hng ca nng BAP + Kinetin + NAA n HSNC v TLCHH 35 2.4.4.6 nh hng ca nng IBA n t l r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di trung bỡnh ca r 35 2.4.4.7 nh hng ca nng IBA+ ABT1 n t l r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di trung bỡnh ca r 36 2.4.4.8 nh hng ca thi gian hun luyn n t l sng v chiu cao cõy m 36 2.4.4.9 iu kin thớ nghim 37 2.4.5 B trớ thớ nghim 38 2.4.6 Thu thp v x lý s liu 38 CHNG 3: KT QU NGHIấN CU V THO LUN 41 3.1 Kh trựng mu cy 41 3.2 nh hng ca v n kh nng tỏi sinh chi ban u 43 3.3 Nghiờn cu loi mụi trng thớch hp cho nhõn nhanh chi 44 3.4 nh hng ca vic b sung vitamine B2 vo mụi trng MS* n HSNC v TLCHH 46 3.5 nh hng ca cht iu ho sinh trng mụi trng MS* n HSNC v TLCHH 50 3.5.1 nh hng ca BAP n HSNC v TLCHH 50 3.5.2 nh hng phi hp ca BAP + IAA n HSNC v TLCHH 52 3.5.3 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA mụi trng MS* n HSNC v TLCHH 55 3.5.4 nh hng ca s phi hp BAP + Kinetin n HSNC v TLCHH 58 3.5.5 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA + Kinetin n HSNC v TLCHH 60 3.5.6 nh hng ca s phi hp nng IBA mụi trng 1/2 MS* t l chi r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di ca r 63 3.5.7 nh hng ca t hp IAA + ABT1 n t l chi r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di ca r 66 3.5.8 nh hng ca thi gian hun luyn n t l sng v chiu cao ca cõy m 68 Chng 4: KT LUN, TN TI V KIN NGH 72 4.1 Kt lun 72 4.2 Tn ti 72 4.3 Kin ngh 73 TI LIU THAM KHO 75 Ti liu ting vit 75 Ti liu ting Anh 77 Ph Lc M U Trong nhng nm gn õy, k thut nuụi cy mụ v t bo thc vt ó khụng ngng phỏt trin v thu c nhng thnh tu ỏng k K thut ny i nhanh chúng cú v trớ quan trng lnh vc cụng ngh sinh hc v sn xut ging cõy trng u im ni bt ca phng phỏp ny l cú th nhõn nhanh, gi c c im di truyn n nh, cú th sn xut vi s lng cỏ th ln thi gian ngn Cõy nuụi cy mụ thng c tr hoỏ cao v cú r ging nh cõy mc t ht Trong lỳc cõy hom li thng khụng cú r cc, r cõy khụng th lm õm sõu xung t nh cõy mc t ht v thng cú hin tng bo lu cc b (topophisis) Vỡ th nuụi cy mụ t bo cũn l mt bin phỏp tr hoỏ ging sn xut lõm nghip Mc dự nuụi cy mụ ũi hi k thut phc tp, giỏ thnh cao, song c nhiu ni ỏp dng, c bit l phi hp vi giõm hom, to thnh cụng ngh mụ - hom ang c s dng khỏ ph bin sn xut lõm nghip (Lờ ỡnh Kh, on Th Mai, 2002, tr 166-182) Bch n l cõy mc nhanh, chu k kinh doanh ngn, cú kh nng sinh trng trờn nhiu dng lp a khỏc nhau, thớch hp cho rng trng sn xut nguyờn liu nh: g, vỏn dm, g tr m, g xõy dng, g ci Bch n c trng rng rói nhiu nc trờn th gii Nhiu ging Bch n c ci thin cựng vi k thut trng rng thõm canh cho nng sut cao Vit Nam, Bch n chim v trớ quan trng c cu cõy trng rng Tuy nhiờn nng sut v cht lng rng Bch n trng rng nc ta cũn thp v rt khỏc T nm 1996 Trung tõm nghiờn cu ging cõy rng - Vin khoa hc Lõm Nghip Vit Nam ó nghiờn cu lai to v chn c mt s t hp lai cú nhiu trin vng v kh nng sinh trng Cỏc t hp lai loi v khỏc loi ca cỏc loi Bch n urophyla (Eucalyptus urophyla) vi Bch n liu (E exserta) ú Eucaluptus urophyla c dựng lm m, E exserta c dựng lm b Nhng dũng cõy lai c chn l cỏc dũng vụ tớnh thuc cỏc t hp lai U29E2 (dũng 35) v U29E4 (dũng 56) Hai dũng cõy lai ny u cú m l Bch n uro (U29), b l Bch n liu (E2), song li thuc hai cõy khỏc l E2 v E4 vỡ vy cú c im sinh trng khỏc Cỏc dũng vụ tớnh ny thuc cỏc t hp lai ó c B NN&PTNT cụng nhn l ging tin b k thut thớch hp vi iu kin lp a vựng t i nghốo dinh dng cú th cho nng sut gp 2-4 ln so vi loi b m (Lờ ỡnh Kh, Nguyn Vit Cng, 2001) Vic nhõn ging bng phng phỏp nuụi cy mụ nhng ging lai mi c chn to ny cú ý ngha rt ln sm a vo sn xut trờn din rng m gi c cỏc c tớnh u vit ca chỳng hn ch lõy lan ca dch bnh cú th xy thỡ mt nhng bin phỏp k thut l trng hn loi cỏc dũng vụ tớnh khỏc Nc ta hin cú khong 12 dũng Bch n ó c B NN&PTNT cụng nhn v cho phộp trng rng sn xut, ú mi cú U6, GU8, PN2, PN14, PN32 l nhng dũng ó c nhõn ging bng nuụi cy mụ ó qua kho nghim, nghiờn cu nhõn ging bng phng phỏp nuụi cy mụ cung cp cho rng trng Hin nay, nhu cu cõy ging Bch n cú nng sut cao v ó qua kho nghim, cng nh ca hai dũng ny nhm phc v trng rng khỏ ln Thi gian qua Trung tõm nghiờn cu ging cõy rng thuc Vin khoa hc Lõm nghip ó th nghim ỏp dng quy trỡnh nhõn ging nuụi cy mụ hai dũng UE35 v UE56 v ó cú kt qu bc u Vic nghiờn cu nhõn ging bng k thut nuụi cy mụ hon thin cụng ngh v phc v sn xut ging l rt cn thit T nhng c im, nhu cu thc tin v nhu cu khoa hc nờu trờn, chỳng tụi tin hnh ti: Nghiờn cu nhõn ging cỏc dũng bch n lai UE35 v UE56 gia Eucaliptus urophyla v E exserta bng phng phỏp nuụi cy mụ õy cng l mt phn kt qu ca ti Nghiờn cu nhõn ging Keo lai t nhiờn, Keo lai nhõn to, Bch n urophyla, Bch n lai nhõn to (mi chn to) v Lỏt hoa bng cụng ngh t bo - ch nhim ti: on Th Mai - Trung tõm nghiờn cu ging cõy rng thuc Vin khoa hc Lõm nghip Vit Nam thc hin CHNG TNG QUAN VN NGHIấN CU 1.1 Khỏi nim v nhõn ging lai lõm nghip Ging lai l ging c to lai t nhiờn hoc lai nhõn to gia cỏc cỏ th cú kiu gen (genotype) khỏc Ging lai thng cú nng sut cao v cú tớnh chng chu vi cỏc iu kin bt li tt hn b m Vỡ th, to v s dng ging lai ang l mi quan tõm hng u ca cỏc nh chn ging nụng lõm nghip trờn th gii (Lờ ỡnh Kh, 2006) 1.2 Khỏi nim v nuụi cy mụ v nhõn ging cõy Lõm nghip Nhõn ging bng nuụi cy mụ (propagation by tissue culture) Vi nhõn ging (micropropagation) l tờn gi chung cho cỏc phng phỏp nuụi cy in vitro cho cỏc b phn nh c tỏch cõy (George, 1930) ang c dựng ph bin nhõn ging thc vt, ú cú cõy lõm nghip Cỏc b phn c dựng nuụi cy cú th l chi bt nh, chi bờn, chi nh, bao phn, phụi v cỏc b phn khỏc nh v cõy, lỏ non, thõn mm (hypocotyl) vv (Isikawa v cs, 1996, Preece, 1997, Tripepi, 1997, Merkle, 1997, Nguyn c Thnh, 2000) Song nuụi cy mụ cho chi bờn v chi bt nh (Preece, 1997, Tripepi, 1997) l nhng phng phỏp chớnh c dựng nhõn ging cõy rng m khụng cp cỏc ni dung khỏc Nuụi cy mụ thng c tr hoỏ cao v cú r ging nh cõy mc t ht, thm khụng cú s khỏc bit ỏng k so vi cõy mc t ht Trong lỳc cõy hom li thng khụng cú r cc, r cõy khụng th õm sõu xung t nh cõy mc t ht v thng cú hin tng bo lu cc b (topophisis) nh ó cp trờn Vớ d: cõy mụ keo lai giai on 1-2 thỏng tui (cng nh cỏc loi cõy b m l Keo tai tng v Keo lỏ trm) cng cú cỏc loi lỏ kộp mt ln, kộp hai ln v lỏ gi, li cú r theo kiu r cc nh nhng cõy mc t ht in hỡnh, thỡ cõy hom cng ca ging ny li ch cú lỏ gi ca cõy trng thnh v khụng cú r cc (ngha l tớnh tr hoỏ b hn ch, cũn tớnh bo lu cc b thỡ biu hin rừ rt) Vỡ th nuụi cy mụ cũn l bin phỏp tr hoỏ ging sn xut lõm nghip Mc du nuụi cy mụ ũi hi So re TB (re/cay) Duncan a Nong IBA (mg/l) 4.0 1.0 3.0 2.0 Sig Subset for alpha = 05 1.280 1.807 1.833 2.027 2.527 1.000 078 1.000 N 3 3 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Duncan a,b Nong IBA (mg/l) 4.0 3.0 2.0 1.0 Sig N 37 90 90 90 90 4811 Subset for alpha = 05 6578 7111 8600 1.000 294 1.000 1.0878 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 69.958 b The group sizes are unequal The harmonic mean of the group sizes is used Type I error levels are not guaranteed Ph lc 15 ảnh hng ca s phi hp gia nng IBA + ABT1 n Dũng UE35 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 988 4.059 df1 df2 4 Sig .457 033 10 10 Multiple Comparisons Dependent Variable: So re TB (re/cay) Tamhane (I) Nong ABT (mg/l) 1.0 1.5 2.0 (J) Nong ABT (mg/l) 1.0 1.5 2.0 1.0 1.5 2.0 1.5 2.0 1.0 2.0 1.0 1.5 Mean Difference (I-J) Std Error -.200 1579 -.043 1107 430 1222 593 1073 200 1579 157 1229 630 1334 793 1199 043 1107 -.157 1229 473 0715 637* 0411 -.430 1222 -.630 1334 -.473 0715 163 0662 -.593 1073 -.793 1199 -.637* 0411 -.163 0662 Sig .960 1.000 294 230 960 977 161 171 1.000 977 060 003 294 161 060 681 230 171 003 681 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.088 688 -1.132 1.045 -.394 1.254 -.683 1.870 -.688 1.088 -1.125 1.439 -.341 1.601 -.677 2.263 -1.045 1.132 -1.439 1.125 -.029 976 369 904 -1.254 394 -1.601 341 -.976 029 -.468 794 -1.870 683 -2.263 677 -.904 -.369 -.794 468 * The mean difference is significant at the 05 level ANOVA Ty le re (%) Between Groups Within Groups Total So re TB (re/cay) Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 2886.017 74.047 2960.064 1.096 087 1.184 df 10 14 10 14 Mean Square 721.504 7.405 F 97.439 Sig .000 274 009 31.359 000 So re TB (re/cay) Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig Subset for alpha = 05 2.020 2.497 2.543 2.603 2.850 1.000 212 1.000 N 3 3 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le re (%) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 42.200 3 3 Subset for alpha = 05 59.433 66.667 75.567 1.000 1.000 1.000 82.233 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 90 90 90 90 90 6711 7789 Subset for alpha = 05 9100 1.0878 059 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 90.000 Dũng UE56 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 1.036 3.539 df1 df2 4 10 10 Sig .435 048 1.2889 1.000 ANOVA Ty le re (%) So re TB (re/cay) Sum of Squares 2633.151 119.267 2752.417 1.371 183 1.555 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 658.288 11.927 F 55.195 Sig .000 343 018 18.722 000 Ty le re (%) Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 45.000 3 3 Subset for alpha = 05 55.000 65.567 75.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 So re TB (re/cay) Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 1.807 1.970 2.400 2.443 2.600 170 114 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 90 90 90 90 90 Subset for alpha = 05 6656 6933 8800 1.0611 1.1644 635 1.000 078 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 90.000 81.700 1.000 Ph lc 16 ảnh hng ca thi gian hun luyn n t l sng v chiu cao ca cõy Dũng UE35 Test of Homogeneity of Variances Ty le song (%) Chieu cao trung binh (cm) Levene Statistic 1.595 794 df1 df2 4 10 10 Sig .250 556 ANOVA Sum of Squares Ty le song (%) Between Groups 4664.667 Within Groups 238.667 Total 4903.333 Chieu cao trung binh (cm)Between Groups 137 Within Groups 180 Total 317 df 10 14 10 14 Mean Square 1166.167 23.867 034 018 F 48.862 Sig .000 1.907 186 Ty le song (%) Duncan a Thoi gian huan luyen (ngay) 16 12 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 45.667 75.667 86.667 92.000 93.333 1.000 1.000 141 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Dũng UE56 Test of Homogeneity of Variances Ty le song (%) Chieu cao trung binh (cm) Levene Statistic 2.000 2.000 df1 df2 4 10 10 Sig .171 171 ANOVA Sum of Squares Ty le song (%) Between Groups 4971.600 Within Groups 121.333 Total 5092.933 Chieu cao trung binh (cm)Between Groups 104 Within Groups 193 Total 297 df 10 14 10 14 Mean Square 1242.900 12.133 026 019 F 102.437 Sig .000 1.345 320 Ty le cay song (%) Duncan a Thoi gian huan luyen (ngay) Khong huan luyen 16 ngay 12 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 44.333 72.333 88.000 92.000 92.000 1.000 1.000 209 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 DANH MC CC Kí HIU, CC CH VIT TT ABT1 : Cht kớch thớch r ca Trung Quc BAP : 6- Benzyl amino purine B2 : Riboflavil B NN&PTNT : B Nụng nghip v Phỏt trin Nụng thụn Ca (0Cl)2 : Hypoclorit canxi GA3 : Gibberellin acid HgCl2 : Clorua thu ngõn HSNC : H s nhõn chi IAA : Indol acetic acid IBA : 3-Indol butyric acid Kinetine : 6- Furfuryl aminopurine - C10H9N05 NAA : Nathyl acetic acid Na0Cl : Hypoclorit natri TTG1 : Thuc kớch thớch r cú gc IBA ca Trung tõm ging - Vin khoa hc lõm nghip Vit Nam TLCHH : T l chi hu hiu DANH MC CC BNG TT Tờn bng Trang 3.1a Bng tng hp kt qu kh trựng mu ca dũng UE35 (180 mu) 41 3.1b Bng tng hp kt qu kh trựng mu ca dũng UE56 (180 mu) 42 3.2 Bng nh hng ca v n kh nng tỏi sinh chi 43 3.3 Kt qu nghiờn cu nh hng ca loi mụi trng n HSNC v TLCHH ca dũng UE35 v UE56 (tng s 180 mu/mụi trng) 44 . 3.4 nh hng ca vic b sung vitamine B2 n HSNC v TLCHH ca UE35 v UE56 (180 mu cy/cụng thc) 47 3.5 nh hng ca nng BAP n HSNC v TLCHH ca Bch n lai dũng UE35 v UE56 (180 mu/cụng thc) . 51 3.6 nh hng s phi hp nng BAP + IAA n HSNC v TLCHH ca dũng UE35 v UE56 (180 mu/ cụng thc) 53 3.7 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA n HSNC v TLCHH ca dũng Bch n lai UE35 v UE56 (180 mu cy/cụng thc) 56 3.8 nh hng ca s phi hp nng BAP + Kinetin n HSNC v TLCHH ca dũng UE35 v UE56 (180 chi cy/cụng thc) 59 3.9 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA + Kinetin n HSNC v TLCHH (180 chi cy/cụng thc) 61 3.10 nh hng nng IBA n t l chi r, s r trung bỡnh v chiu di ca r (180 chi cõy/ cụng thc) 64 3.11 nh hng ca IBA + ABT1 n t l chi r, s r trung bỡnh v chiu di r ca dũng UE35 v UE56 66 3.12 nh hng ca thi gian hun luyn n t l sng ca cõy ti m sau thỏng (90 cõy m /cụng thc) 69 DANH MC CC HèNH NH TT Tờn bng Trang 3.1 nh kh trựng mu cy v mu nuụi cy sau 20 ngy 43 3.2 nh dũng UE35 cy loi mụi trng 46 3.3 nh mu c cy sang mụi trng cú b sung vitamin B2 sau 10 ngy nuụi cy 47 3.4a nh chi nuụi cy mụi trng MS* cú b sung 2,0mg/l B2 48 3.4b nh chi nuụi cy mụi trng MS* cú b sung 2,0mg/l B2 49 3.5 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA n HSNC v TLCHH 55 3.6 nh chi nuụi cy cú b sung 2,0 mg/l B2 + 2,0 mg/l BAP + 1,0 mg/l NAA 58 3.7 nh chi nuụi cy cú b sung 2,0 mg/l B2 + 2,0 mg/l BAP + mg/l N AA + 0,5 mg/l Kinetin 62 3.8 nh chi nuụi cy cú b sung ABT1 vo mụi trng r sau 15 ngy nuụi cy 68 3.9 nh cõy ti m ca dũng 71 3.10 nh s cho quy trỡnh nuụi cy mụ dũng UE35 v UE56 74 DANH MC CC BIU TT Tờn biu Trang 3.1a: Biu nh hng ca vitamin B2 n HSNC ca dũng UE35 v UE 48 3.1b: Biu nh hng ca vitamin B2 n TLCHH ca dũng UE35 v UE 48 3.2a: Biu nh hng ca BAP n HSNC ca dũng UE35 v UE 51 3.2b: Biu nh hng ca BAP n TLCHH ca dũng UE35 v UE 52 3.3a: Biu nh hng ca s phi hp nng BAP + IAA n HSNC ca dũng UE35 v UE 54 3.3b: Biu nh hng ca s phi hp nng BAP + IAA n TLCHH ca dũng UE35 v UE 54 3.4a: Biu nh hng ca ca s phi hp nng BAP + NAA n HSNC ca dũng UE35 v UE 56 3.4b: Biu nh hng ca ca s phi hp nng BAP + NAA n TLCHH ca dũng UE35 v UE 58 3.5a: Biu nh hng ca s phi hp nng BAP + Kinetin n HSNC ca dũng UE35 v UE 59 3.5b: Biu nh hng ca s phi hp nng BAP + Kinetin n TLCHH ca dũng UE35 v UE 60 3.6a: Biu nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA + Kinetin n HSNC ca dũng UE35 v UE 62 3.6b: Biu nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA + Kinetin n TLCHH ca dũng UE35 v UE 62 3.7a: Biu nh hng ca nng IBA t l r ca dũng UE35 v UE 65 3.7b: Biu nh hng ca nng IBA ti s r trung bỡnh ca dũng UE35 v UE 65 3.8a: Biu nh hng ca t hp IBA + ABT1ti t l r ca dũng UE35 v UE 67 3.8b: Biu nh hng ca nng IBA + ABT1 ti s r trung bỡnh ca dũng UE35 v UE 67 LI NểI U Nõng cao cht lng o to bng nghiờn cu khoa hc l mc tiờu quan trng vic o to cao hc ca Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn hon thnh chng trỡnh o to cao hc Lõm nghip khoỏ hc 2006-2009, c s ng ý ca Khoa sau i hc - Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn, tụi thc hin ti tt nghip Nghiờn cu nhõn ging cỏc dũng Bch n lai UE35 v UE56 gia Eucaliptus urophylla v E exsertar bng phng phỏp nuụi cy mụ t bo Sau thi gian hc v hon thnh lun tt nghip ny, tụi ó nhn c s quan tõm v giỳp tn tỡnh v nhiu mt ca Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn, c bit l khoa sau i hc, cựng cỏc thy cụ giỏo trc tip ging dy, cng nh lónh o Trung tõm nghiờn cu ging cõy rng thuc Vin khoa hc Lõm nghip H Ni, b mụn cụng ngh t bo thuc Vin khoa hc s sng - trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn Cho phộp tụi c by t lũng bit n chõn thnh n cỏc thy cụ giỏo, c bit l GS.TS Lờ ỡnh Kh, Th.s on Th Mai ó tn tỡnh hng dn, ch bo giỳp tụi hon thnh lun ny Cui cựng, tụi xin by t lũng bit n n tt c bn bố ng nghip v ngi thõn ó giỳp tụi cú c bn lun ny Nghiờn cu nhõn ging bng nuụi cy mụ t bo l mt khú nghiờn cu ng dng sn xut ging cõy lõm nghip Vic nghiờn cu nhõn ging mt s dũng Bch n lai núi trờn ti nhm gúp phn xõy dng c s hon thin quy trỡnh cụng ngh sn xut cõy vi s lng ln, ng u, cú cht lng cao vy khụng th trỏnh nhng khim khuyt, rt mong c s ch bo b sung ý kin ca cỏc nh khoa hc, cỏc bn ng nghip cụng trỡnh nghiờn cu ny c hon thin Tụi xin chõn thnh cm n! Thỏi Nguyờn, thỏng nm 2009 Tỏc gi ng Ngc Hựng MC LC Trang Li cm n Li núi u Danh mc bng Danh mc biu Danh mc hỡnh nh Danh mc cỏc ký hiu, cỏc t vit tt M U CHNG TNG QUAN VN NGHIấN CU 1.1 Khỏi nim v nhõn ging lai lõm nghip 1.2 Khỏi nim v nuụi cy mụ v nhõn ging cõy Lõm nghip 1.3 C s khoa hc ca phng phỏp nuụi cy mụ t bo 1.3.1 Tớnh ton nng ca t bo thc vt 1.3.2 S phõn hoỏ v phn phõn hoỏ ca t bo 1.4 Cỏc nhõn t nh hng ti quỏ trỡnh nhõn ging bng nuụi cy mụ t bo 1.4.1 Mụi trng nuụi cy 1.4.2 Cỏc cht iu ho sinh trng 1.4.3 Mụi trng vt lý 10 1.4.4 Vt liu nuụi cy 11 1.4.5 iu kin vụ trựng 11 1.4.6 Bung nuụi cy 12 1.5 Cỏc giai on chớnh quỏ trỡnh nhõn ging 12 1.5.1 Giai on chun b 12 1.5.2 Giai on cy ng 13 1.5.3 Giai on nhõn nhanh 13 1.5.4 To cõy hon chnh (ra r) 14 1.5.5 a cõy mụi trng t nhiờn 14 1.6 Bch n urụ (Eucalyptus urophylla) v Bch n liu (E exserta) 16 1.6.1 Bch n urụ (Eucalyptus urophylla) 16 1.6.2 Bch n liu (Eucalyptus exserta) 17 1.6.3 Bch n lai 17 1.6.4 Nhõn ging Bch n bng nuụi cy mụ 20 1.7 Mt s kt qu ni bt v nuụi cy mụ cõy thõn g v Bch n 21 1.7.1 Trờn th gii 21 1.7.2 Nhõn ging cõy g bng phng phỏp nuụi cy mụ Vit Nam 25 CHNG 2: MC TIấU, I TNG, NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 28 2.1 Mc tiờu nghiờn cu 28 2.2 i tng nghiờn cu 28 2.2.1 Mt s c im chớnh ca dũng UE35 v dũng UE56 28 2.2.2 Cõy m ly vt liu 28 2.2.3 Vt liu nuụi cy (mu cy) 29 2.3 Ni dung nghiờn cu 29 2.4 Phng phỏp nghiờn cu 30 2.4.1 Chn loi mụi trng phự hp 31 2.4.2 nh hng ca v n kh nng tỏi sinh chi ban u 31 2.4.3 nh hng ca vitamin B2 n h s nhõn chi v t l chi hu hiu 32 2.4.4 nh hng ca cht iu ho sinh trng n h s nhõn chi (HSNC) v cht lng chi (TLCHH) 32 2.4.4.1 nh hng ca nng BAP n HSNC v TLCHH 32 2.4.4.2 nh hng ca nng BAP+IAA n HSNC v TLCHH 33 2.4.4.3 nh hng ca nng BAP + NAA n HSNC v TLCHH 34 2.4.4.4 nh hng ca nng BAP + Kinetin n HSNC v TLCHH 34 2.4.4.5 nh hng ca nng BAP + Kinetin + NAA n HSNC v TLCHH 35 2.4.4.6 nh hng ca nng IBA n t l r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di trung bỡnh ca r 35 2.4.4.7 nh hng ca nng IBA+ ABT1 n t l r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di trung bỡnh ca r 36 2.4.4.8 nh hng ca thi gian hun luyn n t l sng v chiu cao cõy m 36 2.4.4.9 iu kin thớ nghim 37 2.4.5 B trớ thớ nghim 38 2.4.6 Thu thp v x lý s liu 38 CHNG 3: KT QU NGHIấN CU V THO LUN 41 3.1 Kh trựng mu cy 41 3.2 nh hng ca v n kh nng tỏi sinh chi ban u 43 3.3 Nghiờn cu loi mụi trng thớch hp cho nhõn nhanh chi 44 3.4 nh hng ca vic b sung vitamine B2 vo mụi trng MS* n HSNC v TLCHH 46 3.5 nh hng ca cht iu ho sinh trng mụi trng MS* n HSNC v TLCHH 50 3.5.1 nh hng ca BAP n HSNC v TLCHH 50 3.5.2 nh hng phi hp ca BAP + IAA n HSNC v TLCHH 52 3.5.3 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA mụi trng MS* n HSNC v TLCHH 55 3.5.4 nh hng ca s phi hp BAP + Kinetin n HSNC v TLCHH 58 3.5.5 nh hng ca s phi hp nng BAP + NAA + Kinetin n HSNC v TLCHH 60 3.5.6 nh hng ca s phi hp nng IBA mụi trng 1/2 MS* t l chi r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di ca r 63 3.5.7 nh hng ca t hp IAA + ABT1 n t l chi r, s r trung bỡnh/cõy v chiu di ca r 66 3.5.8 nh hng ca thi gian hun luyn n t l sng v chiu cao ca cõy m 68 Chng 4: KT LUN, TN TI V KIN NGH 72 4.1 Kt lun 72 4.2 Tn ti 72 4.3 Kin ngh 73 TI LIU THAM KHO 75 Ti liu ting vit 75 Ti liu ting Anh 77 Ph Lc [...]... chỉnh bằng phương pháp nuôi cấy mô cho các dòng UE35 và dòng UE56 • Huấn luyện và cấy cây con ra vườn ươm 2.2 Đối tượng nghiên cứu Tiến hành nghiên cứu nhân giống cho 2 dòng UE35 và dòng UE56 Hai dòng này đã được tuyển chọn và trồng khảo nghiệm dòng vô tính tại trung tâm nghiên cứu giống cây rừng thuộc Viện khoa học lâm nghiệp Việt Nam 2.2.1 Một số đặc điểm chính của dòng UE35 và dòng UE56 Dòng Bạch đàn. .. hợp lai giữa các loài E alba, E camaldulensis, E microtheca, E terericornis, E polycarpa và E. torelliana cũng được tạo ở Ấn Độ trong các năm 1991 - 1999 (Paramathma, Surendran, 2000) Sau này nhiều giống lai khác loài giữa E grandis và E urophylla, giữa E urophylla và E tereticornis, E camaldulensis, E exserta, E grandis, E saligna và E pellita đã được khảo nghiệm, từ đó đã chọn được những giống lai. .. đầu Nuôi cấy mô ở nước ta đã áp dụng rộng rãi trong công tác nhân giống một số giống Bạch đàn nhập nội, các dòng vô tính Bạch đàn lai và keo lai có năng suất cao Cùng với những kết quả về cải thiện giống Trung tâm nghiên cứu giống cây rừng đã nghiên cứu thành công kỹ thuật nuôi cây mô tế bào cho Keo lai, Bạch đàn và một số cây rừng khác (Lê Đình khả và cs, 2003) Ngoài những nghiên cứu nuôi cấy mô Keo... nhanh và có khả năng thích ứng lớn Trong đó, đáng chú ý là các loài Bạch đàn uro (E urophylla) , Bạch đàn tere (E tereticornis) và Bạch đàn caman (E camaldulensis), Bạch đàn liễu (E exserta) Ở những nơi thấp Bạch đàn E urophylla có thể mọc lẫn với Bạch đàn E alba (Martin and Cossalater, 1975 - 1976) Bạch đàn urô là cây thích hợp với các lập địa có đất sâu ẩm ở các tỉnh miền Bắc, Bắc Trung Bộ và Tây... và PN3D là mẫu bật chồi đạt 17,5% HgCl2 nồng độ 0,5% trong khoảng thời gian là 12 phút Môi trường là MS* + BAP 0,5mg/l + NAA 0,3mg/l + các phụ gia khác CHƯƠNG 2 MỤC TIÊU, ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu nghiên cứu • Xác định môi trường (hoá học và vật lý) phù hợp để nhân giống 2 dòng UE35 và UE56 của bạch đàn lai giữa (E urophylla x E exserta) bằng phương pháp nuôi cấy mô. .. hưởng tới quá trình nhân giống bằng nuôi cấy mô tế bào Nhân giống bằng nuôi cấy mô tế bào gồm nhiều giai đoạn kế tiếp nhau, quá trình này có thể chia thành các nhân tố sau: 1.4.1 Môi trường nuôi cấy Trong nuôi cấy in vitro, môi trưởng nuôi cấy và điều kiện bên ngoài được xem là vấn để quyết định sự thành bại của quá trình nuôi cấy Môi trường nuôi cấy được xem là phần đệm để cung cấp các chất dinh dưỡng... mọi tế bào của các mô chuyên hoá đều có tính toàn năng, nghĩa là đều có thể nuôi cấy thành công Thực tế cho thấy các loài tế bào và các loại mô khác nhau có mức độ nuôi cấy thành công khác nhau Một nguyên tắc cơ bản trong nuôi cấy mô tế bào là các tế bào làm vật liệu nuôi cấy càng non thì khả năng nuôi cấy thành công càng cao Như vậy, tế bào và mô phôi non là triển vọng nhất, rồi đến các tế bào của... cây lai E urophylla x E tereticornis và E urophylla x E camaldulensis đã có ưu thế lai rõ rệt về sinh trưởng so với bố mẹ của chúng, cây lai có thể tích vượt bố mẹ tương ứng là 120,7% và 89,4% (Xing & Wang, 1996; Shen Xihuan, 2000) Các tổ hợp lai thuận nghịch giữa E urophylla và E grandis đã được tạo ra ở Trung Quốc (Wang & Yang, 1996, Rezede Gabriel & Rezende Marcos, 2000) Ở Brazin và Indonesia (Hardlyanto... nghiên cứu lâm nghiệp Quảng Tây (Trung Quốc) đã tạo được một số tổ hợp lai E saligna x E exserta, trong đó một số cá thể của cây lai có thể tích thân cây vượt E exserta đến 82% Từ năm 1989 Viện lâm nghiệp nhiệt đới của Trung Quốc cũng tạo ra 204 cây lai (không phải tổ hợp lai) giữa E urophylla với E tereticornis, E camaldulensis E exserta, E grandis, E saligna và E pellita, trong đó một số cá thể cây lai. .. IBA 1ppm ra rễ tốt cho dòng BV16 (65%), BV5 (50%) Dương Mộng Hùng (1993) nghiên cứu bằng nuôi cấy mô cho 2 loài Bạch đàn E camaldulensis và E urophylla từ cây chội của 2 loài đã tạo được một số cây mô Bạch đàn với hệ số nhân chồi là 1-2 lần Đoàn Thị Mai và cs (2000) đã nghiên cứu nuôi cấy mô thành công cho giống Bạch đàn lai U29C3 Kết quả cho thấy thời kỳ mẫu bị nhiễm ít nhất và có tỷ lệ bật chồi cao