Nghiên cứu khả năng tái sinh cây khoai từ burkill bằng kỹ thuật in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÀN VĂN ĐÔNG Tên đề tài: T NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH CÂY KHOAI TỪ [Dioscorea esculenta (lour.) burkill] BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 - 2014 Thái Nguyên, 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÀN VĂN ĐÔNG Tên đề tài: T NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH CÂY KHOAI TỪ [Dioscorea esculenta (lour.) burkill] BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Lớp : 42 - CNSH Khoá học : 2010 - 2014 Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình Thái Nguyên, 2014 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Th.S Nguyễn Thị Tình tạo điều kiện thuận lợi hướng dẫn tận tình chu đáo trình thực tập Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến KS Lã Văn Hiền dành nhiều thời gian trực tiếp hướng dẫn em thực nghiên cứu đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể giáo viên Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên dạy bảo em suốt trình học tập Và cuối cùng, em xin cảm ơn quan tâm, giúp đỡ, động viên tinh thần người thân bạn bè suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2014 Sinh viên Làn Văn Đông DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT AND : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CV : Coefficient of Variation CT : Công thức Đ/C : Đối chứng IAA : Indol axetic acid iP : N6-(2-isopentyl)adenin Kinetin : 6-Furfurylaminopurine KIN : Kinetin LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphlene axetic acid TN : Thí nghiệm WPM : Woody Plant Medium DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 26 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khoáng MS tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 28 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 29 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 31 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 33 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 34 Bảng 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ trình phân hóa phản phân hóa tế bào thực vật Hình 2.2 Cây Khoai Từ 12 Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta ) (sau 20 ngày nuôi cấy) 27 Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ khoáng MS tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 28 Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 30 Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 32 Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) .33 Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) .35 Hình 4.7 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 36 MỤC LỤC Trang Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài .2 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.1 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.1.1 Tính toàn tế bào thực vật 2.1.1.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 2.1.1.3 Cơ chế di truyền thông qua hệ tế bào 2.1.2 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.2.1 Khử trùng mẫu cấy khởi động 2.1.2.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy 2.1.2.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi .5 2.1.4.4 Tạo hoàn chỉnh 2.1.2.5 Giai đoạn đưa đất .6 2.1.3 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.3.1 Các muối khoáng đa lượng vi lượng 2.1.3.2 Nguồn cacbon .7 2.1.3.3 Các vitamin acid amin .8 2.1.3.4 Các chất điều hòa sinh trưởng 2.1.3.5 Các chất bổ sung, làm thay đổi trạng thái môi trường 2.1.3.6 pH môi trường 10 2.1.4 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật .10 2.1.4.1 Điều kiện vô trùng 10 2.1.4.2 Môi trường vật lý 10 2.2 Giới thiệu Khoai Từ 11 2.2.1 Nguồn gốc phân loại 11 2.2.2 Đặc điểm thực vật học Khoai Từ .12 2.2.3 Phân bố sinh thái 13 2.2.4 Công dụng Khoai Từ 14 2.3 Tình hình nghiên cứu Khoai Từ nước giới 15 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 Phần 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 18 3.1.1 Vật liệu thực vật 18 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 18 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng 18 3.3.1 Hóa chất 18 3.3.2 Thiết bị 18 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu .19 3.4.1 Nội dụng nghiên cứu .19 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu .19 3.4.2.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ 19 3.4.2.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ 21 3.4.2.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: nghiên cứu ảnh hưởng số Cytokinin (BA, Kinetin) đến khả nhân nhanh Khoai Từ 22 3.4.2.4 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: nghiên cứu ảnh hưởng số auxin (NAA, IAA) đến khả rễ chồi Khoai Từ 23 3.5 Phương pháp đánh giá xử lý số liệu 24 3.5.1 Phương pháp đánh giá .24 3.5.2 Phương pháp xử lý số liệu .25 Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .26 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta ) 26 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khoáng MS tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 28 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 29 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 31 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 33 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) .34 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 36 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 5.1 Kết luận 38 5.2 Kiến nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 I Tiếng Việt 39 II Tiếng Anh .40 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Khoai Từ [Dioscorea esculenta (Lour.) Burkill] thuộc họ củ nâu, chi Dioscorea có củ truyền thống, gọi với nhiều tên khác củ từ, từ lông, từ gai Chúng có đặc điểm thân leo, loài giàu tinh bột Củ Khoai Từ giàu nguồn carbohydrate chất xơ, hàm lượng chất béo mức thấp tốt cho nguồn dinh dưỡng [22] Cùng với số loài khác Khoai Mỡ, củ Khoai Từ trở thành nguồn lương thực, thực phẩm có ý nghĩa quan trọng người nông dân quốc gia vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, đặc biệt nước châu Phi [25] Củ Khoai Từ nguồn nguyên liệu quan trọng công nghiệp dược phẩm y học, chất Diosgenin có củ Khoai Từ sử dụng để tổng hợp Cortisone, Pregnenolone, progesterone sản phẩm steroid khác có hoạt tính estrogen làm giảm cholesterol máu [37] Trong thực tế, nhân giống in vitro loài Dioscorea tác giả tiến hành nghiên cứu cách khoảng 30 năm sau tăng lên nhanh Các tác giả sử dụng phận nuôi cấy khác cho đối tượng nghiên cứu họ Kohmura cs (1995) sử dụng non làm mẫu nuôi cấy [36] Theo Alizadeh cs (1998) [21] Twyford Mantell, (1996) sử dụng mẫu cấy rễ [50] Tor cs (1998) dùng tế bào protoplasts [49] Nhiều tác Mantell Hugo (1989), Jasik Mantell (2000), Fotso cs (2013), Borges cs (2004) thực nghiên cứu đối tượng Khoai Mỡ với mẫu củ bi [29], [30], [32], [40] Tuy nhiên, có công trình nghiêm cứu hoàn thiện nhân giống Khoai Từ phương pháp in vitro công bố Hầu hết nghiên cứu dừng lại việc tách chiết hợp chất hữu có hoạt tính hóa học sinh học củ Khoai Từ Trong tự nhiên, Khoai Từ tái sinh thông qua hạt hay đoạn thân tươi hay củ Nhưng suất củ giảm nhiễm virus loài tuyến trùng, củ bị nhiễm truyền cho hệ sau làm giảm chất lượng củ [49] Nhân giống Khoai Từ phương pháp truyền thống trở nên phổ biến hầu hết người nông dân, song kỹ thuật nhân giống cho hiệu thấp Nuôi cấy mô tế bào thực vật phương pháp nhân giống hiệu cao Với phương pháp nhân giống invitro đảm bảo chủ động số lượng lớn giống, đồng đều, bệnh Xuất phát từ yêu cầu trên, 43 50 Twyford CT and Mantell SH (1996), “Production of somatic embryos and plantlets from root cells of Greater Yam”, Plant Cell Tiss.Org.Cult, 46, pp.17-26 51 Ukaegbu M and Okpuzor J (2010), “A Study Of Changes In Some Biochemical Parameters During Bacterial Fermantation Of Dioscorea EsculentaTubers”, Report and Opinion, 2(6), pp.88-93 52 Yan H and Yang L., (2011), “Improved growth and quality of Dioscorea fordii Prain et Burk and Dioscorea alata plantlets using temporary immersion system”, Afr J Biotechnol, 10(83), pp.19444-19448 44 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số kết ảnh thí nghiệm MS B5 WPM Hình Ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ MS 1/2MS 4/3MS 2MS Hình Ảnh hưởng nồng độ tối ưu môi trường khoáng (MS,B5, WPM) tới khả tái sinh chồi Khoai Từ 45 GA3 0,8 mg/l GA3 0,5 mg/l GA3 2,0 mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Khoai Từ 46 BA 0,0 mg/l BA 2,0 mg/l BA 3,0 mg/l BA 4,0 mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ 47 BA 1,5 mg/l + Kinetin 1,0 mg/l BA 1,5 mg/l + Kinetin 2,0 mg/l BA 1,5 mg/l + Kinetin 3,0 mg/l BA 1,5 mg/l + Kinetin 4,0 mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ 48 NAA 2,0 mg/l NAA 4,0 mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Khoai Từ NAA 2,0 mg/l + IAA 0,0 mg/l NAA 2,0 mg/l + IAA 1,0 mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp IAA đến khả rễ Khoai Từ 49 Phụ lục 2: Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE E1 11/5/14 22:46 :PAGE Anh huong cua moi truong MS, B5, WPM toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu RIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1755.56 877.778 79.00 0.000 * RESIDUAL 66.6669 11.1112 * TOTAL (CORRECTED) 1822.22 227.778 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E1 11/ 5/14 22:46 :PAGE Anh huong cua moi truong MS, B5, WPM toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLTS 93.3333 70.0000 60.0000 SE(N= 3) 1.92450 5%LSD 6DF 6.65717 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E1 11/ 5/14 22:46 :PAGE Anh huong cua moi truong MS, B5, WPM toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLTS GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 74.444 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 15.092 3.3333 4.5 0.0001 | | | | Bảng 4.2 Xác định nồng độ tối ưu môi trường khoáng MS tới khả tái sinh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE E2 11/ 5/14 23: :PAGE Anh huong nong toi uu moi truong khoang MS toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER 50 SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1091.67 363.889 21.83 0.000 * RESIDUAL 133.333 16.6667 * TOTAL (CORRECTED) 11 1225.00 111.364 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E2 11/ 5/14 23: :PAGE Anh huong nong toi uu moi truong khoang MS toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLTS 96.6667 83.3333 80.0000 70.0000 SE(N= 3) 2.35702 5%LSD 8DF 7.68601 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E2 11/ 5/14 23: :PAGE Anh huong nong toi uu moi truong khoang MS toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLTS GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 82.500 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.553 4.0825 4.9 0.0004 | | | | Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE E3 12/ 5/14 23:33 :PAGE Anh huong nong GA3 toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 777.778 155.556 9.33 0.001 * RESIDUAL 12 200.000 16.6667 * TOTAL (CORRECTED) 17 977.778 57.5163 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E3 12/ 5/14 23:33 :PAGE Anh huong nong GA3 toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ - 51 CT$ NOS 3 3 3 TLTS 90.0000 86.6667 93.3333 100.000 83.3333 80.0000 SE(N= 3) 2.35702 5%LSD 12DF 7.26279 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E3 12/ 5/14 23:33 :PAGE Anh huong nong GA3 toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLTS GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 88.889 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.5840 4.0825 4.6 0.0009 | | | | Bảng 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE C4 20/ 5/14 16:47 :PAGE Anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai tu VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 940000 188000 37.60 0.000 * RESIDUAL 12 600000E-01 500000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.00000 588235E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE C4 20/ 5/14 16:47 :PAGE Anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 HSN 1.33333 1.56667 1.76667 2.06667 1.83333 1.63333 SE(N= 3) 0.408248E-01 5%LSD 12DF 0.125795 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE C4 20/ 5/14 16:47 52 :PAGE Anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 1.7000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.24254 0.70711E-01 4.2 0.0000 | | | | Bảng 4.5 Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE C5 22/ 5/14 17:33 :PAGE Anh huong cua BA ket hop Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai Tu VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.74933 437333 43.73 0.000 * RESIDUAL 10 100000 100000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.84933 132095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE C5 22/ 5/14 17:33 :PAGE Anh huong cua BA ket hop Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai Tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 1.26667 1.83333 2.36667 2.10000 1.90000 SE(N= 3) 0.577350E-01 5%LSD 10DF 0.181925 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE C5 22/ 5/14 17:33 :PAGE Anh huong cua BA ket hop Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai Tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.9067 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.36345 0.10000 5.2 0.0000 | | | | Bảng 4.6 nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu VARIATE V003 TLRR 53 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 13796.3 3449.07 517.36 0.000 * RESIDUAL 10 66.6666 6.66666 * TOTAL (CORRECTED) 14 13862.9 990.210 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR/C FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu VARIATE V004 SR/C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.23067 1.55767 101.59 0.000 * RESIDUAL 10 153334 153334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.38400 456000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 TLRR 20.0000 70.0000 90.0000 73.3333 50.0000 SR/C 2.16667 3.00000 3.20000 3.46667 2.73333 SE(N= 3) 1.49071 0.632456E-01 5%LSD 10DF 4.69728 0.199289 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLRR SR/C GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 57.067 15 2.9133 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 31.468 2.5820 4.5 0.0000 0.46884 0.10954 3.8 0.0000 | | | | Bảng Xác định nồng độ NAA kết hợp IAA đến khả rễ Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA ket hop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu VARIATE V003 TLRR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN 54 ============================================================================= CT$ 398.944 79.7889 37.79 0.000 * RESIDUAL 12 25.3334 2.11111 * TOTAL (CORRECTED) 17 424.278 24.9575 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR/C FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA ket hop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu VARIATE V004 SR/C LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.91611 383222 45.99 0.000 * RESIDUAL 12 999999E-01 833333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.01611 118595 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA ket hop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 TLRR 87.0000 90.3333 95.6667 90.6667 86.3333 80.3333 SR/C 3.56667 3.66667 4.00000 4.13333 4.60000 4.13333 SE(N= 3) 0.838871 0.720082E-01 5%LSD 12DF 2.58485 0.221882 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA kethop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLRR SR/C GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 88.389 18 4.0167 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.9957 1.4530 1.6 0.0000 0.36501 0.12472E-01 3.1 0.0000 | | | | 55 Phụ lục 3: Môi trường Table 1: Preparation of modified Murashige AND Skoog’s MS medium Thứ tự I II III IV V Muối khoáng Dung dịch Thể tích cần Nồng độ Stock (g/l lấy (ml) (mg/l) NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 20 1.650,0 1.900,0 370,0 10 10 10 22,3 10,6 0,83 6,2 0,25 10 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 Thiamin acid 100 0,1 0,1 Pyridoxine HCl 100 0,5 0,5 Inositol 100,0 Sucrose 30.0000,0 Agar 8.000,0 pH 5,8 56 Bảng 2: Môi trường B5 (Gamborg’s B5 medium) Thứ tự Dung dịch Stock Thể tích cần lấy Nồng độ (g/l (ml) (mg/l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.2 H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0.0025 0,025 CoCl2.6H2O 0.0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 Muối khoáng 10 Inositol 27,85 160 mg/100ml Vitamins Nicotinic acid 100 1,0 Thiamin HCl 100 10 10,0 Pyridoxine HCl 100 1,0 Sucrose 8000,0 Agar pH 5,6 - 5,8 57 Bảng 3: Môi trường WPM - Woody Plant Medium Muối khoáng Nồng độ (mg/l) Muối khoáng Nồng độ (mg/l) NH4NO3 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8.6 CaCl2.2H2O 96 Na2EDTA.22O 37,2 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2 SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 Các chất hữu Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 Thiamine HCl 1,0 Glycine 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 pH 5,6 - 5,8 [...]... Nghiên cứu khả năng tái sinh cây Khoai Từ [Dioscorea esculenta (Lour.) Burkill] bằng kỹ thuật in vitro 1.2 Mục đích nghiên cứu Đưa ra quy trình tái sinh cây Khoai Từ [Dioscorea esculenta (Lour.) Burkill] bằng kỹ thuật in vitro 1.3 Yêu cầu đề tài - Xác định được môi trường tái sinh chồi từ đốt thân cây Khoai Từ (Dioscorea esculenta) - Xác định được nồng độ GA3 đến khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ. .. pháp nghiên cứu 3.4.1 Nội dụng nghiên cứu - Nội dung 1: nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường MS, B5, WPM đến khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ + Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường MS, B5 và WPM đến khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ + Xác định nồng độ tối ưu môi trường khoáng (MS, WPM và B5) tới khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ - Nội dung 2: nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả năng tái sinh. .. chồi cây Khoai Từ - Nội dung 3: nghiên cứu ảnh hưởng của một số Cytokinin (BA, Kinetin) đến khả năng nhân nhanh cây Khoai Từ + Xác định nồng độ BA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Khoai Từ + Xác định nồng độ BA kết hợp Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi cây Khoai Từ - Nội dung 4: nghiên cứu ảnh hưởng một số auxin (NAA, IAA) đến khả năng ra rễ chồi cây Khoai Từ + Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA tới khả. .. Burkill) do Khoa CNSH - CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên cung cấp 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường khoáng MS, WPM, B5 tới khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ (Dioscorea esculenta) - Nghiên cứu ảnh hưởng của GA3 đến khả năng tái sinh chồi cấy Khoai Từ (Dioscorea esculenta) - Nghiên cứu ảnh hưởng một số cytokinin (BA, Kinetin) đến khả năng nhân nhanh chồi cây Khoai. .. esculenta) - Nghiên cứu ảnh hưởng của một số cytokinin (BA, Kinetin) tới khả năng nhân nhanh cây Khoai Từ (Dioscorea esculenta) - Xác định được nồng độ một số Auxin đến khả năng ra rễ chồi cây Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 1.4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài - Ý nghĩa khoa học: + Kết quả nghiên cứu sẽ xây dựng được quy trình nhân giống cây Khoai Từ bằng kỹ thuật in vitro + Kết quả nghiên cứu đạt... NAA tới khả năng ra rễ chồi cây Khoai Từ + Xác định nồng độ NAA kết hợp IAA đến khả năng ra rễ chồi cây Khoai Từ 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 3.4.2.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường MS, B5, WPM đến khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ - Phương pháp tạo vật liệu nuôi cấy vô trùng: + Lấy mẫu: lấy đoạn thân trưởng thành (khoảng 3 tuần tuổi) từ cây Khoai Từ ngoài tự... thí nghiệm với các chỉ tiêu theo dõi: tỷ lệ tái sinh chồi, chất lượng chồi Đưa ra nồng độ môi trường thích hợp nhất cho các thí nghiệm sau 3.4.2.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 2 nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả năng tái sinh chồi cây Khoai Từ - Phương pháp tái sinh (cảm ứng) in vitro: + Sử dụng môi trường MS có bổ sung các nồng độ GA3 khác nhau + Inositol 100mg/l + đường 30 g/l + agar 6 g/l... tra nghiên cứu thì năng suất của Khoai mỡ có thể đạt 20-30 tấn/ha, Khoai Từ mỗi gốc cho thu hoạch từ 1,5-4,5 kg củ/gốc Những địa phương có truyền thống trồng Khoai Từ, khoai vạc là Bắc Giang, Phú Thọ, Ninh Bình, Ninh Thuận, Hà Tây (cũ) và Quảng Ninh [6] 18 Phần 3 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu và phạm vi nghiên cứu 3.1.1 Vật liệu thực vật Vật liệu nuôi cấy là cây Khoai Từ. .. Trong cây auxin được tổng hợp ở các mô non đặc biệt là lá đang phát triển và vùng đỉnh chồi Từ những vùng này auxin được chuyển xuống các phần phía dưới của cây [2] - Cytokinin: Cytokinin là chất kích thích sinh trưởng có tác dụng kích thích sử dụng protein, điều khiển chu trình tế bào và tăng sự phân chia tế bào Các cytokinin thường được sử dụng rộng rãi là kinetine, benzyadenin (BA), 6benzyl aminopurin... chất sinh trưởng sau: auxin, cytokinin và gibberelin Các chất sinh trưởng tương tác với nhau và tương tác với các chất ức chế sinh trưởng (axit abscisis, ethylen) quyết định sự hình thành, phát triển, phát sinh hình thái của thực vật nuôi cấy [16] - Auxin: Auxin được sử dụng phổ biến trong nuôi cấy mô tế bào thực vật và thường được bổ sung vào môi trường nuôi cấy từ đầu Auxin cùng với cytokinin có ... kin lnh di 0oC hoc ch pha ch trc s dng [16] 2.1.3.4 Cỏc cht iu hũa sinh trng Thụng thng mụi trng nuụi cy mụ t bo thc vt ph bin nhúm cht sinh trng sau: auxin, cytokinin v gibberelin Cỏc cht sinh. .. thut in vitro 1.2 Mc ớch nghiờn cu a quy trỡnh tỏi sinh cõy Khoai T [Dioscorea esculenta (Lour.) Burkill] bng k thut in vitro 1.3 Yờu cu ti - Xỏc nh c mụi trng tỏi sinh chi t t thõn cõy Khoai. .. dng protein, iu khin chu trỡnh t bo v tng s phõn chia t bo Cỏc cytokinin thng c s dng rng rói l kinetine, benzyadenin (BA), 6benzyl aminopurin (BAP) v thidiazuzon (TDZ) õy l cỏc cytokinin tng hp