NGHIÊN cứu ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG IN VITRO của VIÊN NANG AZITHROMYCIN 250 mg

LỜI ƠN BỘ YCẢM TẾ TRUỒNG ĐẠI HỌC DUƠC HÀ NỘI Với lòng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn tới TS Nguyễn Thị Kiêu Anh - Bộ môn Hóa phân tích, người thầy tận tình hướng dân, báo suốt trình học tập nghiên cứu thực để tài TRỊNH MINH QUYẺT Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy, cô, kỹ thuật viên Bộ môn Hóa phânĐÁNH tích tạo điềuSINH kiện tốtKHẢ đểDỤNG hoàn IN thành khóa luận NGHIÊN CỨU GIÁ VITRO tốt nghiệpCỦA VIÊN NANG AZITHROMYCIN 250 mg (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ KHÓA 2003-2008) Người hướng dẫn: TS NGUYỄN THỊ KIỀU ANH hiện: Phòng thí nghiêm trungnhà tâm,trường, Bộ mônPhòng hóa phân Tôi xin Nơi trânthực trọng cảm ơn Ban Giám hiệu Đàotích tạo Thời gian thựcthức hiện:cho suốt thờiĩgian ngồi ghế nhà thầy cô truyền đạt kiêh Sinh viẽn Trịnh Minh Quyết A1K58 HÀ NỘ]ị 5-2008 MUC LUC Trang ĐẬT VẤN ĐỂ ỉ PHẦN 1- TỔNG QUAN 1.1 Vài nét Aỉãthromycỉn - 1.1.1 Công thức 1.1.2 Tính chất .3 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Tác dụng không mong muốn .4 1.1.5 .Chỉ định 1.1.6 Liều dùng, cách dùng 1.1.7 Dạng bào chế 1.1.8 Các phương pháp định lượng 1.2 .Vài nét vể sinh khả dụng in vitro 1.21 Khái niệm Azi Azithromycin EtOH Ethanol HPLc Sắc ký tỏng hiệu cao RSD Độ lệch chuẩn tương đối s SKD TB UV-ViS STT 2.1.2 2.1.3 Độ lệnh chuẩn Thiết bị- Dụng cụ DANH MỤC CÁC BẢNG CHỮ VIẾT TẮT DANH MUCCÁC HÌNH Sinh dụng Đối tượng nghiên cứu 13 13 Trung bình: 2.1.4 Quang Phươngphổ pháp nghiênkhả cúu .14 tử ngoạikiến Ký hiệuNội dung nghiên cứu 16 Tên bảng Trang 2.1.5 Bảng 2.1 Giá trị mật độ quang Azi dùng dẫn chất 18 2.2 Kết thực nghiệm nhận xét 17 Bảng 2.2 20 Giá trị mạt độ quang cua Azi dùng dẫn chất 2.2.1 Kh sau thời điểm phản ứng ảo sát 2.3 lựaKết chọn kiện lượng Bảng quảđiều khảo sátđịnh khoảng nồng độ tuyến tính 21 17 Bảng 2:4 Bảng 2.5 độ tích 24 2.1.2 Đánh giá phươngKhảo pháp sát phân .21 Bảng 2.6 25 Phần trăm giải phóng hoạt chất Azi chế Kết qua khảo sát đô ]ăp Ịaị 23 phẩm A môi trường pH 6,8 Bảng 2.7 Phần trăm giải phóng hoạt chất Azi chế 26 phẩm A mồi trường pH 4,5 Bảng 2=8Phin trâm giải phóng hoạt chất ầú sủa chế 27 phẩm A môi trường pH 1,2 Bảng 2.9 10 Bảng 2.10 Kết % giải phóng hoat chất chế 27 phẩm mòì trường pH 6,8 Kết % giải phóng hoạt chất chế 28 phẩm mòi trường pH 4,5 11 Bảng 2:11 Kết % giải phổng hoạt chất sủa sấe shế 29 phẩm mồi trường pH 1,2 12 STT Bảng 2.12 Ký hiệu Hình 1.1 Hình 2.1 So sánh SKD i n vitro chế phẩm thử chế phẩm dối chiếu Nội dung Sơ đồ giải phóng dược chất từ viên nang Phổ hấp thụ cúa dung dịch Azi dẫn chất bàng 30 Trang 10 18 acid sulfuric Hình 2.2 Đỗ thị biểu thị phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ acid sulíuric đùng dẫn chất 19 Hình 2.3 Đổ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang 20 vào thời gian phản ứng Hình 2.4 Đồ thị biểu diễn sư phụ thuộc tuyến tính độ 21 hấp thụ nồng độ Azi Hình 2.5 ĐỒ thị biểu diễn % giải phóng Azi chế phấm 28 tron® mỏi trường pH 6,8 Hình 2.6 Hình 2.7 Đổ thị biểu diễn % giải phóng Azi chế phẩm môi trường pH 4,5 Đồ thị biểu diễn % giải phóng Azi chế phẩm mối trường pH 1,2 29 30 ĐẶT VẤN ĐỂ Azithromycin kháng sinh macrohđ bán tổng hợp Thuốc có hiệu điều trị nhiều pneumonỉae, ỉoại vi khuán Mycopĩasma Hemophỉhis pneumoniae, inýỉuemae, Staphyỉococus Sírepíococus aureus, Mycobacterium avium, nên sử dụng rộng rãi để điểu trị bệnh nhiễm trùng hỏ hấp, nhiễm trùng da, đường tiẽụ hóa bệnh nhiêm khuẩn gây chủng vi khuẩn kháng penicillin Đặc biệt thuốc tồn thể lâu, cho phép dùng liều llần/ngày vả rút ngán liêu trình điéu tri phán lớn nhiễm trùng Hiện nay, thị trường có nhiều loại chế phẩm có loại dược chất hãng khác sản xuất, có tác dụng giống nhimg giá chế phẩm sản xuất nước thấp nhiều so với chế phẩm ngoại nhập Ví dụ hàm lượng, chế phẩm Azithromycin hãng Pfizer đắt gấp khoảng 30 lần so với thuốc loại hãng nước sản xuất Vì vậy, cần phải đánh giá thuốc sản xuất nước thuốc sản xuất nước cỏ tương đương sinh học không để khẳng định chất híựng thuốc sản xuất nước tạo niềm tin cho người tiêu dung yên tâm dùng sản phắm hãng nước sản xuất, tránh lãng phí không cần thiết Việc tiến hành đánh giá tương đuơng sinh học gồm hai giai đoạn thử in vitro thử in Vỉ vo Thử nghiệm in vitro tiến hành trước nhằm định hướng, sàng lọc cho bước thử in vivo giai đoạn Để gop phẩn nâng cao chất lượng thuốc sản xuất nước, tiến hành đề tài “Nghiên cứu đánh giá SKD in vỉtro viên nang Azithromycin” với mục tiêu sau: - Xây dưng mô hình đánh giá sinh khả dụng in vitro viên nang Azithromycin 250mg - Đánh giấ khả giai phóng hoat chất môi trường mô dịch dường tiêu hóa cua sô' chế phẩm viên Azithromycin 250 mg sản xuất PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT VỂ AZITHROMYCIN H3C Công thức phân tử: C3SH72N20p Khối lượng phân từ: 748,98 Tên khoa học: N-methyỉ“l l-axa-lO-deoxo-lO-dihydroerythromycin A 7.7.2 Tính chất [5,13,16,17] • Tính chất vật Lý - Bột màu trắng, tan nước, dẻ tan cổn tuyệt đổi, dicloiomethan - Dung dịch 0,2 % Azithromycĩn hỗn hợp methânol: nước (1:1) • Tính chất hoá học: - Tính base: osamin (đường amin) mang lại, pKa =8,74 - Tạo muối dễ tan nước với acid vô hữu - Phản ứng màu: VỚI acid (HCỈ, H2S04) 1.1.3 Tác dụng dược lý [4,16] • Đặc tính dược lực học Azithromycin kháng sinh cổ hoạt phổ rông thuộc nhóm macrolid, gọi azalid Azi có tác dụng tốt trẽn vi khuẩn Gram (+) (như Strepíococcus, Pneumococcus, Staphyỉococcus aureus ) Gram (-) (như Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae ) Azi có tác dụng vừa phải vi khuẩn Escherỉchia coỉy, Salmoneiỉa enterìtìs, Salmoneỉỉa typhỉ, Kỉebsieỉỉa • Cơ chế tác dụng: Azỉ gắn với rĩbosom 50s vi khuẩn gây bệnh, ngàn cản trình tổng hợp protein chúng • Đặc tính dược động học Azi sau uống, phân bố rộng rãi thể Thức ăn làm giảm hấp thu - Azi dung nạp tốt, tỷ lệ tác dụng khống mong muốn thấp Hay gặp chứng rối loạn tiêu hoá (khoảng 10 %) với triệu chứng buổn nôn, đau bụng, co cứng bụng, nôn, đầy hơi, ỉa chảy, thường nhẹ xảy so với erythromycin - Anh hưởng thính giác: Sử dung lâu dài liều cao Azi làm giảm sức nghe có hổi phục ỏ số người bệnh 1.L5 Chỉ định [4,16] Azi định dùng trường hợp nhiễm khuẩn vi khuẩn nhạy cảm với thuốc nhiễm khuẩn dường hô hấp (viêm phổi, viêm phế quản, nhiễm khuẩn da mô mềm, viêm tai giữa), đường hô hấp (viêm xoang, vicm họng viôm amidan), nhiễm khuẩn đương sinh dục chưa biến chứng Chỉamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae không đa kháng 1.1.6 Liêu dùng cách dùng [4] - Dùng lân ngày, uống trước bữa ãn sau ăn - Người lớn: ngày đầu uống ỉ liều 500 mg, dùng ngày với liều đơn 250 mg/ngày - Trẻ em: liều gợi ý cho trẻ ngày đầu 10 mg/kg thể trọng mg/kg ngày, từ ngày thư đến ngày thứ uống lần ngày 1.1.7 Dạng bào chế[3] - Viên nang azithromycin diliyđrat tương đương azithromycin 250 mg 1.1.8 L Phương pháp vi sinh vật [6,15] Khuyếch tán thạch, nuôi cấy chế tạo nhũ dịch, đo đường kính vòng vô khuẩn Có thể định lượng dùng chùng vi khuẩn thị: BaciUuspumilus NCTC (B) 63202 Baciỉlus pumilus NCTC 8241 Micrococcus hiteus ATCC 9341 ững dụng: Định lượng Azi viên nang, viên nén, hổn dịch uống l.x.8.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detectơr điện hóa [17] Định lượng theo chương trinh sau: Cột L29 (5 mm X 4,6 cm X ỊJ.m) Detector điện hoá Pha động: 5,8 g KH2P04 2130 ml nước 870 ml acetonitril, Điều chỉnh pH tới 11 dung dịch KOH ứng dụng; định lượng Ạzị trọng viện nangi hỗn dịch uống 1.1.8.3 Phương pháp HPLC vói detector uv Định lượng Azi bàng HPLC với chương trình sau: • Điểu kiện sắc ký [111 Cột: Lichrosorb RPS ( 250 mm X mm X pm) Chiếu chùm tia sáng đơn sắc có bước sóng X cường độ I() qua dung dịch đồng có nồng độ c, bồ dày lớp dung dịch Khi qua dung dịch, phần ánh sáng bị hấp thụ, phần ánh sáng bị phản xạ, phần lại (I) di qua dung dịchĐinh luật biểu hiên bàng biểu thức sau: A =lg - = e , l c Trong đó: Ầ : Đọ hấp thụ I0 : Cường đò ánh sáng đơn sắc tới I : Cường độ ánh sáng đơn sắc sau truyền qua dung dịch £ : hệ số hấp thụ phân tử phụ thuộc vào bàn Chat dung dịch, bước sóng chùm tia đơn sắc : độ dày lớp dung dịch mà ánh sáng qua (cm) c : nồng dộ chất lìghiêh cứu (rhol/l) 1.4.2 Điều kiện áp dụng định luật Lamhert- fìeer: - Thiết bị phải có khả tạo chùm tia có đệ đơn sắc định Độ đơn sắc cao tốt - Chất thử phải bền dung dịch bễn tác dung tia UV-VIS - Dung dịch phải nằm khoảng nồng độ thích hợp - Điiiĩg dịch phải trông suốt để hận chê tối cắc tượng quãng hộc khác, 11 pháp so sánh, phương pháp dường chuẩn, phương pháp thêm chuẩn Trong phạm vi đề tàí này, trình bày phương pháp đường chuẩn, phương pháp so sánh - Phương pháp đường chuẩn Chuẩn bị dãy chuẩn khoảng đung dịch có nồng độ chất chuẩn cs khác Đo mật độ quang dung dịch chuẩn vẽ đồ thị biểu diễn quan hệ mật độ quang nồng độ dung dịch chuẩn Đo độ hấp thụ Ax dung dịch thử, dựa vào đường chuẩn ta xác định dược Eổng độ mẫu thu cx Để han chế sai số, nổng độ dung dịch thử phải nằm khoảng nồng độ dẫy chuẩn - Phương pháp so sánh: Theo định luật Lambert-Beer, sau đo độ hấp thự dung dịch chuẩn so sánh (S) dưng dịch mẫu thử (X) ta có: As= K L, Cs AX=K L ,cx Nổng độ dung dịch thử cx dung dịch chuẩn cs không chênh lệch nhiều Các nồng độ gần nhau, kết xác 12 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VẢ KẾT QUẢ 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 2.1, ỉ Hóa chất - Thuốc thử - Chất chuẩn - Chất đối chiếu azithromycin: 100,0 % (Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương) - Ethanol tuyệt đối: PA - Trung Quốc - Kãli clôriổ: PÂ — Merck (Đốc) - Dinatri hyđrophosphat: PA - Trung Quốc - Natri acetat: PA - Trung Quốc - Acid sulfuric 98 % : PA “ Trung Quốc - Acid acetic băng: PA - Trung Quô*c - Acid hydrocloric: PA — Trung Quốc - Pâncrẽâtin: PA - Mẽfsfe (Đức) 2.2.2 Thiết bị - Dụng cụ - Máy thử độ hoà tan Varian 705 - DS (Mỹ) - Máy đo phổ hấp thụ Shimadzu ỤV- Mini - 1240 (Nhật) - Máy đo pH: 632pH- meter Metrohm (Thụy sỹ) " Cân phân tích Sartorius (Đức) 13 - Azithromycin 250 mg Traphaco, SDK: VNB-2357-04; số lô: 01/160506; Hạn dùng: 05/2009, (ChếPhẩm B) - Azithromycin Naphaco, SDK: VNB-2709-05; số lô: 06102; hạn dùng: 12/2009, (Chế phẩm C) ■* Chế phẩm đối chiếu: viên nang Mybrucin 250mg hãng Brawn- Ấn Độ; SDK: VN-2128-06; số lô: BC Ữ18Q01; hạn dùng: 12/2010, (Chế phẩm D) 2,1.4, Phương pháp nghiên cứu • Phương pháp thực nghiệm xác định điều kiện phản ứng tối ưu để thu độ hấp thụ lớn khỉ đo quang Từ tiến hành xác đinh khả giải phóng hoạt chất máy thử độ hoà tan môi trường, thu thập số liệu xử lý thống kê để đánh giá kết • Phương pháp đánh giá đõ hòa tan: Thiết - bị: máy thử độ hòa tan cốc, cánh khuấy + Môi trường: dung dịch đệm pH 1,2; 4,5 6,8 - Dung dịch đệm pH 1,2: Cân 3,73 g KC1 hòa tan 900 ml nước cất, điều đến pH 1,2 HC1 N, thêm nước vừa đủ 1000 ml, thêm 0,1 g pàncreatin, khuấy - Dung dịch đệm pH 4,5: Cân 1,80 g CH^COONa hòa tan 900 ml nước cất, điều chỉnh đến pH 4,5 acid acetic N, thêm nước vừa đủ 1000 mỉ, thêm 0,lg pancreatin, khuấy - Dung dịch đệm pH 6,8: cân 6,88 g Na 2P04 hòa tan 900 ml 14 + Cách định lượng: lấy xác 5,0 ml dung dịch Azi + 5,0 ml dung dịch acíd sulluric, sau thời gian phản ứng đem đo quang bước sóng cực đại + Tính kết quả: Hàm lượng Azi tính dựa vào phương trình hồi quy xây dựng từ chất chuẩn Azi ngày phân tích: y — bx + a Từ tính X = (y-a)/b Trong đó: y mật độ quang dược X : nỏng độ Azithromycin * Phản tích sỏ Bệu thực nghiệm + Các đặc trung thống kê để xử ìý kết phân tích 1" - Gỉá trị trung bình X - YJC, - ntr - Độ lệch chuẩn: s—] - Độ lệch chuẩn tương đối: lĩõ^ữ RSD {%) = Ậ 100 JC - Khoảng tin : ~ts ụ=x±-Ỵ=r = x±e yJN với độ tin cậy p = 0,95 s: sai số tương đối 15 Tính hệ số tương đồng ĩ2 theo công thức sau: f2 =5ữỉ!ôg< Trong dó: |+(1/«)Í( Ri-Tiy (=] n: số điểm xác định % hoạt chất giải phóng Rt : độ hòa tan trung bình chế phẩm chuẩn (12 viên) thời điểm Tt : độ hòa tan trung bình chế phẩm thử (12 viên) thời điểm Hai chế phẩm có SKD in vitro tương đồng f2 lởn 50 2.1.5 Nội dung nghiên cứu • Khảo sát lựa chọn phương pháp phãn tích: - - Thuốc thử dẫn chất hóa: chất, nồng độ, lượng thuốc thử Đánh giá phương pháp phân tích: - Khoảng nồng đô tuyến tính - Độ ỉập lại phương pháp - Độ phương pháp - Đánh giá sinh khả dụng ỉn vitro môi trường mô dịch đường tiêu hóa chế phẩm viện Azị trọng nựớc so VỚỊ chế phẩm đối chiếu 16 D Nồng độ acid sulíuric (% kl/tt) 60 Lầnl 65 70 75 80 0,2915 0,3632 0,4781 0,4332 0,4294 Lần 0,2749 0,3781 0,4525 0,4136 0,4191 Lần 0,3082 - Quét 0,4435 0,4794 phổ khoảng bước sóng04524 từ 400 - 6000,4366 nm, từ xác định bước 2.2 KẾT QUẢ THựC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 0,3177sóng hấp 0,4136 0,4485 thụ cực đại0,4593 (Ằ max) Kết trình0,4452 bày ò bảng 2.1, hình 2.1; hình Lần Lần TB RSD(%) 0,3301 0,3764 2.2 0,4505 0,4451 0,3005 0,3988 0,4639 0,4386 2.2-7 Khảo sát rà lựa chọn điều kiện định ỉưỢìĩg 5,73 4,84 2,99 3,59 0,4445 0,4350 2,52 2.2.1.1 Khảo sát ỉựa chọn thuốc thử dẫn chất hóa Azithromvcin macrolid có khả nâng cho phản ứng màu với thuốc thử xanthyldrol, p-dimethylamino benzaldehyd, acid sulíuric đậm đặc, tạo sản phẩm cố đặc tính hấp thụ quang học Dựa vào điều kiện thực tế kết khảo sát, chung chọn acid sulíuric làm thuốc thử cho phản ứng tạo màu với Azi, sau đem đo quang để xác định nồng độ Azi400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 VVavelength(nm) * Chuẩn dung Hình 2.1:bị Phổ hấpdịch thụ dung dịch Azi dược dẩn chất bằngacid suỉỷuric 2.1 :Kểt giãpH trị mật quang dẫnPƠ chấthoà Azi tan phụ thuộc 150 ml -Dung Bảng dịch đệm phosphaí ố,0:độ Cân 7,18của g Na nước, điều chỉnh pH đến 6,0 bàng dung dịch HCt, thêm 0,015 g pancreatin, ưộn vào nồng độ thuốc thử -Dung dịch chuẩn Azi: Cân xác khoảng 20 mg chất chuẩn Azi cho vàọ bình đinh mức 1ỌỌ mỊ, thêm khoảng 2,5 mỊ EtỌH, Ịắc kỹ chọ tan hệt, thêm -Dung dịch acid sulluric nồng độ: 60, 65, 70, 75, 80 % (kl/kl) • / ìên năn ứng: - Cho 5,0 ml dung dịch chuẩn nồng độ 50 Ịug/ml vào ống nghiêm 10 mỉ nắp xoáy, thêm 5,0 ml dung dịch acid sulfuric, lắc kỹ Để 30 phút nhiệt độ phòng Mỗi nồng độ acid sulfuric làm mẫu - Song song làm mẫu trắng điều kiện 18 17 Thời gian (phút) Mẫu Mãu TB 0,4062 0,3947 0,4005 10 0,3687 0,4823 0,4255 15 0,4951 0,5035 0,4993 20 0,5435 0,5571 0,5503 Bảng 2.2: Kếtkết giá trị cho mật độ quang dẫn chấtphản Azi phụ gian Độ phương pháp đuợc đánh giá phương pháp thẽm chuẩn Nhận xét: Kết thấy tiến hành ứngthuộc tạo vàữ màu với thời Nhận xét: Từ thu cho thấy thấy khoảng nồng độ thời khảo sát 25 0,5126 0,4919 0,5021 phán ứng Thèm iượng xác thu chất chuẩn vào mẫu thử đãđộ biết nồng độ, gian ỉà 20 phút, hấp tương lớn nhất, nên lựa chọn thời gian từ 25-75 pg/ml cóđộ phụ thụ thuộc tuyến tính đối lượng chặt chè giũa mật quang 30 0,4754 0,4965 0,4860 cho tổng độ20 chứng khoảng phản ứng tạonồng mau phút chonằm nghiên cứu tiếpnồng theo.độ khảo sát hệ số tương quan hồi quy0,4863 gần 35và nồng độ Azi với 0,4823 0,4904 Tiến hành định lượng mô tả mục 2.1.5 Kết trình bày bảng 2.5 40 0,4857 0,48012.5:Kết 0,4829 khảo phấp sát tỉnh 2.2.2.2 Khảo sát Báng độ lặp lại phương 2.2.2 Đánh giá 0,4905 phương pháp phân tích 45 0,4931 0,4918 2.2.2.1.Khảo sát hành độ tuyến tính Tiến khảo sát độ lặp lại phương pháp cách chuẩn bị đung 50 0,4865 0,4818 0,4841 địch Azi nồng độ từ 25 - 75 Ịig/ml Độ lặp lại phương pháp đánh giá 25,0 sát phụ 37,5thuộc tuyến 50,0tính độ 62,5 75,0 Kháo hấp thụ vào nồng độ Azi cách Nồng độ dựa việc khảo sát độ lặp lại thí nghiệm song song nồng độ (Ịtg/ml) chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn Azi có nồng độ biến thiên khoảng 25 - 75 Mật dỗ quang 0,2271 ỡ,3594 0,4726 0,6874 0,7052 pg/ml,Phương Tiến hành làm phản ứng tạo màu rổi đo quang theo dẫn mục 2.1.5 Bángy= 2.4; Kết quả0,0033 khảo sát độ lặp lại trình hổi quy: 0,0095xHệ số quan tươnggiữa quanmật : r =0,9996 Xác lập mối tương độ quang nồng độ Azi biểu thị phương STT Nồng độ (ptg/ml) Hình 2.2 :ĐÔ thị biểu thị phụ thuộc mật độ quang vào 2.3: Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính trinh hồi quy vàBảng hệ sô' tương quan nồng độ acid suỊỷuric 25,0 37,5 50,0 62,5 75,0 Nhận xét; Từ kết trôn, nhận thấy acid sulíuric 70 % (kl/tt) cho Uộ hấp 0,2292 0,3577 0,4791 0,5854 0,6836 thụ lớn nhít nên định chọn nồng độ để lảm phán úng tạo 0.2275 Trung bình 0,3591 0.4585 0,5856 0,7054 mầu cho giai đoan sau 0,2224 0,3455 0,4654 0,5828 0,6953 2.2.1.2.Khảo sát lựa chọn thời gian phản ứng: 0,2459 0,3756 0,5029 0,6104 0,7254 Nhận xét: Kết thực nghiệm cho thấy phương phấp có độ cao, Chuẩn bị mẫu như0,4658 với0,5784 nồng độ H 2S04 0,694 70 %.ỉ Tiến hãnh làm phán 0,2374 0,3568 tỷ lệ thu hổi Azi xấp xỉ 100 % ứng 0,2325 mô tả 0,3589 mục 2.1.5, sau thời điểm 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 0,4734 0,5885 0,6986 đem mật độờquang bước 482 nm RSD(%) phút 3,97Từ 3,01 2,14 cácđokết trên, 3,71 cho thấysóng phương pháp định2,48 lượng Azi mà STT xằy đựng cố đứng khấ cao, Lượng độ ìậpchuẩn ỉậi khấ lốt, lính rộng fìôn LượngNhận cânđộxét: Tỷthấy lệkhsẩng tìmở cáctuyến Lượng chuẩn Từ kết qua bảng 2.4 cho mức nổng độ khác việcthử áp(mg) dụng phương pháp việc địnhlạilượng nghiên cứu Đồ -I — -■——-——— - tìm lạiphụ (%) độAzi thèm vào Hìnhtuyến 2.3: thị biểunày diễn thuộc mật vàocác khoảng có RSD %của tỏquang phương pháp có độ lặp t chứng tính 2D 40 60 SO đáng tin (mg) cậy (rag) G thời gian phân ứng lại tốt, 30,5 12,6 12,37 100,35 - -— (ng/ml) - 29,9 sát độ đúng: 12,2 2.2.23 Khảo 12,41 101,72 30,0Đánh giá khả 12,2 12,14 99,51 2.2.3 nấng giải phóng hoạt chất môi trướng hòa tan Hình 2.4: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyên tính mật độ quang 29,1 13,1 12,97 99,29 29,2 12,6 Giá trị trung bình X RSD (%) 12,61 100,11 2í 19 22 23 20 100,19 0,95 % Azi giải phóng thời điểm so với hàm lượng ghi Viên nhãn 10 phút 65,6 15 phút 74,8 20 phút 90,3 25 phút 96,4 30 phút50 phút 98,6 106,1 94,0 tả mục 99,4 2,1.5; lấy 105,2mẫu ở108,1 1,2; pH61.8 4,5 pH78,5 6,8 mô thời điểm 10 phút, 76,9 25 91,9 1561,4 phút, 20 phút, 30trăm phút, 50giải phút để 99,6 theo dõi 104,8 khả Bàng 2.7:phút, Phần Aĩi95,8 phóng chế phẩm A giải phóng hoạt 61,9 76,0 chất cùa chế phẩm 2.2.3.1 Đối với chế phẩm A 64,6 74,2 87,4 91,6 99,4 môi trường pH 4,5 92,1 96,6 97,9 97,9 104,9 62,7 79,0 90,7 101,1 103,8 107,0 Tiến hành mục 2.1.5 Kết dược trình bày bảng 2.6; 2.7 2.8 67,8 77,1 92,4 96,9 96,3 106,4 Bàng 2.6: Phần trăm giải phóng hoạt chất Azi chế phẩm A 77,5 81,2 91,5 môi98,3 97,8 trường pH 101,3 6,8 68,7 82,5 90,5 95,0 98,5 96,5 10 75,7 81,2 85,3 89,6 93,6 93,1 11 68,7 68,8 79,3 90,1 93,3 95,6 12 73,9 79,7 89,3 92,2 94,0 97,0 TB 67,5 + 3,5 77,0 ±2,2 86,6 ± 2,5 95,3 101,3 ±2,1 95,5 ±2,4 8,32 4,86 4,45 3,58 3,92 5,31 ±s RSD ±3,4 (%) % Azi giải phóng thời điểm so với hàm lượng ghi nhãn Viẻn 10 phút 15 phút 81,7 82,4 85,4 90,8 89,7 91,1 89,1 90,7 88,7 90,9 95,2 96,9 90,4 91,9 87,9 92,3 96,3 95,1 92,6 91,8 92,9 94,9 96,7 89,4 20 phút 25 phút 30 phút 50 phút 89,6 88,8 90,7 90,5 93,2 94,1 87,7 94,7 94,6 94,3 94,9 95,3 95,6 102,2 99,4 100,7 101,7 94,7 96,3 97,5 98,1 98,5 102,9 95,0 93,9 96,8 96,5 98,7 100,6 10 95,4 100,0 102,1 104,2 104,4 105,8 11 96,8 98,1 97,2 98,9 99,6 99,3 12 91,5 102,5 98,5 24 100,0 101,8 103,1 81,4 93,9 ±3,3 94,4 95,9 97,3 98,5 TB±E ±2,7 94,9 ±3,5 ±2,5 ±2,9 ±3,4 RSỊ) 4,75 5,66 5,84 4j46 4,17 4,44 m % Azi giải phóng tai thời điểm so với hàm lượng ghĩ Viên nhãn 10 phút ỉ phút 20 phút 25 phút 30 phút 50 phút mẫu đầu, nhỏ 10 % thời điểm lấy mẫu sau, đủ điều kiện so sánh 86,8 92,0 92,8 92,7 94,0 96,9 Bang 2.8: Phẩntương trăm đồng giải phóng chất chế phẩm A ỏ với chếhoạt phẩm đốiazi chiếu 87,4 99,0 100,6 97,6 96,0 101,6 môi trường pH 1.2 2.2.1,2, Đối với chê phẩm B, c, D 88,8 100,7 93,3 100,3 101,1 99,1 hành thử 12101,2 viên 89,6 Tiến 101,6 100,3môi trường, 103,1ở môi trường 99,9 pH 1,2; pH 4,5; 87,8 92,1 100,6 100,2 98,1 99,3 100,3 Kết phần trảm hòa tan Azi chê' phẩm B,C,D trình bày bang 97,2 96,8 94,4 97,3 99,5 98,6 2.9; 2.10, 2.11 hình 2.5, hình 2.6, hình 2.7 91,4 92,6 95,0 98,5 97,1 97,5 98,4 98,5 96,3 hoạt chất 98,6của cấc chế 99,2phẩm Bảng 2.9: Kết96,2 % giải phóng 10 91,1 96,4 95,9 97,4 97,7 96,6 99,5 98,9 101,0 99,7 98.9 97,1 98,9 99,0 101,3 99,1 il 102,0 94,6 12 92,2 TB± e RSD 101,6 pH 102,1 6,8 mục 98,3 2.1.5 81,5 98,3 ±2,3±2,1 97,3 98,6 ±1J9 ±2,0 4,09 3,46 3,15 2.60 98,9 901,6 98,8 + 2,2 ±1,8 2.35 1,44 [...]... nghĩa của sinh khả dụng in vitro [8] - SKD ìn vìtro là công cụ kiểm soát chất lượng các dạng thuốc rắn để uống (viên nén, viên nang, pellet ), đặc biệt là đảm bảo sự đồng nhất giữa các lô mẻ sản xuất, giữa các nhà sản xuất - SKD in vitro dùng để sàng lọc, định hướng cho đánh giá SKD in vivo: Việc đánh giá SKD in vivo rất đắt tiền, tốn kém, không thể làm tràn lan do dớ trước hết phải dùng SKD in vitro. .. 2 mg/ ml trong pha động, 1.1.8.4 Định lượng Azithromycin hằng phương pháp tạo cặp lon- chiết đo quang [10] Thuốc thử: dung dịch lục bromocresol CT2 Môi trường tạo cặp ion: dung dịch đệm acetal pH 4,5 Dung mối chiết: CHC13 Khoảng nồng độ Azi 5- 20 pg/ml ứng dụng: định lượng Azi trong viên nén, viên nang, bột thuốc tiêm 12 VÀI NÉT VỀ SINH KHẢ DỤNG IN VITRO [8, 9,12] 1.2.1 Khái niệm [8] Sinh khả đụng in. .. Đánh giá độ hòa tan in vitro của viên nang Azithromycin 250 mg (12 viên trong 1 môi trường với 6 điểm lấy mẫu, tiến hành trong 3 môi trường mõ phỏng mồi trường đường tiêu hóa) đối với 3 chê phẩm thử và 1 chế phẩm đối chiếu Từ đó đánh giá được độ tương đồng f 2 của 3 chế phẩm ở 3 môi trường so với chế phẩm đối chiếu Trong đó 2 chế phẩm có sự tương đổng, còn 1 chê" phẩm khớng đạt tiêu chuẩn để đánh giá. .. tích Sartorius (Đức) 13 - Azithromycin 250 mg của Traphaco, SDK: VNB-2357-04; số lô: 01/160506; Hạn dùng: 05/2009, (ChếPhẩm B) - Azithromycin của Naphaco, SDK: VNB-2709-05; số lô: 06102; hạn dùng: 12/2009, (Chế phẩm C) ■* Chế phẩm đối chiếu: viên nang Mybrucin 25 0mg của hãng Brawn- Ấn Độ; SDK: VN-2128-06; số lô: BC Ữ18Q01; hạn dùng: 12/2010, (Chế phẩm D) 2,1.4, Phương pháp nghiên cứu • Phương pháp thực... B (viên nang Azì của Naphaco) với f 2 = 66,42 - 73,11, Chếphẩm R (viên nang Azi của Traphaco) có RSD (%) quá quy định nên không đủ điều kiện so sánh tương dổng (Theo quy định: f3 lớn hơn 50 % thì hai chế phẩm tương đồng) 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT Kết luân Sau khi hoàn thành khóa luận này, chúng tôi đã đạt được mục tiêu đề ra: 1 Khảo sát và đã xây dựng được phương pháp đánh giá SKD in vitro của viên nang. .. bình của chế phẩm chuẩn (12 viên) tại mỗi thời điểm Tt : độ hòa tan trung bình của chế phẩm thử (12 viên) tại mỗi thời điểm Hai chế phẩm có SKD in vitro tương đồng nhau nếu f2 lởn hơn 50 2.1.5 Nội dung nghiên cứu • Khảo sát và lựa chọn phương pháp phãn tích: - - Thuốc thử dẫn chất hóa: bản chất, nồng độ, lượng thuốc thử Đánh giá phương pháp phân tích: - Khoảng nồng đô tuyến tính - Độ ỉập lại của phương... sao cho tổng độ20 của chứng trong khoảng phản ứng tạonồng mau là phút chonằm các nghiên cứu tiếpnồng theo.độ đã khảo sát hệ số tương quan hồi quy0,4863 rất gần 1 35và nồng độ Azi với 0,4823 0,4904 Tiến hành định lượng như mô tả ở mục 2.1.5 Kết quả được trình bày ở bảng 2.5 40 0,4857 0,48012.5:Kết quả 0,4829 khảo phấp sát tỉnh đúng 2.2.2.2 Khảo sát Báng độ lặp lại của phương 2.2.2 Đánh giá 0,4905 phương... tích 45 0,4931 0,4918 2.2.2.1.Khảo sát hành độ tuyến tính Tiến khảo sát độ lặp lại của phương pháp bằng cách chuẩn bị các đung 50 0,4865 0,4818 0,4841 địch Azi ở 5 nồng độ từ 25 - 75 Ịig/ml Độ lặp lại của phương pháp được đánh giá 25,0 sát sự phụ 37,5thuộc tuyến 50,0tính của độ 62,5 75,0 Kháo hấp thụ vào nồng độ Azi bằng cách Nồng độ dựa trên việc khảo sát độ lặp lại của 5 thí nghiệm song song tại... định hướng cho việc thử in vivo để giảm bớt chi phí, thòi gian - SKD ìn viíro dùng thay thế cho SKD in vivo trong trưòng hợp đã chứng minh được có sự tương quan đồng biến giữa SKD in viiro và in VỈVO với điều kiện cồng thức và qui trình sản xuất không thay đổi Thực ra do tốn kém nỂn SKD in vìvo chỉ được dánh giá một lần khi lập hồ sơ xin phép sản xuất Từ đó về sau phai dùng SKD in vi tro để kiểm soát... thử dẫn chất hóa: bản chất, nồng độ, lượng thuốc thử Đánh giá phương pháp phân tích: - Khoảng nồng đô tuyến tính - Độ ỉập lại của phương pháp - Độ đúng của phương pháp - Đánh giá sinh khả dụng ỉn vitro trong 3 môi trường mô phỏng dịch đường tiêu hóa của 3 chế phẩm viện Azị trọng nựớc so VỚỊ chế phẩm đối chiếu cùng 16 D Nồng độ acid sulíuric (% kl/tt) 60 Lầnl 65 70 75 80 0,2915 0,3632 0,4781 0,4332 0,4294 ... hành đề tài Nghiên cứu đánh giá SKD in vỉtro viên nang Azithromycin với mục tiêu sau: - Xây dưng mô hình đánh giá sinh khả dụng in vitro viên nang Azithromycin 25 0mg - Đánh giấ khả giai phóng... Azi 5- 20 pg/ml ứng dụng: định lượng Azi viên nén, viên nang, bột thuốc tiêm 12 VÀI NÉT VỀ SINH KHẢ DỤNG IN VITRO [8, 9,12] 1.2.1 Khái niệm [8] Sinh khả đụng in vitro đánh giá trình giải phóng,... nm Đánh giá độ hòa tan in vitro viên nang Azithromycin 250 mg (12 viên môi trường với điểm lấy mẫu, tiến hành môi trường mõ mồi trường đường tiêu hóa) chê phẩm thử chế phẩm đối chiếu Từ đánh giá