Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học trên chế phẩm thuốc sản xuất trong nước góp phần hoàn thiện hướng dẫn thử BA-BE

Đánh giá thực hiện đề tài đối chiếu với đề cương nghiên cứu đã được phê duyệt 4 c, Các sản phẩm tạo ra so với dự kiến của đề cương 4 d, Đánh giá việc sử dụng kinh phí 4 1.3 Mục tiêu

Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Trịnh Văn Lẩu Đồng chủ nhiệm: TS Phùng Thị Vinh

Cơ quan chủ trì: Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, Bộ Y tế Cấp quản lý: Bộ Y tế

Thời gian thực hiện: Từ tháng 01/ 2006 đến tháng 12/ 2008 Tổng kinh phí thực hiện đề tài: 670 triệu đồng

Trong đó: Kinh phí sự nghiệp: 670 triệu đồng

HÀ NỘI - 2008

BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ

1 Tên đề tài: Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học chế phẩm sản xuất trong nước, góp phần hoàn thiện bản hướng dẫn thử BA/BE

2 Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Trịnh Văn Lẩu; TS Phùng Thị Vinh

3 Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, Bộ Y tế

Địa chỉ: 48 - Hai Bà Trưng, Hà Nội Điện thoại: (84 – 4) 9 363 114 Fax: (84 – 4) 8 356 911

4 Cơ quan quản lý: Bộ Y tế

TS BS Phạm Duệ

7 Thời gian thực hiện: Từ tháng 01/ 2006 đến tháng 12/ 2008

MỤC LỤC

trang PHẦN A: TÓM TẮT CÁC KẾT QUẢ TÓM TẮT CỦA ĐỀ TÀI 1

a Đóng góp mới của đề tài 1

3 Đánh giá thực hiện đề tài đối chiếu với đề cương nghiên cứu

đã được phê duyệt

4

c, Các sản phẩm tạo ra so với dự kiến của đề cương 4

d, Đánh giá việc sử dụng kinh phí 4

1.3 Mục tiêu nghiên cứu 7

2.1 Tình hình nghiên cứu và ban hành các hướng dẫn về sinh

khả dụng và tương đương sinh học

nghiệm

2.2.1 Chế phẩm phóng thích ngay (thuốc qui ước) 10

2.2.2 Chế phẩm phóng thích chậm 12

2.3 Phương pháp đánh giá tương đương sinh học 14

3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

3.1.2 Thuốc nghiên cứu 18 3.1.3 Thiết kế nghiên cứu 20 3.1.4 Đảm bảo các nguyên tắc đạo đức trong nghiên cứu 20

3.1.5 Người tình nguyện 20 3.1.6 Phương pháp cho uống thuốc và lấy mẫu 21

3.1.8 Phân tích mẫu huyết tương NTN sau khi uống thuốc 23

3.1.9 Xác định các thông số dược động học và đánh giá tương đương

sinh học

23

3.2.2 Dự thảo hướng dẫn 24

3.2.5 Xây dựng quy trình đánh giá tương đương sinh học cho 2 chế

phẩm

25

4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26

4.1 Kết quả nghiên cứu thực nghiệm 26

4.1.1 Đánh giá tương đương sinh học chế phẩm phóng thích chậm 26

4.1.1.1 Phương pháp phân tích 26

4.1.1.2 Kết quả giai đoạn lâm sàng 27

4.1.1.3 Kết quả phân tích, thống kê, đánh giá tương đương sinh học 27

4.1.2 Đánh giá tương đương sinh học chế phẩm phóng thích ngay 28

4.1.2.1 Phương pháp phân tích 28

4.1.2.2 Kết quả giai đoạn lâm sàng 30

4.1.2.3 Kết quả phân tích, thống kê, đánh giá tương đương sinh học 30

4.2.2 Hướng dẫn của Tổ chức Y tế thế giới 33

4.2.5 Hướng dẫn của Trung Quốc 36

5.1.1 Điều kiện nghiên cứu chung 45

5.1.3 Nghiên cứu thuốc phóng thích ngay (thuốc qui ước) 47

6 KẾT LUẬN 49

8 PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC BẢNG KẾT QUẢ

Bảng 1.1 Tóm tắt nghiên cứu thự nghiệm đánh giá TĐSH

Bảng 4.1 Tóm tắt kết quả thẩm định phương pháp xác định Nifedipin trong huyết tương

Bảng 4.2 Thời gian và bố trí cho NTN uống thuốc Nifedipin

Bảng 4.3 Nồng độ thuốc nghiên cứu trung bình –thời gian sau khi uống Nifedipin Bảng 4.4 Thông số dược động học trung bình sau khi uống Nifedipin

Bảng 4.5 Tóm tắt kết quả thẩm định phương pháp xác định Rosiglitazon trong huyết tương

Bảng 4.6 Thời gian và bố trí cho NTN uống thuốc Rosiglitazon

Bảng 4.7 Nồng độ thuốc nghiên cứu trung bình –thời gian sau khi uống Rosiglitazon

Bảng 4.8 Thông số dược động học trung bình sau khi uống Rosiglitazon

Bảng 4.9 Phân tích một số hướng dẫn đã tham khảo

- Phụ lục II: Báo cáo kết quả thực nghiệm

- Phụ lục III: Qui trình đánh giá TĐSH 2 chế phẩm

CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Chữ viết tắt Nội dung

AUC Diện tích dưới đường cong

AUC0-t Diện tích dưới đường cong từ thời điểm 0 đến t

AUC0-∞ Diện tích dưới đường cong từ thời điểm 0 đến vô cùng BCS Hệ thống phân loại sinh dược

Cmax Nồng độ thuốc tối đa

TĐSH Tương đương sinh học

Tmax Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa

TW Trung ương

US - FDA Cơ quan Quản lý thuốc - thực phẩm Mỹ

USP Dược điển Mỹ

VKNTTW Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương

WHO Tổ chức y tế thế giới

PHẦN A: TÓM TẮT CÁC KẾT QUẢ NỔI BẬT CỦA ĐỀ TÀI

1.Kết quả nổi bật của đề tài

a Đóng góp mới của đề tài

- Lần đầu tiên triển khai thực nghiệm đánh giá tương đương sinh học một cách hệ thống, tuân thủ các yêu cầu về thực hành tốt thử nghiệm lâm sàng (GCP)

và thực hành tốt phòng thí nghiệm (GLP) ở Việt Nam

- Xây dựng và hoàn thiện Hướng dẫn nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học của Việt Nam

- Đề xuất các tiêu chí đánh giá cho một cơ sở nghiên cứu sinh khả dụng (SKD) và tương đương sinh học (TĐSH) giúp cho các cơ quan quản lý có thể xem xét khi thẩm định cũng như các đơn vị muốn xây dựng để thực hiện các nghiên cứu về lĩnh vực này

- Đào tạo đội ngũ cán bộ chuyên môn kỹ thuật làm công tác nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học Đề xuất các ý kiến tham luận cho cơ quan quản lý tại các hội thảo trong nước, quốc tế và khu vực

b, Kết quả cụ thể

- Kết quả nghiên cứu thực nghiệm:

+ Đã đánh giá tương đương sinh học 01 chế phẩm phóng thích kéo dài (giải phóng chậm): viên nén Nifedipin Hasan 20mg so với Nefehexal 20mg Kết quả

nghiên cứu cho thấy hai chế phẩm tương đương sinh học in vivo (xem bảng 1)

Mặc dù còn hạn chế về mặt phương pháp, nhưng kết quả đánh giá đã được chấp nhận cho phép chế phẩm lưu hành trong nước

+ Đã đánh giá tương đương sinh học 01 chế phẩm qui ước (giải phóng ngay): viên nén Rosiglitazon 4mg so với Avandia 4mg Kết quả nghiên cứu cho

thấy hai chế phẩm tương đương sinh học in vivo Nghiên cứu được thực hiện vào

cuối năm 2007, khi đó cơ sở nghiên cứu đã được trang bị thiết bị phân tích là máy sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector huỳnh quang Do vậy, mặc dù mẫu nghiên cứu có hàm lượng rất thấp (4mg), nhưng nhờ có thiết bị phân tích với detector huỳnh quang, phương pháp xây dựng đã đáp ứng yêu cầu phân tích của mẫu thử

- Xây dựng và hoàn thiện Hướng dẫn của Việt Nam:

+ Nghiên cứu, phân tích hướng dẫn của các nước và tổ chức trên thế giới + Dự thảo Hướng dẫn nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học:

Đã dự thảo Bản Hướng dẫn và các phụ lục kèm theo, lấy ý kiến đóng góp của các chuyên gia và tổ chức hội thảo để thảo luận về nội dung bản Hướng dẫn nói riêng

và về vấn đề nghiên cứu lĩnh vực này nói chung

Kết quả thực nghiệm được tóm tắt trong bảng 1.1

Bảng 1.1 Tóm tắt nghiên cứu thực nghiệm đánh giá TĐSH

Nội dung Nifedipin Hasan so với

Nifehexal 20mg (n = 14)

Dorosi so với Avandia

(n= 24)

Thử Chứng Thử Chứng Cmax (ng/ml) 65 ± 17 65 ± 9 399 ± 18 403 ± 17 AUC0-∞

(ng.giờ/ml)

363 ± 127 342 ± 91 1772 ± 17 1796 ± 19 Tmax (giờ) 2,3 ± 0,7 2,5 ± 0,5 0,62 ± 0,25 0,67 ± 0,28 Khoảng tin cậy

90%

Cmax: 86,8 % - 112,1%

AUC0-∞: 88,3% - 121,9%

Cmax: 92,4% - 105,6% AUC0-∞: 93,6% - 105,0%

So sánh Tmax Khác nhau không có ý nghĩa Khác nhau không có ý nghĩa Đánh giá

c, Hiệu quả về đào tạo

- Đánh giá tương đương sinh học của thuốc là một nội dung hoạt động chuyên môn mới của Viện Kiểm nghiệm Hầu hết các cán bộ chưa được đào tạo

và chưa có kinh nghiệm trong lĩnh vực này Do vậy, đề tài nghiên cứu này đã tạo

cơ hội cho một số cán bộ của Viện tiếp cận và thực hiện một nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học tương đối hoàn chỉnh Nhờ đó, tạo nguồn nhân lực cho việc thành lập Trung tâm đánh giá tương đương sinh học của Viện (3/2007)

- Thực hiện chương trình hợp tác với Tổ chức Y tế Thế giới, hai cán bộ tham gia đào tạo ở nước ngoài (Malaysia), với sự hỗ trợ kinh phí bởi WHO Ngoài

ra, Viện đã tổ chức và tham gia 03 lớp tập huấn kỹ thuật về TĐSH cho các cán bộ thuộc hệ thống Kiểm nghiệm và một số doanh nghiệp

+ Một lớp do chuyên gia của WHO hướng dẫn cùng với các cán bộ của Viện Kiểm nghiệm thuốc TW và đại diện của Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh: tháng 12/ 2006

+ Hai lớp do Viện KN thuốc Trung ương phối hợp với VKNT Thành phố

d, Hiệu quả về kinh tế

Nghiên cứu thực nghiệm đánh giá TĐSH cho chế phẩm Nifedipin đã cung cấp kết quả cho nhà sản xuất, sử dụng trong xin cấp phép lưu hành sản phẩm, mang lại hiệu quả kinh tế cao Ngoài ra, nghiên cứu đã cung cấp thêm các thông tin về phương pháp phân tích, kinh nghiệm thiết kế nghiên cứu cho các nhà khoa học khi thực hiện nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học các chế phẩm có chứa Nifedipin và Rosiglitazon Nhờ đó, có thể hạn chế được một số nghiên cứu

về phân tích cũng như các nghiên cứu thăm dò không cần thiết

e, Hiệu quả về xã hội

Kết quả đánh giá TĐSH cho các chế phẩm đã nghiên cứu giúp cho người dân thấy được chất lượng của thuốc sản xuất trong nước cũng có thể so sánh được với chế phẩm ngoại nhập Nhờ đó, người dân có thêm niềm tin, chọn lựa sử dụng các sản phẩm nội địa (rẻ hơn), giảm chi phí tiền thuốc và là niềm khích lệ cho các nhà sản xuất dược phẩm trong nước tự tin hơn với sản phẩm của mình

Triển khai thực hiện nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học theo các tiêu chí quốc tế, hướng tới cho các sản phẩm sản xuất tại Việt Nam có thể được vào thị trường nước ngoài, giúp các doanh nghiệp Dược nước ta có thể hội nhập với khu vực và quốc tế Đồng thời, cũng nhờ đó, các cán bộ của Việt Nam đã có thêm kinh nghiệm thực tế, có khả năng tham dự vào các diễn đàn thảo luận chung của khu vực (Hội nghị hòa hợp ASEAN về lĩnh vực Dược), nâng cao vị thế cho Việt Nam

f, Các hiệu quả khác

Từ việc thực hiện đề tài nghiên cứu, nhóm nghiên cứu nói riêng và Viện kiểm nghiệm thuốc nói chung đã có nhiều đóng góp vào việc xây dựng cơ sở về mặt kỹ thuật cũng như quản lý cho những nghiên cứu đánh giá SKD và TĐSH ở trong nước Thời gian qua, đã có một số nghiên cứu được thực hiện một cách chuẩn hóa Nghiên cứu được tuân thủ theo các hướng dẫn và qui định quốc tế

Từ năm 2006 đến nay, nhiều doanh nghiệp dược trong nước đã bắt đầu tìm hiểu và thấy được ý nghĩa của việc đánh giá TĐSH cho các chế phẩm thuốc (mặc

dù đã được phép lưu hành) Trên thị trường đã có sự cạnh tranh lành mạnh hơn về chất lượng và thương hiệu Qua nghiên cứu và xây dựng tiêu chí cho đơn vị triển khai nghiên cứu SKD và TĐSH, các đơn vị thấy rõ hơn nhu cầu cơ sở vật chất, trang thiết bị, dụng cụ chuyên dùng cho lĩnh vực nghiên cứu mới này, làm cơ sở cho việc xây dựng dự án phát triển, nâng cấp các Trung tâm đánh giá TĐSH

Cục Quản lý Dược đã bắt đầu xây dựng những yêu cầu đầu tiên và danh mục thuốc bắt buộc phải cung cấp dữ liệu về TĐSH khi xin cấp phép lưu hành

2 Áp dụng vào thực tiễn sản xuất và đời sống xã hội

Bản thảo hướng dẫn được cơ quan quản lý là Cục Quản lý Dược xem xét

để ban hành hướng dẫn chính thức cho Việt Nam Bên cạnh đó, các cơ sở nghiên

cứu và doanh nghiệp rất hưởng ứng nếu có một hướng dẫn và các qui định rõ ràng

cho việc áp dụng nghiên cứu này Tuy mới ở hình thức bản thảo, nhưng đã được

cán bộ khoa học cũng như quản lý tham khảo để có thêm kiến thức, thông tin về

lĩnh vực này

Các kỹ thuật và phương pháp phân tích cũng như thiết kế nghiên cứu đã được ứng

dụng tại Trung tâm đánh giá TĐSH của Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương

Đã đăng hai bài trên tạp chí kiểm nghiệm để lấy ý kiến đóng góp cho bản thảo

- Kéo dài thời gian nghiên cứu 0

b, Thực hiện mục tiêu nghiên cứu

- Thực hiện đầy đủ các mục tiêu đề ra X

- Thực hiện được các mục tiêu nhưng không hoàn chỉnh 0

- Chỉ thực hiện được một số mục tiêu đề ra 0

- Những mục tiêu không thực hiện được 0

c, Các sản phẩm tạo ra so với dự kiến của đề cương

- Tạo ra đầy đủ các sản phẩm dự kiến trong đề cương X

- Chất lượng sản phẩm đạt yêu cầu như đã ghi trong đề cương X

- Tạo ra đầy đủ các sản phẩm nhưng chất lượng có sản phẩm chưa đạt 0

- Tạo ra đầy đủ các sản phẩm nhưng tất cả đều chưa đạt chất lượng 0

- Tạo ra được một số sản phẩm đạt chất lượng 0

- Những sản phẩm chưa thực hiện được 0

d, Đánh giá việc sử dụng kinh phí

- Tổng kinh phí thực hiện đề tài

- Trong đó: Kinh phí sự nghiệp: 670 triệu đồng

Kinh phí từ nguồn khác: không

- Toàn bộ kinh phí đã được quyết toán và có kế hoạch sử dụng

- Chưa thanh quyết toán xong: Không

- Bộ Khoa học công nghệ - Bộ tài chính cần có những nghiên cứu thay đổi chế tài trong nghiên cứu khoa học, để các hoạt động nghiên cứu được thuận lợi và có hiệu quả hơn

PHẦN B: NỘI DUNG BÁO CÁO CHI TIẾT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ

1 ĐẶT VẤN ĐỀ

1.1 Tính cấp thiết của đề tài

Vấn đề nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học đã được đề cập

và bắt đầu thực hiện một vài năm gần đây Tuy nhiên, các nghiên cứu còn mang tính chất tự phát, từ nhu cầu tiếp cận khoa học, kỹ thuật phân tích, đến những mong muốn hòa hợp khu vực và toàn cầu Hầu hết các quốc gia đều ban hành qui chế rõ ràng trong cấp phép lưu hành cũng như các hướng dẫn cụ thể cho việc thực hiện nghiên cứu Những nghiên cứu vừa qua thường áp dụng một số hướng dẫn của nước ngoài và bản dự thảo của khu vực Nhưng tình hình kinh tế, xã hội của Việt Nam so với các nước phát triển hiện vẫn còn chênh lệch nhiều Hơn nữa, về trình độ kỹ thuật và trang thiết bị, khả năng đầu tư cho lĩnh vực này ở nước ta còn rất hạn chế, nên việc áp dụng những qui chế, hướng dẫn của các nước tiên tiến trong điều kiện hiện tại đã gặp nhiều điều bất cập Chính vì vậy, việc xây dựng và ban hành một Hướng dẫn riêng cho nước ta là rất cần thiết

Để có thể xây dựng một bản Hướng dẫn dựa trên kinh nghiệm thực tế trong nghiên cứu cũng như đánh giá trong điều kiện của Việt Nam, Hội đồng khoa học

Bộ Y tế đã đề xuất chủ đề nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học một

số chế phẩm trong nước, tiến tới hoàn thiện hướng dẫn thử BA/BE vào chương trình nghiên cứu của đề tài cấp bộ năm 2005 Đề cương nghiên cứu của đề tài này

đã được Hội đồng cấp Bộ xem xét và phê duyệt qua một qui trình tuyển chọn, so sánh với đề cương của một số cơ sở khác

1.2 Giả thiết nghiên cứu của đề tài

- Nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học đã được thực hiện ở các nước có nền công nghiệp dược tiên tiến và một số nước trong khu vực Các quốc gia có thể sử dụng bản hướng dẫn chung của khu vực (như EU) hoặc có bản hướng dẫn riêng như Mỹ, Canada, Malaysia Các bản hướng dẫn đều có những phần chung, nhưng sẽ có những qui định riêng phù hợp với điều kiện của từng quốc gia Nghiên cứu sẽ phân tích những yếu tố chung (cần thiết), và xem xét những điểm chưa phù hợp với điều kiện nước ta để xây dựng bản hướng dẫn cho Việt Nam

- Nghiên cứu thực nghiệm là cần thiết để kiểm chứng sự đáp ứng, phù hợp của điều kiện thực tế với các yêu cầu của nghiên cứu Triển khai đánh giá TĐSH cho 2 dạng bào chế trong điều kiện hiện có để xác định rõ năng lực hiện tại về cơ

sở vật chất và con người của các phòng thí nghiệm trong nước

- Xây dựng phương pháp phân tích Nifedipin và Rosiglitazon trong huyết tương Với điều kiện trang thiết bị hiện có, khảo sát phương pháp phân tích trên

hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector UV và huỳnh quang Khảo sát các

kỹ thuật chiết tách các chất này từ huyết tương: loại tạp bằng acid hay dung môi

hữu cơ, chiết lỏng - lỏng bằng dung môi hữu cơ, chiết pha rắn Thẩm định phương pháp phân tích theo các chỉ tiêu qui định của FDA cho phương pháp phân tích mẫu trong dịch sinh học: tính chọn lọc (đặc hiệu), khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới, độ đúng, độ chính xác, độ ổn định và hiệu suất chiết

- Giả thiết rằng thuốc nghiên cứu tương đương với thuốc đối chứng Thiết

kế nghiên cứu trên đối tượng người tình nguyện khỏe mạnh sau khi uống liều đơn, thiết kế chéo, 2 thuốc, 2 giai đoạn Đánh giá bằng xác định nồng độ thuốc trong huyết tương Xác định nồng độ thuốc trong huyết tương NTN sau khi uống thuốc

và tính các thông số dược động học của từng thuốc Tính thống kê và đánh giá mức độ tương đương theo phương pháp khoảng tin cậy 90%

1.3 Mục tiêu nghiên cứu

- Đánh giá tính khả thi của bản dự thảo ASEAN về Hướng dẫn nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học của thuốc

- Hoàn chỉnh bản hướng dẫn nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học của thuốc phù hợp với điều kiện Việt Nam và hòa hợp với các nước Những mục tiêu này được xác định trong đề cương phê duyệt, và nội dung nghiên cứu đã thực hiện nhằm giải quyết các mục tiêu trên

Trong quá trình triển khai hội nhập kinh tế của các nước khối ASEAN, Ủy ban tư vấn về tiêu chuẩn và chất lượng của ASEAN (ASEAN Consultative Committee for Standard and Quality - ACCSQ) đã có nhiều cuộc họp thường niên

để bàn về việc thống nhất các tiêu chí hoà hợp Trong tiến trình này, nhóm công

tác về Dược phẩm đã xây dựng bản “Hướng dẫn thực hiện đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học của thuốc” để áp dụng cho việc công nhận kết quả

nghiên cứu lẫn nhau [16] Các cuộc họp thường niên nhằm xây dựng, hoàn thiện bản Hướng dẫn, đồng thời trao đổi hỗ trợ lẫn nhau trong triển khai các vấn đề liên quan

Trên thế giới, Mỹ gần như là quốc gia đầu tiên thực hiện luật bản quyền trong sản xuất dược phẩm và qui định rõ việc cấp phép lưu hành cho các thuốc generic Chính vì vậy, cho đến nay, FDA đã ban hành khá nhiều hướng dẫn về

nghiên cứu BA/BE như: Hướng dẫn thực hiện BA/BE in vivo; Hướng dẫn thẩm định phương pháp phân tích mẫu sinh học; hướng dẫn về Miễn thử BA/BE in vivo

cho những dạng thuốc uống rắn giải phóng nhanh dựa trên hệ thống phân loại sinh dược (biopharmaceutical Classification System – BCS) [ 21,22,23,24]

Hướng tới mục tiêu là tất cả người bệnh trên thế giới được sử dụng thuốc có chất lượng cao trong điều trị, Tổ chức y tế thế giới (WHO) đã dự thảo các hướng dẫn chung cho việc đánh giá thuốc generic Bản thảo hướng dẫn đề cập tới những nội dung tương tự và hàng năm vẫn lấy ý kiến chỉnh sửa, hoàn chỉnh Ngoài ra, các hướng dẫn của WHO giới thiệu danh mục các thuốc thiết yếu đã được xác định trong hệ thống phân loại BCS, những khuyến cáo cho các dược chất và dạng

thuốc có thể xem xét miễn thử hoặc bắt buộc phải thử BA/BE in vivo [44]

Một số nước châu Á như Hàn quốc, Trung Quốc cũng đã có những hướng dẫn cho việc thử nghiệm BA/BE (bằng tiếng địa phương)

Trong khu vực, các nước như Malaysia, Indonexia cũng đã ban hành các hướng dẫn, chủ yếu để thống nhất những thử nghiệm trong quốc gia đáp ứng tiêu chuẩn cho sản phẩm nội địa [32] Với các sản phẩm dành cho xuất khẩu hoặc các thử nghiệm đa quốc gia, thường có sự kết hợp hướng dẫn của nước sở tại và nước nhập khẩu

Bên cạnh hình thức ban hành Hướng dẫn chung của cơ quan quản lý một số nước đã ban hành hướng dẫn mang tính kỹ thuật trong dược điển như dược điển

Mỹ (USP) và dược điển Trung Quốc Dược điển Mỹ, bên cạnh những qui định chung cho nghiên cứu tương đương sinh học, còn giới thiệu protocol cho thực hiện đánh giá một số loại thuốc cụ thể [40]

Những vấn đề thường được các hướng dẫn đề cập đến như: khái niệm chung về tương đương sinh học và các thuật ngữ liên quan; yêu cầu về TĐSH khi cấp phép lưu hành các thuốc mới cũng như các thuốc generic; một số hương dẫn về kỹ thuật

như thiết kế nghiên cứu, tiêu chuẩn tuyển chọn người tình nguyện, nguyên tắc

chọn thuốc đối chứng cũng như các qui định về phương pháp phân tích Hướng dẫn của WHO còn đề cập đến những yêu cầu tối thiểu về cơ sở vật chất và hoạt động của cơ sở thực hiện các nghiên cứu này

2002, qui định cụ thể hơn các hoạt động theo chuẩn mực GCP hiện hành

Đầu năm 2003, Hội thảo về Thử độ hoà tan và Tương đương sinh học (Dissolution test and Bioequivalence) đã được tổ chức tại Khoa Dược, đại học Y dược TP Hồ Chí Minh Tiếp theo đó, theo chương trình và sự hỗ trợ kỹ thuật của WHO, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương đã thực hiện nghiên cứu "Mô hình mẫu đánh giá TĐSH các dạng bào chế trên người tình nguyện” nhằm tiếp cận kỹ

thuật trong đánh giá TĐSH in vivo ở Việt Nam

Một số nghiên cứu của trường đại học cũng đã được thực hiện như: nghiên cứu đánh giá TĐSH viên nang Cephalexin, viên nén hỗn hợp Amoxicilin và acid Clavulanic (Trần Tử An và cs [1] ); nghiên cứu bào chế viên nén Nifedipin tác dụng kéo dài (Phạm Thị Minh Huệ và cs [6]) Một số nghiên cứu khác về tương đương điều trị cũng đã bước đầu được đề cập đến như nghiên cứu đánh giá tương đương điều trị của chế phẩm Rifampicin, Omeprazol Những nghiên cứu này đã góp phần rất tích cực trong đào tạo đội ngũ cán bộ ngành dược có thêm kiến thức

về SKD và TĐSH Kết quả có ý nghĩa lớn trong đào tạo, nhưng còn hạn chế về thực tiễn đánh giá sản phẩm thuốc; các qui định về GCP (trong pha lâm sàng) cũng như GLP (trong phân tích) chưa được áp dụng và tuân thủ một cách đầy đủ Trước nhu cầu của ngành, ngày 12/ 4/ 2004, Bộ trưởng Bộ Y tế đã có công văn gửi Viện kiểm nghiệm (nay là VKN thuốc TW) và Phân viện kiểm nghiệm

(nay là Viện Kiểm nghiệm thuốc TP Hồ Chí Minh) chuẩn bị lập đề án xây dựng Trung tâm nghiên cứu SKD và TĐSH của thuốc Trong giai đoạn chuẩn bị đề án, hai cơ quan đầu ngành về kiểm nghiệm thuốc là những đơn vị đầu tiên triển khai thực hiện các nghiên cứu đánh giá TĐSH một cách chính quy theo yêu cầu của nhà nước, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (từ 2005) và Viện Kiểm nghiệm thuốc TP Hồ Chí Minh(2006) Cũng từ đó, đến nay đã có 2 trung tâm trực thuộc

2 Viện này được thành lập và có chức năng thực hiện nghiên cứu về lĩnh vực này Một số nghiên cứu đã được thực hiện, có thể theo yêu cầu của cơ quan quản lý (Cục quản lý Dược) như sản phẩm của Phú Yên, của Công ty TNHH dược phẩm Vellpharm; hoặc một số nghiên cứu xuất phát từ nhu cầu của chính các doanh nghiệp nhằm tự đánh giá chất lượng thuốc của mình Dự án nâng cấp và hoàn thiện Trung tâm đánh giá TĐSH của Viện Kiểm nghiệm thuốc TW đang được xem xét

Những nghiên cứu của 2 trung tâm này mang tính chất thực tiễn để đánh giá chất lượng thuốc sản xuất trong nước nên phải tuân thủ theo các qui định về đảm bảo chất lượng nghiên cứu Tuy nhiên, năng lực nghiên cứu của các cơ sở này còn hạn chế, một phần do nhận thức ban đầu chưa đầy đủ, phần khác do thiếu

cơ sở vật chất, thiết bị và phương pháp nghiên cứu Chính vì vậy, những nghiên cứu đã thực hiện trong thời gian qua của các trung tâm này cũng mới đáp ứng được yêu cầu cho sản phẩm lưu hành trong nước, và để có thể được chấp nhận ở nước ngoài sẽ còn phải hoàn chỉnh thêm

Để có thể thống nhất cơ bản về mặt kỹ thuật, Hội đồng Dược điển dự kiến

sẽ đưa chuyên luận chung “Hướng dẫn nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học các chế phẩm thuốc” vào Dược điển Việt Nam trong lần xuất bản tới

Trước nhu cầu hội nhập và mục tiêu tăng cường đảm bảo chất lượng cho thuốc, Cục Quản lý Dược đang soạn thảo ban hành danh mục các thuốc yêu cầu phải cung cấp dữ liệu về TĐSH khi xin cấp phép lưu hành Theo dự kiến, yêu cầu này sẽ phải thực hiện từ tháng 01/ 2009

2.2 Tổng quan về một số chế phẩm dùng trong nghiên cứu thực nghiệm

2.2.1 Chế phẩm phóng thích ngay (thuốc qui ước)

Để thực hiện nghiên cứu SKD và TĐSH của mỗi chế phẩm, những thông tin liên quan tới tác dụng dược lý và đặc tính dược động học của dược chất đó (nếu có) là rất cần thiết, giúp cho người nghiên cứu hiểu về tính chất tác dụng của chế phẩm và định hướng thiết kế nghiên cứu

Khi xã hội phát triển, một số loại bệnh gia tăng như bệnh về tim mạch, bệnh tiểu đường Hiện nay, những loại bệnh này cũng đang gia tăng ở Việt Nam Ngoài những chế độ ăn uống, tập luyện để cải thiện tình trạng sức khỏe, người bệnh vẫn thường xuyên phải sử dụng thuốc để giúp kiểm soát các triệu chứng bệnh Việc nghiên cứu, sản xuất các thuốc chữa những bệnh này cũng đang được chú trọng trên thế giới và ở Việt Nam

Rosiglitazon là một thuốc chữa đái tháo đường thuộc nhóm thiazolidinedion, có tác dụng hạ đường huyết bằng cách tăng nhạy cảm của cơ thể với insulin Thuốc không gây hạ đường huyết ở người không bị đái tháo đường Ở

người đái tháo đường, thuốc làm giảm sự tăng đường huyết nhưng không gây tai biến hạ đường huyết (trừ trường hợp nhịn đói hoặc phối hợp thuốc hiệp đồng tác dụng) Sau khi uống, thuốc được hấp thu tốt qua đường tiêu hóa, sinh khả dụng đạt xấp xỉ 99% Nồng độ đỉnh huyết tương đạt được khoảng 150ng/ml sau khoảng 1h Thức ăn không ảnh hưởng nhiều đến AUC, nhưng làm giảm đáng kể tốc độ hấp thu (Cmax giảm khoảng 28%) và làm chậm hấp thu (Tmax từ 1,0h kéo dài đến 1,75h) Thuốc liên kết với protein rất cao, khoảng 99%, chủ yếu là albumin Thuốc thải trừ dưới dạng không biến đổi qua đường nước tiểu (64%) và phân (23%) Thời gian bán thải 3-4 giờ và không phụ thuộc vào liều dùng Với liều 4

mg và 8 mg, uống xa bữa ăn, nồng độ đỉnh trong huyết tương trung bình đạt được khoảng từ 560 và 650 ng/mL Nồng độ tối đa trong huyết tương và diện tích dưới đường cong của Rosiglitazon tăng tỷ lệ với liều dùng cao hơn liều điều trị

Chỉ định: Rosiglitazon được dùng trong điều trị bệnh đái tháo đường khi bệnh nhân không có đáp ứng với metformin Dùng riêng hoặc phối hợp với metformin Chống chỉ định: Mẫn cảm với thuốc, thận trọng với người có men gan tăng (cao gấp khoảng 2 lần bình thường)

Phản ứng bất lợi: một số phản ứng thường gặp có thể xảy ra khi điều trị với rosiglitazon như đau đầu, đau lưng, tăng đường huyết, mệt mỏi, viêm mũi, viêm đường hô hấp trên

Liều dùng và cách dùng: Liều thường dùng cho người lớn là 4mg/lần/ ngày Liều tối đa là 8mg/ lần/ ngày Thuốc có thể uống lúc đói hoặc no

Trên thế giới, Avandia là một biệt dược khá nổi tiếng của công ty GlaxoSmithKline, thuốc sáng chế của dược chất rosiglitazon Ngoài ra, một số chế phẩm phối hợp với metformin cũng đang được dùng khá phổ biến (viên Avandamet với 3 hàm lượng phối hợp (metformin + rosiglitazon), tỷ lệ : 500mg +1mg; 500mg + 2mg; 500mg + 4mg

Nghiên cứu sinh khả dụng viên Avandamet (500mg/ 4mg), nồng độ đỉnh huyết tương đạt được khoảng 1,1 – 1,35 mcg/ ml (metformin) và 242 – 254ng/ml (rosiglitazon) sau khi uống thuốc khoảng 2,5 – 3 giờ (metfomin) và 1 giờ (rosiglitazon) Các giá trị dược động học này tương tự khi dùng chế phẩm đơn thành phần

Về mặt hoá học, Rosiglitazon có tên khoa học là pyrydinylamino) ethoxy] phenyl] methyl] -2,4-thiazolidinedione, (Z)-2-butenedioate Thông thường, Rosiglitazon tồn tại dưới dạng muối maleat, là chất rắn có màu trắng đến trắng đục, nhiệt độ nóng chảy từ 122ºC đến 123ºC Rosiglitazone maleate dễ tan trong ethanol và dung dịch đệm có pH 2,3 Công thức hóa học và công thức phân tử như dưới đây

- Công thức phân tử : C18H19N3O3S.C4H4O4

- Khối lượng phân tử : 473,52 ( 357,44 dạng base )

- Công thức cấu tạo :

N N

O

∗

S NHO

Rosiglitazon có khả năng phát huỳnh quang tự nhiên (Em= 367nm) khi bị kích thích dưới bức xạ Ex= 247 nm, vì vậy có thể định lượng bằng phương pháp HPLC với detector huỳnh quang

Một số tài liệu giới thiệu có thể tách rosiglitazon ra khỏi dịnh sinh học bằng phương pháp chiết pha rắn tạo cặp ion, sau đó được xác định bằng phương pháp HPLC và/ hoặc LC/MS

Vài năm trước đây, Rosiglitazon vẫn được dùng khá phổ biến trong điều trị và đã được một số công ty dược trong nước nghiên cứu sản xuất Tuy nhiên, từ đầu năm

2007, một vài phản ứng bất lợi gặp phải khi dùng thuốc đã thấy thông báo như tăng nguy cơ nhồi máu cơ tim và tăng tỷ lệ chết do tim mạch ở những người có bệnh tim mạch khi dùng thuốc này, nên việc sử dụng thuốc này có phần hạn chế hơn Chính vì vậy, thuốc hiện được sử dụng trên thị trường chủ yếu là sản phẩm nhập ngoại, các doanh nghiệp trong nước ngừng sản xuất hoặc không có kế hoạch nghiên cứu

2.2.2 Chế phẩm phóng thích chậm:

Chế phẩm thuốc phóng thích chậm đã thể hiện đặc tính ưu việt trong sử

dụng và hiệu quả điều trị Những dược chất được bào chế dưới dạng giải phóng chậm thường là những loại có thời gian bán thải ngắn, thuốc dùng để điều trị các bệnh mạn tính (người bệnh phải dùng trong thời gian dài) như các thuốc điều trị bệnh tim mạch, thấp khớp Thuốc giải phóng chậm phải đảm bảo lượng dược chất được phóng thích theo thời gian dự kiến sao cho đủ nồng độ có hiệu quả điều trị mà không vượt quá khoảng nồng độ an toàn Theo các hướng dẫn dạng thuốc giải phóng chậm đều phải nghiên cứu đánh giá SKD/ TĐSH invivo trước khi được cấp phép lưu hành Do vậy, kỹ thuật bào chế đòi hỏi công nghệ cao nên chưa phát triển ở Việt Nam Cho đến nay, mới chỉ có một vài doanh nghiệp trong nước hoặc liên doanh nghiên cứu sản xuất dạng bào chế này

Trong các thuốc điều trị bệnh tim mạch, Nifedipin là một thuốc dùng khá phổ biến trên thế giới cũng như ở Việt Nam trong nhiều năm qua Đây là một thuốc chẹn kênh calci thuộc nhóm dihydropyridin, có tác dụng chống cơn đau thắt ngực,

chống tăng huyết áp và điều trị bệnh Raynaud Thuốc có tác dụng ức chế chọn lọc dòng ion calci đi vào trong tế bào, bằng cách tương tác đặc hiệu với kênh calci ở màng tế bào Thuốc có tác dụng tương đối chọn lọc trên cơ trơn mạch máu, ít có tác dụng hơn với tế bào cơ tim Do vậy, ở liều điều trị thuốc không ảnh hưởng trực tiếp trên co bóp và dẫn truyền xung động tim Trên huyết áp, thuốc làm giảm sức căng ở cơ trơn các tiểu động mạch do đó làm giảm sức cản ngoại vi nên giảm huyết áp [3]

Thuốc được hấp thu nhanh và gần như hoàn toàn qua đường tiêu hoá, nhưng

do chuyển hoá bước 1 mạnh nên SKD sau khi uống chỉ đạt 45 – 75% Với dạng viên nén, sau khi uống thuốc khoảng 1 giờ thì phát huy tác dụng và sau 2 – 3 giờ đạt nồng độ tối đa trong máu; t1/2 huyết tương khoảng 6 – 11 giờ Thức ăn làm chậm nhưng không giảm mức độ hấp thu Thuốc liên kết với protein cao, khoảng

92 – 98% Một số tác dụng phụ có thể xảy ra ở giai đoạn đầu dùng thuốc Trước đây, thuốc hay được dùng dưới dạng viên nang phóng thích tức thì, để điều trị cao huyết áp, nhưng gần đây ít được dùng do có thể gây tai biến do thuốc phóng thích quá nhanh Chính vì vậy, dạng viên nén phóng thích chậm ít gây tác dụng phụ hơn

do thuốc được phóng thích từ từ ra khỏi dạng bào chế Nếu thuốc hấp thu quá nhanh, mạnh có thể gây hạ huyết áp quá mức, gây tim đập nhanh nên có thể gây thiếu máu cục bộ cơ tim hoặc não Một số phản ứng có thể thấy như: đánh trống ngực, tim đập nhanh, buồn nôn, ỉa chảy hoặc táo bón; đau đầu, mệt mỏi, chóng mặt, nóng đỏ bừng mặt; ít gặp hơn là hạ huyết áp, tăng nặng cơn đau thắt ngực, nổi ban, mày đay

Hiện nay, trên thị trường đang lưu hành khoảng 30 chế phẩm nhập ngoại có chứa nifedipin, bao gồm cả dạng phóng thích nhanh (viên nang) và một số dạng phóng thích chậm (viên nang) Viên nén Nifedipin Hasan là một chế phẩm phóng thích chậm do Công ty TNHH Hasan nghiên cứu sản xuất, để xét cấp phép lưu hành, Cục Quản lý Dược Việt Nam đã yêu cầu công ty cung cấp các dữ liệu về tương đương sinh học của chế phẩm này

Nifedipin tồn tại dưới dạng bột kết tinh màu vàng, nhiệt độ nóng chảy khoảng

172 – 172oC Nifedipin không tan trong nước, ít tan trong cồn, dễ tan trong

aceton, chloroform, không bền dưới ánh sáng tử ngoại

- Công thức phân tử : C17H18N2O6

- Khối lượng phân tử : 346,335

- Công thức cấu tạo :

Hệ số phân bố dầu/nước của Nifedipin là logP = 2,2, do đó có khả năng dùng phương pháp chiết lỏng – lỏng bằng dung môi hữu cơ để chiết tách ra khỏi dịch sinh học Gía trị pKa của Nifedipin khoảng 1,0

Nifedipin hấp thụ ánh sáng tử ngoại ở bước sóng khoảng 250nm trong môi trường acid hóa, vì vậy có thể định lượng Nifedipin bằng HPLC kết nối với detector UV hoặc DAD

Một số tài liệu giới thiệu có thể tách nifedipin ra khỏi dịnh sinh học bằng phương pháp chiết lỏng lỏng với dung môi hữu cơ, sau đó được xác định bằng phương pháp HPLC và/ hoặc LC/MS

2.3 Phương pháp đánh giá tương đương sinh học

Hiện nay, có thể đánh giá so sánh các chế phẩm theo 2 phương pháp:

- Đánh giá tương đương in vitro: Dùng phép thử độ hoà tan

- Đánh giá TĐSH in vivo: So sánh một số thông số dược động học hoặc hiệu

quả sinh học trên người tình nguyện

Những chế phẩm có chứa dược chất có độ tan cao, tính thấm tốt (thuộc nhóm I

trong hệ thống phân loại sinh dược sẽ được xem xét xem xét miễn thử TĐSH in vivo dựa trên các dữ liệu tương đương in vitro bằng phép thử độ hoà tan Khi đó,

sẽ giảm được một phần lớn kinh phí cho các việc nghiên cứu, đánh giá TĐSH Tuy nhiên, với các dược chất ít tan, tính thấm kém (thuộc các nhóm 4, 3, hoặc 2

trong BCS) và các thuốc có khoảng điều trị hẹp, việc xem xét miễn thử TĐSH in vivo hạn chế hơn Hơn nữa thông tin về độ tan và tính thấm (theo BCS) của các

dược chất còn chưa nhiều

Đánh giá TĐSH in vivo: là thực hiện so sánh sự đáp ứng sinh học của thuốc cần

nghiên cứu với một thuốc đối chứng trên cơ thể người hoặc sinh vật sống Có một

số phương pháp đánh giá, nhưng thông dụng nhất là đánh giá so sánh các thông số dược động học (Cmax, AUC, Tmax ), thông qua việc xác định nồng độ thuốc trong máu theo thời gian của thuốc nghiên cứu với thuốc đối chứng Ngoài ra, một

số phương pháp như so sánh dược lực hoặc hoặc lâm sàng cũng có thể được áp dụng nếu phương pháp đánh giá đáp ứng yêu cầu

- Thiết kế nghiên cứu: Mô hình đánh giá TĐSH hay được áp dụng nhất là chéo,

đơn liều/ đa liều, ngẫu nhiên, mù đơn/ mở (khác với các thiết kế thử lâm sàng thường là bố trí song song, mù kép) Bố trí chéo là dùng đối chứng trên chính cá thể đó (ở các giai đoạn khác nhau) nhằm hạn chế sự biến thiên giữa các cá thể Trên thực tế, thiết kế chéo theo kiểu ô vuông latin hay được ứng dụng, với n thuốc và n giai đoạn Để so sánh 2 thuốc (1 thuốc nghiên cứu so với 1 thuốc đối chứng), thiết kế theo kiểu ô vuông 2 x 2 (2 thuốc, 2 giai đoạn) Khi cần so sánh 3 chế phẩm, so sánh 2 thuốc nghiên cứu với cùng 1 thuốc chứng), thiết kế ô vuông

la tinh 3 x 3 (3 thuốc, 3 giai đoạn, 6 trình tự thử) Nghiên cứu với thiết kế 3 x 3 có thể phần nào gảm đươc chi phí Tuy nhiên, với mô hình này, thời gian thử thuốc kéo dài hơn (3 giai đoạn) và mỗi người tình nguyện sẽ phải dùng 3 chế phẩm thuốc; thời gian nghỉ (rửa giải) giữa các giai đoạn phải đảm bảo cho thuốc thải trừ

hết khỏi cơ thể, tức là tuỳ vào thời gian bán thải trừ của từng loại thuốc Do vậy, loại thiết kế này chỉ nên áp dụng khi muốn so sánh 2 thuốc nghiên cứu (có các công thức hoặc qui trình khác nhau) của cùng nhà sản xuất trong quá trình nghiên cứu, lựa chọn công thức

Hầu hết các nghiên cứu đánh giá TĐSH sau khi uống liều đơn Thiết kế đa liều chỉ cần khi:

- Có sự khác biệt về tốc độ hấp thu nhưng không khác về mức độ hấp thu

- Có sự biến thiên về SKD quá mức giữa các cá thể

- Nồng độ của dược chất hoặc chất chuyển hóa trong máu có được từ liều đơn quá thấp, phương pháp phân tích không đáp ứng về yêu cầu độ chính xác

- Sản phẩm thuốc là dạng thuốc phóng thích kéo dài

- Người tình nguyện: đánh giá TĐSH thường tiến hành trên người tình nguyện

khoẻ mạnh Trừ một số trường hợp thuốc có độc tính cao như các thuốc chống ung thư, thuốc chống HIV – Aids có thể phải thử trên bệnh nhân Người tình nguyện phải được kiểm tra sức khoẻ và đạt tiêu chuẩn các yêu cầu nghiên cứu đề

ra Số lượng cá thể cho mỗi nghiên cứu tuỳ thuộc từng thiết kế Mặc dù với các phép đánh giá sinh học cần số lượng cá thể (giá trị n) lớn để thu được giá trị trung bình có khả năng đại diện cao Tuy nhiên, trong đánh giá TĐSH, hầu hết các tài liệu đều khuyến cáo nên sử dụng số lượng cá thể nhỏ nhất nhưng vẫn đảm bảo yêu cầu mức độ tin cậy tính thống kê của phép thử Với các thuốc có sinh khả dụng biến thiên cao, số lượng người tình nguyện cần nhiều hơn Số lượng có thể từ 12,

18, 24, 30, tuỳ từng loại thuốc và qui định của mỗi quốc gia Hướng dẫn của ASEAN khuyến cáo nên dùng số lượng NTN tối thiểu là 12

- Thuốc đối chứng: thuốc được chọn làm đối chứng tốt nhất là chế phẩm phát

minh (thuốc đầu tiên được lưu hành trên thị trường), đã được nghiên cứu một cách đầy đủ về hoá học cũng như đặc tính lâm sàng, đã được cấp phép lưu hành hoặc một thuốc tương tự có chất lượng cao đang lưu hành trên thị trường ở thời điểm nghiên cứu Để thống nhất trong việc so sánh các kết quả đánh giá, mỗi quốc gia (Bộ Y tế hoặc hiệp hội các nhà sản xuất dược phẩm) cần qui định thuốc đối chứng cho từng loại dược chất

- Phương pháp phân tích: Hầu hết các tài liệu tham khảo đều hướng dẫn áp dụng

một phương pháp phân tích đã được thẩm định trong các nghiên cứu phân tích xác định nồng độ thuốc trong dịch sinh học như các nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học Hướng dẫn của FDA [21] qui định thẩm định phương pháp phân tích với 6 chỉ tiêu và mức chất lượng cần phải đạt Trên thực tế, với các nghiên cứu cho các sản phẩm xuất khẩu vào Mỹ hoặc các nước Châu Âu, phương pháp được thẩm định một cách đầy đủ Nghiên cứu ở một số nước trong giai đoạn mới bắt đầu như Indonexia, Hàn Quốc cũng chưa được thẩm định đầy đủ các chỉ tiêu này

Các chỉ tiêu chính được yêu cầu thẩm định như sau:

Tính chọn lọc – đặc hiệu (Selectivity – Specificity):

Tính chọn lọc hay tính đặc hiệu là khả năng đánh giá một cách rõ ràng chất

cần phân tích khi có mặt các thành phần khác, có thể là tạp chất, hoặc các thành

phần cản trở khác

Nói cách khác tính chọn lọc thể hiện khả năng phương pháp phân tích có khả

năng nhận diện chất cần phân tích và không bị nhầm lẫn bởi các chất khác Do

vậy kết quả thu được trên sắc đồ, (từ mẫu trắng, mẫu thử và mẫu chuẩn pha trong

mẫu trắng), pic của chất cần phân tích phân tách hoàn toàn với các pic tạp

Đường chuẩn và xác định khoảng tuyến tính (Linearity):

Đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa đáp ứng của pic và nồng độ

thuốc trong dịch sinh học Mối quan hệ này phải được đánh giá bằng phương trình

hồi quy, thu được từ phương pháp phân tích hồi quy

Khoảng tuyến tính là khoảng nồng độ từ thấp nhất đến cao nhất trong một

đường chuẩn có đáp ứng tuyến tính Đường chuẩn phải có ít nhất 5 nồng độ của

chất chuẩn pha trong cùng một mẫu dịch sinh học Khoảng tuyến tính phải bao

gồm toàn bộ khoảng nồng độ của các mẫu cần phân tích

Giới hạn định lượng dưới (LLOQ):

Mẫu chuẩn có nồng độ thấp nhất trên đường chuẩn được chấp nhận là LLOQ

nếu thỏa mãn:

- Đáp ứng ở nồng độ này phải ≥ 5 lần đáp ứng của mẫu trắng

- Pic của chất cần phân tích có thể nhận biết, nằm tách riêng và có thể tái lập

với độ đúng từ 80-120%

Độ đúng (Accuracy):

Độ đúng của một phương pháp phân tích là giá trị phản ánh độ gần sát của kết

quả phân tích với giá trị thực của mẫu đã biết

Hầu hết các phép đo trong phân tích về bản chất đều mang tính tương đối, có

nghĩa là kết quả thu được đều dựa vào việc so sánh đáp ứng của mẫu thử so với

chất chuẩn tin cậy

Độ chính xác (Precision):

Độ chính xác của một phương pháp phân tích là mức độ thống nhất giữa các

kết quả riêng biệt khi qui trình phân tích được áp dụng lặp đi lặp lại nhiều lần trên

cùng một mẫu đồng nhất Độ chính xác được biểu thị bằng được biểu thị bằng giá

trị CV (%)

Độ ổn định của chất phân tích (Stability of the samples):

Để đánh giá độ ổn định, người ta so sánh kết quả phân tích mẫu bảo quản với

các mẫu mới chuẩn bị Kết quả so sánh được đánh giá theo thống kê dựa trên độ

tin cậy áp dụng trong đánh giá sinh học

Độ ổn định của chất phân tích trong dịch sinh học gồm

+ Độ ổn định sau 3 chu kỳ để đông – rã đông

+ Độ ổn định thời gian ngắn ở nhiệt độ phòng đối với dung dịch mẫu thử sau

khi đã chiết tách

+ Độ ổn định thời gian dài để đông lạnh của mẫu thử trong thời gian dự định

Ngoài những chỉ tiêu trên, một số chỉ tiêu khác cũng cần phải nghiên cứu và xác định trước khi phân tích mẫu như hiệu suất chiết (khả năng thu hồi chất phân tích), đánh giá về tính thích hợp của thiết bị, khả năng lặp lại giữa các phòng thí nghiệm khác nhau (repeatibility), nếu trường hợp thực hiện mẫu phân tích ở các phòng thí nghiệm khác nhau, khác với phòng thí nghiệm đã thẩm định phương pháp

2.4 Yêu cầu về hoạt động và cơ sở vật chất

Nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học là những nghiên cứu thực hiện trên người Giai đoạn lâm sàng (uống thuốc và lấy mẫu) phải tuân thử các qui định về thực hành tốt lâm sàng và các nguyên tắc về đạo đức trong nghiên cứu Đề cương nghiên cứu phải được xem xét và phê duyệt bởi một Hội đồng đạo đức Phòng thí nghiệm phân tích phải hoạt động theo nguyên tắc thực hành tốt phòng thí nghiệm

Từ năm 2002, Bộ Y tế đã có qui chế cho việc thành lập và hoạt động của Hội đồng đạo đức, có hội đồng đạo đức cấp bộ và các cơ sở nghiên cứu cũng đã có hội đồng cấp cơ sở Cho tới nay, Bộ Y tế vừa mới ban hành Hướng dẫn GCP, và chưa thực hiện được việc xem xét đánh giá cho các cơ sở nghiên cứu theo chuẩn mực GCP Chính vì vậy, chưa có đơn vị nào được cấp chứng chỉ GCP, cũng như chưa

có phòng xét nghiệm nào đạt yêu cầu về GLP Viện Kiểm nghiệm thuốc TW và Viện Kiểm nghiệm thuốc TP Hồ Chí Minh là những đơn vị đã hoạt động theo các nguyên tắc GLP từ nhiều năm Do vậy, về mặt phân tích có thể đáp ứng yêu cầu Tuy nhiên, việc tuân thủ yêu cầu GLP của các phòng thí nghiệm Việt Nam trong phân tích, đặc biệt trong nghiên cứu cũng còn chưa thật hòan chỉnh Hai Trung tâm đánh giá TĐSH mới được thành lập, nên chưa có đủ các SOP cho tất cả các hoạt động nghiên cứu

3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Nghiên cứu thực nghiệm

- Nội chuẩn propylparaben (hóa chất) có hàm lượng 99,7; độ ẩm 0,9%

Dung môi, hoá chất:

- Acetonitril, methanol, dicloromethan loại dùng cho HPLC - Merck

- Isopropanol, n - hexan và các hoá chất, dung môi khác đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích (P.A.) dùng trong chiết tách và sắc ký

Huyết tương: dùng huyết tương trắng của người, mua tại Viện Huyết học và

Truyền máu Trung ương

Thiết bị: đã được hiệu chuẩn theo qui định, đáp ứng yêu cầu ISO 17025 và GLP

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC SHIMADZU detector UV và huỳnh quang

- Các thiết bị: máy ly tâm lạnh, máy lắc, tủ bảo quản mẫu ở - 40oC và các loại dụng cụ thuỷ tinh có độ chính xác thích hợp

- Cột sắc ký: RP18 (250mm x 4mm, 5µm)

3.1.2 Thuốc nghiên cứu

- Thuốc phóng thích kéo dài:

Bảng 3.1.Thông tin mẫu thuốc phóng thích kéo dài dùng trong nghiên cứu thực nghiệm

Tên thuốc Viên nén Nifedipin

Hasan 20 retard (viên

nén Nifedipin 20mg phóng thích kéo dài)

Nifehexal retard (Viên nén

nifedipin 20mg phóng thích kéo dài)

Số kiểm soát, hạn dùng Số lô; 0070506, hạn dùng

05/2008

Số lô 530K83, NSX:

300605, Hạn dùng 051005/2008 Nơi sản xuất

Địa chỉ

Công ty TNHH Ha San, địa chỉ: Đường số 2, khu công nghiệp Đồng An,

Hexal AG, Germany SĐK tại Việt Nam: VN 8170 -04

là sản phẩm đang lưu hành

Thuận An, Tỉnh Bình Dương

trên thị trường

Số đăng ký ở Việt Nam VN 8170 -04

Mô tả Chế phẩm dưới dạng viên

nén màu đỏ hồng, hai mặt trơn, hơi lồi Đóng gói 10 viên/ vỉ nhôm – PVC, 10

vỉ đựng trong hộp carton

có in nhãn kèm theo tờ hướng dẫn sử dụng bằng tiếng việt Nhãn đánh máy ghi tên thuốc, hàm lượng, tên nhà sản xuất, địa chỉ,

số kiểm soát

Chế phẩm dưới dạng viên

nén màu đỏ nhạt, hai mặt trơn, lồi Đóng gói 10 viên/

vỉ nhôm - PVC, 3 vỉ/ hộp carton có in nhãn ghi các thông tin tương tự ở mẫu thuốc thử kèm theo tờ hướng dẫn sử dụng bằng tiếng việt

- Thuốc phóng thích ngay (thuốc qui ước):

Bảng 3.2.Thông tin mẫu thuốc phóng thích ngay dùng trong nghiên cứu thực nghiệm

Tên thuốc Dorosi

(Viên nén bao phim Rosiglitazone maleat, tương ứng Rosiglitazone 4 mg)

Avandia

(Viên nén bao phim Rosiglitazone maleat, tương ứng Rosiglitazone 4 mg)

Số kiểm soát, hạn

dùng

SKS: 010206; Ngày sản xuất: 010206;

Hạn dùng: 02-2008

SKS: 12656A59; Ngày sản xuất: 22/05/06;

Hạn dùng: 05/2008 Nơi sản xuất

Địa chỉ

Công ty cổ phần xuất nhập khẩu y tế Domesco

Glaxo SmithKline

7 viên/ vỉ x 1 vỉ trong hộp carton Nhãn trên hộp ghi tên thuốc, hàm lượng, nơi sản xuất, số lô, ngày sản xuất và hạn dùng

Viên nén bao phim màu hồng gạch, hình 5 cạnh, tròn ở 2 góc kề nhau; một mặt viên có gạch ngang và

số 4, mặt kia có gạch ngang

và chữ SB Đóng gói vỉ x 7 viên/ hộp carton Nhãn trên hộp ghi tên thuốc, hàm lượng, nơi sản xuất, số lô, ngày sản xuất và hạn dùng

3.1.3 Thiết kế nghiên cứu

Thiết kế nghiên cứu: Thiết kế chéo, 2 thuốc, 2 giai đoạn, đơn liều, trong tình trạng

đói Thời gian nghỉ giữa 2 giai đoạn là 7 ngày

Số lượng người tình nguyện:

Cả hai thuốc đều tiến hành thử nghiệm thăm dò thực hiện trên 3 người tình nguyện, để khảo sát khoảng nồng độ thuốc và điều chỉnh thời gian lấy mẫu phù hợp

- Thuốc phóng thích kéo dài (Nifedipin): 12 NTN đã tuyển chọn đạt yêu cầu

- Thuốc phóng thích nhanh (Rosiglitazon): 24 NTN đã tuyển chọn đạt yêu cầu

Ngẫu nhiên hóa (bố trí uống thuốc):

Cả hai nghiên cứu đều bố trí uống thuốc bằng cách cho người tình nguyện bốc thăm ngẫu nhiên để xác định thứ tự phân nhóm hoặc xác định loại thuốc sẽ uống trong giai đoạn 1

Theo thiết kế chéo, mỗi người tình nguyện sẽ uống cả 2 loại thuốc Nếu uống thuốc A trong giai đoạn 1, thì uống thuốc B trong giai đoạn 2 và ngược lại

3.1.4 Đảm bảo các nguyên tắc đạo đức trong nghiên cứu

Theo hướng dẫn thực hành tốt lâm sàng (GCP) và các quy định về đạo đức trong nghiên cứu y sinh học, cả 2 nghiên cứu thực nghiệm đều được Hội đồng đạo đức cơ sở của Viện Kiểm nghiệm thuốc TW xem xét đề cương chi tiết và thông qua

- Nghiên cứu Nifedipin: Phiếu chấp thuận số 07/ HĐĐĐ ngày 08/09/2006

- Nghiên cứu Rosiglitazon: Phiếu chấp thuận số 08/HĐ- ĐĐ ngày 07 tháng 12 năm 2007

Tất cả người tình nguyện khi tham gia nghiên cứu đều phải được thông báo chi tiết về nội dung và phương pháp cho uống thuốc, lấy mẫu NTN ký bản cam kết tham gia nghiên cứu một cách hoàn toàn tự nguyện Quá trình đăng ký, tuyển chọn đều phải có kế hoạch, phân công cụ thể và tuân thủ theo đúng các phương pháp đã nêu trong đề cương

3.1.5 Người tình nguyện

Nguồn gốc: Tuyển chọn NTN là sinh viên của các trường đại học và một số người

đang làm việc trong khu vực Hà Nội

Tiêu chuẩn chấp nhận:

- Tiêu chuẩn chung: nam giới khoẻ mạnh, tuổi 18 – 55 Chỉ số BMI về cân nặng và chiều cao phải trong khoảng từ 18 – 25kg/m2, theo cách tính chiều cao, cân nặng của Metropolitan Index 1983 cho người lớn;

- Đánh giá chung về tình hình sức khoẻ, khám tổng quát về tim mạch, tiêu hoá, thần kinh, chiều cao, cân nặng, huyết áp, nhịp thở, tất cả phải trong giới hạn bình thường;

- Các chỉ số xét nghiệm máu đều phải trong giới hạn bình thường Xét nghiệm bao gồm: hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, hemoglobin, hematocrit; Sinh hoá lâm sàng: AST(GOT), ALT(GPT), creatinine, glucose;

- Xét nghiệm (bằng test thử nhanh) kháng thể HIV và kháng nguyên viêm gan B phải âm tính

Tiêu chuẩn loại trừ:

- NTN nghiện ma tuý, rượu hoặc thuốc lá;

- Người đang có những rối loạn về tim mạch, hô hấp, thận, tiêu hóa, miễn dịch, huyết học, nội tiết, hệ thần kinh hoặc bệnh tâm thần ;

- Người có các giá trị xét nghiệm nằm ngoài khoảng bình thường ;

- Người nghi ngờ có nhiễm HIV và HbsAg (dương tính với phép thử nhanh)

- Người có tiền sử dị ứng với thuốc nghiên cứu hoặc các thuốc cùng nhóm;

- Người mới bị ốm trong vòng 2 tuần trước khi uống thuốc giai đoạn I;

- Người đã dùng bất kỳ một loại thuốc nào gây cảm ứng hoặc ức chế chuyển hoá thuốc ở gan trong vòng 28 ngày trước khi uống thuốc giai đoạn I;

Qui trình kiểm tra NTN khi tuyển chọn: Tuyển chọn và kiểm tra NTN theo các chỉ

tiêu trên trong vòng 2 tuần trước khi bắt đầu uống thuốc giai đoạn 1

3.1.6 Phương pháp cho uống thuốc và lấy mẫu

Liều dùng, cách dùng: mỗi giai đoạn, mỗi NTN sẽ uống 1 viên thuốc thử hoặc

thuốc đối chứng vào buổi sáng với 200ml nước tinh khiết

Vào ngày lấy mẫu, NTN tập trung tại khu vực lấy mẫu từ tối hôm trước Bữa tối trước ngày lấy mẫu máu, NTN chỉ được ăn nhẹ và ăn trước 10 giờ đêm, nước uống theo nhu cầu Trước khi uống thuốc, NTN được khám lâm sàng, kiểm tra huyết áp, tim mạch, nhịp thở để đảm bảo họ đang trong tình trạng khỏe mạnh Trong vòng 1 giờ trước và sau khi uống thuốc, NTN không được uống nước Bữa

ăn được thực hiện 4 giờ sau khi uống thuốc Khẩu phần ăn được qui định bởi nhóm nghiên cứu và đồng nhất giữa các NTN Trong suốt thời gian tiến hành lấy máu, NTN chỉ được uống nước tinh khiết, không được uống sữa, nước chè, cà phê, coca hoặc bất kỳ một loại nước tăng lực nào

Cách lấy máu: Dùng kim vô khuẩn luồn vào tĩnh mạch cẳng tay của mỗi NTN và

cố định sao cho không cản trở các hoạt động bình thường của cẳng tay Lấy máu bằng bơm tiêm rồi cho vào các ống nghiệm đã có sẵn chất chống đông (EDTA, 10mg/ ống)

Thời điểm lấy mẫu:

- Nifedipin: trước lúc uống thuốc (0 giờ) và các thời điểm (giờ) sau khi uống thuốc như sau:

0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4 6 8 12

- Rosiglitazon: trước lúc uống thuốc (0 giờ) và tại các thời điểm (giờ) sau khi uống thuốc

0,25 0,5 0,75 1,0 1,25 1,5 2 3 4 6 8 12 Mỗi lần lấy khoảng 6 ml máu Các mẫu máu được ly tâm, tách lấy phần huyết tương Huyết tương được bảo quản ở - 40°C cho đến khi tiến hành phân tích

Quá trình cho uống thuốc và lấy mẫu máu được thực hiện tại phòng lấy mẫu đặt tại Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, 48 – Hai Bà Trưng, Hà Nội Các bác sĩ,

y tá của Bệnh viện Bạch Mai cùng phối hợp theo dõi, giám sát và chăm sóc y tế cho NTN Phương tiện và thuốc cấp cứu cho các phản ứng sốc phản vệ và phản ứng bất lợi được chuẩn bị sẵn sàng để sơ cứu tại chỗ Trường hợp nặng sẽ được gửi tới phòng cấp cứu, BV Việt nam – Cuba, 37 – Hai Bà Trưng hoặc chuyển tới

Bệnh viện Bạch Mai Quá trình lấy mẫu tuân thủ theo Hướng dẫn thực hành lâm sàng tốt (GCP) của Tổ chức Y tế thế giới

tỷ lệ pha động thích hợp để cho khả năng tách tốt nhất

Thẩm định phương pháp

Thẩm định phương pháp phân tích theo các chỉ tiêu qui định của dược điển

và hướng dẫn về thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học của US – FDA, bao gồm tính đặc hiệu, đường chuẩn và khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới (LLOQ), độ chính xác, độ ổn định của chất cần nghiên cứu trong huyết tương khi bảo quản (sau 3 chu kỳ đông - rã đông và bảo quản dài ngày),

độ ổn định của dung dịch chuẩn gốc và nội chuẩn gốc trong ngày và thời gian dài

Tuy nhiên, với nghiên cứu chế phẩm Nifedipin, thực hiện năm 2006, phương pháp phân tích chưa được thẩm định một cách đầy đủ các chỉ tiêu như theo qui định trong hướng dẫn của FDA, ví dụ như đánh giá độ ổn định chưa hết các điều kiện thực hiện nghiên cứu (3 chu kỳ đông – rã đông)

Nghiên cứu Rosiglitazon thực hiện vào năm 2007, khi Trung tâm TĐSH đã được thành lập, một số hoạt động nghiên cứu đã dần được chuẩn hóa, do vậy các chỉ tiêu thẩm định đã được thực hiện một cách khá hoàn chỉnh

2

n i

i i i

t R

T

CI = ln( ) ± ( 0 , 1 ; ' ) 2 ×

3.1.8 Phân tích mẫu huyết tương NTN sau khi uống thuốc

Sử dụng phương pháp phân tích đã được thẩm định để định lượng các mẫu huyết tương NTN sau khi uống thuốc

Khi phân tích, huyết tương được lấy ra khỏi tủ bảo quản và để tan chảy ở nhiệt độ phòng Tiến hành phân tích ngay sau khi để tan chảy Mẫu huyết tương của mỗi NTN (bao gồm cả thuốc thử và thuốc đối chứng được phân tích trong cùng 1 ngày với cùng một đường chuẩn và điều kiện phân tích

3.1.9 Xác định các thông số dược động học và đánh giá tương đương sinh học

Xác định thông số dược động học

Thông số dược động học của từng NTN được xác định bao gồm:

- Nồng độ thuốc tối đa (Cmax) và thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa (Tmax): xác định trực tiếp trên giá trị đo được

- Diện tích dưới đường cong (AUC0 – t; AUC0 – ∞): xác định bằng phương pháp hình thang theo biểu thức sau:

Với Ci là nồng độ thuốc tại thời điểm lấy mẫu ti

Ngoại suy giá trị AUC0-∞ theo biểu thức:

Tính thống kê và đánh giá tương đương sinh học:

Theo các hướng dẫn và qui định của US - FDA:

- Phân tích phương sai, xác định khoảng tin cậy 90% (CI) của các giá trị

tỷ lệ LnCmax và LnAUC0 – ∞ trung bình giữa thuốc thử và thuốc đối chứng:

Trong đó: T: Giá trị Cmax hoặc AUC 0-∞ của thuốc thử

R: Giá trị Cmax hoặc AUC 0-∞ của thuốc chứng N’: Bậc tự do của sai số xác định bằng ANOVA MSE: Trung bình bình phương của sai số xác định bằng ANOVA

- So sánh giá trị Tmax được tính theo phương pháp phân tích phi tham số

của Wilcoxon (Wilcoxon signed – rank test) Giá trị Tmax của thuốc

thử và thuốc chứng khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) khi

tổng thứ tự xếp hạng dương hoặc âm (sum of possitive/negative rank)

lớn hơn giá trị tra bảng với cỡ mẫu n (n là số lượng cặp giá trị Tmax thuốc thử và thuốc chứng khác nhau) Kết quả đánh giá Tmax có thể chỉ mang tính chất thông tin và không căn cứ để so sánh đánh giá TĐSH Hai chế phẩm tương đương sinh học nếu khoảng tin cậy 90% của tỷ lệ Cmax và AUC0–∞ trung bình nằm trong khoảng 80 – 125 %, tính thống kê với giá trị đã chuyển đổi logarit của thuốc thử so với thuốc đối chứng

Loại bỏ số liệu NTN khi phân tích, đánh giá:

Không dùng mẫu của NTN vào phân tích nếu:

- NTN rút lui trong quá trình nghiên cứu, không tham gia hết các giai đoạn

- Trong hoặc sau khi nghiên cứu, phát hiện thấy NTN không tuân thủ những qui định của nghiên cứu

- NTN bị nôn hoặc ỉa chảy trong vòng 2 giờ sau khi uống thuốc hoặc có các phản ứng bất lợi nghiêm trọng trong khi uống thuốc và lấy mẫu

- Số các mẫu máu lấy bị mất ≥ 4 điểm

Không dùng số liệu của NTN vào tính thống kê nếu:

Mất ≥ 2 điểm lấy mẫu liên tiếp trong pha hấp thu hoặc xung quanh Tmax;

3.2 Nghiên cứu xây dựng Hướng dẫn

3.2.1 Phân tích tài liệu tham khảo

Tập hợp các tài liệu tham khảo trong và ngoài nước, phân loại tài liệu thành các nhóm để phân tích và tham khảo thông tin

Phân nhóm tài liệu tham khảo theo tổ chức, địa lý:

- Tài liệu của các khu vực, tổ chức: ASEAN, Châu Âu, ICH, WHO

- Tài liệu của các quốc gia: Malaysia, Trung Quốc, Úc, Mỹ

Phân nhóm tài liệu theo thông tin hướng dẫn:

- Tài liệu hướng dẫn chung

- Tài liệu hướng dẫn kỹ thuật

Phân tích các tài liệu theo nhóm để xác định các thông tin chung, phù hợp với điều kiện của Việt Nam

3.2.2 Dự thảo hướng dẫn

- Tổng hợp các dữ liệu phân tích từ phân phân tích tài liệu tham khảo (3.2.1) và những kinh nghiệm thông qua nghiên cứu thực nghiệm để Dự thảo hướng dẫn

- Sử dụng bố cục cơ bản theo Hướng dẫn của ASEAN để xây dựng hướng dẫn của Việt Nam

- Theo dõi và cập nhật thông tin từ các hoạt động của Ban Tư vấn về tiêu chuẩn và chất lượng ASEAN (qua báo cáo các kỳ họp thường niên) để điều chỉnh, thay đổi phù hợp

- Xem xét kinh nghiệm từ các nghiên cứu trong nước cũng như của các nước khác

3.2.3 Lấy ý kiến chuyên gia

- Bản thảo lần 1 sẽ được gửi lấy ý kiến các chuyên gia đầu ngành về dược

và tương đương sinh học

- Tổ chức hội thảo để thảo luận trực tiếp giữa các chuyên gia quản lý, kỹ thuật, một số doanh nghiệp và cán bộ có quan tâm

- Đăng một số nội dung trên tạp chí chuyên ngành để lấy ý kiến bạn đọc trong ngành

3.2.4 Hoàn thiện bản thảo

Tập hợp các ý kiến góp ý Hoàn thiện bản thảo để nghiệm thu

3.2.5 Xây dựng qui trình đánh giá tương đương sinh học cho 2 chế phẩm

Dựa trên các kết quả thực nghiệm và các hướng dẫn kỹ thuật, xây dựng qui trình đánh giá TĐSH cho 2 loại chế phẩm có chứa Nifedipin 20mg và

Rosiglitazon 4mg

4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

4.1 Kết quả nghiên cứu thực nghiệm

4.1.1 Đánh giá tương đương sinh học chế phẩm phóng thích kéo dài

4.1.1.1 Phương pháp phân tích

Nghiên cứu chiết tách Nifedipin từ huyết tương bằng phương pháp chiết lỏng - lỏng với hỗn hợp dung môi chiết là n- hexan và dicloromethan Sử dụng Diazepam làm chuẩn nội

Định lượng nifedipin trong dịch chiết bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao, dùng chuẩn nội diazepam Điều kiện sắc ký như sau:

- Có sự tương quan tuyến tính giữa nồng độ Nifedipin với tỷ lệ diện tích pic của Nifedipin/ diazepam Khoảng nồng độ tuyến tính xác định được từ 5,0- 100,0 ng/ml, hệ số tương quan tuyến tính với giá trị r2 = 0,9992 Khoảng tuyến tính phù hợp để định lượng nồng độ Nifedipin trong huyết tương

- Giới hạn định lượng dưới (LLOQ): 5ng/mL

- Độ đúng và độ chính xác của phương pháp được thực hiện ở 2 nồng độ: nồng độ thấp (khoảng 10ng/ml) và nồng độ cao (khoảng 50ng/ml)

- Mẫu huyết tương ổn định khi bảo quản ở nhiệt độ - 40oC trong thời gian

102,8 100,1

Độ lặp lại (CV%*):

- Trong ngày

- Khác ngày

8,56 13,36

2,48 6,80

4.1.1.2 Kết quả giai đoạn lâm sàng

Tiến hành cho uống thuốc và lấy mẫu theo phương pháp đã nêu trong phần

phương pháp (3.1.6)

Người tình nguyện tự bốc thăm để xác định số thứ tự của mỗi người, và phân nhóm theo thứ tự đã xếp Người có số thứ tự từ 1 – 6 sẽ thuộc nhóm 1, uống thuốc theo thứ tự A-B, ngược lại những người có số thứ tự từ 7 - 12 sẽ thuộc nhóm 2, uống thuốc theo thứ tự B-A

Bảng 4.2: Thời gian và bố trí cho NTN uống thuốc Nifedipin

Thời gian (NTN số 1 – 6) Nhóm 1 (NTN số 7 – 12) Nhóm 2 Giai đoạn 1

Ngày 16 - 17/9/2006 Thuốc thử Thuốc chứng

Giai đoạn 1 Ngày 23– 24/ 9/ 2006 Thuốc chứng Thuốc thử

Cả 2 giai đoạn, tất cả người tình nguyện đều tham gia đầy đủ và được uống thuốc theo đúng thiết kế nghiên cứu Trong quá trình uống thuốc và lấy mẫu, có 1 trường hợp NTN số 12 cảm thấy khó chịu, đau đầu nhẹ sau khi dùng thuốc ở cả 2 giai đoạn Cảm giác khó chịu xảy ra trong khoảng 3 – 4 giờ, sau đó NTN bình thường, không phải dùng thuốc điều trị Ngoài ra, các trường hợp còn lại đều bình thường

Các mẫu máu sau khi lấy được tách lấy phần huyết tương, bảo quản ở – 400C chờ đến khi phân tích

4.1.1.3 Kết quả phân tích, thống kê, đánh giá tương đương sinh học

Ngay sau khi kết thúc lấy mẫu giai đoạn 2, tiến hành phân tích theo qui trình đã được thẩm định Quá trình phân tích kéo dài tử ngày 27/ 9/ 2006 đến ngày 16/ 10/ 2006

Kết quả nồng độ thuốc trung bình được trình bày trong bảng 4.2 và đường cong nồng độ Nifedipin trung bình trong máu theo thời gian được biểu thị trên hình 4.1

Bảng 4.3 Nồng độ thuốc trung bình – thời gian (ng/ml), n= 12

Nồng độ thuốc trung bình – thời gian (ng/ml)

Đường cong nồng độ thuốc trung bình- thời gian

n = 12

0 10

So sánh (Khoảng tin cậy 90% thử/ chứng) Cmax (ng/ml) 65 ± 17 65 ± 9 86,8 % - 112,1% AUC0-∞

(ng.giờ/ml)

363 ± 127 342 ± 91 88,3% - 121,9%

Tmax (giờ) 2,3 ± 0,7 2,5 ± 0,5 Khác nhau không có ý

nghĩa (PP phi tham số)

4.1.2 Đánh giá tương đương sinh học chế phẩm phóng thích ngay

4.1.2.1 Phương pháp phân tích

Qui trình phân tích:

Mẫu huyết tương để rã đông ở nhiệt độ phòng Ngay sau khi rã đông, lấy 1ml huyết tương, thêm 50µl nội chuẩn, tủa protein bằng acetonitril Lắc, ly tâm lấy lớp

dịch nổi Thêm dichloromethan lắc xoáy, lấy lớp dung môi bốc hơi dưới dòng khí

N2 ở 50oC, thu cắn hòa tan trong methanol, tiêm sắc ký

Điều kiện sắc ký:

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Shimadzu

- Cột : Rp18 (250 mm x 4,6 mm, 5 µm), có bảo vệ cột Rp18 (4 x 3 mm, 5 µm) Nhiệt độ cột: 400C

- Pha động: Đệm acetat pH5,0 - MeOH, tỷ lệ thích hợp

- Tốc độ dòng: khoảng 1 ml/ phút

- Thể tích tiêm mẫu: 50 µL

- Detector huỳnh quang, Ex = 247nm ; Em = 367 nm

- Chất đối chiếu Rosiglitazone maleat: SKS: 0107219 của Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, hàm lượng: 98,98 % (tính theo khan), độ ẩm: 0,39 % Nội chuẩn propylparaben (hóa chất) có hàm lượng 99,7; độ ẩm 0,9%

Phương pháp phân tích đã được thẩm định, kết quả thẩm định được tóm tắt như sau:

- Có tính chọn lọc với Rosiglitazon

- Có sự tương quan tuyến tính giữa nồng độ Rosiglitazon với tỷ lệ diện pic của Rosiglitazon và nội chuẩn Propylparaben Khoảng nồng độ tuyến tính: 0,012 mcg/mL – 0,465 mcg/mL, hệ số tương quan tuyến tính: r ≥ 0,98

- Giới hạn định lượng dưới (LLOQ): 0,012 mcg/mL

- Độ đúng và độ chính xác của phương pháp, hiệu suất chiết được thực hiện ở 3 nồng độ: nồng độ thấp (LQC), nồng độ trung bình (MQC) và nồng độ cao (HQC) Kết quả tóm tắt trong bảng 1

- Mẫu huyết tương ổn định khi bảo quản ở nhiệt độ - 40oC trong thời gian

102,4 99,8

104,3 100,9

Độ lặp lại (CV%*):

- Trong ngày

- Khác ngày

7,6 8,7

4,9 8,5

6,3 8,2 Hiệu suất chiết (%) 89,9 84,4

4.1.2.2 Kết quả giai đoạn lâm sàng

Tiến hành cho uống thuốc và lấy mẫu theo phương pháp đã nêu trong phần

phương pháp (3.1.6)

Người tình nguyện tự bốc thăm để xác định loại thuốc sẽ uống trong giai đoạn 1, giai đoạn 2 sẽ được uống thuốc ngược lại Những người uống thuốc theo thứ tự A-B vào nhóm 1; ngược lại, người uống thuốc theo thứ tự B-A được xếp vào nhóm 2

Bảng 4.6: Thời gian và bố trí cho NTN uống thuốc Rosiglitazon

Người tình nguyện Giai đoạn

Các mẫu máu sau khi lấy được tách lấy phần huyết tương, bảo quản ở – 400C chờ đến khi phân tích

4.1.2.3 Kết quả phân tích, thống kê, đánh giá tương đương sinh học

Ngay sau khi kết thúc lấy mẫu giai đoạn 2, tiến hành phân tích theo qui trình đã được thẩm định Quá trình phân tích kéo dài từ ngày 18/12/2007 đến 12/01/2008 Kết quả nồng độ thuốc trung bình được trình bày trong bảng 4.6 và đường cong nồng độ Rosiglitazon trung bình trong máu được biểu thị trên hình 4.2

Đường cong nồng độ thuốc trung bình - thời gian

(n = 24)

0 50 100 150 200 250 300 350 400

Bảng 4.7 Nồng độ thuốc trung bình – thời gian (ng/ml) sau khi uống rosiglitazon

Nồng độ thuốc trung bình – thời gian, n = 24 (ng/ml)

* T = thuốc thử (Dorosi) ; R = thuốc chứng (Avandia)

Hình 4.2 Đường cong trung bình nồng độ thuốc – thời gian của 24 NTN sau

khi uống rosiglitazon 4mg

Bảng 4.8: Thông số dược động học trung bình sau khi uống Rosiglitazon, n = 24

(TB ± SD)

Thông số Thuốc thử

(Dorosi)

Thuốc chứng (Avandia)

So sánh (Khoảng tin cậy 90%

thử/ chứng) Cmax (ng/ml) 399 ± 18 403 ± 17 92,4% - 105,6%

4.2 Phân tích các tài liệu tham khảo

Tương đương sinh học được sử dụng để chỉ các sản phẩm cùng dạng bào chế, chứa một lượng dược chất như nhau mà có sinh khả dụng tương tự trong cùng điều kiện thử nghiệm Trên thế giới, đánh giá SKD và TĐSH đã được thực hiện từ nhiều thập kỷ trước ở các nước có nền công nghiệp dược phát triển như

Mỹ, Úc, Châu Âu, Canada và một số nước trong khu vực Tùy từng quốc gia, các hướng dẫn có thể được ban hành dưới dạng khác nhau, bao gồm các hướng dẫn chung hay các qui định khi cấp phép lưu hành thuốc hoặc các hướng dẫn chi tiết

về kỹ thuật Sau đây, chúng tôi tóm tắt tình trạng ban hành hướng dẫn và nội dung của một số nước hoặc khu vực đã được tham khảo chính để xây dựng Bản thảo Hướng dẫn cho Việt Nam

4.2.1 Hướng dẫn của ASEAN

Trong quá trình triển khai hội nhập kinh tế của các nước khối ASEAN, Ủy ban tư vấn về tiêu chuẩn và chất lượng của ASEAN (ASEAN Consultative Committee for Standard and Quality - ACCSQ) đã có nhiều cuộc họp thường niên

để bàn về việc thống nhất các tiêu chí hoà hợp Trong quá trình này, nhóm công

tác về Dược phẩm đã xây dựng bản “Hướng dẫn thực hiện đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học của thuốc” để áp dụng chung trong khối [16] Theo

chúng tôi xem xét, hướng dẫn của ASEAN có bố cục và nội dung tương tự của Châu Âu Bản dự thảo lần đầu từ năm 2003 đã được gửi tới các quốc gia thành viên để xem xét và góp ý, nhằm sửa đổi những điểm chưa phù hợp với hoàn cảnh của các nước đang phát triển Tuy nhiên, để đi đến bản thảo cuối cùng, có thể áp dụng triển khai Hướng dẫn này, các cuộc họp thường niên từ năm 2004 đến nay vẫn tiếp tục thảo luận, mỗi kỳ họp thống nhất được một số vấn đề liên quan tới nghiên cứu Cuộc họp lần thứ 13 tại Malaysia và 14 tại Viên Chăn (2007) đã thảo luận và thống nhất được nguyên tắc lựa chọn thuốc đối chứng cho các nghiên cứu SKD và TĐSH muốn công nhận trong khối ASEAN Dựa trên nguyên tắc theo hướng dẫn của WHO về lựa chọn thuốc đối chứng, cụ thể hóa hơn một số tình huống có thể gặp Cuộc họp lần thứ 15 tại Brunei (2008) đã thảo luận và thống nhất biểu mẫu báo cáo kết quả đánh giá tương đương sinh học khi xin cấp phép lưu hành Bên cạnh việc góp ý để hoàn thiện bản thảo, chương trình mỗi kỳ họp cũng đã thảo luận các vấn đề liên quan dưới dạng câu hỏi và giải đáp (Questions and Answers), nhằm tạo cơ hội cho các nước thành viên trao đổi học hỏi lẫn nhau trong tiến trình triển khai áp dụng Cuộc họp lần thứ 15 cũng đã thống nhất chấp nhận các nghiên cứu tuân thủ nguyên tắc về GCP (ICH E6) và bất kỳ một GLP nào phù hợp Tiêu chí cụ thể cho các cơ sở nghiên cứu cũng như việc thanh tra đánh giá công nhận các cơ sở sẽ được thảo luận và thống nhất trong kỳ họp tới lần thứ 16 tại Philipin Mọi thông tin được trao đổi qua thư từ, thảo luận và biên bản các kỳ họp Cho tới nay, bản hướng dẫn chưa được ban hành chính thức dưới hình thức văn bản nào

Đánh giá tính khả thi của hướng dẫn ASEAN: Xem xét nội dung và tình trạng ban

hành như đã nêu ở trên cho thấy Bản hướng dẫn ASEAN đã đề cập tới hầu hết các nội dung liên quan tới nghiên cứu, nhưng đều là những hướng dẫn chung Những qui định cụ thể hoặc hướng dẫn mang tính kỹ thuật không được đề cập đến Cuộc