Thực hành công nghệ protein - enzyme

Thực hành công nghệ protein - enzyme

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG CAO ĐẲNG KINH TẾ - CÔNG NGHỆ TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH TH CÔNG NGHỆ PROTEIN-ENZYME GVHD: ThS Lê Thanh Hải CHUYÊN NGÀNH: Công Nghệ Sinh Học Ứng Dụng NIÊN KHÓA: 2012 – 2015 SVTH: Nhóm (C8UD1) Thành Phố Hồ Chí Minh Tháng 10/2014 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme MỤC LỤC MỤC LỤC HÌNH MỤC LỤC BẢNG GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 1: ĐỊNH LƯỢNG NITƠ ACID AMIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHUẨN ĐỘ FORMOL (PHƯƠNG PHÁP SORENSEN) 1/ Nguyên tắc Các aldehyde dễ kết hợp với nhóm amin Khi cho formaldehyde tác dụng với acid amin, nhóm amin bị methylen hóa tạo thành dẫn xuất methylen amino acid Hợp chất tạo thành có tính acid mạnh acid amin tự do, nhóm carboxyl chúng dễ dàng định phân kiềm, qua gián tiếp tính lượng nitơ amin acid amin có dung dịch 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu hóa chất • • - Nước mắm : 1ml - Dung dịch NaOH 0,05N : 100ml - Dung dịch HCl 0,05N : 30ml - Formol trung tính : 10ml - Bromthymol blue 0,04% : 20ml - Phenolphtalein 0,5% : 20ml - Dung dịch đệm phosphate pH = : 50ml Dung dich A: 27,8 g Na2HPO4 hoà tan 1000ml Dung dịch B: 53.05g Na2HPO4 7H2O 71.1g Na2HPO4.12H2O pha 1000ml • Để pha dung dịch đệm phosphate pH =7 hút dung dịch A dung dịch B theo tỷ lệ sau: Dung dich A: 39 ml + dung dich B: 61ml thêm nước vừa đủ 200ml Dung dịch đệm phosphate pH = 9,2 : 50ml (Hòa tan 456g kali hydro phosphate ngậm phân tử nước (K2HPO4.3H2O) 1000ml nước cất) GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme 2.2 Dụng cụ thiết bị - Bình định mức 100ml : bình - Pipette 1ml :2 - Pipette 10ml :2 - Erlen 100ml : bình - Burette 25ml :1 - Becher 100ml : 2.3 Tiến hành Chuẩn bị thang màu có pH pH 9,2 Lấy erlen 100ml: - Cho vào bình thứ nhất: 20ml dung dịch có pH 7,0 giọt bromthymol blue 0,04% có màu xanh lục nhạt - Cho vào bình thứ hai: 20ml dung dịch có pH 9,2; giọt bromthymol blue 0,04% giọt phenolphtalein 0,5% có màu tím xanh (màu xanh ánh tím) Màu dung dịch giữ bình kín bền nửa tháng Hình 1.1 Dung dịch Ph 9,2 (bên trái), pH 7,0 (phải) GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Xác định hàm lượng nitơ amin nước mắm: Nước mắm dung dịch thủy phân protein định lượng nitơ phương pháp chuẩn độ formol Do nước mắm có màu tối cần phải pha thật loãng so màu chất thị Lấy 1ml nước mắm cho vào bình định mức 100ml, dùng nước cất định mức thành 100ml, lắc Lấy vào bình erlen có dung tích với bình màu chuẩn 20ml dịch mẫu pha loãng từ bình định mức, thêm giọt bromthymol blue Nếu dung dịch có màu xanh dương thêm giọt HCl hay H2SO4 0,05N; dung dịch có màu vàng thêm giọt NaOH 0,05N dung dịch có màu ứng với màu bình có pH 7,0 Thêm giọt phenolphtalein 0,5%; 4ml formol trung tính chuẩn độ NaOH 0,05N hỗn hợp có màu ứng với màu dung dịch bình có pH 9,2 Song song tiến hành làm thí nghiệm kiểm chứng, thay dung dịch nghiên cứu nước cất Hình 1.2: Bình mẫu, bình pH 9,2 bình kiểm chứng (từ trái sang phải) sau trình chuẩn độ dung dịch NaOH 0,05N GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme 2.4 Kết Số gram nitơ acid amin có lít nước mắm: 7,231(g) Trong đó: x: lượng gram nitơ acid amin có lít nước mắm a: số ml dung dịch NaOH 0,05N dùng để chuẩn dung dịch thí nghiệm b: số ml dung dịch NaOH 0,05N dùng để chuẩn dung dịch kiểm chứng T: hệ số hiệu chỉnh nồng độ dung dịch NaOH đem dùng so với nồng độ chuẩn V: số ml nước mắm cho vào bình định mức 0,0007: số gram nitơ với 1ml NaOH 0,05N GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 2: PHẢN ỨNG BIURE 1/ Nguyên tắc Đây phản ứng thường dùng để phát liên kết peptide (-CO-NH-) Phản ứng xảy chất chứa từ hai liên kết peptide trở lên Phản ứng dùng để định lượng protein cách lập đồ thị chuẩn với dung dịch protein chuẩn có nồng độ xác định nhờ kỹ thuật so màu Nồng độ protein tối thiểu để định lượng xác 10mg/ml Tùy thuộc vào gốc R mà màu phản ứng màu xanh tím, tím hồng 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu hóa chất - Dung dịch CuSO4 1% : 20ml - Dung dịch NaOH 10% : 20ml - Ure : – 3g - Dung dịch lòng trắng trứng 1% : 40ml 2.2 Dụng cụ thiết bị - Ống nghiệm : 04 ống - Pipette 1ml : 02 pipette - Pipette 5ml : 01 pipette - Becher 50ml : 03 cốc 2.3 Tiến hành Lấy ống nghiệm khô, cho vài tinh thể ure, đun nhẹ tới nóng chảy, khô cứng tạo thành biure có NH3 bay hơi, nhận biết mùi thử giấy quỳ đo pH Để nguội thêm vào ml dung dịch NaOH 10%, lắc cho tan hết thêm – GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme giọt dung dịch CuSO4 1% Lấy ống nghiệm thứ hai cho 1ml dung dịch lòng trắng trứng, 1ml dung dịch NaOH 10%, thêm – giọt CuSO 1%, lắc có màu tím 2.4 Kết Chụp hình, ghi màu viết phương trình phản ứng phản ứng Hình 2.1: Ống (phải, Biure), Ống (trái, albumin) Ở ống (BIURE): Khi đun ure lửa đèn cồn ta thấy tinh thể ure tan, bay kết tinh lại (khí NH3 bay hơi) Nhưng sau cho 1-2ml dung dịch NaOH 10% vào ta thấy tinh thể ure tan tạo thành dung dịch lỏng không màu Khi lắc cho thêm dung dich CuSO4 1% vào dung dịch hóa màu hồng nhạt Acide cianuric nhỏ NaOH 10% NH3 (bay hơi) cianuric trung hòa) Urea đun Biure (2 phân tử Ure kết hợp tạo thành) làm xuất liên kết peptide (-CO-NH-) Trong môi trường kiềm Biure +CuSO4 cho phức muối Cu có màu tím hồng GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Ống 2: Trong dung dich lòng trắng trứng (Albumin) có liên lết peptide nên có phản ứng Biure tạo phức hợp muối Cu với polypeptide có màu tím xanh Trong môi trường kiềm mạnh, liên kết peptide phân tử protein phản ứng với CuSO4 tạo thành phức chất màu tím mà tím đỏ Tùy theo độ dài mạch peptide mà màu phức biến thiên từ xanh tím đến tím đỏ GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 3: XÁC ĐỊNH ĐIỂM ĐẲNG ĐIỆN CỦA PROTEIN CASEIN 1/ Nguyên tắc Các phân tử protein polymer có tính điện ly lưỡng cực Trong dung dịch, pH thay đổi phân ly tạo thành nhóm tích điện dương nhóm tích điện âm khác Đối với protein có giá trị pH xác định mà tổng số điện tích âm tổng số điện tích dương, phân tử protein trung hòa điện, pH gọi điểm đẳng điện protein Tại điểm đẳng điện, dung dịch protein không bền, dễ bị kết tủa 2/ Thực hành 1.1 Nguyên liệu hóa chất - Dung dịch acid acetic (CH3COONa) 0,1N : 200ml - Dung dịch natri acetate (CH3COONa) 0,1N : 50ml - Dung dịch casein 0,4%: Cân 0,4g casein cho vào becher 100ml thêm 20ml dung dịch CH3COONa 0,1N Đặt lên nồi cách thủy đun nóng để hòa tan hoàn toàn Chuyển sang bình định mức 100ml định mức tới 100ml dung dịch CH3COONa 0,1N - Nước cất : 50ml 1.2 Dụng cụ thiết bị - Ống nghiệm : 10 ống - Pipette 1ml : 02 pipette - Bình định mức 100ml : 01 bình - Becher 100ml : 03 cốc - Nồi cách thủy : 01 GV: ThS Lê Thanh Hải 10 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Dung dịch NaBr 0,5% : 50ml - Dung dịch CuSO4 0,5% : 50ml - Nước cất : 50ml - Dung dịch hồ tinh bột 1% : 50ml - Thuốc thử Lugol : 50ml - Thuốc thử Fehling : 50ml 2.2 Dụng cụ thiết bị - Ống nghiệm : 03 ống - Pipette 5ml : 01 pipette - Pipette 1ml : 01 pipette - Bể điều nhiệt : 01 thiết bị - Becher 50ml : 03 cốc 2.3 Tiến hành Cho vào 03 ống nghiệm ống 5ml dung dịch hồ tinh bột 1%, sau cho vào: - Ống thứ nhất: 10ml nước cất - Ống thứ hai: 10ml dung dịch NaBr 0,5% - Ống thứ ba: 10ml dung dịch CuSO4 0,5% Sau cho vào ba ống ống 10ml dung dịch enzyme amylase Lắc để vào tủ ấm 370C 15 phút Lấy ra, cho vào ống giọt thuốc thử Lugol, lắc GV: ThS Lê Thanh Hải 21 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Tiếp tục cho vào ống 2ml dung dịch Fehling đặt vào bể điều nhiệt sôi phút, làm nguội tới nhiệt độ phòng 2.4 Kết Chụp hình ghi kết vào bảng sau: Bảng 6.1 Bảng kết thí nghiệm xác định tác dụng chất hoạt hóa kiềm hãm hoạt tính enzym amylase Nhận xét tác dụng chất hoạt hóa chất kiềm hãm đến hoạt tính enzyme amylase GV: ThS Lê Thanh Hải 22 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Hình 6.1: Ống 1,2 từ trái sang phải sau trình thí nghiệm •  Nhận xét: Ống 1: Xuất màu xanh nhạt => tốc độ hoạt hóa chất hoạt hóa yếu nước cất chất kìm hãm hay kích thích cho trình thủy phân tinh bột • Ống 2: Xuất màu xanh trung bình =>dung dịch NaBr có tác dụng kích thích cho phản ứng thủy phân mức độ trung bình • Ống 3: Xuất màu xanh đậm =>dung dịch CuSO có tác dụng kìm hãm làm phản ứng thủy phân chậm lại GV: ThS Lê Thanh Hải 23 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 7: XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA ENZYME LIPASE 1/ Nguyên tắc Lipase enzym thuộc nhóm thủy phân, phân nhóm esterase – xúc tác phản ứng thủy giải nối ester glycerine acid béo glyceride Nhờ hoạt động lipase, acid béo giải phóng làm tăng độ chua môi trường phản ứng Lượng acid chuẩn độ kiềm số hoạt độ enzym lượng kiềm cần để trung hòa acid béo hình thành 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu hóa chất - Tuỵ tạng động vật : 4g - Sữa tươi : 100ml - KOH 0,1N : 100ml - Cồn 96% : 50ml - Phenolphtalein 1% : 15ml - Hỗn hợp nước h glycerin : 40ml (tỷ lệ nước : 1glycerin) - H2SO4 0,1N chuẩn : 100ml - Vải :1 - Giấy lọc :4 - Phễu lọc 2.2 Dụng cụ - Erlen 100ml GV: ThS Lê Thanh Hải :7 24 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Bể điều nhiệt :1 - Buret 25ml :1 - Bercher 100ml :4 - Pipet 5ml :2 - Pipet 10ml :2 - Cối sứ :1 - Bếp điện :1 2.3 Tiến hành Chuẩn bị chế phẩm lipase từ tuỵ tạng động vật: Cân 1g tụy tạng động vật, cho vào cối nghiền 5ml hỗn hợp nước – glycerin (tỷ lệ 3:1), nghiền kỹ từ – phút Sau đó, lại cho thêm 5ml hỗn hợp nước – glycerin nghiền tiếp h2 phút Lọc vắt hỗn hợp qua vải màn, sau lọc lại qua giấy lọc, thu dịch lipase để làm thí nghiệm Xác định hoạt tính enzyme lipase: Lấy 02 erlen 100ml, cho vào bình 10ml sữa tươi - Erlen (erlen thí nghiệm): cho vào ml lipase, lắc đều, đặt vào bể điều nhiệt 370C – 400C - Erlen (erlen đối chứng): đun sôi sữa bình, sau cho 2ml lipase vào đun sôi tiếp phút Để nguội đến nhiệt độ phòng Sau đặt vào bể điều nhiệt 370C – 400C Sau lấy erlen ra, thêm vào bình 8ml cồn 96%, vài giọt phenolphtalein, chuẩn độ hai erlen KOH 0,1N Tiến hành thí nghiệm lần Lấy kết giá trị trung bình lần thí nghiệm GV: ThS Lê Thanh Hải 25 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme  Cách xác định hệ số hiệu chỉnh k: - Chuẩn độ 10ml dung dịch KOH 0,1N dung dịch H 2SO4 0,1N chuẩn, thuốc thử màu phenolphtalein dung dịch vừa màu hồng dừng lại - Xác định lượng H2SO4 0,1N chuẩn cần dùng - Tiến hành thí nghiệm lần Lấy kết giá trị trung bình lần thí nghiệm 2.4 Tính kết  Hệ số hiệu chỉnh k tính sau: - Tính nồng độ KOH thực tế: - Hệ số hiệu chỉnh k: Trong đó: CKOHt : Nồng độ dung dịch KOH thực tế VKOHt : Thể tích dung dịch KOH thực tế CKOHp : Nồng độ dung dịch KOH pha VKOHp : Thể tích dung dịch KOH pha Hoạt độ lipase: biểu thị số ml KOH dùng để chuẩn độ acid béo tạo thành từ thủy phân lipid có lít sữa tính theo công thức sau: GV: ThS Lê Thanh Hải 26 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme X= (V1 - V2) x k x 100/3 X= (3,3- 2,6) x x 100/3 = 23,3333 UI Trong đó: X : Hoạt độ enzyme lipase (UI) V1 : Số ml KOH 0,1N dùng để chuẩn độ erlen thí nghiệm (erlen 1) V2 : Số ml KOH 0,1N dùng để chuẩn độ erlen đối chứng (erlen 2) k : Hệ số hiệu chỉnh dung dịch KOH (k = 1) Hình7.1: Kết sau chuẩn độ đối chứng mẫu GV: ThS Lê Thanh Hải 27 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme PHẦN TỰ THIẾT KẾ THÍ NGHIỆM XÁC ĐỊNH NHIỆT ĐỘ TỐI THÍCH CỦA ENZYME ASCOBATOXIDASE 1/ Nguyên tắc Ascobatoxidase enzym thuộc lớp oxi hoá khử (oxireductase) có nhiều loại rau tươi nhiều lớp vỏ Enzym oxi hoá acid ascorbic thành acid dehydroascorbic Trong thành phần enzym có diện ion Cu2+ 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu hoá chất - Dưa chuột : 100g - Dung dịch đệm photphat 0,15M pH7 : 200ml - Acid ascorbic (nồng độ 1mg/ml) : 100ml - Dung dịch KI 10% : 150ml - Dung dịch HCl 5% : 250ml - Dung dịch hồ tinh bột 1% : 100ml - Dung dịch KIO3 0,01N : 250ml - Dung dịch Na2S2O3 0,01N : 1000ml - Cách pha dung dịch đệm phosphate pH 7: o Dung dich A: 289 g NaH2PO4 hoà tan 80ml o Dung dịch B: 8,53g Na2HPO4.12H2O pha 120 ml o Để pha dung dịch đệm phosphate pH =7 hút dung dịch A dung dịch B theo tỷ lệ sau: Dung dich A: 80ml + dung dich B: 120ml 2.2 Dụng cụ - Cối sứ :1 - Becher 50ml :2 - Becher 100ml :2 GV: ThS Lê Thanh Hải 28 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Erlen 100ml :3 - Bình định mức 50ml :2 - Erlen 250ml :4 - Buret 25 ml :1 - Pipet 5ml :2 - Pipet 10ml :2 - Giấy lọc :4 - Mẫu Đối Nhiệt Acid KI HCl Hồ tinh KIO3 (Bình chứn độ ascorbic 10% 5% bột 0,01N erlen) g (0C) (ml) (ml) (ml) (giọt) (ml) 300C 400C 450C 500C 600C 10 10 10 10 10 5 5 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 (Đun Phễu lọc sôi) 10 10 10 10 10 :2 2.3 Tiến hành  Chiết tách enzym ascobatoxidase: Cân 30g dưa chuột (bỏ hạt) cho vào cối sứ, nghiền với 10 – 15ml dung dịch đệm phosphat 0,15M pH Dịch chiết cho vào bình định mức 50ml thêm dung dịch đệm đến vạch định mức Lắc nhiều lần để yên Lọc thu dịch lọc Dịch lọc chế phẩm enzym ascobatoxidase  Khảo sát nhiệt độ tối thích enzym ascobatoxidase: Bảng 7.1: Cách tiến hành thí nghiệm GV: ThS Lê Thanh Hải 29 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Lắc đều, để yên phút chuẩn độ dung dịch Na 2S2O3 0,01N đến màu xanh Xác định hệ số hiệu chỉnh Na2S2O30,01N dung dịch KIO3 0,01N chuẩn (tương tự cách xác định hệ số hiệu chỉnh dung dịch KOH 0,1N) 2.4 Cách tính kết quả: Hoạt tính enzym ascobatoxidase hiển thị số mg acid ascorbic bị oxi hoá tác động enzym có 1g nguyên liệu thời gian phút Hoạt tính enzym tính theo công thức:  Trong X : Hoạt độ enzyme ascorbatoxidase (UI) V1 : Thể tích Na2S2O3dùng erlen thí nghiệm V2 : Thể tích Na2S2O3dùng erlen đối chứng k : Hệ số hiệu chỉnh dung dịch Na2S2O30,01N 0,088 : Số mg acid ascorbic tương ứng với ml dung dịch Na 2S2O30,01N m : Khối lượng nguyên liệu để chiết enzym (g) t : Thời gian phản ứng (phút) 0C Bảng 8.1: Nhiệt độ hoạt độ Acid Ascobatoxidase sau trình thí nghiệm Nhiệt độ (0C) 30 40 45 50 60 Hoạt độ (UI) 65 85 100 95 60 GV: ThS Lê Thanh Hải 30 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Đồ thị biểu diễn nhiệt độ tối thích Enzyme Ascobatoxidase nhiệt độ (450C) Bảng 8.2: pH hoạt độ enzyme ascobatoxidase sau trình thí nghiệm Ph Hoạt độ 85 55 25 Đồ thị biểu diễn pH tối thích Enzyme Ascobatoxidase pH= Hình 8.1: Trước chuẩn độ sau chuẩn độ Na2S2O3 0,01N GV: ThS Lê Thanh Hải 31 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 8: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ENZYME ASCOBATOXIDASE 1/ Nguyên tắc Ascobatoxidase enzym thuộc lớp oxi hoá khử (oxireductase) có nhiều loại rau tươi nhiều lớp vỏ Enzym oxi hoá acid ascorbic thành acid dehydroascorbic Trong thành phần enzym có diện ion Cu2+ 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu hoá chất - Dưa chuột : 100g - Dung dịch đệm photphat 0,15M pH7 : 150ml - Acid ascorbic (nồng độ 1mg/ml) : 100ml - Dung dịch KI 10% : 50ml - Dung dịch HCl 5% : 100ml - Dung dịch hồ tinh bột 1% : 50ml - Dung dịch KIO3 0,01N : 150ml - Dung dịch Na2S2O3 0,01N : 100ml - Cách pha dung dịch đệm phosphate pH 7: o Dung dich A: 27,8 g NaH2PO4 hoà tan 1000ml o Dung dịch B: 53.05g Na2HPO4 7H2O 71.1g Na2HPO4.12H2O pha 1000ml o Để pha dung dịch đệm phosphate pH =7 hút dung dịch A dung dịch B theo tỷ GV: ThS Lê Thanh Hải 32 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme lệ sau: Dung dich A: 39 ml + dung dich B: 61ml thêm nước vừa đủ 200ml 2.2 Dụng cụ - Cối sứ :1 - Becher 50ml :2 - Becher 100ml :2 - Erlen 100ml :3 - Bình định mức 50ml :2 - Erlen 250ml :4 - Buret 25 ml :1 - Pipet 5ml :2 - Pipet 10ml :2 - Giấy lọc :4 - Phễu lọc :2 2.3 Tiến hành Chiết tách enzym ascobatoxidase: Cân 30g dưa chuột (bỏ hạt) cho vào cối sứ, nghiền với 10 – 15ml dung dịch đệm phosphat 0,15M pH Dịch chiết cho vào bình định mức 50ml thêm dung dịch đệm đến vạch định mức Lắc nhiều lần để yên Lọc thu dịch lọc Dịch lọc chế phẩm enzym ascobatoxidase Khảo sát hoạt tính enzym ascobatoxidase GV: ThS Lê Thanh Hải 33 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Hút 10 ml dung dịch enzym cho vào becher 100ml Sau cho thêm 10ml dung dịch acid ascorbic Lắc đều, để yên nhiệt độ phòng 30 phút Tiếp theo đun sôi trực tiếp bếp để ngừng phản ứng, cho vào bình định mức 50 ml làm đầy nước cất - Lấy 10ml dịch bên cho vào erlen 250ml, thêm 5ml dung dịch KI 10%, 10 ml dung dịch HCl 5%, 10 giọt hồ tinh bột 1% 10 ml dung dịch KIO 0,01N Lắc đều, để yên phút chuẩn độ dung dịch Na 2S2O3 0,01N đến màu xanh - Làm mẫu đối chứng tương tự với 10ml dung dịch enzym đun sôi phút làm lạnh - Tiến hành thí nghiệm lần Kết giá trị trung bình Xác định hệ số hiệu chỉnh Na 2S2O3 0,01N dung dịch KIO3 0,01N chuẩn (tương tự cách xác định hệ số hiệu chỉnh dung dịch KOH 0,1N) 2.4 Cách tính kết quả: Hoạt tính enzym ascobatoxidase hiển thị số mg acid ascorbic bị oxi hoá tác động enzym có 1g nguyên liệu thời gian phút Hoạt tính enzym tính theo công thức: Trong X : Hoạt độ enzyme ascorbatoxidase (UI) GV: ThS Lê Thanh Hải 34 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme V1 : Thể tích Na2S2O3 dùng erlen thí nghiệm V2 : Thể tích Na2S2O3 dùng erlen đối chứng k : Hệ số hiệu chỉnh dung dịch Na 2S2O3 0,01N 0,088 : Số mg acid ascorbic tương ứng với ml dung dịch Na2S2O3 0,01N m : Khối lượng nguyên liệu để chiết enzym (g) t : Thời gian phản ứng (phút) Hình 9.1: Trước chuẩn độ sau chuẩn độ GV: ThS Lê Thanh Hải 35 [...]... được hình thành 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu và hóa chất - Tuỵ tạng động vật : 4g - Sữa tươi : 100ml - KOH 0,1N : 100ml - Cồn 96% : 50ml - Phenolphtalein 1% : 15ml - Hỗn hợp nước h glycerin : 40ml (tỷ lệ 3 nước : 1glycerin) - H2SO4 0,1N chuẩn : 100ml - Vải màn :1 - Giấy lọc :4 - Phễu lọc 2.2 Dụng cụ - Erlen 100ml GV: ThS Lê Thanh Hải :7 24 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Bể điều nhiệt :1 - Buret... phân tử enzyme theo chiều hướng bất lợi cho hoạt động xúc tác 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu và hóa chất - Enzyme amylase GV: ThS Lê Thanh Hải : 50ml 20 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Dung dịch NaBr 0,5% : 50ml - Dung dịch CuSO4 0,5% : 50ml - Nước cất : 50ml - Dung dịch hồ tinh bột 1% : 50ml - Thuốc thử Lugol : 50ml - Thuốc thử Fehling : 50ml 2.2 Dụng cụ và thiết bị - Ống nghiệm : 03 ống - Pipette... nhiệt độ và pH ôn hòa 2/ Thực hành 2.1 Nguyên liệu và hóa chất - Enzyme amylase : 50ml - Dung dịch HCl 1% : 50ml - Nước cất : 10ml - Dung dịch hồ tinh bột 10% 2.2 Dụng cụ và thiết bị - Ống nghiệm : 50ml : 04 ống - Pipette 1ml : 02 pipette - Nồi đun cách thủy : 01 cái - Tủ ấm - Becher 50ml GV: ThS Lê Thanh Hải : 01 cái : 03 cốc 13 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme 2.3 Tiến hành Lấy 4 ống nghiệm đã... và dung dịch B theo tỷ GV: ThS Lê Thanh Hải 32 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme lệ sau: Dung dich A: 39 ml + dung dich B: 61ml thêm nước vừa đủ 200ml 2.2 Dụng cụ - Cối sứ :1 - Becher 50ml :2 - Becher 100ml :2 - Erlen 100ml :3 - Bình định mức 50ml :2 - Erlen 250ml :4 - Buret 25 ml :1 - Pipet 5ml :2 - Pipet 10ml :2 - Giấy lọc :4 - Phễu lọc :2 2.3 Tiến hành Chiết tách enzym ascobatoxidase: Cân 30g... dịch A và dung dịch B theo tỷ lệ sau: Dung dich A: 80ml + dung dich B: 120ml 2.2 Dụng cụ - Cối sứ :1 - Becher 50ml :2 - Becher 100ml :2 GV: ThS Lê Thanh Hải 28 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Erlen 100ml :3 - Bình định mức 50ml :2 - Erlen 250ml :4 - Buret 25 ml :1 - Pipet 5ml :2 - Pipet 10ml :2 - Giấy lọc :4 - Mẫu Đối Nhiệt Acid KI HCl Hồ tinh KIO3 (Bình chứn độ ascorbic 10% 5% bột 0,01N erlen)... Hải 16 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Casin 2% : 20ml 2.2 Dụng cụ và thiết bị - Ống nghiệm : 04 ống - Pipette 1ml : 02 pipette - Nồi đun cách thủy : 01 cái - Tủ ấm : 01 cái - Becher 50ml : 03 cốc 2.3 Tiến hành Lấy 4 ống nghiệm đã ghi số, sau đó thêm vào: - Ống thứ nhất: 2ml dung dịch hồ tinh bột 5% + 1ml dung dịch enzyme amylase - Ống thứ hai: 2ml dung dịch hồ tinh bột 5% + 1ml dung dịch enzyme. .. Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Đồ thị biểu diễn nhiệt độ tối thích của Enzyme Ascobatoxidase là ở nhiệt độ (450C) Bảng 8.2: pH và hoạt độ của enzyme ascobatoxidase sau quá trình thí nghiệm Ph 4 6 7 8 9 Hoạt độ 5 85 55 25 5 Đồ thị biểu diễn pH tối thích của Enzyme Ascobatoxidase là ở pH= 6 Hình 8.1: Trước chuẩn độ và sau chuẩn độ bằng Na2S2O3 0,01N GV: ThS Lê Thanh Hải 31 Thực hành Công nghệ Protein. .. Thanh Hải 11 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Hình 3.1 Thí nghiệm điểm đẳng điện của casein từ trái sang phải (1,2,3,4, và 5)  • • • • •  Mức độ kết tủa Ống 1: Kết tủa nhất Ống 2: Kết tủa hết Ống 3: Kết tủa nhiều Ống 4: Kết tủa nhiều nhất Ống 5: Kết tủa trung bình Kết luận: Vậy điểm đẳng điện của protein Casein là ở pH = 4,1 GV: ThS Lê Thanh Hải 12 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 4:... rỗng tinh bột hấp thu iod cho màu xanh đặc trưng ở điều kiện thường Enzyme amylase Glucose Tinh bột GV: ThS Lê Thanh Hải Maltose 18 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme Thủy phân Maltotetrose Dextrin phân tử thấp Enzyme amylase thủy phân liên kết -1 ,4-glycoside của tinh bột thành các dextrin lớn đến nhỏ, cuối cùng là glucose • Ống 2: Enzyme bromelin không tác dụng với tinh bột Sở dĩ thí nghiệm có màu... vật đều được thực hiện trong điều kiện ôn hòa, không đòi hỏi nhiệt độ cao (Enzyme xúc tác vô cơ Amylase) nhưng tốc độ phản ứng vẫn mạnh hơn so với Enzyme xúc tác hữu cơ (HCl) phải cần ở nhiệt độ thích hợp thì phản ứng mới xảy ra GV: ThS Lê Thanh Hải 15 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 5: TÍNH ĐẶC HIỆU CỦA ENZYME 1/ Nguyên tắc Tính chất đặc hiệu là biểu hiện khả năng xúc tác của enzyme đối với ... 1glycerin) - H2SO4 0,1N chuẩn : 100ml - Vải :1 - Giấy lọc :4 - Phễu lọc 2.2 Dụng cụ - Erlen 100ml GV: ThS Lê Thanh Hải :7 24 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Bể điều nhiệt :1 - Buret 25ml :1 - Bercher... Dụng cụ - Cối sứ :1 - Becher 50ml :2 - Becher 100ml :2 GV: ThS Lê Thanh Hải 28 Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme - Erlen 100ml :3 - Bình định mức 50ml :2 - Erlen 250ml :4 - Buret 25 ml :1 - Pipet.. .Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme MỤC LỤC MỤC LỤC HÌNH MỤC LỤC BẢNG GV: ThS Lê Thanh Hải Thực hành Công nghệ Protein - Enzyme BÀI 1: ĐỊNH LƯỢNG NITƠ ACID