1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

NGHIÊN CỨU VÀ THỬ NGHIỆM CHẾ TẠO THIẾT BỊ VI LƯU CHO KỸ THUẬT PCR

50 562 1

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 50
Dung lượng 5,51 MB

Nội dung

Trong công nghệ sinh học đã có rất nhiều các kỹ thuật phân tích DNA như PCR,RT-PCR là các kỹ thuật nhân gene; ngoài ra còn có các kỹ thuật lai gene như SouthernBlot, lai protein như Wert

Trang 1

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ

Nguyễn Thị Hồng Thắm

NGHIÊN CỨU VÀ THỬ NGHIỆM CHẾ TẠO THIẾT BỊ

VI LƯU CHO KỸ THUẬT PCR

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC HỆ CHÍNH QUY

Ngành: Vật lý kỹ thuật

HÀ NỘI - 2011

Trang 2

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ

Nguyễn Thị Hồng Thắm

NGHIÊN CỨU VÀ THỬ NGHIỆM CHẾ TẠO THIẾT BỊ

VI LƯU CHO KỸ THUẬT PCR

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC HỆ CHÍNH QUY

Ngành: Vật lý kỹ thuật

Cán bộ hướng dẫn: TS Trần Đăng Khoa

Cán bộ đồng hướng dẫn: TS Nguyễn Thăng Long

HÀ NỘI - 2011

Trang 3

Lời cảm ơn

Bài báo cáo này được hoàn thành dưới sự giảng dạy và hướng dẫn trực tiếp của

TS Trần Đăng Khoa và TS Nguyễn Thăng Long Với sự kính trọng và lòng biết ơnsâu sắc, em xin chân thành cảm ơn các thầy về những sự chỉ dẫn chu đáo, tận tình.Thời gian em được nghiên cứu cùng các thầy không nhiều nhưng đã giúp em có thêmđược những kiến thức bổ ích, các tư duy và tiến hành công việc một cách có hệ thống,

có hiệu quả và thực tế mà các thầy đã mang lại cho em

Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu Trường Đại học Công nghệ - Đại họcQuốc gia Hà Nội, các giảng viên của Khoa Vật lý Kỹ thuật & Công nghệ Nano cũngnhư các Khoa khác trong trường đã tạo điều kiện và cung cấp cho em những kiến thức

cơ bản, nền tảng khoa học trong suốt bốn năm học qua

Em cũng gửi lời cảm ơn đến các cán bộ ở Viện Công nghệ Sinh học - Viện Khoahọc và Công Nghệ; phòng thí nghiệm Công nghệ Micro & Nano – Trường ĐH CôngNghệ (ĐHQGHN), em cảm ơn CN Nguyễn Thị Hòa và CN Nguyễn Đức Diệp, cùngcác anh chị làm việc ở công ty Cổ phần Điện tử dân dụng Hanel, những người luôngiúp đỡ nhiệt tình, góp ý và ủng hộ em hết mình trong quá trình nghiên cứu

Cuối cùng con xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cha mẹ, người luôn là chỗ dựatinh thần vững chắc nhất của con, luôn cổ vũ và động viên con Xin gửi tới nhữngngười thân yêu và bạn bè những tình cảm thân thương nhất!

Xin chân thành cảm ơn mọi người!

Trang 4

Tóm tắt nội dung

Cùng với sự phát triển nhanh chóng của Công nghệ nano việc nghiên cứu và chếtạo lab-on-chip (phòng thí nghiệm siêu nhỏ tích hợp trên một con chip) ngày càngđược sự quan tâm của các nhà khoa học trên thế giới bởi tính ứng dụng hiệu quả của

hệ thống nay

Nội dung nghiên cứu của khóa luận là bước đầu tiếp cận việc chế tạo hệ thống vi

lưu PCR cho việc phân tích DNA Để thực hiện nghiên cứu này, tôi đã tìm hiểu, thu

thập thông tin về kỹ thuật PCR và công nghệ vi lưu cũng như những ứng dụng củacông nghệ này trong lĩnh vực y sinh để chế tạo hệ vi lưu PCR dùng cho nhân DNA Sửdụng phần mềm COMSOL để mô phỏng kênh dẫn vi lưu, mô phỏng quá trình truyềnnhiệt trong vật liệu và tính toán thiết kế hệ thống vi lưu Dựa trên cơ sở thông tin môphỏng có được chế tạo hệ thống vi lưu bằng máy VersaLASER đặt tại phòng thínghiệm, Trường ĐH Công Nghệ Tìm hiểu về quá trình gia nhiệt cho buồng phản ứngPCR theo cơ chế Peltier

Trang 5

Lời cam đoan

Tôi xin cam đoan bài khóa luận của tôi không sao chép các tài liệu hay công trìnhcủa người nào khác Tất cả những lý thuyết và tài liệu đều được trích dẫn rõ ràng ởtrang tài liệu tham khảo của khóa luận này

Trang 6

Mục lục

Trang 7

Mở đầu

Công nghệ vi lưu ứng dụng trong rất nhiều ngành: Kỹ thuật, Vật lý, Hóa học,Công nghệ vi chế tạo và Công nghệ sinh học Công nghệ này đang từng bước trở thànhcông nghệ mũi nhọn cho phép chế tạo những vi hệ thống sử dụng những vi thể tíchchất lỏng, (còn được biết đến với cái tên “phòng thí nghiệm siêu nhỏ tích hợp trên mộtcon chip” lab-on-chip) Hệ thống vi lưu bao gồm hệ phức hợp như bơm, khoang chứa,khoang trộn, các van đóng mở có khả năng được điều khiển Hệ thống này có thểđược sử dụng cho một loạt ứng dụng như dẫn thuốc, in ấn và đặc biệt là ứng dụngtrong lĩnh vực sinh học phân tử như phân tích enzyme, phân tích DNA và proteomic Trong công nghệ sinh học đã có rất nhiều các kỹ thuật phân tích DNA như PCR,RT-PCR là các kỹ thuật nhân gene; ngoài ra còn có các kỹ thuật lai gene như SouthernBlot, lai protein như Wertern Blot… Tất cả các kỹ thuật này nếu thực hiện sẽ cần rấtnhiều hóa chất và thời gian, nhưng với bước tiến của công nghệ chế tạo hệ vi lưu thìnhững khó khăn trên có thể được giải quyết

Trong khuôn khổ khóa luận này tôi tập trung nghiên cứu về hệ thống vi lưu ứngdụng trong việc phân tích DNA, cụ thể hơn là hệ thống vi lưu dùng cho phản ứngPCR Để tiếp cận với việc chế tạo và ứng dụng thiết bị vi lưu trong công nghệ sinh họcphân tử, tôi đã dựa vào hiểu biết kỹ thuật PCR thông thường để thiết kế hê vi lưu PCR;tiến hành sử dụng phần mềm COMSOL để mô phỏng kênh dẫn vi lưu, mô phỏng quátrình truyền nhiệt trong vật liệu và tính toán thiết kế hệ thống vi lưu Dựa trên cơ sởthông tin mô phỏng có được chế tạo hệ thống vi lưu bằng máy VersaLASER đặt tạiphòng thí nghiệm nhà G2 - Trường ĐH Công Nghệ (ĐHQGHN)

Trang 8

Chương 1 Tổng quan tài liệu

1.1 Công nghệ Nano Sinh học

1.1.1 Giới thiệu về công nhệ nano sinh học

Với sự phát triển nhanh chóng và bao gồm nhiều lĩnh vực, công nghệ nano chođến nay vẫn chưa có được một định nghĩa thống nhất Theo cơ quan hàng không vũ trụHoa Kỳ (NASA), công nghệ nano là công nghệ chế tạo ra các cấu trúc, vật liệu, thiết

bị và hệ thống chức năng với kích thước đo bằng nanometer (khoảng từ 1 đến 100 nm)

và khai thác ứng dụng các đặc tính độc đáo của những sản phẩm này [15] Công nghệnano cũng có thể hiểu là ngành công nghệ dựa trên các hiểu biết về các quy luật, hiệntượng, tính chất của cấu trúc vật lý có kích thước đặc trưng ở thang nano[2]

Như vậy, khái niệm trọng tâm ở đây là cấu trúc, vật liệu nano Cấu trúc nanođược hiểu là các hệ thống có kích cỡ thuộc thang nano gồm các nguyên tử, phân tửđược sắp đặt sao cho cả hệ thống thực hiện được các chức năng định trước Trên cơ sởphân loại hình học, cấu trúc nano có thể là hạt nano, sợi, dây hoặc ống nano, lớp nanohay màng mỏng nano Về chức năng, cấu trúc nano có thể được phân thành: (i) Vậtliệu nano như các hạt nano; (ii) Linh kiện nano (nanodevices) như các cảm biến nano(nanosensor); (iii) Các máy nano như các phân tử protein có khả năng tự lắp ráp[2] Trên cơ sở công nghệ nano và công nghệ sinh học, các nguyên tử hay phân tử cóthể được thiết kế và ghép lại với nhau để tạo ra một số loại linh kiện, cấu trúc nanonhư chip sinh học có phạm vi ứng dụng rộng rãi trong khoa học sự sống, đặc biệt trong

y – dược Có nhiều cách định nghĩa công nghệ sinh học nano (nanobiotechnology/nano – biotechnology/ nanobiotech) Thuật ngữ này có thể được sử dụng để mô tảnhững vấn đề chung của công nghệ nano và sinh học Công nghệ nano sinh học cũng

có thể được xem là những ứng dụng công nghệ nano vào lĩnh vực nghiên cứu sinh học,tìm kiếm dược phẩm và dẫn chuyển thuốc hướng đích, các vật liệu nano mới, các thiết

bị chẩn đoán, trị liệu giúp loại bỏ các thể ngoại lai khỏi cơ thể, sửa chữa tế bào vàmô…[1]

Trong tự nhiên luôn luôn tồn tại các quá trình vật thể cấu trúc ở mức độ nano Rấtnhiều hệ thống sinh học như các virut, phức hợp protein và màng… có cấu trúc nano

và công nghệ sinh học nano chính là sự sinh trưởng của các tế bào và mô đa chức năng

ở thực vật và động vật từ một tế bào sinh vật

Trang 9

1.1.2 Phạm vi ứng dụng của công nghệ nano sinh học

Hình 1 Phạm vi ứng dụng của công nghệ nano sinh học [14]

Trên thế giới, các bài báo khoa học về công nghệ nano xuất hiện từ giữa thập kỷ

90 Từ đó đến nay, số lượng hồ sơ đăng ký bảo hộ sáng chế trong lĩnh vực công nghệnano tăng rất mạnh (từ 500 hồ sơ/ năm 1998 lên 1300 hồ sơ/ năm 2000) chứng tỏ tínhhấp dẫn và giá trị ứng dụng to lớn của ngành khoa học mới mẻ này Phạm vi ứng dụngcủa công nghệ sinh học nano rất rộng, từ lĩnh vực y học, dược phẩm, sinh học, tới cácngành công nghiệp thực phẩm và nông nghiệp

Trong lĩnh vực sinh học, công nghệ sinh học nano được ứng dụng để nghiên cứu

bộ gene học (genomics), tin sinh học (bioinformatics), xác định trình tự gene, tìm kiếm

và sàng lọc nhanh dược phẩm…

Đối với y học, một trong những lĩnh vực ứng dụng chủ yếu của công nghệ sinhhọc nano, các vấn đề chính bao gồm: Tái sinh mô (tissue regeneration), nuôi cấy vàsửa chữa các cơ quan (growth anh repair of organs), các hệ thống dẫn chuyển vàhướng đích dược phẩm (drug – targeting anh delivery systems) Đặc biệt, các hệ thốngdẫn chuyển và hướng đích dược phẩm trên cơ sở công nghệ nano ngày càng được

Trang 10

quan tâm nghiên cứu và đưa vào ứng dụng, bởi vì trên thực tế hầu hết dược phẩmkhong chỉ có các tác dụng dược lý hữu ích mà còn có những tác dụng phụ Các hệthống này bao gồm những hạt nano (nanoparticles) là vector điều khiển dược phẩm tácđộng trực tiếp và tế bào đích và không gây ảnh hưởng đến các tế bào xung quanh [1].Trong lĩnh vực dược phẩm, công nghệ nano sinh học cùng với ngành hóa học đãtạo ra sự phát triển mạnh mẽ của mảng tìm kiếm dược phẩm Những triển vọng mớicủa công nghệ dược phẩm đã mở ra cùng với sự ra đời và phát triển của công nghệDNA chip hay DNA microarray Chẳng hạn, trong trường hợp ưng thư thể tăng sinh tếbào lympho B, hầu hết bệnh nhân ban đầu phản ứng rất tốt đối với phương pháp trịliệu chuẩn Sau đó, hơn một nửa những trường hợp này nhanh chóng chuyển sang tìnhtrạng nguy kịch Một vài năm trước đây, các nhà điều trị không có cách nào để pháthiện các bệnh nhân thuộc nhóm có nguy cơ rủi ro cao này để điều trị tích cực Gầnđây, công nghệ sinh học cho phép các nhà nghiên cứu phân biệt giữa các nhóm bệnhnhân có thể chống lại bệnh tật trong một thời gian dài và ngắn dựa trên sự khác biệttổng thể của các hoạt động liên quan đến hàng trăm gene trong các tế bào khối u của

họ vào thời điểm chẩn đoán Thành tựu này là cơ sở để đưa ra thử nghiệm chẩn đoáncác bệnh nhân có nguy cơ cao

Trong các ngành công nghiệp thực phẩm và nông nghiệp, công nghệ nano sinhhọc được ứng dụng để bảo quản thực phẩm, chế tạo các màng nhựa tổng hợp nano cóthể phân hủy sinh học, trong các kỹ thuật siêu lọc.v.v… (Hình 1)

1.2 Lab on a chip, chip sinh học

1.2.1 Lab-on-chip

Đây là thuật ngữ chỉ nhiều phép phân tích xử lý mẫu DNA, tiến hành song song

và được thực hiện trên cùng một chip Về cơ bản: chip DNA là các sensor DNA thunhỏ, có thể phân tích đồng thời nhiều thông số (massive parallel analysis) tức thời vàsong song (Hình 2)

Trang 11

Hình 2 Mô hình một biochip [6]

1.2.2 Chip DNA / Microarray

Một thiết bị siêu nhỏ, chứa các đoạn DNA hoặc các vật liệu sinh học khác(protein, tế bào) cho phép thực hiện song song hàng chục nghìn phản ứng phân tử trêncùng một miếng vật liệu có diện tích khoảng 1cm

Cấu trúc

Thiết bị thu nhỏ gồm một bề mặt chất rắn (đế) có cấu trúc & thành phần hóa họcxác định, trên đó được gắn các mẫu dò DNA (probe) là các sợi đơn (single strand)bằng các liên kết hoá học (cộng hóa trị) hoặc vật lý (hấp phụ, đơn phân tự lắp ráp -Self Asembly Monolayer - SAM) Đây là phần thụ thể sinh học của chip DNA (cònđược gọi là DNA probe arrays)

Trang 12

Các mẫu dò DNA

Gene hoặc một trình tự xác định ngắn và với số lượng từ hàng trăm đến hàngnghìn tùy thuộc vào mục đích sử dụng của chip và là thông số quyết định độ phức tạp(complexity) của chip

Nguyên lý hoạt động

Dựa trên khả năng nhận dạng (sensing) chọn lọc và tức thời các DNA đích(target) khi các DNA mẫu dò và đích kết hợp với nhau tạo thành sợi kép nhờ sự ghépcặp bổ sung giữa các base A, T, G, C trong quá trình lai phân tử:

– Nếu phân tử DNA đích liên kết với mẫu dò có trình tự là ATCGGC thì

có thể suy ra trình tự bổ sung của phân tử DNA đích này

– RNA cũng tuân theo nguyên tắc ghép cặp base nghiêm ngặt khi kết hợpvới DNA

– Do vậy rất dễ dàng suy luận trình tự của bất kỳ sợi RNA nào bắt cặp vớiDNA trên microarray

Ưu điểm:

 Thể tích nhỏ (vài µl) để phân tích

 Phân tích đồng thời (arrays) => hiệu suất cao

 Giảm thời gian cho 1 mẫu phân tích

 Tăng độ chính xác

 Dễ dàng lặp lại

Tại sao chip có thể thực hiện đồng thời hàng loạt phản ứng trong một thí nghiệm dưới những điều kiện gần như nhau?

Câu trả lời là mỗi loại mẫu dò được định vị ở một vị trí cố định trên đế của chip

& các phân tử DNA hay RNA đưa lên bề mặt array đã đánh dấu (ví dụ, bằnghuỳnh quang) có thể được phát hiện trên máy quét Khi chip được quét thì máytính sẽ chuyển số liệu thô sang kết quả có thể đọc được

Trang 13

Nhận dạng DNA đích

Phương pháp quang học:

– Huỳnh quang– Phương pháp SPR (Surface Plasmon Resonance)

• Phương pháp nhận biết điện hóa

– Sử dụng tính chất hoạt động điện hóa (oxi hóa - khử) nội tại của cácbazơ (A, G, C)

– Sử dụng các hợp chất hoạt động điện hóa (electroactive intercalation) – Sử dụng các polyme chức năng hoạt động điện

Chất huỳnh quang (HQ) được gắn vào các DNA đích (thường trong quá trìnhPCR) Khi lai với các DNA mẫu dò, chất HQ sẽ được phát hiện Đây là phương pháp

có độ nhạy cao nhưng đòi hỏi quá trình chuẩn bị đánh dấu (labelling) khá công phu

1.2.3 Chip protein

Lai các protein trên bề mặt chip

• Sử dụng kỹ thuật di truyền để xử lý các protein nhằm đính lên bề mặt.Đối với các protein tái tổ hợp, cách thích hợp nhất là gắn các đuôi vào đầu Nhoặc C His-tag có thể được sử dụng để lai các protein có đính Ni2+ trên bề mặtchip

• Phương pháp khác liên quan đến đầu N là gắn serine hay threoninevào trình tự protein tạo cơ sở để gắn đặc hiệu vị trí với poly ethylene glycol.Các đuôi khác như protein đặc hiệu biotin cũng đã đợc sử dụng để lai và chokết quả tốt

• Đối với các protein không tái tổ hợp, các phương pháp khác để lai cóđịnh hướng dựa trên các nhóm chức năng sẵn có trong protein Đại đa sốphương pháp được xây dựng cho các kháng thể đơn dòng và được thiết kếnhằm đảm bảo các vị trí đặc hiệu kháng nguyên của kháng thể hướng ra khỏi bềmặt chip

Trang 14

Ứng dụng của Biochip

Các lĩnh vực chính sử dụng công nghệ chip DNA là nghiên cứu kiểu gen, pháthiện đa hình nucleotide đơn, phân tích sự biểu hiện gen, đột biến… Chip DNA đượcứng dụng trực tiếp trong các ngành y - dược để tìm kiếm dược phẩm, xác định độ antoàn của thực phẩm & môi trường, trong quân sự để phát hiện vũ khí sinh học… Hướng ứng dụng về kiểu gen: Kỹ thuật MicroArray có thể cho biết, nguyên nhânlây nhiễm chính xác của bệnh nhân có triệu chứng giống cúm (như đau đầu, sốt cao vàkhó thở) Bề mặt của MicroArray có thể được gắn các DNA đại diện cho các gen chỉxuất hiện trong những tác nhân gây bệnh chọn lọc và phòng thí nghiệm y học có thểtách chiết và đánh dấu DNA từ mẫu mô lây nhiễm (ví dụ, từ dịch mũi của bệnh nhân)

Sự kết hợp giữa DNA của bệnh nhân với một số trình tự gen trên chip có thể cho biếtđâu là tác nhân gây bệnh Tương tự, hiện nay nhiều chip đang được thiết kế nhằm xácđịnh các loại vi khuẩn than đặc biệt dùng trong khủng bố sinh học hay các mầm bệnhkhác xâm nhập vào cộng đồng

Nghiên cứu sự biểu hiện gene: trên cơ sở xác định lượng mRNA có trong mẫu

mô Các chip xác định trực tiếp lượng protein mặc dù rất phức tạp cũng đang đượcnghiên cứu thiết kế Các nhà sinh học tế bào thường sử dụng loại array này để thu thậpcác thông tin về những protein chiếm ưu thế sau khi mô chịu tác động bởi những điềukiện khác nhau

1.3 Hệ thống vi lưu

Hệ thống vi lưu là một lĩnh vực mới thú vị của khoa học và kỹ thuật cho phépphân tích kiểm soát trên quy mô rất nhỏ và thiết bị nhỏ gọn, tiết kiệm chi phí, hiệu quả

và mạnh hơn hệ thống thông thường khác

Vi lưu đã xuất hiện vào đầu những năm 1980 và được sử dụng trong việc pháttriển DNA chip, phòng thí nghiệm trên một công nghệ vi mạch (lab-on-chip), côngnghệ vi nhiệt.v.v…

Trang 15

Hình 3 Hình ảnh thiết bị của hệ thống vi lưu

Vi lưu khống chế và điều khiển dòng chất lỏng trong một không gian, một thếtích siêu nhỏ cỡ dưới milimet (micromet, nanomet…) [4]

Một thiết bị vi lưu có thể có một hoặc nhiều kênh với ít nhất một kích thước nhỏhơn 1 mm Chất lỏng thường được sử dụng trong các thiết bị vi lưu bao gồm toàn bộmẫu máu, tế bào vi khuẩn, protein, DNA, hóa chất dùng cho các phản ứng sinh hóa Việc điều khiển dòng chảy của chất lỏng ở những kích thước siêu nhỏ phụ thuộcnhiều yếu tố khác nhau như: Sức căng bề mặt của chất lỏng, sự mất mát năng lượng,sức cản chất lỏng…

Công nghệ vi lưu đòi hỏi sự kết hợp của các ngành Kỹ thuật, Vật lý, Hóa học,Công nghệ vi chế tạo và Công nghệ sinh học Công nghệ này đang từng bước trở thànhmột công nghệ mũi nhọn cho phép chế tạo những vi hệ thống sử dụng vi thể tích chấtlỏng

Những nghiên cứu trong công nghệ sinh học thường đòi hỏi một số lượng khá lớnnhững trang thiết bị và phòng thí nghiệm, cụ thể là những phân tích DNA, nhữngnghiên cứu về các loại thuốc, những trang thiết bị thu thập thông tin về người bệnhnhư film chụp X-quang, cắt lớp… Hầu hết những quá trình nêu trên đều đòi hỏi phảikhống chế và điều khiển được dòng chảy của chất lỏng Nhu cầu sử dụng thườngxuyên và liên tục đòi hỏi những thiết bị này phải nhỏ gọn, tiện dụng và có thế mang rakhỏi các phòng thí nghiệm Chính vì lẽ đó mà xu hướng “càng nhỏ càng tốt” đang dầnbiến đổi “thế giới lỏng” theo một cuộc cách mạng tương tự như cuộc cách mạng vềcông nghiệp điện tử khi transistor ra đời Trên thực tế có rất nhiều những nghiên cứu,những ứng dụng trong công nghệ sinh học cần phải thao tác với dòng chảy của chấtlỏng trong những kênh dẫn rất nhỏ, lĩnh vực này được gọi tên là vi lưu Lĩnh vực nàyđòi hỏi sự nghiên cứu tổng hợp ba vấn đề: nghiên cứu phương pháp mới nhằm chế tạo

Trang 16

ra những hệ thống điều khiển chất lỏng, nghiên cứu những phương pháp tích hợpnhững chức năng phức tạp của chất lỏng vào trong một thiết bị, và nghiên cứu về cáchthức, đặc điểm của chất lỏng khi nó chảy trong những kênh dẫn siêu nhỏ Sự phát triểncủa công nghệ vi lưu đang góp phần tạo ra những phương pháp thí nghiệm mới trongngành sinh học cơ bản, ngành khoa học vật liệu và hóa lý.

Các hệ thống vi lưu gồm rất nhiều loại khác nhau tương ứng với nhiều ứng dụngkhác nhau như: những ứng dụng trong ngành công nghiệp in phun, trong pin nhiên liệulỏng, nghiên cứu hóa sinh, tổng hợp hóa chất, tách chiết DNA ra khỏi tế bào, phân tích

di truyền, phân tích PCR, bào chế thuốc.v.v…

Mọi hệ thống vi lưu đều được cấu thành từ những thành phần cơ bản như: máybơm, van, bộ trộn, bộ lọc, bộ chia… Trong ngành vi điện tử, kích thước của linh kiệnkhông làm ảnh hưởng đến tính năng của linh kiện, nhưng trong công nghệ vi lưu dòngchảy trong thể tích nhỏ khác khá nhiều so với dòng chảy trong thể tích lớn hơn, điềunày có thể quan sát thấy trong thực tế đời sống Cụ thể hơn nữa khi các thiết bị vi lỏngđiều khiển các dòng chảy trong những thể tích chỉ cỡ microlit hoặc nhỏ hơn đến cỡpicolit thì sự khác biệt trên lại trở nên cực kỳ rõ ràng Những thiết bị phần cứng củacác thiết bị vi lưu đòi hỏi phương pháp thiết kế và chế tạo rất khác so với những thiết

bị siêu nhỏ khác Khi kích thước của một thiết bị hay một hệ thống vi lưu được làmnhỏ hơn thì cách thức hoạt động của chất lỏng đột ngột thay đổi Những hiệu ứngkhông đáng kể trong quy mô lớn cũng trở nên vượt trội hơn, rõ rệt hơn trong quy môrất nhỏ Đó chính là hiện tượng mao dẫn sẽ xuất hiện khi chất lỏng chảy trong nhữngống có tiết diệt nhỏ hơn 1mm, nhưng hiện tượng này lại không xuất hiện khi chất lỏngchảy trong những ống có thiết diện rất lớn [8]

Trong thời kỳ khủng hoảng về nhiên liệu của thế giới thì việc nghiên cứu và pháttriển ngành công nghệ vi lưu đang trở nên có ý nghĩa hơn Các hệ thống vi lưu thường

có kích thước rất nhỏ, việc chế tạo ra chúng sử dụng ít nhiên liệu hơn, rẻ hơn và rất dễdàng chế tạo hàng loạt Thêm nữa là các kênh dẫn trong thiết bị vi lưu chỉ có thể tíchvài nanolit, các mẫu thử cũng trở nên rất nhỏ, lượng thuốc thử sử dụng cũng rất ít, do

đó mà việc phân tích các kết quả thí nghiệm cũng trở nên dễ dàng hơn, tiết kiệmnguyên liệu hơn

Đến đây chúng ta có thể thấy được sự tương đồng giữa ngành công nghệ vi điện

tử và công nghệ vi lưu, đó là cố gắng tích hợp nhiều thiết bị, nhiều chức năng chỉ trênmột con chip Trong tương lai chúng ta hoàn toàn có thể tin tưởng khả năng các thiết

bị nghiên cứu phân tích có thể được tích hợp trên một thiết bị cầm tay Cũng không có

Trang 17

gì phải ngạc nhiên khi trong tương lai ngành công nghệ vi lưu sẽ tạo ra những bướctiến nhảy vọt cho các ngành khoa học khác, đặc biệt là lĩnh vực y sinh.

1.4 PCR, Cơ sở của phản ứng PCR

1.4.1 Giới thiệu về kỹ thuật PCR

PCR là chữ viết tắt của cụm từ Polymerase Chain Reaction, được dịch ở một vàisách là Phản ứng chuỗi trùng hợp cũng có sách gọi là "phản ứng khuếch đại gen" PCR

là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản

sao) một đoạn DNA mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E coli hay nấm

men PCR được sử dụng trong các nghiên cứu sinh học và y học phục vụ nhiều mụcđích khác nhau, như phát hiện các bệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoán những bệnhnhiễm trùng, tách dòng gene, và xác định huyết thống

Phương pháp căn bản chạy PCR được Kary Mullis phát minh ra, ông đã đoạt giảiNobel về Hóa học vào tháng 10 năm 1993 cho thành tựu này, chỉ sau 7 năm khi ôngđưa ra ý tưởng Ý kiến của Mullis là phát triển một quy trình mà DNA có thể nhân lênnhiều lần một cách nhân tạo qua nhiều chu kỳ sao chép bởi enzyme DNA polymerase.DNA polymerase có tự nhiên trong sinh vật sống, nơi mà nó thực hiện chức năngnhân DNA khi tế bào phân chia Nó làm việc bằng cách nối với sợi DNA và tạo sợi bổsung Theo quy trình PCR gốc của Mullis, enzyme phản ứng nhân bản DNA được thựchiện trong ống nghiệm (in vitro) Sợi DNA đôi bị tách thành 2 sợi đơn khi đun nóng ở

96 °C Tuy nhiên, ở nhiệt độ này DNA polymerase bị phá hủy vì vậy cần bổ sungenzyme sau mỗi giai đoạn nung nóng của mỗi chu kỳ Quy trình PCR gốc của Mulliskhông có hiệu quả cao vì nó mất nhiều thời gian, cần một lượng lớn DNA polymerase,

và phải liên tục lưu ý suốt trong quá trình PCR

Sau đó, quy trình gốc này được phát triển bằng cách dùng DNA-Polymerase lấy

từ vi khuẩn thermophilic (ưa nhiệt) sống trong mạch nước phun ở nhiệt độ trên

110 °C DNA polymerase từ sinh vật này là thermostable (ổn định ở nhiệt độ cao) vàkhi dùng trong PCR nó không bị phá vỡ khi hỗn hợp được nung nóng để tách sợiDNA Từ đó, không cần phải thêm DNA-polymerase vào mỗi chu kỳ, quá trình saochép DNA có thể đơn giản và tự động hơn

Một trong những DNA-polymerase chịu nhiệt đầu tiên được phân lập được từ

Thermus aquaticus và được gọi là Taq Taq polymerase được dùng rộng rãi trong thực

nghiệm PCR (5/2004) Nhược điểm của Taq là thỉnh thoảng nó nhầm lẫn trong quá

Trang 18

trình sao chép DNA, dẫn đến đột biến (sai) trong chuỗi DNA, vì nó thiếu tính sửa saiexonuclease 3’-5’ Các polymerase như Pwo hay Pfu, được phân lập từ Archaea có cơchế sửa sai (cơ chế kiểm tra lỗi sai) và có thể làm giảm một cách đáng kể số đột biếnxảy ra trong chuỗi DNA được sao chép Ngày nay, sự kết hợp giữa Taq và Pfu có thểcung cấp cả độ tin cậy cao lẫn sự nhân bản chính xác của DNA [13].

1.4.2 Sự ra đời của kỹ thuật PCR

Những phát minh cơ bản mà nếu không có chúng thì sẽ không có phát minh raPCR:

1) Năm 1953, Watson, Crick & Wilkens công bố công trình mô tả cấu trúcxoắn kép và đưa ra ý tưởng sao chép của phân tử DNA (giải thưởng Nobel1962)

- DNA gồm 4 bases, liên kết với nhau bởi các phân tử đường deoxyribose và cácgốc phosphate

Hình 4 Thành phần cơ bản để tạo nên phân tử DNA là các mononucletide

- Hai sợi của phân tử DNA chạy ngược chiều nhau

- Mặt phẳng của các bases nằm vuông góc với trục xoắn ốc, mặt phẳng của cácphân tử đường gần như thẳng đứng

- Hai sợi của phân tử DNA được liên kết với nhau bởi các cầu nối hydrogen giữacác bases: adenine-thymine; cytosine-guanine

Trang 19

2) Năm 1950's, Arthur Kornberg phân lập nghiên cứu enzyme DNA

polymerase từ E coli (Pol I) và cơ chế sinh tổng hợp DNA (giải thưởng

Nobel 1959)

- Tổng hợp DNA cần dNTPs

- Muốn phát hiện được dNTPs đính vào phân tử DNA cần đánh dấu đồng vịphóng xạ phân tử phosphate của dNTPs và kết tử DNA bằng tricloroacetic acid - TCA

- Chọn E coli làm đối tượng nghiên cứu vì vậy thu được một lượng lớn tế bào và

từ đó thu được một lượng lớn enzyme và nghiên cứu 1 enzyme quan trọng từ E coli

-enzyme xúc tác sinh tổng hợp DNA - Ông đặt tên là DNA polymerase Hiện nay làDNA polymerase - chìa khóa mở đầu cho rất nhiều nghiên cứu sau này

3) Năm 1969, Brock & Freeze: mô tả vi khuẩn thermus aquaticus chịu nhiệt.4) Năm 1970, Klenow & Henningsen tạo ra mảnh Klenow bằng enzyme thủyphân hoạt tính exonuclease đầu 5' của E coli pol 1

5) Ý tưởng của Cary Mullis và thí nghiệm của ông về phát minh PCR (giảithưởng Nobel năm 1993)

- Năm 1983, ông đã cân nhắc làm thế nào để sử dụng polymerase DNA với mồioligonucleotide để xác định một nucleotide được ở một vị trí nhất định trong một phân

tử DNA phức tạp, chẳng hạn như hệ gene của người Trong ổ đĩa này ông đã phátminh hay phát hiện ra phương pháp tạo bản sao DNA không giới hạn từ một bản saocủa DNA, và được gọi là phương pháp "phản ứng chuỗi polymerase (PCR)"

Sau công bố của Cary Mullis phải có những phát minh say đây thì chúng ta mới

có được PCR hoàn hảo như ngày nay:

- Năm 1984, ông đã tiến hành thí nghiệm đầu tiên thành công cùng với KlenowFragment

- Năm 1988, Saiki sử dụng DNA - polymerase chịu nhiệt trong phản ứng PCR

- Cùng năm 1988, Perkin Elmer- hãng đầu tiên sản xuất máy chu kỳ nhiệt tự động(Thermocycle)

- Năm 1989, Lawyer và cs Taq tái tổ hợp trong E coli

- Năm 1990's, thập kỷ đưa PCR vào nghiên cứu và ứng dụng rộng rãi (chẩn đoán,lập bản đồ di truyền, xác định trình tự DNA, tạo đột biến DNA in vitro )

Trang 20

1.5 Hệ vi lưu PCR

Việc thu nhỏ kích thước của sinh học và hóa học trong phân tích của các thiết bịcông nghệ vi-điện-cơ-hệ thống (MEMS) đã đặt ra một ảnh hưởng quan trọng trên cáclĩnh vực như chẩn đoán y tế, phát hiện vi sinh vật và sinh học phân tích khác Trong sốrất nhiều các thiết bị thu nhỏ phân tích, các chuỗi phản ứng polymerase vi mạch (PCR)/ microdevices được nghiên cứu rộng rãi, và do đó sự tiến bộ lớn đã được thực hiệntrên các khía cạnh của vi gia trên chip (chế tạo, liên kết và đóng dấu), lựa chọn vật liệu

bề mặt, hóa học bề mặt và kiến trúc của buồng phản ứng, xử lý mẫu chất lỏng cầnthiết, kiểm soát của ba hoặc thermocycling nhiệt độ hai bước, phát hiện các sản phẩmkhuếch đại acid nucleic, tích hợp với các đơn vị phân tích chức năng chẳng hạn nhưchuẩn bị mẫu, điện mao dẫn (CE), lai tạo DNA microarray, vv…

Hình 5 Sơ đồ minh họa các thiết bị vi lưu trên chip cho hệ thống phân tích DNA [12]

Trong đó bao gồm: (A) – phân loại, sàng lọc, phân tích các tế bài hoạt độngchống lại chất kích thích; (B) – ly giải tế bào; (C) – PCR và thu hồi DNA của khángthể đặc hiệu từ một ngăn riêng biệt

Công nghệ vi lưu sẽ đại diện cho một công nghệ trung tâm trong nhiều hệ thốngthu nhỏ được sử dụng cho hóa học, sinh học và y tế ứng dụng, có tiến bộ hứa hẹn cáchmạng hóa nhiều quá trình phát hiện các mầm bệnh hoặc chất gây ô nhiễm môi trường.Trong số các microfluidics, các dụng cụ PCR thu nhỏ (hay gọi là PCR microfluidics)

đã trở thành một công cụ rất quan trọng Quá trình PCR được sử dụng rộng rãi nhưmột công cụ sinh học phân tử để tái tạo ADN, và có thể tạo ra các bản sao của đoạn cụ

Trang 21

thể của DNA qua các chu trình nhiệt Mỗi một chu kỳ nhiệt độ có thể tăng gấp đôiDNA, và như vậy 20-35 chu kỳ có thể tạo ra hàng triệu bản DNA Tuy nhiên, dụng cụPCR thông thường, để phân tích PCR hoàn chỉnh cần khoảng 1-2 h Tất cả các loạicông nghệ PCR vi lỏng đã tạo điều kiện khuếch đại DNA với tỷ lệ nhanh hơn nhiều đó

là kết quả tốc độ truyền nhiệt lớn hơn

Việc ứng dụng các thiết bị thu nhỏ của PCR đạt được nhiều cải tiến, chủ yếu baogồm giảm chi phí chế tạo và sử dụng; tiết kiệm được thời gian khuếch đại DNA; lượngmẫu tiêu thụ ít; giảm việc sinh ra các sản phẩm PCR không đặc hiệu khác; tăng tính diđộng và hội nhập của các thiết bị PCR Ngoài ra, thực hiện được một số lượng lớn cácphân tích khuếch đại song song trên cùng một chip vi lưu PCR

1.6 Giới thiệu phần mềm COMSOL

Mô phỏng hiện tượng khoa học đã nhanh chóng trở thành một phần của việc thiết

kế và tối ưu hóa quy trình trong tất cả các lĩnh vực kỹ thuật

COMSOL là môi trường cho phép bạn thực hiện các nghiên cứu khoa học liênquan đến tất cả các chủ đề được xây dựng trên một multiphysics-mô hình hóa nền tảngduy nhất với phương trình dựa trên giao diện trực quan

COMSOL cho phép bạn mô hình và giải quyết mọi thứ, từ công nghệ nano đếnthiên văn học…

Một vài ứng dụng mô-đun cụ thể có sẵn cho COMSOL Multiphysics

 Khoa học Trái đất Module

 Heat Transfer Module

 Thư viện vật liệu

 MEMS Module

 RF Module

 Cấu trúc cơ Module Hình 6 Các module có sẵn trong COMSOL Multiphysics

Trang 22

Chương 2 Các phương pháp thực nghiệm

2.1 Thực hiện phản ứng PCR

2.1.1 Các thành phần tham gia phản ứng

- Sợi khuôn (DNA hoặc cDNA)

- Các mồi (oligonucleotide primers)

- DNA polymerase chịu nhiệt (Taq)

- dNTP's

- Dung dịch đệm

- Ion Mg++

2.1.2 Các bước của phản ứng PCR

- Biến tính DNA: 94-95oC, 30-60 giây

- Bắt cặp của mồi vào sợi khuôn: 40-72oC, 30-60 giây

- Phản ứng kéo dài chuỗi: 72oC, 60s/1kb

Ba bước trên hình thành 1 chu kỳ Phản ứng PCR được tiến hành trong khoảng25-40 chu kỳ

Trong kỹ thuật PCR thông thường người ta thực hiện bước biến tính DNA trướckhi bước vào chu kỳ Bước này thường được thực hiện ở 94-95oC, 2-3 phút

Phản ứng PCR được thực hiện trên máy PCR BioRad

2.2 Mô phỏng kênh dẫn vi lưu, sử dụng chương trình COMSOL

2.2.1 Áp suất và nguyên lý đo áp suất chất lưu

2.2.1.1 Áp suất và đơn vị đo

Áp suất là đại lượng có giá trị bằng tỉ số giữa lực tác dụng vuông góc lên một mặtvới diện tích của nó:

Trang 23

(2.1)Trong đó: p là áp suất; dF là lực tác dụng; ds là diện tích mặt.

Đối với các chất lỏng, khí hoặc hơi (gọi chung là chất lưu), áp suất là một thông

số quan trọng xác định trạng thái nhiệt động học của chúng Trong công nghiệp, việc

đo áp suất chất lưu có nghĩa rất lớn trong việc đảm bảo an toàn cho thiết bị cũng nhưgiúp cho việc kiểm tra và điều khiển hoạt động của máy móc thiết bị có sử dụng chấtlưu

Trong hệ đơn vị quốc tế (SI) đơn vị áp suất là pascal (Pa): 1 Pa là áp suất tạo bởimột lực có độ lớn bằng 1N phân bố đồng đều trên một diện tích 1m2 theo hướng pháptuyến

Đơn vị Pa tương đối nhỏ nên trong công nghiệp người ta còn dùng đơn vị áp suất

là bar (1 bar = 105 Pa) và một số đơn vị khác

2.2.1.2 Nguyên lý đo áp suất

Đối với chất lưu không chuyển động, áp suất chất lưu là áp suất tĩnh (pt):

Do vậy đo áp suất chất lưu thực chất là xác định lực tác dụng lên một diện tíchthành bình Đối với chất lưu không chuyển động chứa trong một ống hở đặt thẳngđứng, áp suất tĩnh tại một điểm M cách bề mặt tự do một khoảng (h) xác định theocông thức sau:

(2.3)Trong đó:

P0 - áp suất khí quyển

- khối lượng riêng chất lưu

g - gia tốc trọng trường

Để đo áp suất tĩnh có thể tiến hành bằng các phương pháp sau:

- Đo áp suất chất lưu lấy qua một lỗ được khoan trên thành bình nhờcảm biến thích hợp

- Đo trực tiếp biến dạng của thành bình do áp suất gây nên

Trang 24

Trong cách đo thứ nhất, phải sử dụng một cảm biến đặt sát thành bình Trongtrường hợp này, áp suất cần đo được cân bằng với áp suất thủy tĩnh do cột chất lỏngmẫu tạo nên hoặc tác động lên một vật trung gian có phần tử nhạy cảm với lực do ápsuất gây ra Khi sử dụng vật trung gian để đo áp suất, cảm biến thường được trang bịthêm bộ phận chuyển đổi điện Để sai số đo nhỏ, thể tích chết của kênh dẫn và cảmbiến phải không đáng kể so với thể tích tổng cộng của chất lưu cần đo áp suất.

Trong cách đo thứ hai, người ta gắn lên thành bình các cảm biến đo ứng suất để

đo biến dạng của thành bình Biến dạng này là hàm của áp suất

Đối với chất lưu chuyển động, áp suất chất lưu (p) là tổng áp suất tĩnh (pt) và ápsuất động (pđ):

(2.4)

Áp suất tĩnh tương ứng với áp suất gây nên khi chất lỏng không chuyển động,được đo bằng một trong các phương pháp trình bày ở trên Áp suất động do chất lưuchuyển động gây nên và có giá trị tỉ lệ với bình phương vận tốc chất lưu:

(2.5)Trong đó là khối lượng riêng chất lưu

Khi dòng chảy va đập vuông góc với một mặt phẳng, áp suất động chuyển thành

áp suất tĩnh, áp suất tác dụng lên mặt phẳng là áp suất tổng Do vậy, áp suất động được

đo thông qua độ chênh lệch giữa áp suất tổng và áp suất tĩnh

2.2.2 Lưu lượng

Lưu lượng chất lưu là lượng chất lưu chảy qua tiết diện ngang của ống trong mộtđơn vị thời gian Tùy theo đơn vị tính lượng chất lưu (theo thể tích hoặc khối lượng)người ta phân biệt:

- Lưu lượng thể tích (Q) tính bằng m3/s, m3/giờ …

- Lưu lượng khối (G) tính bằng kg/s, kg/giờ …

Lưu lượng trung bình trong khoảng thời gian ∆t = t2 - t1 xác định bởi biểu thức:

(2.6)Trong đó ∆V, ∆m là thể tích và khối lượng chất lưu chảy qua ống trong khoảngthời gian khảo sát

Trang 25

Lưu lượng tức thời xác định theo công thức:

(2.7)

Để đo lưu lượng người ta dùng các lưu lượng kế Tùy thuộc vào tính chất chấtlưu, yêu cầu công nghệ, người ta sử dụng các lưu lượng kế khác nhau Nguyên lý hoạtđộng của các lưu lượng kế dựa trên cơ sở:

- Đếm trực tiếp thể tích chất lưu chảy qua công tơ trong một khoảngthời gian xác định ∆t

- Đo vận tốc chất lưu chảy qua công tơ khi lưu lượng là hàm của vậntốc

- Đo độ giảm áp qua tiết diện thu hẹp trên dòng chảy, lưu lượng là hàmphụ thuộc độ giảm áp

Tín hiệu đo biến đổi trực tiếp thành tín hiệu điện hoặc nhờ bộ chuyển đổi điệnthích hợp

Phương trình Navier Stoke

Phương trình Navier-Stokes, được đặt tên theo Claude-Louis Navier và George

Gabriel Stokes, miêu tả dòng chảy của các chất lỏng và khí (gọi chung là chất lưu).Những phương trình này thiết lập trên cơ sở biến thiên động lượng trong những thểtích vô cùng nhỏ của chất lưu đơn thuần chỉ là tổng của các lực nhớt tiêu tán (tương tựnhư ma sát), biến đổi áp suất, trọng lực, và các lực khác tác động lên chất lưu - mộtứng dụng của định luật 2 của Newton

Phương trình Navier-Stokes được xây dựng từ sự bảo toàn của khối lượng, độnglượng, và năng lượng được viết cho một thể tích đang xem xét bất kì Dạng tổng quátnhất của hệ phương trình Navier-Stokes là:

(2.8)Đây chỉ là định luật bảo toàn động lượng trong một chất lưu, chỉ là áp dụng địnhluật 2 của Newton cho một môi trường liên tục (continuum) Phương trình này thường

được viết dưới dạng đạo hàm vật chất (substantive derivative hoặc material

derivative), làm rõ đây chỉ là một áp dụng của định luật 2 Newton:

Ngày đăng: 16/02/2016, 22:10

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
[1] Lê Trần Bình, Nông Văn Hải, Lê Thị Thu Hiền, “Bài tổng quan Công nghệ sinh học Nano”, Viện Công Nghệ Sinh Học, Tạp chí Công nghệ Sinh học 2, 2004, tr 133-148 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Bài tổng quan Công nghệ sinhhọc Nano
[2] Vũ Đình Cự, Nguyễn Xuân Chánh, Công nghệ nano điều khiển đến từng nguyên tử, phân tử, NXB KHKT Hà Nội 2004.Tiếng Anh Sách, tạp chí
Tiêu đề: Công nghệ nano điều khiển đến từng nguyêntử, phân tử", NXB KHKT Hà Nội 2004
Nhà XB: NXB KHKT Hà Nội 2004."Tiếng Anh
[3] Michael A. Stroscio, Mitra Dutta, Biological Nanostrustures and Application of Nanostructures in Biology, University of Illionis at Chicago, Chicago, Illionis, 2004, pp 82-85 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Biological Nanostrustures and Application ofNanostructures in Biology
[4] Henrik Bruus, Theoretical Microfluidics, Oxford master series in condensed matter physics, 2007, pp 1-6, pp 197-211 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Theoretical Microfluidics
[5] Jin-Woo Choi, Chong H. Ahn, Gregory Beaucage, members of IEEE,“Disposable smart Lab on a chip for point-of-Care Clinical diagnostics”, Proceedings of the IEEE, Vol. 92, No. 1, 2004, pp 154-173 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Disposable smart Lab on a chip for point-of-Care Clinical diagnostics
[6] Tuan Vo-Dinh, Guy Griffin, David L. Stokes, Alan Wintenberg, “Multi- functional biochip for medical diagnostics and pathogen detection”, Sensor and Actuators B 90, 2003, pp 104-111 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Multi-functional biochip for medical diagnostics and pathogen detection
[7] S. Kim, H. A. Stone, “Microfluidics: Basic issues, Applications, and Challenges”, AIChE Journal No. 6, 2001, pp 1250-1254 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Microfluidics: Basic issues, Applications, and Challenges
[8] Nguyen, N. T.; S. T. Wereley, Fundamentals and Application of Microfluidic, 2 nd ed, Artech House, 2006, pp 1-10 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Fundamentals and Application of Microfluidic
[9] Janak Singh, Mayang Ekaputri, “PCR thermal management in an integrated Lab on Chip”, Journal of Physics: Conference Series 34, 2006, pp 222-227 Sách, tạp chí
Tiêu đề: PCR thermal management in an integrated Labon Chip
[10] Yi Sun, M.V.D. Satyanarayan, Nam Trung Nguyen, Yien Chian Kwok,“Continuous flow polymerase chain reaction using a hybrid PMMA-PC microchip with improved heat tolerance”, Sensor and Actuators B 130, 2008, pp 836-841 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Continuous flow polymerase chain reaction using a hybrid PMMA-PCmicrochip with improved heat tolerance
[11] Wei-Cheng Tian, Erin Finehout, Microfluidics for Biological Applications, Library of Congress Control Number: 2008930844, Springer Science+Business Media, LLC, 2008, pp 2-29 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Microfluidics for Biological Applications
[12] Chunsun Zhang, Jinliang Xu, Wenli Mauer, Wenling Zheng, “PCR microluidic devices for DNA amplification”, Biotechnology Advances 24, 2006, pp 243-284.Internet Sách, tạp chí
Tiêu đề: PCR microluidicdevices for DNA amplification”, Biotechnology Advances 24, 2006, pp 243-284

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TRÍCH ĐOẠN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w