Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng của indomethacin theo đường uống

Chính các yếu tố ảnh hưởng này có thể làm giảm SKD đồng thời làm tăng tác dụng không mong muốn nếu bào chế thuốc hoặc dùng thuốc không hợp lý, đặc biệt là indomethacin- một loại NSAID có

NGUYỄN HOÀNG LONG

NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA INDOMETHACIN THEO ĐƯỜNG UốNG

(KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ ĐẠI HỌC 1999 - 2004)

DS Nguyễn Thị Thu Hằng

Trường ĐH Dược Hà Nội

Thời gian thực hiện : 3-5/2004

m

HÀ NỘI, 5-2004

m

Ĩ U 3

JÍỜ3 V c A jh (ỹ n

Ç Ji'ù in j q u á t r ì n ít th u ’e h iê n U h o á lu â n tế t tig Jtiê fL, lờ i đ ã n h ậ n ¿ttiü'e

su ' q iú fL (tí) (¡m ị h á II í‘ủ d eủe t h ầ ụ c ỏ (Jtáfí bô m o n luto ch è , bí% tnêtt tliíú ’e

ÍẠ.

Q ịh ă tt ííịp It à If tồ i æ ùi bù ụ tú lòtttị lùèt o'ti ijâ u it íc ỉâ i:

liltíe h lè , tra e tîê fi g iú ft ĩtõ tỏ i trtu iq (Ị n á t r in h tlitte h iê n / líậ n íU Ìti IIÍII/

eùn ạ ¿tm u tu tíA ự - G íạ a ự êềt & ¡kf @ ¡ki£ ^ ĩằ n ạ

ÇTêt æÙL (‘ít ủ n th à t ih ạ ử i Lồ i eủ m ổ n tớ i tifie, fililí/ eỗ- íỊÌtío trtỉtK Ị hê

m ê*t hito ehè ũ ỉí hỗ m ò n (ln'tïe l í ị đ ã tạ o m ú i đ iề u k iê n th u ậ n Lời eỉtở tò i tro n ạ quá t f in h tím e h iê n (tề là i.

Ç Jô î e ủ n ụ æÙL eít ñ u t h à n h ạ ử i lồ i eảnt ổn, lổ i ừ á ứ Ịitiò n tị h a n trtìn ụ

n h à írtu ĩttạ đ ă (‘ó n h iê u g iú p (Tở' ixề eo' l ã ữ ỉỊt e lĩù t, tra n tị t h iâ b i o à hở á

e iiíít t h í n ạ ỉiiè n i tríìtKỊ q u á trìn h th u e h u n (te tà i.

S in h o ìè n :

Q ltịU lfen lô o ỉim Ị M úttạ.

CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT

SKD Sinh khả dụng

KTTP Kích thước tiểu phân

HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao

DTDĐC Diện tích dưới đường cong

HPMC Hydroxypropylmethyl cellulose

PVP Polyvinyl pyrrolidon

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN Đ Ề 1

PHẦN 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Sơ lược về sinh khả dụng của dạng thuốc rắn dùng theo đường uống 2

1.1.1 Khái niệm sinh khả dụng 2

1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến SKD của thuốc dùng theo đường uống.2 1.1.3 Phương pháp đánh giá SKD 8

1.2 Indomethacin 12

1.2.1 Công thức cấu tạo 12

1.2.2 Tính chất 13

1.2.3 Dược động h ọ c 13

1.2.4 Chống chỉ định 13

1.2.5 Chỉ định và liều dùng 13

1.2.6 Một số chế phẩm 14

1.2.7 Phương pháp định lượng 14

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 15

2.1 Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm 15

2.1.1 Nguyên vật liệu 15

2.1.2 Phương pháp thực nghiệm 16

2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 20

2.2.1 Kết quả xây dựng phương pháp định lượng indomethacin trong huyết tương 20

2.2.2 Kết quả đánh giá sơ bộ về SKD của indomethacin theo đường uống thử trên chó 28

PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XưẤT 33

TÀI LIỆU THAM KHẢO 34

ĐẶT VÂN ĐỂ

Trong những năm gần đây, số công trình nghiên cứu, số chế phẩm, sản lượng sản xuất cũng như lưu thông, sử dụng thuốc indomethacin theo đường

uống ngày càng phổ biến không chỉ ở nước ta mà còn trên cả thế giới.

Indomethacin là một hoạt chất chống viêm phi steroid (NSAID) được sử dụng rộng rãi với tác dụng chống viêm, hạ nhiệt, giảm đau mạnh Thuốc được dùng theo đường uống là đường phổ biến và thông dụng nhất, tuy nhiên tác dụng của thuốc lại bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố vì phải thông qua hệ tiêu hoá mới vào hệ tuần hoàn để đi đến các cơ quan cần tác dụng Muốn đánh giá hiệu quả điều trị của thuốc không chỉ dựa trên thành phần thuốc, hàm lượng thuốc

mà phải đánh giá SKD của thuốc Chính các yếu tố ảnh hưởng này có thể làm giảm SKD đồng thời làm tăng tác dụng không mong muốn nếu bào chế thuốc hoặc dùng thuốc không hợp lý, đặc biệt là indomethacin- một loại NSAID có nhiều tác dụng không mong muốn khi dùng theo đường uống

Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi thực hiện đề tà i"Nghiên cứu đánh

giá SKD của indomethacin theo đường u ố n g ” với các mục tiêu là:

1 Nghiên cứu xây dụng phương pháp định lượng indomethacin trong huyết tương

2 Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để sơ bộ đánh giá SKD indomethacin dùng theo đường uống

mà người ta đưa ra khái niệm sinh khả dụng để đằnh giá chất lượng thuốc.Người ta đã đưa ra định nghĩa SKD như sau: SKD của thuốc là một đại lượng chỉ tốc độ và mức độ hấp thu của dược chất dạng còn nguyên hoạt tính

từ một chế phẩm bào chế vào tuần hoàn chung và đưa đến nơi tác dụng [4], [10], [13], [16]

1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến SKD của thuốc dùng theo đường uống I.I.2.I Các yếu tố dược học ảnh hưởng đến SKD của thuốc

Dược chất chỉ được hấp thu khi đã hoà tan trong dịch tiêu hoá, do đó độ tan, tốc độ hoà tan của dược chất, và các yếu tố ảnh hưởng đến sự hấp thu dược chất đều ảnh hưởng nhiều đến SKD của thuốc [1], [2], [3], [4], [5], [10]

(a) Các yếu tố thuộc về dược chất

Tốc độ hoà tan của dược chất được biểu thị theo phương trình Brunner [10]: — = — xSx(Cs -C,) (1)

Nemst-dt h

Trong đó:

Q: Lượng dược chất hoà tan trong thời gian t.

s : Diện tích bề mặt tiếp xúc của dược chất với môi trường hoà tan.D: Hệ số khuếch tán của dược chất trong môi trường hoà tan

h : Bề dày lớp khuếch tán

Cs: Độ tan của dược chất

Ct: Nồng độ dược chất trong môi trường hoà tan tại thời điểm t

Từ phương trình Nemst- Brunner cho thấy có nhiều yếu tố thuộc về dược chất ảnh hưởng đến tốc độ hoà tan của dược chất, cụ thể là:

■ Kích thước tiểu phân dược chất

Theo phương trình (1), với cùng một lượng dược chất, khi kích thước tiểu phân dược chất giảm thì tổng diện tích tiếp xúc giữa tiểu phân dược chất và môi trường tăng lên, do đó tốc độ hoà tan dược chất càng nhanh Ví dụ, cloramphenicol khi KTTP giảm từ 800 Ịim xuống 200 Ịim thì tốc độ hấp thu tăng [4]

Tuy nhiên với một số trường hợp khi giảm KTTP thì độc tính và tác dụng phụ cũng tăng như nitroíuratoin khi dùng nang có KTTP 10 Ịim thì sẽ làm tăng kích ứng dạ dày và buồn nôn [4] Với một số dược chất dễ bị phân huỷ bởi dịch vị dạ dày, nghiền quá mịn dược chất sẽ dễ tan trong dịch vị và bị phân hủy nhiều hơn như penicillin

Ngoài ra KTTP còn ảnh hưởng nhiều đến các thông số khác trong quá trình bào chế như độ trơn chảy khối bột, lực liên kết khi dập viên cho nên phải xem xét KTTP một cách toàn diện và cụ thể khi đưa vào dạng thuốc

■ Độ tan của dược chất

Độ tan của dược chất có ảnh hưởng rất lớn đến tốc độ hoà tan và giải phóng của dược chất ra khỏi dạng thuốc rắn

- Dạng muối: Các dược chất là acid yếu hay base yếu có thể chuyển thành các dạng muối khác nhau Dạng muối có độ tan tốt hơn dạng acid hay base tương ứng, nên thường có SKD cao hơn Ví dụ: penicilin V, dùng dạng muối kali hoặc muối calci penicilin V cho nồng độ trong máu cao hơn nhiều so với penicilin V [4]

Tính đa hình

Dược chất có thể tồn tại dưới nhiều dạng tinh thể khác nhau tuỳ điều kiện kết tinh Quá trình kết tinh bắt đầu từ việc tạo thành dạng ít bền cần ít năng lượng đến dạng bền cần nhiều năng lượng hơn, các dạng ít bền xu hướng chuyển dần sang dạng bền, dạng không bền dễ tan hơn do đó SKD cao hơn [12] Tuy nhiên trong quá trình sản xuất, bảo quản, các thao tác kỹ thuật như nghiền bột, tạo hạt dạng không bền chuyển dần sang dạng bền làm giảm SKD của thuốc

- Hydrat hoá

Dược chất có thể tồn tại ở dạng khan hay dạng hydrat hoá Dạng khan hay

hydrat có liên quan đến độ tan dược chất, do đó ảnh hưởng đến SKD thuốc, thông thường dạng hydrat có độ tan thấp hơn nên SKD thấp hơn [10]

Trong sản xuất và bảo quản các yếu tố nhiệt độ, dung môi làm chuyển dạng này sang dạng khác làm thay đổi SKD thuốc

(b)Các yếu tố thuộc về tá dược

Tá dược đưa vào dạng thuốc rắn không chỉ đơn thuần là làm thuận lợi cho quá trình sản xuất, mà còn ảnh hưởng rất nhiều đến SKD của thuốc:

- Nhóm tinh bột và cellulose vi tinh thể giải phóng theo cơ chế trương nở

và vi mao quản Đây là nhóm tá dược thân nước có khả năng cải thiện tính sơ nước của dược chất ít tan

_ 4_

-Nhóm tá dược có khả năng hút như calci carbonat, magnesi carbonat làm viên rã trong dịch vị, nhưng có tính kiềm và khả năng hấp thu mạnh, dễ gây tương tác với dược chất.

■ Tá dược rã

Tá dược rã thúc đẩy quá trình vỡ của viên sau khi uống Tá dược rã làm thuốc nhanh rã, làm tăng diện tích tiếp xúc giữa tiểu phân dược chất và môi trường hoà tan, do đó làm tăng tốc độ hoà tan dược chất, tăng SKD thuốc

■ Tá dược trơn

Nhóm tá dược trơn sơ nước, tạo thành màng bao quanh tiểu phân, làm giảm sự thấm nước, làm giảm tốc độ rã và tốc độ hoà tan dược chất của thuốc Trái lại, tá dược trơn thân nước làm tăng tốc độ rã và tốc độ hoà tan dược chất

■ Tá dược bao

- Bao bảo vệ: Thông thường làm kéo dài thời gian rã của thuốc, nhưng không ảnh hưởng nhiều đến khả năng rã của thuốc

- Bao tan ở ruột: Có tác dụng làm thuốc kháng dịch vị trong một thời gian

nhất định và phải rã trong dịch ruột để giải phóng dược chất

- Bao điều khiển giải phóng: Tạo ra thuốc tác dụng kéo dài

(c) Các yếu tố ảnh hưởng đến hấp thu thuốc

Dược chất sau khi hoà tan vào dịch tiêu hoá thành dung dịch sẽ được hấp thu qua màng dạ dày- ruột vào máu Phần lớn dược chất hấp thu qua màng theo cơ chế khuếch tán thụ động Tốc độ khuếch tán tuân theo định luật Fick:

dC K.D c/r^ n ^ M1

— xS(C J c 2) |4J.

af /

Trong đó: K : Hệ số phân bố của dược chất giữa môi trường và màng

D : Hệ số khuếch tán của dược chất qua màng,

s : Diện tích bề mặt tiếp xúc giữa môi trường và màng

L : Bề dày của màng

Cj - C2: Chênh lệch nồng độ dược chất ở hai bên màng

Từ phương trình cho thấy:

- Hệ số phân bố của dược chất giữa dịch tiêu hoá và màng càng lớn thì tốc

độ hấp thu càng lớn

- Dược chất có khả năng ion hoá cao khó đi qua phần lipid của màng, mức

độ ion hoá của dược chất lại phụ thuộc vào pH môi trường dạ dày- ruột, các

acid yếu tồn tại chủ yếu dưới dạng không ion hoá ở dạ dày, được hấp thu nhanh ở dạ dày Các base yếu tồn tại chủ yếu dưói dạng không ion hoá ở ruột non và được hấp thu ở ruột.

I.I.2.2 Các yếu tố sinh học ảnh hưởng đến SKD của thuốc

(a) Các yếu tố thuộc về dạ dày

■ Thành phần và tính chất dịch vị

Dịch dạ dày có pH từ 1- 3, 5, tăng lên sau khi ăn và giảm dần sau vài giờ

pH dạ dày ảnh hưởng đến độ tan dược chất là acid hay base yếu, nên ảnh hưởng đến hấp thu và đến độ bền của dược chất Vì vậy ảnh hưởng đến SKD của thuốc

■ Thời gian lưu lại của thuốc ở dạ dày

Hầu hết các thuốc được hấp thu ở ruột non Nếu thuốc bị lưu lại lâu ở dạ dày sẽ làm giảm tốc độ và mức độ hấp thu thuốc Thời gian lưu của thuốc phụ thuộc vào nhiều yếu tố như lượng thức ăn, thể chất thức ăn, vị trí dạ dày, trạng thái vận động Thức ăn trì hoãn quá trình tháo rỗng của dạ dày, làm chậm

6

-hấp thu đối với dược chất -hấp thu chủ yếu ở ruột non Thức ăn còn có thể gây tương tác với dược chất, gây tăng dịch tiêu hoá, làm tăng phân huỷ thuốc Thức ăn làm tăng độ nhớt của dịch tiêu hoá, làm chậm quá trình hoà tan và hấp thu dược chất [2], [5] Các cá thể khác nhau có tốc độ tháo rỗng dạ dày khác nhau, đây là nguyên nhân làm cho SKD của cùng một thuốc giữa các cá

thể rất khác nhau, thậm chí trên cùng một cá thể cũng rất khác nhau ờ các thời

điểm

(b)Các yếu tố thuộc về ruột non

Ruột non có hệ mao mạch dầy đặc Lưu lượng máu rất lớn, rất thuận tiện cho việc trao đổi chất qua màng sinh học

Thành phần của dịch ruột cũng ảnh hưởng nhiều đến độ tan, tốc độ hoà tan

và mức độ hấp thu của dược chất Dịch mật làm giảm sức căng bề mặt của dịch vị và dịch tá tràng, tăng khả năng thấm của dược chất sơ nước và tăng khả năng hoà tan của một số dược chất ít tan

Do trải trên một chiều dài lớn, qua nhiều vùng khác nhau nên sự hấp thu thuốc từng vùng phụ thuộc vào pH và hệ men

-Tá tràng: pH khá acid (4- 6), thời gian lưu ngắn 5- 15 phút, các acid yếu

tiếp tục được hấp thu ở đây.

- Hỗng tràng: pH vẫn còn acid nhẹ (6- 7), thời gian lưu 2- 3,5 giờ

- Hồi tràng: pH kiềm (7- 8), thời gian lưu 3- 6 giờ Đây là vùng hấp thu phần lớn các thuốc còn lại, đặc biệt là các base yếu

(c) Tuổi

Đối tượng đáng chú ý nhất là trẻ em và người già, nhất là trẻ sơ sinh Ở trẻ

sơ sinh tính thấm của màng hấp thu cao hơn trẻ em nói chung, nên thuốc rất

dễ hấp thu, dễ gây quá liều Các cơ quan chuyển hoá và thải trừ chưa hoàn thiện nên dễ gây tích luỹ thuốc Đối với người già, các chức năng đều suy giảm, hiệu quả hấp thu thuốc kém do giảm acid dịch vị, tăng thời gian lưu thuốc ở dạ dày, giảm tốc độ tưới máu, diện tích bề mặt ruột giảm, chuyển hoá

7

-qua gan lần đầu giảm, mắc nhiều bệnh cùng lúc, gây tương tác dược chất với dược chất làm thay đổi SKD thuốc [2], [5].

(d)Mang thai

Có thai làm thay đổi lượng nước trong tổ chức, có thể ảnh hưởng đến sự phân bố thuốc Phụ nữ có thai thường thiểu năng gan Do đó thận trọng khi dùng thuốc phân huỷ ở gan [2]

(e) Thể trọng

Một liều dược chất như nhau có thể có sự phân bố tích lũy khác nhau khá

xa giữa người có thể hình to và nhỏ dẫn đến tình trạng không đủ liều hay quá liều Tuy nhiên việc tính liều theo thể trọng cũng chưa tính hết đặc tính hấp

thu của thuốc Thuốc thân dầu được cố định trong các mô lipid Cho nên, ở

người béo nhiều mô mỡ, nồng độ thuốc tự do có thể thấp Trong khi đó các thuốc thân nước thì ngược lại các nơi nhiều nước sẽ kiểm soát quá trình khuếch tán, phân bố và thải trừ thuốc qua thận [2]

(f) Các yếu tố bệnh lý

Các yếu tố bệnh lý ảnh hưởng nhiều đến sự hấp thu thuốc, có thể làm giảm

sự hấp thu thuốc như: bệnh ỉa chảy làm tăng nhu động ruột, thời gian lưu

thuốc ở ruột ngắn do đó làm giảm SKD thuốc, cũng có trường hợp làm tăng sự

hấp thu thuốc như: tổn thương gan (viêm gan, sơ gan) làm tăng tích luỹ thuốc trong cơ thể

1.1.3 Phương pháp đánh giá SKD

I.I.3.I Đánh giá SKD in vitro

SKD in vitro là đánh giá quá trình hoà tan giải phóng dược chất từ dạng thuốc Đầu tiên người ta quy định phép thử để đánh giá khả năng giải phóng hoạt chất từ dạng thuốc đó là phép thử độ rã Tuy nhiên qua nhiều nghiên cứu người ta thấy độ rã chưa phản ánh đúng thực chất sự hấp thu của thuốc [11]

Từ năm 1951, Edward đã làm thực nghiệm về thử độ tan của các chế phẩm có chứa aspirin và nhận thấy rằng tác dụng giảm đau của viên nén

aspirin phụ thuộc vào tốc độ hoà tan aspirin trong đường tiêu hoá Từ đó hàng loạt các thiết bị dùng để đánh giá tốc độ hoà tan của dược chất ra đời đặt cơ sở cho việc phát triển môn sinh học dược bào chế v ề mặt ý nghĩa SKD in vitro chưa phải là SKD thực sự, tuy về mặt lý thuyết phép thử độ hoà tan có bắt chước một số điều kiện sinh học, nhưng vẫn còn khác xa thực tế Do đó chưa đánh giá đầy đủ hiệu quả lâm sàng của chế phẩm Có những trường hợp dược chất hoà tan nhanh nhưng chưa chắc đã hấp thu tốt Tuy nhiên SKD in vitro là công cụ quan trọng trong quá trình thiết kế công thức thuốc và kiểm soát đảm bảo sự đồng nhất của các lô mẻ sản xuất trong cùng một cơ sở và giữa các cơ

sở sản xuất với nhau Bên cạnh đó SKD in vitro còn là công cụ dùng sàng lọc, định hướng cho đánh giá SKD in vivo để giảm chi phí nghiên cứu SKD in vitro chỉ được dùng thay thế SKD in vivo trong các trường hợp đã chứng minh được sự tương quan chặt chẽ giữa SKD in vitro và SKD in vivo

1.1.3.2 Đánh gỉá SKD ỉn vivo

(a) Thuốc đối chỉếu

Để đánh giá SKD, tốt nhất chế phẩm đối chiếu là dung dịch tiêm tĩnh mạch, khi đó sẽ xác định được SKD tuyệt đối Trường hợp không thể theo đường tiêm tĩnh mạch do độc tính hay do không thể pha được dạng thuốc tiêm tĩnh mạch thì dùng dung dịch dược chất làm thuốc đối chiếu Trường hợp không thể pha được dung dịch do dược chất ít tan hoặc không bền thì có thể pha hỗn dịch mịn của dược chất dùng để uống hoặc tiêm bắp để đối chiếu Cũng có thể dùng nang cứng chế từ bột mịn của dược chất có thêm tá dược rã

để làm thuốc đối chiếu Để đánh giá tương đương sinh học giữa các chế phẩm tương đương bào chế, thì dùng thuốc gốc của nhà phát minh làm thuốc chuẩn

để đối chiếu [9], [14]

(b)Đối tượng thử thuốc

■ Động vật:

9

-Động vật được dùng trong các trường hợp: Thuốc đang nghiên cứu được thử nghiệm trên động vật trước khi thử trên người Thuốc không được tiêm tĩnh mạch cho người khi đánh giá SKD tuyệt đối do có nhiều phản ứng không mong muốn hoặc độc tính cao Thuốc do nồng độ trong máu thấp, khó định lượng, dùng động vật thử có thể tăng liều, khi đó nồng độ thuốc trong máu đủ lớn để định lượng bằng phương pháp thích hợp Tuy vậy giữa người và động

vật có sự khác nhau lớn về chuyển hoá thuốc trong cơ thể, chuyển hóa thuốc ở

người diễn ra chậm hơn động vật [13] Để đánh giá SKD người ta thường dùng các động vật sau:

- Chó: Mô hình tốt nhất để đánh giá SKD thuốc uống, vì đường tiêu hoá của chó tương đối giống người Tuy nhiên thời gian vận chuyển thuốc trong đường tiêu hoá ở chó ngắn hơn người

-Thỏ: Đường tiêu hoá thỏ khác xa của người, dạ dày thường xuyên chứa thức ăn ngay cả khi nhịn đói lâu ngày, chuyển hoá thuốc trong đường tiêu hoá

■ Mô hình thử thuốc:

Thường đánh giá SKD theo mô hình thử chéo ngẫu nhiên, các đối tượng thử đều phải uống cả thuốc nghiên cứu và thuốc đối chiếu theo thứ tự ngẫu nhiên, nhằm giảm bớt sai số cá thể Trường hợp đánh giá một chế phẩm nghiên cứu so với chế phẩm đối chiếu thì bố trí thử 2 đợt theo phương pháp

chéo đôi Trường hợp cần đánh giá nhiều chế phẩm thử, bố trí thí nghiệm theo nguyên tắc ô vuông latinh để giảm bớt số người tình nguyện [4].

Thời gian giữa các lần thử thuốc phải đủ để thuốc dùng lần trước thải trừ hết khỏi cơ thể, thường là gấp 10 lần thời gian bán thải của thuốc

■ Dịch sinh học dùng xác định SKD:

- Dịch sinh học có thể là máu, được dùng trong trường hợp dược chất có đáp ứng sinh học phụ thuộc vào nồng độ dược chất trong máu Số mẫu máu phải đủ xác định cả pha hấp thu và pha thải trừ của dược chất, đồng thời xác định cả giá trị nồng độ dược chất cao nhất trong máu Thường lấy khoảng 10-15 mẫu Khoảng thời gian lấy mẫu cần kéo dài từ 3- 4 lần thời gian bán thải với thuốc uống Với thuốc tiêm tĩnh mạch, lấy mẫu sau khi tiêm 5 phút, khoảng 10-15 phút lấy mẫu một lần cho đến khi hoàn thiện đồ thị [15] Mẫu phải được bảo quản ở nhiệt độ < -20° c cho tói khi phân tích

- Dịch sinh học có thể là nước tiểu để xác định tổng lượng dược chất hoặc chất chuyển hoá được bài tiết qua nước tiểu sau khi uống thuốc

- Dịch sinh học có thể là nước bọt khi dược chất bài tiết qua nước bọt và phương pháp phân tích đủ nhạy, nồng độ dược chất trong máu và trong nước bọt đồng biến với nhau

■ Phương pháp định lượng

Các phương pháp phân tích được dùng phổ biến trong nghiên cứu SKD là phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), sắc ký khí (GC), sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao (HPTLC), phương pháp miễn dịch phóng xạ (RIA)

Các mẫu thử và mẫu chuẩn của cùng một cá thể nên phân tích cùng một ngày Đường chuẩn cần xây dựng cho mỗi ngày định lượng và dãy nồng độ của đường chuẩn nên nằm trong khoảng nồng độ dự đoán thấp nhất và cao nhất sẽ gặp trong các mẫu phân tích

■ Phương pháp đánh giá kết quả

Để đánh giá kết quả người ta sử dụng các thông số sau [4], [5]:

- Diện tích dưới đường cong là thông số biểu thị mức độ hấp thu dược chất

từ chế phẩm, và được xác định theo công thức:

- Cmax là giá trị nồng độ dược chất cao nhất trong máu tương ứng với tmax

- SKD tương đối và SKD tuyệt đối của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu Được xác định theo công thức:

SKD„„Í(W= ^ x 100

SKD tuvêtđối = ^ ^ x i o otuyệt đổi A U C

t m

Trong đó: AUC thlà diện tích dưới đường cong của chế phẩm thử

AUCch là diện tích dưới đường cong của thuốc đối chiếu

AUCtm là diện tích dưới đường cong của dung dịch tiêm tĩnh mạch

1.2 Indomethacin

1.2.1 Công thức cấu tạo

Indomethacin Công thức phân tử: C19H16C1N04

Khối lượng phân tử: 357,79.

Tên khoa học: l-(4-chlorobenroyl)-5-methylindol-3-ylacetic acid

- Indomethacin hấp thu tốt ở ống tiêu hoá (90% liều uống vào được hấp

thu trong 4 giờ) Nồng độ đỉnh trong huyết tương phụ thuộc vào liều sử dụng

và đạt được khoảng 2 giờ sau khi uống Khi có thức ăn thuốc bị giảm hấp thu nhẹ nhưng SKD không đổi Tuổi không ảnh hưởng tới hấp thu Với liều điều trị thông thường indomethacin gắn nhiều với protein huyết tương Thuốc gắn vào dịch ổ khớp (tỉ lệ nồng độ trong ổ dịch và trong huyết thanh là khoảng 20%), qua được nhau thai, hàng rào máu não, có trong sữa mẹ và nước bọt

3 lần/ngày [7]

1.2.6 Một số chế phẩm

Các dạng bào chế của indomethacin hiện đang được sử dụng gồm:

- Dạng thuốc uống như viên nén, viên nang hàm lượng 25 mg hoặc 50

mg như Indocin, Indolag [7], [8]

- Dạng hỗn dịch như Indolag 25 mg/ 5 ml

- Dạng thuốc đạn, thuốc nhỏ mắt

- Dạng thuốc bột pha tiêm hàm lượng 25 mg hoặc 50 mg

1.2.7 Phương pháp định lượng

- Phương pháp đo quang: Dung dịch indomethacin trong methanol cho một

hấp thu cực đại ở bước sóng X = 320 nm, vì vậy có thể áp dụng phương pháp

đo quang để định lượng indomethacin trong nguyên liệu hoặc trong các chế phẩm [14]

- Indomethacin có chứa một nhóm acid vì vậy có thể sử dụng phản ứng trung hoà để định lượng indomethacin [14]

- Phương pháp HPLC với detector u v để định lượng indomethacin trong các dịch sinh học [6], [17]

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm

2.1.1 Nguyên vật liệu

2.1.1.1 Nguyên liệu hoá chất

- Indomethacin (Trung Quốc), theo tiêu chuẩn BP 98

- Methanol (HPLC Grade - Prolabo)

- Acetonitril (HPLC Grade - Merck)

- Acid acetic (HPLC Grade - Prolabo)

- Natri acetat trihydrat (PA - Merck)

- Ether (AR Trung Quốc)

- Ethanol, propylen glycol, Avicel, HPMC, Tween 80, PVP, lactose là các hoá chất dược dụng

2.1.1.2 Thiết bị, máy móc

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (Thermo Finnigan, Mỹ)

- Cột sắc ký Lichrospher 100 RP 18 (250 mm X 4 mm, 5 Ịi,m) và cột sắc ký BDS Hypersil C18 (150 mm X 4,6 mm ,5 Ịxm)

- Cân phân tích Sartorius

- Máy đo pH Mettler toledo

- Máy ly tâm Hermle z 200 A

- Máy lắc cơ học Velp scienfica

- Máy lắc siêu âm Ultrasonic LC 60 H

- Máy lọc Sartorius

- Máy đùn Extruder 65 - LAB

- Máy tạo cầu Spheriodzer - 250

- Tủ đá nhiệt độ < - 20° c.

2.1.1.3 Súc vật thí nghiệm

Súc vật thí nghiệm là chó đực khoẻ mạnh, cân nặng khoảng 1 0 -1 1 kg, được nuôi trong điều kiện ăn uống đầy đủ, không cho ăn thức ăn lạ Trước khi làm thí nghiệm cho chó nhịn ăn 12 giờ