- Ế Đánh giá chát lượng nguyên liệu terazosin hydroclorid tổng htfp tai Viêt Nam Nguyễn Hải Nam, Nguyễn Thị Kiều Anh, Ngô Quang Trung, Nguyễn Thị Huyền, Đ ỗ Nguyễn Thanh cẩ n * TrẩnThúy H ạnh** Lê Kim D u n g *** *Trường Đợi học Dược Hà Nội, **Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương, *** Cục Quản lý khám chữa bệnh Đặt vấn đề học Dược Hà Nội - Chất đối chiếu: Terazosin hydrochloric! dihydrat - hàm lượng 99,4% - độ ẩm 7,54% (Rohdea - Trung Quốc) - Các hóa chất, dung môi thuộc loại dùng cho sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) tinh khiết phân tích (Merck - Đức) Thiết bị nghiên cứu - Hệ thống HPLC Thermo - Finigan, detector UVDAD 6000 (My) - Hệ thống sắc ký khí CE Instruments SOOOtop detector FID (Ý) - Cân phân tích M etller (Thụy Sĩ) - Máy quang phổ hổng ngoại Perkin - Elmer (Mỹ) -Tủ sấy chân không Shellab (Mỹ) - Máy đo pH Metrohm (Thụy Sĩ) Phương pháp nghiên cứu Theo qui định chuyên luận TZ USP 30, nguyên liệu có 10 tiêu chất lượng Hầu hết tiêu chất lượng nguyên liệu tiến hành theo qui định chuyên luận TZ USP 30, như: tính chất (thử cảm quan), độ màu sắc dung dịch (quan sát mắt), định tính (dùng phổ hổng ngoại, HPLC, phản ứng hóa học), khối lượng làm khô (sấy chân không 105°C),giới hạn 1-[(tetrahỵdro-2-furanỵl)carbonyl] piperazin (TFCP) định lượng (phương pháp HPLC), Nguyên liệu, thiết bị phương pháp nghiên kim loại nặng (phương pháp 2), tro Sulfat Trong đó, cứu có thay đổi điều kiện thử cho phù hợp với điểu kiện Hóa chất - thuốc thử- mẫu thử phân tích so với USP 30 tiêu xác định giới Mẫu thử: Nguyên liệu TZ mẫu TZI, TZII, TZIII hạn acid tetrahydro-2-furancarboxylic (TFA) tổng hợp môn Hóa Dược - Trường Đại phương pháp sắc ký khí nước ta, phẩn lớn nguyên liệu làm thuốc (tân dược) nhập từ nước Công nghiệp hóa dược chưa đáp ứng yêu cẩu nguyên liệu thuốc chữa bệnh cho nhân dân Với mục tiêu góp phẩn tạo nguồn nguyên liệu làm thuốc sản xuất nước thay nguyên liệu nhập khẩu, nhóm nghiên cứu Trường đại học Dược Hà Nội tổng hợp thành công m ột nguyên liệu thuốc chống tăng huyết áp terazosin hydrochloric! (TZ) Terazosin có tác dụng ức chế chọn lọc receptor a1 - adrenergic, dùng điểu trị tăng huyết áp nhẹ vừa, thích hợp với trường hợp tăng huyết áp tâm trương [2], Để nguyên liệu đưa vào sản xuất nhằm tạo dạng bào chế thích hợp, có hiệu điều trị an toàn chất lượng nguyên liệu vấn để quan tâm hàng đắu Dược điển Việt Nam [1] chưa có chuyên luận riêng vể TZ, Dược điển Mỹ (USP) [5], Dược điển Anh [3], Dược điển châu Âu [4] có chuyên luận riêng kiểm nghiệm dược chất Các tiêu chuẩn chất lượng TZ qui định dược điển tương tự Trong báo này, muốn trình bày nghiên cứu triển khai qui trình kiểm nghiệm terazosin hydrochloric! dựa yêu cẩu USP phù hợp với điểu kiện Việt Nam Sỗ1/2011 Nghiên cOu duợc Thòng tin thuõc Kết bàn luận Rà soát điều kiện kiểm nghiệm terazosin hydrochloric! theo USP 30 Các tiêu tính chất, độ màu sác dung dịch, định tính, khối lượng làm khô, kim loại nặng, tro sulfat dễ dàng làm theo hướng dẫn USP 30 Trong phẩn trình bày chi tiết rà soát điểu kiện phân tích sử dụng phương pháp HPLC, sắc ký khí với tiêu giới hạn TFA, giới hạn TFCP định lượng Giới hạn acid tetrahydro-2-furancarboxylic • Điểu kiện sắc kí: - C ộ t: mao quản silica nung chảy 0,32 mm X 30 m, tráng lớp phim dày 0,25 um polyethylene glycol (Innowax), nhiệt độ 170°c - Detector: FID, 250°c - Hệ bơm mẫu: chia dòng (1 :2), thể tích tiêm mẫu 1|j 1; nhiệt độ 240°c - Khí mang: nitơ - Lưu lượng dòng: 1,5 m l/ phút • Chuẩn bị dung dịch: - Mẫu trắng: Pha 2,0 ml dung dịch acid acetic băng vừa đủ 100,0 ml aceton Lấy 5,0 ml dung dịch trộn lẫn với 5,0 ml aceton, lọc qua màng lọc nylon 0,45 |am, màng lọc rửa trước với aceton, bỏ ml dịch lọc đẩu - Dung dịch chuẩn nội: Hòa tan m ột lượng xác khoảng 50 mg naphthalen (IS) 100,0 ml aceton Lấy 10,0 ml dung dịch 2,0 ml dung dịch acid acetic băng cho vào bình định mức 100 ml, thêm aceton vừa đủ đến vạch lắc đểu - Dung dịch chuẩn gốc: Dung dịch TFA aceton nồng độ khoảng 100 ụ q/ ml - Dung dịch chuẩn: chuyển 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc 5,0 ml dung dịch chuẩn nội vào ống ly tâm 50 ml lắc đểu Lọc mẫu trắng - Dung dịch thử: Cân xác khoảng 100 mg mẫu thửTZ, cho vào ống ly tâm 50 ml, thêm 5,0 ml aceton 5,0 ml dung dịch chuẩn nội; lắc khoảng 30 phút Ly tâm 10 phút Lọc mẫu trắng • Đánh giá độ phù hợp hệ thống (SST): Sắc ký mẫu trắng, đo đáp ứng pic: để đảm bảo pic lạ Sắc ký dung dịch chuẩn đo đáp ứng pic: độ lệch chuẩn tương đối (RSD) tỷ số diện tích pic TFA IS lẩn tiêm liên tiếp không lớn 6,5% Kết cho thấy hệ thống phân tích phù hợp yêu cầu qui định với RSD = 1,85% • Tiến hành: Sắc ký dung dịch chuẩn dung dịch thử, ghi lại sắc kí đồ đo diện tích pic Hình sắc ký đồ 10 Nghiên CỨU duộcThông tín thuóc! Số 1/2011 dung dịch mẫu chuẩn mẫu thử, thời gian lưu TFA khoảng 11,00 phút Tính phẩn trăm TFA có mẫu th T Z theo công thức sau: (C/W/10)(Rt/Rc) Trong đó: c nống độ (ng/ml) TFA dung dịch chuẩn w khối lượng (mg) mẫu thửTZ Rt Rc tỉ số diện tích pic TFA IS sắc ký đổ dung dịch thử chuẩn Trong USP 30, yêu cẩu cột sắc ký cột mao quản silica nung chảy 0,53 mm X 10 m, tráng lớp phim dày 1,2 |jm polỵethylen glycol ester hóa acid terephthalic, loại cột gặp phòng phân tích Việt Nam đả khảo sát lựa chọn điểu kiện phân tích với thay đổi thông số cột tách, khí mang chất chuẩn nội Độ phân giải (RS) pic TFA IS lớn (khoảng 29) nên không cẩn th iết phải đưa vào mục đánh giá SST (trong chuyên luận TZ USP 30 yêu cẩu Rs không nhỏ 2,3) Kết thu cho thấy, điểu kiện phân tích đề xuất hoàn toàn phù hợp với yêu cầu cho phép thử Giới hạn 1-[(tetrahydro-2-furanyl) carbonyl] piperazin J Cách chuẩn bị mẫu, điểu kiện sắc ký dẫn USP 30 [5], • Đánh giá SST: Tiến hành sắc kí dung dịch mẫu trắng dung dịch chuẩn dẫn chất hóa điểu kiện ghi đáp ứng pic sắc ký Đảm bảo pic thu từ sắc ký đổ dung dịch mẫu trắng dẫn chất hóa không ảnh hưởng tới kết quả: thời gian lưu (Tr) TFCP không nhỏ 22 phút; hiệu lực cột (N) không nhỏ 3500 đĩa lý thuyết RSD tiêm lặp lán liên tiếp không lớn 3,0% Kết cho thấy hệ thống phân tích phù hợp yêu cầu qui định với Tr khoảng 26,5 phút, N lớn 5600 RSD nhỏ 1,5 % • Tiến hành định lượng; Tiến hành sắc kí dung dịch chuẩn dung dịch thử dẫn chất hóa, ghi diện tích pic Hình sắc ký đổ dung dịch chuẩn thử í Định lượng Cách chuẩn bị mẫu, điểu kiện sắc ký dẫn USP 30 [5], • Đánh giá SST: Tiến hành sắc kí pha động dung dịch chuẩn điều kiện ghi đáp ứng pic sắc ký Đảm bảo pic thu từ sắc ký đổ pha động không ảnh hưởng tới kết Ghi đáp ứng pic TZ, N không nhỏ 12 000 đĩa lý thuyết, hệ số đối xứng (T) nằm khoảng 0,9 - 1,3 RSD tiêm lặp lần liên tiếp không lớn 0,9% diện tích pic Kết cho thấy hệ thống phân tích phù hợp yêu cẩu qui định với N lớn 12900, T khoảng 1,26 -1 ,2 RSD nhỏ 0,1 % Các thông số đánh giá SST yêu cẩu cao so với qui định chuyên luận khác (thông thường yêu cẩu N > 3500, RSD < 2,0%) Để đạt tiêu chuẩn này, phòng phân tích phải có cột tách hiệu lực cao, kiểm nghiệm viên có trình độ «MJ ÍO- E « ' 38atw0-« • ■X25 rs « 75 10 129 15 175 20 29 M Hình 2: Sác đổ dung dịch mỗu chuổn (Q thừ (D) xác định giới hạn TFCP Hàm lượng % TFCP mẫu thử tính theo công thức: _ 25 ì 1Ĩ5 w 175 Hintì ìS đ cđ ă dung dịch màu chuổn (E) vò mâu thử(FÌ ũịnh lượng x% = X 200 Ả ^m ,{ì-N ,) 2500(C/W)(AƯAc) Trong đó: At, Ac diện tích pic TFCP dung dịch thử dung dịch chuẩn dẫn chất hóa c nổng độ (m g/m l) TFCP dung dịch chuẩn w khối lượng (mg) mẫu thử • Tiến hành định lượng: Sắc kí dung dịch thử dung dịch chuẩn, ghi lại sắc đồ dung dịch thử chuẩn Hình sắc ký đồ dung dịch mẫu chuẩn mẫu thử, thời gian lưu TZ khoảng 11,06 phút Hàm lượng % TZ chế phẩm tính theo công thức: Trong đó: At, Ac diện tích pic TZ dung dịch thử chuẩn Số 1/20111 Nghiên CỨU dược Thông tín thuởc 11 mt, mc khối lượng (mg) mẫu thử mẫu chuẩn Cc hàm lượng phẩn tràm chất chuẩn Nt, Nc, lượng nước (%) mẫu thử mẫu chuẩn Tạp chất liên quan Điểu kiện phân tích tương tự định lượng, yêu cẩu phải có chuẩn tạp tạp chất liên quan A, B c với terazosin (Terazosin Related Compound A, B, C) Hội Dược điển Mỹ Việc đặt mua qua công ty thương mại khó khăn, thời gian hàng năm trời với giá cao (khoảng 500 - 1000 USD cho lọ cỡ vài chục miligam chuẩn tạp) Đây khó khăn chung lĩnh vực kiểm nghiệm nghiệm phòng thí nghiệm Việt Nam với kết tin cậy Các tiêu chất lượng bao gồm chi tiêu chung cho nguyên liệu làm thuốc (cảm quan, độ màu sắc dung dịch, tro Sulfat, kim loại nặng, độ ẩm) tiêu riêng cho TZ (định lượng, định tính, giới hạn TFA, giới hạn TFCP) kiểm nghiệm th iế t th iế t bị sẵn có phòng kiểm nghiệm Việt Nam Chất lượng mẫu nguyên liệu TZ tổng hợp trường Đại học Dược Hà Nội đạt theo tiêu chuẩn USP 30 tiêu thử nghiệm đưa vào sản xuất nhằm cung cấp nguyên liệu làm thuốc phục vụ công tác điều trị bệnh cho nhân dân kiểm tra chất lượng nguyên liệu làm thuốc có yêu cẩu tiêu Kết kiểm nghiệm m ột số mẫu nguyên liệu terazosin hydrocloríd Tiến hành kiểm tra chất lượng mẫu nguyên liệu TZ tổng hợp trường Đại học Dược Hà Nội, kết trình bày bảng sau: SUM M ARY:Q uality o f raw m ate ria l-te zo sin hydrochloride - w hich produced at Hanoi University o f Pharmacy was tested based on USP 30 specifications Nine o f ten q u a lity criteria o f terazosin hydrochloride were evaluated by com m on equipm ents at drug q u a lity co n tro l labs in Vietnam such as HPLC, GC, IR, The results ob tained showed th a t q u a lity o f all three samples o f terazosin hydrochloride KẾT QUÀ YẼUCẦU conform ed w ith USP 30 specifications (except related TZI TZII TZIII com pounds critérium due to lack o f im p u rity standard Tính chất: bột kết tinh trắng, không mùi Đạt Đạt Đạt substances) Đô màu sắc dung dịch' Đạt Đạt Đạt Đinh tính: terazosin hydrochlorid Đúng Đúng Đúng Mất khối lương làm khô: < 9,0% Đat 7,25% Đat 7,01% Đat 7,05% Tro: không 0,2% Đat 0,154% Đat 0,1 Ổ5% Đat 0,ĨỔ5% Kim loại nặng: < 0,002% Đạt Đạt Đạt Giới han acid tetrahydro-2fu n carb ũ xylic: ... dân kiểm tra chất lượng nguyên liệu làm thuốc có yêu cẩu tiêu Kết kiểm nghiệm m ột số mẫu nguyên liệu terazosin hydrocloríd Tiến hành kiểm tra chất lượng mẫu nguyên liệu TZ tổng hợp trường Đại... phòng kiểm nghiệm Việt Nam Chất lượng mẫu nguyên liệu TZ tổng hợp trường Đại học Dược Hà Nội đạt theo tiêu chuẩn USP 30 tiêu thử nghiệm đưa vào sản xuất nhằm cung cấp nguyên liệu làm thuốc phục... phẩn tràm chất chuẩn Nt, Nc, lượng nước (%) mẫu thử mẫu chuẩn Tạp chất liên quan Điểu kiện phân tích tương tự định lượng, yêu cẩu phải có chuẩn tạp tạp chất liên quan A, B c với terazosin (Terazosin