Câu hỏi và Đề cương vi sinh vật thú (nguồn Đinh Công Trưởng)

ĐỀ CƢƠNG ÔN THI KẾT THÚC HỌC PHẦN Môn Học : Vi sinh vật thú y Kỳ – Năm 2011- 2012 A: CÂU HỎI ÔN Câu 1: Đặc tính sinh học tụ cầu khuẩn Staphylococcus aureus? Câu 2: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh Staphylococcus gây ra? Câu 3: Đặc tính sinh học Streptococcus suis? Câu 4:Đặc tính sinh học trực khuẩn Đóng dấu lợn? Câu 5:Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh trực khuẩn Đóng dấu lợn? Câu 6: Chẩn đoán huyết học bệnh Đóng dấu lợn? Câu 7: Đặc tính sinh học Pasteurella multocida? Câu 8: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh tụ huyết trùng gà? Câu 9: Đặc tính sinh học VK brucella? Câu 10: Chẩn đoán bệnh xảy thai truyền nhiễm Brucellosis phản ứng ngưng kết? Câu 11: Đặc tính chung giống Salmonella hình thái, nuôi cấy, sinh hóa, độc tố? Câu 12: Cấu trúc kháng nguyên giống Salmonella? Câu 13: Đặc tính sinh học trực khuẩn E.coli? Câu 14: Đặc tính sinh học trực khuẩn phó thương hàn lợn? Câu 15: Chẩn đoán huyết học bệnh thương hàn gà phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính? Câu 16: Đặc tính sinh học trực khuẩn nhiệt thán Bacillus anthracis? Câu 17: Chẩn đoán VK học bệnh nhiệt thán? Câu 18: Trình bày phản ứng kết tủa Ascoli để chẩn đoán bệnh nhiệt thán? Câu 19: Đặc tính sinh học trực khuẩn uốn ván Từ đề biện pháp phòng trị bệnh? Câu 20: Đặc tính sinh học trực khuẩn Lao? Câu 21: Dùng phản ứng dị ứng để phát lao bò( nguyên lý, phương pháp tiêm nội bì)? Câu 22: Đặc tính sinh học Leptospira? Câu 23: Chẩn đoán Leptospira phản ứng ngưng kết tan với kháng nguyên sống phiến kính? Câu 24, Đặc tính sinh học virus dịch tả lợn? Câu 25, Chẩn đoán virus học bệnh dịch tả lợn? Câu 26, Chẩn đoán huyết học bệnh dịch tả lợn?( phản ứng trung hòa thỏ,phản ứng kết tủa khuếch tán thạch)? Câu 27, Đặc tính sinh học virus lở mồm long móng? Câu 28, Đặc tính sinh học virus dại? Câu 29, Chẩn đoán bệnh dại phản ứng miễn dịch huỳnh quang ( phƣơng pháp Câu 30.Đặc tính sinh học virus Newcastle? Câu 31, Trình bày phƣơng pháp làm phản ứng HA( nguyên lý, mục đích cách tiến Câu 21: Dùng phản ứng dị ứng để phát lao bò( nguyên lý, phương pháp tiêm nội bì)? Câu 22: Đặc tính sinh học Leptospira? Câu 23: Chẩn đoán Leptospira phản ứng ngưng kết tan với kháng nguyên sống phiến kính? Câu 24, Đặc tính sinh học virus dịch tả lợn? Câu 25, Chẩn đoán virus học bệnh dịch tả lợn? Câu 26, Chẩn đoán huyết học bệnh dịch tả lợn?( phản ứng trung hòa thỏ,phản ứng kết tủa khuếch tán thạch)? Câu 27, Đặc tính sinh học virus lở mồm long móng? Câu 28, Đặc tính sinh học virus dại? Câu 29, Chẩn đoán bệnh dại phản ứng miễn dịch huỳnh quang ( phƣơng pháp Câu 30.Đặc tính sinh học virus Newcastle? Câu 32, Trình bày phƣơng pháp làm phản ứng HI để giám định virus Newcastle vàvirus cúm gia cầm? Câu 33 Chuẩn đoán viruts học bệnh Newcastle Câu 34: Dặc tính sinh học viruts gumboro Câu 35: Chuẩn đoán viruts học bệnh gumboro Câu 36:đặc tính sinh học vr cúm gia cầm( Avian Ingluenza Virus) Câu 37: đặc tính sinh học vr dịch tả vịt ( Pestis anatum virus) Câu 38: chẩn đoán virus học dịch tả vịt: Câu 39: đặc tính sinh học vr viêm gan vịt.(Duck Hepatitis Virus) Câu 40:Chẩn đoán virut học bệnh viêm gan vịt Câu 41 : Đặc tính sinh học VR PRRS Câu 43: Kể tên phương pháp chẩn đoán bệnh: Newcastle, dại, dịch tả lợn, viêm gan vịt, cúm gia cầm, Gumboro, Đóng dấu lợn Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com B: Trả lời Câu 1: Đặc tính sinh học tụ cầu khuẩn Staphylococcus aureus? Trả lời: Tụ cầu khuẩn: Staphylococcus aureus a Hình thái : -Vi khuẩn hình cầu, đường kính 0,7-1 μm -Không sinh nha bào giáp mô,và thường ko có vỏ, không lông, không di động -Trong bệnh phẩm VK xếp thành đôi, đám nhỏ hình chùm nho -VK bắt màu Gram + b Đặc tính nuôi cấy : -Sống hiếu khí kỵ khí tùy tiện -Nhiệt độ thích hợp : 32 – 370C, pH : 7,2 – 7,6 Dễ mọc môi trường nuôi cấy thông thường *Các môi trường -Nƣớc thịt : Sau 5-6h VK làm đục, sau 24h môi trường đục, lắng cặn nhiều, màng -Thạch thƣờng : Sau 24h khuẩn lạc to dạng S, mặt ướt, bờ nhẵn, VK sinh sắc tố nên khuẩn lạc có màu vàng thẫm loài tụ cầu gây bệnh (aureus) trắng (albus), vàng chanh(citreus) loài tụ cầu có độc lực thấp, không gây bệnh -Thạch máu : Sau 24h vi khuẩn mọc tốt, khuẩn lạc dạng S Tụ cầu loại gây bệnh gây tượng dung huyết -MT Sapman : Phân lập kiểm tra độc lực tụ cầu Thành phần môi trường gồm có (thạch thường 1000ml, clorua natri 75g, mannit 10g, dung dịch Phenon đỏ 4% 3-4 ml) Môi trường từ màu đỏ (pH= 8,4) sang màu vàng (pH= 6,8) tụ cầu gây bệnh Môi trường ko đổi màu ko gây bệnh -MT Gelatin : Cấy VK theo đường chích sâu, nuôi nhiệt độ 200C, sau 2-3 ngày gelatin bị tan chảy trông giống dạng hình phễu - Trên môi trƣờng thạch máu : Tụ cầu có loại độc tố có khả làm tan hồng cầu số loài ĐV gọi dung huyết tố : α : gây tan hồng cầu thỏ 370C, hoạt tử da gây chết Đây ngoại độc tố, chất Protein, bền với nhiệt độ Là KN hoàn toàn, gây hình thành KT kết tủa KT trung hòa tác dụng focmon nhiệt độ biến thành giải độc tố dùng làm vacxin β: gây tan hồng cầu cừ 40C, độc dung huyết tố anpha δ: gây tan hồng cầu người, thỏ, cừu, ngựa, gây hoại tử da γ: loại không tác động lên hồng cầu ngựa Dung huyết tố anpha đặc điểm xác định tụ cầu có khả gây bệnh c Đặc tính sinh hóa : -Chuyển hóa đường: Lên men đường sau :Glucoz, Levuloz, Lactoz, Manit, Saccaroz -Phản ứng catalaza dƣơng tính d Sức đề kháng: -Kém với nhiệt độ: 700 /1h, 800 / 10-30 phút, 1000 C sau vài phút -Các chất sát trùng thông thường diệt VK nhanh chóng -Ở nơi khô VK sống 200 ngày -VK có sức đề kháng nhiệt độ lạnh -Tồn môi trường co nđộ muối 75% e Khả gây bệnh: *Trong tự nhiên: - Tụ cầu thường kí sinh da người gia súc, có 30% người khỏe mang Staphylococcus aureus da, niêm mạc Khi sức đề kháng thể giảm có tổn thương da, niêm mạc, VK xâm nhập gây bệnh - Nhiễm trùng tụ cầu có nhiều biểu khác nhau: + Mưng mủ, apse, viêm cơ, viêm vú + Nhiễm trùng huyết, bại huyết + Hình thành độc tố ruột gây ngộ độc thực phẩm + Mức độ cảm nhiễm gia súc: Ngựa> bò> chó> lợn> cừu Ngoài người cảm nhiễm Chim ko mắc bệnh *Trong phòng TN: - Thỏ cảm nhiễm nhất, tiêm 1-2 ml canh khuẩn tụ cầu 24h vào TM tai, sau 36-48h thỏ chết chứng huyết nhiễm mủ, mổ khám thấy nhiều ổ apxe phủ tạng - Nếu tiêm da cho thỏ gây áp xe da f Cấu trúc kháng nguyên: - kháng nguyên polysaccarit vách phức hợp mucopeptide – axit teichoic Khi gặp kháng thể tương ứng gây nên phản ứng ngưng kết Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - kháng nguyên protein (protein A) thành phần vách phía g Các chất tụ cầu gây bệnh tiết ra: - Các độc tố: +) Nhân tố diệt bạch cầu : + Bạch cầu tính di động, hạt nhân bị phá hủy, vai trò quan trọng chế sinh bệnh tụ cầu +) Độc tố ruột : Có loại, có loại biết : + Độc tố ruột A : tạo chủng phân lập trình nhiễm độc thức ăn + Độc tố ruột B : tạo chủng phân lập bệnh nhân viêm ruột - Các enzyme : + Men đông huyết tương ( Coagulaz) + Men làm tan tơ huyết ( Fibrinolyzin hay Staphylokinaz) + Men Deoxyribonucleaz: thủy phân axit dezoxyribonucleic gây thương tổn tổ chức + Men Hyaluronidaz: tác dụng men Penixilinaz làm cho penixilin tác dụng, chế kháng penixilin Câu 2: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh Staphylococcus gây ra? Trả lời: Gồm có bƣớc: - Lấy bệnh phẩm: +Phải tuân thủ quy tắc tuyệt đối vô trùng để tránh nhiễm VK khác + Dùng tăm lấy mủ dịch viêm ổ mủ vết thương hở + Dùng bơm tiêm hút mủ ổ apxe - Kiểm tra hình thái kính hiển vi: +Làm tiêu bản, đem nhuộm Gram quan sát kính hiển vi +Nếu tụ cầu: VK hình cầu, bắt màu Gram dương, tụ lại thành đám hình chùm nho - Nuôi cấy vào môi trường thích hợp:Bệnh phẩm nuôi cấy vào môi trường nước thịt, thạch máu, thạch Sapman - Tiêm ĐV thí nghiệm: * Dùng thỏ để gây bệnh +Để xác định tụ cầu gây bệnh phải dựa vào tính chất sau: + Lên men đường manit + Sinh sắc tố + Có dung huyết tố anpha + Có men Coagulaz + Một số trường hợp phát Dezoxyribonucleaz Fibrinolyzin Câu 3: Đặc tính sinh học Streptococcus suis? Trả lời: Liên cầu khuẩn: Streptococcus suis Hình thái: -VK hình cầu bầu dục, o van đường kính 0,5-1 μm Đôi có vỏ -VK xếp thành chuỗi ngắn( tùy thuộc vào điều kiện môi trường) -Không sinh nha bào, không di động, có lớp giáp mô mỏng bên VK Đặc tính nuôi cấy: -VK hiếu khí hay yếm khí tùy tiện( môi trường thiếu O2 phát triển mạnh), mọc tốt mt thong thường -Thường kí sinh đường ruột gia súc -Nhiệt độ thích hợp: 370C; pH= 7,2-7,4 - Môi trường Nước thịt: VK hình thành hạt Sau nuôi cấy 24h, môi trường suốt, đáy ống có cặn - Môi trường Thạch thường: VK hình thành khuẩn lạc dạng S, khuẩn lạc nhỏ, tròn, lồi, bóng, màu xám Đường kính khuẩn lạc: 1-2 mm VK xếp thành chuỗi ngắn - Môi trường Thạch máu (thỏ,ngựa,cừu): Sau nuôi cấy 24h, VK phát triển tốt, khuẩn lạc dạng S to môi trường thạch thường Những chủng gây bệnh có độc tố, gây dung huyết, môi trường thạch máu làm tan máu: týp β , týp α , týp γ - Trong môi trƣờng thạch máu quan sát đƣợc: + Týp anpha (α): Khuẩn lạc bao quanh vòng hồng cầu nguyên hình màu xanh, xa khuẩn lạc chút có vòng tan máu Liên cầu dung huyết nhóm anpha, độc lực không cao + Týp bêta (β): Bao quanh KL vòng tan máu hoàn toàn suốt có bờ rõ ràng Liên cầu dung huyết nhóm bêta, độc lực cao + Týp gamma (γ):Xung quanh KL ko có thay đổi nào, hồng cầu giữ màu hồng nhạt Liên cầu khả dung huyết, thường VK không gây bệnh Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: Lên men đường sau:Glucoz, Saccaroz, Lactoz , Salixin, trêhaloz - Không lên men đường sau: Mannit, Inulin Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Phản ứng sinh hóa khác: + Indol: âm tính + Không làm đông vón huyết tương ( Coagulaz - ) + H2S: âm tính Cấu trúc kháng nguyên: -KN Polyozit( chất C): KN thân, dựa vào chất “C” khác chia thành nhóm A, B, C, D…R -KN protein( M): liên cầu nhóm A có khoảng 42 type, có 12 type quan trọng hay gây bệnh -Các mucopeptit: làm vách cầu liên cầu cứng rắn, có khả gây độc Các chất liên cầu tiết ra: a Độc tố: - Liên cầu nhóm A sinh độc tố mà chất chúng Protein thường độc tố gây nốt ban đỏ da (liên cầu nhóm B, C gây độc tố này) - Dung huyết tố: +Streptolysin O: Đóng vai trò quan trọng, hầu hết loại liên cầu làm tan máu có độc tố Dung huyết tố hoạt động chiều sâu môi trường oxi ko khí, dễ bị hoạt tính oxi Định lượng kháng thể antistreptolyzin O có giá trị chẩn đoán bệnh liên cầu gây +Streptolysin S: ko có ý nghĩa quan trọng, nhiều loại VK sản sinh độc tố này.Không bị hoạt tính Oxy, có tính kháng nguyên yếu nên ‎ý nghĩa chẩn đoán bệnh b Enzyme: - Men làm tan tơ huyết ( streptokinaz): + Do liên cầu nhóm A, C, G sinh ra, làm tan tơ huyết + Tính kháng nguyên cao, kích thích thể hình thành kháng thể anti streptokinaz +ng ta chế KN từ liên cầu nhóm C, ứng dụng để chữa bệnh Fibrin máu - Streptodornaz: + Làm lỏng mủ đặc liên cầu độc tạo nên + Có loại A, B, C, D chúng có tác dụng có mặt ion Mg2+ - Hyaluronidaz: + Thủy phân axit hyaluronic chất mô liên kết, giúp VK dễ lan tràn + Kích thích thể hình thành kháng thể đặc hiệu, hiệu giá kháng thể thấp nên dùng chẩn đoán bệnh - Diphotpho-Pyridin-Nucleotidaz + men có Các liên cầu A, C, G làm chết bạch cầu - Proteinaz: + Phân hủy protein, tiêm liều cao gây thương tổn tim Sức đề kháng: Liên cầu khuẩn có sức đề kháng với nhiệt độ hóa chất - Nhiệt độ: 700C/ 35-40ph, 1000C/ 1phút - Các chất sát trùng thông thường dễ tiêu diệt liên cầu Tính gây bệnh: a Trong tự nhiên: - có khắp nơi, Chúng cư trú họng ruột, số có khả gây bệnh: - Ở người: nhiễm khuẩn Eczema, mưng mủ phủ tạng, viêm họng, mẩn đỏ vv - Ở ĐV: chứng mưng mủ, bệnh biến chung hay cục bộ( viêm vú) + Ở ngựa: bệnh viêm hạch truyền nhiễm Adenitis Equorum + Ở bò: bệnh viêm buồng vú truyền nhiễm bò sữa, bệnh bại liệt bê + Ở dê: chứng nung mủ, viêm vú, viêm phổi ngoại tâm mạc b Trong phòng thí nghiệm: - Thỏ ĐVTN dễ cảm thụ - Tiêm vào da cho thỏ: Áp xe nơi viêm - Tiêm vào tĩnh mạch hay phúc mạc: thỏ chết nhanh nhiễm khuẩn huyết - Có thể dùng chuột nhắt để gây bệnh Câu 4:Đặc tính sinh học trực khuẩn Đóng dấu lợn? Trả lời: Trực khuẩn đóng dấu lợn: Erysipelothrix rhusiopathiae a Hình thái: - Trực khuẩn nhỏ, thẳng, có cong, kích thước – 1,5 X 0,2 – 0,4 µm - VK lông, không di động, không hình thành nha bào giáp mô, sinh sản trực phân, sống hiếu khí - Từ canh khuẩn già bệnh phẩm lợn mắc bệnh mạn tính thấy VK có hình sợi tơ dài, cong queo - Trong bệnh phẩm VK đứng riêng lẻ hay đôi một, có nằm bạch cầu - Bắt màu Gram + , nhuộm với tất thuốc nhuộm kiềm Anilin Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com b Đặc tính nuôi cấy:VK hiếu khí( sinh trưởng môi trường yếm khí), nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 7,2 – 7,6 - Môi trƣờng nƣớc thịt: sau 24h, môi trường đục trong, lắc có vẩn mây bay trở lại cũ, đáy ống có cặntrắng nhày màu tro Nếu cho thêm đường glucozo 10% huyết vào môi trường VK mọc tốt Chú ý: nuôi lâu nước thịt ra, có giống lại làm môi trường vẩn đục có mùi thối - Thạch thƣờng: sau 24h, VK hình thành khuẩn lạc nhỏ, bóng láng( dạng S) hình tròn, rìa gọn, giọt sương - Thạch máu: Không dung huyết, sau 24 – 48h, thấy xuất khuẩn lạc nhỏ, tròn, óng ánh hạt sương - Thạch huyết 10%: khuẩn lạc nhỏ li ti, giống hạt sương, màu xanh lơ nhạt, nhìn qua ánh sáng thấy khuẩn lạc to có màu xanh lơ rõ, khuẩn lạc nhỏ có màu lơ nhạt - Môi trƣờng packer: hình thành khuẩn lạc nhỏ mịn, dạng S khuẩn lạc dạng R, to hơn, bề mặt không đục -Thạch lỏng: VK phát triển tốt, ko di động - Gelatin: Cấy sâu nuôi 280C sau ngày đường cấy chích sâu thấy VK mọc ngang lôngnhỏ màu xanh tro giống hình bàn chải rửa ống nghiệm Gelatin ko tan chảy, để lâu, mặt gelatin xung quanh vết cấy khô c Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đƣờng: Đặc tính lên men đường thay đổi tủy chủng, phần lớn vi khuẩn lên men đường (glucoz, galactoz, levuloz, mannoz) Không lên men đường: saccaroz, mantoz, arabinoz, xyloz, dechtrin, mantion, socbiton, dunxiton, glyxeron, inositon, trihaloz, inulin, xalixin - Phản ứng sinh hóa: + Phản ứng VP: âm tính + Phản ứng MR: âm tính + Indol: âm tính + Sinh H2S: dương tính + Không sinh ure, không gây dung huyết + Catalase: âm tính d Sức đề kháng: - Vk sống 17-35 năm môi trường dịch thể nút kín miệng ống nghiệm - Trong phủ tạng lợn chết: tháng; lợn chết chôn đất: tháng, Sấy khô Vk chết tuần - Chỗ ẩm, tối 370C: sống tháng - Có ánh sáng mặt trời sống 12 ngày - Nhiệt độ cao dễ dàng giết VK: canh khuẩn đun 700C/ phút; 1000C chết Thịt có VK cắt dày 15 cm phải nấu sôi 1000C/ 2h30ph chưa diệt VK - Những chất hóa học sát trùng thông thường diệt Vk: clorua vôi 1%, NaOH 5%, axit pheic 1% e Tính gây bệnh: - Trong tự nhiên: + Lợn đặc biệt lợn con, lợn 3-4 tháng tuổi năm tuổi mẫn cảm + Loài chim cảm thụ mức độ nặng nhẹ theo thứ tự: Bồ câu, gà, vịt, ngan, ngỗng, vẹt, sáo, chim sẻ + Triệu chứng chim: mào tái, suy nhược, ỉa chảy Bệnh tích: xuất huyết niêm mạc bắp thịt, gan lách tụ máu, sưng to + Trâu, bò, dê, chó mắc + Người mắc: sốt cao, nốt đỏ da, đầu khớp xương hạch sưng - Trong phòng thí nghiệm: + Chuột bạch: cảm thụ Tiêm S.C chuột canh khuẩn 24h với liều 0,3-0,4 ml sau từ 2-6 ngày tuổi chuột bị bại huyết chết, trước chết chuột sợ ánh sáng, viêm sưng giác mạc Bệnh tích: phổi sưng, tụ máu, lách sưng, gan màu tro, nát + Bồ câu: mẫn cảm Tiêm S.C I.M canh khuẩn 24h liều 1ml Sau 3-4 ngày chết Trước chết: chân bại, thở khó Bệnh tích: chỗ tiêm sưng tụ máu, tim sưng, viêm ngoại tâm mạc có tích nước, gan thận viêm tụ máu Có thể tăng độc lực VK qua tiêm truyền nhiều lần qua bồ câu + Thỏ: cảm thụ Tiêm vi khuẩn vào I.V, thỏ chết sau 3-6 ngày, kết ko chắn Câu 5:Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh trực khuẩn Đóng dấu lợn? Trả lời: a Lấy bệnh phẩm: - Thể cấp mạn tính lấy máu tim lách - Bại huyết lấy gan, thận - Mắc bệnh cấp tính bại huyết mà không chết, chuyển sang thể mạn tính lấy tủy sương ( tốt đốt sống 3-5) b Kiểm tra hình thái KHV: - Lấy bệnh phẩm làm tiêu nhuộm gram Vrait thấy VK ngắn, nhỏ, tập trung nhiều bạch cầu - Ở lợn mắc bệnh mạn tính VK có hình sợi dài c Nuôi cấy vào môi trƣờng thích hợp: - Dùng bệnh phẩm cấy vào môi trường Packer tốt - Nếu bệnh phẩm thối đem nghiền với nước sinh lý tiêm S.C bồ câu ( không I.M) sau phân lập VK lấy từ máu tim gan bồ câu chết Nuôi cấy vào môi trường quan sát tính chất mọc, thử phản ứng sinh hóa: VP, MR, Indol, H2S Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com d Tiêm ĐVTN: - Tiêm canh khuẩn hay bệnh phẩm S.C cho chuột bạch, S.C hay I.M cho bồ câu, theo dõi triệu chứng, thời gian chết mổ khám xem bệnh tích Câu 6:Chẩn đoán huyết học bệnh Đóng dấu lợn? Trả lời: có phản ứng để Chẩn đoán huyết học bệnh Đóng dấu lợn -phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính -Phản ứng ngưng kết ống ngiệm -phản ứng ngưng kết nhanh với máu ->Ta thường dung Phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính với máu lợn nghi: đơn giản, dễ ứngdụng a.Nguyên lý:Đối với KN hữu hình( xác VK) gặp KT đặc hiệu VK kết lại với thành đám lớn nhờ cầu nối KT đặc hiệu mà mắt thường quan sát -> tượng ngưng kết trực tiếp a.Phƣơng pháp tiến hành: *Chuẩn bị: -KN: VK đóng dấu lợn tiêu chuẩn pha với nước sinh lý: đậm độ 15 tỷ VK/ ml Được giết chết formol nhuộm màu tím Gientian -KT: máu lợn nghi bệnh Lấy máu tĩnh mạch tai, chống đôngbằng natricitrat 5% lấy huyết *Tiến hành: -Dùng phiến kính sạch: chia phần +1 đầu nhỏ giọt KN ( 0,05ml), giọt máu nghi bệnh +1 đầu nhỏ giọt KN, giọt nước sinh lý ( để đối chứng) -Trộn đều, để 1-2 ph đọc kết -Phản ứng dương tính : VK tập trung thành đám màu tím nước xung quanh, +Phản ứng âm tính : hỗn dịch có màu tím giọt đối chứng Câu 7: Đặc tính sinh học Pasteurella multocida? Trả lời: Tụ huyết trùng: Pasteurella multocida Hình thái: -Cầu trực khuẩn nhỏ, hình trứng hình bầu dục, đầu tròn, kích thước 0,25 – 0,4 x 0,4 – 1,5 µm, -Không có lông, không di động, nha bào hình thành lớp giáp mô thể vật bệnh, khó thấy - Bắt màu Gram âm - Tiêu làm từ bệnh phẩm thấy VK bắt màu xẫm đầu (do tốc độ sinh sản lớn) nên gọi VK lưỡng cực - Tiêu từ canh trùng thấy VK đứng riêng lẻ thành chuỗi ngắn Đặc tính nuôi cấy:VK khí yếm khí tùy tiện, nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 7,2 – 7,4 Mọc yếu môi trường thông thường, môi trường có bổ sung huyết máu VK mọc tốt -Môi trƣờng nƣớc thịt: sau cấy 24h, môi trường đục vừa, lắc có vẩn sương mù lại mất, đáy ống nghiệm có cặn nhầy, mặt môi trường có lớp màng mỏng Môi trường có mùi đặc biệt giống mùi nước dãi khô -Môi trƣờng thạch thƣờng: hình thái khuẩn lạc dạng S nhỏ, suốt long lanh hạt sương, mặt khuẩn lạc vồng Trong môi trường P.multocida phát triển thành dạng khuẩn lạc sau: + Dạng S: Khuẩn lạc dạng trơn, bóng láng, long lanh, mặt vồng, có dung quanh sắc cầu vồng, dạng khuẩn lạc có độc lực mạnh, tạo thành lớp giáp mô nhiều loại khuẩn lạc dạng xù xì + Dạng R: Khuẩn lạc thường dẹt, có rìa nhám xù xì, trơn nhám, có dung quanh màu xanh, dạng khuẩn lạc có độc lực yếu + Dạng M: Khuẩn lạc nhày ướt, có kích thước to nhất, có rìa nhẵn, dung quanh sắc cầu vồng yếu dạng S - Môi trƣờng thạch máu: VK không dung huyết, phát triển tốt, khuẩn lạc to thạch thường Thường dùng để nhân giữ giống VK - Môi trƣờng nƣớc thịt pepton: Sau 24h VK làm đục môi trường, vài ngày sau môi trường trở nên trong, đáy có cặn nhày, lắc khó tan - Môi trƣờng thạch có huyết huyết cầu tố: Gồm: thạch martin: 100ml, huyết cầu tố cừu dê 1/10: 1ml, huyết bò, cừu dê: 4ml Sau 24h, quan sát khuẩn lạc KHV thị giác có hệ số giác X20 góc chiếu ánh sáng đèn 450, khuẩn lạc có tượng phát huỳnh quang, tùy theo độc lực VK mà màu sắc huỳnh quang khuẩn lạc khác nhau: + Nếu VK có độc lực cao: màu xanh mạ chiếm 2/3 diện tích khuẩn lạc phía đèn, 1/3 lại có màu vàng cam Khuẩn lạc gọi dạng Fg ( Fluorescent green) + Nếu VK có độc lực vừa: khuẩn lạc có 1/3 diện tích có màu xanh mạ, 2/3 màu vàng cam Gọi dạng Fo (F orange) + Nếu VK có độc lực yếu: khuẩn lạc không phát huỳnh quang, dạng Nf (No Fluorescent) Hiện tượng phát huỳnh quang xem rõ sau nuôi cấy 24h, để lâu sau 72h huỳnh quang Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Môi trƣờng gelatin: Dọc theo đường cấy trích sâu, VK mọc thành khuẩn lạc mịn, hình hạt, không làm tan chảy gelatin Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đƣờng: + Lên men đường ko sinh đường: glucoz, saccaroz, mannit, sozbit, xylo + Không lên men đường: lactoz, maltoz, arabino, rammo, salixin, dunxid, adonit - Các phản ứng sinh hóa khác: + Indol: dương tính + H2S: sản sinh bất thường, lúc có, lúc không + VP: âm + Catalaz: dương tính + MR: âm tính + Oxydaz: dương tính Thành phần kháng nguyên: *P.multocida phức tạp cấu trúc loại kháng nguyên thay đổi Gồm loại kháng nguyên - Kháng nguyên thân (O): + Đóng vai trò quan trọng trình hình thành miễn dịch vật + Phức hợp protein – lipit – polysaccarit + Đóng vai trò quan trọng việc gây bệnh VK - Kháng nguyên giáp mô (K) : + Tránh thực bào kháng thể + Chia nhóm theo paster Kí hiệu : A, B, D, E, F + VK sinh khuẩn lạc dạng S tạo kháng nguyên K + Cấu tạo thành phần: Protein + polysaccarit + lipopolysaccarit + Có khả gắn kết với thụ thể hồng cầu Tính gây bệnh VK a Trong tự nhiên : - P.multocida gây chứng bại huyết kèm theo tụ huyết, xuất huyết cho gia súc, gia cầm - P.boviseptica gây bệnh THT cho trâu, bò với triệu chứng thủy thũng sưng hạch hầu, viêm phổi Bệnh từ trâu, bò lây sang ngựa Ở nước ta trâu nặng bò Trong ổ dịch thấy trâu, bò rừng, hươu nai, sơn dương, lợn thỏ rừng mắc bệnh - P.suiseptica gây bệnh THT cho lợn, lợn – tháng tuổi mắc nhiều, vật bị bệnh thường có bệnh tích : phổi viêm có nhiều vùng gan hóa, viêm ngoại tâm mạc có tích nước, hạch hầu viêm, thủy thũng Bệnh lợn lây sang trâu, bò gà - P Aviseptica gây bệnh THT cho gia cầm, gà vịt thường bị bệnh hay gây vụ dịch lớn, giết chết nhiều Bệnh tích chủ yếu tim sưng, viêm ngoại tâm mạc, có tích nước, mỡ vành tim xuất huyết, gan tụ máu, có hoại tử điểm đầu mũi kim, đầu đinh ghim, màu vàng nhạt - VK có khả gây bệnh cho người, nhiễm trùng cục bộ, bị ĐV bệnh cắn, cào vết thương bị nhiễm khuẩn b Trong phòng TN : - Chuột bạch thỏ cảm nhiễm : + Với thỏ : tiêm da, phúc mạc tĩnh mạch canh trùng 24h, thỏ chết sau 24 – 48h Bệnh tích thể : nơi tiêm tụ máu, lồng ngực tích đầy nước, lách sưng to, phổi sưng tụ máu, khí quản xuất huyết Sức đề kháng : - VK THT dễ bị tiêu diệt sức nóng, ánh sáng mặt trời chất sát trùng - VK bị diệt đun 580C/20ph, 800C/10ph, 1000C chết - Ánh sáng MT chiếu trực tiếp, diệt VK canh trùng sau ngày - Trong tổ chức ĐV bệnh bị thối nát VK sống – tháng chất sát trùng thông thường diệt VK nhanh chóng : axit phenic 5%, crezit 3%, nước vôi 1%, formol 2% - VK sống lâu sinh sản đất ẩm thiếu ánh sáng có nhiều muối nitrat chất hữu - Trong chuồng nuôi súc vật đồng cỏ VK sống hàng tháng có hàng năm Câu 8: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh tụ huyết trùng gà? a Lấy bệnh phẩm : - Có thể lấy máu tim, gan, lách, tủy xương, phổi, dịch thủy thủng b Kiểm tra KHV : - Tiến hành lấy bệnh phẩm, làm thành tiêu bản, nhuộm Gram Nếu có P.multocida, vi khuẩn nhỏ, ngắn hình trứng, bắt màu thẫm hai đầu, Gram âm, không nha bào, lông, có giáp mô khó phát thấy xem nhuộm Trường hợp bệnh mạn tính hay bệnh phẩm thối khó phát VK KHV, cần đem bồi dưỡng môi trường tiêm ĐVTN c Nuôi cấy vào môi trƣờng thích hợp: Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Cấy vào môi trường nuôi cấy thích hợp, quan sát tính chất mọc xác định phản ứng sinh hóa cần thiết, khả không dung huyết d Tiêm ĐVTN: - Dùng thỏ hay chuột bạch để tiêm - Nếu bệnh phẩm có P.multocida sau tiêm 24 – 48h vào da hay phúc mạc, ĐV chết với bệnh tích tụ huyết, xuất huyết - Mổ khám quan sát bệnh tích Câu 9: Đặc tính sinh học VK brucella? Trả lời: a Hình thái tính chất bắt màu: - Trực khuẩn nhỏ, đầu tròn kích thước 0,6 – 1,5 x 0,5 – 0,7 µm - Không di động, không sinh nha bào, có giáp mô - Bắt màu gram – b Đặc tính nuôi cấy: - Vi khuẩn hiếu khí, nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 6,8 – 7,4 - VK mọc tốt môi trường cho thêm huyết thanh, máu, gan Mọc chậm môi trường nuôi cấy thông thường *các môi trƣờng - Môi trƣờng nƣớc thịt: Đục đều, có váng nhỏ mặt, sau lắng cặn lầy nhầy đáy - Môi trƣờng thạch nƣớc gan: Khuẩn lạc hạt sương, tròn, lồi, ướt, màu sắc - Môi trƣờng thạch huyết đứng: Cấy theo đường trích sâu, sau 3-6 ngày cách mặt thạch 0,5 cm trở xuống VK mọc theo đường cấy 1-2 cm, khuẩn lạc màu trắng, trắng xám - Môi trƣờng khoai tây: Sau 40h, VK mọc thành khuẩn lạc màu nâu -Môi trƣờng gelatin: Không làm tan chảy gelatin c Đặc tính sinh hóa: - Không lên men đường - Có khả phân giải ure nhờ men ureaz - Có khả năg sinh H2S dựa vào tính chất ức chế thuốc nhuộm đặc biệt d Cấu trúc kháng nguyên: - Có phức hợp kháng nguyên: + Kháng nguyên A kháng nguyên M, typ có tượng ngưng kết chéo + Tỉ lệ kháng nguyên A kháng nguyên M typ Brucella khác e Miễn dịch: - Brucellosis có khả miễn dịch, gia súc người mắc bệnh brucella khỏi không mắc bệnh lại - Miễn dịch chống Brucella miễn dịch qua trung gian tế bào, lympho T đại thực bào đóng vai trò thể đáp ứng miễn dịch thể - Các yếu tố: opsonin, ngưng kết tố, kháng thể kết hợp bổ thể hạn chế tác hại VK f Sức đề kháng: - VK có sức đề kháng tương đối cao, điều kiện 00C/8 tháng - Ở 600C/30ph, 750C/5-10ph, đun sôi VK bị diệt ngay( khử trùng sữa 700C/30ph) - Trong nước VK sống từ 5-6 tháng, sữa 6-8 tháng, lông 1,5-4 tháng, phân 45 ngày - Các chất sát trùng thông thường diệt VK dễ dàng: Axit phenic, focmon 4% diệt VK từ vài phút đến 1h, nước vôi 5%/2h g Tính gây bệnh: - Trong tự nhiên: + Ổ chứa VK: dê, cừu, bò, trâu, lợn, chó, thú rừng, loài chim, loài chuột + Bệnh truyền từ đực sang gây sảy thai Con đực, VK xâm nhập vào tuyến sinh dục mắc bệnh thể ẩn + Người mắc chăm sóc ĐV bị sảy thai, tay bị nhiễm VK đưa vào niêm mạc miệng chiếm 70% 30% uống sữa tươi, ăn phó mát tươi bò, dê, cừu, lây ăn rau tươi bị nhiễm khuẩn - Trong phòng thí nghiệm: + Động vật cảm thụ: chuột lang, thỏ, khỉ, chuột nhắt + Gây bệnh tiêm bệnh phẩm hay canh khuẩn S.C hay phúc mạc Sau tiêm gây nhiễm khuẩn huyết, xuất sớm + Nếu tiêm vào phúc mạc sau 10-15 ngày theo độc lực thấy hạch bẹn sưng, nung mủ, tổn thương khớp, xuất mụn lao, nang lao giả lách, gan, hạch, phổi… Câu 10:Chẩn đoán bệnh xảy thai truyền nhiễm Brucellosis phản ứng ngưng kết? Nguyên lý:Đối với KN hữu hình( xác VK) gặp KT đặc hiệu VK kết lại với thành đám lớn nhờ cầu nối KT đặc hiệu mà mắt thường quan sát -> tượng ngưng kết trực tiếp Phản ứng ngƣng kết nhanh phiến kính: phản ứng Huddleson: Phản ứng có tính chất định tính a.Chuẩn bị: Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com -KN Huddleson (KN chuẩn) : Lấy VK Brucella tiêu chuẩn cấy vào môi trường thạch glyxerin có glucoza 48h/ 370C, rửa nước muối 12% nhuộm tím Gientian, giết VK ax phenic -Kháng Thể: dùng huyết gia súc nghi mắc bệnh,huyết phải tươi, trong, không tan máu pha loãng b.Tiến hành: -Dùng kính 30 nhân 25 cm chia 24 ô (cho mẫu huyết khác nhau) - Nhỏ Kháng Nguyên lên phiến kính, sau nhỏ huyết sát cạnh giọt KN pha loãng theo hiệu giá khác -Dùng đũa thủy tinh trộn từ trái qua phải Hơ qua kính lửa đèn cồn1-2ph -Đọc kết sau vài phút ( dương tính, vật mắc bệnh Phản ứng ngƣng kết chậm ống nghiệm: phản ứng Vrait:Có tính chất định lượng a.Chuẩn bị: -Kháng Nguyên Vrait: VK Brucella nước sinh lý pha focmon nồng độ đặc 10 tỷ VK Khi chẩn đoán pha loãng 1/10 với nc sinh lý, có1 tỷ VK/1ml -Kháng Thể: từ gia súc nghi bệnh lấy huyết tươi, trong, không lẫn máu b.Tiến hành: -dùng 10 ống nghiệm đánh số tới 10 Pha loãng huyết từ ống tới 8, có hiệu giasntuwf 1/12,5 tới 1/1600 cộng 0,5 ml hốn dịch KN 1/10 Ống làm đối chứng huyết thanh, ống 10 làm đối chứng KN Khối lg ống 1ml lác mạnh ống ngiêm 1‟, để tủ ấm 37*C 24h, lấy để nhiệt độ phòng thí nghiệm 1h đọc kết • Ngưng kết ++++: nước bên hoàn toàn, lắng cặn nhiều_ giống dù lộn ngược • Ngưng kết +++: nước bên gần hoàn toàn, lắng cặn nhiều • Ngưng kết ++: nước không trong, nước nhiều hạt vẩn, lắng cặn đáy ống • Ngưng kết +: nước không trong, nước nhiều hạt nhỏ lơ lửng, không lắng cặn đáy • Không ngưng kết: hỗn dịch vẩn đục Nếu độ ngưng kết ++ , độ pha loãng 1/200-1/400-> dương tính, vật mắc bệnh Phản ứng ngƣng kết vòng ống nghiệm với sữa: a.Chuẩn bị: -Kháng Nguyên: Hỗn dịch đặc Brucella giết chết focmon, nhuộm đỏ Hematoxylin -Kháng Thể: sữa tươi không tách mỡ gia súc nghi mắc b.Tiến hành: -2 ống nghiệm: làm thí nghiệm, làm đối chứng +cho 1ml sữa gia súc nghi bị mắc bệnh vào ống thí ngiêm, 1ml sữa gia súc khỏe ống đối chứng, nhỏ vào ống vài giọt KN lắc đều, sữa có mầu hồng nhạt +Để 370C/15-40ph, đọc kết quả: •phản ứng Dương tính: bề mặt sữa có vòng đỏ, phía sữa màu hồng • phản ứng Âm tính: sữa màu hồng nhạt giống ống đối chung Câu 11: Đặc tính chung giống Salmonella hình thái, nuôi cấy, sinh hóa, độc tố? Trả lời: Hình thái: - Salmonella trực khuẩn hình gậy ngắn, hai đầu tròn, kích thước 0,4 – 0,6 x – µm - Không hình thành giáp mô nha bào - Đa số loài Salmonella có khả di động mạnh có 7-12 lông xung quanh thân( trừ S.gallinarum – pullorum) - Bắt màu Gram -, bắt màu toàn thân đậm hai đầu Tính chất nuôi cấy: - Salmonella vừa hiếu khí vừa kỵ khí không bắt buộc, dễ nuôi cấy, nhiệt độ 370C, – 420C, pH= 7,6, phát triển pH: – - Salmonella gây bệnh gia súc, sinh trưởng tốt điều kiện hiếu khí, điều kiện kỵ khí Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Không làm tan chảy gelatin *các môi trƣờng : -Môi trƣờng nƣớc thịt: cấy vài đục nhẹ, sau 18h đục đều, nuôi lâu đáy ống nghiệm có cặn, môi trường có màng mỏng -Môi trƣờng thạch thƣờng: Vk mọc thành khuẩn lạc tròn, sáng xám, nhẵn bóng, lồi lên giữa, nhỏ trắng khuẩn lạc E Coli ( đường kính: – 1,5 mm) -Thạch pepton: Sau 1-2 ngày khuẩn lạc hình thành bờ chất dính lầy nhầy xung quanh Thỉnh thoảng có thấy khuẩn lạc dạng R, nhám, mặt không bóng, không đều, mờ.(S.paratyphi B, S.cholerae suis) Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: MT kiểm tra MT nước thịt pepton cho thêm loại đường với tỉ lệ 0,5% chất thị màu xanh bromotymon, tím bromocrezon, đỏ phenon + Phần lớn Salmonella lên men đường có sinh hơi: glucoz, mannit, mantoz, galactoz, levuloz, arabinoz, xyloz, dechtrin, dunxit, ramnoz,…Một số lên men đường ko sinh + Tất Salmonell ko lên men: lactoz, saccarroz - Môi Trường có kali xyanua: tất Salmonella ko mọc -enzimKhử cacboxyn: lyzyn, octinin, acginin - đa số salmonella Không phân giải urê, không sản sinh indol - Phân giải xanh metylen - Catalaz, MR:dương tính ( trừ S.cholerae suis, S gallinarum – pullorum) - H2S: dương tính ( trừ S.paratyphi A, S.typhi suis, S.abortus equi) - Dùng môi trường đặc biệt EMB, Kauffman, SS, để phân lập Sal Độc tố: a Nội độc tố: + Rất mạnh, liều thích hợp tiêm tĩnh mạch VK giết chết chuột bạch, chuột lang 48h Bệnh tích: ruột non sung huyết, mảng payer phù nề, hoại tử + Độc tố ruột gây ngộ độc thần kinh, gây hôn mê, co giật, nội độc tố có hai loại: gây sung huyết mụn loét b Ngoại độc tố: + Hình thành điều kiện invitro nuôi cấy kị khí + Ngoại độc tố tác dụng vào thần kinh ruột + Chế giải độc tố cách trộn focmon 5% để 370C 20 ngày Khi tiêm cho thỏ tạo kháng thể ngưng kết nên thỏ có khả trung hòa với độc tố VK Câu 12: Cấu trúc kháng nguyên giống Salmonella? Cấu trúc kháng nguyên Salmonella phức tạp gồm: -Kháng nguyên O -Kháng nguyên H -Kháng nguyên vỏ K a.Kháng nguyên O: - Rất phức tạp, tìm thấy 65 yếu tố khác Một Salmonella có nhiều yếu tố yếu tố Chia thành 34 nhóm: A, B, C1, C2, C3…………………………………………………………………………………………………………………………… ……… - Mỗi nhóm VK có KN O cấu tạo số thành phần định kí hiệu số La mã + Yếu tố đặc hiệu: loài có + Yếu tố ko đặc hiệu: chung cho vài loài Ví dụ: Nhóm A: ( II, IX, XII) Yếu tố đặc hiệu: II ; Yếu tố ko đặc hiệu: XII Nhóm B: ( I, IV, XII, XXVII) yếu tố đặc hiệu: IV; yếu tố ko đặc hiệu: XII Nhóm D: ( I, IX, XII) yếu tố đặc hiệu: IX; yếu tố ko đặc hiệu: XII b.Kháng nguyên H: -Chỉ có Salmonella có lông ( trừ S.gallinarium – pullorum) -Kháng nguyên H chia làm pha ( Phase): +Pha có tính chất đặc hiệu, gồm 28 loại KN lông biểu thị chữ mẫu Latinh thường: a, b, c, d, f, g, h,…z +Pha ko có tính chất đặc hiệu, ngưng kết với loại khác( gặp Escherichia) , có loại biểu thị chữ số Ả rập 1,2,3,4,5,6 hay chữ Latinh thường e,n,x… c.Kháng nguyên vỏ K: -Kháng nguyên K Salmonella ko phức tạp, có Kn vỏ biết KN Vi có typ S.typhi S.para typhi KN Vi gặp KT Vi gây nên tượng ngưng kết chậm xuất hạt nhỏ -Bản chất KN Vi phức hợp gluxit – lipid – polypeptide gần giống Kháng Nguyên O, Kháng Nguyên Vi không tham gia vào trình gây bệnh Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com -Các chất sát trùng như: xút 2% diệt virus nước tiểu sau 15 phút, nước vôi 10% axit phenic giết chết virus sau 15 phút -Trong chuồng phân, víu bị vô hoạt sau vài ngày(2 ngày) -Trong thịt lợn bệnh & sản phẩm nó, virus trì hoạt tính vài tháng, nguồn lây nhiễm quan trọng e.Tính gây bệnh: *Trong tự nhiên: có loài lơn mắc bệnh DTL -Vius dịch tả lợn gây bệnh cho lợn: lợn nhà, lợn rừng lứa tuổi, lợn bú hay cai sữa mắc nhiều chết nhiều, lợn mắc truyền bệnh cho lợn -Các loài vật khác người không mắc bệnh dịch tả lợn *Trong phòng thí nghiệm: -Lợn cảm thụ với bệnh -Gây bệnh cho lợn con, bệnh xảy giống tự nhiên triệuchứng bệnh tích -Tiêm vius dịch tả lợn cho thỏ & chuột lang gây bệnh thể ẩn -Người ta dùng Vius dịch tả lợn tiêm truyền liên tục cho thỏ trongnhiều đời Độc thỏ tăng lên, độc lực lợn giảmxuống, đến 150 đời giống virus hoàn toàn không độclực lợn giữ đặc tính kháng nguyên.Đây giống virus nhược độc dịch tả lợn qua thỏ dung để chế vacxin Câu 25, Chẩn đoán virus học bệnh dịch tả lợn? Lấy bệnh phẩm: Bệnh phẩm máu lách, hạch lâm ba, tủy xương gia súc nghi mắcbệnh Kiểm tra kính hiển vi -Lấy bệnh phẩm gia súc làm tiêu bản, nhuộm Gram kiểm tra kínhhiển vi Nếu: +Không thấy vi khuẩn nghi mắc bệnh dịch tả lợn túysau chẩn đoán lâm sang xác định bệnh +Nếu có vi khuẩn tụ huyết trùng, phó thương hàn lợn…thì có thểdịch tả lợn ghép với bệnh Tiêm động vật thí nghiệm -Dùng lợn để gây bệnh: lợn từ 3-4 tháng tuổi, lợn khỏe mạnh,không nằm ổ dịch tả lợn, chưa tiêm phòng vacxin dịch tả lợn -Dùng bệnh phẩm 1ml máu 0.5 g lách gia súc nghi mắcbệnh pha thành huyễn dịch tiêm vào da cho lợn Nếu bệnh phẩm có vuruts sau tiêm ngày : lơn trongbệnh phẩm có vius dịch tả lợn a ngày sau tiêm, lợn l ăn,sốt cao 41*C-42*C, giữ vững 4-5 ngày liền, lơn bỏ ăn, táo, phân rắn,có tượng viêm kết mạc mắt,có dử,nước mắt có nhờn chảy Sau tuần lễ, vật tháo,phân lẫn máu có mùi hôi thối đặc biệt Nếu kéo dài thấytriệu chứng thần kinh: ( liệt chân sau) Cuối nhiệt độ hạthấp xuống 35-360C, vật mệt lả & chết - Mổ khám: +Thấy lợn có bệnh tích sau:Niêm mạc miệng, lưỡi, lợi tụ máu, loét +Dạ dày, ruột tụ máu, thấy rõ van hồi manh tràng, ruộtgià , nàn lâm ba loét hình cúc áo có vòng tròn đồng tâm +Lách có tượng nhồi huyết, xuất huyết quanh rìa, láchkhông sưng sưng +Thận xuất huyết thành chấm nhỏ mặt, bể thận ứmáu có cục máu +Trên da đùi, bụng có chấm xuất huyết đầuđinh ghim, hạt vừng, hạt đỗ *Vậy : Kết luận bệnh phẩm có VR DTL Phƣơng pháp làm tăng cƣờng độc lực virus Newcastle: -Dung môi trường tế bào dịch hoàn lợn lớp nuôi cấy virus dịch tả lợn,sau ngày cấy virus Newcastle thấy virus Newcastle nhân lên mạnh mẽ vàgây bệnh tích tế bào -Nếu môi trường tế bào dịch hoàn lợn cấy virus Newcastle viruskhông gây bệnh tích tế bào Điều chứng tỏ virus dịch tả lợn đãlàm tăng độc lực virus Newcastle Câu 26, Chẩn đoán huyết học bệnh dịch tả lợn?( phản ứng trung hòa thỏ,phản ứng kết tủa khuếch tán thạch)? 1.Thí nghiệm trung hòa thỏ: a.Nguyên lý -Virus dịch tả lợn cường độc & Virus dịch tả lợn nhược độc có tính gây bệnh khác nhaucho thỏ lợn, lại có tính kháng nguyên giống Có thể dùng Virus dịch tả lợncường độc tiêm cho thỏ, gây miễn dịch, sau chứng minh tính miễn dịch thỏ đối vớiVirus dịch tả lợn cách tiêm virus nhược độc dịch tả lợn, VR bị kích thích trung hòa có máu thỏ trung hòa nên k gây bện cho thỏ đc b chuẩn bị -bệnh phẩm lách lợn nghi mắc bệnh nghiền với nước sinh lý thành huyễn dịch1/10 & 1/100 , xử lý kháng sinh, diệt tạp khuẩn - thỏ khỏ mạnh chưa tiếp xuacs với viruts DTL c Tiến hành phản ứng Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Thỏ số tiêm 1ml huyễn dịch 1/10 - Thỏ số tiêm 1ml huyễn dịch 1/100 *Sau 5-10 ngày( tb ngày), dung giống virus nhược độc dịch tả lợn pha thành huyễn dịch 1/10 & 1/100 tiêm vào bắp thịt thỏ - Thỏ số tiêm 1ml huyễn dịch 1/10 - Thỏ số tiêm 1ml huyễn dịch 1/100 *Kết :Hai thỏ thí nghiệm phản ứng sốt lấy máu thỏ đem tiêm cho thỏ khỏe mạnh khác, hai thỏ không sốt, điều chứng tỏ virus nhược độc dịch tả lợn bị kháng thể dịch tả lợn trung hòa Kháng thể có bệnh phẩm có virus dịch tả lợn, kích thích thể thỏ sinh Chứng tỏ bệnh phẩm có virus dịch tả lợn *Trong thỏ làm đối chứng: lấy máu, lách lợn khỏe tiêm cho thỏ, sau 5-10 ngày tiêm virus nhược độc dịch tả lợn cho thỏ, thấy thỏ có phản ứng sốt thỏ chưa miễn dịch với virus dịch tả lợn 2.Phản ứng khuếch tán thạch: *Nguyên lý : Trong môi trường Gel, KN KT cách nahu khoảng thạch, chúng khuyeechs tán phía gặp Nếu KN KT tương ứng chúng kết hợp với tạo thành đường tủa quan sát mắt thường or nhuộm màu để thấy rõ a.Chuẩn bị: -Kháng nguyên nghi: bệnh phẩm lợn nghi mắc bệnh nghiền với nước sinh lý có phathem 1-2% axit phenic, lọc qua gạc ly tâm lấy nước -Kháng nguyên dương: chế tạo trên, từ phủ tạng lách, hạch lợn tiêmvirus dịch tả lợn cừng độc -Kháng nguyên âm: chế từ hạch, lách lợn khỏe -Kháng thể: huyết dịch tả lợn chế từ lợn thỏ phương pháp gây tốimiễn dịch b.Phƣơng pháp tiến hành: - Đun chảy thạch 1,5% nước muối sinh lý - Đổ thạch phiến kính, lượng thạch cần dung 0.12 ml/cm2 , để đông thạch - Đục lỗ theo sơ đồ A, đường kính lỗ 3-4mm Khoảng cách trung tâm củacác lỗ từ 5-6mm - Thể tích thành phần phản ứng 0.02ml, cho vào theo sơ đồ A - Sau cho thành phần phản ứng vào lỗ, đặt phiến kính vào hộp ẩm( đĩaPetri với mẫu bong tẩm nước), cho vào tủ ấm 370C 12-24 *Đọc kết quả: -Phản ứng dương tính: kháng thể dịch tả lợn với kháng nguyên nghixuất đường kết tủa trắng -Phản ứng âm tính: kháng thể dịch tả lợn với kháng nguyên nghikhông có đường kết tủa Câu 27, Đặc tính sinh học virus lở mồm long móng? I.Hình thái phân loại: - Virus LMLM loại virus nhỏ nhất, thuộc họ Picornavirideae, virus chứa nhân ARN gồm 800 base, phân tử lượng 8,6 kilodalton, số lắng 140s -Kíchthước từ 10-20 nm, cấu trúc khối, có dạng hình cầu, bề mặt nhẵn -Capxit viruts có 60 capsome, cấu tạo loại pr VP1, VP2, VP3, VP4 Trong VP1 uqyeets định tính KN tính độc VR -Virus LMLM có typ: typ O, A, C, Asia, SAT1, SAT2, SAT3 -Các typ virus LMLM gâynhững triệu chứng lâm sàng giống nhau, không gây miễn dịch chéo cho -O, A, C typs gây bệnh phổ biến giới việt nam phát typ O, A Asia typ thương fgawpj typ O -Các typ LMLM lại chia fnhieeuf biến chủng Viruts LMLM gây ổ dịch rộng lớn, có tính chất quốc gia châu lục ĐV cảm thụ mắc gần 100% Bện có mawth hầu hết giới II.Đặc tính nuôi cấy: - Virus LMLM virus hướng thượng bì, thường nuôi cấy virus tổ chức da thai lợn, thai bò sống - Nếu nuôi cấy Virus LMLM động vật thí nghiệm thỏ, chuột lang, chuột nhắttrưởng thành virus hay bị biến đổi thường đặc tính gây bệnh - Còn nuôi cấy màng niệu nang phôi trứng, có có không - Phương pháp nuôi cấy tốt nuôi Virus LMLM tổ chức thượng bì lưỡi bò trưởngthành, phương pháp cho kết tốt sau nhiều lần tiếp đời, độc lực virus giữđược với bò động vật thí nghiệm - Ngoài nuôi cấy Virus LMLM môi trường tế bào tổ chức, tốt tế bàolấy từ tuyến yên bò lợn, tế bào thận bê thận cừu non dòng tếbào có độ nhạy tương đương, tế bào thận chuột Hamster gọi tắt tế bào BHK( baby hamster kidney) Sau cấy Virus LMLM vào môi trường tế bào để tủ ấm 370C 24, 48, 72 virus làm hủy hoại tế bào nuôi Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com III.Sức đề kháng: -Virus LMLM có sức đề kháng cao với ngoại cảnh, với ánh sánh mặt trời chiếu -trên đồng cỏ virus sống tháng mùa đông, ngày mùa hè, lông gia súcvirus hoạt lực sau tuần lễ, đất ẩm virus sống hàng năm.Với sức nóng virus dễ bị tiêu diệt, từ 30-370C virus sống 4-9 ngày, 500C virusnhanh chóng bị bất hoạt, 700C virus chết sau 5-10 phút.Nhiệt độ lạnh bảo tồn virus sống lâu -Trong phân ủ thành đống, lớp sâu 15cm virus bị diệt sau ngày, sâu 50 cmbị diệt sau giờ, cỏ khô virus sống từ 8-15 tuần với chất sát trùng nhưcrezon 3%, sau 6h virus hoạt lực, clorofoc 1% sau 20 ngày virus độc lực, tốtnhất dùng chất sát trùng mạnh NaOH 1% diệt virus 5-10 phút, focmon 2%diệt virus 6h IV.Tính gây bệnh: -*Trong tự nhiên: Virus gây bệnh chủ yếu cho trâu, bò, dê, cừu, lợn động vật hoang dã bò rừng, trâu rừng, lợn rừng, lợn lòi, lạc đà, sơn dương… - Loài ăn thịt người mắc thường mắc thể nhẹ - Loài động vật móng ngựa, lừa, la; gia cầm, chim không mắc bệnh -Đường xâm nhập chủ yếu đương tiêu hóa, xâm nhập qua vào thể qua vết thương, niêm mạc hô hấp sinh dục cai nhiêm bị xẩy thai -ở ng thường sốt cao, có mụn nhỏ mọc lowijn niêm mạc miệng, mụn nước mọc ngón tay, bàn tay, đùi, chân, vú, mặt -Bệnh léo dài 10 – 20 ngày nặng có theer nôn mửa, ỉa chạy - Trong vùng dịch LMLM trâu bò người ta thấy nhím chuột hươu nai, hoẵng bị chếtnhiều *Trong phòng thí nghiệm:chuột lang, chuột nhắt trắng, chuột đồng, chuột Hamster dễ cảm nhiễm, khía da bàn chân chuột chà xát bệnh phẩm có virus lên sau 12-24h chỗ chà xát có nôi mụn nhỏ, màu đỏ, có thủy thũng, đau chỗ khía, sau 2-3 ngày nhiễm trùng toàn than, có mụn mồm, lưỡi, lợi - Bê đẻ chưa bú sữa mẹ tiêm virus LMLM chết sau 36-48h Câu 28, Đặc tính sinh học virus dại? Hình thái cấu trúc, phân loại: a hình thái cấu trúc -Virus dại thuộc học Rhabdovirideae, nhóm Rhadbovirus, ARN virus -Có hình trụ, đầu tròn, đầu dẹt giống hình viên đạn -Kích thước trung bình virion có chiều dài từ 175 – 180nm, đường kính 70 – 80nm Kích thước thay đổi tùy theo chủng gốc -Nucleocapxit viruts có hình đối xứng xoắn, có đường kính đường xoẵn ốc từ 15 – 18 nm trải chiều dài khoảng 4,2 … chiều rông thay đổi từ 20 – 65 ăng grong - Lõi sợi ARN cuộn lại theo hình xoẵn có đôi cấu trúc pr bám vào sợi ARN Virion có vỏ kép bọc áp xát bề mặt Nucleocapxit *thể negri - Là dấu hiệu bệnh lý đặc trưng bệnh dại -Là hạt nhỏ hình tròn, hình trứng , hình bầu dục, có kích thước 0,5 – 30 nm Định vị bào tương nơ ron thần kinh, chủ yếu sừng Anmon tế bào tiểu não -Nhuộm tiểu thể phương pháp nhuộm Giemsa, chúng bắt mầu đỏ tươi Thể negri đc tìm thấy 80% trường hợp dại b.phân loại - Viruts dại thuộc họ Rhabdovirideae, gồm 200 loài gây bệnh cho loài động vật có xương sống không xương sống -Loài gây bệnh chon g ĐV máu nóng đc chia làm nhóm “ lyssavirus Vesiculovirus + lyssavirus gồm khaongr 80 laoif khác Và có loại serotype : -VR dại gây bệnh tự nhiên gọi VR dại đường phố ( street viruts) chủng cực độc gây bệnh cao cho động vật với thể : Dại điên cuồn dại bại liệt Đặc tính nuôi cấy a.Trên phôi gà -VR thích ứng đc sau nhiều lần nuôi cấy phôi gà -Dùng phôi – ngày tuổi tiêm vào tú long đỏhoặc phôi 13 ngày tuooirtieem vào màng nhung niệu -VR nhân lên mô thần kinh mô khác phôi, hiệu giá tối đa nagyf thứ 9, phôi chận phát triển không chết tế bào thần kinh tìm thấy thể Negri b.Trên môi trƣờng tế bào - VR nhân lên nhiều hệ tế bào, thận chuột nhắt, thận lợn, cho, tế bào xơ phôi gà, tế bào lưỡng bội , tế bào lưỡng bội BHK 21 , tê bào thường trực… phải qua nhiều lần cấy truyền, tác dụng gây hủy hoại tế bào rõ -Trong nuôi cấy tế bào bị nhiễm virus dại phương pháp nhuộm mann, Sellers thấy thể hình tròn, có danh giói rõ rệt thể Nêgry Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com Sức đề kháng: -VR dại mẫn cảm với sức nóng 50*C Viruts bị diệt sau 1h, 60*C 5-10‟, 70*C chết -Nhiệt độ lạnh VR tồn lâu, o*C năm, -70*C tồn nhiều năm, đc bảo quản tốt dd glyxerin 50% -VR bị bất hoạt ánh sáng mặt trời, tia cực tím, tia X… Nếu làm khô chạm nơi ánh sáng VR yếu nhanh chóng, làm khô nhanh VR giữ khả truyền nhiễm Tính chất miễn dịch: - bị nhiếm VR dại thể tạo kháng thể khác như: KT kết tủa, KT trung hòa, KT cố định bổ thể, … -Việc tìm kháng thể dặc thù không giúp ích cho việc chuẩn đoán huyết học bệnh dại, bệnh tiến triển nhanh chóng dẫn đến tử vong Phương pháp tôt có vai trò quan trong việc chuẩn đoán phát sớm bệnh dại gia súc kỹ thuật kháng thể huynh quang Khả gây bệnh: *Trong tự nhiên: tất loài đv máu nóng mắc bệnh, loài đv chó mèo, trâu bò, ngựa lơn, lặc đà ĐV hoang dã chó sói, mèo rừng, mẫn cảm chó mẫn cảm nhất, người mẫn cảm - Chó chó sói nguồn lây bệnh chủ yếu bệnh truyền trực tieeos qua vết cawbs VR nhiếm vảo thể qua vết thương, vết cắn gần dây thần kinh nguy hiểm (90% người mắc bệnh chó cắn, số lây qua đường hô hấp) thời gian nung bệnh dài hay ngắn phụ thuộc vao chủng viruts vết cắn gần hay xa hệ thần kinh trng ương *Trong phòng thí nghiệm: -Tốt dung thỏ, sau chuột bạch, chuột lang, chuột đất vàng -Dùng thỏ: tiêm viruts vào não thỏ qua đương giác mạc vào tiềm phòng or hậu phòng mắt tùy đường tiêm thời gian ủ bệnh khác Có biểu hiên: co giãn đồng tử mắt – Rối loạn hô hấp – liệt chân – vật lả kiệt sức chết -Dung chuột : tiêm viruts qua đường não time ủ bệnh 8-15 ngày Xuât triệu chứng : long dựng đứng, hình thành cục bướu cộ sống bị kích thíc mạnh -Với chuộ lang xuất hiên triệu chứng kích đọng hán, cắn, liệt toàn thân chết Chất chứa virus: VR dại có tính hướng than fkinh, VR cư trú hệ thần kin : não, tủy sống nhiều sừng Ammon, chất xám vỏ não, đặc biệt tuyến nước bọt có động lực sớm thời kỳ chó nguồn beenhjnguy hiểm Cấu tạo kháng nguyên typ huyết thanh: *pr VR dại đc chia làm loại +pr nucleocapxit hình thành kháng nghuyên nội môi +pr bề mặt hình thành kháng nguyên bề mặt Câu 29, Chẩn đoán bệnh dại phản ứng miễn dịch huỳnh quang ( phƣơng pháp trực tiếp gián tiếp)? Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp: - Dùng kháng thể đặc hiệu nhuộm màu để phát kháng nguyên nghi dại - Chuẩn bị kháng nguyên chẩn đoán: dung bệnh phẩm não, nước bọt áp kính vàovùng sừng Ammon động ật nghi mắc bệnh dại, cố định tiêu ete hơnóng lửa đèn cồn - Chuẩn bị kháng thể đặc hiệu nhuộm huỳnh quang: dung virus dại gây tối miễndịch cho thỏ, lấy máu chắt huyết thanh, tách phần gamma globulin có huyếtthanh miễn dịch đem nhuộm màu thuốc nhuộm huỳnh quang - Tiến hành phản ứng: sau cố định kháng nguyên tiêu bản, nhỏ 1-2giọt kháng thể đặc hiệu chống dại nhuộm màu huỳnh quang lên tiêu bản, để ở370C 30 phút, đem rửa nước, làm khô, quan sát kính hiển vi huỳnh quang + phản ứng dương tính: kháng thể tương ứng với kháng nguyên, kết hợp sẽphát sáng + phản ứng âm tính: kết hợp kháng thể kháng nguyên, khôngphát sáng, bệnh phẩm virus dại Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp: - Kỹ thuật không dùng kháng thể đặc hiệu nhuộm màu huỳnh quang, mà dùng khángthể kháng gamma globulin loài vật dùng để chế kháng thể đặc hiệu đem nhuộmmàu huỳnh quang Như kháng thể đặc hiệu có chức năng, chức kháng thểđối với kháng nguyên cần chẩn đoán chức kháng nguyên kháng thểgamma globulinnhuộm màu huỳnh quang Như cần nhuộm màu kháng thể kháng gamma globulincó thể chẩn đoán nhiều bệnh truyền nhiễm - Chuẩn bị kháng nguyên chẩn đoán: giống phần chuẩn bị phản ứng trực tiếp - Chuẩn bị kháng thể kháng gamma globulin: dùng gamma globulin thỏ tiêm cho gàtrống, sau 2-3 tuần lễ máu gà có nhiều kháng thể chống gamma globulin củathỏ, lấy máu gà chắt lấy huyết thanh, tách phần gamma globulin, thu kháng thể kháng gamma globulin thỏ Kháng thể chắn kết hợp đặc hiệu vớigamma globulin thỏ, đem nhuộm màu kháng thể - Tiến hành phản ứng: sau cố định kháng nguyên tiêu bản, nhỏ 1-2 giọt khángthể đặc hiệ, kháng thể kháng nguyên tương ứng, chúng kết hợp chặt chẽ vớinhau, không phát sáng xem kính kháng thể đặc hiệu Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com không nhuộmmàu Nhỏ tiếp 1-2 giọt kháng thể kháng gamma globulin nhuộm màu lên tiêu đểtác động thời gian rửa nước, để khô, quan sát kính hiển vi huỳnh quang sẽthấ phát sáng có kết hợp tầng, tầng 1: kháng thể kháng nguyên đặc hiệu, tầng 2: kháng thể đặc hiệu với kháng gamma globulin, phản ứng dương tính Kết luận bệnh phẩm có chứa virus dại.Trong trường hợp kháng nguyên nghi không tương ứng với kháng thể đặc hiệu bệnh dại kết hợp tầng 1, nhỏ kháng thể kháng gamma globulinnhuộm màu lên tiêu bản, kháng thể kháng thể bị trôi rửa nước, nên khiquan sát kính hiển vi huỳnh quang không thấy phát sáng, phản ứng âm tính, bệnh phâm rkhoong chứa virus dại Câu 30.Đặc tính sinh học virus Newcastle? a.Hình thái, phân loại, độc lực: *Virus Newcastle thuộc họ Paramyxovirideae.Cấu tạo xoắn, hình tròn, hình trụ, hình sợi, kích thước vỉon củavirus từ 120-130 nm, trung bình khoảng 180 nm *Virus có loại protein cấu trúc: -(HN): đặc tính ngưng kết hồng cầu có hoạt tính menNeuraminidaza tác dụng cắt đứt thụ thể hồng cầu - lien hợp tế bào bị nhiễm virus với để tao thành tế bào khổng lồ đa nhân -large – protein (L): chưa rỗ chức -Matrice protein( M): gắn ARN virus với vỏ bọc - phosphor nucleoprotein (NP): hình ống dài xoắn nhiều vòng, chưa rõ chức - nucleoprotein(N): protein kiềm bảo vệ ARN virus -Các đơn vị cấu trúc protein xắp xếp quanh trục, rỗng theohình xoắn ốc, bên axit nucleic định hình dạng virus -Vỏ bọc virus lipid nên vỉion mẫn cảm với chất hòa tannhư ete, cồn, clorofoc, mectiolat -Virus qua màng lọc Berkerfeld, Chamberland màng lọcSeitz -Virus có khả làm ngưng kết hồng cầu: gà, bò người, chuột bạch,chuột lang, không làm ngưng kết hồng cầu ngựa, đặc tính đểphân biệt với virus dịch tả gà, virus dịch tả gà lại làm ngưng kết hồngcầu ngựa -Virus Newcastle có nhiều chủng, có động lực khác nhau, chia nhóm: +Nhóm Velogen : chủng có độc lực cao, VR cường đọc tự nhiên +Nhóm Méogen : chủng có động lực vừa, VR gây bệnh cho gà +nhóm Lentogen : chủng có động lực thấp, ko có khả gây bệnh, or gây bệnh nhẹ cho gà nở b Đặc tính nuôi cấy *Nuôi phôi gà: -Dùng phôi gà ấp 9-10 ngày tuổi, têm viruts xoang niệu đạo mô, thời gian gây chat ohooi tùy thuộc vào động lực viruts ( động lực cao phôi chết 60h chủng động lục thấp phôi chết 100h) Bệnh tích phôi xuất huyết da đầu, chân cánh -Đặc điểm quan trọng sau cấy truyền đời qua phôi thai gà nhiều lần ngta thu đc giống VR Newcastle Nhược độc dung chế tạo vác xin phòng bệnh *Nuôi cấy môi trƣờng tế bào: VR nhân lên tốt môi trường tế bào thận lợn, thận khỉ, tế bào xơ phôi gà Sau 24 tới 72 h gây nhiễm, tb bị hoại tử (CPE) chủ yếu hinh thành Syncitium, làm cho tế bào bị biến đổi hình thái, tb co tròn lại vỡ tao thành tế bào khổng lồ *Nuôi cấy động vật cảm thụ : dung gà giò để tiêm truyền, với chủng viruts cường độc Bện phát giống bệnh tự nhiên c Khả gây bệnh *trong tự nhiên: gây bệnh cho loài gà, gà tây, bồ câu, chim se, vịt, ngan ngỗng cngx mắc nhẹ Gà moi lứa tuổi mắc cảm thụ gà Người nhiễm viruts, nung bệnh 1-4 ngày, sốt cảm mạo *Trong phòng thí ngiệm: thường gây nhiễm cho gà giò, phôi gà ấp 9-11 ngày sau tiêm gà có triệu chứng bệnh giống bệnh tích gà mắc bệnh tự nhiên Có thể dung chim bồ câu gây bệnh tiêm vào bắp thị sau 6-8 ngày bồ cau tê liệt, sau 15-16 ngày chết Dung chuột tiêm vào phúc mạc, chuột chết sau 3-6 ngày d.Sức đề kháng: -Có màng bao bọc lipit nên rễ mẫn cảm với chất hóa học ete, clorofoc, cồn… -VR Newcastle có sức đề kháng yếu tự nhiên -Ở 60*C viruts bị diệt 30‟, 100*C diệt 1‟ 4-20*C VR tồn tháng Nhiệt độ âm VR tồn hang năm -khả chịu nhiệt chủng Newcastel đặc tính di truyền , chủng khác chịu nhiệt khác -các chủng chịu nhiệt tồn 25 – 30*c 2-3 tháng, 56*C 6h chủng V4 -các chất sát trùng thong thường diệt vi khuẩn nhanh chóng -Rễ bị diệt tia tử ngoại, dd glycerin 50% giữ vi khuản khả gây nhiễm e khả tạo miễn dịch Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Kháng nguyên VR Newcastle gồm có loại protein : HN, F, L, M, NP, N có kháng nguyên: Fusion protein (F), haemagglutinin – neuraminidaza (HN) nẳm lớp vỏ VR có khả sản sinh kháng thể đặc hiệu Kháng thể HN, F kháng thể trung hòa, riêng KT HN KT ức chế -KT đặc hiệu vi rút tạo phụ thuộc vào loại KN VR đưa vào thể Nếu KN VR Newcastle vô hoạt kháng thể sinh chậm thương 10-14 ngày thời gian tồn kháng thể ngắn 3-4 tháng Kháng nguyên VR Newcastle sống kháng thể sinh nhanh thường 6-7 ngày thời gian tồn lâu từ 6-12 tháng Câu 31, Trình bày phƣơng pháp làm phản ứng HA( nguyên lý, mục đích cách tiến hành) ? *nguyên lý : Do capxit vk có bán kn Haemagglutinin – Neuraminidaza (H)N có kháng nguyên gắn với thụ thể hồng cầu làm hồng câu dính kết với sau cắt đứt thụ thể hồng cầu để chúng lại rời *Mục đích : -Xác định viruts có khả gây ngưng kết hồng cầu - Xác định nòng đọ virtus cao hay thấp -Xác định đơn vị ngưng keetsdungf cho phản ứng HL *Cách tiến hành a.Chuẩn bị hồng cầu gà 1% -Lấy 10 ml máu tim gà them ml xitrat natri 5% để chống đông máu -Rồi quay ly tâm chohồng cầu lắng xuống,hút bỏ bạch cầu huyết tương ,rồi cho nước sinh lý vào rửa lạiquay ly tâm,hut bỏ phân nươc trên,rồi lại cho nước sinh lý vào rửa,xong lại quayly tâm hút phân nước đi(rửa nước sinh lý lần )chỉ giữ lại hồng cầu,cuối pháhồng cầu 1% với nước sinh lý b.Chuẩn bị nƣớc trứng có chúa virust Lây óc gà nghi mắc bệnh Newcaslte nghiền thành huyễn dịch 1/10 với nước sinh lý,khửtạp khuẩn kháng sinh cấy vào xoang niệu mô phôi gà 10-12 ngày ,ấp tiếp ở370c sau 2-4 ngày phôi chết(tùy theo độc lựa mầm bệnh)lấy để tủ lạnh từ 0-4oc trong4 để mạch máu co lại ,sau hút lấy nước trứng,thử vô trùng cách cấy trêncác môi trường ,nước trứng giữ tủ lạnh đƣợc 3-6 tháng c.Phƣơng pháp tiến hành phản ứng Dùng ống thí nghiệm ống đối chứng: -Cho vào ống thí nghiệm thứ 0,9ml nước sinh lý,các ống lại từ ống đếnống ống cho 0,5 nước sinh lý -Cho vào ống nghiệm thứ 0,1 ml nước trứng có chứa virust ,trộn ,lắc đềuống nghiệm thứ hút 0,5 ml từ ống thư chuyển sang ống thứ lại trộnđều ống thứ xong hút 0,5 ml tứ ống thứ chuyển sang ống thứ 3,trộn hút 0,5 mlchuyển sang ống thứ 4vaf làm ống thư hút bỏ 0,5ml Như vậylần lượt ta co hiệu giá pha loãng nước trứng tứ đống thứ tới ống thứ 8laf:1/10 ,1/20 ,1/40, 1/80, 1/160 ,1/320 ,1/640,1/1280 -Cuối cho hồng cầu gà 1% vào tất ống ,mỗi ống 0,5ml ,lắc đều,trộn đềucác ống phút để yên 15-20 phút đọc kết -Ông thứ ống đối chứng có 0,5 ml nước sinh lý có 0,5ml hồng cầu gà ,dođó hồng cầu gà không bị ngừng kết mà lắng xuống đáy ống thành cục máu tònđỏ,nước phản ứng âm tính -Phản ứng dương tính hồng cầu ngừng kết thành hạt lấm màu đỏ(thànhquầng đỏ rạn nứt đáy ống nghiệm,hiệu giá ngừng kết đọc ống ngừng kết cuối ,trước ống không ngừng kết).Độ pha loãng virust lớn mà có tượng ngừng kết hồng cầu thìgọi đơn vị HA - Để yên 15-20 phút, xem kết quả, dùng gương phẳng đặt phía đáyống nghiệm để xác định hiệu giá ngưng kết +Phản ứng dương tính : hồng cầu ngưng kết (NK) nằm dải thàng mảng đáy lỗ +Hiệu giá ngưng kết : độ pha loãng viruts lớn có tượng ngưng kết hồng cầu rõ +Phản ứng âm tính: Hồng cầu lắng xuống đáy cục mầu đỏ nước bên Câu 32, Trình bày phƣơng pháp làm phản ứng HI để giám định virus Newcastle virus cúm gia cầm? *nguyên lý : Kháng thể đặc hiệu vs viryts có huyết thanh, gặp khabf snguyeen tương ứng , phản ứng trung hòa xảy VR bị kháng thể trung hòa không khả ngưng kết hồng cầu *Ứng dụng: -chuẩn đoán bệnh -Giam định VR cúm gia cầm VR Newcastle -Định lượng hàm lượng cá thể có máu gà để đánh giá mức độ miễn dịch gà sử dụng vaxcin -Xác định time tái chủng vác xin 1.Chuẩn bị: -Kháng thể nghi: viruts phân lập đc có gây ngưng kết hồng cầu đc pha ở; hiệu giá đơn vị HA với viruts Newcastle, hiệu giá đơn vị với VR cúm gia cầm Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Pha kháng huyết Newcatle kháng huyết dịch tả gà nồng độ: 1/10, 1/20, 1/40, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280 - Pha nước trứng có chứa virus hiệu giá ngưng kết đơn vị HA Tức tăng sốlượng virus lên lần hay gọi đơn vị ngưng kết hồng cầu làm để: nếutrong huyết kháng thể Newcatle phản ứng HA chắn xảy - Hồng cầu gà 1%: +Lấy 10 ml máu tim gà them ml xitrat natri 5% để chống đông máu +Rồi quay ly tâm chohồng cầu lắng xuống,hút bỏ bạch cầu huyết tương ,rồi cho nước sinh lý vào rửa lạiquay ly tâm,hut bỏ phân nươc trên,rồi lại cho nước sinh lý vào rửa,xong lại quayly tâm hút phân nước đi(rửa nước sinh lý lần )chỉ giữ lại hồng cầu,cuối pháhồng cầu 1% với nước sinh lý -Kháng thể chuẩn : +KT Newcastle +kháng thể cúm gia cầm 2.Phƣơng pháp tiến hành phản ứng: - Dùng dãy ống nghiệm ngưng kết, dãy cho ống thí nghiệm thêm ống đốichứng dương đối chứng âm Bước 1: - Dãy thứ cho huyết Newcatle vòa ống lượng 0.25ml, cáchiệu giá pha loãng khác từ ống đến ống 1/10, 1/20, 1/40, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280 - Dãy thứ hai cho huyết dịch tả gà vào ống lượng 0.25ml, cáchiệu giá pha loãng khác từ ống đến ống 1/10, 1/20, 1/40, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280 *Bƣớc 2: -Cho vào tất 16 ống nghiệm dãy thí nghiệm, ống 0.25ml nước trứng cóchứa virus hiệu giá đơn vị ngưng kết hồng cầu -Lắc dãy huyết virus trộn lẫn vào nhau, để yên 5-10 phút Bƣớc 3: -Cho vào tất ống dãy thí nghiệm, ống 0.5ml hồng cầu gà 1% -ở ống đối chứng dương cho vào 0.25ml nước trứng; 0.5ml hồng cầu gà 0.25mlnước sinh lý -ở ống đối chứng âm cho vào 0.5ml hồng cầu gà 1% 0.5ml nước sinh lý.Tất ống nghiệm ống đối chứng có khối lượng 1ml.Lắc tất ống để yên vòng 15-20 phút đọc kết -Nếu bên ngưng kết hồng cầu kết luận có virus tương ứngvới huyết -Nếu dẫy ngưng kết hồng cầu gà kết luận nước có chứacả loại virus dịch tả gà Newcatle Câu 33 Chuẩn đoán viruts học bệnh Newcastle *Bệnh phẩm -Não gà nghi bị bệnh, pha với nước sinh lý thành huyễn dịch 1/10 -Xử lý kháng sinh để diệt tạp khuẩn : ly tâm lây nước hay tiêm qua phôi gà ấp -11 ngày, phôi chết, mổ trứng thu nươc trứng để chuản đoán *Tiêm động vật thí nghiêm -Dùng gà giò đủ tiêu chuẩn để gây bệnh -Tiêm 1ml huyễn dịch bệnh phẩm hay 0,5 ml nước trứng nghi vào bắp thịt, đùi, hay da gà -Nếu bệnh phẩm có viruts sau tiêm – ngày có triệu trứng: ủ rũ, long xù, sã cánh, mắt lim dim, đứng co chỗ, đứng chân, ăn uống nước nhiều, sốt cao bình thường từ 1*C – 1,5 *C, ỉa chảy, phân xanh có bọt, miengj đầy nước dãi dính quanh, dốc ngược chân gà lên có nhiều nước dãi chảy mùi chu khám, – ngày sau gà khó thở mào xám, hay ngáp, ngày 6-7 thân nhiệt hạ gà chêt -Nếu bệnh tích kéo dài gà có triệu chứng thần kinh : siêu vẹo, giật lùi, đầu cổ co giật, mổ không trúng thức ăn, quay quanh chỗ, xác gầy dần chết *Mổ khám thấy: -Dọc theo niêm mạc đườn tiêu hóa: miệng, hộng, thực quản phủ chat snhownf mầu trắng xám hay màu vàng nhạt có xuất huyết điểm -Dạ dày tuyến xuất huyết điểmtạo thành vành đai đoạn đầu hay cuối cuống mề, cạy thấy có vết loát phủ bực vàng, bóc màng mề thấy có đám mầu đỏ có chất nhớt -Niêm mạc ruột non ,Tổ chức lympho niêm mạc xuất huyết loét thành đám hình tròn, hình bầu dục -Niêm mạc ruột già, trực tràng, hậu môn tụ máu xuất huyết mảng dài Câu 34: Dặc tính sinh học viruts gumboro a.Hình thái cấu trúc -VR gumboro hay gọi VR viêm túi huyeeth truyền nhiễm thuộc họ Birnavirideae giống Birnaviruts -Là loại VR trần, vỏ bọc Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com -Có cấu tạo hình khối dda diện kích thước từ 50 – 70 nm, VR chứa ARN sợi cuộn tròn phân làm đoạn riêng biệt( birnaviruts) -Capxit có 32 capxome, đc tạo thành loại pr có câu strucs khác : VP1, VP2, VP3, VP4, VP5(viral protein) -Trong VP2, VP3,là lạo Pr chủ yếu mang tings kháng nguyên đăc hiệu +Loại pr có kháng nguyên kích thích thể sin kháng thể kêt tủa, đc gọi kháng nguyên đặc hiệu nhóm (GS – Group specific) +Loại pr có tính kháng nguyên kích thích sinh kháng thể trung hòa đc goi kháng nguyên đặc hiệu typ (TS- Typ specific antigen) -Sự thay đổi cấu trúc VP2 dẫn đến thay đổi tính kháng nguyên khả gây bệnh VR -Các change gumboro đc xác định khác phân tử VP2 -Hiện phát đc VR gumboro có serotyp +Serotyp gây bệnh cho gà +Serotyp gây bệnh cho gà tây -giữa typ ko có niễn dịch chéo Trong serotype tính tương đồng có 30%-Khi xác đinh serotype ơhair dựa sỏ phản ưng trung hòa b.Đặc tính nuôi cấy: *Trên phôi gà: -Cấy VR vào màng niệu đệm, xoang niệu, phôi gà ấp 10 – 11 tuổi -Phôi chết sau gây nhiễm 3-5 ngày -Bệnh tích : gây xưng huyết phổi, thùy thũng vùng bụng, có điểm xuất huyết da, vùng da đùi, đầu bền sườn phải phôi, gan xưng có điểm xuất huyết hoại tử *Trên môi trƣờng tế bào -Trên môi trường tế bào xơ phôi gà, xơ phôi vịt, thận thỏ, thận khỉ -Sau vài lần cấy chuyển viruts thích ứng gây hủy hoại tế bào: tế bào biến dạng, co tròn -VR gây hủy hoại tế bào sau 48 – 98h gây nhiễm -Nếu cấy chuyển liên tiếp nhiều lần qua môi trường tế bào độc lực viruts giảm dần sử dụng làm vaxin *Trên gà thí nghiệm -Nuôi cấy VR gà 3-6 tuần tuổi -Sau 2-3 ngày VR nhân lên quan lympho , đăc biệt túi fabricius, làm tú bị viêm, sưng, tổ chức túi bị phá hủy biến màu, tăng kích thước trọng lượng - Ngoài biểu hện gà có triệu chứng lâm sang bệnh tích đăc trưng bệnh gumboro -VR gumboro cấy truyền nhiểu lần gà 3-6 tuần tuổi động lực VR đc tăng cường c.Sức đề kháng -VR có sức đề kháng coa tự nhiên -VR bị vô hoạt ph =2 ph =12 -ở 56*C VR chết 5h, 60*C chết 30 „, 70*C chết nhanh chóng -Các chất hóa học thong thường diệt đc VR -Trong phân rác, chất độn chuồng chuồng gà bị nhiễm VR tồn rấ lâu, đay nguồn tang chữ VR dẫn tới việc bệnh xảy lưu cữu quanh năm d Khả gây bệnh *trong tự nhiên: -Gà, gà tây đc coi loại nhiễm bệnh nhất, tất gống gà mắc -Tỉ lệ chết 10-30 %, ghép với bệnh khác tỉ lệ gà chết cao -Bệnh thường xảy gà tuwe 3-6 tuần tuổi, có trường hợp xớm ( 11 ngày tuổi ) muộn (2o ngày tuổi), thiệt hại kinh tế lớn gà qua khỏi, gà bị còi cọc chậm lớn, không phát triển, mặt khác hệ thong miến dịch là túi fabricius bị phá hủy, bị teo phần mât HOÀN tàn hoạt động miễn dịch, đãn tới giảm miễn dịch or khả nawg đáp ứng miến dịch -Gà chăn nuôi tập trung rễ mắc gằn chăn nuôi nhỏ lẻ -Trong thể bệnh VR tập trung nhiều túi fabricius, sau lách, thận ác quan phủ tạng khác -Sau vào hệ tiêu hóa VR vào máu đến túi fabricius , Vr nhân lên nhanh công phá hủy tế bào lympho B chin chưa chin -Khi tb B bị phá huyrsex gây tương suy giảm miễn dịch dịch thể, gà rễ mắc bệnh truyền nhiếm khác -Gà nhỏ tuổi bị nhiễm VR hậu lại nặng nề *Trong phòng thí nghiệm -Dùng phôi gà ấp 10 -11 ngày gà 3-6 tuần tuổi để gây bệnh thực ngiệm, sau gây bệnh gà có bệnh tích gioongs bệnh tích gà mắ bệnh tự nhiên Câu 35: Chuẩn đoán viruts học bệnh gumboro *Bệnh phẩm: -là túi fabricius lách gà bị bệnh -Ngiền với nước sinh lý theo tỉ lệ 1/5 or 1/10 Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com -Đong tan 2-3 lần , xử lý kháng sinh -Ly tâm lấy nươ gây bệnh cho gà *Động vật thí nghiệm -chon gà 3-4 tuần tuổi , đủ tiêu chuẩn gây bệnh -Dùng bệnh phẩm nhỏ vào miệng, mắt, hậu môn cho gà Nếu bệnh phẩm có viruts sau 2-3 ngày gà có biểu hiên bệnh *Triệu chứng -Triệu chứng sớm thấy ddc gà quay mở lại gãi vào phao câu -Sau gà ủ rũ, bỏ ăn, lạo hướng, xù long, ỉa chảy phân trắng, loãng toàn nước lấn máu -Gà sốt cao, than nhiệt giảm, gà nằm liệt chết nước nhiều *Bệnh tích: -Chủ yếu túi fabricius +Túi biến đổi kích thước, hình dạng đọ bền, mầu sắc +Túi bắt đầu xưng, phù thũng, có bã đậu, phù ngày thứ 2-3, tới ngày thứ túi xưng to gáp 3-4 lần, ngày tứ 5-6 túi trở lai kích thước trọng lượng bình thường, sau teo dần ngày thứ trọng lượng túi 1/3 so với bân đầu +Xuất huyết ngực đùi, ruột tăng sinh dày lên *KẾT LUẬN: bệnh phẩm có VR gumboro Câu 36:đặc tính sinh học vr cúm gia cầm( Avian Ingluenza Virus) Trả lời: *phân loại:Virus cúm gia cầm có tên Avian Ingluenza Virus, thuộc họ Orthonyxoviridea - gâybệnh cho loài chim, số dv có vũ lây xag người - họ Orthonyxoviridea có nhóm : typ a, typ B, typ C Thogotoviruts -VR cúm gọi A VR cúm thứ gọi B, VR cúm thư gọi C Hình thái, cấu trúc: - Vr cúm gia cầm thuộc họ Orthonyoviridae, type A -Vr có dạng hình cầu, dạng sợi, kích thước đường kính hạt VR 80 – 100nm, phân tử lương = 25 triệu dalton - VR cúm có hệ gen sợi ARN , dài 10.000 – 15.000 nucleotide, phân thành – đoạnmang mật mã cho 10 loại protein cấu trúc khác viruts - Capsit bao quanh sợi ARN, mang KN H N, mang 1KNmàng M1 KN có khả kết hợp với bổ thể hòa tan NS - Vỏ bao bọc ngoài, chất lipit Đặc tính nuôi cấy: *Trên phôi gà : -VR nhân lên dễ dàng, dùng phôi – 11 ngày tuổi 13 ngày tuổi Ttiêm VR vào túi ối or niệu mô -vr nhân lên tế bào biểu mô màng ối màng túi ối -xâm nhập vào phôi gây chết phôi sau 24 – 48 h - bệnh tích vr gây xuất huyết nặng toàn phôi *Môi trƣờng tế bào: -Có thể nuôi cấy VR tế bào thận khỉ, thận phôi người, thận chuột lang -ít sử dụng phương pháp hoặt tính gây nhiếm hiệu giá viruts giảm dần cấy chuyển nhiều lần, không gay hủy hoại tế bào *Trên động vật cảm thụ - Động vật cảm thụ dùng gây nhiễm cho chồn, chuột nhắt, phương pháp khôngđược sử dụng Cấu trúc kháng nguyên:cấu trúc kháng nguyên VR cúm phức tạp có kháng nguyên nawmd capxit cảu VR - Kháng nguyên H (Hemaggnutinin) : +gây ngưng kết hồng cầu gần 20 loài động vật, phân nhiều loại từ H1,H2, H3….H15, giúp vr bám vào tế bào xâm nhập vào bên +Ngta hay dung hồng cầu gà, hồng cầu ng có nhóm máu O hồng caaud chuột lang để phát viruts pứ ngưng kết hồng cầu HA -Kháng nguyên (Neuraminidara) N: + Là loại enzyme làm tách cầu nối axit neuraminic với plysecasrit để giả phóng axit neuraminicvà phá hủy thụ thể mucoprotein +cónhiều loại từ N1, N2… N9, giúp vr khỏi tế bào xâm nhập vào tế bào khác +đối với lây nhiễm 2KN : H N CÓ VAI TRÕ LỚN GIÖP VR gây bệnh: Kháng nguyên H giúp VR xâm nhaapk vào bên tế bào Kháng nguyên N giúp VR khỏi tb lan sang tb lành khác Sự biến đổi gen: Bệnh cúm đv VR cúm ttyp A gây nặng nhất, gây đại dịch a, biến đổi nội gen: khả nguy hiểm vr - Là thay đổi nucleotide đoạn gen Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Những thay đổi thường xảy phân đoạn gen mã hóa cho KN H KN N - Thay đổi số cấu trúc nu sợi ARN tạo dòng vr tránh phần Miễn Dịch có quần thểĐV vụ dịch cúm trươc tạo b, Sự trao đổi gen: - Khả nguy hiểm vr - Gây tượng vr tái tổ hợp gen với dòng vr cúm khác đồng nhiễm vào cơthể tạo dòng vr hoàn toàn mới, tránh hoàn toàn MD có quần thể -Đây trowe ngại lớn việc ngiên cứu vacxin phòng bệnh cúm cho ng động vật Khả gây bệnh độc lực VR *Khả gây bệnh a, tự nhiên : -Vr cúm type A có khả gây bệnh cho chim, động vật có vú -ở người VR cúm A gây bệnh thường VR có KN h từ H1 Tới H3 Các chủng VR cúm phổ biến là: A/ H1N1, A/H2N2, A/H3N2 Ngaoif người mắc bệnh cúm VR cúm Typ B, C -Ở gia súc :lợn , ngựa, đà điểu mẫn cảm với vr cúm type A -Với loài chim : gà, gà tây, loại chim cảnh, ngan , ngỗng mẫn cảm với viruts Trong gà mẫn cảm nhất, non mẫn cảm -Thủy cầm loài mang trùng -Nuôi gia cầm lẫn thủy cầm : nguy mắc bệnh gấp lần b phòng thí nghiệm: -Không gây bệnh đông vật cảm thụ,chỉ gây bệnh phôi môi tế bào *động lực -Đối với nhóm vr có độc lực cao (HPAI) +Gà động vật mắc bệnh nhất, tỉ lệ chết 100%., thời gian nung bệnh từ vài tới ngày +Bệnh phát triệu chứng đa dạng: điển hình chết đột ngột, chết nhạnh, chếtnhư trúng độc +Gà có biểu sốt cao, ủ rũ,da chân xuất huyết, thâm tím, có biểu khó thở, hắt hơi, viêm kết mạc +Xưng phù đầu, mào sưng phù thâm tím, triệu chứng thần kinh: co giật, xoaytròn, giật lùi *Bệnh tích: xuất huyết toàn đường tiêu hóa, tuyến tụy -Đối với nhóm vr độc lực thấp (LPAI) +Triệu chứng lâm sàng biểu hiện, tỉ lệ gia cầm chết thấp +Nếu gia cầm kế phát số vi khuẩn độc lực vr tăng lên, chúng biếnchủng thành chủng có độc lực cao, nguy hiểm cho vật nuôi.và người *Bệnh tích: viêm xoang cata, vieemnhej đường hô hấp, phù khí quản, ruột viêm cata Sức đề kháng: -giacầm: gà, gà tây, ngan ngỗng mắc bệnh, thủy cầm mang trùng -Vr không bền nhiệt độ 560C , chết 1000C Ở 40C nước trứng vr tồn tháng, phân gà 40C vr tồn được35 ngày.ở -70*c làm lạnh bảo quản viruts lâu dài -Thịt gà lạnh 23 ngày vr khả gây bệnh -Chất sát trung thông thường có khả diệt vr Câu 37: đặc tính sinh học vr dịch tả vịt ( Pestis anatum virus) Trả lời: vr gây bệnh truyền nhiễm cấp tính, gây tử vong cao cho vịt, ngan ngỗng thiên nga Phân loại vr: - Là loại ADN virus thuộc họ Herpesvirideae nhóm Herpes - Có nhiều chủng có độc lực khác tự nhiên - Không có khả gây ngưng kết hồng cầu Hình thái kích thƣớc: - Gần tròn, có vỏ bọc bên lõi - Sau 24h xâm nhập vào tế bào, thấy hạt virus nhân nguyên sinh chất - Thể vùi nhân tập hợp hình thù, giống bụi - Trong nhân tế bào có không vùi xuất khoảng trống, đócó virus hay tập hợp virus có capxit hình cầu sáu cạnh Nucleocapxitcó Ф = 93,5 nm - Khi vào nguyên sinh chất, đường kính hạt virus tăng đến 136nm - Khi vào không bào virus thành thục có đường kính 250nm Chất chứa virus : - Trong thể vịt bệnh , vius có máu, dịch nội tiết, quan nội tạng,nhiều gan, lách, não - Vịt bệnh thải virus qua phân dịch xuất - Nguồn nước nhiễm virus, động vật thủy sinh chứa virus time định có vai trò chuyền bệnh Đặc tính nuôi cấy: Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com *Nuôi cấy phôi: - Nuôi cấy vr màng niệu đệm hay xoang niệu mô thai vịt ấp 12 ngày - Sau – ngày phôi chết với bệnh tích: + Xuất huyết da vùng lưng, rìa cánh, đầu, … + Gan, tối có điểm xuất huyết hoại tử + Màng nhung niệu sưng dày lên - Nếu tiếp truyền 12 đời liên tiếp phôi gà, từ đời thứ ba phôi gà chết sau 4- 5ngày tiêm vào màng niệu đệm chết sau 6- ngày tiêm vào xoang niệumô - Khi gây nhiễm phôi gà vr nhược độc nhân lên mạnh , chứa nhiều xoang niệuđệm nước niệu, túi long đỏ vr - Vr cảm nhiễm với phôi ngỗng ấp 12 ngày tuổi giết chết phôi sau 3- ngày -Người ta dung chủng vr nhược độc qua phôi để chế vacxin *Nuôi cấy tế bào: - Sử dụng tế bào xơ phôi vịt, ngan, gà lớp - Sau ngày gây bệnh phương pháp quan sát p-lê-cơ ngta nhân thấy pleco bắt đầu hình thành phát triển tối đa sau ngày *Nuôi cấy động vật cảm thụ: -VR thích ứng môi trường nuôi tb xơ phôi gà , sau 24h tb bắt đầu có tượng hủy hoại, bệnh tích tb chủ yếu tượng tế bào bị biến dạng, co tròn, phình to ra, tập trung thành dám, nhìn rõ kinh shieenr vi quang học Tính gây bệnh: a, tự nhiên: - Vịt loài cảm nhiễm lứa tuổi giống vịt, loài thủy cầm khác bị mắcbệnh - Biểu hiện: +vịt ngại xuống nước bị liệt chân, bại cánh, +đầu xưng to,sốt ăn, phù thũng hàm, mí mắt sưng chảy nước mắt, sau đócơ mi dính lại có nhiều dử mắt - Sau tuần vịt chết kiệt sức, xác gầy - Bệnh tích mổ khám: + phân dính bết hậu môn + toàn niêm mạc đường tiêu hóa xuất huyết, có vết loét rõ rệt + gan sưng tích máu có nhiều điểm hoại tử trắng b, phòng thí ngiệm: - Gây bệnh cho vịt con, ngỗng con, ngan gà ngày tuổi - Các động vật thí nghiệm khác thỏ, chuột, chim bồ câu không cảm thụ với bệnh - Đường gây nhiễm chủ yếu đường tiêu hóa, gây bệnh nhân tạo tiêm vrdưới da, bắp thịt tĩnh mạch nhỏ mũi Sức đề kháng : - Mẫn cảm với chất làm tan mỡ Cồn 75 độ diệt viruts 5-30‟ - Bất hoạt mt pH < pH> 10 - nhiệt độ cao đề kháng kém: 30oC chết sau 2h,70oC/20‟ 80oC/5‟ - Nhiệt độ lạnh : bảo quản thời gian dài Câu 38: chẩn đoán virus học dịch tả vịt: a.Bệnh phẩm - Lấy bệnh phẩm gan lách, phủ tạng b.Làm tiê soi kính hiển vi: Dùng bệnh phẩm máu phủ tạng làm tiêu quan sat kính hiển vi quang học phát có VK Pasteurella, Salmonella hay VK khác cần thận ko thể kết luận VR dịch tả vịt bệnh ghép với VK c.Tiêm động vật thí nghiệm: *Gây nhiễm cho vịt: - Gây nhiễm cho vịt 0,6 – 1kg, đủ tiêu chuẩn - Ngiền bệnh phẩm với nước sinh lý nồng độ 10-20%, xử lý kháng sinh với liều 500-1000 UI penixilin, 200 mg streptomyxin cho 1ml, để 4*C 6h sau tiêm cho vịt khỏe vào da hay bắp thịt -Nếu bệnh phẩm có VR sau 2-3 ngày vịt bắt đầu sốt, thân nhiệt len tới 43-44*C , vịt ủ rũ, ăn, xù long, xã cánh, khắt nước -Đén ngày thứ hai chân mềm, mí mắt xưng, chảy nước mắt, lúc đầu niêm dịch sau dử đặc mầu vàng - Ngày thứ 5, bại chân, ỉa chảy, Ngày thứ – vịt kiệt sức chết ♦ Bệnh tích: - Xuất huyết da đầu, lưng , bụng, vết xuất huyết lấm giống muỗi đốt Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com - Niêm mạc thực quản bị viêm, xuất huyết,có màng giả màu vàng, có vết loét to hatk đậu xanh,Dạ dày tuyến có chất nhày mủ, xuất huyết, ruột viêm cata, xuất huyết cóvết loét -Gan sưng tụ máu, có điểm hoại tử trắng, mật sưng, lách có chấm hoại tử, xoangbao tim có nước vàng -Ngoại tâm mạc có điểm xuất huyết, phổi sưng, bụng thấy dịch thẩmxuất màu vàng ♦ Kết luận :Bệnh phẩm có viruts dịch tả vịt *Gây nhiễm cho phôi vịt: - Tiêm huyễn dịch 10 – 20 % liều 0,2 ml cho phôi vịt 12 ngày tuổi vào xoangniệu Sau – ngày, bệnh phẩm có vr, phôi chết ♦ Bệnh tích: Xuất huyết thủy thũng da tổ chức da, gan hoại tử, màng nhung niệu phủ dày.ở lần tiêm đầu tiên, tỉ lệ chết chưa cao, tiêm thêm nhiều lần vr thích nghi giết chết toàn phôi gây nhiễm Câu 39: đặc tính sinh học vr viêm gan vịt.(Duck Hepatitis Virus) Phân loại hình thái: a, phân loại :Có tuýp khác nhau: *Tuýp 1: - Thuộc họ Picornavideae, kích thước 20 – 40 nm - Gây bệnh chủ yếu giới tỉ lệ chết 80 - 85% *Tuýp 2: - Là cistrovirus, chủ yếu gây bệnh Anh, kích thước 28 – 30 nm - Gây bệnh cho vịt từ 10 ngày – tuần tuổi - Tỉ lệ chết 10 – 50 % *Tuýp 3: - Thuộc Picornarideae riêng biệt với tuýp - Gây bệnh chủ yếu Mỹ - Kt : 30nm, gồm vr có độc lực thấp - Tỉ lệ chết 10 – 30% b.Hình thái cấu trúc - Nhân 1ARN, - Vỏ capxit gồm 32 capsom, - Vr có hình cầu,kt nhỏ, bề mặt xù xì, vỏ bọc bên - Không có Khả gây ngưng kết hồng cầu - Không có MD chéo với VR viêm gan người vr dịch tả vịt Đặc tính nuôi cấy: a Nuôi cấy phôi: *Nuôi cấy phôi vịt: - VR viêm gan vịt thích ưng streen phôi vietj 10-14 ngày tuổi phôi gà 8-10 ngày tuổi -Đường gây nhiếm tốt xoang niệu - Phần lớn phôi gà chết sau 5- ngày , phôi vịt sau 24 – 48h - Bệnh tích: phù phôi, xuất huyết nặng vùng đầu, da, tứ chi Gan sưng, có xuất huyết, bề mặt gan có nhiều hoại tử mầu vàng b Nuôi cấy môi trƣờng tế bào: - Dùng tế bào xơ phôi gà, xơ phôi vịt, thận phôi gà - Sau – ngày gây bệnh tích tế bào: phá vỡ màng tế bào, tan NSC lại nhântế bào c Nuôi cấy động vật cảm thụ: - Nuôi cấy vr vịt đủ tiêu chuẩn từ 1- ngày tuổi cảm thụ Trên VR bệnh phát giống tự nhiên - Gây bệnh tích đặc trưng Sức đề kháng: - Sđk cao, không mẫn cảm với chất làm tan mỡ - Nhiệt độ: 37*C tồn 48h, 50*C /1h, 6*C / 30p, 4*C /2 năm, -20*C /9 năm - Trong tự nhiên tồn thời gian dài, phân vịt, chất độn chuồng tồn trong10 tuần - Chất sát trùng thường phải có nồng độ cao, thời gian tác dụng lâu diệt Tính gây bệnh: *Trong tự nhiên: - Vịt 1-3 tuần tuổi mắc bệnh chủ yếu gặp vịt nở or vịt 5-6 tuần tuổi - Vịt trưởng thành cà loài gia cầm khác không mẫn cảm - Ngan có khả mắc bệnh -ở vịt 1-3 tuần tuổi xảy ác liệt với tỉ lệ chết 50-90% *trong phòng thí ngiệm -Dùng vị or phôi vịt để gây nhiễm Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com Câu 40:Chẩn đoán virut học bệnh viêm gan vịt *Bệnh phẩm: - gan vịt nghi bệnh, gan , lách , máu *Làm bệnh phẩm - nghiền nát với nước sinh lý thành nồng độ 20% - xử lí kháng sinh - li tâm lấy nước - xử lí với chloroform 5%/10p‟ *Kiểm tra kính hiển vi *Tiêm động vật thí nghiệm: vịt 1-7 ngày tuổi, phôi vịt 10-14 ngày tuổi -Gây nhiễm cho phôi: +dùng phôi vịt 10-14 ngày tuổi,liều 0.2ml/phôi, tiêm virut vào xoang niệu mô +nếu có virut phôi chết vòng 24-48h với bệnh tích đặc trưng: phù phôi, xuất huyế nặng, gan xưng, xuất huyết điểm -Gây bệnh cho vịt con: +Đây phương pháp có độ tin cậy cao +Mỗi mẫu bệnh phẩm pha với nồng độ 1/10 tiêm cho 6-10 vịt độ tuổi 1-7 ngày với liều 0.2ml/con +Nếu có VR sau 1-3 ngày vịt có triệu chứng:bỏ ăn,buồn ngủ.sã cánh.ỉa chảy,niêm mạc xanh tím, vịt nằm ngửa,co dật,chân duỗi thẳng,đầu ngoẹo sang bên sườn lưng( tưthế chết đặc trưng bệnh) - Mổ khám thấy bệnh tích: + Chủ yếu tập trung Gan: gan sưng,xuất huyết lốm đốm gan,xuất huyết thànhđám,vệt nốt xuất huyết đầu đinh ghim mầu đỏ, nhỏ li ti lan tràn khắp bề mặt gan, tổ chức gan bị thoái hóa + Ngoài thấy: tim nhợt nhạt bị luộc chin, màng bao tim túi khí bịviêm Thận tụ huyết nhẹ, lách sưng Câu 41 : Đặc tính sinh học VR PRRS a.phân loại -Là VR thuộc họ arterivilidae -Có chủng nguyên mẫu( prototype) + Chủng Bắc Mĩ VR 2332 + Chủng Châu Âu Lelystad VR ( LV) Gây bệnh ĐV cảm thụ với bệnh cảnh giống có cấu trúc KN khác biệt vào khoảng 40% b.Hình thái: +Hạt VR có đường kính 50 – 70 nm + Nucleocapsid kích thước có cấu trúc đối xứng 20 mặt đường kính 35 nm + Bao bọc bên ngaoif lớp vỏ đính chặt với cấu trúc bề mặt Nucleocapsid nên trông hạt vi rút giống tổ ong c.Cấu trúc : + Bộ gen : phân tử ARN đơn chuỗi dương, kích thước 13-15 kb + Sợi ARN virus có cổng đầu 5‟ dải cổng đầu 3‟ + Gen ARN Polimeraza chiếm khoảng 75% đầu 5‟ hệ gen + Gen mã hoá cho protein cấu trúc Vr nằm đầu 3‟ + Hệ gen VR có ORF( Openreadeng frame) mã hóa cho loại pro cấu trúc + phân tử kháng thể có khả trung hòa phân tử glycoprotein, phân tử pr màng (M) phân tử pr vỏ(N) d.Nuôi cấy : thể vật bệnh VR nhân lên tế bào đại thực bào phương pháp nuôi cấy áp dụng : ĐV môi trường nuôi cấy dòng tế bào đại thực bào(TB ĐTB) lợn e.Động lực VR : tồn dạng + Dạng cổ điển : động lực thấp, tỷ lệ chết thấp 1-5% tổng đàn + Dạng biến thể động lực cao : gây nhiễm làm chết nhiều lợn.Sự khác biệt đa dạng tính KN, khả biến đổi cấu trúc KN VR làm tăng them khó khăn việc sản xuất Vacine f.Sức đề kháng + VR tồn năm nhiệt độ lạnh từ -20oC đến -70o C, 4oC tháng Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com + Với nhiệt độ cao PRRSV có sức đề kháng 37oC 48h, 56oC 1h + Khoảng pH mà VR tồn 6.5 – 7.5 + Ánh sáng môi trường tia tử ngoại vô hoạt VR nhanh chóng, dung môi hòa tan chất béo dễ dàng phá hủy + Các thuốc sát trùng thông thường diệt VR Trong ổ dịch sử dụng để tiêu độc, sát trùng: Iodin 4%, Cloramin 23%, NAOH 3% g.Khả gây bệnh + PRRSV bệnh riêng cho loài lợn: giống lợn nhà, lợn rừng cảm nhiễm, nắc lứa tuổi mẫn cảm lợn lợn nái mang thai + Lợn rừng nhiễm VR thường dấu hiệu lâm sàng -> nguồn dịch thiên nhiên + Trong chăn nuôi công nghiệp bệnh lây lan nhanh, rộng, tồn lâu đàn lợn nái, khó toán, lợn nái mắc bệnh thường truyền cho bào thai gây chết, xảy thai + Người động vật khác không mắc bệnh + Thủy cầm chân màng vịt trời mẫn cảm với VR PRRSV nhân lên loài động vật -> nguồn reo rắc mầm bệnh diện rộng h.Cơ chế sinh bệnh +VK xâm nhập vào thể lơn theo nhiều đường : hô hấp, tiêu hóa, nội đường âm đạo Sauk hi xâm nhập đích công VR cac ĐTB +Đây TB có Receptor phù hợp với cấu trúc hạt VR VR hấp thụ thực hiên trình nhân lên lạo tế bào phá hủy +Ở lợn tỉ lệ lớn TB ĐTB nang phổi bị xâm nhiễm sớm phá hủy làm giảm khả phòng vệ phổi +PRRSV kích thích tăng sinh ĐTB 2-3 ngày VR giết chết chúng Virion đc giải phóng oy ạt xâm nhiễm xang tế bào khác tiwwps tục trình nhân lên phá hủy ĐTB thể lơn ốm có 40% số lượng TB ĐTB bị viruts giết chết -Triệu chứng tùy thuộc : nhiễm lần đầu hay lần sau, sức đề kháng biến đổi VR… +Đực giống: Kém ăn, sốt lừ đừ Số lượng, chất lượng tinh dịch giảm, tinh shawng sinh dục giảm +LLợn theo mẹ: yếu ớt, bỏ bú Mắt có nghèn nâu, da phồng dộp iả chảy, thở mạnh, chân choãi, run rẩy tăng tỉ lệ chết +Lơn nái: biếng ăn, sốt lừ đừ, sảy thai, sữa, tăng tỉ lệ heo sơ sinh bị loại bỏ, giảm tỉ lệ thụ thai Thời gian lên giống trở lại kéo dài Câu 43: Kể tên phương pháp chẩn đoán bệnh: Newcastle, dại, dịch tả lợn, viêm gan vịt, cúm gia cầm, Gumboro, Đóng dấu lợn? 1.Newcaste a Chuẩn đoán VR học -Tiêm động vật thí ngiệm -Thí nghiệm trung hòa +Trên gà thí ngiệm +Trên môi trường TB tổ chức phôi thai gà ĐVTN b Chuẩn đoán Huyết học -Pứ ngưng kết hồng cầu (HA) -Pứ ngăn trở ngưng kết hồng cầu(Hi) 2.Dại a.chuẩn đoán VR học -Kiểm tra thể Negri -Tiêm ĐV thí nghiệm b.Chuẩn đoán huyết học -Phản ứng miễn dịch huỳnh quang : Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp gián tiếp 3.Dịch tả lợn(DTL) -Chuẩn đoán VR học -Chuẩn đoán huyết học +TN trung hòa thỏ +P.ứ kết tủa khuếch tán thạch +Phản ứng ngưng kết gián tiếp HC +Phản ứng miễn dịch huỳnh quang Viêm gan vịt a.Chuẩn đoán virut học b.Chuẩn đoán huyết học -P.ứ trung hòa -P.ứ kết hợp bổ thể -P.ứ AGP -P.ứ ELISA Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com 5.Cúm gia cầm a.chuẩn đoán vr học b.Chuẩn đoán huyết học - Phản ứng HI - Phản ứng AGID - Phản ứng ELISA - Kĩ thuật IF -Ngoài chuẩn đoán VR cúm = pứ RT_PCR ( Reverse Transcription – Polymerase chain Reaction) Gumboro: a.chuẩn đoán vr học b.Chuẩn đoán huyết học -Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch (AGID) -Phản ứng trung hòa virus -Phản ứng miễn dịch đánh dấu ELISA -Pứ AGP (Agar Gell precipitation test) đóng dấu lợn a.chuẩn đoán vr học b.Chuẩn đoán huyết học -Pứ ngưng kết -Pứ miễn dịch huỳnh quang *Thường sử dụng pứ ngưng kết nhanh phiến kính 8.PRRS: a chuẩn đoán lâm sang: dựa vào triệu chứng lâm sang bệnh tích đặc trƣng b chuẩn đoán huyết học - Phản ứng ELISA - Phản ứng kháng thể huỳnh quang gián tiếp ( IFA) - Phản ứng PCR phân tích từ máu lấy giai đoạn đầu bệnh để xác định có mặt virus THE END Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com [...]... loại - Viruts dại thuộc họ Rhabdovirideae, gồm 200 loài gây bệnh cho các loài động vật có xương sống và không xương sống -Loài gây bệnh chon g và ĐV máu nóng đc chia làm 2 nhóm “ lyssavirus và Vesiculovirus + lyssavirus gồm khaongr trên 80 laoif khác nhau Và có 4 loại serotype : 1 2 3 4 -VR dại gây bệnh trong tự nhiên gọi là VR dại đường phố ( street viruts) là chủng cực độc gây bệnh cao cho động vật. .. chứng dương cho vào 0.25ml nước trứng; 0.5ml hồng cầu gà và 0.25mlnước sinh lý -ở ống đối chứng âm cho vào 0.5ml hồng cầu gà 1% và 0.5ml nước sinh lý.Tất cả các ống nghiệm và ống đối chứng đều có khối lượng là 1ml.Lắc đều tất cả các ống và để yên trong vòng 15-20 phút rồi đọc kết quả -Nếu bên nào không có ngưng kết hồng cầu thì kết luận có virus tương ứngvới huyết thanh đó -Nếu cả 2 dẫy đều ngưng kết... thước và trọng lượng bình thường, sau đó teo dần ngày thứ 8 trọng lượng túi còn bằng 1/3 so với bân đầu +Xuất huyết cơ ngực và cơ đùi, ruột tăng sinh dày lên *KẾT LUẬN: bệnh phẩm có VR gumboro Câu 36:đặc tính sinh học của vr cúm gia cầm( Avian Ingluenza Virus) Trả lời: *phân loại:Virus cúm gia cầm có tên là Avian Ingluenza Virus, thuộc họ Orthonyxoviridea - gâybệnh cho mọi loài chim, 1 số dv có vũ và. .. không bào thì virus thành thục và có đường kính 250nm 3 Chất chứa virus : - Trong cơ thể vịt bệnh , vius có trong máu, dịch nội tiết, các cơ quan nội tạng,nhiều nhất ở gan, lách, não - Vịt bệnh thải virus ra ngoài qua phân và dịch bài xuất - Nguồn nước nhiễm virus, động vật thủy sinh cũng chứa virus trong 1 time nhất định và có vai trò chuyền bệnh 4 Đặc tính nuôi cấy: Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email:... 1 tuổi: Vk gây vi m dạ dày ruột, gây nhiễm độc, vi m túi mật, bàng quang, đường niệu sinh dục và vi m não, đôi khi nhiễm khuẩn huyết trầm trọng *Trong phòng TN: Tiêm S.C chuột bạch, chuột lang, thỏ có thể vi m cục bộ, liều lớn gây bại huyết, giết chết con vật Câu 14: Đặc tính sinh học của trực khuẩn phó thương hàn lợn? Trả lời: VK đc phân lập đầu tiên ở lợn con vào năm 1885 do salmon và smith a Hình... nhập vào tế bào, thấy các hạt virus trong nhân và nguyên sinh chất - Thể vùi trong nhân là những tập hợp không có hình thù, giống như bụi - Trong nhân tế bào có hoặc không có thể vùi xuất hiện những khoảng trống, ở đócó những virus hay tập hợp virus có capxit hình cầu hoặc sáu cạnh Nucleocapxitcó Ф = 93,5 nm - Khi vào nguyên sinh chất, đường kính của hạt virus tăng đến 136nm - Khi vào không bào thì virus... gọi là giống viruts nhược độc DTL qua thỏ, dung để ché vacxin Cấu trúc kháng nguyên và cấu trúc ARN của virus dịch tả lợn rất giống với virus gây bệnh tiêu chảy ở bò và virus gây bệnh Border ở cừu, do vậy cần lưu ý phân biệt trong chẩn đoán huyết thanh học d.Sức đề kháng: -Dưới tác nhân vật lý, khả năng vô hoạt của virus phụ thuộc phần nào vào chất chứa trung gian -Trong môi trường tế bào, vius bị mất... hamster kidney) Sau khi cấy Virus LMLM vào các môi trường tế bào này để tủ ấm 370C trong 24, 48, 72 giờ virus sẽ làm hủy hoại tế bào nuôi Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com III.Sức đề kháng: -Virus LMLM có sức đề kháng cao với ngoại cảnh, với ánh sánh mặt trời chiếu -trên đồng cỏ virus sống ít nhất 2 tháng về mùa đông, 2 ngày về mùa hè, trên lông gia súcvirus còn hoạt lực sau... cầu và huyết tương đi ,rồi cho nước sinh lý vào rửa lạiquay ly tâm,hut bỏ phân nươc trong ở trên,rồi lại cho nước sinh lý vào rửa,xong lại quayly tâm hút phân nước trong đi(rửa nước sinh lý 3 lần )chỉ giữ lại hồng cầu,cuối cùng pháhồng cầu 1% với nước sinh lý b.Chuẩn bị nƣớc trứng có chúa virust Lây óc gà nghi mắc bệnh Newcaslte nghiền thành huyễn dịch 1/10 với nước sinh lý,khửtạp khuẩn bằng kháng sinh. .. trong đất ẩm virus sống hàng năm.Với sức nóng virus dễ bị tiêu diệt, từ 30-370C virus sống 4-9 ngày, 500C virusnhanh chóng bị bất hoạt, 700C virus chết sau 5-10 phút.Nhiệt độ lạnh bảo tồn được virus sống lâu -Trong phân ủ thành đống, ở lớp sâu 15cm virus bị diệt sau 7 ngày, sâu 50 cmbị diệt sau 9 giờ, trong cỏ khô virus có thể sống từ 8-15 tuần với các chất sát trùng nhưcrezon 3%, sau 6h virus vẫn còn ... gia vào trình gây bệnh Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com * ngày ng ta biểu thị chúng công thức kháng nguyên, ví dụ : S VI, VII: C- 1,5 công thức S cholera suis Câu. .. làm phản ứng Câu 24, Đặc tính sinh học virus dịch tả lợn? Trả lời : viruts dịch tả lơn : Pestis suum visrus a.Hình thái cấu trúc: -Là thành vi n họ Togavirideae, thuộc giống Pestisvirus - ARN... cấy Virus LMLM vào môi trường tế bào để tủ ấm 370C 24, 48, 72 virus làm hủy hoại tế bào nuôi Đinh Công Trƣởng K55 – TYD Email: dinhcongtruong1311@gmail.com III.Sức đề kháng: -Virus LMLM có sức đề