nghiên cứu sự phát triển in vitro của tế bào sâu khoang (spodoptera litura)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - - HÀ THỊ THU THỦY NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT TRIỂN IN VITRO CỦA TẾ BÀO SÂU KHOANG (Spodoptera litura) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - - HÀ THỊ THU THỦY NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT TRIỂN IN VITRO CỦA TẾ BÀO SÂU KHOANG (Spodoptera litura) CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ : 60420201 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS LÊ VĂN TRỊNH TS NGUYỄN HỮU ĐỨC HÀ NỘI - 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cao học công trình nghiên cứu riêng cá nhân Các tài liệu, số liệu nêu luận văn trung thực Các luận điểm kết nghiên cứu chưa công bố công trình khác Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Hà Thị Thu Thủy Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập hoàn thành luận văn này, nhận hướng dẫn nhiệt tình, giúp đỡ quý báu thầy cô, anh chị nơi công tác nơi học tập Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới: PGS.TS Lê Văn Trịnh – Giám đốc Trung tâm đấu tranh Sinh học, Viện Bảo vệ thực vật, người thầy đáng kính công việc sống, trực tiếp hướng dẫn định hướng chuyên môn đồng thời tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình công tác hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp TS Nguyễn Hữu Đức - Phó Trưởng Khoa Công nghệ Sinh học, Trưởng Bộ môn Công nghệ sinh học Động vật – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, người thầy kính mến quan tâm, giúp đỡ tận tình bảo cho nhiều kiến thức kinh nghiệm quý báu để hoàn thành luận văn Để thực nghiên cứu này, xin chân thành cảm ơn tài trợ từ đề tài cấp Nhà nước: “Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV-spl (Nucleo Polyhedrosis Virus) từ tế bào gốc sâu khoang để phòng trừ sâu hại trồng nông nghiệp” Tôi xin chân thành cảm ơn anh, chị nhóm đề tài, Trung tâm Sinh học Ban Giám đốc Viện Bảo vệ thực vật tạo điều kiện nhiệt tình giúp đỡ để hoàn thành tốt luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô hội đồng chấm luận văn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii cho đóng góp quý báu để hoàn chỉnh luận văn Cuối cùng, xin cảm ơn Thầy, Cô giáo; chuyên viên Ban quản lý đào tạo – Học viện Nông nghiệp Việt Nam ủng hộ, tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành thủ tục cần thiết để bảo vệ thành công luận văn Hà Nội, năm 2014 Tác giả luận văn Hà Thị Thu Thủy Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC .iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cơ sở khoa học đề tài nghiên cứu 1.2 Kết nghiên cứu nước 1.2.1 Mô bào điều kiện nhân nuôi tạo vật liệu tế bào 1.2.2 Kỹ thuật bảo quản tế bào 12 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả phát triển sinh khối tế bào 14 1.3 Kết nghiên cứu nước 23 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu, đối tượng địa điểm nghiên cứu 25 2.1.1 Vật liệu, đối tượng phạm vi nghiên cứu 25 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 26 2.2 Nội dung nghiên cứu 26 2.2.1 Nghiên cứu xác định mô bào điều kiện nhân nuôi tạo vật liệu tế bào khởi đầu 26 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 2.2.2 Nghiên cứu xác định mức độ ảnh hưởng yếu tố môi trường nhân nuôi đến khả phát triển sinh khối tế bào 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Các thí nghiệm thu thập phân lập tế bào sâu khoang 26 2.3.2 Nghiên cứu nhân nhân nuôi in vitro tế bào sâu khoang 30 2.3.3 Phương pháp đếm tế bào 32 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 34 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Phân lập mô bào nhân nuôi sơ cấp tạo vật liệu khởi đầu 35 3.2 Nhân nuôi thứ cấp 42 3.3 Kiểm tra tế bào kĩ thuật PCR 49 3.4 Kỹ thuật bảo quản lạnh đông tế bào nhiệt độ - 800C 51 3.5 Khả phát triển in vitro tế bào sâu khoang 53 3.5.1 Môi trường nhân nuôi thích hợp 53 3.5.2 Nhiệt độ nhân nuôi thích hợp 55 3.5.3 Điều kiện pH môi trường nhân nuôi thích hợp 57 3.5.4 Tỷ lệ FBS bổ sung thích hợp cho nhân nuôi 59 3.5.5 Xác định mật độ tế bào tối đa đạt nhân nuôi điều kiện in vitro tối ưu 63 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 65 Kết luận 65 Đề nghị 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC CÁC BẢNG STT 3.1 Trang Tên bảng Số lượng nguồn tế bào phân lập nhân nuôi tạo thực liệu dòng tế bào sâu khoang 35 3.2 Hàm lượng tế bào sau nhân nuôi sơ cấp mô tiền phôi 36 3.3 Hàm lượng tế bào sau nhân nuôi sơ cấp mô phôi 37 3.4 Hàm lượng tế bào sau nhân nuôi sơ cấp mô trứng 38 3.5 Hàm lượng tế bào từ mẫu mô bào tiềm sau 10 ngày nhân nuôi 3.6 39 Hàm lượng tế bào qua chu kỳ nhân nuôi sơ cấp mẫu tế bào tiềm 3.7 41 Hàm lượng tế bào nguồn thực liệu qua chu kỳ nhân nuôi thứ cấp 3.8 46 Ảnh hưởng mật độ tế bào ban đầu cấy vào bình đến phát triển sinh khối tế bào 3.9 47 Hàm lượng tế bào sau nhân nuôi trở lại qua tháng bảo quản mẫu tế bào 2.tp sử dụng mức DMSO bảo quản khác 53 3.10 Mật độ tế bào nhân nuôi môi trường khác 54 3.11 Hàm lượng tế bào mức nhiệt độ nhân nuôi khác 56 3.12 Ảnh hưởng độ pH môi trường nhân nuôi đến sinh khối tế bào 58 3.13 Mật độ tế bào thu bổ sung chất bổ trợ FBS với tỷ lệ 3.14 khác 61 Xác định mật độ tế bào thu nhân nuôi in vitro 63 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC CÁC HÌNH STT 1.1 Tên hình Trang Sơ đồ loài côn trùng cho thấy mô sử dụng cho phát triển dòng tế bào (Theo Lynn, 2001) 1.2 Số dòng tế bào phát triển từ năm 1962 đến năm 2000 (Theo Lynn, 2001) 2.1 Buồng đếm hồng cầu Neubauer 33 3.1 Tế bào sâu khoang sau tuần nuôi cấy 40 3.2 Diễn biến hàm lượng tế bào sinh khối qua chu kỳ nhân nuôi sơ cấp 42 3.3 Tế bào biểu mô chiếm ưu 43 3.4 Tế bào tròn nhỏ, dính hình thành khối trôi môi trường 3.5 3.6 45 Các tế bào tròn nhỏ trôi môi trường 45 10 Quần thể tế bào 2,0 x 10 tế bào/ml thu 27 ngày từ cấy vào bình nuôi 1,0 x 109 tế bào/ml Sử dụng buồng đếm hồng cầu để đếm mật độ tế bào 3.7 45 Diền biến hàm lượng tế bào qua lần cấy chuyển nhân nuôi thứ cấp 3.8 47 Ảnh hưởng mật độ tế bào ban đầu cấy vào bình đến phát triển sinh khối tế bào 48 3.9 Ảnh điện di sản phẩm PCR mẫu tế bào sâu khoang nhân nuôi 50 3.10 Cây phả hệ xây dựng theo phương pháp Neighbor-Joining 50 3.11 Hàm lượng tế bào môi trường nhân nuôi khác 55 3.12 Mật độ tế bào mức nhiệt độ nhân nuôi khác 57 3.13 Diễn biến mật độ tế bào sâu khoang nhân nuôi mức pH khác 3.14 59 Mật độ tế bào sâu khoang nhân nuôi môi trường có bổ sung FBS với tỷ lệ khác Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 62 Page vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Tên viết tắt % Phần trăm độ C C Tên viết đầy đủ Cm Centimet Cs cộng DMSO Dimethyl Sulfoxide Excell Excell 420-14419C FBS Fetal Bovine Serum G Gram Kg Kilogam 10 KTCN 11 Ml Mililit 12 µl Microlit 13 NPV Nucleo Polyhedrosis Virus 14 PBS Phosµphate Buffered Saline 15 Spl Spodoptera litura 16 Schneider Schneider S9895 17 TC-100 18 TNM-FH Kỹ thuật công nghệ TC-100 T3160 TNM-FH T3285 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.08564 0.08564 2.96 0.1458 Remainder 0.14448 0.02890 Relative Efficiency, RCB 1.30 Means of Sau for CT CT Mean EX 1.2677 S 1.1343 TC 1.1277 TNM 1.0830 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.1131 Std Error (Diff of Means) 0.1599 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 0.00300 0.00150 CT 1.20473 0.40158 Error 0.36064 0.06011 Total 11 1.56837 Grand Mean 1.3818 F P 6.68 0.0243 CV 17.74 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.00009 0.00009 0.00 0.9733 Remainder 0.36055 0.07211 Relative Efficiency, RCB 0.78 Means of Sau for CT CT Mean Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 84 EX 1.8847 S 1.0663 TC 1.1623 TNM 1.4137 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.1415 Std Error (Diff of Means) 0.2002 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 1.03884 0.51942 CT 0.51733 0.17244 Error 0.52774 0.08796 Total 11 2.08391 Grand Mean 1.2712 F P 1.96 0.2214 CV 23.33 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.03324 0.03324 0.34 0.5872 Remainder 0.49450 0.09890 Relative Efficiency, RCB 1.80 Means of Sau for CT CT Mean EX 1.6300 S 1.1707 TC 1.1523 TNM 1.1317 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.1712 Std Error (Diff of Means) 0.2422 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 85 Source DF SS MS NL 0.67370 0.33685 CT 1.50749 0.50250 Error 0.38325 0.06388 Total 11 2.56444 Grand Mean 1.1566 F P 7.87 0.0168 CV 21.85 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.04463 0.04463 0.66 0.4538 Remainder 0.33862 0.06772 Relative Efficiency, RCB 1.69 Means of Sau for CT CT Mean 24 0.6277 26 1.4957 28 1.4633 29 1.0397 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.1459 Std Error (Diff of Means) 0.2064 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 0.12984 0.06492 CT 0.56035 0.18678 Error 0.06880 0.01147 Total 11 0.75899 Grand Mean 0.8662 F P 16.29 0.0027 CV 12.36 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source Nonadditivity DF SS MS F P 0.02743 0.02743 3.31 0.1283 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 86 Remainder 0.04137 0.00827 Relative Efficiency, RCB 1.76 Means of Sau for CT CT Mean 24 0.5760 26 0.9440 28 1.1647 29 0.7800 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.0618 Std Error (Diff of Means) 0.0874 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 3969.8 793.97 CT 12922.8 4307.61 Error 15 12317.2 821.14 Total 23 29209.8 Grand Mean 113.42 F P 5.25 0.0113 CV 25.27 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source Nonadditivity Remainder DF SS MS F P 97.1 97.136 0.11 0.7436 14 12220.0 872.859 Relative Efficiency, RCB 0.97 Means of Sau for CT CT Mean 24 85.67 26 118.17 28 148.33 29 101.50 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 87 Observations per Mean Standard Error of a Mean 11.699 Std Error (Diff of Means) 16.544 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 1763.21 352.64 CT 3240.79 1080.26 Error 15 958.96 63.93 Total 23 5962.96 Grand Mean 80.292 F P 16.90 0.0000 CV 9.96 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF Nonadditivity Remainder SS MS F P 84.846 84.8463 1.36 0.2632 14 874.112 62.4366 Relative Efficiency, RCB 1.93 Means of Sau for CT CT Mean 24 65.833 26 90.333 28 93.000 29 72.000 Observations per Mean Standard Error of a Mean 3.2642 Std Error (Diff of Means) 4.6163 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 983.92 196.783 CT 1254.58 250.917 F P 5.29 0.0019 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 88 Error 25 1186.25 Total 35 3424.75 Grand Mean 51.250 47.450 CV 13.44 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P 51.64 51.6380 1.09 0.3064 24 1134.61 47.2755 Nonadditivity Remainder Relative Efficiency, RCB 1.45 Means of Sau for CT CT Mean pH 60 43.667 pH 62 53.167 pH 64 44.833 pH 66 56.167 pH 68 60.167 pH 70 49.500 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.8122 Std Error (Diff of Means) 3.9770 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 59.14 11.828 CT 918.47 183.694 Error 25 1130.69 45.228 Total 35 2108.31 Grand Mean 44.639 F P 4.06 0.0078 CV 15.07 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source Nonadditivity Remainder DF SS MS F P 9.96 9.9639 0.21 0.6483 24 1120.73 46.6971 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 89 Relative Efficiency, RCB 0.89 Means of Sau for CT CT Mean pH 60 40.333 pH 62 45.333 pH 64 40.500 pH 66 49.833 pH 68 52.500 pH 70 39.333 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.7455 Std Error (Diff of Means) 3.8828 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 703.14 140.628 CT 4815.47 963.094 Error 25 1435.69 57.428 Total 35 6954.31 Grand Mean 68.139 F P 16.77 0.0000 CV 11.12 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source Nonadditivity Remainder DF SS MS F P 261.75 261.749 5.35 0.0296 24 1173.95 48.914 Relative Efficiency, RCB 1.21 Means of Sau for CT CT Mean pH 60 62.000 pH 62 63.667 pH 64 49.333 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 90 pH 66 78.167 pH 68 85.000 pH 70 70.667 Observations per Mean Standard Error of a Mean 3.0938 Std Error (Diff of Means) 4.3752 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 288.89 57.778 CT 2451.56 490.311 Error 25 887.78 35.511 Total 35 3628.22 Grand Mean 36.778 F P 13.81 0.0000 CV 16.20 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source Nonadditivity Remainder DF SS MS F P 9.670 9.6705 0.26 0.6119 24 878.107 36.5878 Relative Efficiency, RCB 1.09 Means of Sau for CT CT Mean pH 60 30.667 pH 62 25.333 pH 64 35.333 pH 66 45.000 pH 68 49.667 pH 70 34.667 Observations per Mean Standard Error of a Mean 2.4328 Std Error (Diff of Means) 3.4405 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 91 Source NL CT DF SS MS 0.00671 0.00335 0.12853 0.02571 Error 10 0.25714 0.02571 Total 17 0.39238 Grand Mean 0.7701 F P 1.00 0.4653 CV 20.82 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.00029 0.00029 0.01 0.9218 Remainder 0.25685 0.02854 Relative Efficiency, RCB 0.88 Means of Sau for CT CT Mean FBS 10% 0.7363 FBS 15% 0.7663 FBS 20% 0.7970 FBS 25% 0.9370 FBS 5% 0.7133 không FBS 0.6707 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.0926 Std Error (Diff of Means) 0.1309 Randomized Complete Block AOV Table for sau Source DF SS MS NL 1.02522 0.51261 CT 3.80150 0.76030 Error 10 1.21701 0.12170 Total 17 6.04373 Grand Mean 1.3794 F P 6.25 0.0070 CV 25.29 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 92 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.17680 0.17680 1.53 0.2475 Remainder 1.04021 0.11558 Relative Efficiency, RCB 1.35 Means of sau for CT CT Mean FBS 10% 1.3650 FBS 15% 1.4690 FBS 20% 1.5440 FBS 25% 2.1647 FBS 5% 1.0787 không FBS 0.6550 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.2014 Std Error (Diff of Means) 0.2848 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Source DF SS MS NL 2.1881 1.09405 CT 16.6814 3.33628 Error 10 12.6601 1.26601 Total 17 31.5296 Grand Mean 2.4089 F P 2.64 0.0902 CV 46.71 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 1.6867 1.68671 1.38 0.2697 Remainder 10.9734 1.21926 Relative Efficiency, RCB 0.96 Means of Sau for CT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 93 CT Mean FBS 10% 2.4733 FBS 15% 3.0440 FBS 20% 3.1830 FBS 25% 3.2707 FBS 5% 1.9773 không FBS 0.5050 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.6496 Std Error (Diff of Means) 0.9187 Randomized Complete Block AOV Table for sau Source DF SS MS NL 0.14862 0.07431 CT 0.09300 0.04650 Error 0.06171 0.01543 Total 0.30333 Grand Mean 1.1529 F P 3.01 0.1591 CV 10.77 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.01241 0.01241 0.76 0.4487 Remainder 0.04930 0.01643 Relative Efficiency, RCB 1.79 Means of sau for CT CT Mean 1.0287 1.2777 1.1523 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.0717 Std Error (Diff of Means) 0.1014 Randomized Complete Block AOV Table for Sau Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 94 Source DF SS MS NL 0.05098 0.02549 CT 1.14214 0.57107 Error 1.76897 0.44224 Total 2.96210 Grand Mean 2.2880 F P 1.29 0.3693 CV 29.07 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.18126 0.18126 0.34 0.5995 Remainder 1.58771 0.52924 Relative Efficiency, RCB 0.70 Means of Sau for CT CT Mean 2.0550 2.7913 2.0177 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.3839 Std Error (Diff of Means) 0.5430 Randomized Complete Block AOV Table for sau Source DF SS MS NL 0.92042 0.46021 CT 0.42524 0.21262 Error 1.35636 0.33909 Total 2.70202 Grand Mean 2.5089 F P 0.63 0.5796 CV 23.21 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source Nonadditivity DF SS MS F P 0.16754 0.16754 0.42 0.5619 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 95 Remainder 1.18882 0.39627 Relative Efficiency, RCB 1.00 Means of sau for CT CT Mean 2.3023 2.8093 2.4150 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.3362 Std Error (Diff of Means) 0.4755 Randomized Complete Block AOV Table for sau Source DF SS MS 2.82223 1.41112 NL CT 0.06517 0.03259 Error 5.67208 1.41802 Total 8.55949 Grand Mean 3.0474 F P 0.02 0.9774 CV 39.08 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 3.01723 3.01723 3.41 0.1620 Remainder 2.65485 0.88495 Relative Efficiency, RCB 0.92 Means of sau for CT CT Mean 2.9413 3.1497 3.0513 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.6875 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 96 Std Error (Diff of Means) 0.9723 Randomized Complete Block AOV Table for sau Source DF SS MS NL 0.41792 0.20896 CT 0.74056 0.37028 Error 2.45397 0.61349 Total 3.61244 Grand Mean 2.3802 F P 0.60 0.5901 CV 32.91 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.01178 0.01178 0.01 0.9118 Remainder 2.44218 0.81406 Relative Efficiency, RCB 0.77 Means of sau for CT CT Mean 2.6747 2.4747 1.9913 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.4522 Std Error (Diff of Means) 0.6395 Randomized Complete Block AOV Table for sau Source DF SS MS NL 0.03267 0.01633 CT 1.41455 0.70727 Error 1.12503 0.28126 Total 2.57225 Grand Mean 1.4246 F P 2.51 0.1962 CV 37.23 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 97 Tukey's Degree of Freedom Test for Nonadditivity Source DF SS MS F P Nonadditivity 0.47576 0.47576 2.20 0.2348 Remainder 0.64927 0.21642 Relative Efficiency, RCB 0.70 Means of sau for CT CT Mean 1.8163 1.5760 0.8813 Observations per Mean Standard Error of a Mean 0.3062 Std Error (Diff of Means) 0.4330 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 98 [...]... nhiều ở các cơ quan nghiên cứu Xuất phát từ những yêu cầu thực tế trên chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu sự phát triển in vitro của tế bào sâu khoang (Spodoptera litura )” 2 Mục tiêu của đề tài Nghiên cứu phân lập và xác định mức độ tác động của các yếu tố có ảnh hưởng đến khả năng nhân nuôi thành công tế bào sâu khoang, nhằm phục vụ phát triển chế phẩm sinh học vi rút để phòng trừ sâu hại cây trồng... Eukaryota, là tế bào của sinh vật có nhân chuẩn, có màng nhân ngăn cách nhân với tế bào chất và trong nhân tế bào phân tử DNA kết hợp với các protein tạo thành các sợi nhiễm sắc thể (Sills, 2005) Chúng được chia thành 2 nhóm cơ bản: Tế bào toàn năng (totipotent) và tế bào vạn năng (pluripotent) bao gồm: tế bào mầm (còn gọi là nguyên bào) , tế bào phôi, tế bào đĩa mầm và tế bào tái sinh; Tế bào gốc đa năng... nuôi cấy tế bào ở nước ta Việc nghiên cứu nhân nuôi tế bào của các loài côn trùng và phát triển các kỹ thuật công nghệ nhân sinh khối tế bào côn trùng còn góp phần phục vụ nghiên cứu giám định bệnh lý côn trùng ở Việt Nam + Ý nghĩa thực tiễn Các kết quả nghiên cứu nhân nuôi tế bào sẽ góp thêm tư liệu nhằm phát triển sinh khối tế bào côn trùng, phục vụ sản xuất chế phẩm vi rút NPV để phòng trừ sâu hại... đối với loài sâu khoang (Spodoptera litura), qua các tài liệu thu thập được cho thấy có 4 công trình công bố đã phát triển được dòng tế bào phục vụ cho nghiên cứu và nhân nuôi sinh khối Kết quả công bố của Shih và Cs (1997) thì dòng tế bào sâu khoang IBLSLO1A được phát triển từ mô phôi phân lập từ nhộng Còn Pant và Cs (2000) phát triển dòng tế bào từ hồng cầu sâu khoang Theo tổng hợp của Zhang và Cs.(2008)... Phạm vi nghiên cứu Tập trung vào nghiên cứu khả năng phát triển sinh khối tế bào và các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng phát triển sinh khối tế bào 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu Các thí nghiệm được tiến hành tại Phòng thí nghiệm sinh học, Viện Bảo vệ thực vật, phường Đức Thắng, Bắc Từ Liêm, thành phố Hà Nội 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu xác định mô bào và điều kiện nhân nuôi tạo vật liệu tế bào khởi... (1956) đã phát triển một môi trường dựa trên phân tích sinh hóa chi tiết của tế bào máu tằm và chứng minh môi trường này gây ra sự tăng trưởng của tế bào từ mô buồng trứng của loài tằm Bombyx mori và đóng góp vào sự tăng trưởng và duy trì sự sống sót của tế bào trong phòng thí nghiệm trong thời gian dài đến ba tuần Và gần 50 năm sau nghiên cứu đầu tiên của Goldschmidt (1915), Grace (1962) đã nghiên cứu ra... Hình 1.1: Sơ đồ của một loài côn trùng cho thấy các mô có thể được sử dụng cho sự phát triển của các dòng tế bào (Theo Lynn, 2001) Ngoài các mô trên thì tổng hợp các tế bào tiền thân của mô trưởng thành (Imaginal discs) cũng là những mô quan trọng trong sự phát triển của tế bào côn trùng bởi vì chúng được xác định phát triển để trở thành cấu trúc đặc biệt, chúng không bao gồm những tế bào giống nhau;... đoạn tăng trưởng tế bào của các tế bào không bị nhiễm bệnh Dao động tối ưu cho việc thúc đẩy một giai đoạn tăng trưởng tế bào dài mà không làm giảm mật độ tế bào tối đa là từ 24 đến 280C Ở nhiệt độ dưới 220C, tế bào phát triển quá chậm và đã không đạt được một mật độ tế bào cao như đạt trong nuôi cấy ở 280C Theo tổng hợp tài liệu của Juan D Claus và Cs., việc nuôi cấy tế bào côn trùng in vitro ở nhiều... sinh hữu cơ Paolo Alto – Mỹ đã sử dụng tế bào côn trùng Sf9 để nghiên cứu và chẩn đoán nhanh các Baculovirus gây bệnh cho tôm và đã thành công Qua các kết quả nghiên cứu khoa học đã được công bố đã cho thấy việc nghiên cứu phát triển dòng tế bào côn trùng ở các nước trên thế giới đã phát triển mạnh mẽ và đạt nhiều thành công to lớn Việc nghiên cứu nhân nuôi tế bào đã phục vụ đắc lực cho hoạt động nghiên. .. được phân lập từ mô phôi của loài sâu đo xanh Trichoplusia ni Theo Sardud-Din và Cs (1996), trong nhân nuôi sinh khối tế bào từ các Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 8 tế bào gốc thì tế bào sẽ phân chia liên tục trong thời gian dài ở môi trường thích hợp Nếu mô tế bào phân lập không chứa tế bào gốc thì tế bào sẽ phát triển chậm hoặc phát triển với tốc độ giảm dần