Tuyển chọn chủng vi khuẩn acetobacter xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, ph, ứng dụng làm thạch dừa

Khoỏ lun tt nghip TRNG I HC S PHM H NI KHOA : SINH HC NGUYN TH QUANG K29A TUYN CHN CHNG VI KHUN ACETOBACTER XYLINUM CHO MNG DY, NGHIấN CU NH HNG CA ETANOL, AXIT AXETIC, (NH4)2SO4, pH,NG DNG LM THCH DA KHO LUN TT NGHIP I HC Chuyờn ngnh : Vi sinh vt Ngi hng dn : Thc s: Nguyn Khc Thanh H Ni: 2007 Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip LI CM N cú c s thnh cụng ca ti khoỏ lun, em ó nhn c s giỳp tõm huyt v tn tỡnh ca cỏc thy cụ b mụn Vi Sinh t thc vt, c bit l s giỳp ca thy Nguyn Khc Thanh v cụ inh th Kim Nhung cựng cỏc bn sinh viờn, nhng ý kin úng gúp ca cỏc bn nhúm vi sinh Em xin c by t lũng cm n chõn thnh v sõu sc nht v s giỳp quý bỏu ú ca cỏc thy cụ, cỏc bn nhúm vi sinh v ngi trc tip hng dn em l thy Nguyn Khc Thanh H Ni, thỏng 05 nm 2007 Sinh viờn: Nguyn th Quang Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip LI CAM OAN Khoỏ lun tt nghip ny c hon thnh di s hng dn tn tỡnh ca thc s Nguyn Khc Thanh Em xin cam oan rng: õy l kt qu nghiờn cu ca riờng em Kt qu ny khụng trựng vi kt qu ca bt kỡ tỏc gi no ó cụng b Nu sai em xin chu hon ton trỏch nhim Sinh viờn: Nguyn Th Quang Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip TểM TT CễNG TRèNH Thch da l sn phm c to thnh quỏ trỡnh nuụi cy vi sinh Acetobacter xylinum mụi trng nc da chuyn hoỏ thnh Hemixenluoza, qua ch bin v x lý cựng vi mt s nguyờn liu thnh thch da õy l mún n c truyn ca mt s nc ụng Nam : Philipin, Malaixia Vit Nam cng l mt nhng x s ca da Bờn cnh cỏc mún n c ch bin t da nh cm da, ko da, bỏnh a Thỡ thch da cng c khỏ nhiu ngi a thớch Thch da vi thnh phn chớnh l Hemixenluloza, cú tỏc dng giỳp cho quỏ trỡnh tiờu hoỏ tt hn, dng da, chng lóo hoỏ, gim cholesterol mỏu v phũng nga mt s bnh ung th nc ta, vic nghiờn cu ng dng vi khunAcetobacter xylinum v sn xut thch da rt ớt, xut hờn mt vi c s sn xut thch da (Thnh ph H Chớ Minh) nhng sn lng ớt nhu cu s dng thch da ngy cng tng, hn na ngun nguyờn liu li khỏ di ng trc nhu cu v tim nng ú cng nh vic nghiờn cu vi khun Acetobacter xylinum n vic ng dng to ngun thc n t nguyờn liu sn cú l mt vic lm cú ý ngha thc tin v lý lun sõu sc, vỡ vy tụi ó chn v nghiờn cu ti:Tuyn chn chng vi khun Acetobacter xylinum cho mng dy, nghiờn cu nh hng etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH, ng dng lm thch da Trong ti ny, t cỏc ngun nguyờn liu sn cú nc tụi ó phõn lp c 60 mu, tuyn chn c 02 chng vi khun Acetobacter xylinum cho mng dy hn c lm i tng nghiờn cu tip theo Nghiờn cu kh nng to mng chn hai chng vi khun Acetobacter xylinum l A3 v A6 cho mng dy nht Nghiờn cu tip theo l quan sỏt hỡnh dng t bo trờn kớnh hin vi quang hc Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin ca hai chng trờn Nghiờn c nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH ti quỏ trỡnh to mng ca hai chng ny ng dng hai chng ú vo lm thch da phm vi phũng thớ nghim Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip PHN T VN 1.1 Lý chn ti Cng nh cỏc linh vc khoa hc khỏc, cụng ngh vi sinh m tin thõn ca nú l cụng ngh lờn men c ó tri qua nhng chng ng phỏt trin y khú khn, phc ó t rt lõu ngi ó bit ng dng quỏ trỡnh lờn men sn xut vo i sng nh: Lm tng, mui da, lm bỏnh mỡ, sn xut bia ru m cha hiu ht bn cht ca quỏ trỡnh lờn men Cho n gn õy trờn th trng ó xut hin mt loi thc phm mi ú l thch da õy l mt loi thc phm c khỏ nhiu ngi u thớch v b dng: Giỳp cho quỏ trỡnh tiờu hoỏ tt hn, dng da, gim cholesterol mỏu, chng lóo hoỏ, ngn nga mt s bnh ung thTuy nhiờn nc mi ch mt vi c s sn xut, nhu cu s dng thch da ngy cng cao, hn na ngun nguyờn liu thụ sn xut li khỏ di v cng rt kh bo qun nc da ng trc tim nng v nhu cu y chỳng tụi ó chn v tin hnh nghiờn cu ti: :Tuyn chn chng vi khun Acetobacter xylinum cho mng dy, nghiờn cu nh hng etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH, ng dng lm thch da 1.2.Mc tiờu ca ti T cỏc ngun nguyờn liu: Bia, ru vang, hoa qu, gim tin hnh phõn lp tuyn chn cỏc chng cho mng dy, nghiờn cu nh hng ca mt s yu t ti quỏ trỡnh lờn men 1.3.Nhim v Phõn lp tuyn chn cỏc chng vi khun Acetobacter xylinum cho mng dy, t ú chn hai chng cho mng dy nht lm i tng nghiờn cu Tỡm hm lng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH thớch hp cho s phỏt trin ca hai chng Acetobacter xylinum tuyn chn c 1.4 í ngha lý lun v thc tin ca ti Nghiờn cu nhm i sõu tỡm hiu hỡnh thỏi, c tớnh sinh lý, sinh hoỏ ca cỏc chng Acetobacter xylinum cú kh nng cho mng dy Gúp phn tỡm hiu quỏ trỡnh sn xut thch da v nõng cao hiu qu sn xut Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Phn Tng quan ti liu 2.1 Lc s nghiờn cu v phõn loi vi khun Acetobacter xylinum (A.xylinum) 2.1.1.Lc s nghiờn cu vi khun A.xylinum Ngi ta thng gi quỏ trỡnh chuyn hoỏ ru thnh axit axetic l quỏ trỡnh lờn men axetic, nhng thc cht y l mt quỏ trỡnh oxi hoỏ, vi khun gõy quỏ trỡnh ny l vi khun axetic thuc ging Acetobacter Trc õy ngi mi ch ng dng quỏ trỡnh ny lm gim t ru vang hng mt cỏch th ng m cha h bit n c ch v bn cht cu nú Tuy vy ti nhng nm u ca th k 19 ngi ó iu ch c axit axetic m c, bit gim l sn phm lờn men ca nhúm vi sinh vt m ngy chỳng ta gi l Acetobacter hay vi khun axetic T ú n ó cú rt nhiu khoa hc nghiờn cu v loi vi khun ny Ngi u tiờn nhỡn thy vi sinh vt l Antoni Lvenhuc (1632-1723) v Person (1822) l ngi u tiờn nghiờn cu v axit axetic t lp mng mng phỏt trin trờn gim ễng ó chng minh c ú l mt loi vi sinh vt cú tờn l Mycoderma axetic Nm 1973 Kittzing nhn xột quỏ trỡnh lờn men gim nht thit phi cú vi sinh vt, nh vy ụng ó khng nh rừ vai trũ ca vi sinh vt quỏ trinh lờn men gim Cựng nm ú, Hansen cung tỏch c hai loi vi khun thun khit t mangf gim ụng gi ú l Mycoderma aceti v Mycoderma pasteurianum Nm (1862-1868) L.pasteur l ngi u tiờn khỏm phỏ c ch ca quỏ trỡnh lờn men axetic, ú l mt quỏ trỡnh oxi hoỏ ru etylic ễng ó chng minh s ỳng n nhn xột ca Kittzing & Hansen, khng nh bn cht ca quỏ trỡnh lờn men axetic Vi vic s dng kớnh hin vi bi Lvenhuc thỡ nhn thc v s tn ti ca th gii vi sinh vt mi thc s bt u, nh ú Pasteur ó xem xột s xut hin mng trờn bia v ru vang mt cỏch k lng Cui cựng ụng kt lun mng ú c to thnh mt loi trc khun (mng l hp nhng t bo trc khun) v ụng cng gi l Mycoderma aceti Nhng nghiờn cu tip theo nhm mc ớch ci tin quỏ trỡnh lờn men axetic Trờn c s ú ó cú rt nhiu quan im phõn loi khỏc i Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 2.1.2.Phõn loi vi khun Acetobacter T trc ti ó cú rt nhiu tỏc gi cp n ny ú ỏng chỳ ý nht l khoỏ phõn loi ca Beijerinck ễng phõn loi vi khun da vo hai du hiu Mt l: Kh nng s dng m amoni thc hin s sinh trng v phỏt trin Hai l: Cú hay khụng cú giai on di ng quỏ trỡnh phỏt trin Nm 1962 Heneberg ó chia tt c cỏc vi khun axetic thnh nhúm theo ni sng c trng ca chỳng Nhúm 1: Vi khun khụng phỏt trin trờn bia vỡ hoa Hublon c vi chỳng Nhúm 2: Vi khun phỏt trin trờn bia Nhúm 3: Vi khun phỏt trin dung dch ru vang Nhúm 4: Vi khun sn xut gim theo phng phỏp nhanh Nm 1934, theo nghiờn cu ca hi nh vi khun hc Hoa K, cỏc vi khun axetic cú kh nng s dng cỏc hp cht tng i n gin ca cacbon v nit nờn ó kt hp vo h Nitrobacteriaceae T ú vi khun gim gi tờn l Acetobacter Nm 1848 Vanght cụng b kt qu ca mỡnh ụng quan sỏt thy c s di ng ca nhiu loi Acetobacter aceti, Acetobacter pasteurianum, Acetobacter oxydans, Acetobacter malanogenum Vanght ó gii thớch rng cỏc loi trờn cựng mt loi cú n mao cc v ó xỏc nhn v trớ ca vi khun axetic h Pseudomonadaceae Ngy theo khoỏ phõn loi ca Bergeys v nhiu tỏc gi khỏc ó xp vi khun Acetobacter v Gluconobacter vo h Acetobacter iaceae Nm 1914 Bergeys phõn loi cỏc loi ging Acetobacter thnh hai loi - Loi 1: Oxi hoỏ axit axetic thnh CO2 v H2O + Loi ny s dng mui amoni lm ngun nit nht, i din l vi khun Acetobacter aceti + Khụng s dng mui amoni lm ngun nit nht Trờn b mt mụi trng dch th to mng nhy cú cha xenluloza, in hỡnh l acetobacter xylinum Trờn b mt mụi trng dch th khụng to mng nhy cha xenluloza, dng in hỡnh l Acetobacter rancens, Acetobacter pasteurianum Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip _ Loi 2: Vi khun khụng oxi hoỏ axit axetic +To thnh sc t trờn mụi trng glucoza Sc t nõu ti en nht : Acetobacter malanogenus Sc t hng: Acetobacter zancens + Khụng to thnh sc t Nhit thớch hp nht l 30-350C: Acetobacter suboxydans Nhit thớch hp gia 18-210C :Acetobacter oxydans Nm 1960 Shiwel v Car nghiờn cu v c trng nuụi cy sinh hoỏ ca vi khun Acetobacter v a kt lun khụng th cú s ng nht cỏc vi khun Acetobacter T nhng nghiờn cu v Acetobacter ngi ta ó khụng ngng phỏt huy vai trũ ca nú i sng ngi Nhu cu ca ngi vố s dng Acetobacter ngy cng a dng v chỳng c s dng nhiu cỏc cụng trỡnh khoa hc phc v nhu cu hng ngy nh: lờn men gim, ch bin thc n, sn xut vitaminC, B1, B2, B12, sn xut t nhõn to 2.2 c im chung v vi khun Acetobacter[2] Ngy ngi ta ó bit vi khun Acetobacter l tỏc nhõn chớnh ca quỏ trỡnh lờn men axetic Chỳng thuc vo ging vi khun Acetobacter chu mao hoc khụng b Gluconobacter n mao õy l ging vi khun axeticquan trng nht h Acetobaccter iaceae Chỳng ph bin trongt nhiờn, cú trờn b mt lỏ, hoa quchỳng to axix axetic t ru etylic Trong t bo Gluconobacter khụng cú chu trỡnh tricacboxylic hot ng nờn nú khụng th oxi hoỏ axetat nhng cú mt chu trỡnh khỏc thay th( chu trỡnh glyoxylat) Khụng oxi hoỏ axit axetic Khi so sỏnh vi khun ny vi nhng vi khun thuc ging pseudomonas thy cú c im tng t Chỳng ch khỏc pseudomonas ch chu c axit cao hn, kh nng chuyn hoỏ pepton yu ớt di ng v khụng sinh sc t.Nhiu loi vi khun Acetobacter phỏt trin trờn mụi trng thiu thc n hoc mụi trng ó nuụi cy lõu d lm bin i hỡnh thỏi thnh dng cú hỡnh thỏi c bit Vi khun Acetobacter dng hỡnh que, cú th cú tiờm mao, di ng , khụng sinh bo t,gram õm, hiu khớ bt buc Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Trờn c s da vo tớnh cht c trng ca vi khun Acetobacter m ngi ta xp chỳng vo nhúm c lp l kh nng oxi hoỏ ru etylic thnh axit axetic, pH=4,5 Ngoi chỳng cũn thc hin quỏ trỡnh oxi hoỏ khụng hon ton cỏc hp cht hu c khỏc to thnh cỏc hp cht xeton, Vi khun Acetobacter ch phỏt trin tt iu kin hiu khớ, nhit thớch hp t25-300C, pH thớch hp 5,4-6,8 hoỏ d dng hu c [10,15] c im phõn bit Acetobacter v Gluconobacter So sỏnh vi Pseudomonas c im so sỏnh Gluconobacter Acetobacter Pseudomonas n mao cc hoc Chu mao hoc Chu mao V trớ tiờm mao khụng khụng cc Phỏt trin pH=4.5 Oxy hoỏ etanol pH=4.5 Oxy hoỏ axit axetic Oxy hoỏ lactat Glucoza -> Gluconate S dng tinh bt lactose S dng Gelatin Sc t hunh quang + + _ + + _ _ + + _ + + + + _ _ _ _ _ _ V hỡnh dng t bo, vi khun Acetobacter l nhng trc khun hỡnh que, kớch thc trung bỡnh t 0,6-0,8àm Cỏc t bo ng tỏch riờng hoc xp thnh chui, loi c bit cú t bo hỡnh cu tu thuc vo iu kin pH mụi trng ,nhit nuụi cy [2].Vi khun Acetobacter khụng cú kh nng sinh bo t, to Nguyn Th Quang K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip mng nhy, mt s cú kh nng di ng nh tiờm mao,mt s khụng cú kh nng ny Khi nghiờn cu v khun lc v mng vi khun Acetobacter trờn mụi trng cy cho thy vi khun Acetobacter phỏt trin tt trờn mụi trng nc bia, cỏc mụi trng cú cha cao nm men:glucoza, ru etylic, hoc manitol Trờn mụi trng c chỳng phỏt trin nhng khun lc trũn u n ng kớnh trung bỡnh l 3mm, b mt trn búng, phn gia khgun lc ni lờn dy v sm hn cỏc phn xung quanh Mt s loi cú khun lc ln(d=4-5mm) b mt trn búng khụng cú mu, mng nh ht sng nh d dng dựng que cy gt mụi trung Trờn mụi trng lng vi khun axetic phỏt trin to thnh lp mng Dung dch di mng bao gi cng sut Khi nghiờn cu lp mng ny ngi ta thy cú si xenluloza ging nh si bụng Nhu cu dinh dng ca vi khun axetic i vi ngun cacbon, nit v cỏc cht sinh trng rt a dng Chỳng s dng ng, ru etylic, axit hu c lm ngun cacbon, mui amoni lm ngun nit Trong quỏ trỡnh phỏt trin chỳng cú nhu cu i vi mt s axit amin, cht kớch thớch sinh trng Mt s loi vi khun cú kh nng tng hp cỏc cht cao phõn t:xenluloza, tinh bt Con ngi ó ng dng iu ny sn xut cụng nghip Vi khun axetic cú kh nng oxi hoỏ gluxit theo my hng sau: -Hng 1: Khụng cú s photphoril hoỏ c cht vi s tham gia ca enzym c hiu -Hng 2: Oxxi hoỏ cỏc c cht ó c photphoril hoỏ ng pentozo photphat -Hng 3: Theo s ca Entenr-Doudoroff -Hng 4: Theo chu trỡnh Krebs hoc Glyoxylat 2.3.Mt s loi vi khun Acetobacter[10,15] 2.3.1.Acetobacter xylinum L nhng trc khun hỡnh que (2àm), ng riờng r hoc xp thnh chui, khụng di ng cỏc t bo c bao bc bi cht dy, to vỏng nhanh khỏ dy, bt mu xanh vi thuc nhum It v H2SO4 2.3.2 Acetobacter aceti Nguyn Th Quang 10 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip PHN KT QU NGHIấN CU V THO LUN 4.1 Phõn lp vi khun acetic t mng ca bia, chui, gim, nc da, tuyn chn cỏc chng vi khun A xylinum tin hnh phõn lp, trc tiờn chỳng tụi tin hnh lm dch lờn men Cho vo bỡnh cu hoc bỡnh tam giỏc cú dung tớch 500 ml khong 200 ml nc hoa qua hoc gim, thờm vo ú ml ru etylic v axit hoỏ mụi trng bng ml axetic, cú th cú vi lỏt chui tiờu chớn ó búc v vi mc ớch cung cp thờm ngun gluxit, vitamin cho vi khun axetic phỏt trin, y bng nỳt bụng, cho vo t m 300C Sau 5-7 ngy trờn b mt thoỏng ca bỡnh cu s xut hin lp mng mu trng, mng ú chớnh l hp t bo vi khun axetic cú dch lờn men t cỏc ngun nguyờn liu k trờn[11,12,14] Hỡnh :Mu dch lờn men t ngun nguyờn liu l gim Nguyn Th Quang 22 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Khi ó cú dch lờn men tụi tin hnh phõn lp to cỏc mu vi khun Acetobacter phõn lp c cỏc vi khun acetic ta dựng que cy hoc a thu tinh ó vụ trựng ly dch chit lờn men hoc ly lng mng nht nh cho vo nc vụ trựng ỏnh tan u Tip theo tin hnh pha loóng theo phng phỏp pasteur cỏc pha loóng khỏc t 10-1 -10-10 Sau ú gieo cy trờn mụi trng thch a (mt 1) ó c hp kh trựng tỏch khun lc riờng r Sau phõn lp c 4-7 ngy trờn b mt mụi trng thch a xut hin nhng khun lc cú kớch thc to nh khỏc Hu nh cỏc khun lc cú ng kớnh t 0,6-2,4 mm, b mt trn búng, phn gia dy lờn v sm mu hn cỏc phn xung quanh Cng cú dng b mt xự xỡ, nhn nheo Hỡnh : Khun lc vi khun acetic pha loóng 10-8 Nguyn Th Quang 23 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Sau ó cú khun lc trờn mụi trng thch a dựng que cy ó c kh trựng trờn ngn la ốn cn gt ly tng khun lc riờng r Mi khun lc cy trờn ng thch nghiờng v l mu , mi mu c mó hoỏ bng kớ t riờng Sau thi gian phõn lp v tuyn chn liờn tc tụi ó tuyn chn c 60 mu vi khun acetic t cỏc ngun nguyờn liu núi trờn Sau 3-5 ngy cỏc t bo ny phỏt trin theo ng cy Hỡnh : Vi khun acetic trờn mụi trng thch nghiờng Tip theo tụi tin hnh nuụi cy 60 mu vi khun ny vo mụi trng s Khi nuụi cy c 15 ngy cn kim tra kh nng oxi hoỏ etanol v xỏc nh xem cỏc mu ú l Acetobacter hay Gluconobacter Trong 60 mu ú tụi xỏc nh c mu l chng vi khun Acetobacter xylinum So sỏnh vi c im ca vi khun A.xylinum tụi thy vi khun A.xylinum l loi trc khun hỡnh que 2àm ng riờng r hoc xp thnh chui, khụng di ng, cỏc t bo c bao bc bi cht nhy to vỏng nhn v dy, bt mu xanh vi thuc nhum Iot v H2SO4 Nguyn Th Quang 24 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Cn c vo c im hỡnh thỏi, sinh lớ, sinh hoỏ ca vi khun A.xylinum tụi khng nh chng ó chn l vi khun A.xylinum, kớ hiu t A1-> A6 4.2 Nghiờn cu mt s c im hỡnh thỏi sinh lớ, sinh hoỏ ca vi khun A xylinum Tụi dựng chng vi khun A xylinum nuụi cy sang mụi trng nc da( mt 4) Mụi trng ny c kh trựng 0,5 at, 30 phỳt ngui, cy ging vo Theo dừi kh nng to mng, quan sỏt hỡnh dng t bo trờn kớnh hin vi quang hc 4.2.1 Quan sỏt kh nng to mng ca chng vi khun A.xylinum Khi cy sang mụi trng nc da tụi thy ớt chng mng xut hin ngy th 3, a s xut hin ngy th Ba ngy u k t xut hin mng dy nhanh , nhng ngy sau ú mng phỏt trin nhng chm li, mụi trng cy cú c c v Sau 20 ngy nuụi cy kt qu thu c bng Bng 1: Kh nng to mng ca chng vi khun A.xylinum STT Ký hiu chng A.xylinum A1 A.xylinum A2 A.xylinum A3 A.xylinum A4 A.xylinum A5 A.xylinum A6 Kh nng to mng Rt mng Mng + ++ + ++ - Dy +++ +++ Mụi trng nuụi cy c Trong + + + + + + - Ghi chỳ: Du (+): cú Du (-): Khụng Du (++): Mng dy tng dn Du (+++): Mng rt dy v tng lờn nhanh[12] Kt qu bng cho thy chng vi khun A xylinum u cú kh nng to mng dy Kt qu thc nghim ó ch ra: Nguyn Th Quang 25 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Loi : Mng mng(2cm) mụi trng nuụi cy c Loi 4: Mng dy, dch nuụi cy Nhn xột: Hu ht vi khun A xylinum l vi khun hiu khớ, vỡ th trờn mụi trng lng bao gi chỳng cng phỏt trin lp mng dy mng khỏc trờn b mt v mang c im tu tớnh cht ca tng loi Mng ú chớnh l hp vi khun A xylinum Kt qu thớ nghim cho thy chng vi khun A3 v A6 cho mng dy nht l 2,5 v 2,6 cm Vỡ vy tụi quyt nh gi li chng ny tip tc nghiờn cu Hỡnh 4: nh to mng dy ca s chng A.xylinum Nguyn Th Quang 26 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 4.2.2 Quan sỏt hỡnh dng t bo vi khun A.xylinum trờn kớnh hin vi quang hc Sau ó kim tra kh nng oxi hoỏ etanol v xỏc nh mu vi khun A.xylinum tụi tin hnh quan sỏt hỡnh dng t bo ca cỏc chng vi khun ny trờn kớnh hin vi quang hc cú phúng i 1000 ln Da theo ngun nguyờn liu phõn lp, c im kh nng to mng, dy mng, hỡnh dng t bo ca cỏc chng tụi quyt nh gi li chng A.xylinum A3 v A6 cú c tớnh cho mng dy hn c Kt qu quan sỏt c dn hỡnh v Nhn xột: S lng mu A.xylinum khỏ nhiu nhng ch chn chng i din cho mng dy lm i tng nghiờn cu tip theo 4.3 Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin ca chng vi khun A xylinum A3 v A6 Tin hnh nuụi cy chng ny trờn mụi trung s mụi trng ny cỏc thnh phn dinh dng ó c ti u Nuụi cy trờn mụi trng ny nhm mc ớch xỏc nh xem khong thi gian no thỡ s lng t bo ca cỏc chng vi khun t cc i Mụi trng ny c hp kh trựng ngy liờn tip, ngui sau ú cy ging vo, b sung thờm ru etylic v axit axetic, t m Nguyn Th Quang 27 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Tin hnh xỏc nh s lng t bo ti cỏc thi im :0, 24,48,72,96,120,144,168,192,216,240,264,288,312,336,360,384,408,432h bng phng phỏp m s lng t bo trờn bung m hng cu[3, 4, 7] S lng t bo x 106 Cỏc chng Thi gian (h) A3 A6 Kt qu c dn bng v biu Bng 2: S lng t bo ti cỏc thi im ca chng vi khun A3 v A6 Nguyn Th Quang 28 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264 288 312 336 360 384 408 432 0,19 0,05 0,28 0.25 2,3 0,015 6,1 0,04 6,15 0,35 11,5 0,06 14,8 0,15 17,5 0,02 24,9 0,03 30,2 0,016 40,5 0,045 47,8 0,04 60,15 0,015 90,2 0,02 129,1 0,035 124,5 0,04 122 0,026 119,53 0,03 117,28 0,015 0,15 0,37 2,5 4,5 6,2 15,73 16,86 14,25 22,5 29,16 42,7 46,9 61,2 92,5 127,3 90,0 90,5 85,53 80,9 Biu Quỏ trỡnh sinh trng ca chng Acetobacter xylinum A3 v A6 Nguyn Th Quang 29 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 300 250 200 A6 150 A3 100 50 0 48 96 144 192 240 288 336 384 432 4.4 Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH ti quỏ trỡnh to mng ca chng Acetobacter xylinum A3 v A6 4.4.1 nh hng ca (NH4)2SO4 Trc tiờn chỳng tụi tin hnh nuụi cy chng ny trờn mụi trng s 3, sau ú thay i dn yu t (NH4)2SO4 cỏc nng khỏc nhau: 0, 4; 0, 5; 0, 6; 0, 7; 0, 8; 0, 9, 1,0 (%) Biu Biu din dy ca chng vi khun Acetobacter xylinum A3 v A6 cú t l (NH4)2SO4 cỏc mc khỏc Nguyn Th Quang 30 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 2.5 1.5 A3 A6 0.5 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Độ dày màng (cm) 4.4.2 nh hng ca etanol S dng nng etanol cỏc nng khỏc nhau: ; ; ; 10 ; 12 (g/l) Kt qu thớ nghim c th hin biu 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 A3 A6 10 12 Nồng độ etanol (g/l) Nguyn Th Quang 31 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Nhn xột: Chng vi khun Acetobacter xylinum A3 phỏt trin tt c cỏc nng etanol ó pha nhng phỏt trin tt nht nng 8(g/l) Chng A6 phỏt trin tt nht nng etanol l 4g/l 4.4.3 nh hng ca axit axetic Mụi trng nuụi cy c pha ch cỏc nng : ; 1,5 ; ; 2,5 ; 3,0 (g/l) Qua thớ nghim ta thu c kt qu sau:Nhn xột: Ti thớch cho A3 l g/l v A6 l (g/l) cỏc nng khỏc ln hn v nh hn mng to mng hn Gii thớch: axit axetic c xem nh l ngun nguyờn liu thụ ban u, ngun cacbon b sung cho phn ng polime hoỏ to thnh xenluloza 4.4.4 nh hng ca pH pH: 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 Kt qu thớ nghim c th hin biu Độ dày màng(cm) 2.5 A3 1.5 A6 0.5 2.5 4.5 5.5 Độ pH Nhn xột: Qua bng v biu ta thy dy mng t giỏ tr cc i pH = 4,5 Vi chng A.x A3 l 2,5cm Vi chng A.x A6 l 2,6cm Nguyn Th Quang 32 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 4.5 ng dng chng vi khun Acetobacter xylinum A3 v A6 vo lm thch da phm vi phũng thớ nghim Phn KT LUN V NGH 5.1 Kt lun - ó phõn lp c mu vi khun Acetobacter xylinum t ngun nguyờn liu l gim - Nghiờn cu kh nng to mng Quan sỏt hỡnh dng t bo - Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin - Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH ti quỏ trỡnh to mng ca chng vi khun Acetobacter xylinum A3 v A6 - ng dng chng ny vo lm thch da phũng thớ nghim Kt qu ó thu c lp mng thch da vi dy nht Vi chng Acetobacter xylinum A3 t: 2,5cm Vi chng Acetobacter xylinum A6 t: 2,6cm 5.2 ngh Tụi hy vng qua nhng phỏt hiờn ca chỳng tụi nhng nghiờn cu ú s cú th ỏp dng vo thc tin Nguyn Th Quang 33 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip MC LC trang 6 10 12 13 14 16 16 16 17 22 22 Li cm n Li cam oan Túm tt cng trỡnh Phn t Phn Tng quan ti liu 2.1 Lc s nghiờn cu v phõn loi vi khun Acetobacter 2.2 c im chung v vi khun Acetobacter 2.3 Mt s loi vi khun Acetobacter 2.4 C s khoa hc ca s lờn men axetic 2.5 Cỏc iu kiờn nh hng ti quỏ trỡnh lờn men axetic 2.6 Cỏc tiờu chun phõn loi Acetobacte Phn 3.i tng v phng phỏp nghiờn cu 3.1 i tng nghiờn cu 3.2 Hoỏ cht v mụi trng 3.3 Phng phỏp nghiờn cu Phn Kt qu nghiờn cu v tho lun 4.1 Phõn lp vi khun axetic t mng ca bia, chui, gim, nc da, tuyn chn cỏc chng vi khun Acetobacter xylinum 4.2 Nghiờn cu mt s c im hỡnh thỏi, sinh lý, sinh hoỏ ca vi khun Acetobacter xylinum 4.3 Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin ca hai chng vi khun Acetobacter xylinum 4.4 Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4,pH ti quỏ trỡnh to mng ca hai chng vi khun Acetobacter xylinum 4.5 Ưngs dụng chủng vi khuẩn Acetobacter xylinum vào làm thạch dừa phạm vi phòng thí nghiệm 24 27 28 33 33 Phần Kết luận đề nghị Nguyn Th Quang 34 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip TI LIU THAM KHO 1.Nguyn Lõn Dng, Phm Vn Ty, Ngụ K Sng (1970), C s lý lun vi sinh hc, Nxb khoa hc k thut Nguyn Lõn Dng v mt s cng s (1976), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt, (1, 2) Nxb khoa hc k thut Nguyn Lõn Dung, Phm Vn Ty, Dng c Tin (1979), Vi sinh vt (1) Nxb i hc v Trung hc chuyờn nghip, tr 87-107 Nguyn thnh t, Nguyn Duy Tho, Vng Trng Ho (1990), Thc hnh vi sinh vt hc, Nxb giỏo dc Vn Thuý H, o Th Bớch Ngc (1999), Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin ca mt s chng vi khun Acetobacter xylinum, Thụng bỏo khoa hc trng HSPHN 2, tr 9-12 Hu Th Hi, o Th Bớch Ngc (1999), Nghiờn cu nh hng ca mt s nhõn t vụ c ti s to mng ca mt s chng vi khun Acetobacter xylinum, Thụng bỏo khoa hc Trng HSPHN Nguyn Duy Hng (2000), Phõn lp v tuyn chn mt s chng vi khun Acetobacter xylinum, ng dng lm thch da, Cụng trỡnh d thi gii thng sinh viờn nghiờn cu khoa hc inh Th Kim Nhung (1993), Kho sỏt lờn men axetic mụi trng cú thay ng glucoza bng ng malt, Thụng bỏo khoa hc Trng HSPHN 2, tr 12 inh Th Kim Nhung (1995), Phõn lp v tuyn chn chng vi khun Acetobacter xylinum ng dng lm thch dựa, Thụng bỏo khoa hc Trng HSPHN 2, tr 181 186 Nguyn Th Quang 35 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Nguyn Th Quang 36 K29A-Sinh [...]... vi khun Acetobacter xylinum 4.2 Nghiờn cu mt s c im hỡnh thỏi, sinh lý, sinh hoỏ ca vi khun Acetobacter xylinum 4.3 Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin ca hai chng vi khun Acetobacter xylinum 4.4 Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4,pH ti quỏ trỡnh to mng ca hai chng vi khun Acetobacter xylinum 4.5 Ưngs dụng 2 chủng vi khuẩn Acetobacter xylinum vào làm thạch dừa trong phạm vi phòng thí nghiệm... Bng 1: Kh nng to mng ca 6 chng vi khun A .xylinum STT Ký hiu chng 1 2 3 4 5 6 A .xylinum A1 A .xylinum A2 A .xylinum A3 A .xylinum A4 A .xylinum A5 A .xylinum A6 Kh nng to mng Rt mng Mng + ++ + ++ - Dy +++ +++ Mụi trng nuụi cy c Trong + + + + + + - Ghi chỳ: Du (+ ): cú Du (- ): Khụng Du (+ +): Mng dy tng dn Du (+ ++): Mng rt dy v tng lờn nhanh[12] Kt qu bng 1 cho thy 6 chng vi khun A xylinum u cú kh nng to mng dy... chng vi khun Acetobacter xylinum, Thụng bỏo khoa hc trng HSPHN 2, tr 9-12 6 Hu Th Hi, o Th Bớch Ngc (1 999), Nghiờn cu nh hng ca mt s nhõn t vụ c ti s to mng ca mt s chng vi khun Acetobacter xylinum, Thụng bỏo khoa hc Trng HSPHN 2 7 Nguyn Duy Hng (2 000), Phõn lp v tuyn chn mt s chng vi khun Acetobacter xylinum, ng dng lm thch da, Cụng trỡnh d thi gii thng sinh vi n nghiờn cu khoa hc 8 inh Th Kim Nhung (1 993),... Acetobacter xylinum A3 v A6 vo lm thch da trong phm vi phũng thớ nghim Phn 5 KT LUN V NGH 5.1 Kt lun - ó phõn lp c 6 mu vi khun Acetobacter xylinum t ngun nguyờn liu l gim - Nghiờn cu kh nng to mng Quan sỏt hỡnh dng t bo - Nghiờn cu ng thỏi phỏt trin - Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH ti quỏ trỡnh to mng ca 2 chng vi khun Acetobacter xylinum A3 v A6 - ng dng 2 chng ny vo lm thch da... Vn Ty, Ngụ K Sng (1 970), C s lý lun vi sinh hc, Nxb khoa hc k thut 2 Nguyn Lõn Dng v mt s cng s (1 976), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt, (1 , 2) Nxb khoa hc k thut 3 Nguyn Lõn Dung, Phm Vn Ty, Dng c Tin (1 979), Vi sinh vt (1 ) Nxb i hc v Trung hc chuyờn nghip, tr 87-107 4 Nguyn thnh t, Nguyn Duy Tho, Vng Trng Ho (1 990), Thc hnh vi sinh vt hc, Nxb giỏo dc 5 Vn Thuý H, o Th Bớch Ngc (1 999), Nghiờn cu... sinh trng ca 2 chng Acetobacter xylinum A3 v A6 Nguyn Th Quang 29 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip 300 250 200 A6 150 A3 100 50 0 0 48 96 144 192 240 288 336 384 432 4.4 Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH ti quỏ trỡnh to mng ca 2 chng Acetobacter xylinum A3 v A6 4.4.1 nh hng ca (NH4)2SO4 Trc tiờn chỳng tụi tin hnh nuụi cy 2 chng ny trờn mụi trng s 3, sau ú thay i dn yu t (NH4)2SO4 cỏc nng... Mng mng( 2cm) mụi trng nuụi cy c Loi 4: Mng dy, dch nuụi cy trong Nhn xột: Hu ht vi khun A xylinum l vi khun hiu khớ, vỡ th trờn mụi trng lng bao gi chỳng cng phỏt trin lp mng dy mng khỏc nhau trờn b mt v mang c im tu tớnh cht ca tng loi Mng ú chớnh l tp hp vi khun A xylinum Kt qu thớ nghim cho thy 2 chng vi khun A3 v A6 cho mng... tuyn chn cỏc chng vi khun A xylinum tin hnh phõn lp, trc tiờn chỳng tụi tin hnh lm dch lờn men Cho vo bỡnh cu hoc bỡnh tam giỏc cú dung tớch 500 ml khong 200 ml nc hoa qua hoc gim, thờm vo ú 1 ml ru etylic v axit hoỏ mụi trng bng 2 ml axetic, cú th cú vi lỏt chui tiờu chớn ó búc v vi mc ớch cung cp thờm ngun gluxit, vitamin cho vi khun axetic phỏt trin, y bng nỳt bụng, cho vo t m 300C Sau 5-7 ngy... nghip cn(20s) ra li bng nc Nh dung dch Fuchsin lờn gi trong 1-2 phỳt, ra nc, hong khụ t nhiờn Mc ớch ca phng phỏp ny l phõn loi vi khun: phõn loi vi khun gram õm (Gr-)v vi khun gram dng(Gr+) Nu sau khi nhum kộp m t bo bt mu hng thỡ ú l vi khun Gr-, nu bt mu tớm l vi khun Gr+ Vi khun Gr+ l do cht nguyờn sinh ca t bo c cu to t 1 loi protein c bit cú cha mui nucleatmagie Mui ny cú kh nng to vi tớm gentian... 3.3.3 Phng phỏp tuyn chn cỏc chng vi khun A xylinum cho mng dy Sau khi ó tuyn chn c cỏc chng Acetobacter thun khit, chỳng tụi tin hnh tuyn chn cỏc chng A xylinum cho mng dy nghiờn cu tip, phng phỏp tuyn chn nh sau: Nguyn Th Quang 19 K29A-Sinh Khoỏ lun tt nghip Cy cỏc chng vi khun Acetobacter thun khit c la chn bng 2 phng phỏp trờn cỏc ng thch nghiờng sang mụi trng nc da( mụi trng 4), sau ú: - Quan sỏt ... chng vi khun Acetobacter xylinum 4.4 Nghiờn cu nh hng ca etanol, axit axetic, (NH4)2SO4,pH ti quỏ trỡnh to mng ca hai chng vi khun Acetobacter xylinum 4.5 Ưngs dụng chủng vi khuẩn Acetobacter xylinum. .. chỳng tụi ó chn v tin hnh nghiờn cu ti: :Tuyn chn chng vi khun Acetobacter xylinum cho mng dy, nghiờn cu nh hng etanol, axit axetic, (NH4)2SO4, pH, ng dng lm thch da 1.2.Mc tiờu ca ti T cỏc ngun... chng vi khun Acetobacter xylinum A3 v A6 - ng dng chng ny vo lm thch da phũng thớ nghim Kt qu ó thu c lp mng thch da vi dy nht Vi chng Acetobacter xylinum A3 t: 2,5cm Vi chng Acetobacter xylinum