khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat của cây nam sâm đứng boerhaavia erecta l họ bông phấn (nyctaginaceae)

Có đến 80% các hoạt chất đã và đang sử dụng làm thuốc trong y học hiện đại là các chất có nguồn gốc tự nhiên, các chất tổng hợp và bán tổng hợp đều dựa trên cấu trúc hóa học của các hợp

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA HÓA

MỤC LỤC

MỤC LỤC 2

L ỜI CẢM ƠN 3

L ỜI MỞ ĐẦU 4

DANH M ỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 5

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 6

1.1 ĐẶC TÍNH THỰC VẬT 6

1.2 NGHIÊN C ỨU VỀ DƯỢC TÍNH CỦA CHI BOERHAAVIA 8

CHƯƠNG 2: NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ 19

2.1 THU HÁI VÀ X Ử LÝ MẪU 20

2.2 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 20

2.3 TRÍCH LY, CÔ L ẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CÂY NAM SÂM ĐỨNG 21

2.4 KH ẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA CÁC HỢP CHẤT CÔ L ẬP ĐƯỢC 23

CHƯƠNG 3:KẾT LUẬN 30

3.1 CÔ L ẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ 30

3.2 CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 31

TÀI LI ỆU THAM KHẢO 32

LỜI CẢM ƠN

Em xin t ỏ lòng biết ơn sâu sắc đến:

 Cô GS TS Nguyễn Kim Phi Phụng đã tận tình hướng dẫn, động viên, truyền đạt những kiến thức quý báu và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành tốt khóa luận này Cô là một người thầy tận tụy, một tấm gương nghiên cứu khoa học,

cô không những trang bị cho em kiến thức chuyên môn mà cả những hành trang, kỹ năng cho con đường tương lai sau này

 Chị NCS Đỗ Thị Mỹ Liên- là người chị- đã nhiệt tình hướng dẫn, giúp đỡ, động viên, truyền đạt những kiến thức và kinh nghiệm quý báu mà chị tích lũy được trong quá trình nghiên cứu giúp em hoàn thành tốt khóa luận Chị đã truyền tinh thần nghiên cứu khoa học, sự ham học hỏi và giúp em định hướng cho những bước

đi sau này

 Thầy NCS Dương Thúc Huy đã cho em kiến thức và cơ hội được học tập, hoàn thành khóa luận tại Phòng thí nghiệm Hóa hữu cơ- Trường Đại học Khoa học tự nhiên TP HCM

 Các thầy cô Trường Đại học sư phạm TP HCM đã giảng dạy và truyền thụ cho em nhiều kiến thức khoa học

 Các anh chị học viên cao học và các bạn sinh viên cùng làm việc, học tập tại Phòng thí nghiệm Hóa hữu cơ- Trường Đại học Khoa học tự nhiên TP HCM đã nhiệt tình giúp đỡ, động viên em trong suốt quá trình làm khóa luận

 Và cuối cùng là ba mẹ đã ủng hộ, tiếp sức và là nguồn động viên lớn lao trên

suốt con đường học tập của em

LỜI MỞ ĐẦU

Từ xa xưa con người đã sử dụng nhiều loại cây cỏ hoặc các hợp chất trích

ly từ cây cỏ để làm hương liệu, gia vị thực phẩm, màu tự nhiên,…đặc biệt là sử

dụng để làm thuốc chữa bệnh Trong y học cổ truyền có nhiều bài thuốc giá trị mà cho đến nay chúng ta chỉ mới khám phá được một phần

Có đến 80% các hoạt chất đã và đang sử dụng làm thuốc trong y học hiện đại là các chất có nguồn gốc tự nhiên, các chất tổng hợp và bán tổng hợp đều dựa trên cấu trúc hóa học của các hợp chất tự nhiên Vì vậy, việc nghiên cứu, tìm kiếm các thuốc mới từ nguồn gốc tự nhiên hiện nay đang rất được quan tâm

Chi Boerhaavia, họ Bông phấn (Nyctaginaceae), có khoảng hơn 40 loài, trong đó ở Việt Nam, theo tài liệu đã tìm thấy khoảng 3 loài Một số loài cây thuộc

chi Boerhaavia đã được sử dụng trong y học cổ truyền của nhiều nước trên thế giới

để chữa trị rất nhiều loại bệnh như viêm nhiễm, kháng u bướu, kháng tế bào ung thư, kháng virút, …

Các nghiên cứu hóa – dược cho thấy chi Boerhaavia chứa rất nhiều loại hợp

chất hữu cơ có hoạt tính sinh học hấp dẫn như triterpen, steroid, glycoside, flavonoid, alkaloid, Tuy nhiên, các cây thuộc chi Boerhaavia rất giống nhau về

hình dáng bên ngoài và lại chưa được nghiên cứu và áp dụng vào thực tế ở Việt Nam

Cây Boerhaavia erecta L là một loài cây được phân bố rộng rãi ở nước ta, đây là loài cây chịu hạn rất dễ sống và sự phát tán cũng như sự sinh sôi nảy nở rất

dễ dàng Với những hoạt tính rất hấp dẫn cũng như sự thuận lợi khi nuôi trồng thì

quả thật đây là nguồn dược liệu rất quý giá Mục tiêu của đề tài là nghiên cứu thành

phần hóa học cây Nam sâm đứng Boerhavia erecta L thu hái ở Thủ Đức bằng cách

cô lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất hữu cơ có trong cây; tiến hành

so sánh đặc tính hóa thực vật của cây này với các cây cùng chi Hy vọng rằng kết

quả nghiên cứu sẽ mang lại những hiểu biết mới về mặt hóa – dược của cây

Boerhaavia erecta L và làm tăng giá trị ứng dụng của cây vào thực tế cuộc sống

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

br: rộng (broad)

C: cloroform

d: mũi đôi (doublet)

dd: mũi đôi - đôi (doublet-doublet)

DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

EA: etyl acetat

ED: eter dầu hỏa

H: hexan

HSQC: tương quan H-C qua 1 nối (Heteronuclear Single Quantum Correlation)

HMBC: tương quan H-C qua 2, 3 nối (Heteronuclear Multiple Bond Coherence)

M: metanol

N: nước

NMR: phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy)

s: mũi đơn (singlet)

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 ĐẶC TÍNH THỰC VẬT

1.1.1 Tổng quan về chi Boerhaavia

Chi Boerhaavia[17] có khoảng hơn 40 loài, bao gồm cả cây lâu năm và cây

hằng năm Cây mọc thẳng đứng, nghiêng hoặc bò sát mặt đất, được phân bố rộng rãi

ở những vùng có khí hậu nhiệt đới, cận nhiệt đới và một số nước vùng ôn đới Chúng được tìm thấy ở Úc, Trung Quốc, Ai Cập, Pakistan, Sudan, Sri Lanka, Nam Phi, Mỹ và một vài nước Trung Đông

Trong đó, ở Việt Nam chỉ mới xác định được 3 loài thuộc chi Boerhaavia

đó là Boerhaavia diffusa Linn (Nam sâm bò), Boerhaavia erecta L (Nam sâm đứng), và Boerhaavia chinensis (Nam sâm Trung Quốc)[3]

Boerhaavia diffusa Boerhaavia coulteri Boerhaavia gracillima

1.1.2 Mô tả thực vật cây Boerhaavia erecta L.[3, 20]

Cây Nam sâm đứng có tên khoa học là Boerhaavia erecta L là loại cây

thảo mộc thuộc chi Boerhaavia, họ Bông phấn (Nyctaginaceae) (họ Bốn giờ), nhóm

Hai lá mầm, thuộc ngành Cây hạt kín

Nam sâm đứng là loại cỏ mảnh, cao 40-80 cm, mọc thẳng đứng hoặc có thể

rủ xuống ở nách chồi, có lông mịn ở chót Lá hình trứng hoặc dạng elip, phiến lá

xoan tròn dài đến thon, đáy tròn hay cắt ngang, kích thước 2-3,5× 1-2,5 cm, mặt dưới lá trắng như có bột và có tuyến, mặt phía trên xanh, cuống dài 1-4 cm Chùm

tụ tán dài; nhánh chót mang tụ tán 3 hoa; cọng hoa 15-20 mm; bao hoa trắng, hồng hay đỏ, dài 1,5-2 mm; tiểu nhụy 1-2 thùy Hoa quả hình chùy lật ngược, cao 4 mm,

có 5 cánh to, hạt nhiều

Cây nam sâm đứng được phân bố ở vùng có khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới trên thế giới Là loài liên nhiệt đới, mọc hoang khắp nơi ở vườn, sân, bờ đường hay bãi cỏ… Ở Việt Nam cây mọc nhiều ở vùng Bình Thuận, Ninh Thuận, Ninh Hòa, Phú Yên,… là những vùng đất cát, khô cằn

Cho đến nay, các nghiên cứu và ứng dụng vào y học chỉ tập trung chủ yếu

vào loài cây cùng chi là Nam sâm bò (Boerhaavia diffusa L.), còn cây Boerhaavia erecta mặc dù cũng đã được sử dụng làm thuốc ở nhiều nơi trên thế giới, nhưng

những nghiên cứu cụ thể về dược tính của cây này thì còn rất ít

Thân lá cây Boerhaavia diffusa đã được người dân ở một số nước như Ấn

Độ, Sri Lanka, Việt Nam để nấu ăn như rau Lá cây có tác dụng hoạt huyết giải độc

Rễ cây có tác dụng tăng lượng nước tiểu nhưng với liều cao có thể gây nôn mửa và

ra nhiều mồ hôi; cây còn có tác dụng trấn tĩnh (về mặt thần kinh) Rễ cây được dùng

để chữa các bệnh như gãy xương (Nepan) (dùng toàn cây hay kết hợp với các loại cây khác); chữa rắn cắn và thấp khớp (Sri Lanka); ở Đông Phi dùng để chữa bỏng

và chữa áp xe; ở Brasil và một số nơi khác người ta dùng cây này để chữa các bệnh

về gan và lá lách, bệnh về túi mật, các bệnh về thận và chữa viêm nhiễm bên trong

Ở Ấn Độ người ta dùng cây làm thuốc chữa rất nhiều bệnh[18] như chữa đau bao tử, trừ giun sán, thuốc hạ sốt, chữa phong, chữa bệnh lậu, chứng khó tiêu, chứng phù nề, vàng da, thiếu máu, điều hòa kinh nguyệt Rễ cây được dùng làm thuốc lợi tiểu và nhuận tràng với liều dùng 15 g/ngày, ngày dùng hai lần

Có nơi dùng chữa ho dưới dạng thuốc bột, thuốc sắc hoặc thuốc pha uống như trà (10 g/1 lít nước sôi), nếu pha rượu thì chỉ dùng 2-5 g bột rễ mỗi ngày

Có rất nhiều các nghiên cứu dược lý về cây Boerhaavia diffusa L đã được

thực hiện trên thế giới cụ thể như: nghiên cứu về khả năng chữa bỏng[12]; khả năng lợi tiểu và điều hòa huyết áp[24,59]; khả năng nhuận tràng[40]; khả năng chống co giật[6]; khả năng chống nhiễm độc gan[52]; dùng để chữa các triệu chứng của bệnh thận[38,58]

; các bệnh về gan, túi mật và đường tiểu[15,16]; khả năng miễn dịch và kháng khuẩn[9,10,37,41,44,56,60]; khả năng chống co thắt[21]; khả năng giảm đường huyết của cao nước của lá[42,47]

Năm 2003, ở Ấn Độ, Rupjyoti Bharali và cộng sự[53] tiến hành nghiên cứu

khả năng ngăn ngừa ung thư da trên chuột của dịch chiết thân lá của cây Boerhaavia diffusa ban đầu đã cho thấy rằng dịch chiết thân lá của cây có khả năng ngăn ngừa

sự hình thành các tác nhân gây ung thư da

Năm 2007, đã có các nghiên cứu trên chuột về khả năng chống stress của dịch chiết metanol của cây[35,51] và nhận thấy cao metanol có khả năng chống stress,

các nghiên cứu đi sâu tiếp tục được tiến hành Ngoài ra người ta cũng đã nghiên cứu trên chuột khả năng làm giảm đau[28] của dịch chiết lá tươi của cây

Năm 2008, ở Nigeria, C.O.Ojowundu và cộng sự[19] tiến hành nghiên cứu

về các chất dinh dưỡng có trong cây Boerhaavia diffusa L và báo cáo cho thấy hàm

lượng các vitamin và các khoáng chất trong cây cao (Bảng 1.2 và 1.3) Ngoài ra báo

cáo còn cho thấy cây Boerhaavia diffusa L có khả năng chống oxy hóa và giảm

stress cao

Năm 2009, Tillán Hood và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu để xác định tác

dụng của dịch nước chiết xuất từ Boerhaavia erecta L đến chức năng bảo vệ gan

trên cơ thể chuột Kết quả cho thấy dịch chiết của cây có khả năng chống lại sự tổn thương gan trên cơ thể chuột gây ra bởi carbon tetracloride[31]

Năm 2010, ở Ấn Độ, Rajeswari và Krishnakumari tiến hành nghiên cứu để xác định tổng lượng phenol và flavonoid trong dịch chiết xuất methanol của lá cây

Boerhavia erecta L., đây là những hợp chất quan trọng đóng vai trò là chất chống oxy hóa, chống ung thư,… Kết quả nghiên cứu cho thấy trong lá cây có một lượng đáng kể phenol và flavonoid[45]

1.2 NGHIÊN C ỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC

1.2.1 Hàm lượng các thành phần, các vitamin và khoáng chất trong cây Nam sâm bò ở Nigeria [19]

Bảng 1.2: Hàm lượng các thành phần có trong cây Nam sâm bò

Bảng 1.3: Hàm lượng các vitamin có trong cây Nam sâm bò

Loại vitamin Hàm lượng (mg/100g)

1 1

1 1 1 1 1 1

1 2

2 2

2 2 2

HO O H

H

1 2 3 4 5 6 7 8 9 1

10 0

1

11 1 1

12 2 1

14 4 1

13 3 1

15 5 1

16 6 1

17 7 1

22 2

2

23 3 2244 2

25 5 2

26 6

2 7

2

28 8 2299

O H

 Triterpen

 Flavonoid

Boerhavilanostenyl benzoate[11] Boerhavisterol[11]

H

HO O

C COOH H H

Boeravinone A[8,27,34] Boeravinone B[8,27,34] Boeravinone C[8,27,34]

O

O

O

A O

D

1

2 34

6 7

OH H H

O

O H

Boeravinone D[8,27,34] Boeravinone E[8,27,34] Boeravinone F[8,27,34]

H

HO O

H

2 2

O

H

O H

O

O O

Boeravinone J[4] Coccineon A[7] Coccineone B[4,7,11,21]

Boeravinone G[22] Boeravinone H[22] Boeravinone I[4]

O

O

O O

O

OH H O

5,7-Dihydroxy-3',4'-dimethoxy-6,8-dimethylflavone[11]

methylflavone[11

4',3,7-Trihydroxy-3'-methoxyflavone[11]

6

7

7

8 8

1 1'' 2 2'' 3 3'' 4 4'' 5 5'' 6 6''

OH H

H3COCO

O

OH H

2'-O-Methylabronisoflavone[21] Eupalitin[11,50] Kaempferol[27]

O H

O

OH H H

HO O H

HO O O

O

OH H H

O

O O O

O

OH H H

HO O H

HO O O

 Alkaloid [26,32,36]

Các alkaloid chiếm hàm lượng lớn trong cây nam sâm bò (2%)

Gồm các chất Punarnavine-1, Punarnavine-2, Hypoxanthine-9-L-arabinofuranoside, Punarnavoside , Neobetanin-5-β-D-glucopyranoside và Amarantin

OH H

O

O O

H3CO

H3CO

OH

O OH

HO

O OH

O OH

HO

OH OH

Quercetin[11,27] Eupalitin 3-O-

 Lignan[11,36] Năm 1991, Lami và cộng sự đã cô lập được từ rễ cây nam sâm

bò hai hợp chất lignan là liriodendrin và syringaresinol

mono-β-D-glycoside

O

O

OH H O

O

OH H

O H

HO O

HO O

O

OH H O

O OCH 3

O

OH H

O OCH3

H3CCOO

O O OCH 3

O OCH 3

O

OH H

O OCH 3

H3CCOO

H

HO O O OCH 3

H

Syringaresinol

O

O H

OCH3O

OCH3

H3CO

O OCH3

O HO

HO

OH OH

O

HO OH OH

CH2OH H

Lidriodendrin

Borhavine (Dihydroisofuroxanthone)

O

O OH

CH 3

CH 3

OCH3O

O OCH 3

 Carbohydrate [11,36]: Fructose, Galactose, Glucose, Xylose, Sucrose

 Xanthone [11,36]

 Amino acid [27]

: Cystine, glycine, histidine, lisine, methionine, phenylalanine,

proline, tryptophan, alanine, acid aspartic, acid glutamic, leucine, serine, threonine, tyrosine, valine

 Các acid béo [11,49,61]

CH3―(CH2)14―COOH : Acid hexadecanoic (Acid palmitic)

CH3―(CH2)16―COOH : Acid octadecanoic (Acid stearic)

CH3―(CH2)18―COOH : Acid eicosanoic ( Acid arachidic)

CH3―(CH2)20―COOH : Acid docosanoic (Acid behenic)

CH3―(CH2)7―CH=CH―(CH2)7―COOH : Acid 9-octadecenoic (Acid oleic)

CHƯƠNG 2: NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ

- Ngâm dầm với metanol

- L ọc, cô quay thu hồi dung môi

Trích lỏng- lỏng với ete dầu hỏa và etyl acetat Phơi khô, xay nhuyễn

- Tiến hành sắc ký cột với hệ dung môi phân cực tăng dần H:EA (8:2 - 0:10), EA:M (10:0 - 5:5)

- Cô quay, thu hồi dung môi

- Sử dụng sắc ký lớp mỏng để kiểm tra và gom các phân đoạn

EA.A

(3.9 g)

EA.B (4.5 g)

EA.C (2.3 g)

EA.D (7.1 g)

EA.E (2.1 g)

EA.F (3.5 g)

C:M:N (8:2:0.1)

EA.F2 (0.4 g)

EA.F3 (0.72 g)

EA.F4 (0.45 g)

EA.F5 (0.83 g) EA.F1

(0.58g)

Sơ đồ 2.1: quy trình điều chế các loại cao

2.1 THU HÁI VÀ XỬ LÝ MẪU

Mẫu cây tươi Nam sâm đứng được thu hái tại Thủ Đức vào tháng 9 năm

2009 Cây đã được nhận danh tên khoa học là Boerhaavia erecta L bởi Dược sĩ

Phan Đức Bình, Phó Tổng biên tập Tạp chí Thuốc và Sức Khỏe, Hội Dược học Việt Nam

Sau khi thu hái, cây được rửa sạch, sấy khô, xay nhuyễn thu được bột khô (3.8 kg)

2.2 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO

Bột cây khô phần thân lá (3.8 kg) được trích kiệt bằng metanol theo phương pháp ngâm dầm ở nhiệt độ phòng, lọc, cô quay thu hồi dung môi, thu được cao metanol thô (245 g)

Từ cao metanol thô, tiến hành trích lỏng- lỏng lần lượt với ete dầu hòa và etyl acetat thu được cao eter dầu hỏa (38.1 g), cao etyl acetat (25.1 g) và phần cao metanol còn lại (160.0 g)

Quy trình điều chế các loại cao được trình bày trong sơ đồ 2.1

Eter dầu hỏa (ED)

Etyl acetat (EA)

Metanol (M)

38.1 25.1

160

15.55 10.24 65.31

2.3 TRÍCH LY, C Ô LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CÂY NAM SÂM ĐỨNG

2.3.1 S ắc ký cột trên cao etyl acetat của sơ đồ 2.1

Thực hiện sắc ký cột trên cao etyl acetat (25.1 g) với silica gel pha thường

bằng hệ dung môi phân cực tăng dần từ hệ hexan: etyl acetat (8:2 – 0:10), etyl acetat: metanol (10:0 – 5:5) thu được 6 phân đoạn được trình bày trong sơ đồ 2.1

2.3.2 S ắc ký cột trên phân đoạn EA.F của cao etyl acetat

Phân đoạn EA.F (3.5 g) của cao etyl acetat được sắc ký cột silica gel, giải ly

bằng hệ dung môi phân cực cloroform: metanol: nước (8:2:0.1)

Kết quả sắc ký lớp mỏng cho thấy phân đoạn EA.F1 và EA.F3 có các vết chính rõ, đẹp Do đó được chọn để sắc ký cột Các phân đoạn còn lại sẽ được tiếp

tục khảo sát sau

2.3.2.1 S ắc ký cột trên phân đoạn EA.F1 của cao etyl acetat

Phân đoạn F1 của cao etyl acetat (580 mg) được sắc ký cột silica gel nhiều

lần, giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8:2:0.1), kết quả sắc ký cột được trình bày trong bảng 2.2

Trọng lượng cao (mg)

Nhận xét (bằng sắc ký lớp mỏng)

F1-2 15 - 23 C:M:N (8:2:0.1) 110 Một vết chính Sẽ khảo sát sau

F1-4 39- 51 C:M:N (8:2:0.1) 135 Nhiều vết Không khảo sát

Hợp chất EREC-EA25 (10 mg) có dạng tinh thể hình kim, màu vàng, tan trong metanol

2.3.2.1 S ắc ký cột trên phân đoạn EA.F1 của cao etyl acetat

Phân đoạn F3 của cao etyl acetat (720 mg) được sắc ký cột silica gel nhiều

lần, giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8:2:0.1), kết quả sắc ký cột được trình bày trong bảng 2.3

Trọng lượng cao (mg)

Nhận xét (bằng sắc ký lớp mỏng) F3-1 1 - 10 C:M:N (8:2:0.1) 100 Vết dài Không khảo sát

F3-3 28 - 40 C:M:N (8:2:0.1) 87 Một vết chính Sẽ khảo sát sau F3-4 41 - 52 C:M:N (8:2:0.1) 145 Nhiều vết Không khảo sát F3-5 53 - 67 C:M:N (8:2:0.1) 180 Một vết chính Sẽ khảo sát sau

Hợp chất EREC-EA26 (8 mg) có dạng bột, vô định hình màu vàng, tan trong metanol

2.4 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA CÁC HỢP CHẤT CÔ LẬP ĐƯỢC

2.4.1 Kh ảo sát cấu trúc hóa học của của hợp chất 1 (EREC- EA25)

 Hợp chất 1 thu được từ phân đoạn EA.F của cao etyl acetat, có đặc điểm sau:

- Hợp chất 1 có dạng tinh thể hình kim, màu vàng, tan trong dung môi

- Phổ 1

H-NMR (CD3OD) (Phụ lục 1, 1A, 1B), phổ 13

C-NMR (CD3OD) (Phụ lục 2), phổ HSQC (Phụ lục 3), phổ HMBC (Phụ lục 4, 4A, 4B, 4C) được trình bày trong bảng 2.4

 Biện luận cấu trúc:

Hợp chất 1 có sắc ký lớp mỏng khi hiện hình bằng dung dịch acid H2SO4cho một vết màu vàng, hiện hình bằng dung dịch FeCl3/ ancol, cho màu xanh đen, nên hợp chất 1 có thể là một flavon

 Phổ 1H-NMR có năm tín hiệu proton nằm trong vùng từ trường δH 6.5-8 ppm, là tín hiệu của proton gắn với vòng thơm

- Tín hiệu mũi đôi tại δH 6.21 (1H, d, J = 1.5 Hz) và mũi đơn tại δH 6.39 (1H,

s ) thể hiện 2 proton ghép cặp meta của vòng A là H-6 và H-8

- Hai tín hiệu mũi đôi tại δH 7.71 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-2’), δH 6,84 (1H, d, J =

8.5, H-5’) và một mũi đôi-đôi tại δH 7.59 (1H, dd, J = 6.5; 2.0, H-6’) của hệ thống ghép ABX cho biết rằng có nhóm thế tại vị trí 3’ và 4’ trên vòng B

- Phổ 1H-NMR còn có 1 mũi đôi tại δH 5.24 (1H, d, J = 7.5) là tín hiệu của proton anomer H-1’’, kết hợp với các tín hiệu trong vùng từ trường δH 3.2-3.8 ppm cho biết có sự hiện diện của một đơn vị đường

 Phổ 13C-NMR cho thấy hợp chất 1 có 21 carbon

- Có 15 tín hiệu carbon nằm trong trường thấp (>90ppm) Trong đó có 14 carbon thơm của phần aglycon trong vùng từ trường δC 90-170 ppm, một carbon carbonyl >C=O tại δC 179.6 (C-4), một carbon acetal δC 104.5 (C-1”) Các tín hiệu còn lại nằm trong vùng trường cao (60-80 ppm) củng cố nhận định hợp chất có mang một đơn vị đường

- Carbon metylen –CH2– mang oxy tại δC 62.7 ppm là C-6 của đường glucose

- Tín hiệu carbon tứ cấp tại δC 135.7 ppm là tín hiệu đặc trưng của C-3 của khung flavonol

- Phổ HMBC cho thấy tín hiệu tương quan của proton anomer C-1’’ của đơn

vị đường với C-3 của khung flavonol ở δC135.7 ppm, chứng tỏ flavonol này

có mang nhóm đường ở C-3

Phân tích các dữ liệu phổ nghiệm của hợp chất 1 và so sánh với số liệu phổ

nghiệm của hợp chất quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside[ 5,13,33,43] được trình bày trong bảng 2.4, cho thấy sự tương đồng

Vậy, cấu trúc của hợp chất 1 được đề nghị là quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside

O H

HO

H HO

H

H OH H

OH

3 4 5 6

2.4.2 Kh ảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất 2 (EREC- EA26)

 Hợp chất 2 thu được từ phân đoạn EA.F của cao etyl acetat, có đặc điểm

sau:

- Hợp chất có dạng bột vô định hình màu vàng, tan trong dung môi metanol

- Sắc ký lớp mỏng giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8: 2: 0.1) hiện hình bằng dung dịch acid H2SO4 30%, sấy bản ở 1100C cho một vết màu vàng có giá trị Rf= 0.4; và hiện hình bằng dung dịch FeCl3/ ancol, sấy nhẹ cho một vết màu xanh đen

- Phổ 1

H-NMR (CD3OD) (Phụ lục 5, 5A, 5B, 5C), phổ 13

C-NMR (CD3OD) (Phụ lục 6, 6A), phổ DEPT-NMR (Phụ lục 7), phổ HSQC (Phụ lục 8, 8A), phổ HMBC (Phụ lục 9, 9A, 9B, 9C, 9D) được trình bày trong bảng 2.5

 Biện luận cấu trúc:

 Phổ 1H-NMR của 2 tương tự với phổ của hợp chất 1, cũng chia ra hai vùng

Trong vùng từ trường δH 3.0-5.0 ppm xuất hiện thêm các tín hiệu khác Tín hiệu ở δH 4.53 (1H, d, J = 1.5) là tín hiệu của proton anomer thứ hai H-1’’’, ngoài ra tại δH 1.14 (3H, d, J = 6.5 Hz) là tín hiệu đặc trưng của proton nhóm metyl H-6’’’ của đường rhamnopyranose Từ đây, có thể xác định hợp chất 2

có thêm một đơn vị đường α-L-rhamnopyranose

 Phổ 13C-NMR kết hợp phổ DEPT-NMR cho thấy hợp chất có 27 carbon Ngoài tín hiệu tương tự như phổ 13

C-NMR của hợp chất 1, hợp chất 2 còn

xuất hiện thêm một carbon acetal δC 101.0 (C-1’’’), bốn carbon metin mang oxy trong vùng δC 65-80 ppm (C-2’’’; C-3’’’; C-4’’’; C-5’’’), và một carbon metyl bão hòa δC 16.5 ppm (C-6”’) Đây là tín hiệu đặc trưng của phần đường L-rhamnose

- Tín hiệu của –CH2– xuất hiện tại δC 67.2 ppm, kết hợp với phổ HMBC cho thấy proton anomer thứ hai H-1”’ cho tương quan với C-6” chứng tỏ đơn vị đường thứ hai gắn với đơn vị đường thứ nhất qua cầu nối 1-6

So sánh số liệu phổ nghiệm của hợp chất 2 với hợp chất 1 và với

kaempferol 3-O-β-D-rutinoside[14,43,57] được trình bày trong bảng 2.3 cho thấy sự tương đồng

Vậy cấu trúc của EREC- EA26 được đề nghị là kaempferol 3-O-β-D-rutinoside

O HO

HO

OH

3 4 5 6

1'

7 9 10

O

2' 3' 4' 5'

H 3 C 1"'

2"' 3"' 4'"

5"' 6"'

Kaempferol 3-O-β-D-rutinoside

CHƯƠNG 3:KẾT LUẬN

Quá trình nghiên cứu cây Nam sâm đứng Berhaavia erecta L thuộc họ

bông phấn (Nyctaginaceae), thu hái tại Thủ Đức, đã thu được kết quả sau:

3.1 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ

Phần thân lá cây Nam sâm đứng tươi sau khi phơi khô, được điều chế thành cao metanol bằng phương pháp ngâm dầm ở nhiệt độ thường Kế đó, sử dụng phương pháp trích lỏng- lỏng để phân chia cao metanol thành các loại cao khác nhau Thu suất của các cao so với cao metanol ban đầu: cao ete dầu hỏa (15.55%), cao etyl acetat (10,24%) và cao metanol còn lại (65,31%)

Cao etyl acetat được lựa chọn để nghiên cứu trong khóa luận này Từ cao etyl acetat, bằng phương pháp sắc ký cột silica gel đã tách được thành 6 phân đoạn Phân đoạn EA.F đã được lựa chọn để tiếp tục nghiên cứu

Từ phân đoạn EA.F đã cô lập được 2 hợp chất, ký hiệu là EREC- EA25 và EREC- EA26

Sử dụng các phương pháp hóa lý hiện đại NMR (một chiều và hai chiều),

kết hợp so sánh với các tài liệu tham khảo, đã xác định được cấu trúc các hợp chất

hữu cơ cô lập được như sau:

- EREC- EA25 là quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside

- EREC- EA26 là kaempferol 3-O-β-D-rutinoside

O

O

OH OH

OH

HO

O HO

O

O HO

HO

OH OH

HO HO

O

O

Quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside Kaempferol 3-O-β-D-rutinoside

3.2 CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO

Vì điều kiện thời gian và vật chất hạn chế, nên trong phạm vi của bài khóa

luận này, chỉ khảo sát một phân đoạn của cao etyl acetat

Trong thời gian tới, chúng tôi sẽ tiếp tục tiến hành khảo sát thành phần hóa

học và thử hoạt tính sinh học trên các phân đoạn cao còn lại của cao etyl acetat và các loại cao khác