Nghiên cứu alcaloid của cây sen (nelumbo nucifera gaertn nelumbonaceae)

BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGHIÊN CỨU ALCALOID CỦA CÂY SEN Nelumbo nucỉfera Gaertn Nelumbonaceae KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 1995-2000 Người thực Người hướng dẫn Nơi thực Thời gian thực :sv Nguyễn Thị Lựu : GS TS.Phạm Thanh Kỳ DS NCS Nguyễn Thị Nhung : Bộ môn dược liệu : 3/2000- 5/ 2000' Hà Nội, tháng 5năm 2000 LỜI CẢM ƠN Lần làm quen với công tác nghiên cứu khoa học ,do kinh nghiệm chưa có, vốn kiến thức thân hạn chế nên gặp khó khăn bỡ ngỡ Song giúp đỡ bảo tận tình thầy cô , hoàn thành khoá luận Nhân dịp xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: GS.TS : Phạm Thanh Kỳ DS.NCS : Nguyễn Thị Nhung Là người thầy trực tiếp hướng dẫn hết lòng bảo giúp đỡ thời gian vừa qua Đồng thời xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo môn dược liệu, TS Cao Văn Thu phòng ban chức tạo điều kiện cho trình thực khoá luận Hà nội tháng năm 2000 Sinh viên: Nguyễn Thị Lựu BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT Alc : Alcaloid B : Baccilus Genta : Gentamicin p : Pseudomonas Peni : Penicilin Pro : Proteus s : Salmonella Sa : Sarcina Sh : Shigella Sta : Staphylococcus STT : Số thứ tự t° v nc : Nhiệt độ nóng chảy TP : Thành phố TT : Thuốc thử MỤC LỤC PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỂ PHẦN II.TổNG QUAN 2.1 Giới thiệu khái quát đặc điểm thực vật phân bố sen 2.2 Thành phần hoá h ọ c 2.3 Tác dụng công dụng PHẦN III.THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 Nguyên liệu phương pháp thực nghiệm 3.1.1 Nguyên liệu 3.1.2.Phương pháp nghiên u 3.2.Kết thực nghiệm 3.2.1.Định tính nhóm chất hữu sen, tâm sen, gương sen 3.2.2.Định tính sắc ký lớp mỏng 3 Xác định nguyên tố vô sen, tâm sen, gương sen 3.2.4.Định lượng alcaloid 3.2.4.1.Định lượng alcaloid toàn phần sen, tâm sen gương sen 3.2Ả.2 Định lượng alcaloid toàn phần sen theo tháng năm 3.2.4.3 Định lượng alcaloid toàn phần sen thu hái số địa phương 3.2.5 Chiết xuất phân lập alcaloid 3.2.5.1 Chiết xuất alcaloid toàn phần 3.2.5.2 Tính hiệu suất chiết nuciíerin từ sen 3.2.5 Phân lập tinh chế alcaloid 3.2.5Ả Kiểm to độ tinh khiết alcaloid V8 sắc ký lóp mỏng 3.2.5.5 Nhận dạng alcaloid Vg 3.3 Tác dụng sinh h ọ c PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ 4.1 Kết lu ận 4.2 Đề nghị TÀI LIỆU THAM KHẢO Trang 2 7 7 8 10 13 16 16 18 19 21 21 22 22 23 25 26 30 30 31 PHẦN I- ĐẶT VÂN ĐỂ Nước ta nằm khu vực khí hậu nhiệt đới gió mùa, điều kiện thuận lợi cho cỏ phát triển mạnh, nguồn thuốc ta phong phú đa dạng Trong số thuốc mà danh y sử dụng vào mục đích chữa bệnh, không nói đến sen Cây sen số thuốc có hầu hết phận sử dụng để làm thuốc: sen, tâm sen, gương sen, ngó sen, tua sen, hạt sen, Các phận có thành phần số thuốc dùng để an thần, cầm máu , chữa ăn, ngủ, Cây sen có nhiều tác giả giới nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng sinh học, nước ta việc nghiên cứu cách toàn diện sen chưa thật đầy đủ Do để nâng cao giá trị sử dụng sen tiến hành nghiên cứu với số nội dung sau: -Định tính nhóm chất sen, tâm sen, gương sen, -Xác định nguyên tố vô sen , tâm sen , gương sen -Định lượng alcaloid sen , tâm sen, gương sen phương pháp acid-base, thu hái theo tháng mùa, năm khác số địa phương -Chiết xuất, phân lập, nhận dạng alcaloid tính hiệu suất chiết xuất nuciíerin từ Sen -Thử tác dụng kháng khuẩn alcaloid toàn phần sen nuciíerin PHẦN II - TỔNG QUAN 2.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN Bố CỦA CÂY SEN [2], [8 ], [10], [17] Cây Sen có tên khoa học : Nelumbo nuciíera Gaertn (Nelumbium speciosum Willd) Họ Sen (Nelumbonaceae) Sen gọi Liên, Quỳ [17], thủy sinh mọc ao, đầm Thân rễ hình trụ mọc bùn, thường gọi ngó Sen hay ngẫu tiết Lá mọc lên khỏi mặt nước, có cuống dài, có gai nhỏ, phiến hình khiên to, đường kính 40 - 70cm, có gân tỏa tròn, mặt màu lục sẫm, mặt nhạt Ngó Sen cuống Sen có nhiều ống rỗng, bẻ có nhiều sợi tơ Hoa to màu trắng hay đỏ hồng, đều, lưỡng tính, có từ - đài màu xanh lục Tràng gồm lất nhiều cánh màu hồng hay trắng phần, cánh hoa có màu lục đài Nhị nhiều, màu vàng, nhị mảnh, bao phấn ô, mở theo kẽ nứt dọc, trung đới mọc dài thành phần phụ màu trắng, gọi gạo Sen (có hương thơm) Nhiều noãn lời nhau, đựng đế hoa loe hình nón ngược gọi gương Sen (hay liên phòng) [10], [26] Vòi ngắn, núm nhụy nhô lên khỏi đế hoa Mỗi noãn có đến noãn Quả bế, thường gọi hạt Sen, chứa hạt (liên nhục) nội nhũ Hai mầm dày, chồi mầm (liên tâm) gồm non gập vào phía [2], [17] Sen trổng nhiều nước ta để ăn làm thuốc : Bắc Giang, Bắc Ninh, Nam Hà, Hà Tây, Hải Hưng, Thanh Hóa, Nghệ An, Đồng Tháp Mười Mùa thu hái vào tháng - [17] Cây Sen mọc chủ yếu vùng nhiệt đới, độ cao tương đối thấp so với mặt nước biển Họ Sen họ thủy sinh chứa alcaloid [8 ] .THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 2 Những năm gần có nhiều công trình nghiên cứu thành phần hoá học sen chủ yếu tâm sen Các kết nghiên cứu tác giả cho thấy thành phần hoá học sen sau: 2.2.1 Những nghiên cứu nước '*Lá sen: Năm 1959 Arthur Cheung [20] công bố chiết nuciíerin từ sen.Sau năm ,vào năm 1960 , Tomita Macao[24] công bố chiết nuciíerin, Nor-nuciferin,vả roemerin Một số tác giả cho thấy sen có alcaloid: armepavin, anonain, lidiodenin,pronuciferín, N-nomuciferin, D-N-methyl coclauryl, o-nomuciferin, methyl coclauryl [5], [17], [21] Theo tài liệu [17] sen có chứa nhiều alcaloid:nuciferin, Nnomuciferin, anonain, roemerin, armepavin, N-methyl coclauryl, N-methylisococlauryl, pronuciíerin, spermatheridin, liriodenin, dehydro nuciíerin, nelumboxit, dehydro-roemerin, dehydro-anonain Có tác giả thấy vitamin c, acid citric, acid oxalic, acid tactric, acid succinic [17] Từ sen Nakaoku chiết 0,l%quercetin [5] *Tâm sen: Theo tài liệu [5], tác giả Pan.P.Ch;Chao T.Y ,Tomita Fumkawa Yang, Khirosi;Yang Tsang Sung ,Triệu Chí Viễn tách từ tâm sen alcaloidrliensinin, methyl coparamin, isoliensinin, neferin,lotusin, nuciíerin, 1101 - nuciíerin, pronuciíerin, N-nornucifferin Theo Chemical abtracts (1964) [21], từ tâm sen Hồng Kông tách Neíerin (dạng dầu), liensinin, nuciíerin, pronuciferin Năm 1986, Nishibe Sansei [25] chiết xuất phân lập neíerin, d1-armepavin, metyl-4-N-metylcoclaurin Trong tâm sen có asparagin alcaloid (chừng 0,06%) nelumbin chất màu trắng, vị đắng, thể đặc cứng dòn 40-50°C, 65°c chất sền sệt, dễ tan cồn, chloroíorm, ether ethylic, aceton, acid loãng cồn amylic, gần không tan ether dầu hoả [17] Trong tâm sen có sitosterol este [23] * Gương sen Theo tài liệu [4],[10],[17],[26] gương sen có 4,9% chất đạm, 0,6% chất béo, 9% carbohydrat ,một lượng nhỏ vitamin c (0,017%), có tanin, protein, caroten nuclein * Tua sen Trong tua sen có tanin [4), [17], [26] * Cuông : Có lượng nhỏ roemerin, nor-nuciferin [26] * Ngó sen: Theo tài liệu [4], [10], [26] ngó sen có chứa 70% tinh bột, 2% asparagin, arginin, trigonellin, tyrosin, glucose, vitamin c, A, B, pp, phosphoric ether, sucrose, raffinose, stachyose tanin * Hat sen i Theo tài liệu [4], [10], [26] hạt sen có đườiig raffinose, 16% đạm, 2% chất béo, carbohydrat 62%, Ca 0,089%, phospho 0,285%, Fe 0,0064% Từ hoa sen mọc miền Bắc An Độ tìm thấy chất kemferon-3-galactosamonosi _;• U -< Q *T I ■~ CJ ■RAMETERS E— : 'o : S I tư O) c -H 21 O C i- O J 21 < m co c 13 ^ CỌ ỉ - ■ —H o o ^ Ị ; >< [...]... (!ô I : :»;u; ký (lổ nlcnlokl Irong á vSen, (Am Sen, gư ơng Sen Ghi chú: I - D ịch cliiCM lá Sen 2- D icli chiếl tílm Sen .V D ịch chi ỐI gu'n’nu, scn Bảng 3 : kết quả sắc ký lớp mỏng alcaloỉd trong lá sen , tâm sen và gương sen Bộ phận Lá sen Tâm sen Vết V, v; vã v4 v5 v6 V7 v8 Vp V, v; v3 v4 v5 v v 0 1 0 0.15 0.19 8 9 0.43 v 10 v„ v ,2 V 13 Vu v 15 Gương sen 0.08 0.16 0.28 0.36 0.56 0.63 0.70 0.77... vết của hai bộ phân lá sen và tâm sen có Rf gẩn trùng nhau đưực xếp theo 3 nhóm sau: Nhỏm 1: V6 ( lá) Nhóm 2 : V5 ( lá ) v „ ( lâm ) V l2 ( tâm ) Nhóm 3: V, ( lá ) V, ( tâm ) - Trong 4 nhóm ở cả 3 bộ phận lá sen, tâm sen, gương sen nhận thấy: Nhóm 1: có V9 của lá to và đậm nhất Nhóm 2: có V 14 của tâm là to và đậm nhâì Nhóm 3: có V 13 của tâm là to và đậm nhất, - Trong 3 nhóm ở 2 bộ phận lá sen, tâm sen. .. Sen, tâm Sen và gương Sen 17 • Nhân xét: Qua quá trình định lượng ở trên cho thấy: hàm lượng alcaloid toàn phần trong tâm sen là cao nhất, tiếp đến là trong lá sen, hàm lượng alcaloid toàn phần trong gương sen là thấp nhất 3.2.4.2 Định lượng alcaloỉd toàn phần trong lá sen theo các tháng trong năm bằng phương pháp acỉd - base Trong quá trình làm thực nghiệm, chúng tôi tiến hành thu hái mẫu của lá sen. .. mẫu.Kêtquả trung bình cộng của 3 mẫu được trình bày trong bảng 7 và hình 1 Bảng 7 :Hàm lượng alcaloid toàn phần trong lá sen, tâm sen, gương sen Hàm lượng alcaloid toàn phần (%) SỐ lần Lá sen Tâm sen Gương sen Lần 1 0,89 1 ,2 1 0,25 Lần 2 0,84 1,24 0,23 Lần 3 0,94 1,24 0,23 Trung bình 0,89 1,23 0,24 caloid toàn phần (%) 1.4- 1.2 1.0 0,8 0 ,6 0,40 2 - ô phận 0 Lá Tâm Gươns Hình 1 : Hàm lượng Alcaloid toàn phần... cho tới khi tàn, hàm lượng alcaloid toàn phần trong lá sen biến động theo từng tháng và theo các năm - Hàm lượng alcaloid cao nhất là ở tháng 5, là tháng đầu tiên có lá bánh tẻ - Hàm lượng alcaloid thấp nhất là ở tháng 10 6 và tháng 10 (liêng tháng là lá sen già vì sen đã tàn ) - Hàm lượng alcaloid toàn phần thay đổi trong năm có thể do quá trình phát triển của cây - Hàm lượng alcaloid thay đổi ở các... alcaloid( %) Alcaloiđ toàn phần {%) i 1.0 - 0 8- 0 ,6 0.4- 0 2 - Địa phương > l là Nội Hà Tây Hải Dương Bắc Giang Huế TP.HỒ Chí Minh Hình 3: Hàm lượng aỉcaỊoid toàn phần trong lá sen ở một sô địa phương • Nhân xét: Hàm lượng alcaloid trong lá sen ở các địa phương trong cùng một thời điểm là lất khác nhau: cây sen có hàm lượng alcaloid cao nhất mọc ỏ' Hà Tày và Bắc Giang, thấp nhất là alcaloid của cây. .. trong lá sen, tâm sen, gương sen so với dược liệu ( X.103) STT Uì w 2 3 AI Si Mg Ca Ba Fe Mn Ti Co Ni Cr 0,1076 1 Lá sen 170,4 852 85,2 85,2 0,852 25,56 85,2 0,426 2 Tâm sen 161,4 538 53,8 53,8 1,61 26,9 5,38 5,38 0,0538 0,0538 3 Gương sen 35 877 157,5 52,65 1,76 175,5 175,5 0,351 0,176 0,351 Zn Ga Na K Zr Sn STT 1 Nguyên tố Nguyên tố Pb Ag Lá sen 0,00085 0,0085 Tâm sen 0,0054 0,269 Gương sen 0,0351... xét: - Các nguyên tố có mật trong lá sen, tâm sen, gương sen là khác nhau Lá sen có 16 ngyên tố /46 nguyên tố, tâm sen có 21 nguyên tố/46 nguyên tố, gương sen có 20 nguyên tố/46 nguyên tố - Trong các nguyên tố tìm thấy ở 3 bộ phận hàmlượng của K là lớn nhất (> 1 0 % so với tro trắng) - Trong 3 bộ phận chỉ có gương sen là có Zn =0,05% sovới tro trắng, và chỉ có tâm sen là có Cr =0,002% so với tro trắng... QUẢ THựC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 3.2.1 Định tính các chất trong lá sen, tâm sen , gương sen bằng phản ứng hoá h ọ c Bằng các phản ứng hóa học, chúng tôi đã tiến hành định tính các nhóm chất trong lá sen, gương sen, tâm sen. Kết quả được ghi ở bảng 2 8 Bảng2: Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ Tên nhóm chất STT Alcaloid 1 Lá sen Kết quả Tâm sen Tạo tủa với TT chung -TT Mayer -TT Dragendorff ++++ ++++... aỉcaloid toàn phần ở lá sen Căn cứ vào phần định tính bằng sắc ký lớp mỏng và qua quá trình phân lập v 9 (KNj), tức nuciíerin [15], [16], chúng tôi nhận thấy nuciíerin là alcaloid chính của cây sen Chúng tôi đã tiến hành tính hiệu suất của nuciferin thu được từ alcaloid toàn phần trong lá Sen Kết quả được làm trên 5 mẫu và ghi ở bảng 10 Bảng 10 : Hiệu suất nuciíerin thu được so với alcaloid toàn phần và ... đến sen Cây sen số thuốc có hầu hết phận sử dụng để làm thuốc: sen, tâm sen, gương sen, ngó sen, tua sen, hạt sen, Các phận có thành phần số thuốc dùng để an thần, cầm máu , chữa ăn, ngủ, Cây sen. .. số nội dung sau: -Định tính nhóm chất sen, tâm sen, gương sen, -Xác định nguyên tố vô sen , tâm sen , gương sen -Định lượng alcaloid sen , tâm sen, gương sen phương pháp acid-base, thu hái theo... vSen, (Am Sen, gư ơng Sen Ghi chú: I - D ịch cliiCM Sen 2- D icli chiếl tílm Sen .V D ịch chi ỐI gu'n’nu, scn Bảng : kết sắc ký lớp mỏng alcaloỉd sen , tâm sen gương sen Bộ phận Lá sen Tâm sen