Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học, sinh thái và thành phần hóa học của tinh dầu của loài biến hóa núi cao (asarum balansae franch ) ở một số tỉnh phía bắc việt nam

MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) thuộc chi Hoa tiên (Asarum L.), họ Mộc hương (Aristolochiaceae) Các loài chi Hoa tiên cỏ nhiều năm, mọc thành đám nhỏ nơi ẩm ướt, gần khe núi, ven đường tán rừng kín thường xanh Hiện phân bố số khu vực rừng núi cao : Hà Giang, Cao Bằng, Hà Nội( Ba Vì) Biến hóa núi cao ( Asarum balansae Franch.) loài quý hiếm, có giá trị sử dụng cao Tại số địa phương miền núi nước ta, sử dụng làm thuốc chữa ho, chữa cảm sốt Mấy năm gần đây, loài Biến hóa núi cao ( Asarum balansae Franch.) bị khai thác tận lực để làm thuốc bán qua Trung Quốc Bên cạnh rừng nguyên sinh bị tàn phá nhiều, nơi sống loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) ngày bị thu hẹp nên tính đa dạng loài bị đe dọa nghiêm trọng Đến nay, tất loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) Việt Nam đưa vào Nghị định 32/2006 Thủ tướng Chính phủ Những nghiên cứu nước loài chi Hoa tiên đặc biệt loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) chưa đề cấp đến, có mức độ mô tả đơn giải, chưa có tính hệ thống Từ thực tế trạng trữ lượng tự nhiên nguy đe dọa loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.), tiến hành triển khai đề tài “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học, sinh thái thành phần hóa học tinh dầu loài biến hóa núi cao(Asarum balansae Franch.) số tỉnh phía Bắc Việt Nam” Mục đích nghiên cứu Cung cấp thông tin đặc điểm sinh học, sinh thái, thành phần hóa học tinh dầu loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) Ý nghĩa khoa học thực tiễn: Ý nghĩa khoa học: Cung cấp tài liệu phục vụ cho việc viết Thực vật chí Việt Nam họ Mộc hương Việt Nam; kết đề tài sở cho công trình nghiên cứu để hoàn thiện trình nghiên cứu bảo tồn loài biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) có nguy tuyệt chủng cao Ý nghĩa thực tiễn: Kết đề tài phục vụ trực tiếp cho ngành ứng dụng sản xuất lâm nghiệp, y dược, sinh thái tài nguyên sinh vật,… Điểm đề tài: Đây công trình Việt Nam tiến hành nghiên cứu loài Biến hóa núi cao(Asarum balansae Franch.) Việt Nam cách đầy đủ hệ thống Bổ sung phân bố cho loài Biến hóa núi cao(Asarum balansae Franch.) Bố cục khóa luận: gồm 38 trang, ảnh,1 hình, bảng chia thành phần sau: Mở đầu (2 trang), chương (tổng quan tài liệu: trang), chương (Đối tượng, phạm vi, thời gian phương pháp nghiên cứu: trang), chương (Kết nghiên cứu: 14 trang,kết luận kiến nghị), tài liệu tham khảo: 34 tài liệu CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Trên giới Vùng Đông Nam Á coi trung tâm đa dạng phong phú chi Hoa tiên (Asarum L.) Wu Zheng-yi et al (2003) [32] công bố Thực vật chí Trung Quốc có 39 loài thứ thuộc chi Asarum L.; Yong Wang et al (2004) [34] bổ sung thêm loài cho chi Asarum Trung Quốc Asarum campaniflorum Wang Yong & Wang Q F., sp nov., nâng tổng số lên 40 loài Huang S F et al (1995, 2010) công bố chi Asarum Tạp chí Taiwania có loài (gồm A caudigerum, A epigynum, A hypogynum, A macranthum, A crassusepalum A taipingshanianum) [22,23]; Chang-Tse Lu et al (2010) [21] bổ sung thêm loài Đài Loan A chatienshanianum, A tawushanianum, A villisepalum, A yaeyamense A satsumense, nâng tổng lên 11 loài thuộc chi Asarum Hwang Shu-Mei Wong Siu Tak-Ping (1990) [24] phát loài thuộc chi Asarum đặt tên A hongkongense S M Hwang et T P Wong Siu Cho đến nay, A hongkongense loài chi Asarum gặp phân bố Hồng Kông Ohwi J (1965) [28] thống kê có loài Asarum caulescens Maxim., A sieboldii Miquel, A dimidiatum F Maekawa A heterotropoides F Schmidt Cho đến năm 1991, Satake Momiyama (1982) [29] Sugawara T (1991) [30] thống kê 40 loài thuộc chi Asarum Nhật Bản Trong công trình nghiên cứu tiếp theo, Sugawara T (1996) [31] bổ sung thêm hai loài A mitoanum T Sugaw., sp nov A majale T Sugaw cho hệ thực vật quần đảo Oh Byoung-Un nnk(1997) công bố loài A misandrum B Oh et J Kim, nâng tổng số loài thuộc chi Asarum L lên loài thứ [27] Ở Malaysia, có loài A arifolium Michaux; A caudatum Lindl.; A europaeum L.; A virginicum L.; A canadense L A sieboldii Miq var seoulensis Nakai Ở Bắc Mỹ, có loài thuộc chi Asarum [26], có loài phổ biến có vùng phân bố rộng: loài phía Đông (Asarum canadense) loài phía Tây (Asarum caudatum); loài đặc hữu California (A lemmonii A hartwegii); loài khác đặc hữu Oregon (một tiểu bang vùng Tây Bắc Thái Bình Dương Hoa Kỳ) Asarum wagneri loài khác (A marmoratum) trồng phía Tây Oregon phía Bắc California; có thứ Asarum canadense var canadense Asarum canadense var reflexum tiểu bang Carolinas, Virginia Georgia thuộc vùng Tây Bắc Thái Bình Dương Hoa Kỳ 1.2 Ở Việt Nam Ở Việt Nam, tài liệu có cho biết chi Asarum L gồm có loài (A balansae Franch; A blumei Duch in DC.; A caudigerum Hance; A glabrum Merr.; A petelotii O C Schmidt; A reticulatum Merr A wulingense Liang) phân bố chủ yếu miền Bắc Việt Nam, riêng loài A wulingense phát miền Trung Hương Sơn, Kéo Nưa (Hà Tĩnh) [20,23,27,29] Trong đợt nghiên cứu đa dạng sinh học KBTTN Na Hang, Tuyên Quang vào năm 1996, Nguyễn Nghĩa Thìn phát hiện có mặt loài A balansae khu vực Bản Bung, xã Thanh Tương [12] Trần Đình Nghĩa (1997) phát loài phân bố khu vực Tắt Kẻ, thuộc KBTTN Na Hang, Tuyên Quang [2] Trong công trình “Cây cỏ Việt Nam” Phạm Hoàng Hộ (1999) mô tả đặc điểm hình thái nơi phân bố loài A balansae [10] Theo Võ Văn Chi (2003) [7] Nguyễn Tiến Bân (2003) [2], loài A balansae thấy Cao Bằng (Quảng Hòa) Hà Tây (Ba Vì); sau đó, nhà thực vật phát có mặt loài Hà Giang (Phó Bảng) Trong Sách Đỏ Việt Nam (2007) [5], Loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) phân hạng EN A1c,d yếu tố đặc hữu Bắc Đây loài coi nguy cấp có nguy tuyệt chủng tự nhiên tương lai gần, quần thể bị suy giảm khoảng 50%, nơi sống bị thu hẹp tình trạng khai thác mức Nguyễn Anh Tuấn nnk (2012) [17,18] bổ sung cho hệ thực vật Việt Nam hai loài A cordifolium A yunnanense, nâng tổng số loài biết thuộc chi Asarum L lên loài Ở Việt Nam, công trình nghiên cứu thành phần hóa học loài thuộc chi Asarum L hạn chế Trần Minh Hợi (2004) [9Error! Reference source not found.] phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) xác định hợp chất tinh dầu từ thân loài Asarum caudigerum phân bố Hương Sơn (Hà Tĩnh) là: safrol (chiếm 96,2%), nonan (1,72%), 1,6-octadien-3-ol, 3,7-dimethyl (0,22%), axetaldehyt (0,09%), -caryophyllen (0,58%), benzen,1-(1,1-dimethylethoxy)-2-methyl (0,18%), elemixin (0,64%) 4,6-guaiadien (0,25%) Trần Huy Thái nnk (2010) [11Error! Reference source not found.], phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS), xác định 31 hợp chất có tinh dầu từ thân loài Hoa tiên (Asarum glabrum) phân bố Hà Giang, đó, thành phần hóa học tinh dầu safrol (chiếm 42,24%), apiole (27,11%) myristicin (6,13%) Như vậy, nghiên cứu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) ít, nghiên cứu thực chủ yếu nhằm phân loại xác định vùng phân bố để phục vụ cho công tác bảo tồn Tuy nhiên, nghiên cứu đặc tính sinh học, sinh thái, thành phần hóa học loài hạn chế CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, PHẠM VI, THỜI GIAN, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu Loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Việt Nam, dựa sở mẫu vật tài liệu Tài liệu: Các tài liệu phân loại chi Hoa tiên giới Việt Nam, chuyên khảo Mẫu vật: Là loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) bao gồm mẫu khô lưu giữ phòng tiêu thực vật Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật (HN), Viện Dược liệu (HNPM), Trường Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội (HNU), Các mẫu tươi thu Na Hang (Tuyên Quang), Tam Đảo (Vĩnh Phúc), Ba Vì (Hà Nội), Quản Bạ (Hà Giang) Gồm 20 mẫu thu Na Hang (Tuyên Quang), kí hiệu NAT11121; 10 mẫu thu Ba Vì (Hà Nội), kí hiệu NAT12031; 01 mẫu thu xã Ngọc Sơn, huyện Lạc Sơn, tỉnh Hòa Bình, kí hiệu CPC 1695; 01 mẫu thu xã Hướng Việt, huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị, kí hiệu CPC 2819; 03 mẫu Bảo tàng thực vật (Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG Hà Nội), kí hiệu 0217VNU; 04 mẫu Bảo tàng lịch sử tự nhiên Pháp, kí hiệu 3160-NMNH 2.2 Phạm vi nghiên cứu: Tập trung chủ yếu khu vực có rừng xã huyện Na Hang tỉnh Tuyên Quang số tỉnh phía bắc Việt Nam 2.3 Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 7/2011 - 1/2012 2.4 Nội dung nghiên cứu Thu thập tài liệu, xử lí hệ thống thông tin có loài chi Hoa tiên(Asarum spp.), đặc biệt loài Biến hóa núi cao(Asarum balansae Franch.) nước Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái, loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Nghiên cứu khả nhân giống phương pháp sinh dưỡng hữu tính loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Phân tích thành phần hóa học tinh dầu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Điều tra tri thức địa khai thác sử dụng loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.5.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái Để nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.), dựa vào tài liệu phương pháp nghiên cứu Nguyễn Nghĩa Thìn(2007)[13] Việc nghiên cứu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) tiến hành theo bước sau: Bước 1: Tổng hợp, phân tích tài liệu nước loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Bước 2: Phân tích, định loại mẫu vật loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Bước 3: Tham gia chuyến điều tra, nghiên cứu thực địa để thu thêm mẫu, tìm hiểu thêm sinh thái học, phân bố thông tin có liên quan khác Bước 4: Tổng hợp kết nghiên cứu, mô tả đặc điểm loài, chỉnh lý phần danh pháp theo luật danh pháp quốc tế cuối hoàn chỉnh nội dung khoa học khác đề tài – Soạn thảo loài dựa theo quy ước quốc tế soạn thảo thực vật quy phạm soạn thảo thực vật chí Việt Nam, thứ tự sau: Thứ tự soạn thảo loài loài: Tên khoa học thức kèm theo tên tác giả công bố tên gọi, tên Việt Nam thường dùng, trích dẫn lại tên tác giả công bố tên khoa học, năm công bố, tài liệu công bố, số trang, tài liệu tài liệu Việt nam đề cập đến, tên đồng nghĩa gốc (nếu có), tên đồng nghĩa (nếu có), tên Việt Nam khác (nếu có), mô tả, địa điểm thu mẫu chuẩn (Loc class.), mẫu vật chuẩn (Typus) kèm theo nơi bảo quản (theo quy ước quốc tế), sinh học sinh thái, phân bố, mẫu nghiên cứu, giá trị sử dụng, ghi (nếu có) – Cách mô tả: Mô tả liên tục đặc điểm theo nguyên tắc truyền tin ngắn gọn, theo trình tự từ quan dinh dưỡng (dạng sống, cành, lá, ) đến quan sinh sản (cụm hoa, cấu trúc hoa, quả, hạt) Để xây dựng mô tả cho loài, tập hợp số liệu phân tích loài sau so sánh với tài liệu gốc, chuyên khảo mẫu typ (nếu có), từ xác định tiêu chuẩn dấu hiệu định loại cho loài Bản mô tả chi xây dựng sở tập hợp mô tả loài chi Nếu mô tả có khác biệt so với tài liệu gốc tài liệu khác (thường số loài chi tài liệu khác nhau), có ghi bổ sung Sử dụng máy định vị toàn cầu (GPS) Garmin Hc Vistra đo tọa độ địa lý, độ cao so với mặt nước biển (a.s.l.), để ghi nhận điểm phân bố, tuyến điều tra Định loại mẫu vật thu phương pháp hình thái so sánh sở mẫu vật có đối chiếu với tài liệu công bố Sử dụng số tài liệu tham khảo: Cây cỏ Việt Nam Phạm Hoàng Hộ, Thực vật chí Trung Quốc, Thực vật chí đại cương Đông Dương, Thực vật chí Việt Nam…, mẫu vật sau xác định khoa học lưu giữ Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật 2.5.2 Phương pháp nhân giống Xây dựng rừng giống vườn giống Rừng giống lựa chọn thung Lung Khăm (độ cao từ 400 đến 600m) Pu Cọ (độ cao 900m), thuộc Bản Bung, huyện Na Hang, Tuyên Quang; kích thước 10  20 m (200m2) Tam Đảo (Vĩnh Phúc), rừng giống chia làm 25 luống, luống cách 20 cm; luống trồng 100 hom Trong đó, số loại hom sử dụng cho nghiên cứu gồm 1.000 hom ngọn, 1.000 hom thân rễ 500 hom sử dụng thuốc kích thích Vườn giống lựa chọn Bung (Na Hang, Tuyên Quang) vườn ươm VQG Tam Đảo (Vĩnh Phúc); kích thước (10 x m) 50 m2 ; độ cao 400m so với mặt nước biển; giống trồng túi PE đục lỗ, có kích thước 20  15  15 cm Chọn loại hom: hom (120 hom), hom thân rễ (120 hom) hom có sử dụng chất kích thích (120 hom) Nhân giống từ hạt: Hạt loài Asarum balansae Asarum glabrum thu vào tháng 7/2011; loài Asarum caudigerum thu vào tháng 3-4/2012; tách hạt khỏi quả; làm hạt; phân loại hạt, loại bỏ hạt màu vàng nhạt, hạt lép; đem phơi khô bảo quản túi PE (polyethylene); trước gieo, ủ hạt với cát ẩm thời gian 10 ngày; sau gieo 60 hạt vào túi [8] Nhân giống từ hom: Thu vào buổi sáng sớm, lựa chọn khỏe mạnh, tỉa cắt hom với kích thước dài từ 15-20 cm Lựa chọn loại hom: Hom thân - phần gốc cây; hom - phần ngọn, giữ lại non Cắt hom xong, để vào chậu nước đủ ngập 3-5 cm phần gốc; đem giâm hom vào luống túi PE làm đất, góc nghiêng hom 60 o, khoảng cách hom 20 cm, chiều sâu từ 4-7 cm [8] Chăm sóc bảo quản: Rừng giống vườn giống tưới nước hàng ngày, bảo vệ cẩn thận hàng rào chắn xung quanh, để tránh trâu bò loại động vật khác tàn phá 2.5.3 Phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu Đối tượng nghiên cứu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae), thu Na Hang (Tuyên Quang); Mẫu vật lưu giữ Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Nguyên liệu chưng cất toàn (thân rễ) loài nói chưng cất phương pháp chưng cất lôi nước có hồi lưu thiết bị Clevenger với thời gian áp suất thường Hàm lượng tinh dầu tính theo nguyên liệu khô không khí nguyên liệu khô tuyệt đối Hòa tan 1,5 mg tinh dầu làm khô natrisunfat khan 1ml metanol tinh khiết sắc ký loại dùng cho phân tích phổ Sắc ký khí-khối phổ (GC/MS): Việc phân tích định tính thực hệ thống thiết bị sắc ký khí phổ ký liên hợp GC/MS hãng Agilent Technologies HP 6890N Agilent Technologies HP 6890N ghép nối với Mass Selective Detector Agilent HP 5973 MSD Cột HP-5MS có kích thước 0,25 m x 30 m x 0,25 mm HP1 có kích thước 0,25 m x 30 m x 0,32 mm Chương trình nhiệt độ với điều kiện 60 oC/2 phút; tăng nhiệt độ 4oC/1 phút 220oC, sau lại tăng nhiệt độ 20 o/phút 260oC; với He làm khí mang Tra thư viện phổ Willey/ Chemstation HP [25] Bảng Điều kiện tự nhiên khu vực nghiên cứu Khu OTC vực cấp I Nà Niếng Lung Khăm Độ Vị trí cao (m) Độ dốc Nhiệt độ (oC) Độ (%) ẩm Độ gặp Chân núi 430 0o 24,5 82 Thường gặp Sườn núi 440 26o 24,3 84 Ít gặp Đỉnh núi 626 58o 24,5 75 Không gặp Chân núi 420 0o 24,5 83 Thường gặp Sườn núi 446 29o 24,4 84 Ít gặp Đỉnh núi 632 62o 24,5 76 Không gặp Khảo sát khu vực thung Nà Niếng thung Lung Khăm Bản Bung, mật độ tái sinh tự nhiên loài Biến hóa núi cao (A balansae) thể qua bảng Bảng Đặc điểm tái sinh chất lƣợng tái sinh tự nhiên loài Biến hóa núi cao (A balansae) Mật Nguồn gốc tái sinh OTC Khu cấp vực I Số tái Chồi Hạt Số Số Nà Niếng Lung Khăm độ Chất lượng tái sinh % sinh/ Tổng % 1.000 Số m2 Trung Tốt bình % Số % Xấu Số % 133 117 97,5 2,5 120 5.000 11 10 47 39 60 51 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 264 85 76,6 26 23,4 111 4.625 85 76,6 18 16,2 7,2 0 100 42 100 0 0 0 0 0 0 0 0 Bảng cho thấy, khu vực, mật độ tái sinh chân núi (OTC1) cao (từ 4.625 đến 5.000 cây/1000m2), trung bình 4.812 cây/1000m2, đó, tái sinh có nguồn gốc từ chồi chiếm ưu (từ 76,6-97,5%); tái sinh có nguồn gốc từ hạt chiếm tỷ lệ tương đối thấp (từ 2,5-23,4%) Tỷ lệ tái sinh có nguồn gốc từ chồi khu vực Nà Niếng (97,5%) cao so với Lung Khăm (76,6%); đó, tỷ lệ tái sinh có nguồn gốc từ hạt khu vực Nà Niếng (2,5%) lại thấp Lung Khăm (23,6%) Điều cho thấy, khu vực Nà Niếng có tác động mạnh người qua việc khai thác chăn thả động vật nuôi (trâu, bò) (gần khu vực sinh sống người Tày Bản Bung) Loài Biến hóa núi cao bắt đầu hoa từ tháng 10 hàng năm, trùng vào thời điểm vụ mùa đông xuân, người dân địa phương không chăn thả trâu bò Bản Bung, trâu bò chăn thả cánh rừng gần khu vực sinh sống, đó, khu vực Nà Niếng địa điểm thích hợp Cũng vậy, loài Biến hóa núi cao bị tác động mạnh vào giai đoạn hoa khu vực Nà Niếng, khả tái sinh có nguồn gốc từ hạt giảm khả tái sinh từ chồi tăng lên Điều ảnh hưởng lớn đến chất lượng tái sinh có khác biệt rõ rệt khu vực Nà Niếng Lung Khăm Tỷ lệ tốt khu vực Lung Khăm (chiếm 76,6%) cao so với khu vực Nà Niếng (chiếm 10%); tỷ lệ xấu tương ứng khu vực 7,2% 51% Tại sườn núi (OTC2) khu vực Nà Niếng Lung Khăm, gặp loài Biến hóa núi cao, mật độ tái sinh tương đối thấp (từ đến 42 cây/1.000m2), trung bình 21 cây/1.000m2 Tại khu vực đỉnh núi (OTC3) không gặp loài Asarum balansae Như mật độ tái sinh trung bình khu vực nghiên cứu đạt 1.611 cây/1.000m2 Như vậy, mật độ tái sinh loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) chân núi cao (từ 46.250 đến 50.000 cây/ha), đó, tái sinh có nguồn gốc từ chồi chiếm ưu (từ 76,6-97,5%); tái sinh có nguồn gốc từ hạt chiếm tỷ lệ tương đối thấp (từ 2,5-23,4%) Tại sườn núi, gặp loài A balansae, mật độ tái sinh tương đối thấp (từ đến 417 cây/ha) Chất lượng tái sinh không đồng khu vực khác nhau: tỷ lệ tốt (10-76,6%); tỷ lệ trung bình (16,2-39%) tỷ lệ xấu (7,2-51%) 3.1.4 Phân bố Trong nước: Hà Giang (Phó Bảng), Cao Bằng (Quảng Hòa), Ba Vì (Hà Nội), Tuyên Quang (Na Hang), Hòa Bình (Lạc Sơn) Quảng Trị (Hướng Hóa) Trên giới, phân bố Trung Quốc Nhật Bản 3.1.5 Giá trị sử dụng Đây loài có nguồn gen quý hiếm, phân hạng EN (Nguy cấp) Sách Đỏ Việt Nam (2007)[5] Danh mục rừng, Động vật rừng nguy cấp, quý, (nhóm 2) Nghị định số32/2006/NĐ – CP ngày 30/3/2006 Chính phủ để hạn chế khai thác sử dụng mục đích thương mại Tại số địa phương miền núi nước ta, loài biến hóa núi cao sử dụng làm thuốc chữa ho, chữa cảm sốt viêm phế quản Tại khu bảo tồn thiên nhiên (KBTTN) Na Hang, huyện Na Hang, tỉnh Tuyên Quang, người Tày sử dụng làm men rượu để sản xuất rượu ngô (rượu men lá), người Dao sử dụng rễ làm thuốc chữa ho 3.2 Khả nhân giống loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) Từ sở trên, tiến hành nhân giống loài Asarum balansae địa điểm Bung rừng giống (thung Lung Khăm) vườn giống (bản Bung), số liệu thu bảng Qua bảng cho thấy, tỷ lệ phát triển từ hom thân rễ cao so với hom ngọn; tỷ lệ phát triển từ hom kích thích cao so hom tự nhiên Đặc biệt, chưa thấy nảy mầm từ hạt (Ảnh 9) Bảng Đặc điểm tái sinh nhân tạo loài Biến hóa núi cao (A balansae) Khu vực nhân Loại hom Tỷ lệ Nảy mầm Ra Ra rễ Số lượng 912 854 813 % 91,2 85,4 81,3 Hom Số lượng 750 689 570 Rừng (1.000 hom) % 75 68,9 57 giống Hom Số lượng 435 402 386 % 87 80,4 77,2 Hạt Số lượng 0 (60 hạt) % 0 Hom thân Số lượng 114 108 98 (120 hom) % 95,00 90,00 81,6 Hom Số lượng 120 120 118 (120 hom) % 100 100 98,3 Hạt Số lượng 0 (60 hạt) % 0 giống hạt Hom thân rễ (1.000 hom) KT (500 hom) Vườn giống 3.3 Thành phần hóa học tinh dầu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) 3.3.1 Quy trình chưng cất tinh dầu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Nguyên liệu toàn loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) thu hái KBTTN Na Hang Thân rễ sau xử lý sơ cắt nhỏ (rửa sạch, bỏ sâu, dập) say nhuyễn với nước cho vào bình cầu (nồi áp suất) Ráp hệ thống chưng cất tiến hành chưng cất tinh dầu Sau để nguội, dùng ống đong chiết lấy phần tinh dầu phía trên, làm khan Na2SO4 thu tinh dầu sản phẩm (Ảnh 6,7,6) Sơ đồ tách chiết tinh dầu loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) Nguyên liệu ↓ Xử lý sơ ↓ Bình cầu(nồi áp xuất) ↓ Hệ thống chưng cất ↓ Ống đong ↓ Lớp tinh dầu ↓ Na2SO4 → Làm khan ↓ Tinh dầu thành phẩm 3.3.2 Thành phần hóa học tinh dầu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Sau phân tích tinh dầu loài Biến hóa núi cao hệ thống thiết bị sắc ký khí phổ ký liên hợp GC/MS hãng Agilent Technologies HP 6890N Viện Hóa Học hợp chất tự nhiên, thu 18 hợp chất thể qua bảng Bảng Thành phần hóa học tinh dầu số loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae.) Việt Nam STT Asarum Thành phần balansae hóa học (%) α-pinene Camphene β-pinene 0,42 δ-3-caren 0,14 4-terpineol 0,19 α-terpineol 0,14 bornyl acetate 0,25 methyl eugenol 1,21 α –humulene 0,13 10 germacren D 0,55 11 β-selinene 0,16 12 Elemicine 71,53 13 germacren b 0,55 14 α-cedrol 0,92 15 trans isoelemicin 19,85 0,12 - 16 trans asaron 0,81 17 3-fluoropyridin 1,68 18 Tatorol 0,14 Tổng 98,90 Hàm lượng tinh dầu loài Asarum balansae đạt 0,02% (theo nguyên liệu khô không khí) Tinh dầu chất lỏng màu vàng chanh, có mùi thơm nhẹ nặng nước Tinh dầu từ loài Aarum balansae chứa 18 hợp chất, chiếm 98,9% tổng hàm lượng tinh dầu Thành phần hóa học tinh dầu elemicin (71,53%) trans isoelemicin (19,85%) (bảng 5) Như có đa dạng khác thành phần hóa học hàm lượng thành phần tinh dầu loài nói Loài Asarum balansae có thành phần tinh dầu hợp chất elemicin (71,53%); trans isoelemicin (19,85%); loài Asarum cordifolium có thành phần tinh dầu hợp chất elemicin (84,38%) Trong loài Asarum petelotii có thành phần tinh dầu myristicin (59,06%) dilapiol (17,67%); loài Asarum yunnanense có thành phần hợp chất E -methyl isoeugenol (47,39%), cis-β-elemen (5,94%), bicyclogermacren (4,58%), myristicin (4,26%), δ-elemen (4,90%) KẾT LUẬN Từ kết dẫn liệu thu được, rút số kết luận đây: Đã cung cấp thêm số dẫn liệu đặc điểm sinh học, sinh thái, phân bố, công dụng loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Loài Asarum balansae phân bố tập trung chủ yếu dải đất chân núi, tạo thành đám nhỏ Mật độ phân bố đạt 1.611 cây/1.000m2Trong đó, đáng ý tái sinh có nguồn gốc từ chồi với loài A balansae chiếm ưu (từ 76,6-97,5%) Còn tái sinh có nguồn gốc từ hạt chiếm tỷ lệ tương đối thấp (từ 2,5-23,4%) Đã nghiên cứu khả nhân giống loài Asarum balansae Tại khu vực vườn rừng (trong điều kiện tự nhiên) tỷ lệ sống loài A balansae từ hom thân rễ đạt 81,3% hom đạt 57 Tại khu vực (vườn ươm), tỷ lệ sống từ hom thân loài A balansae đạt 98% Thành phần hóa học tinh dầu Asarum balansae elemicin (71,53%), trans isoelemicin (19,85) Đây dẫn liệu thành phần hóa học tinh dầu loài Biến hóa núi cao Việt Nam Kiến nghị: Để bảo tồn (cả in situ ex situ) bền vững loài chi Hoa tiên (Asarum) Việt Nam việc nghiên cứu nhân giống, theo dõi sinh trưởng phát triển chúng cần phải tiếp tục thời gian Đặc biệt việc tiếp tục nghiên cứu khả nhân giống từ hạt loài nói TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân, (1999), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Đại học Quốc gia Hà Nội, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên)(2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Tập II Nxb Nông nghiệp, Hà Nội trang 125-126 Đỗ Huy Bích nnk.,(2006)Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam, tập 1, 928-930 Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Bộ Khoa học Công nghệ (2008), Quy phạm soạn thảo Thực vật chí Việt Nam, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Hà Nội Bộ Khoa học Công nghệ, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, (2007), Sách Đỏ Việt Nam, phần II - Thực Vật Nxb Khoa học tự nhiên Công nghệ Trang: 94-98 Võ Văn Chi & Trần Hợp (1999-2001), Cây cỏ có ích Việt Nam, tập 12 Nxb Giáo dục, Hà Nội Võ Văn Chi, (2003), Từ điển thực vật thông dụng, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trang: 375-377 Dự án VN 06/011 (2010), Tài liệu kỹ thuật Bảo tồn phát triển nguồn gen quí hệ sinh thái núi đá vôi xã Thí Phìn Tùng, Đồng Văn, Hà Giang Nxb KHTN & CN Trần Minh Hợi (2004), Thành phần hoá học tinh dầu thổ tế tân (Asarum caudigerum Hance) Hương Sơn (Hà Tĩnh), Tạp chí Sinh học, 26(4): 59-60 10 Phạm Hoàng Hộ (1999-2000), Cây cỏ Việt Nam, I, II, III Nxb Trẻ, Thành phố Hồ Chí Minh, trang 305-306 11 Trần Huy Thái, Đỗ Thị Hiền, Nguyễn Thị Minh, Nguyễn Anh Tuấn (2010), Thành phần hóa học tinh dầu hoa tiên (Asarum glabrum Merr.) Hà Giang, Việt Nam, Tạp chí Sinh học, 32(1): 94-96 12 Nguyễn Nghĩa Thìn (1997), Cẩm nang nghiên cứu Đa dạng sinh vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 13 Nguyễn Nghĩa Thìn (2007), Phương pháp nghiên cứu thực vật, tr 171, Nxb Đại học quốc gia Hà Nội 14 Nguyễn Duy Thuần, Nguyễn Chiến Binh, Phan Văn Kiệm (2007), “Nghiên cứu thành phần hoá học Tế hoa Petelot (Asarum petelotii O.C Schmidt) mọc Tam Đảo, Vĩnh Phúc”, Tạp chí Dược học, 9: 3033 15 Nguyễn Anh Tuấn, Trần Huy Thái, Jenn-Che Wang, Chang-Tse Lu, (2012), “ Bổ sung loài Asarum cordifolium C E C Fischer (họ Mộc hương - Aristolochiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 34(2): 197-200 16 Nguyễn Anh Tuấn, Trần Huy Thái, Jenn-Che Wang, Chang-Tse Lu, (2012), “Bổ sung loài Asarum yunnanense T Sugaw., Ogisu & C Y Cheng (họ Mộc hương - Aristolochiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 34(4): 441-445 17 Nguyễn Anh Tuấn, Trần Huy Thái, Jenn-Che Wang, Chang-Tse Lu, (2012), “Bổ sung loài Asarum cordifolium C E C Fischer (họ Mộc hương – Aristolochiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 34(2): 197-200 18 Nguyễn Anh Tuấn, Trần Huy Thái, Jenn-Che Wang, Chang-Tse Lu, (2012),“ Bổ sung loài Asarum yunnanense T Sugaw., Ogisu & C Y Cheng (họ Mộc hương - Aristolochiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 34(4): 441-445 19 Nguyễn Anh Tuấn, Trần Huy Thái,“ Đặc điểm sinh thái phân bố loài biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Tại bung, huyện Na Hang, tỉnh Tuyên Quang”, Tạp chí sinh học, 2012,34(1):75-81 Tiếng nƣớc 20 Bai-Bo Xie, Ming-Ying Shang, Xuan Wang, Shao-Qing Cai, Kuo- Hsiung Lee (2011),“ A new aristolochic acid derivative from Asarum himalaicum”, Acta pharmaceutica Sinica, 46(2): 188-92 21 Chang-Tse Lu, Wen-Liang Chiou, Shu-Chuan Liu and Jenn-Che Wang, (2010), “Asarum satsumense F Maekawa (Aristolochiaceae) - A newly recorded species in Taiwan”, Taiwania, 55(4): 396-401 22 Huang S F., T H Hsieh and T C Huang (1995), “ Note on the Flora of Taiwan (21) - The genus Asarum L (Aristolochiaceae)”, Taiwania, 40(2): 91-120 23 Huang S F., T H Hsieh and T C Huang (2010), “ Flora of Taiwan”, International Journal of life Sciences, 55(2): 637-651 24 Hwang Shu-Mei, Wong Siu Tak-Ping (1990), “A new species of Asarum from HongKong”, Acta Phytotaxonomica Sinica, 28(5): 406-408 25 Joulain D, Koenig W.A(1998), The Atlas of Spectral Data of Secqyitecpene Hydrocarbons, 658 pp, E, B Verlag, Hamburg 26 Kess W J., R A DeFilipps, E Farr & Y Kyi (2003) A checklist of the trees, Shrubs, Herbs and Climbers of Myanmar Nat Mus Natur Hist., Smithsonian Inst., Washington, DC 27 Oh Byoung-Un, Ok-Hyon Nam and Jae-Gil Kim (1997), A new species of Asarum sect, Asiasarum from Korea, A misandrum B Oh et J Kim Kor J Plant Tax., 27(4): 491-499 28 Ohwi J (1965), Flora of Japan Smithsonia Institution, Washington (English version translated by Meyer F G & Walker E H.) 29 Satake Y and Y Momiyama (1982), Aristolochiaceae In Y Satake et al (ed.), Wild Flowers of Japan II: 102-109 Heibonsha, Tokyo, Japan 30 Sugawara T., (1991), The genus Asarum, characteristics, classification, and relationships Proc Jap Soc P1 Tax 8: 83-90 (tiếng Nhật) 31 Sugawara T (1996), “ A new species of Asarum (Aristolochiaceae) from Goto Islands, Japan”, Acta Phytotax Geobot., 47(2): 135-141 32 Wu Zheng-yi, Peter H Raven et al (2003), Flora of China, volume 5: 246-257 Missouri Botanical Garden Press 33 Yang ZL, Jiang MX, Li FS, Xu KP, Tan GS (2006), Studies on the chemical constituents from Asarum chinese Franch, f fargesii (Franch.) C Y Cheng (II) Zhong Yao Cai., 29(2):130-2 34 Yong Wang, Qing-Feng Wang, Wahiti Robert Gituru, and You-Hao Guo (2004), A New Species of Asarum (Aristolochiaceae) from China, NOVON, 14: 239-241 PHỤ LỤC KÝ HIỆU VIẾT TẮT CÁC PHÒNG TIÊU BẢN (Thường gặp mục “Typus” “Mẫu nghiên cứu”) HN = Herbarium, Institute of Ecology and Biological Resources, Hanoi Vietnam (Phòng tiêu thực vật, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật) HNPM = Herbarium, National Institute of Medicinal Materials, Hanoi, Vietnam (Phòng tiêu thực vật, Viện Dược liệu, Hà Nội) HNU = Herbarium, Hanoi National University, Hanoi, Vietnam (Phòng tiêu thực vật, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội) [...]... 118 (120 hom) % 100 100 98,3 Hạt Số lượng 0 0 0 (60 hạt) % 0 0 0 giống và hạt Hom thân rễ (1.000 hom) KT (500 hom) Vườn giống 3.3 Thành phần hóa học của tinh dầu của loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch. ) 3.3.1 Quy trình chưng cất tinh dầu của loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch. ) Nguyên liệu là toàn cây của các loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch. ) thu hái được ở KBTTN Na... QUẢ 3.1 Đặc điểm sinh học, sinh thái và phân bố của loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch. ) 3.1.1 Danh pháp và vị trí phân loại Loài Biến hóa núi cao có tên khoa học là Asarum balansae Franch hay có tên khác là: Tế hoa, Tế tân, Thổ tế tân Biến hóa núi cao thuộc chi Hoa tiên (Asarum L .), họ Mộc hương (Aristolochiaceae), bộ Hồ tiêu( Piperales), phân lớp Ngọc lan( Magnoliidae) 3.1.2 Đặc điểm nhận... loài A balansae từ hom thân rễ đạt 81,3% và hom ngọn đạt 57 Tại khu vực (vườn ươm), tỷ lệ sống từ hom thân của loài A balansae đạt 98% 4 Thành phần hóa học chính của tinh dầu Asarum balansae là elemicin (71,53 %), trans isoelemicin (19,8 5) Đây là các dẫn liệu mới về thành phần hóa học của tinh dầu các loài Biến hóa núi cao ở Việt Nam Kiến nghị: Để bảo tồn (cả in situ và ex situ) bền vững các loài trong... lượng tinh dầu của loài Asarum balansae đạt 0,02% (theo nguyên liệu khô không kh ) Tinh dầu là chất lỏng màu vàng chanh, có mùi thơm nhẹ và nặng hơn nước Tinh dầu từ loài Aarum balansae chứa 18 hợp chất, chiếm 98,9% tổng hàm lượng tinh dầu Thành phần hóa học chính của tinh dầu là elemicin (71,53 %) và trans isoelemicin (19,85 %) (bảng 5) Như vậy có sự đa dạng và khác nhau về thành phần hóa học và hàm... sơ bộ ↓ Bình cầu(nồi áp xuất) ↓ Hệ thống chưng cất ↓ Ống đong ↓ Lớp tinh dầu trên ↓ Na2SO4 → Làm khan ↓ Tinh dầu thành phẩm 3.3.2 Thành phần hóa học trong tinh dầu loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch. ) Sau khi phân tích tinh dầu của loài Biến hóa núi cao bằng hệ thống thiết bị sắc ký khí và phổ ký liên hợp GC/MS của hãng Agilent Technologies HP 6890N tại Viện Hóa Học các hợp chất tự nhiên,... thành phần chính trong tinh dầu của các loài nói trên Loài Asarum balansae có thành phần chính trong tinh dầu là hợp chất elemicin (71,53 %); trans isoelemicin (19,85 %); loài Asarum cordifolium cũng có thành phần chính của tinh dầu là hợp chất elemicin (84,38 %) Trong khi đó loài Asarum petelotii có thành phần chính của tinh dầu là myristicin (59,06 %) và dilapiol (17,67 %); loài Asarum yunnanense có thành. .. Mật độ phân bố và tái sinh tự nhiên của loài Biến hóa núi cao (A balansae) Số liệu bảng 2 cho thấy, loài Biến hóa núi cao (A balansae) phân bố tập trung tại các thung dọc theo đường mòn ở chân núi, nơi có độ ẩm cao, độ che phủ ít Tại các sườn núi, ít gặp; đặc biệt, tại các đỉnh và dông núi, không thấy xuất hiện loài Biến hóa núi cao Bảng 2 Điều kiện tự nhiên tại các khu vực nghiên cứu Khu OTC vực... thành phần chính là hợp chất E -methyl isoeugenol (47,39 %), cis-β-elemen (5,94 %), bicyclogermacren (4,58 %), myristicin (4,26 %), δ-elemen (4,90 %) KẾT LUẬN Từ các kết quả và những dẫn liệu thu được, chúng tôi rút ra được một số kết luận dưới đây: 1 Đã cung cấp thêm một số dẫn liệu mới về đặc điểm sinh học, sinh thái, phân bố, công dụng của loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch. ) 2 Loài Asarum balansae. .. 0,012 19,5 Dẫn liệu ở bảng 1 cho thấy, chiều dài trung bình của hạt là 0,44 mm, chiều ngang trung bình là 0,22 mm và trong lượng trung bình của hạt là 0,012 g Số lượng hạt trung bình ở mỗi quả là 19,5 3.1.3.2 Một số đặc điểm sinh thái của loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch. ) ở bản Bung huyện Na Hang tỉnh Tuyên Quang[18] Một số đặc điểm về môi trường sống tại khu vực nghiên cứu Khu bảo tồn thiên... (201 0), Thành phần hóa học của tinh dầu hoa tiên (Asarum glabrum Merr .) ở Hà Giang, Việt Nam, Tạp chí Sinh học, 32( 1): 94-96 12 Nguyễn Nghĩa Thìn (199 7), Cẩm nang nghiên cứu Đa dạng sinh vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 13 Nguyễn Nghĩa Thìn (200 7), Phương pháp nghiên cứu thực vật, tr 171, Nxb Đại học quốc gia Hà Nội 14 Nguyễn Duy Thuần, Nguyễn Chiến Binh, Phan Văn Kiệm (200 7), Nghiên cứu thành phần hoá học ... loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.5.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái Để nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái loài Biến hóa núi. .. loài chi Hoa tiên(Asarum spp.), đặc biệt loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) nước Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái, loài Biến hóa núi cao (Asarum balansae Franch.) Nghiên cứu. .. 3.1.3.1 Một số đặc điểm hình thái hạt loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) Các đặc điểm hình thái hạt loài Biến hóa núi cao( Asarum balansae Franch.) thể qua bảng Bảng Một số đặc điểm