Nghiên cứu một số tính chất hóa lý của chất kháng sinh

KHOA KHOA HỌC SỰ SỐNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÍNH CHẤT HÓA LÝ CỦA CHẤT KHÁNG SINH CÓ NGUỒN GỐC TỪ CHỦNG XẠ KHUẨN HT28 CÓ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH: VI SINH VẬT Nội dung Mở đầu Vật liệu phương pháp nghiên cứu Kết thảo luận Kết luận kiến nghị Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề  Chất kháng sinh chất có nguồn gốc thiên nhiên sản phẩm cải biến chúng đường hóa học, có tác dụng chọn lọc phát triển VSV, tế bào ung thư nồng độ thấp  17000 chất có nguồn gốc từ VSV khoảng 30000 CKS bán tổng hợp…  Trong số VSV có khả sinh CKS XK nhóm có tiềm lớn, chiếm tới 80% số CKS mô tả  Hiện tình trạng sử dụng CKS không hợp lý nên xuất nhiều chủng vi khuẩn gây bệnh kháng lại nhiều CKS điều trị  Xuất phát từ thực tiễn chúng em thực đề tài: “Nghiên cứu số tính chất hóa lý chất kháng sinh có nguồn gốc từ chủng xạ khuẩn HT28 có hoạt tính kháng khuẩn” , 1.2 Mục tiêu nghiên cứu  Bước đầu tìm hiểu số tính chất chất kháng sinh chủng xạ khuẩn HT28 1.3 Nội dung nghiên cứu  Xác định HTKS dịch chiết từ sinh khối dịch ngoại bào chủng  Xác định ảnh hưởng pH đến khả khuếch tán CKS  Xác định khả bền pH CKS  Xác định khả bền với nhiệt độ CKS Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu nghiên cứu  Xạ khuẩn: Chủng xạ khuẩn Streptomyces cineveoruber subp HT28  Vi sinh vật kiểm định: Các chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus ATCC 25923 Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 2.2 Phương pháp nghiên cứu  Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh Phương pháp khối thạch  Phương pháp đục lỗ  Phương pháp tách chiết chất kháng sinh dung môi hữu  Phương pháp tách chiết chất kháng sinh từ sinh khối  Phương pháp tách chiết CKS từ dịch ngoại bào  Phương pháp xác định số tính chất chất kháng sinh  Phương pháp xác định pH khuếch tán dịch kháng sinh  Phương pháp xác định khả bền pH CKS  Phương pháp xác định khả bền với nhiệt độ CKS  Phương pháp xử lý số liệu  Kết thảo luận 3.1 Kiểm tra hoạt tính kháng sinh chủng HT28 Hình 3.1: Chủng xạ khuẩn HT28 giữ môi trường Gause VSVKĐ: P aeruginosa ( Gram âm) VSVKĐ: Staph aureus ( Gram dương) Hình 3.2: Hoạt tính kháng sinh chủng HT28 3.2 Tách chiết chất kháng sinh 3.2.1 Tách chiết chất kháng sinh từ sinh khối Bảng 3.1 Hoạt tính kháng sinh dịch chiết từ sinh khối STT Dung môi hữu HTKS ( D – d, mm ) Đối chứng (-) n-propynol 13,7 ± 1,6 5,5 ± 1,7 Etyl axetat 14,2 ± 0,2 2,8 ± 0,1 Metanol 14,4 ± 0,7 3,2 ± 0,2 Iso butanol 15,6 ± 0,6 5,9 ± 1,8 Axeton 16,3 ± 0,3 2,1 ± 0,8 Etanol 19,6 ± 0,7 2,9 ± 0,1 Đối chứng (+) 20,7 ± 0,3 ( Đối chứng (-): dung môi; đối chứng (+): dịch lên men ) Hình 3.3 HTKS dịch chiết từ sinh khối 1- n- propynol; 2- etyl axetat; 3- metanol; 4- iso butanol; 5- axeton; 6- etanol 3.2.2 Tách chiết chất kháng sinh từ dịch ngoại bào Bảng 3.2: Hoạt tính kháng sinh dịch ngoại bào Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm ) STT Dung môi pH = pH = pH = 10 ĐC ( - ) Etyl axetat 13,5 ±0,2 10,1 ±1,8 7,70 ±1,6 2,8 ± 0,1 Axeton 12,1 ±1,6 2,20 ±0,1 2,60 ±1,4 2,1 ± 0,8 Metanol 13,7 ±0,6 12,5 ±0,5 12,8 ±0,2 3,2 ± 0,2 n - propynol 14,1 ±1,1 12,8 ±0,3 12,9 ±1,7 5,5 ± 1,7 Iso butanol 18,0 ±0,3 13,9 ±0,6 13,5 ±0,8 5,9 ± 1,8 Etanol 12,2 ±0,1 11,1 ±0,8 11,3 ±0,1 2,9 ± 0,1 ( ĐC (-): dung môi ; ĐC (+): dịch lên men ) ĐC ( + ) 20,7± 0,3 Hình 3.5: HTKS dịch ngoại bào chiết pH khác 1- etyl axetat; 2- axeton; 3- metanol; 4- n- propynol; 5- iso butanol; 6- etanol Hình 3.6 HTKS dịch ngoại bào chiết pH = Hình 3.7: Khả ức chế VSVKĐ dung môi 1- etyl axetat; 2- axeton; 3- metanol; 4- n- propynol; 5- iso butanol; 6- etanol 3.3 Một số tính chất chất kháng sinh từ chủng HT28 3.3.1 Ảnh hưởng pH đến khả khuếch tán chất kháng sinh Bảng 3.3: Ảnh hưởng pH tới khuếch tán dịch kháng sinh pH Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm) 5,6 17,4 ± 0.9 20,8 ± 0,2 19,5 ± 0,4 3.3.2 Độ bền chất kháng sinh pH Bảng 3.4: Độ bền chất kháng sinh pH pH Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm) 15,8 ± 0,5 18.1 ± 0,3 17,6 ± 0,5 17,6 ± 0,8 19,1 ± 0,1 18,0 ± 0,1 17,0 ± 0,2 Hình 3.8: Độ bền chất kháng sinh pH 3.3.3 Khả bền nhiệt chất kháng sinh Bảng 3.5: HTKS dịch lọc sau xử lý nhiệt độ khác Thời gian ( phút ) Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm ) 400C 700C 800C 1000C 20 13,8 ± 0,2 13,5 ± 0,4 13,3 ± 0,1 11,7 ± 0,7 40 13,7 ± 0,9 13,4 ± 0,1 12,3 ± 0,8 7,80 ± 0,2 60 13,7 ± 0,8 13,2 ± 0,5 12,0 ± 0,7 6,50 ± 0,1 Đối chứng 20,7 ± 0,3 ( Đối chứng: Dịch kháng sinh chưa xử lý với nhiệt độ ) Hình 3.10: HTKS dịch lọc sau xử lý nhiệt độ khác Hình 3.11: HTKS dịch lọc xử lý nhiệt độ khác vòng 60 phút 4.1 Kết luận Kết luận kiến nghị  Đã kiểm tra HTKS chủng xạ khuẩn HT28 nhận thấy CKS chủng HT28 giữ hoạt tính cao, ổn định, có hoạt phổ rộng, ức chế hai nhóm vi khuẩn Gram âm Gram dương  CKS chủng HT28 có sinh khối tế bào dịch ngoại bào Trong sinh khối dung môi tách chiết tốt etanol Trong dịch ngoại bào dung môi tách chiết tốt iso butanol tách chiết có hiệu cao điều kiện pH =  Đã nghiên cứu số tính chất CKS từ chủng HT28: CKS có khả khuếch tán môi trường axit, trung tính kiềm Trong CKS khuếch tán tốt môi trường trung tính kiềm Trong môi trường axit, CKS khuếch tán   CKS có độ bền cao dải pH từ đến thời gian 10 phút Chất kháng sinh có khả bền với nhiệt độ Ở 100 độ C kéo dài 60 phút, hoạt tính kháng sinh 31%  4.2 Kiến nghị Chủng xạ khuẩn HT28 chủng có HTKS mạnh, hoạt phổ rộng Vì chúng em có số kiến nghị sau:  Xác định chất hóa học chất kháng sinh  Nâng cao hoạt tính kháng sinh chủng phương pháp gây đột biến [...]... của chất kháng sinh Bảng 3.3: Ảnh hưởng của pH tới sự khuếch tán của dịch kháng sinh pH Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm) 5,6 17,4 ± 0.9 7 20,8 ± 0,2 8 19,5 ± 0,4 3.3.2 Độ bền của chất kháng sinh trong pH Bảng 3.4: Độ bền của chất kháng sinh trong pH pH Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm) 3 15,8 ± 0,5 4 18.1 ± 0,3 5 17,6 ± 0,5 6 17,6 ± 0,8 7 19,1 ± 0,1 8 18,0 ± 0,1 9 17,0 ± 0,2 Hình 3.8: Độ bền của chất. .. trung tính và kiềm Trong môi trường axit, CKS khuếch tán kém nhất   CKS có độ bền cao trong dải pH từ 3 đến 9 trong thời gian 10 phút Chất kháng sinh có khả năng kém bền với nhiệt độ Ở 100 độ C kéo dài 60 phút, hoạt tính kháng sinh chỉ còn 31%  4.2 Kiến nghị Chủng xạ khuẩn HT28 là chủng có HTKS mạnh, hoạt phổ rộng Vì vậy chúng em có một số kiến nghị sau:  Xác định bản chất hóa học của chất kháng sinh. .. chất kháng sinh trong pH 3.3.3 Khả năng bền nhiệt của chất kháng sinh Bảng 3.5: HTKS của dịch lọc sau khi đã xử lý ở các nhiệt độ khác nhau Thời gian ( phút ) Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm ) 400C 700C 800C 1000C 20 13,8 ± 0,2 13,5 ± 0,4 13,3 ± 0,1 11,7 ± 0,7 40 13,7 ± 0,9 13,4 ± 0,1 12,3 ± 0,8 7,80 ± 0,2 60 13,7 ± 0,8 13,2 ± 0,5 12,0 ± 0,7 6,50 ± 0,1 Đối chứng 20,7 ± 0,3 ( Đối chứng: Dịch kháng sinh. .. 3.5: HTKS của dịch ngoại bào được chiết ở các pH khác nhau 1- etyl axetat; 2- axeton; 3- metanol; 4- n- propynol; 5- iso butanol; 6- etanol Hình 3.6 HTKS của dịch ngoại bào được chiết ở pH = 3 Hình 3.7: Khả năng ức chế VSVKĐ của dung môi 1- etyl axetat; 2- axeton; 3- metanol; 4- n- propynol; 5- iso butanol; 6- etanol 3.3 Một số tính chất của chất kháng sinh từ chủng HT28 3.3.1 Ảnh hưởng của pH đến... và Gram dương  CKS của chủng HT28 đều có cả trong sinh khối tế bào và dịch ngoại bào Trong sinh khối dung môi tách chiết tốt nhất là etanol Trong dịch ngoại bào dung môi tách chiết tốt nhất là iso butanol và tách chiết có hiệu quả cao nhất ở điều kiện pH = 3  Đã nghiên cứu một số tính chất của CKS từ chủng HT28: CKS có khả năng khuếch tán được cả trong 3 môi trường axit, trung tính và kiềm Trong đó...3.2.2 Tách chiết chất kháng sinh từ dịch ngoại bào Bảng 3.2: Hoạt tính kháng sinh của dịch ngoại bào Hoạt tính kháng sinh ( D – d, mm ) STT Dung môi pH = 3 pH = 7 pH = 10 ĐC ( - ) 1 Etyl axetat 13,5 ±0,2 10,1 ±1,8 7,70 ±1,6 2,8 ± 0,1 2 Axeton 12,1 ±1,6 2,20 ±0,1 2,60... 20,7 ± 0,3 ( Đối chứng: Dịch kháng sinh chưa xử lý với nhiệt độ ) Hình 3.10: HTKS của dịch lọc sau khi đã xử lý ở các nhiệt độ khác nhau Hình 3.11: HTKS của dịch lọc đã được xử lý ở các nhiệt độ khác nhau trong vòng 60 phút 4.1 Kết luận 4 Kết luận và kiến nghị  Đã kiểm tra HTKS của chủng xạ khuẩn HT28 và nhận thấy rằng CKS của chủng HT28 vẫn giữ được hoạt tính cao, ổn định, có hoạt phổ rộng, ức chế được... sinh chỉ còn 31%  4.2 Kiến nghị Chủng xạ khuẩn HT28 là chủng có HTKS mạnh, hoạt phổ rộng Vì vậy chúng em có một số kiến nghị sau:  Xác định bản chất hóa học của chất kháng sinh  Nâng cao hoạt tính kháng sinh của chủng bằng phương pháp gây đột biến  ... etanol 3.3 Một số tính chất chất kháng sinh từ chủng HT28 3.3.1 Ảnh hưởng pH đến khả khuếch tán chất kháng sinh Bảng 3.3: Ảnh hưởng pH tới khuếch tán dịch kháng sinh pH Hoạt tính kháng sinh ( D... dương) Hình 3.2: Hoạt tính kháng sinh chủng HT28 3.2 Tách chiết chất kháng sinh 3.2.1 Tách chiết chất kháng sinh từ sinh khối Bảng 3.1 Hoạt tính kháng sinh dịch chiết từ sinh khối STT Dung môi... gây bệnh kháng lại nhiều CKS điều trị  Xuất phát từ thực tiễn chúng em thực đề tài: Nghiên cứu số tính chất hóa lý chất kháng sinh có nguồn gốc từ chủng xạ khuẩn HT28 có hoạt tính kháng khuẩn”