Nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản và thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai tripneustes gratila (linnaeus, 1758)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HOÀNG HÀ GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH LÝ SINH SẢN VÀ THỬ NGHIỆM SINH SẢN NHÂN TẠO CẦU GAI Tripneustes gratila (Linnaeus, 1758) LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 60620301 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS LÊ MINH HOÀNG TS HUỲNH MINH SANG CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG KHOA SAU ĐẠI HỌC PGS.TS LẠI VĂN HÙNG Khánh Hòa – 8/2014 i    LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila (Linnaeus, 1758)” công trình nghiên cứu cá nhân chưa công bố công trình khoa học khác thời điểm Tác giả luận văn Hoàng Hà Giang ii    LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài, nhận giúp đỡ quý phòng ban trường Đại học Nha Trang, Viện Nuôi trồng thủy sản, Khoa Sau Đại học, Trung tâm Thí nghiệm Thực hành, Tổ bảo vệ tạo điều kiện tốt cho hoàn thành đề tài Đặc biệt hướng dẫn tận tình TS Lê Minh Hoàng TS Huỳnh Minh Sang giúp hoàn thành tốt đề tài Qua đây, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giúp đỡ Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn tới cán viên chức Thư viện Viện Hải dương học nhiệt tình giúp đỡ tài liệu cần thiết để thực đề tài Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến tất quý thầy, cô giáo viện Nuôi trồng thủy sản – Trường Đại học Nha Trang truyền đạt cho kiến thức làm sở tảng cho thực đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình tất bạn bè giúp đỡ, động viên suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, ngày 25 tháng năm 2014 Người thực Hoàng Hà Giang iii    MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC BẢNG .v DANH MỤC HÌNH vi TÓM TẮT vii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm sinh học cầu gai Tripneustes gratilla 1.1.1 Hình thái phân loại 1.1.2 Đặc điểm sinh sản 1.1.3 Vai trò cầu gai hệ sinh thái 1.2 Đặc điểm sinh lý sinh sản cầu gai 1.2.1 Đặc điểm cấu tạo tinh trùng 1.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt lực tinh trùng 1.2.3 Đặc điểm cấu tạo trứng 1.3 Tình hình nghiên cứu cầu gai 10 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 10 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam .14 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .16 2.1 Thời gian địa điểm đối tượng nghiên cứu 16 2.2 Vật liệu nghiên cứu .17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Đặc điểm sinh lý sinh sản 17 2.3.1.1 Đặc tính lý học tinh trùng cầu gai 17 2.3.1.2 Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng .18 2.3.1.3 Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng 19 2.3.1.4 Ảnh hưởng nồng độ ion (K+, Ca2+, Na+, Mg2+) lên hoạt lực tinh trùng .19 2.3.2 Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai 19 2.3.2.1 Phương pháp thụ tinh .19 2.3.2.2 Xác định tỉ lệ thụ tinh tỉ lệ nở 20 2.3.2.3 Quan sát trình phát triển phôi 20 iv    2.4 Phương pháp xử lý số liệu 20 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .21 3.1 Đặc điểm sinh lý sinh sản .21 3.1.1 Đặc tính lý học tinh trùng cầu gai 21 3.1.2 Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng 21 3.1.3 Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng 24 3.1.4 Ảnh hưởng nồng độ ion (K+, Ca2+, Mg2+, Na+) lên hoạt lực tinh trùng 26 3.1.4.1 Ảnh hưởng ion K+ lên hoạt lực tinh trùng 26 3.1.4.2 Ảnh hưởng ion Ca 2+ lên hoạt lực tinh trùng .27 3.1.4.3 Ảnh hưởng ion Mg 2+ lên hoạt lực tinh trùng 29 3.1.4.4 Ảnh hưởng ion Na+ lên hoạt lực tinh trùng 31 3.2 Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila 33 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO .41 PHỤ LỤC 45 v    DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Nồng độ thẩm thấu ion dịch khoang thể cầu gai bổ sung ion Mg2+, Ca2+, K+ 12 Bảng 3.1 Đặc tính lý học tinh trùng .21 Bảng 3.2 Quá trình phát triển phôi cầu gai Tripneustes gratila 33 vi    DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình thái cầu gai Tripneustes gratilla (Linnaeus, 1758) .3 Hình 1.2 Cấu tạo tinh trùng .6 Hình 1.3 Cấu tạo trứng cầu gai Hình 1.4 Quá trình phát triển phôi cầu gai .10 Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 16 Hình 2.2 Cá thể cầu gai trước sau giải phẫu 18 Hình 3.1 Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng 23 Hình 3.2 Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng 25 Hình 3.3 Ảnh hưởng ion K+ lên hoạt lực tinh trùng 27 Hình 3.4 Ảnh hưởng ion Ca2+ lên hoạt lực tinh trùng 29 Hình 3.5 Ảnh hưởng ion Mg2+ lên hoạt lực tinh trùng 30 Hình 3.6 Ảnh hưởng ion Na+ lên hoạt lực tinh trùng 32 Hình 3.7 Các giai đoạn phát triển phôi cầu gai 36 vii    TÓM TẮT Nghiên cứu thực từ tháng 12/2013 đến tháng 6/2014, loài cầu gai Trippneustes gratila (Linnaeus, 1758) Mục tiêu nghiên cứu tìm đặc điểm sinh lý sinh sản cầu gai, thử nghiệm sinh sản nhân tạo loài Thông qua quan sát ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu, nồng độ ion để đánh giá đặc điểm sinh lý tinh trùng Quan sát ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng kiểm tra mức pha loãng 1:1; 1:25; 1:50; 1:100; 1:200 (tinh dịch:nước biển nhân tạo), tỉ lệ pha loãng tốt dùng để tiến hành quan sát áp suất thẩm thấu, ion Quan sát ảnh hưởng áp suất thẩm thấu kiểm tra mức áp suất 100, 200, 300, 400 500 mOsm/kg Quan sát ảnh hưởng ion kiểm tra ion K+, Na+, Ca2+ , Mg2+ với nồng độ 0,2M; 0,4M; 0,6M 0,8M Kết cho thấy, tỉ lệ pha loãng tốt cho tinh trùng cầu gai 1:50, vận tốc tinh trùng sau pha loãng 3s 126,33±0,67µm/s phần trăm hoạt lực 95,67±0,67% Áp suất thẩm thấu phù hợp cho tinh trùng cầu gai 500 mOsm/kg, tinh trùng có hoạt lực với vận tốc đạt 94,33±2,72µm/s Nồng độ ion phù hợp cho tinh trùng K+ 0,4M; Ca2+ 0,8M; Mg2+ 0,2M; Na+ 0,2M Trong thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai, kết cho thấy, tỉ lệ thụ tinh đạt 84,8% Quá trình phát triển phôi trải qua 11 giai đoạn sau 65 phôi phát triển thành giai đoạn tiền ấu trùng, tỉ lệ nở đạt 80,7% Từ khóa: Cầu gai, Tripneustes gratila, tinh trùng, hoạt lực, phát triển phôi 1    MỞ ĐẦU Tripneustes gratilla (Linnaeus, 1758) loài cầu gai nhiệt đới có giá trị kinh tế với tốc độ tăng trưởng cao [26]; [36] Từ lâu, nhiều nơi giới người ta biết sử dụng tuyến sinh dục cầu gai để chế biến ăn có lợi cho sức khỏe, cầu gai chế biến thành ăn ăn sống với chanh, hay sashimi, susi Tại Nhật Bản, trứng giá bán lẻ với giá 450$/kg [52] Ngoài giá trị thương mại, cầu gai có vai trò quan trọng hệ sinh thái, với san hô, biển gai chúng tạo nên mắt xích quan trọng chu trình thức ăn rạn san hô [6] Việc khai thác ạt, gây sụt giảm đáng kể suất cầu gai toàn cầu [41] Sự suy giảm khai thác tự nhiên cho thấy quan tâm ngày tăng việc tăng giá trị thương mại cầu gai thông qua việc nuôi trồng bảo vệ nguồn lợi Trong việc tìm các thông số môi trường tối ưu cho tăng trưởng, sinh sản thụ tinh cầu gai có vai trò quan trọng Tại vùng biển nhiệt đới, cầu gai Tripneustes gratilla có tốc độ tăng trưởng nhanh giá trị kinh tế cao, loài tiềm cho việc phát triển nuôi trồng loài nước nhiệt đới ven biển Và coi mục tiêu nuôi trồng số nước, Úc, Philippines [26]; [35]; [41]; [46], sản xuất với số lượng nhỏ Nhật Bản [12]; [46] Tuy nhiên, việc thiếu liệu liên quan đến điều kiện nuôi tối ưu, thông số phù hợp cho tăng trưởng, sinh sản, phát triển hạn chế việc phát triển nuôi đối tượng [14] Đã có nhiều nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản cầu gai Tripneustes gratila thực hiện: nghiên cứu vòng đời cầu gai [59] nghiên cứu thụ tinh phát triển phôi [57]; [42]; [38] nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng tới phát triển biến thái ấu trùng [41], hướng dẫn chu kỳ phát triển tuyến sinh dục cách làm tiêu [60]; ảnh hưởng canxi lên hoạt lực tinh trùng cầu gai [13], tiếp cận tinh trùng trứng hình thành giao tử [15], ảnh hưởng axit hóa đại dương làm giảm tỉ lệ thụ tinh cầu gai [30]; ảnh hưởng ion kim loại nặng lên hoạt lực tinh trùng cầu gai [50] Tuy nhiên, công trình nghiên cứu tìm đặc điểm sinh lý sinh sản thử nghiệm sinh sản nhân tạo loài hạn chế Tại vịnh Nha Trang, cầu gai Tripneustes gratila (Linnaeus, 1758) loài phân bố phổ biến, có giá trị kinh tế cao, người ta thường khai thác nhóm cầu gai có đường kính 65 – 130mm nhóm 90 – 100 mm chiếm ưu Những năm 1990 trở lại 2    đây, cầu gai Tripneustes gratilla trở thành sản phẩm quan trọng nghề cá Việt Nam, chúng bị khai thác ạt để xuất sang nước Nhật Bản, Đài Loan … [3] Theo Ngô Trọng Lư [65] riêng năm 1993 Nha Trang khai thác 500 cầu gai vỏ, 30 trứng xuất Trứng cầu gai có hàm lượng prôtêin cao (20 - 25%), bổ dưỡng, dùng để chế biến trứng sống Sushi người Nhật Bản trứng sống ăn với mù tạt nhà hàng Việt Nam Nhưng nay, nghiên cứu cầu gai Tripneustes gratila Việt Nam hạn chế, sản lượng khai thác chủ yếu tự nhiên nên việc nuôi trồng đối tượng chưa ý Xuất phát từ yêu cầu “Nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila (Linnaeus, 1758)” thực hiện: Đề tài thực với nội dung sau: - Đặc điểm sinh lý sinh sản + Đặc tính lý học tinh trùng cầu gai +Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng +Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng +Ảnh hưởng nồng độ ion (K+, Ca2+, Na+, Mg2+) lên hoạt lực tinh trùng - Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila Mục tiêu tổng thể: Mục tiêu nghiên cứu tìm đặc điểm sinh lý sinh sản cầu gaivà thử nghiệm sinh sản nhân tạo loài Mục tiêu cụ thể: Kéo dài thời gian sống khả hoạt lực tinh trùng cầu gai môi trường nhằm tăng tỉ lệ thụ tinh tinh trùng phục vụ cho sản xuất giống nhân tạo loài cầu gai Kiểm tra tỉ lệ thụ tinh tỉ lệ nở điều kiện nhân tạo Việt Nam Ý nghĩa khoa học: Nghiên cứu có tác dụng điều kiện tối ưu cho hoạt lực tinh trùng cầu gai thành công việc thử nghiệm sinh sản nhân tạo Các kết nghiên cứu dùng làm tiền đề cho nghiên cứu loài cầu gai khác Việt Nam Do thời gian vốn kiến thức hạn chế nên báo cáo tránh khỏi thiếu sót Kính mong đón nhận đóng góp thầy cô bạn để báo cáo hoàn chỉnh 45    PHỤ LỤC Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng cầu gai a Thời gian hoạt lực (s) Descriptives Thời gian hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 52,3250 507,6750 180,00 360,00 N Mean 280,0000 Std Deviation 91,65151 Std Error 52,91503 1:25 660,0000 60,00000 34,64102 1:50 1:100 840,0000 60,00000 34,64102 690,9517 1:200 360,0000 60,00000 34,64102 Total 15 676,0000 368,79727 95,22305 1:1 1240,0000 173,20508 100,00000 510,9517 809,0483 600,00 720,00 809,7347 1670,2653 1140,00 1440,00 989,0483 780,00 900,00 210,9517 509,0483 300,00 420,00 471,7669 880,2331 180,00 1440,00 Thời gian hoạt lực Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana 1:1 1:200 1:25 1:100 1:50 Sig 280,0000 360,0000 3 3 3 660,0000 840,0000 ,347 ,050 1240,0000 1,000 b Vận tốc tinh trùng (µm/s) sau khoảng thời gian 3s, 60s, 120s, 180s Descriptives Vận tốc tinh trùng sau s N Std Deviation 3,00000 Std Error 1,73205 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 112,5476 127,4524 1:1 Mean 120,0000 Minimum 117,00 Maximum 123,00 1:25 118,0000 1,73205 1,00000 113,6973 122,3027 117,00 120,00 1:50 126,3333 1,15470 ,66667 123,4649 129,2018 125,00 127,00 1:100 123,6667 1,15470 ,66667 120,7982 126,5351 123,00 125,00 1:200 121,3333 3,78594 2,18581 111,9285 130,7381 117,00 124,00 Total 15 121,8667 3,62268 ,93537 119,8605 123,8728 117,00 127,00 46    Vận tốc tinh trùng sau s Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 118,0000 120,0000 120,0000 121,3333 121,3333 N Duncana 1:25 1:1 1:200 3 1:100 1:50 Sig 3 123,6667 ,136 123,6667 126,3333 ,205 ,105 Descriptives Vận tốc tinh trùng sau 60 s N Std Deviation 3,60555 Std Error 2,08167 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 104,0433 121,9567 1:1 Mean 113,0000 Minimum 110,00 Maximum 117,00 1:25 114,3333 7,76745 4,48454 95,0379 133,6288 108,00 123,00 1:50 125,0000 2,00000 1,15470 120,0317 129,9683 123,00 127,00 1:100 122,6667 2,51661 1,45297 116,4151 128,9183 120,00 125,00 1:200 119,0000 1,73205 1,00000 114,6973 123,3027 117,00 120,00 Total 15 118,8000 5,94258 1,53437 115,5091 122,0909 108,00 127,00 Vận tốc tinh trùng sau 60 s Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana 3 113,0000 114,3333 1:200 119,0000 1:100 1:50 1:1 1:25 119,0000 122,6667 125,0000 Sig ,123 ,123 Vận tốc tinh trùng sau 120 s Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana 1:25 1:1 3 1:200 1:100 1:50 Sig 110,6667 113,0000 113,0000 115,6667 115,6667 118,0000 122,0000 ,200 ,148 ,200 1,000 47    Descriptives Vận tốc tinh trùng sau 120 s N Std Deviation 3,60555 Std Error 2,08167 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 104,0433 121,9567 1:1 Mean 113,0000 Minimum 110,00 Maximum 117,00 1:25 110,6667 1,15470 ,66667 107,7982 113,5351 110,00 112,00 1:50 122,0000 1,73205 1,00000 117,6973 126,3027 120,00 123,00 1:100 118,0000 1,73205 1,00000 113,6973 122,3027 117,00 120,00 1:200 115,6667 1,15470 ,66667 112,7982 118,5351 115,00 117,00 Total 15 115,8667 4,43793 1,14587 113,4090 118,3243 110,00 123,00 Vận tốc tinh trùng sau 180 s Nghiemthuc N Duncana 1:200 1:25 1:100 1:1 1:50 3 3 Sig 44,6667 48,3333 Subset for alpha = 0.05 67,6667 79,6667 114,6667 ,428 1,000 1,000 1,000 Descriptives Vận tốc tinh trùng sau 180 s 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation 6,65833 Std Error 3,84419 Lower Bound 63,1265 Upper Bound 96,2069 Minimum 72,00 Maximum 84,00 1:1 Mean 79,6667 1:25 48,3333 3,21455 1,85592 40,3479 56,3187 46,00 52,00 1:50 114,6667 2,51661 1,45297 108,4151 120,9183 112,00 117,00 1:100 67,6667 8,96289 5,17472 45,4016 89,9317 62,00 78,00 1:200 44,6667 2,51661 1,45297 38,4151 50,9183 42,00 47,00 Total 15 71,0000 26,58679 6,86468 56,2767 85,7233 42,00 117,00 c Phần trăm tinh trùng hoạt lực (%) sau khoảng thời gian (3s, 60s, 120s, 180s) Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau s Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 87,3333 1:200 1:100 89,6667 89,6667 1:25 90,6667 90,6667 1:1 1:50 Sig N Duncana ,090 92,3333 92,3333 ,165 95,6667 ,078 48    Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau s N Std Deviation 2,51661 Std Error 1,45297 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 86,0817 98,5849 1:1 Mean 92,3333 Minimum 90,00 Maximum 95,00 1:25 90,6667 1,15470 ,66667 87,7982 93,5351 90,00 92,00 1:50 95,6667 1,15470 ,66667 92,7982 98,5351 95,00 97,00 1:100 89,6667 2,51661 1,45297 83,4151 95,9183 87,00 92,00 1:200 87,3333 2,51661 1,45297 81,0817 93,5849 85,00 90,00 Total 15 91,1333 3,37780 ,87214 89,2628 93,0039 85,00 97,00 Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau 60 s Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana 1:200 1:100 3 1:1 1:25 1:50 Sig 3 81,0000 84,6667 84,6667 87,0000 87,0000 90,6667 ,068 ,221 ,068 95,6667 1,000 Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau 60 s N Std Deviation 2,00000 Std Error 1,15470 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 82,0317 91,9683 1:1 Mean 87,0000 Minimum 85,00 Maximum 89,00 1:25 90,6667 1,15470 ,66667 87,7982 93,5351 90,00 92,00 1:50 95,6667 1,15470 ,66667 92,7982 98,5351 95,00 97,00 1:100 84,6667 2,08167 1,20185 79,4955 89,8378 83,00 87,00 1:200 81,0000 3,60555 2,08167 72,0433 89,9567 78,00 85,00 Total 15 87,8000 5,53173 1,42829 84,7366 90,8634 78,00 97,00 49    Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau 120 s N Std Deviation 5,00000 Std Error 2,88675 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 62,5793 87,4207 1:1 Mean 75,0000 Minimum 70,00 Maximum 80,00 1:25 81,6667 2,88675 1,66667 74,4956 88,8378 80,00 85,00 1:50 91,6667 2,88675 1,66667 84,4956 98,8378 90,00 95,00 1:100 71,6667 2,88675 1,66667 64,4956 78,8378 70,00 75,00 1:200 65,0000 5,00000 2,88675 52,5793 77,4207 60,00 70,00 Total 15 77,0000 9,96422 2,57275 71,4820 82,5180 60,00 95,00 Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau 120 s Nghiemthuc 1:200 65,0000 1:100 71,6667 N Duncana 1:1 1:25 1:50 Sig 3 Subset for alpha = 0.05 71,6667 75,0000 75,0000 81,6667 ,061 ,317 ,061 91,6667 1,000 Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau 180 s N Std Deviation 5,00000 Std Error 2,88675 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 2,5793 27,4207 1:1 Mean 15,0000 Minimum 10,00 Maximum 20,00 1:25 38,3333 2,88675 1,66667 31,1622 45,5044 35,00 40,00 1:50 85,0000 5,00000 2,88675 72,5793 97,4207 80,00 90,00 1:100 58,3333 2,88675 1,66667 51,1622 65,5044 55,00 60,00 1:200 45,0000 5,00000 2,88675 32,5793 57,4207 40,00 50,00 Total 15 48,3333 24,17693 6,24246 34,9446 61,7221 10,00 90,00 Phần trăm tinh trùng hoạt lực sau 180 s Nghiemthuc N Duncana 1:1 1:25 1:200 1:100 3 3 1:50 Sig 15,0000 Subset for alpha = 0.05 38,3333 45,0000 58,3333 85,0000 1,000 ,086 1,000 1,000 50    Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng Descriptives Thời gian hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 Lower Bound ,0000 Upper Bound ,0000 Minimum ,00 Maximum ,00 Osomol 100 Mean ,0000 Osomol 200 120,0000 60,00000 34,64102 -29,0483 269,0483 60,00 180,00 Osomol 300 1940,0000 183,30303 105,83005 1484,6500 2395,3500 1740,00 2100,00 Osomol 400 1780,0000 270,55499 156,20499 1107,9042 2452,0958 1500,00 2040,00 Osomol 500 2540,0000 307,89609 177,76389 1775,1437 3304,8563 2280,00 2880,00 15 1276,0000 1075,10000 277,58963 680,6295 1871,3705 ,00 2880,00 Total Thời gian hoạt lực Nghiemthuc Duncana Subset for alpha = 0.05 ,0000 120,0000 1780,0000 N Osomol 100 Osomol 200 Osomol 400 3 Osomol 300 Osomol 500 3 Sig 1940,0000 2540,0000 ,485 ,356 1,000 Descriptives Vận tốc tinh trùng 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 Lower Bound ,0000 Upper Bound ,0000 Minimum ,00 Maximum ,00 Osomol 100 Mean ,0000 Osomol 200 ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 Osomol 300 48,3333 3,21455 1,85592 40,3479 56,3187 46,00 52,00 Osomol 400 55,6667 2,51661 1,45297 49,4151 61,9183 53,00 58,00 Osomol 500 94,3333 4,72582 2,72845 82,5938 106,0729 89,00 98,00 15 39,6667 37,29930 9,63064 19,0110 60,3223 ,00 98,00 Total 51    Vận tốc tinh trùng Nghiemthuc N Duncana Osomol 100 Osomol 200 Osomol 300 Osomol 400 3 3 Osomol 500 Sig Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 48,3333 55,6667 1,000 1,000 1,000 94,3333 1,000 Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 Lower Bound ,0000 Upper Bound ,0000 Minimum ,00 Maximum ,00 Osomol 100 Mean ,0000 Osomol 200 ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 Osomol 300 2,3333 ,57735 ,33333 ,8991 3,7676 2,00 3,00 Osomol 400 6,0000 1,00000 ,57735 3,5159 8,4841 5,00 7,00 Osomol 500 20,0000 2,00000 1,15470 15,0317 24,9683 18,00 22,00 15 5,6667 7,80720 2,01581 1,3432 9,9902 ,00 22,00 Total Phần trăm tinh trùng hoạt lực Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana Osomol 100 ,0000 Osomol 200 ,0000 Osomol 300 Osomol 400 Osomol 500 Sig 2,3333 6,0000 20,0000 1,000 1,000 1,000 1,000 52    Ảnh hưởng nồng độ ion (K+, Ca2+, Mg2+, Na+) lên hoạt lực tinh trùng cầu gai a Ion K+ (0,2; 0,4; 0,6; 0,8 M) Descriptives Thời gian hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 Lower Bound ,0000 Upper Bound ,0000 Minimum ,00 Maximum ,00 KCl 0.2M Mean ,0000 KCl 0,4M 1200,0000 60,00000 34,64102 1050,9517 1349,0483 1140,00 1260,00 KCl 0,6M 620,0000 91,65151 52,91503 392,3250 847,6750 540,00 720,00 KCl 0,8M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 455,0000 523,35456 151,07945 122,4764 787,5236 ,00 1260,00 Total Thời gian hoạt lực Nghiemthuc N Duncana KCl 0.2M KCl 0,8M KCl 0,6M KCl 0,4M Sig 3 3 Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 620,0000 1,000 1200,0000 1,000 1,000 Descriptives Vận tốc tinh trùng 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 Lower Bound ,0000 Upper Bound ,0000 Minimum ,00 Maximum ,00 KCl 0.2M Mean ,0000 KCl 0,4M 79,6667 6,65833 3,84419 63,1265 96,2069 72,00 84,00 KCl 0,6M 48,3333 3,21455 1,85592 40,3479 56,3187 46,00 52,00 KCl 0,8M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 32,0000 35,50928 10,25065 9,4385 54,5615 ,00 84,00 Total Vận tốc tinh trùng Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana KCl 0.2M ,0000 KCl 0,8M ,0000 KCl 0,6M KCl 0,4M Sig 48,3333 79,6667 1,000 1,000 1,000 53    Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 Lower Bound ,0000 Upper Bound ,0000 Minimum ,00 Maximum ,00 KCl 0.2M Mean ,0000 KCl 0,4M 38,6667 2,30940 1,33333 32,9298 44,4035 36,00 40,00 KCl 0,6M 2,3333 ,57735 ,33333 ,8991 3,7676 2,00 3,00 KCl 0,8M Total ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 10,2500 17,19474 4,96369 -,6750 21,1750 ,00 40,00 Phần trăm tinh trùng hoạt lực Nghiemthuc N Duncana KCl 0.2M KCl 0,8M KCl 0,6M KCl 0,4M Sig 3 3 Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 2,3333 38,6667 ,050 1,000 b Ion Ca2+ (0,2; 0,4; 0,6; 0,8 M) Descriptives Thời gian hoạt lực N Std Deviation 34,64102 Std Error 20,00000 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 53,9469 226,0531 CaCl2 0,2M Mean 140,0000 CaCl2 0,4M 160,0000 34,64102 20,00000 73,9469 CaCl2 0,6M 180,0000 60,00000 34,64102 CaCl2 0.8M 360,0000 60,00000 12 210,0000 100,72465 Total Minimum 120,00 Maximum 180,00 246,0531 120,00 180,00 30,9517 329,0483 120,00 240,00 34,64102 210,9517 509,0483 300,00 420,00 29,07670 146,0026 273,9974 120,00 420,00 Thời gian hoạt lực Nghiemthuc N Duncana CaCl2 0,2M CaCl2 0,4M 3 CaCl2 0,6M CaCl2 0.8M Sig Subset for alpha = 0.05 140,0000 160,0000 180,0000 360,0000 ,365 Descriptives 1,000 54    Vận tốc tinh trùng N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound ,0000 ,0000 CaCl2 0,2M Mean ,0000 CaCl2 0,4M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 CaCl2 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 CaCl2 0.8M 37,6667 3,05505 12 9,4167 17,08513 Total Minimum ,00 Maximum ,00 ,0000 ,00 ,00 ,0000 ,0000 ,00 ,00 1,76383 30,0775 45,2558 35,00 41,00 4,93205 -1,4387 20,2720 ,00 41,00 Vận tốc tinh trùng Nghiemthuc N Duncana CaCl2 0,2M CaCl2 0,4M CaCl2 0,6M 3 CaCl2 0.8M Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 ,0000 37,6667 Sig 1,000 1,000 Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực N Std Deviation ,00000 Std Error ,00000 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound ,0000 ,0000 CaCl2 0,2M Mean ,0000 CaCl2 0,4M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 CaCl2 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 CaCl2 0.8M 23,3333 2,88675 12 5,8333 10,62444 Total Minimum ,00 Maximum ,00 ,0000 ,00 ,00 ,0000 ,0000 ,00 ,00 1,66667 16,1622 30,5044 20,00 25,00 3,06701 -,9171 12,5838 ,00 25,00 Phần trăm tinh trùng hoạt lực Nghiemthuc N Duncana CaCl2 0,2M CaCl2 0,4M CaCl2 0,6M 3 CaCl2 0.8M Sig Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 ,0000 23,3333 1,000 1,000 55    c Ion Mg2+ (0,2; 0,4; 0,6; 0,8 M) Descriptives Thời gian hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Mean 2720,0000 Std Deviation 210,71308 Std Error 121,65525 Lower Bound 2196,5597 Upper Bound 3243,4403 Minimum 2520,00 Maximum 2940,00 MgCl2 0,4M 1980,0000 216,33308 124,89996 1442,5988 2517,4012 1800,00 2220,00 MgCl2 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 MgCl2 0,8M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 1175,0000 1263,87931 364,85053 371,9694 1978,0306 ,00 2940,00 MgCl2 0,2M Total Thời gian hoạt lực Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 1980,0000 N Duncana MgCl2 0,6M MgCl2 0,8M MgCl2 0,4M MgCl2 0,2M Sig 3 3 1,000 2720,0000 1,000 1,000 Descriptives Vận tốc tinh trùng 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation 8,96289 Std Error 5,17472 Lower Bound 45,4016 Upper Bound 89,9317 Minimum 62,00 Maximum 78,00 MgCl2 0,2M Mean 67,6667 MgCl2 0,4M 55,6667 5,50757 3,17980 41,9851 69,3482 50,00 61,00 MgCl2 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 MgCl2 0,8M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 30,8333 32,81583 9,47311 9,9831 51,6835 ,00 78,00 Total Vận tốc tinh trùng Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana MgCl2 0,6M ,0000 MgCl2 0,8M ,0000 MgCl2 0,4M MgCl2 0,2M Sig 55,6667 67,6667 1,000 1,000 1,000 56    Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation 3,60555 Std Error 2,08167 Lower Bound 4,0433 Upper Bound 21,9567 Minimum 10,00 Maximum 17,00 MgCl2 0,2M Mean 13,0000 MgCl2 0,4M 5,6667 2,51661 1,45297 -,5849 11,9183 3,00 8,00 MgCl2 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 MgCl2 0,8M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 4,6667 5,88269 1,69819 ,9290 8,4044 ,00 17,00 Total Phần trăm tinh trùng hoạt lực Nghiemthuc N Duncana MgCl2 0,6M MgCl2 0,8M MgCl2 0,4M MgCl2 0,2M Sig 3 3 Subset for alpha = 0.05 ,0000 ,0000 5,6667 1,000 1,000 13,0000 1,000 d Ion Na+ (0,2; 0,4; 0,6; 0,8 M) Descriptives Thời gian hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean Mean 1560,0000 Std Deviation 334,06586 Std Error 192,87302 Lower Bound 730,1344 Upper Bound 2389,8656 Minimum 1260,00 Maximum 1920,00 1200,0000 103,92305 60,00000 941,8408 1458,1592 1140,00 1320,00 ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 N NaCl 0,2M NaCl 0,4M NaCl 0,6M NaCl0,8M Total ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 690,0000 747,86970 215,89139 214,8263 1165,1737 ,00 1920,00 Thời gian hoạt lực Nghiemthuc NaCl 0,6M Subset for alpha = 0.05 ,0000 NaCl0,8M ,0000 NaCl 0,4M NaCl 0,2M N Duncana Sig 1200,0000 1560,0000 1,000 Descriptives 1,000 1,000 57    Vận tốc tinh trùng 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation 4,58258 Std Error 2,64575 Lower Bound 94,6163 Upper Bound 117,3837 Minimum 102,00 Maximum 111,00 NaCl 0,2M Mean 106,0000 NaCl 0,4M 95,0000 4,35890 2,51661 84,1719 105,8281 90,00 98,00 NaCl 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 NaCl0,8M Total ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 50,2500 52,71040 15,21618 16,7594 83,7406 ,00 111,00 Vận tốc tinh trùng Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 ,0000 NaCl0,8M ,0000 NaCl 0,4M NaCl 0,2M N Duncana NaCl 0,6M 95,0000 106,0000 Sig 1,000 1,000 1,000 Descriptives Phần trăm tinh trùng hoạt lực 95% Confidence Interval for Mean N Std Deviation 5,00000 Std Error 2,88675 Lower Bound 67,5793 Upper Bound 92,4207 Minimum 75,00 Maximum 85,00 NaCl 0,2M Mean 80,0000 NaCl 0,4M 41,6667 2,88675 1,66667 34,4956 48,8378 40,00 45,00 NaCl 0,6M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 NaCl 0,8M ,0000 ,00000 ,00000 ,0000 ,0000 ,00 ,00 12 30,4167 34,86717 10,06529 8,2631 52,5702 ,00 85,00 Total Phần trăm tinh trùng hoạt lực Nghiemthuc Subset for alpha = 0.05 N Duncana NaCl 0,6M ,0000 NaCl 0,8M ,0000 NaCl 0,4M NaCl 0,2M Sig 41,6667 80,0000 1,000 1,000 1,000 58    MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU Hình Thu mua mẫu Hình Cầu gai bố mẹ 59    Hình Tuyến sinh dục sau giải phẫu Hình Thu trứng Hình Quan sát kính hiển vi [...]... thủy sản – Trường Đại học Nha Trang Thời gian: Từ ngày 06/12/2013 đến ngày 1/5/2014 Đối tượng nghiên cứu: Cầu gai Tripneustes gratilla (Linnaeus, 1758) được thu mua ở các chợ sau đó được lưu giữ tại phòng thí nghiệm Nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản và thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila (Linnaeus, 1758) Sinh lý sinh sản (tập trung vào sinh lý tinh trùng) Thử nghiệm sinh sản nhân. .. loại, đặc điểm hình thái lớp cầu gai, đặc điểm sinh sản và phát triển, cũng như giá trị thực tiễn của da gai Những nghiên cứu về đặc điểm sinh lý sinh sản của cầu gai tại Việt Nam còn rất hạn chế Phạm Thị Dự [3] đã công bố nghiên cứu sơ bộ về sự phát triển tuyến sinh dục của cầu gai (Tripneustes gratilla) tại Vịnh Nha Trang bằng phương pháp thu thập mẫu và nhuộm màu làm tiêu bản sau đó quan sát và đo... 1.1 Đặc điểm sinh học của cầu gai Tripneustes gratilla 1.1.1 Hình thái và phân loại Ngành: Echinodermata Lớp: Echinoidea Bộ: Temnopleuroida Họ: Toxopneustidae Giống: Tripneustes Loài: Tripneustes gratilla (Linnaeus, 1758) Hình 1.1 Hình thái ngoài của cầu gai Tripneustes gratilla (Linnaeus, 1758) Cầu gai Tripneustes gratilla, ở Việt Nam, tên thường gọi là cầu gai sọ dừa hay nhum sọ, là loài cầu gai. .. vị được hình thành theo phương thức lõm vào [4] Hình 1.4 Quá trình phát triển phôi ở cầu gai [63] 1.3 Tình hình nghiên cứu cầu gai 1.3.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới Sinh lý sinh sản đặc điểm đặc trưng của cơ thể sống, trong đó, việc sử dụng động vật da gai cho các mô hình nghiên cứu về sự sinh sản được coi là cách tốt nhất để khám phá các phân tử tham gia vào quá trình thụ tinh cũng như con đường... cho thấy tuyến sinh dục của cầu gai trải qua 4 giai đoạn phát triển: giai đoạn nghỉ, giai đoạn phục hồi và giai đoạn thành thục Nghiên cứu cũng chỉ ra mùa vụ sinh sản của cầu gai tại vịnh Nha Trang, trong đó tuyến sinh dục phát triển lớn nhất vào tháng 10 và tháng 11, mùa sinh sản kéo dài từ tháng 8 - 12, và đường kính tuyến sinh dục phụ thuộc vào nhiệt độ cũng như kích cỡ Mùa lạnh tuyến sinh dục nhỏ... lượng rất ít Cầu gai Tripneustes gratilla là loài có giá trị kinh tế, tuy nhiên vai trò của nó chưa được chú trọng, và số lượng đang ngày càng giảm sút đòi hỏi có nhiều hơn các nghiên cứu về loài cầu gai này để phục vụ cho việc nuôi trồng và bảo vệ nguồn lợi 16    Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian địa điểm và đối tượng nghiên cứu Địa điểm: Phòng thí nghiệm – Bộ môn Sinh học nghề... sinh sản nở rộ bắt đầu vào tháng 2 - 3 năm sau và giảm dần đến tháng 4 thì kết thúc mùa sinh sản, Sự thay đổi trong chu kỳ sinh sản giữa các quần thể cầu gai phụ thuộc vào sự biến động của lượng thức ăn và nhiệt độ nước [60] Sự suy giảm sản lượng cầu gai ngoài tự nhiên, đã cho thấy một tiềm năng sản xuất thương mại cầu gai Tripneustes gratilla tại Úc do khả năng sinh trưởng nhanh và 14    giá trị cao... sinh sản Mùa vụ sinh sản cũng ảnh hưởng lớn đến hoạt lực của tinh trùng Càng về cuối mùa sinh sản mật độ của tinh trùng càng giảm và khả năng hoạt lực cũng kém hơn Vào cuối mùa sinh sản tinh trùng sẽ bị lão hóa như thay đổi hình thái học, giảm khả năng hoạt lực 1.2.3 Đặc điểm cấu tạo trứng Không giống như trứng của nhiều loài động vật khác, trứng cầu gai đã hoàn thành giảm phân và được đẩy ra cực cầu. .. thường xuyên vệ sinh lồng để loại bỏ thức ăn dư thừa và chất thải Sau 2 – 3 tháng nuôi giảm mật độ nuôi, thu hoạch sau khoảng 6 - 8 tháng khi cơ thể cầu gai đạt đường kính 7 – 8 cm [51] 1.3.2 Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam Tại Việt Nam, các nghiên cứu về cầu gai còn rất hạn chế, chủ yếu là các nghiên cứu về phân loại danh mục động vật da gai Trong đó, có nghiên cứu của Đào Tấn Hổ [5 ]nghiên cứu danh mục... hô, gây mất cân bằng hệ sinh thái và hủy hoại đời sống của hệ sinh thái rạn san hô, lợi dụng điều này, năm 2011, các nhà khoa học đã thả 1.000 cá thể cầu gai xuống vịnh Kaneohe Bay để đối phó với loại rong biển ngoại lai thuộc giống Kappaphycus nhập từ Hawaii đang gây ra nạn “smothering seaweed” tại vịnh này [62] 1.2 Đặc điểm sinh lý sinh sản của cầu gai 1.2.1 Đặc điểm cấu tạo của tinh trùng Tương ... tiến hành nghiên cứu sinh lý sinh hóa tế bào trứng để hoàn thiện nghiên cứu sinh lý sinh sản cầu gai Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Nghiên cứu thành công việc thử nghiệm sinh sản cầu gai phòng... lực tinh trùng - Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila Mục tiêu tổng thể: Mục tiêu nghiên cứu tìm đặc điểm sinh lý sinh sản cầu gaivà thử nghiệm sinh sản nhân tạo loài Mục tiêu... tượng nghiên cứu: Cầu gai Tripneustes gratilla (Linnaeus, 1758) thu mua chợ sau lưu giữ phòng thí nghiệm Nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila