Nghiên cứu về bệnh khảm lá bầu bí Papaya Ringspot Vius tại Gia lâm hà nội

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA NƠNG HỌC BỘ MƠN BỆNH CÂY KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP “Nghiên cứu bệnh khảm Papaya ringspot virus (PRSV) bầu bí Gia Lâm” SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN VĂN HẢI LỚP K56 – BVTVA MÃ SINH VIÊN 560019 GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN TS HÀ VIẾT CƯỜNG Tháng năm 2015 Đặt Vấn Đề I IV II Vật Liệu Và Phương Pháp III Kết Quả Và Thảo Luận Kết Luận Và Kiến Nghị I ĐẶT VẤN ĐỀ • Trên họ bầu bí phải đối mặt với nhóm bệnh quan trọng bệnh virus • Bệnh ảnh hưởng đến sức sống ảnh hưởng lớn tới sản phẩm cuối làm biến dạng quả, giảm suất chất lượng • Bệnh khảm họ bầu bí xác định Papaya ringspot virus (PRSV) gây • PRSV virus có gen RNA, thuộc chi Potyvirus, họ Potyviridae • Bệnh phổ biến chưa có biện pháp phòng chống hiệu Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn trên, chúng tơi thực đề tài: “Nghiên cứu bệnh khảm Papaya ringspot virus (PRSV) bầu bí Gia Lâm” 1.1 MỤC ĐÍCH Tìm hiểu tình bệnh khảm virus Papaya ringspot họ bầu bí Gia Lâm Xác định tính kháng bệnh virus tập đồn dòng giống bầu bí thu thập 1.2 U CẦU • Điều tra thành phần bệnh hại bầu bí Gia Lâm • Đánh giá tính kháng bệnh khảm tập đồn giống dưa chuột bí ngơ Khoa Nơng học • Lây nhiễm nhân tạo tiếp xúc học virus PRSV số giống tiềm kháng điều kiện nhà lưới • Xác định virus thu thập ngồi đồng ruộng ELISA (PRSV, ZYMV, CMV) begomovirus PCR II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU • Các dòng/giống bầu bí • Virus PRSV (nguồn bầu bí) • Mẫu bệnh có triệu chứng điển hình thu thập từ địa điểm điều tra, sau bảo quản khơ hạt Silicagel để kiểm tra virus 2.2 PHƯƠNG PHÁP Điều tra đồng ruộng Áp dụng “Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật” Viện Bảo vệ thực vật (5 điểm chéo góc) Đánh giá tính kháng kiện đồng ruộng Ruộng thí nghiệm gồm 46 giống dưa chuột Bộ mơn Rau hoa - cảnh quan trồng Khoa Nơng học 2.2 PHƯƠNG PHÁP Thu xử lý mẫu - Thu mẫu Bảo quản Tên mẫu Địa điểm ruộng Thời gian lấy mẫu Đặc điểm triệu chứng bệnh Tỷ lệ nhiễm bệnh chung ruộng - Bảo quản khơ: Mẫu thu để túi chứa hạt Silicagel Thay hạt Silicagel đến mẫu khơ - Bảo quản tươi: Mẫu thu để ngun túi giữ lạnh tủ -20 C Trung tâm Bệnh nhiệt đới 3.5 Đánh giá tính kháng PRSV số giống dưa chuột tiềm kháng điều kiện nhà lưới Từ kết đánh giá tính kháng đồng ruộng virus PRSV tập đồn giống dưa chuột trồng khoa Nơng học vụ đơng năm 2014 theo số liệu bảng 3.3 số AUDPC chọn giống có tỷ lệ bệnh (%) nhỏ HB1, LCH3b, SL27b, SL29g Bên cạnh chúng tơi chọn giống đối chứng kháng mẫn cảm với virus PRSV HY1 giống đối chứng kháng Nhật T1126, tiến hành gieo 15 hạt giống lây nhiễm virus PRSV phương pháp tiếp xúc học Kiểm tra virus PRSV mẫu nguồn trước lây nhiễm phương pháp ELISA Bảng 3.9 Kiểm tra ELISA phát PRSV, ZYMV CMV mẫu bí ngơ trước lây nhiễm STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Mẫu 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 25 25 Đối chứng khỏe Ngưỡng* ZYMV OD 0.165 0.153 0.145 0.152 0.158 0.136 0.136 0.144 0.157 0.147 0.151 0.155 0.168 0.155 0.153 0.162 0.160 0.166 0.171 0.166 0.163 0.147 0.154 0.158 0.177 0.097 0.194 PRSV Phản ứng - OD 0.303 0.158 0.360 0.264 0.530 0.204 0.758 0.690 0.370 0.346 0.552 0.165 0.279 0.159 0.166 0.167 0.168 0.175 0.520 0.848 0.967 0.240 0.197 0.176 0.884 0.105 0.210 CMV Phản ứng + + + + + + + + + + + + + + + OD 0.143 0.147 0.151 0.146 0.146 0.143 0.162 0.164 0.146 0.149 0.151 0.152 0.152 0.156 0.152 0.147 0.155 0.161 0.169 0.173 0.131 0.151 0.156 0.137 0.090 0.112 0.224 Phản ứng - Số mẫu dương 15 Phần trăm mẫu dương (%) 60 Lây nhiễm tiếp xúc học bố trí thí nghiệm Kết lây nhiễm nhân tạo PRSV giống dưa chuột tiềm kháng Bảng 3.10 Đánh giá tính kháng PRSV tập đồn giống dưa chuột tiềm kháng Sau lây tuần STT Giống Sau lây tuần Sau lây tuần Sau lây tuần TLB (%) Cấp bệnh TB TLB (%) Cấp bệnh TB TLB (%) Cấp bệnh TB TLB (%) Cấp bệnh TB LCH3b 0.0 0.0 28.6 1.0 53.3 1.6 42.9 2.5 HY1 14.3 1.0 15.4 2.0 66.7 1.8 81.8 2.6 SL29g 11.1 1.0 22.2 1.5 66.7 1.7 77.8 2.3 SL27b 43.8 1.6 66.7 2.4 80.0 2.6 92.9 3.2 T1-126 0.0 0.0 0.0 0.0 6.7 2.0 6.7 3.0 Ở tuần đánh giá cuối cho thấy: - Giống T1- 126 có tỷ lệ nhiễm PRSV 6.7% thấp nhiều so với giống lại - Các giống SL27b, HY1 SL29g có tỷ lệ 92.9, 81.8 77.8 mẫn cảm với virus khảm PRSV Kiểm tra ELISA tất sau tuần lây nhiễm Bảng 3.11 Kiểm tra ELISA virus PRSV lây nhiễm STT Mẫu PRSV STT Mẫu PRSV OD Phản ứng OD Phản ứng HY1 I- 3.943 + 18 LCH3b II- 3.834 + HY1 II- 3.623 + 19 LCH3b II- 3.320 + HY1 II- 4.230 + 20 LCH3b II- 3.772 + HY1 II- 3.705 + 21 LCH3b II- 0.279 - HY1 II- 3.176 + 22 LCH3b III- 3.519 + HY1 II- 3.930 + 23 LCH3b III- 3.749 + HY1 III- 3.032 + 24 LCH3b III- 0.509 - HY1 III- 3.024 + 25 LCH3b III- 3.716 + HY1 III- 3.889 + 26 LCH3b III- 0.469 - 10 HY1 III- 4.051 + 27 SL27b I- 4.732 + 11 HY1 III- 3.156 + 28 SL27b I- 4.621 + 12 LCH3b I- 3.278 + 29 SL27b I- 3.433 + 13 LCH3b I- 4.270 + 30 SL27b I- 3.510 + 14 LCH3b I- 3.795 + 31 SL27b I- 3.852 + 15 LCH3b I- 0.492 - 32 SL27b II- 3.954 + 16 LCH3b I- 2.632 + 33 SL27b II- 4.133 + 17 LCH3b II- 2.830 + 34 SL27b II- 3.353 + 35 SL27b II- 4.061 + 53 T1_126 I- 0.553 - 36 SL27b II- 3.677 + 54 T1_126 II- 0.237 - 37 SL27b III- 4.018 + 55 T1_126 II- 0.230 - 38 SL27b III- 4.109 + 56 T1_126 II- 0.272 - 39 SL27b III- 4.599 + 57 T1_126 II- 1.669 + 40 SL29g I- 3.273 + 58 T1_126 II- 3.914 + 41 SL29g I- 2.214 + 59 T1_126 III- 0.291 - 42 SL29g I- 3.577 + 43 SL29g II- 2.521 + 60 T1_126 III- 0.259 - 44 SL29g II- 4.090 + 61 T1_126 III- 2.486 + 45 SL29g II- 2.565 + 62 T1_126 III- 0.278 - 46 SL29g III- 3.705 + 63 T1_126 III- 1.446 + 47 SL29g III- 3.366 + 64 Đối chứng khỏe 0.287 48 SL29g III- 1.246 + 49 T1_126 I- 3.334 + 65 Đối chứng khỏe 0.334 50 T1_126 I- 0.224 - Ngưỡng* 0.621 51 T1_126 I- 1.552 + Số mẫu dương 51 52 T1_126 I- 2.482 + Phần trăm mẫu dương 81.0 Qua kết (bảng 3.10) kết kiểm tra ELISA (bảng 3.11) cho thấy: - Các giống SL27b SL29g với tỷ lệ bệnh 92.9 77.8% mẫn cảm với virus PRSV Giống LCH3b với tỷ lệ nhiễm bệnh 42.9 cấp bệnh trung bình 2.5 có khả kháng tốt với PRSV Giống đối chứng kháng Nhật T1- 126 với tỷ lệ bệnh 6.7% thấp cấp bệnh trung bình 3.0 có khả kháng với virus PRSV giống trồng thí nghiệm 3.6 PCR phát bogomovirus bầu bí thu thập năm 2014 2015 - Kiểm tra ELISA mẫu vụ Đơng năm 2014 vụ Xn hè năm 2015 phát potyvirrus gây bệnh bầu bí, chưa phát - Mục tiêu nghiên cứu phát begomovirus PCR dùng mồi đặc hiệu cho bogomovirrus gây bệnh begomovirus bầu bí BegoAFor1/BegoARev1) Tại miền Bắc Việt Nam, có mẫu bầu bí thu thập begomovirus phát thấy có biểu triệu chứng bầu bí Squash leaf curl China virus (SqLCCNV) (Revill et al., 2003) bệnh virus (cặp mồi Bảng 3.12 Kiểm tra PCR mẫu thu thập từ khu ruộng thí nghiệm khoa Nơng học năm 2014 2015 PCR BegoAFor1/ Krusty & BegoARev1 Homer STT Mẫu Giống Triệu chứng Năm M1 Dưa chuột Khảm biến vàng 2014 - - Dưa chuột khảm nhăn + biến dạng +biến vàng 2014 - - M2 M3 Dưa chuột Khảm biến vàng 2014 - - M4 Dưa chuột Khảm biến vàng 2014 - - M5 Dưa chuột Khảm biến vàng 2014 - - M6 Dưa chuột Khảm biến vàng 2014 - - M7 Dưa chuột Khảm biến vàng 2014 - - M8 Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 2015 - + 2015 - + M9 Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 10 M10 Bí ngơ Đốm biến vàng 2015 - + 11 M11 Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 2015 - + 12 M12 Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 2015 - + Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 2015 - + 2015 - + 13 M13 14 M14 Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 15 M15 Bí ngơ Khảm biến vàng 2015 - + PCR STT Mẫu Giống 16 M16 Bí ngơ 17 M17 18 Triệu chứng Năm BegoAFor1/ BegoARev1 Krusty & Homer Khảm nhăn + đốm biến vàng 2015 - + Bí ngơ Khảm nhăn + đốm biến vàng 2015 - + M18 Bí ngơ Khảm biến vàng 2015 - + 19 M19 Bí ngơ Khảm nhăn + biến vàng 2015 - + 20 M20 Bí ngơ Khảm biến vàng 2015 - + 21 M21 Dưa chuột Khảm đốm biến vàng 2015 - - 22 M22 Dưa chuột Khảm nhăn + biến dạng 2015 - + 23 M23 Dưa chuột khảm biến dạng 2015 - + 24 M24 Dưa chuột Khảm nhăn 2015 - - 25 M25 Dưa chuột Khảm 2015 - - 26 M26 Dưa chuột Khảm biến dạng 2015 - + 27 M27 Dưa chuột Khảm 2015 - + 28 M28 Dưa chuột Khảm 2015 - - 29 M29 Dưa chuột Khảm nhăn + biến dạng 2015 - - 30 M30 Dưa chuột Khảm biến dạng 2015 - - - Kết PCR 30 mẫu dưa chuột bí ngơ phản ứng PCR âm tính với cặp mồi đặc hiệu begomovirus (cặp mồi BegoAFor1/BegoARev1) - Tiến hành kiểm tra PCR cặp mồi đặc hiệu phát begomovirus (DNA – A) Krusty & Homer kích thước khoảng 600 bp Kết cho thấy 17/30 mẫu có phản ứng dương tính với mồi đặc hiệu Krusty & Homer Hình 3.14 Kết PCR phát begomovirus (cặp mồi Krusty & Homer) 30 mẫu bầu bí thu Gia Lâm năm 2014 2015 (thứ tự mẫu trình bày bảng 3.12) Ghi chú: - M thang DNA (Genruler Kb, hãng Fermentas) với băng tham khảo kb - Ca mẫu cà chua thu nhà lưới Trung tâm bệnh nhiệt đới- HVNNVN - N mẫu nước cất làm đối chứng IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Điều tra đồng ruộng ruộng bầu bí khu vực Gia Lâm Vụ Đơng 2014 phát bệnh gồm bệnh biến vàng (do virus), bệnh khảm nhăn (do virus), bệnh phấn trắng (nấm ) bệnh sương mai (nấm) Điều tra định kì bệnh virus tập đồn 46 giống dưa chuột mơn Rau Hoa Qủa trồng khoa Nơng học , vụ Đơng 2014 xác định giống có tiềm kháng bệnh khảm Papaya ringspot virus là HB1, LCH3b, SL29g SL27b Điều tra định kì bệnh virus tập đồn 47 giống dưa chuột mơn Rau Hoa Qủa trồng khoa Nơng học , vụ Xn hè 2015 xác định giống có tiềm kháng bệnh khảm PRSV NEP1, THI LCH3b 4.1 KẾT LUẬN So sánh giống tiềm kháng qua vụ Đơng 2014 vụ Xn hè 2015 cho thấy giống LCH3b có tiềm kháng với virus PRSV Kiểm tra ELISA xác định thành phần virus bầu bí Gia Lâm năm 2014-2015 gồm virus PRSV, CMV, ZYMV, virus PRSV ngun nhân gây nên triệu chứng bệnh virus Kiểm tra PCR xác định tập đồn giống bí ngơ dưa chuột ngồi potyvirus có begomovirus gây bệnh khảm 4.1 KẾT LUẬN Đánh giá tính kháng bệnh khảm PRSV giống có tiềm kháng (SL29g, SL27b, LCH3b HB1) phương pháp lây nhiễm nhân tạo nhà lưới chống trùng xác định giống LCH3b có tính kháng với PRSV Ngồi qua kết đánh giá tính kháng nhà lưới thấy giống đối chứng kháng Nhật T1-126 có biểu tính kháng PRSV tốt 4.2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu tính kháng bệnh khảm Papaya ringspot virus bầu bí Em xin m ơn quý thầy cô bạ n dã lắ n g nghe [...]... kiện nhà lưới 5 Phương pháp kiểm tra ELISA gián tiếp phát hiện PRSV, ZYMV, CMV 6 Phương pháp kiểm tra PCR 7 Phương pháp tính và xử lý số liệu III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Điều tra thành phần bệnh hại trên cây bầu bí tại Gia Lâm Bảng 3.1 Tình hình bệnh hại bầu bí một số xã tại huyện Gia Lâm vụ xuân hè 2015 TỈ LỆ BỆNH HẠI (%) Xã Cổ Bi TT Trâu Quỳ Đa Tốn RUỘNG GIỐNG GIAI ĐOẠN SỐ CÂY (n) Virus (khảm, nhăn)... hoa- đậu quả Ra hoa- đậu quả 1 2 3 4 Hình 3.1 Một số bệnh gây hại trên cây họ bầu bí tại Gia Lâm Virus khảm biến vàng trên bí ngô (1), Phấn trắng trên dưa chuột (2), Khảm nhăn trên dưa chuột (3), Sương mai trên dưa chuột (4) 3.2 Kiểm tra ELISA phát hiện PRSV, ZYMV và CMV trên các mẫu dưa chuột thu tại ruộng thí nghiệm vụ đông 2014 Hình 3.2 Triệu chứng bệnh virus điển hình trên ruộng dưa chuột thí nghiệm... các mẫu dưa chuột thu tại ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 Bảng 3.6 Đánh giá tính kháng PRSV của các dòng dưa chuột trồng vụ xuân hè 2015 (số liệu ở 2 lần điều tra cuối) 1 Điều tra ngày 11/5/2015 Điều tra gày 25/5/2015 Cấp Cấp Cấp Cấp Cấp Cấp n n Tỷ lệ n n Tỷ lệ Giống bệnh bệnh bệnh bệnh bệnh bệnh (tổng (cây bệnh (tổng (cây bệnh trung cao thấp trung cao thấp số) bệnh) (%) số) bệnh) (%) bình nhất nhất... 16 30 LS2 31 LS4 32 33 9 69.2 4.4 5 2 42 TB1 43 TB2 1 1.0 1.0 1 1 1 Cấp bệnh thấp nhất 9 16 24 LCA6 25 LCA7 Điều tra gày 8/12/2014 Cấp Cấp n Cấp n Tỷ lệ bệnh bệnh (cây bệnh (tổn bệnh trun thấp bệnh cao g số) (%) g nhất ) nhất bình 15 3 BN2 1.0 1.0 2.0 Số Điều tra ngày 3/11/2014 Cấp n Cấp n Tỷ lệ bệnh Giống (cây bệnh (tổn bệnh trun bệnh cao g số) (%) g ) nhất bình 1 16 1 6.3 1.0 1 1 16 16 100 0 16 1 6.3... Biều đồ trình bày Chỉ số tích lũy bệnh theo thời gian AUDPC đối với bệnh PRSV của 39 giống dưa chuột Mũi tên đỏ chỉ các giống có tiềm năng kháng (Area Under the Disease Progress Curve - AUDPC) là chỉ số tích lũy bệnh theo thời gian hay còn gọi là diện tích dưới đường diễn biến bệnh Chúng tôi cũng tiến hành tính toán AUDPC của tập đoàn giống dưa chuột đối với bệnh khảm lá PRSV dựa trên số liệu 6 lần điều... (n) Virus (khảm, nhăn) Virus (khảm, biến vàng) Phấn trắng Sương mai 1 Bí ngô Ra hoa- đậu quả 76 23.7 0.0 31.6 17.1 2 Dưa chuột Phát triển thân lá 91 38.3 0.0 15.9 0.0 3 Dưa chuột Phát triển thân lá 79 26.4 9.6 10.2 18.5 1 Bí ngô 84 25.0 14.3 14.3 0.0 2 Bí ngô 65 12.3 13.9 16.9 10.8 3 Bí ngô 77 11.7 9.1 16.9 7.8 1 Bí ngô 93 12.9 6.5 0.0 0.0 2 Bí ngô 81 13.6 0.0 6.2 0.0 3 Bí ngô 75 10.7 0.0 0.0 0.0 Ra... 2 2 HD3 15 6 40,0 2,2 3 1 14 10 71,4 4,3 5 1 26 Điều tra ngày 11/5/2015 Điều tra gày 25/5/2015 Cấp Cấp Cấp Cấp Cấp Cấp n n Tỷ lệ n n Tỷ lệ Giống bệnh bệnh bệnh bệnh bệnh bệnh (tổng (cây bệnh (tổng (cây bệnh trung cao thấp trung cao thấp số) bệnh) (%) số) bệnh) (%) bình nhất nhất bình nhất nhất 16 5 31,3 2,2 4 1 13 8 61,5 2,9 5 1 ĐB15 16 8 50,0 2,1 3 1 9 8 88,9 3,6 5 1 ĐB1b 3 HY1 15 6 40,0 2,0 4 1 13... phát hiện PRSV, ZYMV và CMV trên các mẫu bí ngô thu tại ruộng thí nghiệm vụ xuân hè 2015 1 2 Hình 3.9 Tập đoàn giống bí ngô 1 tháng sau gieo tại khu ruộng thí nghiệm khoa Nông học vụ xuân hè 2015 (1) Triệu chứng bệnh virus điển hình trên ruộng bí ngô thí nghiệm vụ xuân hè 2015 (2) Bảng 3.7 Kiểm tra ELISA phát hiện PRSV, ZYMV và CMV đối với các mẫu bí ngô thu tại ruộng thí nghiệm trông vụ xuân hè 2015... 45 VP1 16 1 6.3 1.0 1 1 16 8 50.0 1.3 2 1 16 3 18.8 1.7 2 1 15 14 93.3 3.9 5 2 46 VP2 15 1 6.7 1.0 1 1 Bảng 3.4 Chỉ số tích lũy bệnh khảm lá PRSV theo thời gian (AUDPC) của tâp đoàn giống dưa chuột trồng tại ruộng thí nghiệm khoa Nông học vụ đông 2014 Tỷ lệ bệnh (%) Tỷ lệ bệnh (%) 3/11 10/11 17/11 24/11 1/12 8/12 AUDPC (%.ngày) BK1 0.0 0.0 14.3 28.6 28.6 28.6 350.0 21 2 BN2 25.0 31.3 56.3 81.3 100.0... ZYMV trên 52 mẫu lá bí ngô có triệu chứng điển hình ở khu ruộng thí nghiệm - Kết quả cho thấy 36/52 (69.2%) mẫu có phản ứng với virus PRSV - Tất cả đều âm tính với virus ZYMV - 1 mẫu đồng thời nhiễm cả virus CMV và PRSV • Qua 2 lần kiểm tra phát hiện sự có mặt của PRSV, CMV và ZYMV cho thấy đa số các triệu chứng khảm lá trên các giống bí ngô là do virus PRSV gây ra Hình 3.12 Các mẫu bí ngô thu trên ...Đặt Vấn Đề I IV II Vật Liệu Và Phương Pháp III Kết Quả Và Thảo Luận Kết Luận Và Kiến Nghị I ĐẶT VẤN ĐỀ • Trên họ bầu bí phải đối mặt với nhóm bệnh quan trọng bệnh virus • Bệnh ảnh hưởng đến... thu nhà lưới Trung tâm bệnh nhiệt đới- HVNNVN - N mẫu nước cất làm đối chứng IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Điều tra đồng ruộng ruộng bầu bí khu vực Gia Lâm Vụ Đơng 2014 phát bệnh gồm bệnh... phát PRSV, ZYMV, CMV Phương pháp kiểm tra PCR Phương pháp tính xử lý số liệu III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Điều tra thành phần bệnh hại bầu bí Gia Lâm Bảng 3.1 Tình hình bệnh hại bầu bí số xã huyện