Nghiên cứu ưng dụng công nghệ sản xuất vacxin AND đa chủng gumboro phòng bệnh cho gà

BKHCN VCNSH BKHCN VCHSH VKHCNVN VCNSH Bộ KHOA HọC Và CÔNG NGHệ VIệN KHOA HọC Và CÔNG NGHệ VIệT NAM VIệN CÔNG NGHệ SINH HọC Bộ khoa học công nghệ Viện kh cn việt nam 39 Trần Hng Đạo Hà Nội 18 Hoàng Quốc Việt Hà Nội Viện công nghệ sinh học BáO CáO Tổng kết khoa học kỹ thuật đề tài KC.04.29 NGHIÊN CứU ứng dụng công nghệ Sản xuất vacxin adn đa chủng gumboro phòng bệnh cho gà Chủ nhiệm: PGS.TS Lê Thanh Hoà Hà Nội/11-2006 Bản quyền báo cáo thuộc Viện Công nghệ sinh học Sao chép sử dụng toàn phần tài liệu phải đợc Viện trởng Viện Công nghệ sinh học Bộ Khoa học Công nghệ đồng ý Tài liệu đợc chuẩn bị sở kết thực đề tài cấp nhà nớc KC 04 29 Bộ Khoa học Công nghệ Viện Công nghệ sinh học chủ trì Mục lục báo cáo đề tài Trang Báo cáo tổng kết A B Tóm tắt báo cáo Thông tin đề tài A1 Chủ nhiệm quan chủ trì đề tài A.2 Danh sách ngời thực đề tài phân công công việc A3 Các nội dung ký thực theo hợp đồng A4 Các sản phẩm đăng ký đề tài Tổng quan tài liệu B1 tổng quan tình hình nghiên cứu nớc B1.1 Giới thiệu bệnh Gumboro B1.2 Chẩn đoán Gumboro B1.3 Các serotype phân nhóm độc lực virus Gumboro B1.4 Sinh học phân tử hệ gen virus Gumboro B1.5 Vacxin phòng bệnh Gumboro B1.6 Nguyên lý thiết kế vacxin ADN phơng thức sử dụng B1.7 Vector biểu gen kháng nguyên B1.8 Các thành phần kích ứng gen miễn dịch B1.8.1 Chuỗi Kozak kích ứng biểu gen B1.8.2 Chuỗi CpG kích ứng miễn dịch B1.9 Miễn dịch học vacxin ADN B1.9.1 Vai trò tế bào tua (DC) xử lý ADN kháng nguyên B1.9.2 Vai trò vị trí tế bào tiếp nhận ADN vacxin B1.9.3 Nguyên tắc tạo miễn dịch vacxin ADN B2 tổng quan tình hình nghiên cứu nớc 8 9 11 13 14 16 16 17 18 18 21 22 23 C Các phơng pháp nghiên cứu 29 D Báo cáo kết đạt đợc 32 D1 Kết thu thập nguyên liệu thiết kế giống gốc D1.1 Kết thu thập mẫu tiếp truyền bệnh phẩm D1.1.1 Thu thập mẫu bệnh phẩm Gumboro D1.1.2 Kết tiếp truyền virus Gumboro phôi gà mẫn cảm D1.2 Kết phân tích chọn lọc chủng đại diện D1.2.1 Bố trí nghiên cứu chọn lọc chủng cung cấp nguồn gen D1.2.2 Các plasmid vector sử dụng nghiên cứu vacxin ADN D1.2.3 Kết chọn lọc nguồn gen chủng đại điện D1.3 Kết thiết kế plasmid giống gốc pG-VP2 32 32 32 33 34 34 38 39 42 D1.3.1 Tách VP2 từ plasmid trung gian D1.3.2 Thu nhận khung plasmid pcDNA3.1(+) D1.3.3 Nối VP2 vào pcDNA3.1(+) tạo plasmid gốc pG-VP2 D1.3.4 Kết kiểm tra pG-VP2 enzyme giới hạn D1.3.5 Kết kiểm tra khung đọc phân tích thành phần gen VP2 D1.4 Kết thiết kế plasmid giống gốc pG-A D1.4.1 Thu nhận lu giữ phân đoạn A chứa gen VP2-4-3 D1.4.2 Tách gen kháng nguyên VP2-4-3 nối vào pcDNA3.1(+) D1.4.3 Kết kiểm tra khung đọc phân tích thành phần gen VP2 D2 kết sản phẩm D2.1 Qui trình công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Gumboro 42 43 43 44 45 48 48 50 51 53 53 D2.2 Qui trình kiểm định sử dụng vacxin ADN đa chủng Gumboro 59 D2.3 Sản phẩm plasmid giống gốc vacxin (đơn đa chủng) 63 D3 Kết kiểm nghiệm biểu gen miễn dịch vacxin D3.1 Kết kiểm nghiệm biểu gen VP2 hệ thống E Coli D3.1.1 Yêu cầu kiểm nghiệm nguyên vật liệu D3.1.2 Phơng pháp biểu D3.1.3 Kết biểu gen VP2 D3.2 Kết kiểm nghiệm miễn dịch vacxin ELISA D3.2.1 Yêu cầu bố trí thí nghiệm D3.2.2 Kết kiểm nghiệm miễn dịch vacxin quy mô phòng thí nghiệm D3.2.3 Kết kiểm nghiệm miễn dịch vacxin thử nghiệm mở rộng ỏ miền Bắc đợt I D3.2.4 Kết kiểm nghiệm miễn dịch vacxin thử nghiệm mở rộng miền Bắc đợt II D3.3 Kết kiểm nghiệm miễn dịch vacxin phơng pháp công cờng độc D3.3.1 Yêu cầu thí nghiệm D3.3.2 Bố trí thí nghiệm D3.3.3 Kết chuẩn độ xác định liều gây nhiễm 50% gà chủng BDG D3.3.4 Kết công cờng độc kiểm nghiệm miễn dịch vacxin D3.3.5 Kết luận thí nghiệm công cờng độc D3.4 Kiểm định pháp lý vacxin D3.4.1 Xây dựng tiêu chuẩn vacxin D3.4.2 Xây dựng phiếu kiểm định vacxin xuất xởng D3.4.3 Kết kiểm định pháp lý vacxin 65 65 65 65 66 67 67 68 68 71 74 74 75 77 79 81 82 82 84 84 D4 Kết giải m gen đăng ký quyền D4.1 Danh sách giải mã gen VP2 phân đoạn A D4.2 Danh sách đăng ký quyền ngân hàng gen D5 Công bố khoa học D5.1 Danh sách báo D5.2 Danh sách xuất sách chơng sách D6 Kết đào tạo D6.1 Khóa luận tốt nghiệp đại học D6.2 Luận văn cao học D6.3 Đề cơng nghiên cứu sinh D7 Tổng kết sản phẩm đề tài 85 85 86 86 86 88 88 88 89 89 90 E Tình hình sử dụng kinh phí báo cáo toán tài 91 F Nhận xét đánh giá kết đạt đợc đề tài 92 Phụ lục báo cáo tổng kết Phụ lục I: Một số phơng pháp sinh học phân tử sử dụng nghiên cứu vacxin ADN Phụ lục II: Một số phơng pháp huyết học sử dụng kiểm nghiệm miễn dịch vacxin ADN Phụ lục III: Một số hình ảnh hoạt động đề tài Phụ lục IV: Tài liệu phục vụ nghiên cứu đề tài Mục lục hình Mục lục bảng Báo cáo tổng kết LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH Tóm tắt báo cáo Bệnh Gumboro hay gọi bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm (Infectious Bursal Disease - viết tắt IBD) bệnh cấp tính, có khả lây lan cao gà 2-6 tuần tuổi, gây chết với tỷ lệ cao, từ 10-30% Số lại còi cọc, chậm lớn, dễ phát bệnh, bị suy giảm miễn dịch Virus Gumboro có hệ gen gồm phân đoạn ARN phân đoạn A B Phân đoạn A gồm gen hợp VP2-4-3 gen VP5 Gen VP2 mã hoá protein kháng nguyên VP2 đồng thời yếu tố gây bệnh virus Tuy có vacxin nhợc độc (chủng virus làm giảm độc lực) sản xuất từ giống virus nhập từ nớc ngoài, nhng nớc ta, mức độ bảo hộ miễn dịch không ổn định tính kháng nguyên vacxin virus gây bệnh có mức độ đồng không đồng Đề tài KC.04.29: Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Gumboro phòng bệnh cho gà đợc tiến hành với mục tiêu tổng thể nghiên cứu ứng dụng thêm loại vacxin hệ mới, đa dạng hoá vacxin Gumboro quy mô nhỏ đánh giá hiệu bảo vệ đàn gà thử nghiệm Để thực đợc mục tiêu trên, đề tài cần thiết kế đợc plasmid biểu tái tổ hợp chứa gen kháng nguyên VP2 từ nhiều chủng Gumboro chọn lọc khác Việt Nam, sản xuất thu nhận đợc ADN tinh khiết làm nguồn nguyên liệu thử nghiệm vacxin ADN đa chủng, ổn định, chất lợng đạt điều kiện quy định OIE/WHO triển khai thử nghiệm vacxin ADN, kiểm tra an toàn, vô trùng hiệu lực đảm bảo tiêu chuẩn OIE/WHO quy định Đề tài sử dụng phơng pháp sinh học phân tử thiết kế plasmid tái tổ hợp (RT-PCR, dòng hoá, giải trình trình tự, chọn lọc tách ADN tái tổ hợp), phơng pháp kiểm tra giống vacxin (an toàn, vô trùng, hiệu lực), phơng pháp huyết học (ELISA) xác định bảo hộ miễn dịch Trong năm thực hiện, đề tài thu nhận đợc 90 mẫu virus cờng độc gây bệnh từ miền (Bắc, Trung, Nam), mẫu vacxin thu nhận phân tích vùng siêu biến đổi (474 bp) gen VP2, từ chọn lọc chủng có kháng nguyên đồng theo nhóm vùng địa lý Trên sở đó, phân lập lu giữ toàn gen VP2 15 plasmid trung gian (pCR2.1TOPO), từ nguồn gen thiết kế đợc 15 plasmid gốc (pG-VP2) chứa toàn gen VP2 số Báo cáo tổng kết LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH plasmid gốc (pG-A) chứa toàn phân đoạn A, làm nguyên liệu chọn giống sản xuất vacxin ADN tiến hành nghiên cứu xây dung Quy trình: i) Quy trình công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Việt Nam; ii) Quy trình kiểm định sử dụng vacxin ADN đa chủng Việt Nam Sử dụng giống gốc chứa gen VP2 (pG-VP2), đề tài sản xuất đợc 100.000 liều vacxin đơn chủng cho chủng chọn lọc (20 àg ADN/liều đơn chủng), phối hợp với nhau, đợc 20.000 liều đa chủng (100 àg ADN/liều đa chủgn) để làm vacxin đa chủng thử nghiệm Đề tài sử dụng 30.000 liều đơn chủng (6.000 liều đa chủng) để tiến hành thử nghiệm bố trí đợt kiểm tra miễn dịch miền Bắc miền Trung Kết triểm tra ELISA (kit IDEXX Mỹ) cho thấy vacxin có bảo hộ miễn dịch tơng đối tốt (79-96%) có kháng thể tuổi gà 35-56 ngày tuổi), nhng hàm lợng kháng thể trì dới tháng Về quyền, đề tài đăng ký 11 quyền bao gồm 10 chuỗi gen VP2 chuỗi gen VP2-343 (phân đoạn A) Việt Nam Ngân hàng gen Đề tài góp phần đào tạo nghiên cứu sinh, cao học, sinh viên tốt nghiệp xuất 10 công trình, báo chơng sách (2 in thảo) Đánh giá chung, đề tài hoàn thành nhiệm vụ đề ra, có đủ số lợng plasmid gốc chứa gen VP2, xây dựng thành công quy trình công nghệ sản xuất kiểm định vacxin, sản xuất vacxin theo yêu cầu đăng ký bớc đầu thử nghiệm hiệu lực vacxin Đề tài mở hớng định hớng nghiên cứu loại hình vacxin ADN lần Việt Nam Tuy nhiên, tình hình cúm gà nặng nề năm 2004-2005 ảnh hởng đến tiến độ phạm vi nghiên cứu đề tài, phần tiến độ cấp kinh phí, phần thời gian hạn định cho nghiên cứu loại vacxin ngắn nên diện thử nghiệm vacxin cha đợc rộng phơng pháp kiểm tra miễn dịch cha đợc áp dụng nhiều (ví dụ: cần công cờng độc để thử thách hiệu lực) Mặt khác cần so sánh vacxin ADN sản xuất từ plasmid giống gốc chứa toàn phân đoạn A (pG-A) với vacxin ADN từ giống gốc chứa toàn gen VP2 (pG-VP2), để chọn lọc nguồn giống thích hợp Đề tài hoàn thành tất nội dung đăng ký với mức độ đạt vợt, vài điểm cần bổ sung khảo sát Đề tài mở hớng triển khai ứng dụng vacxin ADN có triển vọng Việt Nam Báo cáo tổng kết thực đề tài kc.04.29 Bỏo cỏo tng kt LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH Tên đề tài: Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Gumboro phòng bệnh cho gà A thông tin đề tài A1 chủ nhiệm đề tài quan chủ trì đề tài Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Lê Thanh Hoà Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Điện thoại: (4)7567297; (4)7564391 (CQ)/ (4)8525566 (NR); Mobil: 0912336855 Fax: (4)8363144 Email: im-ibt@hn.vnn.vn, imibtvn@gmail.com Cơ quan chủ trì: Viện Công nghệ Sinh học Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Địa quan: 18 Đờng Hoàng Quốc Việt, Quận Cầu Giấy, Hà Nội Việt Nam Thời gian thực hiện: 24 tháng (01/01/2004 31/12/2005) Kinh phí đợc cấp: 1.900 triệu (một nghìn chín trăm triệu) Bỏo cỏo tng kt LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH A2 danh sách ngời thực đề tài phân công công việc Nhóm I Lê Thanh Hoà II Họ tên Lê Thị Kim Xuyến Nguyễn Thị Bích Nga Hoàng Thị Minh Châu Đoàn Thị Thanh Hơng Nguyễn Thị Tuyết Nhung Nguyễn Văn Vũ Võ Công Huân Vũ Thị Tiến Phạm Việt Cờng Nguyễn Hoàng Dơng Phạm Đức Thuận Lê Thị Hồng Minh III Nguyễn Thị Kim Cúc Nguyễn Thị Tuyết Mai Học hàm Cơ quan công tác học vị PGS.TS, Phòng Miễn dịch học, NCVC Viện Công nghệ Sinh học ThS ThS ThS ThS ThS CN CN CN - Phân công phụ trách Chủ nhiệm đề tài Tham gia - TS, NCVC Phụ trách nhánh CN ThS ThS TS, NCVC ThS Liên hiệp Khoa học sản xuất CNSH MT Viện Công nghệ sinh học Phòng Vi sinh phân tử Viện Công nghệ Sinh học - Tham gia - Phân công công việc Thu nhận mẫu, tách ARN tổng số, thiết kế loại primer cho phản ứng RT-PCR vùng siêu biến đổi khảo sát tính đặc hiệu chúng Phân tích biến đổi gen VP2 tạo dòng ổn định Nghiên cứu lắp ráp plasmid tái tổ hợp phân đoạn VP2, từ chủng đại điện đợc chọn lọc, để làm plasmid gốc Nghiên cứu chuyển nạp plasmid gốc vào dòng tế bào chuẩn, giữ giống gốc Nghiên cứu kỹ thuật tinh ADN plasmid làm vacxin Bố trí thử nghiệm vacxin sở thí nghiệm Tổng kết đề tài, hội nghị xuất Nghiên cứu tách chiết ARN tổng số số chủng virus Nghiên cứu thực phản ứng RT-PCR phân đoạn A, VP2 Nghiên cứu điều kiện lên men, nhân ADN plasmid tái tổ hợp từ plasmid gốc Sản xuất vacxin quy mô nhỏ, đánh giá hiệu lực Sản xuất lô lớn, kiểm tra tiêu chuẩn an toàn vô trùng hiệu lực vacxin Xây dựng quy trình an toàn Báo cáo tóm tắt LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH Đã thiết kế thành công plasmid giống gốc pG-VP2 chứa toàn gen kháng nguyên VP2 Từ plasmid trung gian, thực tách gen VP2, nối vào plasmid biểu pcDNA3.1(+) để làm plasmid giống gốc pG-VP2 sản xuất vacxin Các plasmid tái tổ hợp đợc kiểm tra bằng: i) cắt EcoRI-NotI kiểm tra độ dài gen VP2; ii) giải trình trình tự kiểm tra khung đọc thành phần gen VP2 Kết thiết kế đợc 15 plasmid giống gốc pG-VP2, bao gồm: Chủng BDG (phân lập Bình Dơng): ký hiệu pG-VP2(BDG) Chủng GTG25 (phân lập Tiền Giang): ký hiệu pG-VP2(TG25) Chủng GHUT-1 (phân lập Thừa Thiên-Huế): ký hiệu pG-VP2(HUT-1) Chủng GLL2 (phân lập miền Trung): ký hiệu pG-VP2(LL2) Chủng GHUT-12 (phân lập Thừa Thiên-Huế): ký hiệu pG-VP2(HUT-12) Chủng GDN-2 (phân lập Đồng Nai): ký hiệu pG-VP2(DN-2) Chủng GTN (phân lập Tây Ninh): ký hiệu pG-VP2(TN) Chủng GBD-1 (phân lập Bình Dơng): ký hiệu pG-VP2(BD-1) Chủng GHY-1 (phân lập Hng Yên): ký hiệu pG-VP2(HY-1) 10 Chủng GSG4 (phân lập TP Hồ Chí Minh): ký hiệu pG-VP2(SG4) 11 Chủng GSG16 (phân lập TP Hồ Chí Minh): ký hiệu pG-VP2(SG16) 12 Chủng GT1ST (phân lập Sóc Trăng): ký hiệu pG-VP2(T1ST) 13 Chủng GLA (phân lập Long An): ký hiệu pG-VP2(LA) 14 Chủng vacxin 2512 (vacxin Mỹ): ký hiệu pG-VP2(2512) 15 Chủng vacxin Blue (vacxin Mỹ): ký hiệu pG-VP2(Blue) Trên sở phân tích thành phần chuỗi gen VP2 chủng Gumboro đại diện này, phân tích epitope kháng nguyên lu ý sai khác vị trí khác VP2, tiến hành xem xét mối quan hệ kháng nguyên chủng chọn lọc lần nữa, để có plasmid giống gốc đủ tiêu chuẩn làm vacxin ADN Kết chọn đợc chủng để làm giống sản xuất vacxin ADN, là: - Chủng BDG (phân lập Bình Dơng): ký hiệu giống pG-VP2(BDG) - Chủng GTG25 (phân lập Tiền Giang): ký hiệu giống pG-VP2(TG25) - Chủng GHUT-1 (phân lập Thừa Thiên-Huế): ký hiệu giống pG-VP2(HUT-1) - Chủng GLL2 (phân lập miền Trung): ký hiệu giống pG-VP2(LL2) - Chủng vacxin 2512 (vacxin Mỹ): ký hiệu giống pG-VP2(2512) 12 Báo cáo tóm tắt LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH Đã thiết kế thành công plasmid giống gốc pG-A chứa toàn phân đoạn A Thu nhận lu giữ phân đoạn A chứa gen VP2-4-3: Phân đoạn A (VP24-3) đợc thu nhận cách tiến hành phản ứng RT-PCR: i) Thu nhận sản phẩm đầu 5, ký hiệu SegA1 (cặp mồi: GVF(Kz2)-GSALR; ii) Thu nhận sản phẩm đầu 3, ký hiệu SegA2 (cặp mồi: GSALF-GNOR); iii) Sau cắt - nối tạo thành sản phẩm VP2-4-3 hoàn chỉnh Sản phẩm SegA1 có độ dài khoảng 1,6 kb SegA2 (1,4 kb) đợc dòng hoá vào pCR2.1TOPO, gọi plasmid trung gian lu giữ nguồn gen phân đoạn A Các đoạn SeqA1 SeqA2 đợc tách nối vào pcDNA3.1(+), đợc plasmid giống gốc pG-A chứa phân đoạn A Đã thiết kế thành công plasmid giống gốc pG-A, đợc kiểm tra cách: i) cắt EcoRI-NotI kiểm tra độ dài phân đoạn A (3,05 kb); ii) giải trình trình tự kiểm tra khung đọc thành phần phân đoạn A Từ phơng pháp kết phân tích trên, chọn đợc chủng để làm giống sản xuất vacxin ADN, là: - Chủng GHUT-12 (phân lập Thừa Thiên-Huế): ký hiệu giống pG-A(HUT12) - Chủng GT1ST (phân lập Sóc Trăng): ký hiệu giống pG-A(T1ST) - Chủng GHUT-1 (phân lập Thừa Thiên-Huế): ký hiệu giống pGA(HUT-1) Toàn chuỗi gen phân đoạn A plasmid giống gốc chủng GHUT-12 pG-A(HUT-12) đợc giải mã toàn đăng ký Ngân hàng gen số: DQ778035 Đã xây dựng qui trình sản xuất kiểm nghiệm vacxin ADN đa chủng Gumboro Việt Nam Qui trình 1: Qui trình công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Gumboro; gồm công đoạn, tóm tắt nh sau: Công đoạn I (tiếp giống sản xuất vacxin đơn chủng): Lấy 0,1 àl ADN plasmid đơn chủng, chuyển nạp vào tế bào DH5, trải đĩa thạch LB-agar có ampicillin X-gal; Công đoạn II (sản xuất vacxin đơn chủng): Chọn khuẩn lạc, nuôi cấy vi khuẩn tách chiết thu hoạch ADN plasmid theo lô sản xuất; Thu hoạch ADN plasmid qui mô nhỏ sử dụng hóa chất (kit) EndoFree Plasmid Mega Kit (QIAGEN), qui mô vừa lớn sử dụng phơng pháp tách chiết ADN plasmid đợc mô tả Sambrook 13 Báo cáo tóm tắt LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH Russell (2001); kiểm tra hàm lợng ADN, an toàn, vô trùng phân tử; Công đoạn III (kiểm nghiệm phối hợp vacxin): Vacxin đợc kiểm nghiệm lý-hoásinh học, phối hợp thành vacxin đa chủng tiến hành kiểm nghiệm miễn dịch Qui trình 2: Qui trình kiểm định sử dụng vacxin ADN đa chủng Gumboro; gồm công đoạn, tóm tắt nh sau: Công đoạn I (kiểm định chất lợng vacxin ADN thơng phẩm): kiểm định lý-hoá-sinh học, vi sinh vật học, an toàn liều lợng phân tử, tiêu bảo quản; Công đoạn II: (kiểm định miễn dịch vacxin ADN thơng phẩm): bố trí lô gà thí nghiệm đối chứng, lô thí nghiệm tiêm vacxin đa chủng lần lúc ngày tuổi 14 ngày tuổi, vacxin gồm chủng (100 àg ADN/liều), thu huyết thanh, kiểm tra kháng thể ELISA sử dụng kit FlockChek (IDEXX, Mỹ); giá trị S/P lớn 0,2 (hay hiệu giá kháng thể >396 dơng tính với kháng thể Gumboro, [...]... dụng vacxin 17 Bố trí khảo nghiệm ở địa phơng tại miền Bắc và miền Trung Mục 6: Tổng kết Báo cáo tổng kết, công bố Ngân hàng gen, công bố khoa học, đào tạo, trao đổi khoa học A4 các sản phẩm đăng ký của đề tài Sản phẩm QUY TRìNH 1 Quy trình I: Công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng phòng bệnh Gumboro tại Việt Nam 2 Quy trình II: Kiểm định chất lợng vacxin ADN đa chủng và sử dụng Sản phẩm giống và vacxin. .. mức độ lại độc cao, vacxin vô hoạt cho miễn dịch cha đều, virus cờng độc gây bệnh đa dạng và chơng trình vacxin cho gà mẹ, gà con và gà dò cha đúng chủng loại và lịch trình phù hợp Cho đến khi thực hiện đề tài này, ở Việt Nam, cha có bất kỳ một công trình nào nghiên cứu vacxin ADN nói chung, và vacxin ADN ứng dụng phòng chống bệnh Gumboro nói riêng Tuy nhiên, đã có những nghiên cứu phân tử đợc tiến... phả hệ các chủng virus cờng độc Gumboro và nghiên cứu vacxin tái tổ hợp (Yamaguchi và cs, 1996; Scherbacova và cs, 1998; Chang và cs, 2002) (Hình B-1) B1.5 Vacxin phòng bệnh Vacxin ứng dụng phòng chống bệnh Gumboro gồm 2 loại: vacxin truyền thống (vacxin vô hoạt, vacxin nhợc độc sống) thuộc thế hệ cũ, và vacxin thế hệ mới bao gồm các loại vacxin tái tổ hợp chứa ADN gen kháng nguyên hoặc sản phẩm protein... tiêm vacxin Gumboro và giám định phân tử và phân nhóm phả hệ virus gây bệnh Nhiều nghiên cứu về sản xuất vacxin nhợc độc sống nhập nội nuôi cấy trên tế bào (Đái Duy Ban, 1991), thử nghiệm một số vacxin ở Việt Nam (Nguyễn Tiến Dũng và cs, 1993), sản xuất vacxin Gumboro đông khô 2512 (Trần Thị Liên và Trần Khâm, 1999), tạo vacxin vô hoạt nhũ dầu và kiểm tra an toàn hiệu lực và thử nghiệm sử dụng trên gà. .. PGS.TS Phân công công việc chính Su tập và tạo các loại tế bào chủ thích hợp, cung cấp tế bào để sản xuất vacxin Thiết kế plasmid gốc chứa gen VP2 phân lập từ các chủng Gumboro ở tỉnh Thừa Thiên Huế Thử nghiệm liệu pháp vacxin (chất mang, bổ trợ, phơng pháp sử dụng) Phân lập gen VP2 từ các chủng Gumboro ở các tỉnh phụ cận Hà Nội và thiết kế plasmid gốc cho sản xuất vacxin ADN Khảo nghiệm vacxin ở miền... triệt để, virus Gumboro có sức đề kháng cao với điều kiện tự nhiên, cho nên bệnh tồn tại và lu hành rộng rãi, cũng nh vacxin nhập ngoại có nguồn kháng nguyên không hoàn toàn tơng ứng với các chủng gây bệnh của Việt Nam (Nguyễn Tiến Dũng, 1996; Lê Thanh Hoà, 2002; Lê Thanh Hoà, 2003a,b) Cho đến khi đề xuất đề tài nghiên cứu vacxin ADN Gumboro (thời điểm 2003), đã có nhiều nghiên cứu về Gumboro ở Việt... các hớng nghiên cứu dịch tễ bệnh, chẩn đoán và nghiên cứu ứng dụng vacxin thế hệ cũ bao gồm khảo sát dịch tễ bệnh, điều tra mức độ nhiễm bệnh và hớng phòng chống, phân lập giám định virus gây bệnh và biến đổi bệnh lý, phân lập giám định phân tử, phơng thức chẩn đoán bằng bệnh lý học vi thể, chẩn đoán bằng huyết thanh học sử dụng phản ứng khuếch tán trên thạch AGP (agar gel precipitation), sử dụng phản... (dòng tế bào chủ ổn định) 12 Nghiên cứu chuyển nạp plasmid gốc vào các dòng tế bào chuẩn, giữ giống gốc (dòng tế bào tái tổ hợp chứa plasmid gốc) NHóM II: (Sản xuất, kiểm nghiệm và thử nghiêm vacxin) Mục 4: Nghiên cứu sản xuất vacxin 13 Nghiên cứu các điều kiện lên men, nhân ADN plasmid tái tổ hợp từ plasmid gốc (ADN plasmid chứa gen VP2 hoặc phân đoạn A để làm vacxin) 14 Nghiên cứu kỹ thuật tinh sạch ADN... A để làm vacxin, kiểm tra an toàn, vô trùng 6 Bỏo cỏo tng kt LTH/KC.04.29(2004-2006)/VCNSH 15 Sản xuất lô vacxin quy mô nhỏ và lớn (yêu cầu cần đạt: 100.000 liều vacxin) , thử nghiệm liệu pháp vacxin (chất mang, bổ trợ, phơng pháp sử dụng) , bố trí thử nghiệm vacxin ở trại thí nghiệm, đánh giá hiệu lực Mục 5: Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất, kiểm nghiệm vacxin 16 Xây dựng quy trình sản xuất, kiểm... (1991) Vacxin Gumboro nhợc độc sản xuất tại Việt Nam Báo cáo tổng kết trình bày tại Tiểu ban Chăn nuôi Thú Y, Bộ Nông nghiệp và công nghiệp thực phẩm (5.1991) Đái Duy Ban, Phạm Công Hoạt, Phan Thanh Phợng (1998) Độ an toàn và hiệu lực của vacxin vô hoạt nhũ dầu Gumboro sản xuất ở trong nớc Tạp chí Sinh học, 20:41-44 Bitay Zoltan, Trần Minh Châu, Dơng Công Thuận (1984) Phát hiện bệnh Gumboro ở gà công ... KC.04.29: Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Gumboro phòng bệnh cho gà đợc tiến hành với mục tiêu tổng thể nghiên cứu ứng dụng thêm loại vacxin hệ mới, đa dạng hoá vacxin Gumboro. .. giống sản xuất vacxin ADN tiến hành nghiên cứu xây dung Quy trình: i) Quy trình công nghệ sản xuất vacxin ADN đa chủng Việt Nam; ii) Quy trình kiểm định sử dụng vacxin ADN đa chủng Việt Nam Sử dụng. .. CứU ứng dụng công nghệ Sản xuất vacxin adn đa chủng gumboro phòng bệnh cho gà Chủ nhiệm: PGS.TS Lê Thanh Hoà Hà Nội/11-2006 Bản quyền báo cáo thuộc Viện Công nghệ sinh học Sao chép sử dụng toàn