Bệnh khảm lá bầu bí đã được xác định do PRSV gây ra.PRSV có bộ gen RNA thuộc chi Potyvirus
PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Việt Nam nước nhiệt đới gió mùa, đất đai màu mỡ thuận lợi để phát triển nông nghiệp Các vùng trồng rau màu phát triển theo hướng chuyên canh với quy mô lớn nhằm đáp ứng nhu cầu người tiêu dùng nước xuất ngày tăng Tuy vậy, suất nông sản bấp bênh theo vụ, năm ảnh hưởng thời tiết, thiên tai, dịch hại mà đặc biệt bệnh hại, bệnh virus gây thiệt hại đáng kể Bệnh virus gây thiệt hại lớn làm cho trồng bị chết nhanh chóng mà chúng làm cho bị thoái hóa, giảm sức sống, tàn lụi Ở lâu năm số virus gây nên tượng triệu chứng làm cho người sản xuất nhầm lẫn, không phát bệnh, đến lúc tàn lụi, người sản xuất biết muộn Ngoài ảnh hưởng đến sức sống cây, bệnh virus ảnh hưởng lớn tới sản phẩm cuối làm biến dạng quả, giảm suất chất lượng Trong số trồng nông nghiệp Việt Nam giới, rau ăn thuộc họ bầu bí xem trồng quan trọng phổ biến dễ trồng có giá trị dinh dưỡng cao, cung cấp lương thực thực phẩm cho người làm thức ăn chăn nuôi… Trên họ bầu bí phải đối mặt với nhóm bệnh quan trọng bệnh virus Bệnh khảm phổ biến, đặc biệt bí ngô, bí xanh dưa chuột, bí ngồi loại dưa Gọi bệnh khảm triệu chứng khác kèm theo thường sinh trưởng còi cọc, bị biến dạng dội Hậu suất, chất lượng giá trị thẩm mỹ bị giảm mạnh Một số biện pháp phòng chống virus thử nghiệm đối tượng virus bao gồm phòng chống vector dùng bẫy xua đuổi tạo tính kháng tập nhiễm hệ thống (Systemic Acquired Resystance, SAR) cách xử lý với số hóa chất Salicylic Acid (SA) Acybenzolar-SMethyl (BION) Tính kháng tập nhiễm hệ thống tính kháng phổ rộng, chống nhiều tác nhân gây bệnh kể virus Tuy nhiên biện pháp chưa thử nghiệm Papaya ringspot virus Bệnh khảm Papaya ringspot virus (PRSV) bầu bí phát Webb Scott (1965) PRSV virus có gen RNA, thuộc chi Potyvirus, họ Potyviridae Virus PRSV có phổ ký chủ hẹp Ngoài tự nhiên, PRSV không truyền qua hạt giống lan truyền tự nhiên nhiều loài rệp muội họ Aphididae theo kiểu không bền vững Bệnh PRSV họ bầu bí phổ biến, biện pháp phòng chống bệnh lan truyền theo kiểu không bền vững nên phòng chống vector Có thể phòng chống hiệu giống kháng chưa có giống kháng xác định Việt Nam Xuất phát từ tình hình thực tiễn trên, phân công Bộ môn Bệnh cây, Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, hướng dẫn TS Hà Viết Cường, thực đề tài: “Nghiên cứu bệnh khảm Papaya ringspot virus (PRSV) bầu bí Gia Lâm” 1.2 Mục đích - Tìm hiểu tình bệnh khảm virus Papaya ringspot họ bầu bí huyện Gia Lâm - Xác định tính kháng bệnh virus tập đoàn dòng giống bầu bí thu thập 1.3 Yêu cầu - Điều tra thành phần bệnh hại bầu bí Gia Lâm - Đánh giá tính kháng bệnh khảm tập đoàn giống dưa chuột bí ngô Khoa Nông học - Xác định virus thu thập đồng ruộng ELISA (PRSV, ZYMV, CMV) begomovirus PCR - Lây nhiễm nhân tạo tiếp xúc học virus PRSV số giống tiềm kháng trông điều kiện nhà lưới PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm chung chi Potyvirus 2.1.1 Phân loại Họ Potyviridae (tên có nguồn gốc từ Potato vius Y) họ virus thực vật lớn với 200 loài (bảng 2.1) Tất thành viên họ có gen RNA sợi đơn, cực dương, có phân tử dạng sợi mềm đường kính 11-15 nm dài 650-950 nm virus có gen đơn ( Hình 2.1) 200-300 x 500-600 nm dài 650-950 nm virus có gen kép Hiện nay, potyvirus phân loại thành chi sở tổ chức gen, vector lan truyền, so sánh trình tự Đặc điểm gen, mối quan hệ vector số loài chi trình bày bảng 2.1 Trong số chi, chi Potyvirus quan trọng nhất, số lượng loài bệnh có ý nghĩa kinh tế mà chúng gây Các virus chi Potyvirus, Macluravirus, Ipomovirus, Rymovirus Tritimovirus có gen không phân đoạn tức gen gồm phân tử RNA nên gọi virus có gen đơn Các virus chi lại, chi Bymovirus, có gen kép gồm phân tử RNA-1, RNA-2 Đối với bymovirus, phân tử RNA-1 tương đương với 2/3 kính thước tính từ đầu 3’ phân tử RNA-2 tương đương phần lại gen virus có gen đơn Bảng 2.1 Phân loại họ Potyviridae Chi Loài chuẩn Bộ gen 1.Potyvirus Potato virus Y (PVY) Bộ gen đơn Sweet Potato mild mottle 2.Ipomovirus virus (SPMMV) 3.Macluravirus (MacMV) Ryegrass mosaic virus 4.Rymovirus (RGMV) 5.Tritimovirus 6.Bymovirus Maclura mosaic virus Wheat streak mosaic virus (WSMV) Bộ gen đơn Vectơ Rệp( không bền vững) Bọ phấn Số loài 197 ( Không bền vững) Rệp Bộ gen đơn ( không bền vững) Nhện Bộ gen đơn (bền vững hoàn toàn) Nhện Bộ gen đơn (bền vững hoàn toàn) Barley yellow mosaic virus (BaYMV) Bộ gen kép Tổng Nấm 218 2.1.2 Đặc điểm phân tử virus (virion) Phân tử potyvirus có hình sợi mềm, kích thước 11-15 x 650-950 nm Mỗi phân tử virion cấu tạo từ 1700-2000 tiểu phần protein xếp theo kiểu xoắn đối xứng xung quanh phân tử RNA genome http://viralzone.expasy.org/all_by_species/50.html Hình 2.1 Hình thái virion potyvirus Acid nucleic: Tất potyvirus có chứa phân tử RNA genome sợi Tổ chức gen potyvirus giống nhau, tính từ trái sang phải là: • Đầu 5’ chứa vùng không dịch mã (5’UTR) • Một ORF đơn, lớn gọi ORF (major ORF) • Đầu 3’ chứa vùng không dịch mã (3’UTR) chuỗi polyA http://viralzone.expasy.org/all_by_species/50.html Hình 2.2 Tổ chức gen potyvirus 2.1.3 Lan truyền Lan truyền tự nhiên rệp muội theo kiểu không bền vững Nhiều virus truyền qua vật liệu giống củ giống (PVY - khoai tây; OYDV, LYSV, SYSV - hành tỏi), hạt (BCMV - đậu đỗ), qua phấn hoa (BCMV đậu đỗ) Có thể truyền qua tiếp xúc học 2.1.4 Cách chẩn đoán xác định Potyvirus Chẩn đoán PTA-ELISA (Plate trapped antigen- Enzyme linked immunosorbent assay) Chẩn đoán RT-PCR 2.2 Giới thiệu Papaya ringspot virus 2.2.1 Phân loại Họ: Potyviridae Giống: Potyvirus Loài: Papaya ringspot virus Tên viết tắt: PRSV Đặc điểm virus PRSV PRSV chia làm hai dạng PRSV-w PRSV-p Trong đó, PRSV-p xâm nhiễm gây hại hầu hết loài đu đủ thuộc họ bầu bí giới, PRSV-w xâm nhiễm thuộc họ bầu bí, không xâm nhiễm đu đủ Cây trồng dễ bị nhiễm bệnh 2.2.2 Môi giới truyền bệnh PRSV loài vi sinh vật sống kí sinh Chúng lây truyền từ chủ sang chủ khác thông qua vector Đó hai loài aphids (rầy mềm hay rệp muội), Aphis gossypii (rệp bông) Myzus persicae (rệp đào), chúng mang theo virus thể truyền sang chúng chích hút cây, truyền theo phương thức không bền vững (non-persistant) Ngoài ra, bệnh bị lây truyền từ bệnh sang lành người chạm vào bệnh sau chạm vào lành lây truyền trực tiếp qua vết thương học Virus không truyền qua hạt bị bệnh Đồng thời virus khả tồn môi trường đất mô bị chết (Purcifull et al., 1984) 2.2.3 Triệu chứng Bệnh gây tượng khảm cây, có nhiều màu vàng xanh lẫn lộn, khảm nặng biến sang màu vàng Lá bị bệnh có kích thước nhỏ lại biến dạng, nhăn Quả nhỏ, biến dạng, chai sượng 2.2.4 Biện pháp phòng chống Hiện chưa có biện pháp phòng trừ hữu hiệu bệnh Trước mắt áp dụng số biện pháp phòng trị sau: - Tạo nguồn bệnh vườn ươm cách ly chống rệp - Không trồng họ bầu bí vùng nhiễm bệnh - Phun thuốc hoá học kết hợp biện pháp hoá học để diệt côn trùng truyền bệnh, rệp rệp đào Một số thuốc hữu hiệu trừ rệp: Bassa, Trebon, Pegasus, Applaud, Sumicidin, Supracid, Zolone - Thực chọn lọc, vệ sinh vườn bầu bí thường xuyên để loại bỏ bệnh, tránh lây lan 2.3 Nguồn gốc xuất xứ tình hình sản xuất họ bầu bí Dưa chuột (Cucumis sativus) trồng phổ biến họ bầu bí Cucurbitaceae, loại rau ăn thương mại quan trọng, trồng lâu đời giới trở thành thực phẩm nhiều nước Những nước dẫn đầu diện tích gieo trồng suất là: Trung Quốc, Nga, Nhật Bản, Mỹ, Hà Lan, Thổ Nhĩ Kỳ, Ba Lan, Ai Cập Tây Ban Nha Bảng 2.2 Tình hình sản xuất dưa chuột số nước giới qua năm 2006, 2007 Quốc gia Thế giới Trung Quốc Nhật Bản Indonesia Mexico Thái Lan Canada Cuba Diện tích (nghìn ha) 2006 2007 2524,11 2583,3 1603,6 1653,8 13,1 13 58,65 59 17,73 18 28 28 2,55 2,48 17,55 18 Năng suất (tấn/ha) 2006 17,46 17,06 47,96 10,21 27,98 7,93 85,06 8,87 2007 17,27 16,97 48,77 10,17 27,78 7,93 88,82 8,78 Sản lượng (nghìn tấn) 2006 2007 44065,87 44610,94 27357 28062 628,3 634 598,89 600 496,03 500 222 222 216,56 220 155,67 158 Nguồn: FAO.org Bí ngô (Curcurbita pepo L var pepo) trồng hầu hết hạt California, sản xuất có xu hướng tập trung gần khu dân cư hầu hết bí ngô bán thị trường địa phương trực tiếp cho người tiêu dùng Bí ngô có giá trị dinh dưỡng giá trị sử dụng cao: Trong 100g thịt bí ngô có 0,9g protein, - 6g gluxit, có nhiều vitamin B1, B2, PP, B6 đặc biệt có 400g vitamin B5 có axit béo quý linoleic, linolenic, 28mg beta - caroten Bí ngô có nhiều nguyên tố vi lượng axit amin như: alanine, valin, leucin, cystin, lysin Hạt bí ngô chứa nhiều dầu béo có tác dụng trừ giun sán tốt Trong 100g màng đỏ bao quanh hạt có tới 250 mg beta - caroten 100g tươi bí ngô chứa mg beta caroten Dưa hấu (Citrullus lanatus) trồng miền Nam nước Mỹ Trên giới, 10 virus biết gây hại cho sản xuất dưa hấu (Provvidenti, 1986b) Hầu hết virus gây bệnh cho dưa hấu Mỹ Papaya ringspot virus – type W (PRSV-W), watermelon mosaic virus (WMV) zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) 2.3.1 Thành phần bệnh virus họ bầu bí Bệnh khảm Papaya ringspot virus (PRSV) bầu bí phát Webb Scott (1965) Papaya ringspot virus type W (PRSV-W) làm cho trồng còi cọc, phiến nhỏ không đều, khảm chỗ tối chỗ xanh chỗ phồng lên Quả biến dạng, u màu PRSV-W trước có tên Watermelon mosaic virus (WMV-1) Nó potyvirus, với sợi dài 760-800 x 12 nm có lõi RNA Phổ ký chủ PRSV-W họ bầu bí PRSV-W có vector truyền bệnh loài rệp muội Cucumber mosaic virus (CMV) tìm thấy khắp nơi giới gây bệnh 800 loài (cây trồng dại), bao gồm họ bầu bí CMV làm phát triển còi cọc, bị biến dạng, giảm kích thước, quăn cuộn lại, có vết khảm vàng vết chấm lốm đốm với khoảng vàng Lá non đỉnh sinh trưởng biến dạng hình nơ Hoa bị méo mó có cánh hoa xanh Quả nhỏ, mã màu CMV cucumovirus có dạng hình cầu đường kính 29 nm bao gồm sợi đơn RNAs Virus truyền loài rệp muội Squash leaf curl virus (SLCV) tìm thấy từ năm 1970s vùng Tây Nam nước Mỹ Ngay sau virus tìm thấy loài bầu bí trồng vùng nước Mỹ, Mexico châu Mỹ SLCV gây triệu chứng vết khảm vàng sang xen lẫn vết chấm lốm đốm Lá bị quăn, nhỏ Cây còi cọc, phát triển Hoa nở muộn rụng Quả không phát triển, biến dạng, màu SLCV geminivirus, có sợi dài 20 x 30 nm axit nucleic dạng sợi đơn DNA Vector truyền bệnh bọ phấn phát họ bầu bí Squash mosaic virus (SqMV) biết từ sớm năm 1990s Ở nhiều nước giới giảm sút sử dụng hạt bị virus Squash mosaic virus (SqMV) có triệu chứng thay đổi cực độ Lá khảm đậm nhạt, gân xanh thẫm, đốm hình nhẫn giống với số virus khác Lá mầm có triệu chứng Cây còi cọc xấu xí, màu SqMV thuộc nhóm comovirus, kích thước sợi virus 28-30nm Axit nucleic có sợi đơn RNAs Các chủng khác gây triệu chứng khác loài bầu bí khác Vector virus bọ cánh cứng có sọc có đốm (Acalymma trivittatum), (Diabrotica undecimpunctata) Virus bền vững lây truyền suốt trình sản xuất thu hoạch Ký chủ virus loài thuộc họ bầu bí họ rau muối WMV thuộc nhóm potyvirus với sợi dài 730–765 nm axit nucleic dạng RNA WMV gây hại họ bầu bí, họ đậu trồng khác; ký chủ virus khoảng 150 loài Vector truyền bệnh rệp muội Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) virus hại bầu bí quan trọng giới gây mùa màng Bệnh phát miền Bắc Italy miền Nam nước Pháp năm cuối 1970s tới 1980s tìm thấy UK năm 1987 Lá bị phồng lên khảm xanh thẫm, biến dạng, có khía, cưa, chết hoại triệu chứng khác Cây phát triển còi cọc, lóng ngắn Quả biến dạng, u, phồng nứt ZYMV thuộc nhóm potyvirus với sợi dài 750 x 11 nm axit nucleic dạng sợi đơn RNA Bao gồm số chủng khác ZYMV truyền rệp muội, hạt có vỏ mỏng qua vết cắt trình thu hoạch Bảng 2.3 Thành phần bệnh virus gây hại bầu bí xác định giới STT Loài virus Viết tắt Họ (Family) Chi (Genus) Cucumber mosaic virus CMV Bromoviridae Cucumovirus Squash mosaic virus SqMV Comoviridae Comovirus Squash leaf curl virus SLCV Geminiviridae Begomovirus Watermelon mosaic virus WMV1 Potyviridae Potyvirus Watermelon mosaic virus WMV2 Potyviridae Potyvirus Papaya ringspot virus type W PRSV-W Potyviridae Potyvirus Môi giới truyền bệnh Rệp muội (Aphidiae) Bọ cánh cứng Bọ phấn (Bemisia sp.) Rệp muội (Aphidiae) Rệp muội (Aphidiae) Rệp muội (Aphidiae) Tuyến trùng (Xiphinema Tobacco ringspot virus TRSV Secoviridae Nepovirus americanum), bọ trĩ (Thrips tabaci), nhện Zucchini yellow mosaic virus ZYMV Potyviridae Potyvirus (Tetranychus) Rệp muội (Aphididae) 2.3.2 Tình hình sản xuất bầu bí Việt Nam Các giống rau bầu bí trồng phổ biến nước ta như: bí ngô, bí ngồi, dưa chuột (dưa leo), dưa hấu… Riêng dưa chuột xem loại rau chủ lực, có diện tích 19.874 ha, suất 16,88 tấn/ha, sản lượng 33.537 đứng sau cà chua 10 làm thí nghiệm Sau đó, thêm vào bột carborandum 600 Mesh vào hỗn hợp dịch nghiền để tiến hành lây nhiễm Lúc tiến hành lây nhiễm, dùng tăm thấm dịch bệnh chà từ cuống lên chót 2- lần cho không bị rách Các lây nhiễm trồng trước lây nhiễm khoảng tuần, giai đoạn mầm hình thành thật Hình 4.15 Cây nguồn đánh dấu mẫu trước lây nhiễm Hình 4.16 Dịch bệnh, dụng cụ chậu dưa chuột tiến hành lây nhiễm tiếp xúc học Sau tiến hành lây nhiễm phòng điều hòa với nhiệt độ 25 0C vào thời điểm chiều mát Chúng tiến hành bố trí thí nghiệm theo kiểu khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh RCBD nhà lưới chống côn trùng 45 Các tiếp tục chăm sóc đánh giá cấp độ bệnh theo thang cấp sau 1, 2, tuần lây nhiễm Số liệu trình bày bảng 4.9 Ở tuần đánh giá cuối cho thấy giống T1- 126 có tỷ lệ nhiễm PRSV 6.7% thấp nhiều so với giống lại Các giống SL27b, HY1 SL29g có tỷ lệ 92.9, 81.8 77.8 mẫn cảm với virus khảm PRSV Hình 4.17 Bố trí thí nghiệm nhà lưới chống côn trùng Bảng 4.10 Đánh giá tính kháng PRSV tập đoàn giống dưa chuột tiềm kháng STT Giống Sau lây tuần TLB (%) Cấp bệnh TB Sau lây tuần Cấp TLB bệnh (%) TB Sau lây tuần TLB (%) Cấp bệnh TB Sau lây tuần TLB (%) Cấp bệnh TB LCH3b 0.0 0.0 28.6 1.0 53.3 1.6 42.9 2.5 HY1 14.3 1.0 15.4 2.0 66.7 1.8 81.8 2.6 SL29g 11.1 1.0 22.2 1.5 66.7 1.7 77.8 2.3 SL27b 43.8 1.6 66.7 2.4 80.0 2.6 92.9 3.2 T1-126 0.0 0.0 0.0 0.0 6.7 2.0 6.7 3.0 4.5.3 Kiểm tra ELISA tất sau tuần lây nhiễm Để xác định mức độ nhiễm virus PRSV tất lây nhiễm chăm sóc điều kiện nhà lưới chống côn trùng, tiến hành thu tất mẫu dưa chuột (63 mẫu) kiểm tra phương pháp PTA46 ELISA Kết ELISA trình bày bảng 4.10 Kết cho thấy lây nhiễm tỷ lệ nhiễm virus PRSV cao 51/63 (81.0%) Hình 4.18 Kiểm tra ELISA lây nhiễm PRSV nhà lưới Bảng 4.11 Kiểm tra ELISA virus PRSV lây nhiễm STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Mẫu PRSV OD 3.943 3.623 4.230 3.705 3.176 3.930 3.032 3.024 3.889 4.051 3.156 3.278 4.270 3.795 0.492 2.632 2.830 3.834 3.320 3.772 HY1 I- HY1 II- HY1 II- HY1 II- HY1 II- HY1 II- HY1 III- HY1 III- HY1 III- HY1 III- HY1 III- LCH3b I- LCH3b I- LCH3b I- LCH3b I- LCH3b I- LCH3b II- LCH3b II- LCH3b II- LCH3b II- 47 Phản ứng + + + + + + + + + + + + + + + + + + + STT 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 Mẫu PRSV OD 0.279 3.519 3.749 0.509 3.716 0.469 4.732 4.621 3.433 3.510 3.852 3.954 4.133 3.353 4.061 3.677 4.018 4.109 4.599 3.273 2.214 3.577 2.521 4.090 2.565 3.705 3.366 1.246 3.334 0.224 1.552 2.482 0.553 0.237 0.230 0.272 1.669 3.914 0.291 0.259 LCH3b II- LCH3b III- LCH3b III- LCH3b III- LCH3b III- LCH3b III- SL27b I- SL27b I- SL27b I- SL27b I- SL27b I- SL27b II- SL27b II- SL27b II- SL27b II- SL27b II- SL27b III- SL27b III- SL27b III- SL29g I- SL29g I- SL29g I- SL29g II- SL29g II- SL29g II- SL29g III- SL29g III- SL29g III- T1_126 I- T1_126 I- T1_126 I- T1_126 I- T1_126 I- T1_126 II- T1_126 II- T1_126 II- T1_126 II- T1_126 II- T1_126 III- T1_126 III- 48 Phản ứng + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - STT 61 62 63 64 65 Mẫu PRSV OD 2.486 0.278 1.446 T1_126 III- T1_126 III- T1_126 III- Đối chứng Phản ứng + + 0.287 khỏe Đối chứng khỏe Ngưỡng* Số mẫu dương Phần trăm mẫu dương 0.334 0.621 51 81.0 Qua kết đánh giá tất lây nhiễm (bảng 4.9) kết kiểm tra ELISA (bảng 4.10) cho thấy giống cho có tiềm kháng SL27b SL29g với tỷ lệ bệnh 92.9 77.8% mẫn cảm với virus PRSV Giống LCH3b với tỷ lệ nhiễm bệnh 42.9 cấp bệnh trung bình 2.5 có khả kháng tốt với PRSV Bên cạnh đó, giống đối chứng kháng Nhật T1126 với tỷ lệ bệnh 6.7% thấp cấp bệnh trung bình 3.0 có khả kháng với virus PRSV giống trồng thí nghiệm 4.6 PCR phát bogomovirus bầu bí thu thập năm 2014 2015 Trong trình kiểm tra ELISA mẫu dưa chuột vụ Đông năm 2014 mẫu bí ngô, dưa chuột vụ Xuân hè năm 2015 phát potyvirrus gây bệnh bầu bí, chưa phát bogomovirrus gây bệnh bầu bí Tại miền Bắc Việt Nam, có begomovirus phát thấy bầu bí Squash leaf curl China virus (SqLCCNV) (Revill et al., 2003) Mục tiêu nghiên cứu phát begomovirus PCR dùng mồi đặc hiệu cho begomovirus (cặp mồi BegoAFor1/BegoARev1) mẫu bầu bí thu thập có biểu triệu chứng bệnh virus Bảng 4.12 Kiểm tra PCR mẫu thu thập từ khu ruộng thí nghiệm khoa Nông học năm 2014 2015 49 ST PCR BegoAFor1/ Krusty & Mẫu Giống Triệu chứng Năm M1 Dưa chuột 2014 BegoARev1 - Homer - M2 Dưa chuột Khảm biến vàng khảm nhăn + biến dạng 2014 - - 10 11 12 13 14 15 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10 M11 M12 M13 M14 M15 Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Bí ngô Bí ngô Bí ngô Bí ngô Bí ngô Bí ngô Bí ngô Bí ngô 2014 2014 2014 2014 2014 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 - + + + + + + + + 16 M16 Bí ngô 2015 - + 17 M17 Bí ngô 2015 - + 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 M18 M19 M20 M21 M22 M23 M24 M25 M26 M27 M28 M29 M30 Bí ngô Bí ngô Bí ngô Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột Dưa chuột 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 2015 - + + + + + + + - T +biến vàng Khảm biến vàng Khảm biến vàng Khảm biến vàng Khảm biến vàng Khảm biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Đốm biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Khảm biến vàng Khảm nhăn + đốm biến vàng Khảm nhăn + đốm biến vàng Khảm biến vàng Khảm nhăn + biến vàng Khảm biến vàng Khảm đốm biến vàng Khảm nhăn + biến dạng khảm biến dạng Khảm nhăn Khảm Khảm biến dạng Khảm Khảm Khảm nhăn + biến dạng Khảm biến dạng 50 M Ca 10 11 12 13 14 15 16 N M 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Ca 26 27 28 29 30 N Hình 4.19 Kết PCR phát begomovirus (cặp mồi Krusty & Homer) 30 mẫu bầu bí thu Gia Lâm năm 2014 2015 (thứ tự mẫu trình bày bảng 4.12) M thang DNA (Genruler Kb, hãng Fermentas) với băng tham khảo kb Ca mẫu cà chua thu nhà lưới Trung tâm bệnh nhiệt đới- HVNNVN, N mẫu nước cất làm đối chứng Kết PCR cho thấy tất 30 mẫu dưa chuột bí ngô biểu triệu chứng bệnh virus có phản ứng PCR âm tính với cặp mồi đặc hiệu begomovirus (cặp mồi BegoAFor1/BegoARev1) Qua kiểm tra mồi BegoARev1 bắt cặp với DNA SLCCNV trình tự vị trí 3’ SLCCNV AA mồi CC Vì cặp mồi BegoAFor1/BegoARev1 không phát SLCCNV có mẫu thu thập Tiến hành kiểm tra PCR cặp mồi đặc hiệu phát begomovirus (DNA – A) Krusty & Homer kích thước khoảng 600 bp Kết cho thấy 17/30 mẫu có phản ứng dương tính với mồi đặc hiệu Krusty & Homer Qua kết PCR (bảng 4.12) có 13 mẫu bí ngô mẫu dưa chuột nhiễm begomovirus, đánh giá tính kháng PRSV tự nhiên tập đoàn giống dưa chuột xác, đánh giá tập đoàn giống bí ngô phức tạp tỷ lệ nhiều begomovirustreen bí ngô cao ảnh hưởng nhiều đến biểu triệu chứng PRSV gây 51 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình nghiên cứu bệnh khảm papaya ringspot virus (PRSV) họ bầu bí Huyện Gia Lâm vụ Đông năm 2014 vụ Xuân hè năm 2015 chúng tối có số kết luận sau : Điều tra đồng ruộng ruộng bầu bí khu vực Gia Lâm Vụ Đông 2014 phát bệnh gồm bệnh biến vàng (do virus), bệnh khảm nhăn (do virus), bệnh phấn trắng (nấm ) bệnh sương mai (nấm) Điều tra định kì bệnh virus tập đoàn 46 giống dưa chuột môn Rau Hoa Qủa trồng khoa Nông học , vụ Đông 2014 xác định giống có tiềm kháng bệnh khảm Papaya ringspot virus là HB1, LCH3b, SL29g SL27b Điều tra định kì bệnh virus tập đoàn 47 giống dưa chuột môn Rau Hoa Qủa trồng khoa Nông học , vụ Xuân hè 2015 xác định giống có tiềm kháng bệnh khảm PRSV NEP1, THI LCH3b So sánh giống tiềm kháng qua vụ Đông 2014 vụ Xuân hè 2015 cho thấy giống LCH3b có tiềm kháng với virus PRSV Kiểm tra ELISA xác định thành phần virus bầu bí Gia Lâm năm 2014-2015 gồm virus PRSV, CMV, ZYMV, virus PRSV nguyên nhân gây nên triệu chứng bệnh virus Kiểm tra PCR xác định tập đoàn giống bí ngô dưa chuột potyvirus có begomovirus gây bệnh khảm Đánh giá tính kháng bệnh khảm PRSV giống có tiềm kháng (SL29g, SL27b, LCH3b HB1) phương pháp lây nhiễm nhân tạo nhà lưới chống côn trùng xác định giống LCH3b có tính kháng với PRSV Ngoài qua kết đánh giá tính kháng nhà lưới thấy giống đối chứng kháng Nhật T1-126 có biểu tính kháng PRSV tốt 5.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu tính kháng bệnh khảm Papaya ringspot virus bầu bí 52 PHẦN VI TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Cục BVTV (1997), Phương pháp điều tra phát bệnh hại trồng, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Hà Viết Cường (2008), Giáo trình dịch bệnh cây, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Hà Viết Cường (2008), Giáo trình miễn dịch thực vật, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Hà Viết Cường, Trần Thị Như Hoa, Vũ Triệu Mân, Peter Revill, James Dale, Phát virus gây bệnh bầu bí Việt Nam, Detection of viruses Infecting Cucurbits in Viet Nam, Hội thảo bệnh sinh học phân tử, 2002, tr 26-28 Vũ Triệu Mân, Lê Lương Tề (1998), Giáo trình bệnh Nông nghiệp, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Triệu Mân (1995), Một số bệnh virus hại họ bầu bí vùng đồng sông hồng miền bắc Việt Nam, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 5, Tr 3033 Vũ Triệu Mân (2003), Chẩn đoán nhanh bệnh hại thực vật, NXB Nông Nghiệp Vũ Hồng Xa (2002), Điều tra thành phần bệnh virus hại họ bầu bí nghiên cứu SqLCV Gia Lâm –Hà Nội vụ xuân hè 2002 Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp, Đại học nông nghiệp, Hà Nội Tài liệu tiếng anh 53 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực hiện, nghiên cứu để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp, nỗ lực thân, nhận hướng dẫn, bảo nhiệt tình, chu đáo thầy, cô giáo cá nhân tập thể Trước hết xin bày tỏ cảm ơn trân trọng tới thầy TS Hà Viết Cường - Giám đốc trung tâm nghiên cứu bệnh nhiệt đới - Phó trưởng khoa Nông học - Học viện nông nghiệp Việt Nam tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên suốt trình thực đề tài hoàn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cán công nhân viên thuộc Trung tâm nghiên cứu bệnh nhiệt đới – Học viện nông nghiệp Việt Nam, nhiệt tình giúp đỡ suốt trình thực tập Trung tâm Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy, cô giáo môn bệnh thầy cô giáo khoa Nông học - Học viện nông nghiệp Việt Nam trực tiếp giảng dạy, trang bị kiến thức bổ ích, góp ý chân thành giúp hoàn thiện báo cáo Cám ơn bạn tham gia làm đề tài khoa học hỗ trợ lúc cần thiết Cuối xin chân thành cảm ơn tới gia đình, người thân bạn bè tạo điều kiện mặt cho trình thực đề tài Hà Nội, ngày 31 tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Văn Hải i MỤC LỤC PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích .2 1.3 Yêu cầu .2 PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm chung chi Potyvirus 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm phân tử virus (virion) 2.1.3 Lan truyền 2.1.4 Cách chẩn đoán xác định Potyvirus .5 2.2 Giới thiệu Papaya ringspot virus 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Môi giới truyền bệnh 2.2.3 Triệu chứng .6 2.2.4 Biện pháp phòng chống 2.3 Nguồn gốc xuất xứ tình hình sản xuất họ bầu bí .7 2.3.1 Thành phần bệnh virus họ bầu bí .8 2.3.2 Tình hình sản xuất bầu bí Việt Nam 10 2.3.3 Những nghiên cứu bệnh virus họ bầu bí Việt Nam 11 2.4 Tính kháng bệnh virus PRSV họ bầu bí 12 PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .12 3.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 12 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 3.1.2 Thời gian nghiên cứu .12 3.1.3 Địa điểm điều tra xác định thành phần bệnh 13 3.2 Vật liệu nghiên cứu 13 3.2.1 Thiết bị nghiên cứu 13 3.2.2 Dụng cụ nghiên cứu .13 3.2.3 Hoá chất 13 3.3 Phương pháp nghiên cứu 14 3.3.1 Điều tra đồng ruộng .14 3.3.2 Đánh giá tính kháng kiện đồng ruộng 14 3.3.3 Đánh giá tính kháng điều kiện nhà lưới .16 3.3.4 Phương pháp kiểm tra ELISA gián tiếp phát PRSV, ZYMV, CMV .17 3.3.5 Phương pháp kiểm tra PCR 19 3.3.6 Phương pháp tính xử lý số liệu 20 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Điều tra thành phần bệnh hại bầu bí huyện Gia Lâm vụ xuân hè 2015 22 4.2 Đánh giá tính kháng đồng ruộng virus PRSV tập đoàn giống dưa chuột trồng khoa Nông học vụ đông năm 2014 24 4.2.1 Xác định bệnh virus tập đoàn giống dưa chuột vụ đông 2014 phương pháp ELISA 24 4.2.2 Đánh giá tính kháng PRSV tập đoàn giống dưa chuột thí nghiệm vụ đông 2014 27 4.3 Đánh giá tính kháng đồng ruộng virus PRSV tập đoàn giống dưa chuột trồng khoa Nông học vụ xuân hè năm 2015 31 4.3.1 Xác định bệnh virus tập đoàn giống dưa chuột vụ xuân hè 2015 phương pháp ELISA 31 ii 4.3.2 Đánh giá tính kháng PRSV tập đoàn giống dưa chuột thí nghiệm vụ xuân hè 201535 4.4 Đánh giá tính kháng đồng ruộng bệnh virus tập đoàn giống bí ngô trồng khoa Nông học vụ xuân hè 2015 37 4.4.1 Xác định bệnh virus tập đoàn giống bí ngô vụ xuân hè 2015 phương pháp ELISA 37 4.5 Đánh giá tính kháng PRSV số giống dưa chuột tiềm kháng điều kiện nhà lưới 43 4.5.1 Kiểm tra virus PRSV mẫu nguồn trước lây nhiễm phương pháp ELISA .43 4.5.2 Kết lây nhiễm nhân tạo PRSV giống dưa chuột tiềm kháng 44 4.5.3 Kiểm tra ELISA tất sau tuần lây nhiễm 46 4.6 PCR phát bogomovirus bầu bí thu thập năm 2014 2015 .49 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 5.1 Kết luận .52 5.2 Kiến nghị 52 PHẦN VI TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Tài liệu tiếng việt 53 Tài liệu tiếng anh 53 LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .vi iii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Phân loại họ Potyviridae Bảng 2.2 Tình hình sản xuất dưa chuột số nước giới .7 qua năm 2006, 2007 Bảng 2.3 Thành phần bệnh virus gây hại bầu bí xác định 10 giới 10 Bảng 2.4 Diện tích, suất sản lượng số loại rau chủ lực năm 2004 11 Bảng 2.5: Mức độ phổ biến loài virus trông họ bầu bí .11 Bảng 3.1 Các mồi sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 4.1 Tình hình bệnh hại bầu bí số xã huyện Gia Lâm 22 vụ xuân hè 2015 22 Bảng 4.2 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu dưa chuột thu ruộng thí nghiệm trông vụ đông 2014 25 Bảng 4.3 Đánh giá tính kháng PRSV dòng dưa chuột trồng vụ 27 đông 2014 (Chỉ trình bày số liệu lần điều tra cuối) .27 Bảng 4.4 Chỉ số tích lũy bệnh khảm PRSV theo thời gian (AUDPC) tâp đoàn giống dưa chuột trồng ruộng thí nghiệm khoa Nông học vụ đông 2014 30 Bảng 4.5 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV .33 mẫu dưa chuột thu ruộng thí nghiệm trông vụ xuân hè 2015 33 Bảng 4.6 Đánh giá tính kháng PRSV dòng dưa chuột trồng 36 vụ xuân hè 2015 (Chỉ trình bày số liệu lần điều tra cuối) 36 Bảng 4.7 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV 38 mẫu bí ngô thu ruộng thí nghiệm trông vụ xuân hè 2015 (lần 1- 28/5)38 Bảng 4.8 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu bí ngô thu ruộng thí nghiệm trông vụ xuân hè 2015 (lần 2- 17/6) 40 Bảng 4.9 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu mẫu bí ngô trước lây nhiễm 43 Bảng 4.10 Đánh giá tính kháng PRSV tập đoàn giống dưa chuột tiềm kháng 46 Bảng 4.11 Kiểm tra ELISA virus PRSV lây nhiễm 47 Bảng 4.12 Kiểm tra PCR mẫu thu thập từ khu ruộng thí nghiệm 49 khoa Nông học năm 2014 2015 49 iv DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình thái virion potyvirus Hình 2.2 Tổ chức gen potyvirus Hình 4.1 Một số bệnh gây hại họ bầu bí Gia Lâm 23 Hình 4.2 Triệu chứng bệnh virus điển hình ruộng dưa chuột thí nghiệm vụ đông 2014 .25 Hình 4.3 Các mẫu dưa chuột thu ruộng thí nghiệm vụ đông 2014 kiểm tra ELISA 26 Hình 4.4 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu dưa chuột thu ruộng thí nghiệm vụ đông 2014 27 Hình 4.6 Triệu chứng bệnh virus điển hình ruộng dưa chuột 32 thí nghiệm vụ xuân hè 2015 32 Hình 4.7 Các mẫu dưa chuột thu ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 kiểm tra ELISA 34 Hình 4.8 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu dưa chuột thu ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 34 Hình 4.9 Tập đoàn giống bí ngô tháng sau gieo khu ruộng 37 thí nghiệm khoa Nông học vụ xuân hè 2015 37 Hình 4.10 Triệu chứng bệnh virus điển hình ruộng bí ngô thí nghiệm vụ xuân hè 2015 38 Hình 4.11 Các mẫu bí ngô thu ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 kiểm tra ELISA (lần 1) 40 Hình 4.12 Các mẫu bí ngô thu ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 kiểm tra ELISA (lần 2) 42 Hình 4.13 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu bí ngô thu ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 .42 Hình 4.14 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu bí ngô trước lây nhiễm 44 Hình 4.15 Cây nguồn đánh dấu mẫu trước lây nhiễm 45 Hình 4.16 Dịch bệnh, dụng cụ chậu dưa chuột tiến hành lây nhiễm tiếp xúc học 45 Hình 4.17 Bố trí thí nghiệm nhà lưới chống côn trùng .46 Hình 4.18 Kiểm tra ELISA lây nhiễm PRSV nhà lưới 47 Hình 4.19 Kết PCR phát begomovirus (cặp mồi Krusty & Homer) 30 mẫu bầu bí thu Gia Lâm năm 2014 2015 (thứ tự mẫu trình bày bảng 4.12) M thang DNA (Genruler Kb, hãng Fermentas) với băng tham khảo kb Ca mẫu cà chua thu nhà lưới Trung tâm bệnh nhiệt đới- HVNNVN, N mẫu nước cất làm đối chứng 51 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Chữ viết tắt BVTV Từ viết vắt Bảo vệ thực vật CS Cộng NXB Nhà xuất OD Optical Density RNA Ribonucleic Acid ĐHNN I Đại học Nông nghiệp I vi [...]... 0.02M, pH 7.0) PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng, thời gian và địa điểm nghiên cứu 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu Bệnh virus Papaya ringspot và tính kháng trên cây họ bầu bí 3.1.2 Thời gian nghiên cứu Từ tháng 01/2015 đến tháng 06/2015 12 3.1.3 Địa điểm điều tra xác định thành phần bệnh - Điều tra thành phần bệnh hại ở một số vùng trồng bầu bí tại Gia Lâm - Địa điểm đánh giá các dòng/giống... trên cây bầu bí Trong số chúng, PRSV và ZYMV là các potyviruses, gây triệu chứng khảm lá và biến dạng trên nhiều cây họ bầu bí và lan truyền trên đồng ruộng nhờ rệp muội Các nghiên cứu trước đây cho thấy PRSV phổ biến hơn ZYMV SLCCNV là một begomovirus, gây bệnh đốm biến vàng, biến vàng và cây còi cọc trên cây bầu bí, đặc biệt là bí ngô Sự có mặt của CMV trên cây bầu bí vẫn chưa được báo cáo bởi các... bí cũng phát triển và gây thiệt hại về kinh tế, số liệu qua quá trình điều tra tình hình bệnh hại chính trên bầu bí được trình bày bảng 4.1 Bảng 4.1 Tình hình bệnh hại bầu bí một số xã tại huyện Gia Lâm vụ xuân hè 2015 XÃ RUỘNG GIỐNG 1 Bí ngô 2 Dưa chuột 3 Dưa chuột 1 Bí ngô 2 Bí ngô 3 Bí ngô 1 Bí ngô 2 Bí ngô 3 Bí ngô Cổ Bi TT Trâu Quỳ Đa Tốn GIAI ĐOẠN Ra hoađậu quả Phát triển thân lá Phát triển thân... thể phân biệt được virus gây bệnh nếu chỉ dựa vào triệu chứng Theo kết quả nghiên cứu của Vũ Triệu Mân (1995) có nhiều loài virus cùng gây hại trên bầu bí, trong đó điển hình là những loài sau (bảng 2.5) Bảng 2.5: Mức độ phổ biến của những loài virus trên cây trông họ bầu bí Cây trồng Kết quả ELISA test WMMV2 CMV SqMV 0,803 1,654 0,774 Bí ngô (bí đỏ) PRSV 1,516 Bí đao (bí xanh) 0,004 0,507 0,953 0,702... virus khảm lá, bệnh phấn trắng và 22 bệnh sương mai Trong các bệnh virus gây hại trên các cây họ bầu bí được điều tra có 2 triệu chứng điển hình nhất là khảm nhăn và khảm biến vàng Trên các địa điểm điều tra, nhìn chung các bệnh do virus gây ra trên cây họ bầu bí vụ xuân hè 2015 khá phổ biến, trong 9 ruộng ở 3 xã điều tra đều thấy xuất hiện virus gây bệnh khảm nhăn lá (hình 4.1) với tỷ lệ bệnh cao nhất... Bi, thấp nhất ở ruộng bí ngô thứ 3 tại xã Đa Tốn là 10.7% Do điều kiện thời tiết không thích hợp nên bệnh phấn trắng hay sương mai tuy có phát triển trên các ruộng điều tra nhưng tỷ lệ bệnh và mức độ gây hại cũng không đáng kể Virus khảm biến vàng trên bí ngô Phấn trắng trên dưa chuột Khảm nhăn trên dưa chuột Sương mai trên dưa chuột Hình 4.1 Một số bệnh gây hại trên cây họ bầu bí tại Gia Lâm 23 4.2... 232.500 Nguồn: Tổng cục thống kê năm 2004 2.3.3 Những nghiên cứu về bệnh virus trên cây họ bầu bí ở Việt Nam Năm 1991 – 1992 Vũ Triệu Mân và Lecoq (Inra Pháp) và các CTV đã xác định bằng phương pháp ELISA (tại ĐHNN I) các virus PRSV, WMMV 2, CMV, SqMN, ZyMV có mặt trên 24 loài cây họ bầu bí, cà chua, họ đậu…ở miền Bắc Việt Nam Ở Việt Nam, cây bầu bí bị rất nhiều loại virus tấn công với nhiều triệu chứng... Trung tâm bệnh cây nhiệt đới – Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Địa điểm thí nghiệm trong phòng: Trung tâm bệnh cây nhiệt đới – Học viện Nông nghiệp Việt Nam 3.2 Vật liệu nghiên cứu - Các dòng/giống bầu bí - virus PRSV (nguồn cây bầu bí) - Mẫu cây bệnh có triệu chứng điển hình được thu thập từ các địa điểm điều tra, sau đó được bảo quản khô bằng hạt Silicagel để kiểm tra virus 3.2.1 Thiết bị nghiên cứu Máy... trên cây bầu bí tại huyện Gia Lâm vụ xuân hè 2015 Để đáp ứng yêu cầu của đề tài chúng tôi tiến hành điều tra thành phần hại chính trên một số cây thuộc họ bầu bí tại địa bàn huyện Gia Lâm vụ Xuân hè 2015 Vụ Xuân hè là vụ có điều kiện khí hậu thuận lợi cho trồng các cây rau màu trong đó các cây họ bầu bí được trồng khá phổ biến, đồng thời các bệnh hại trên bầu bí cũng phát triển và gây thiệt hại về kinh... CMV, PRSV, PMV,…đã được nghiên cứu và sản xuất thử kháng huyết thanh tại trường ĐHNN I Kỹ thuật ELISA được sử dụng từ 1990, kỹ thuật PCR bắt đầu áp dụng từ năm 1995, để chẩn đoán bệnh 2.4 Tính kháng bệnh virus PRSV trên cây họ bầu bí Papaya ringspot virus type W (PRSV- W) trước đây có tên là Watermelon mosaic virus (WMV-1), gây ảnh hưởng tới các loài cây trồng nông nghiệp quan trọng của họ bầu bí và ... qua vật liệu giống củ giống (PVY - khoai tây; OYDV, LYSV, SYSV - hành tỏi), hạt (BCMV - đậu đỗ), qua phấn hoa (BCMV đậu đỗ) Có thể truyền qua tiếp xúc học 2.1.4 Cách chẩn đoán xác định Potyvirus... 21CB1- 04SI1- 05PT1- 28SL1- 31SL4- 11BG2- 4 5BC2 - 25HY4- 25HY4- 03GL1- 28SL1- 05PT1- 35DB3- 37LC2- 31SL4- 10PT2.2- 29SL2- 07HB1- 04SI1- 47LC5- 29SL2- 4 5BC2 - 39LC4- 19HG2- 09PT1- 34DB2-1 09PT1- 27QN2-... nm Mỗi phân tử virion cấu tạo từ 1700-2000 tiểu phần protein xếp theo kiểu xoắn đối xứng xung quanh phân tử RNA genome http://viralzone.expasy.org/all_by_species/50.html Hình 2.1 Hình thái virion