Nghiên cứu thành phần hóa học của lá hen và thăm dò tác dụng giãn khí quản thực nghiệm của lá hen cà độc dược cóc mẳn

BÔ Y TÉ TRUÔNG DAI HOC DÜOC HÀ NÔI NGÔ DUY DÔNG NGHIÊN CÜXJ THÀNH PHAN HOÂ HOC CÜA LA HEN VÀ THÂM DÔ TAC DUNG GIÂN KHI QUÂN THlTC NGHIÊM CÜA LA HEN - CÀ DÔC DÜOC - CÔC MÂN ( KHOÂ LUÂN TÔT NGHIÊP DlTOC SI KHOÂ1998 - 2003 ) Ngiroi hircmg dân: PGS.TS. Pham Xuân Sinh ThS. Nguyên Manh Tuyën Noi thirc hiên: Bô mon Diroc hoc Co truyên Bô mon Duroc lue Thôi gian thirc hiên: 01/2003 - 05/2003 HÀ NÔI: 05/2003 & « LÔICÂM ON DChod lu â n td t m jJiièp . n à y ttuda hoùu tliù tih t a i (23 Trên tim thô cô lâp: Vcfi lieu diêu tri chê' pham cô tac dung tâng suc co bôp tim, làm giâm nhip tim và tâng truong lue co tim. Vôi liêu dôc gây ngîmg tim ô thi tâm thu. [18] ❖ Trên diên tâm dô thô: Vôi liëu 0,3g/kg tiêm tmh mach và lg/kg uông dâ thé hiên khoâng RR dài ra, phûc hê QRS ngân lai, biên dô sông R tâng cao và khoâng TP kéo dài ra. Vôi liêu dôc xuât hiên nhip tim châm lai quâ mire dân dên hiên tuong Block nhï thât. [18] ❖ Trên hê mach tai thô và trên hê mach êch dêu cô tac dung giân mach. Ô nông dô thâp hon mot phân nghin cô tac dung gây co mach.[18] ❖ Trên huyê't âp mèo và thô: Vôi liêu diêu tri ché’phâm cô tac dung làm tâng lue tâm thu, nhip tim châm lai. Và thôi gian tâm truong kéo dài. Vôi liêu dôc xuât hiên dâu hiêu ngô dôc nhu: Huyê't âp ha dân, non do hê thân kinh phô giao câm bi kich thich. [18] ❖ Trên khi quân chuôt lang cô lâp: Dich chiê't la Hen nông dô 1.10‘2% cô tac dung gây co thât nhe khi quân.[13] 4 Ngoài ra, cdn cô tâc dung chûa ho tôt, tâc dung long dôm rô rêt và không ânh huong dên thdi gian chây mâu cüa chuôt. [13] Vê công nàng - chu tri: ❖ Nhua mü cô tmh dôc, cô tâc dung gây nôn. Nô duoc công nhân là cô ich trong bênh ly nhe. Dùng ngoài chüa thâp khôp, chûa vêt «y / sf thuong. Cô tâc dung giâm dau khi sâu rang. O An Dô, nguôi ta côn dùng mû dé gây sây thai. Dùng làm giân dông tü, rây giun. ❖ Lâ thucmg dùng làm thuôc dàp chüa bênh ngoài da, tâo bon, sâu rang; xông chüa loét müi. Ô Viêt Nam, tù lâu lâ duoc sü dung làm thuôc chüa hen duôi dang thuôc sac, và trong Dông y côn dùng duoi dang cao thuôc, siro thuôc. Théo Y hoc Cé truyên: Lâ Hen cô vi dâng, hai chât, tmh mât quy kinh Phê. Cô công nàng tiêu dôc, tiêu demi, giâng khi nghich, trùr ho. Dùng dê diêu tri ho, hen xuyên và 16 ngüa. De chüa hen, ngucti ta lây lâ bânh tè lau sach phân trang o mât sau lâ, rüa sach, dé râo nuôc, phoi khô và truôc khi dùng sao qua roi sàc uông (ngày dùng 6 - 12g) ❖ Hoa làm cho dê tiêu, kiên vi và bo, cüng côn dùng dé chüa hen xuyên và chung îa chây.[l] 1.2.2 - Lâ Cà dôc dirçrc: (Folium Daturae). Cà dôc duoc côn cô tên khâc là: Cà duoc, Cà diên, Man dà la... Théo tài lieu thi Cà dôc duoc co nhièu loai khâc nhau nhu: Datura metel L.Solanaceae cô loai cây hoa tràng hoàc loai cây cuông lâ tim, hoa cô dôm tim. Hai loai này cô moc à miên nui và dông bang.Hoàc loai cây: Datura Stramonium Solanaceae. Cây này cô moc à vùng nui Mucmg Khuong - Lao Cai. Nhîn chung Cà dôc duoc phân bô' rông khàp nuôc ta. Nô moc hoang và duoc trông khâp noi ô Viêt Nam: Cô nhiêu à Hâi Duong, Vïnh Phü, Thanh Hoa, Nghê An, Cao Bang, Thâi Blnh, Ninh Thuân... Ngoài ra nô cüng phé bien à môt sô nuôc khâc nhu : Campuchia, Lào, An Dô, Malaysia, Trung Quôc...[1,18] 5 Vê thành phàn hoâ hoc: Hàu hét câc bô phân cüa cây dêu chûa alcaloid, trong do alcaloid chînh là: Hyoscin (L-Scopolamin). Ngoài ra côn co atropin, hyoscyamin, norhyoscyamin. Hàm lirong alcaloid thay doi tuÿ theo thôri kÿ sinh trucmg cüa cây và câch trông trot, châm soc (thircmg cao nhât vào lue cây sâp ra hoa).[ 18,24] TN-CH3 /H 1 ' OR 'H 0 c h 2oh R: — OC C: ■CH - Q \ // 0 C— H ÔH2OH Atropin Hyoscin (L- Scopolamin) Vê tac dung diroc lÿ: Tac dung cüa Cà dôc diroc chmh là tac dung cüa hyoscin và cüa atropin: ❖ Atropin: Làm co vông cüa mât giân ra, nên dông tü giân. Nhân càu det lai, âp lue mât tâng lên. Su tiét nuôc bot, mo hôi, dich vi, dich ruôt ngùng lai. Làm no khi dao khi khi dao bi co thât và phô giao câm bi kfch thfch,[18]. Luc bînh thucmg atropin không tac dung. Co tac dung làm giân nhu dông ruôt chô thuc nghiêm,[24]. Lièu dôc: Atropin tac dông lên nâo làm say cô khi phât diên, hô hâp tâng, sot, cuô'i cùng thàn kinh trung uong bi ûc ché và tê liêt.[18] ❖ Hyoscin: Cô tac dung gàn giông atropin, nhung làm giân dông tü trong thefi gian ngân hon. Khâc vôi atropin là khi ngô dôc thi hyoscin ûc ché thân kinh nhiêu hon là kich thich. Vî vây, hyoscin 6 duoc dùng trong khoa thàn kinh dé chüa con co giât cüa bênh Parkinson. Phô'i hop vôi atropin dé chông say tàu xe, làm thuôc cô tac dung diu thàn kinh [18]. Mot sô tac giâ côn cho thây rang Cà dôc duçfc côn cô tac dung giân co tron phé quân, làm hê't con hen [24]. Ô Trung Quô'c côn dùng chê" phâm Cà dôc duoc gây tê trong phâu thuât. Tac dung khâng khuan cüng hay duoc su dung do thuôc cô tac dung iïc chê' Staphylococcus aureus và Bacillus subtilis .[17,19] Vê công nâng - chü tri: > Dinh xuyên, dùng dô'i vôi hen phê' quân cô thé dùng hoa, la khô thâi nhô thành -soi cuô'n lai nhu diêu thuô'c la rôi hût, së cât duoc con hen (chî dùng cho nguôi lôn). [1] > Giâm dau: Dùng tri bênh dau da dày, dau khôp dùng liêu 0,4g sàc uô'ng. Hoàc dùng 12g sâc, xông và rua vào chô khôp bi dau.[l] > Sât khuan: Chùa ràn càn, dùng quâ tuoi, giâ nât, dàp vào chô ràn càn, mun nhot hoàc chô bi châ'n thuong.[l] 1.2.3 - Côc mân: (Herba Centipedae). Côc mân là loai thân mêm, cô nhiêu tên khâc nhau nhu: Cuc mân, Cô the, Thach hô tuy, Nga bât thuc thâo, Dia hô tiêu, Câu tu thâo, Cây trâm chân, Côc ngôi, Thanh minh thâi... [18,17,25] Côc mân cô tên khoa hoc là: Centipeda minima L. Asteraceae (Ho Cüc). Côc mân moc ô nhiêu noi trên nuôc ta nhu: Hâi Hung, Hà Bàc, Thâi Blnh, Hà Nôi (Tù Liêm)... và à câc nuôc cô khi hâu nhiêt dôi nhu: Trung Quôc, Ài Dô... [1,15,17,18] Vê thành phân hoâ hoc: 7 Khi nghiên cuu vé thành phân hoa hoc trong cây Côc man, à Nhât ngirài ta dâ phât hiên trong toàn cây Côc man cô Taraxasterol, Taraxasteryl acetat, Amidiol. [16,17,19,25] Arnidiol Ô Trung Quôc nguôi ta dâ tim ra trong toàn cây Côc mân cô tinh dàu, sterol, coumarin, saponin triterpenic, acid amin, acid hüu co... Sterol dâ cô hai chât duoc xâc dinh công thirc, dô là: Stigmasterol và Taraxasterol.[17,19,25] Stigmasterol Vê tâc dung diïçrc lÿ: Dâ cô nhiêu nghiên cuu và dâ chung minh duoc Côc man cô tâc dung giâm ho và long dôm rô rêt. Ngoài ra, Côc man côn cô tâc dung sinh hoc là khâng khuan rat tôt, cô tâc dung lên cà truc khuân mü xanh (Pseudomonas aeruginosa) [19,25]. Côn tâc dung giân khi quân chua cô tài lieu nào nôi tôi. Vè công nâng - chu tri: 8 Théo Y hoc Co truyên, toàn cây thu hâi khi cô hoa, bô tap chât, phoi khô cô tac dung nhuân phé chi khâi, bînh xuyën, dieu trung îch khi, khû phong trûf thâp, luong huyét, ha âp, dùng dé diêu tri viêm khi quân mân tmh, ho xuyën, phong thâp dau nhuc, và chûng cao huyét âp [1,18,25]. Ô nuôc ta theo kinh nghiêm dân gian cüng dâ dùng Côc mân de chûa bênh. Dé chûa ho cô thé dùng Côc mân sâc lây nuôc uông. Khi trè em bi ho gà cüng cô thé dùng Côc mân phô'i hop vôi Chua me dât giâ nhô vât lây nuôc cho uông. Ngoài mue dich dùng Côc mân de chûa ho là chü yéu, nguài ta côn dùng Côc mân dé chüa dau mât do viêm loét giâc mac, viêm müi di üng, viêm müi mân tmh và chûa mot sô câc bênh ngoài da (dây là tac dung khâng khuan cüa thành phàn hoa hoc coumarin cô trong vi thuôc này).[19,25] 9 PHÂN 2 - THÜC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ 2.1 - Nguyên vât liêu và phuong phâp nghiên cûu: 2.1.1 - Nguyên vât liêu: 2.1.1.1 - La Hen: (Folium Calotropis) Thu hâi la bânh té cua cây Hen (Calotropis gigantea R.Br) moc hoang à vùng Bàc sông Duông vào thâng 7-10 nàm 2002. Dùng vâi am lau sach long và phân trâng à mât sau la, nia sach dé râo nirac, phoi tâi rôi thâi nhô, tiép tue phoi dén khô, sau dô tan thành bôt thô.[l,2,24] ■I ■M *7 Anh 1: Cây Hen (Calotropis gigantea Asclepiadaceae) 10 2.1.1.2 - Lâ Cà dôc duoc: (Folium Daturae) Thu hai lâ Cà dôc duoc (loài Datura metel Solanaceae) tai Hai Duong (lue cây sâp ra hoa) thâng 7/2002. Rua sach, sau dô dem phoi khô hoàc sây ô nhiêt dô duôi 50°C dén khô. [1,2,24] Ânh 2: Cây Cà dôc dixac (Datura metel Solanaceae) 2.1.1.3 - Côc mân: (Herba Çentipedae) Thu hai toàn cây tai Thâi Bînh vào thâng 12/2002 và thâng 1/2003. Sau khi thu hai, rira sach dât cât, phoi khô hoàc sây khô.[1,2,24] 11 Ânh 3: Cây Côc mân (Centipeda minima Asteraceae) 2.1.1.4 - Cao long 1:1 cüa vi la Hen, la Cà dôc duoc, Côc mân (Trang 27) 2.1.2 - Phuong phâp nghiên cufu: 2.1.2.1 - Nghiên cufu thành phàn hoa hoc cüa la Hen: ♦> Dinh tinh ong nghiêm 1 sô thành phàn hoa hoc trong la Hen. [5] ❖ Sàc kÿ lôp mông alcaloid, glycosid tim.[5,12] ❖ Dinh luong alcaloid - glycosid tim - tanin bang phuong phâp cân. [2,4,6,12] 2.1.2.2 - Tac dung giân khi quân: Tien hành thü dua trên phuong phâp nghiên cuu tâc dung duoc lÿ giân khi quân cüa Trung thâo duoc cüa Trung Quôc. [26] ❖ Nguyên tâc cüa phuong phâp thü: 12 Khi khi quân co, long khi quân hep lai së dây côt nuôc lên cao và nguac lai. Dânh giâ tâc dung cüa câc vi thuôc dôi vôi su co giân cüa khi quân theo chièu cao côt nuôc cüa dung eu do. Trong mô hinh thf nghiêm co dùng hai loai chât thü tucmg dôi diën hinh cho su co giân cüa ca tron khi quân, dô là: + Adrenalin 0,005%: Gây giân ea tretn khi quân. + Acetylcholin 0,0025%: Gây co ca tron khi quân. ❖ Dung eu thuc nghiêm gôm: Bô chiêt Soxhlet, nôi câch thuÿ, cân phân ti'ch, côc cân (dinh luçfng), mây on nhiêt Ugo-basile cüa Italia (thü tâc dung co giân khi quân), kim bam, và câc dung eu khâc. Mô hinh thuc nghiêm, duge bô tri nhu sa dô 1. Trong dô: 1. Khoâ giü mao quân 2. Thuôc chia vach (mm) a ' 7 3. Ong mao quan 4. Xi lanh * 5. Ong nôi 6. Khi quân chuôt lang cô 7. Ong mao quan chü U A/ 8. Ong nuôi khi quân 9. Van thay dich nuôi Sa dô 1: Mô hinh thuc nghiêm thü tâc dung co giân khi quân. ♦> Xü lÿ kêt quâ: Theo phueng phâp thông kê sinh hoc [20]. 13 2.2 - Ket quâ và nhân xét: 2.2.1 - Nghiên cüru thành phân hôa hoc cüa lâ Hen: 2.2.1.1 - Dinh tînh ong nghiêm thành phân hôa hoc cüa lâ Hen: a. Dinh tînh alcaloid: Lây khoâng 3g bot thô lâ Hen, cho vào binh non dung tfch 100ml. Thêm 40ml dung dich H2S04 10%. Dun soi 2 phüt. Loc lây dich cho vào binh gan 250ml. Kiém hôa dich loc bâng 5ml NH4OH 25%. Chiét alcaloid bâng cloroform (5 ml x 3 lân). Gôp câc dich chiét. Dem lâc vôi H2S0410% (5ml x 2 lân). Gôp câc dich chiét nuôc acid. Cho vào 3 ông nghiêm: lml/1 ong nghiêm. Tién hành câc phân üng dinh tmh: ♦> Ông nghiêm 1 : Thuôc thû Mayer: Tao tua trâng. Phân üng duong tînh. ♦> Ong nghiêm 2\ Thuôc thir Bouchardat: Tao tua dô nâu. Phân ung duong tmh. *1* Ong nghiêm 3: Thuôc thu Dragendorff: Tao tua dô cam. Phân ung duong tînh. Sa bô két luân trong lâ Hen cô chira alcaloid. (Bâng 1) b. Dinh tînh saponin: Lây khoâng 2g bôt thô lâ Hen. Thêm 20ml nuôc c â t. Dun soi nhe trong 2 phut. Loc lây dich cho vào ông nghiêm. Làc theo chiêu doc trong 5 phüt, thây tao bot. De yên 15 phüt, thây côt bot vân côn. Cho 3 giot H2S04dàc, thây côt bot tan hét. Bot tao thành không phâi do saponin. Phân üng âm tînh. So bô két luân trong lâ Hen không cô saponin. (Bâng 1) c. Dinh tmh acid hüu ca: Lây khoâng 3g bôt thô la Hen cho vào côc co mô. Thêm 20ml nuôc cât. Dun sôi 5 phüt. Loc lây dich làm phân ûng: Lây 1ml dich loc cho vào ong nghiêm. Thêm khoâng lOmg bôt Na2C 03, không thây bot khi noi lên. Phân ûng âm tmh. Sa bô két luân trong la Hen không cô acid hûu co. (Bâng 1) d. Dinh tînh tanin: Lây khoâng 3g bôt thô la Hen cho vào côc cô mô. Thêm 20ml nuôc cât. Dun sôi 5 phüt. Loc lây dich làm phân ûng: Cho dich loc vào 3 ông nghiêm, lml/1 ông nghiêm. ♦> Ông 1: Cho thêm 2 giot thuôc thù FeQ3 5%, tao tüa màu xanh den. Phân ûng duong tmh. ♦> Ong 2: Cho thêm 2 giot thuôc thu gelatin 1%, tao tüa bông. Phân ûng duong tînh. ♦> Ong 3: Cho thêm 2 giot chi acetat, tao tua bông. Phan ûng duong tmh. Sa bô két luân trong la Hen co tanin. (Bâng 1) e. Dinh tînh flavonoid: Lây khoâng lg bôt thô la Hen cho vào ông nghiêm lôn. Thêm 10ml ethanol 90°'. Dun sôi câch thüy 5 phut. Loc nông lây dich làm thi nghiêm: ♦> Phân ûng Cyanidin: Cho vào ông nghiêm 1ml dich chiét. Thêm mot ît bôt Mg kim loai. Nhô tùng giot HC1 dàc (5 giot). Không thây dung dich chuyën sang màu dô. Phân ûng âm tmh. ♦> Phân ûng vâi Idem: > Nhô 1 giot dich chiét lên giây loc. Ho khô rôi dé lên miêng lo NH4OH dâc (dâ duçfc mô nüt), không thây màu vàng cüa dich chiét tâng lên. Phân ûng âm tmh. 15 > Cho vào ong nghiêm nhô 1ml dich chiét. Thêm 3 giot dung dich NaOH 10%, thây xuât hiên tüa vàng. Thêm 1ml nuôc cat, thay tua không tan. Phân ûng âm tînh. ♦> Phân ûng vâi dung dich FeCl35%: Cho vào ông nghiêm nhô 1ml dich chiêt. Thêm 3 giot FeCl3 5%, thây xuât hiên tüa xanh den. Phân ûng duong tmh. Sa bô kê't luân trong lâ Hen không cô flavonoid. (Bang 1) f. Dinh tînh anthraglycosid (phân ûng Boctrager): Lây khoâng 3g bôt thô lâ Hen cho vào binh non dung tich 100ml. Thêm 40ml H2S04 10%. Dun sôi câch thüy 15 phüt. De nguôi, loc. Dich loc cho vào binh gan. Lâc vôi 5ml ether ethylic. Thêm 3ml dung dich NaOH 10% thây lôp nuôc không cô màu dô sim. Phân ûng âm tmh. Sa bô kêt luân trong lâ Hen không cô anthraglycosid. (Bâng 1) g. Dinh tînh diïcmg khûr: Lây khoâng lg bôt thô lâ Hen cho vào ông nghiêm lôn. Thêm 10ml nuôc cât. Dun sôi câch thüy 5 phüt. Loc lây dich làm thf nghiêm: Cho vào ông nghiêm 2ml dich chiét. Thêm 0,5ml thuôc thü Fehling A công vôi 0,5ml thuôc thü Fehling B. Dun sôi câch thüy vài phüt. Thây cô xuât hiên tüa dô gach. Phân ûng duang tînh. Sa bô kê't luân trong lâ Hen cô chûa duông khü. (Bâng 1) h. Dinh tînh coumarin: Lây khoâng lg bôt thô lâ Hen cho vào ông nghiêm lôn. Thêm 10ml ethanol 90°. Dun sôi câch thüy 5 phüt. Loc nông lây dich làm thl nghiêm: ♦> Phân ûng mâ - dông vông lacton: > Birôc 1: Cho vào 2 ông nghiêm, môi ông 1ml dich chiê't. - Ông 1: Cho thêm 0,5ml dung dich NaOH 10% - Ong 2: Giü nguyên. 16 > Birac 2: Dun câ 2 ông nghiêm dên soi, sau dô dé nguôi. Quan sât thây: /v ' - Ong 1: Không cô màu vàng. - Ong 2: Vân trong. > Buôc 3: Thêm vào 2 ông nghiêm, môi ông 2ml nuôc cât. Lâc dêu. Quan sât thây không cô su tao tua à ông 2. Phân ung âm tmh ♦> Phân ûng diazo hôa: Cho vào ông nghiêm nhô 1ml dich chiét. Thêm vào dô 2ml dung dich NaOH 10%. Dun soi câch thüy, de nguôi. Nhô 3 giot thuôc thü diazo. Quan sât, không thây cô màu dô gach. Phân üng âm tînh. Sa bô két luân trong la Hen không cô coumarin. (Bâng 1) i. Dinh tinh glycosid tim: Lây khoâng 5g bot thô lâ Hen cho vào binh non dung tfch 100ml. Thêm 50ml nuôc cât. Sàc trong 2 giô. Gan dich chiêt vào côc cô mô 100ml. Thêm vào dich chiêt 3ml chi acetat 30%, loai chï thùa bâng dung dich Na2S04 10%, dé lâng. Loc 2 lân qua giây loc. Chuyén toàn bô dich chiét vào binh gan. Chiêt bâng cloroform (10ml x 3 lân). Gan lôp cloroform, chuyén dich chiét vào 4 ông nghiêm nhô, khô. Bôc hoi trên nôi câch thüy dên khi côn lai càn. Can dem thü câc phân ûng sau: ❖ Phân üng Liebermann: Hôa tan càn bâng 0,5ml anhydrid acetic. Lâc dêu. Nghiêng thành ông nghiêm 45°. Thêm 0,5ml H2S04 dâc theo thành ông nghiêm. Mât tiêp xüc giûa 2 lôp chât long thây xuât hiên 1 vông tim dô. Lâc nhe, lôp chât long phia trên cô màu xanh nhat. Phân ung duong tmh. ❖ Phân ung Baljet: Hôa tan càn bâng 0,5ml ethanol 90°. Làc dêu. Nhô tùng giot thuôc thü Baljet vùa pha (acid picric:NaOH 10% = 1:9) thây xuât hiên màu dô da cam. Phân ung duong tmh. 17 ❖ Phân ûng Légal: H5a tan càn bàng 0,5ml ethanol 90° . Làc dêu. Nhô 1 giot thuôc thu natrinitroprusiat 0,5% và 2 giot dung dich NaOH 10%. Làc dêu, thây xuât hiên màu dô. Phân ûng duong tînh. ❖ Phân ûng Relier - Kiliani: Hoa tan càn bâng 0,5ml ethanol 90°. Làc dêu. Thêm 4 giot dung dich FeCl3 5% trong acid acetic. Làc dêu. Thêm 0,5ml H2S04 dàc theo thành ong nghiêm (de nghiêng 45°). Mât tiêp xüc giûa 2 lôp châ't long thây xuât hiên 1 vông tim dô. Làc nhe, lôp chat long phia trên cô màu xanh nhat. Phân ûng duong tînh. So bô két luân trong la Hen cô chüa glycosid tim. (Bâng 1) k. Dinh tînh chat béo, sterol, caroten: Lây khoâng 5g bôt thô la Hen, cho vào binh Soxhlet roi chiét vôi dung môi ether dàu hoa trong 2 gicf. Lây dich ether dàu làm phân ûng: ❖ Dinh tmh chat béo: Nhô 2 giot dich chiét ether dâu lên giây loc, ho khô, thây cô dé lai vêt trên giây loc. Phân ûng duong tînh. ❖ Dinh tînh sterol: (Phân ûng Liebermann- Burchardat) Cho 10ml dich chiét ether dàu vào côc, thêm 2ml dung dich NaOH 10%. Dun câch thuy dén khô. Hoa tan càn trong 3ml cloroform. Lây dich cloroform dé làm phân ûng dinh tmh: Hôn hop gôm 1ml anhydrid acetic và 1ml cloroform dâ dé lanh à 0° C, - sau dô thêm 1 giot H2S04 dàc. Cho hôn hop này tâc dung vôi dich cloroform ô trên, thây dung dich cô màu xanh bên vûng trong môt thôi gian. Phân ûng duong tmh. ❖ Dinh tînh caroten: Lây 3ml dich chiét ether dâu, dem bô'c hoi tôi khi côn càn. Thêm 2 giot H2S04 dàc, thây xuât hiên màu xanh nhat. Phân ûng duong tmh. 18 Sa bô két luân trong lâ Hen co chtia chât béo, sterol và caroten. (Bâng 1) Bâng 1: Ket quâ dinh tînh câc nhôm hop chât trong lâ Hen: STT 1 Nhôm hop chât Alcaloid 2 Saponin 3 Acid hüu ca 4 Tanin Phân img dinh tînh Ket quâ Sa bô ket luân Thuôc thu: Mayer ++++ Thuôc thü Bousacdat ++++ Thuôc thur Dragendorff ++++ Cô Su tao bot - Không cô Phân irng vôi Na2C03 - Không cô Dung dich FeCl3 5% ++++ Dung dich gelatin 1% ++++ Dung dich chi acetat ++++ Cô Cyanidin 5 Flavonoid Dung dich kiêm Dung dich FeCl3 5% 6 Anthraglycosid 7 Ducmg khir 8 Coumarin 9 Glycosid tim Chât béo 10 Sterol Caroten Boctrager Thuôc thur Fehling A+B Không cô + - Không cô ++ Cô Mô- dông vông Lacton Diazo hoa Không cô - Liebermann +++ Baljet +++ Légal +++ Keller - Kiliani +++ Dé lai vêt Cô + Cô Liebermann- Burchardat + Cô Dung dich H2S04 dàc + Cô 19 * Nhân xét: Qua dinh tînh môt s6 hop chât trong lâ Hen thây: Lâ Hen thu hâi vào thâng 7/2002 co câc chât sau: Alcaloid, tanin, glycosid tim, ducmg khü, chât béo, sterol, caroten. Trong do cô mot so chât môi duoc phât hiên trong lân nghiên curu này là ducmg khu, chât béo, sterol và caroten, tuy nhiên môi chî à mire so bô mà de tài nghiên cuu truôc chua cô. 2.2.1.2 - Nghiên cun mot so thành phân hôa hoc chmh cüa lâ Hen: a. Nghiên cuti vê alcaloid: ❖ Chiét xuât alcaloid toàn phân: Tiên hành chiét xuât alcaloid theo phuong phâp chung: Cân khoâng 10g bot thô lâ Hen. Loai chât béo bang ether dàu trong thefi gian 8 giô. Sau khi bay hoi hêt ether dàu. Duofc liêu duoc thâm âm vôi NH4OH 5% dé qua dêm. Tiên hành chiét bâng dung môi cloroform. Cho nguyên liêu dâ duoc thâm âm à trên vào mot tüi vâi. Dàt tüi vâi trên vào bînh Soxhlet. Khi bô dung eu duoc lâp cô dinh. Do cloroform vào binh Soxhlet. Dun câch thuÿ. Tien hành chiét dên khi kiêt alcaloid (thü mûc dô kiêt cüa alcaloid bàng thuôc thü Mayer và dragendorff ). Thu lây dich chiét 6 trên, cô dâc. Dùng H2S04 2% acid hoâ (20ml x 5 lân) dé chuyén alcaloid sang dang muô'i. Dich acid thu duoc dem kiêm hoâ bâng NH4OH dâc dên khoâng pH = 10 (thü bâng giây qui). Chuyén alcaloid dang kiêm sang cloroform. Thu hôi cloroform (bâng mây cât quay duôi âp lue giâm). Càn côn lai duoc hoà tan trong côn tuyêt dô'i thu duoc alcaloid toàn phân. Quâ trinh chiét alcaloid duoc minh hoa theo so dô 2. 20 Sa do 2: Quy trinh chiét xuât alcaloid tù la Hen. ♦> Dinh tmh alcaloid bàng sâc kÿ lôp mông: Tiê'n hành kiëm tra lai sir cô màt cüa alcaloid trong dich chiét trên. Dùng câc thuôc thü Mayer và Dragendorff làm câc phân ûng dinh tmh, két quâ cho thây câc phân ûng dêu duong tmh. 21 Tien hành phân tich bàng sâc kÿ lôp mông dé xâc dinh câc vêt alcaloid : + Dùng bân mông Silicagel 60 F254 Merck (kich thuôc: 3 x 10cm). + Dich châm sâc kÿ: Dich côn cüa alcaloid toàn phàn. + Câc hê dung môi khai triën duçrc khâo sât: Hê I- cloroform:methanol (9:1) Hê H- cloroform:methanol: NH4OH dàc (50:9:1) Hê III- cloroform:methanol (1:1) + Thuôc thü hiên màu: Dragendorff. Ket quâ thü nghiêm cho thây, câc thành phàn cüa alcaloid tâch tôt nhât vôi hê II, duoc thé hiên trong hinh 2 và bâng 2. Hinh 2: Sac kÿ dô cüa Bâng 2: Ket quâ sâc kÿ l&p mông alcaloid alcaloid toàn phàn. toàn phàn trong lâ Hen. Vet Rr Màu sâc vet A! 0,38 Dô cam nhat a2 0,53 Dô cam a3 0,67 Dô cam dâm a4 0,88 Dô cam dâm *Nhân xét: Tù kêt qüa trên thây rang: alcaloid cüa lâ Hen gôm 4 vêt trong dô vê't sô 3 và sô 4 là dâm, rô. 22 ♦> Dinh luçfng alcaloid toàn phân bàng phurong phâp cân: Cân chrnh xâc 10g bôt thô lâ Hen (dâ xâc dinh luçfng âm). Tiên hành chiét xuât theo so dô 1. Dich chiét thu duoc, sau khi loai bô hét tap, sây càn tod khôi luong không dôi, dem cân. Hàm luçfng alcaloid toàn phân duçfc tmh theo công thtrc: X(%) = — -— 100 b (l-c ) Trong dô : a là khôi luong cûa alcaloid toàn phân (g). b là khôi luong duçfc liêu lâ Hen dem chiét (g), c là luçfng âm trong lâ Hen dem chiét (g). Két quâ dinh luçfng duoc tînh trung binh tir 3 lân thuc nghiêm: Vôi: a = 0,0089 (g) b = 10,012 (g) c = 0,1915 (g) Tînh duçfc hàm luçfng alcaloid toàn phân trong lâ Hen trung binh là: 0,11%. b. Nghiên cufu vë glycosid tim: ❖ Chiét xuâ't glycosid: Cân khoâng 10g bôt thô lâ Hen. Loai chât béo bàng ether dâu hoâ. Tiên hành chiét xuât bâng dung môi là côn 70° voi bô dung eu chiét xuât là Soxhlet. Thu lây dich chiét côn ô trên, cô dâc, hôa tan trong 100ml nuôc cât. Loai tap bâng 3ml dung dich chi acetat 30%. Dùng dung dich Na2S04 10% dé loai chi thùa. De làng, loc 2 lân. Cô bôt dich loc, lâc dich loc vôi cloroform. Thu lây phân dich cloroform. Thu hôi cloroform (bàng mây cât quay duôi âp lue giâm). Hôa tan càn trong côn tuyêt dôi, thu duçfc glycosid tim trong côn. Quâ trinh chiét xuât glycosid tim duçfc minh hoa theo so dô 3. 23 Sa dô 3: Quy trînh chiét xuât glycosid tim tù la Hen. ♦♦♦ Dinh tfnh glycosid tim bàng sac kÿ lôp mông: 24 Tien hành kiëm tra lai su cô mât cua glycosid tim trong dich chiét bàng côn nôi trên bang câc phân ûng dinh tmh dâc trung, kêt quâ cho thây câc phân ûng dêu ducfng tînh. Tien hành phân tich bàng sâc kÿ lôp mông dé xâc dinh câc vêt glycosid tim: + Dùng bân mông Silicagel 60 ^254 Merck (kfch thuôc: 3 x 10cm). + Dich châm sâc kÿ: Dich côn cüa glycosid tim. + Câc hê dung môi khai triën duac khâo sât: H ê l - ethylacetat:cyclohexan (4:1) H ê l l - ethylacetat:aceton (9:1) + Hiên màu bàng thuôc thü Légal. Kêt quâ phân tich cho thây khi dùng hê II câc glycosid tim tâch tôt hon. Kêt quâ duac thé hiên trong hinh 3 và bâng 4. Hinh 3: Sâc kÿ dô cüa Bâng 3: Ket quâ sâc kÿ l&p mông glycosid glycosid tim. tim trong lâ Hen. «a Vêt Rf Màu sâc vet G1 0,26 Dô tim nhat G2 0,48 Dô tim dâm g3 0,62 Dô tim dâm g4 0,80 Dô tim dâm G, 25 *Nhân xét: Tù két qüa trên thây rang glycosid cua la Hen gôm 4 vêt trong dô vét sô' 2, so3 và so 4 là dâm, rô. ❖ Dinh luong glycosid tim bâng phuong phâp cân: Cân chmh xâc 10g bôt thô la Hen (dâ xâc dinh lurong âm). Tién hành chiét xuât theo so dô 2. Dich chiét thu duoc, sau khi loai hêt tap, sây càn tôi khôl luong không doi, dem cân. Hàm luong glycosid toàn phàn duoc tmh theo công thtrc: X(%) = — - — 100 b (l-c ) Trong dô : a là khôl luong cüa glycosid toàn phàn (g). b là khôl luong duoc lieu là Hen dem chiét (g), c là luong âm trong la Hen dem chiét (g). Két quâ dinh luong duoc tînh trung binh tù 3 làn thuc nghiêm Vôi: a = 0,0041 (g) b = 10,0126 (g) c = 0,1783 (g) Tmh duoc hàm luong glycosid tim trong la Hen trung binh là: 0,05% c. Nghiên cufu vê tanin: Dinh luong tanin theo phuong phâp bôt da:[6] Cân chmh xâc 10g la Hen (dâ xâc dinh luong âm) cho vào binh non, thêm 150ml nuôc và dun câch thuÿ trong 30 phüt. Dé nguôi, chuyën hôn hop vào binh dinh müc 250ml. Thêm nuôc vùa dû tôi ngân, loc. Dich loc này dùng làm chat thü. ❖ Dinh luçmg toàn phàn châ't chiét duoc trong nuôc: Lây chmh xâc 25ml dung dich thü dem bôc hoi dén khô, sây càn ô 105°C trong 3 giô. Cân duoc khôl luçrng Tt (g). 26 ❖ Dinh luçfng chât chiét duçfc trong nuôc không liên két vcfi bôt da: Lây chmh xâc 100ml dung dich thü, thêm 6g bôt da khô (TT). Lâc dêu trong 15 phüt, loc. Lây chmh xâc 25ml dich loc, bô'c hcfi dên khô, sây cân à 105°C trong 3 gicf. Cân duçfc khôi luçfng T2(g). ❖ Dinh luofng chât chiét duçfc trong nuôc liên két vôi bôt da: Lây chmh xâc 100ml nuôc cât, thêm 6g bôt da khô (TT). Lâc dèu trong 15 phüt, loc. Lây chmh xâc 25ml dich loc, bôc hoi dên khô, sây cân ôf 105°C trong 3 gicf. Cân duçfc khôi luçfng T0 (g). Hàm luçfng % tanin trong lâ Hen duoc tmh theo công thüc: X(%) = (T| - V T°->10ioo a (l-p ) Trong dô: a là khôi luçfng duçfc liêu lâ Hen dem chiét (g), p là luçfng âm trong lâ Hen (g). Két quâ dinh luçfng duçfc tmh trung binh tù 3 lân thuc nghiêm. Vôi: T, = 0,2992 (g) T2 = 0,2898 (g) T0 = 0,0002 (g) a =10,0117 (g) p = 0,1529 (g) Tmh duçfc hàm luçfng tanin trong lâ Hen trung bînh là: 1,12%. 2.2.2 - Thuf tac dung duofc lÿ cüa cao long 1:1 lâ Hen, lâ Cà dôc duorc, Côc mân lên co tron khi quân: ♦> Cao long 1:1 cüa vi lâ Hen; lâ Cà dôc duoc; Côc mân: Câc cao long trên duçfc diêu ché nhu sau: Cân 12g Duçfc liêu dâ duçfc ché bién theo Y hoc Cô truyèn. Cho vào mot côc cô mô, dung tîch 500ml. Thêm mot luçfng nuôc cât vùa dü ngâp duçfc liêu. Sàc lân 1 trong khoâng thcd gian là 1 gicf. Gan loc 27 lây dich sâc (dich sâc 1). Bâ con lai tiép tue cho thêm nuôc câ't và tien hành nhu làm làn 1, kêt quâ thu duac dich sâc 2. Dich sâc 2 duac cô câch thuÿ dên khi con 1/2 luçmg ban dàu. Gôp dich sâc 1 và 2 lai. Tiép tue cô câch thuÿ dên khi luçmg dich chiét côn khoâng 12ml thî dùng lai. Dùng dich chiét này dem thu tâc dung duac lÿ. ♦> Dich nuôi khi quan: * * Dung dich, Tyrode me gom câc thành phàn: - NaCl 160g - KC1 4g - MgCl2 2g - CaCl2 1,4g - Nuôc câ't vd 1000ml Dich nuôi khi quân: - Dung dich Tyrode me 50ml - NaCl lg - Glucose 30% 1,7ml - Nuôc câ't vd 1000ml Tien hành thü tâc dung giân khi quân chuôt lang cô lâp: Chuôt lang khoè manh kë câ hai giông cô trong luçmg 250-300g. Mé lây riêng khi quân, cât sât tù phân dâu khi quân dên chô phân nhânh. Cho ngay vào dùng dich Tyrode (dich nuôi khi quân). Loai bô câc lôp màng bâm xung quanh. Rua sach mâu rôi lâp theo sa dô mô hinh thü (trang 13). Dë không ânh huông dén su sông cüa khi quân, ta phâi tién hành làm nhanh. Nôi khi quân vôi ông mao quân cô chia vach và dât vào ông nuôi khi quân (phàn dàu khi quân quay lên trên) dâ cô san dich nuôi Tyrode và duac én dinh a nhiêt dô 37°C, dông thôi liên tue bam không khi sach vào ông nuôi khi quân. Dë khi quân co thât tu nhiên trong khoâng 15 phüt. Diêu chînh cho côt nuôc vê vach "O" rôi bât dàu th ü . 28 2.2.2.1 - Thu" dâp urng à trang thâi binh thuông cüa khi quân chuôt lang cô lâp: Tién hành vôi tùng châ't thü sau: Tyrode, dung dich Adrenalin 0,005%, dung dich Acetylcholin 0,0025%, và dich thü là cao long 1:1 cüa là Hen, cûa la Cà dôc duoc, cüa Côc mân. Câch tien hành: Thêm 1ml châ't thü Adrenalin hoàc Acetylcolin hoàc mot trong ba cao long trên vào ông nuôi cô san Tyrode, thînh thoâng suc không khi dé tàng nông dô oxy trong dich nuôi. Sau khi quâ trînh dâp ûng két thüc, ghi két quâ dâp ûng dôi vôi tùng mâu thü. Sau môi làn thü, rüa sach khi quân bàng câch rût hét dung dich cü qua van 9 và thay dung dich Tyrode môi vào. Doi cho khi quân trô vê trang thâi ban dàu roi môi làm tiêp. Cô dinh luong dich thü là 1ml cho tât câ câc mâu trong suôt quâ trinh thü. Môi chât thü duoc tien hành thü trên nhiêu khi quân chuôt lang cô lâp khâc nhau. Két quâ duoc ghi trong bâng 4. Câc giâ tri duoc tmh trung bînh tù 5 làn thuc nghiêm. Két quâ duoc trînh bày à bâng 4. Bâng 4: Thü dâp ûng âtrang thâi binh thuùng cüa khi quân chuôt lang cô lâp: Chiéucao côt nuôc (mm) Mâu thuf Tyrode 0,00 ±0,00 Dd Adrenalin 0,005% (-) 7,73 ±0,35 Dd Acetylcholin 0,0025% (+) 8,06 ± 1,47 Cao long 1:1 lâ Hen (-) 1,57 ±0,46 Cao long 1:1 Cà dôc duoc (-) 2,06 ± 0,46 Cao long 1:1 Côc mân (-) 1,05 ±0,32 29 * Ghi chu: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi thü dâp ung à trang thâi bînh thuông cüa khi quân chuôt lang cô lâp thây: - Adrenalin 0,005% co tâc dung làm giân khi quân rat tôt. - Acetylcholin 0,0025% lai co tâc dung làm co khi quân rât manh. - Câc cao long 1:1 cüa lâ Hen, Cà dôc duoc, Côc mân cô tâc dung làm giân nhe khi quân. 2.2.2.2 - Thü tâc dung doi khâng cüa cao long 1:1 cüa lâ Hen, Cà dôc duoc, Côc mân voi Acetylcholin 0,0025%: Tien hành nhu sau: .Thêm 1ml Acetylcholin 0,0025% vào ông nuôi Tyrode. Khi su dâp ung cüa khi quân vôi Acetylcholin két thüc, thêm 1ml cüa 1 trong 3 cao long 1:1 cüa lâ Hen, Cà dôc duoc, Côc mân. Khi dâp ung két thüc, ghi nhân két quâ. Bâng 5: Tâc dung doi khâng cüa cao long 1:1 lâ Hen vâi Acetylcholin 0,0025%: Chiëu cao côt nuôc (mm) Lan thü Dd Acetylcholin 0,0025% Cao long 1: lia Hen 1 (+) 8,5 (-) 9,0 2 (+) 7,5 (-) 9,5 3 (+) 8,0 (-) 7,0 4 (+) 15,5 (-) 13,0 5 (+) 14,5 0 1 1 ,0 6 (+) 10,0 (-) 6,5 Trung bînh (+) 10,58 ±3,34 (-) 9,33 ± 2,44 • * Ghi chu: 30 Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi khi quân bi co thât bcd Aœtylcholin thi tac dung giân khi quan cüa cao long 1:1 lâ Hen thé hiên rât rô. Bâng 6: Tâc dung dôî khâng cüa cao long 1:1 lâ Cà dôc duoc vôiAcetylcholin 0,0025%: Chiêu cao côt nirôc (mm) Làn thur Dd Acetylcholin 0,0025% Cao long 1:1 Cà dôc duac 1 (+) 17,0 (-) 13,5 2 (+) 19,0 (-) 18,5 3 (+) 12,0 (-) 11,5 4 (+) 12,0 (-) 10,0 5 (+) 11,0 (-) 11,0 6 (+) 11,5 (-) 10,5 Trung binh (+) 13,75 ± 3,37 (-) 12,50 ± 3,18 * Ghi chü: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi khi quân bi co thât bai Acetylcholin thi tac dung giân khi quân cûa cao long 1:1 lâ Cà dôc duac thé hiên rât rô. 31 Bâng 7 : Tâc dung doi khâng cüa cao long 1:1 Côc man vôi Acetylcholin 0,0025%: Chiêu cao côt nirôc (mm) Làn thü Dd Acetylcholin 0,0025% Cao long 1:1 Côc mân 1 (+) 10,0 (-) 6,5 2 (+) 6,0 (-) 5,0 3 (+) 8,0 (-) 8,0 4 (+) 9,5 (-) 7,0 5 (+) 8,0 (-) 5,5 6 (+) 7,5 (-) 6,0 Trung bînh (+) 8,17 ±1,44 (-) 6,33 ± 1,08 * Ghi chu: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi khi quân bi co thàt bôi Acetylcholin thï tâc dung giân khi quân cüa cao long 1:1 Côc mân thé hiên rât rô. 2.2.23 - Thü tâc dung cùng chiéu cüa cao long 1:1 cüa la Hen, la Cà dôc diroc, Côc mân vôi Adrenalin 0,005%: Tien hành nhu sau: Thêm 1ml Adrenalin 0,005% vào ông nuôi Tyrode. Khi su dâp üng cüa khi quân vôi Adrenalin két thüc, thêm 1ml cao long 1:1 cüa lâ Hen (hoàc Cà dôc duoc, Côc mân ). Khi dâp üng két thüc, ghi nhân két quâ. Két quâ duoc trînh bày à bâng 8,9,10. 32 Bâng 8: Tâc dung cùng chieu cüa cao long 1:1 lâ Hen vôiAdrenalin 0,005%: « Chieu cao côt rnrôc (mm) Lan thû Dd Adrenalin 0,005% Cao long 1:1 lâ Hen 1 (-) 7,0 (-) 1,0 2 (-) 6,5 (-) 1,5 3 (-) 7,5 (-) 1,0 4 (-) 7,5 (-) 1,5 5 (-) 6,5 (-) 2,0 6 (-) 7,5 (-) 1,5 Trung bînh (-) 7,08 ± 0,49 (-) 1,42 ± 0,38 * Ghi chu: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi khi quân bi giân bai Adrenalin thi cao long 1:1 lâ Hen cô tâc dung làm giân nhe khi quân. Bâng 9: Tâc dung cùng chieu cüa cao long 1:1 Cà dôc duoc vâi Adrenalin 0,005%: Chieu cao côt rnrôc (mm) Lan thû . Dd Adrenalin 0,005% Cao long 1:1 Cà dôc duoc 1 (-) 7,5 (-) 2,5 2 (■) 7,0 (-) 1,5 3 (-) 7,0 (“) 1,5 4 (-) 7,5 (-) 2,0 5 (-) 7,5 (-) 2,0 6 (-) 7,0 (-) 2,5 Trung binh (-) 7,25 ± 0,27 (-) 2,00 ± 0,45 33 * Ghi chü: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi khi quân bi giân bai Adrenalin thi cao long 1:1 lâ Cà dôc duac cô tâc dung làm giân nhe khi quân. Bâng 10: Tâc dung cùng chiéu cüa cao long 1:1 Côc man vôi Adrenalin 0,005%: Chiê'u cao côt nuôc (mm) Lànthür Dd Adrenalin 0,005% Cao long 1:1 Côc mân 1 (-) 7,0 (-) 1,5 2 (-) 8,0 (-) 0,5 3 (-) 7,5 (-) 1,5 4 (-) 7,5 (-) 1,0 5 (-) 6,5 (-) i,o 6 (-) 7,5 (-) 0,5 Trung bînh (-) 7,33 ± 0,52 (-) 1,00 ± 0,45 * Ghi chü: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. * Nhân xét: Khi khi quân bi giân bai Adrenalin thi cao long 1:1 Côc man cô tâc dung làm giân nhe khi quân. NHÂN XÉT CHUNG: + Tût ket quâ thuc nghiêm cho thây: Câc cao long 1:1 cüa lâ Hen, lâ Cà dôc duac, Côc man à trên hàu nhu không ânh huông dên su co thât cüa khi quân chuôt lang cô lâp à trang thâi bînh thucmg. 34 + Khi thur tâc dung doi khâng voi Acetylcholin thl tâc dung giân co tron khi quân duoc thé hiên là tuong doi tôt. + Khi thü tâc dung cùng chiêu vôi Adrenalin thi cô thây tâc dung giân co tron khi quân nhung không dâng ké so vôi Adrenalin. 2.2.2.4 - Sof bô xâc dinh thành phân hoa hoc gây tâc dung giân khi quân cüa lâ Hen: Chüng tôi tiên hành chiét xuât riêng alcaloid và glycosid tim theo dung quy trînh chiét xuât duoc mô ta nhu à so dô 1 và so dô 2. Thu lây hai dich chiét cô nông dô tuong duong vôi cao long 1:1 cüa lâ Hen dâ thü ô trên. Tiên hành thü tâc dung giân khi quân cüa tùng mâu dô'i vôi khi quân chuôt lang cô lâp sau khi dâ gây co thàt bàng dung dich Acetylcholin 0,0025%. Câch tiên hành tuong tu nhu trong phàn 2.2.2. Két quâ duoc trînh bày ô bâng 11,12. Bâng 11: Tâc dung giân khi quân cüa dich chiét alcaloid: Chiêu cao côt nuôc (mm) Làn thü Dd Acetylcholin 0,0025% Dich chiét alcaloid 1 (+) 9,5 (-) 5,5 2 (+) 9,5 (-) 4,0 3 (+) 8,0 (-) 4,5 4 (+) 9,0 (-) 3,0 5 (+) 7,5 0 4 ,5 6 (+) 8,0 (-) 5,0 Trung binh (+) 8,58 ± 0,91 (-) 4,42 ±1,13 * Ghi chu: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. 35 Bâng 12: Tâc dung giân khi quân cüa dich chiét glycosid tim: Chièu cao côt nufôc (mm) Lànthur Dd Acetylcholin 0,0025% Dich chiét glycosid tim 1 (+) 8,5 (-) 0,0 2 (+) 10,0 (-) 0,5 3 (+) 8,0 (-) 0,0 4 (+) 8,0 (-) 0,0 5 (+) 9,5 (-) 1,0 6 (+) 11,0 (-) 0,0 Trung bînh (+) 9,17 ± 1,21 (-) 0,25 ± 0,42 * Ghi chü: Dâu (+): Co khi quân. Dâu (-): Giân khi quân. • Nhân xét: Tu kêt quâ thuc nghiêm trên cho thây: Alcaloid trong lâ Hen cô tâc dung làm giân khi quân tuong dôi tôt, con glycosid tim hâu nhu không cô tâc dung này. Vï vây chüng tôi so bô kêt luân: Thành phàn hoa hoc trong lâ Hen cô tâc dung làm giân co tron khi quân là alcaloid. 2.3 - Bàn luân: Qua quâ trînh thuc nghiêm chüng tôi thây râng: - Trong dieu kiên bînh thucmg (khi quân không bi co thât) thî tâc dung giân khi quân cüa câc vi thuôc trên là không dâng kê, hay nôi môt câch khâc là thuôc hâu nhu không ânh huông tôi nguôi bînh thuông. - Trong dieu kiên khi quân bi co thât bcti Acetylcholin thî câc vi thuôc trên cô tâc dung làm giân khi quân manh, và nhu vây câc vi thuôc này cô tâc 36 dung rat tôt trong viêc diêu tri bênh hen xuyên, mà nhât là hen xuyên do roi loan thàn kinh thuc vât. - Trong diêu kiên khi quân bi giân bai Adrenalin thi câc vi thuôc trên vân thé hiên tâc dung giân nhe khi quân (tuong duong vôi diêu kiên binh thucmg), diêu này giüp ta nghî dên co chê" tâc dung cüa câc vi thuôc trên cô thé ô vi tri khâc (receptor khâc) vôi Adrenalin, và cô thé câc vi thuôc này cô tâc dung hiêp dông vôi Adrenalin. Bênh hen xuyên ô nuôc ta ngày càng phât triën manh; Cô tôi 5% dân sô bi bênh này. Câc vi thuôc dé tri hen trong dân gian cô nhiêu; song câc phuong thuôc chüa hen xuyên chua cô nhiêu và hàu nhu chî duoc nghiên cuu vê mât hôa hoc. Thuc nghiêm giân-khi quân chuôt lang là phuong phâp dang tin cây de kiêm tra mot vi thuôc, mot chê' phàm thuôc cô tâc dung chüa hen xuyên hay không. Tir co sa này cô thé phât hiên câc vi thuôc và phuong thuôc môi de chüa hen xuyên. Cà dôc duoc, lâ Hen, Côc mân trên thuc tê' nhân dân dùng dé chua ho hen; song vê mât nghiên ciru khoa hoc trên khi quân thuc nghiêm thi dây môi là buôc dàu o nuôc ta. Do dô cân tiên tôi cô kê' hoach xây dung mô hinh thuc nghiêm thât on dinh, thât chmh xâc; De vân dung cho câc vi thuôc, phuong thuôc khâc sau này. 37 PHAN 3 - KÉT LUÂN VÀ DE XUAT 3.1 - Két luân: Qua quâ trînh thuc nghiêm và nhùng két quâ thu duoc à trên chüng tôi sa bô rut ra môt sô két luân nhu sau: 3.1.1 - Vê thành phàn hoa hoc cüa lâ Hen (thu hâi vào thâng 7-10): + Trong lâ Hen co câc thành phân hoâ hoc là: Alcaloid, glycosid tim, tanin, dirông khü, chat béo, sterol và caroten. + Tù alcaloid dâ tâch ra duoc 4 vét trên sàc kÿ lôp mông. + Dâ tiên hành dinh luçmg, sa bô xâc dinh duoc hàm luong alcaloid toàn phàn trong lâ Hen là: 0,11%’. + Tù glycosid tim dà tâch ra duoc 4 vêt trên sàc kÿ lôp mông. + Dâ tiên hành dinh luçmg glycosid tim, sa bô xâc dinh duoc hàm luong glycosid tim trong lâ Hen là: 0,05%. + Dâ tiên hành dinh luong tanin, sa bô xâc dinh duoc hàm luong tanin trong lâ Hen là: 1,12%. 3.1.2 - Vê tâc dung duoc lÿ cüa 3 vi thuôc: Lâ Hen, Cà dôc duoc, Côc mân: + Cao long 1:1 cûa lâ Hen, lâ Cà dôc duoc, Côc mân hâu nhu không ânh huong dên su co thàt cüa khi quân chuôt lang cô lâp à trang thâi bînh thuông. + Trên khi quân bi co thàt bai Acetylcholin thây tâc dung giân ca tron khi quân chuôt lang cô lâp cûa câc cao long trên duoc thé hiên là tuong doi tôt. + Trên khi quân bi giân bai Adrenalin, câc vi thuôc này vân cô tâc dung (tuy nhiên chi à mûc dô nhe), cô thé câc vi thôc này cô tâc dung hiêp dông vôi Adrenalin. 38 + Khi chiét tâch lây riêng alcaloid và glycosid tim trong lâ Hen dem thü tâc dung duoc lÿ, thi thây alcaloid cô tâc dung làm giân co tron khi quân chuôt lang cô lâp, con glycosid tim thi hâu nhu không cô tâc dung này. * Tôm lai: TU câc kêt quâ thuc nghiêm à trên, chüng tôi thây câ 3 vi thuôc: Lâ Hen, Cà dôc duoc, Côc man dêu co tâc dung làm giân co tron khi quân. Diêu dô phù hçrp vôi kinh nghiêm dùng câc vi thuôc trên dé chüa bênh ho, hen trong dân gian. 3.2 - Dê xuât: Nhu chüng ta dâ biét: Câc bênh vê duông hô hâp ngày nay là râ't pho bien, vi vây viêc tim ra duoc mot vi thuôc dë chüa câc chüng bênh này là diêu vô cùng quÿ hiêm (dâc biêt là câc vi thuôc cô tâc dung chüa tri hen xuyên). Qua mot sô thuc nghiêm dâ duoc tien hành trong khoâ luân, chüng tôi thây rang: Lâ Hen, lâ Cà dôc duoc, Côc man là câc vi thuôc rât cô y nghïa doi vôi chüng bênh này. Tuy nhiên trong diêu kiên thuc hiên khoâ luân cô han vê thcfi gian, mà nhiêu uu diëm khâc cüa câc vi thuôc này chua duoc phât hiên ra. Do vây chüng tôi dê nghi nên tiép tue nghiên cüu sâu hon nüa hai vi thuôc lâ Hen và Côc man vê câc mât: Thành phàn hoâ hoc, tâc dung duoc lÿ cüng nhu tâc dung sinh hoc cüa hai vi thuôc này nhâm mue dich tao dung mot co sà khoa hoc vüng châc cho viêc sü dung câc vi thuôc nôi trên. 39 TÀI LIÊU THAM KHÂO 1. Bô mon Duoc hoc Co trayên - Dai hoc Duçfc Hà Nôi (2002), Duoc hoc Co truyen - NXB Y hoc. 2. Bô mon Duoc hoc Co trayên - Dai hoc Duoc Hà Nôi (1997), Thuc tâp Duoc hoc Co truyen. 3. Bô mon Duoc liêu - Dai hoc Duoc Hà Nôi (2002), Bài giâng Duoc liêu tâp I - NXB Y hoc. 4. Bô mon Duçfc liêu - Dai hoc Duçfc Hà Nôi (2002), Bài giâng Duoc liêu tâp II - NXB Y hoc. 5. Bô mon Duçfc liêu - Dai hoc Duçfc Hà Nôi (1999), Thuc tâp Duoc liêu. 6. Bô y tê" (2002), Duoc dien Viêt Nam III - NXB Y hoc, trang 141. 7. Nguyên Nàng An (1997), Hen phe quân, tài liêu tâp huâ'n tai khoa di ûng mien dich lâm sàng, trang 12- 40 . 8. Dô Huy Bfch, Bùi Xuân Chuong (1980), So tay cây thuoc Viêt Nam - NXB Y hoc, trang 69,126. 9. Nguyên Thanh Binh (1993), Nghiên cùu thành phân hoâ hoc và tâc dung sinh hoc cüa cây Muâp - Luân vàn tôt nghiêp trof lÿ giâng day và nghiên cuu. 10. Vô Vàn Chi (1999), Cây cô cô îch à Viêt Nam, tâp 1 - NXB Giâo duc, trang 698,1134. 11. Dào Vàn Chinh (1991), Hen phe quân, Bach khoa thu bênh hoc, tâp 1, trang 169-173. 12. Nguyên Vân Dàn, Nguyên Viê't Tuu (1985), Phuong phâp nghiên cùu hoâ hoc cây thuoc - NXB Y hoc 1985, trang 357359, 360-364, 387-390. 13. Trinh Thi Thanh Hai (1992), Nghiên cûu thành phàn hoâ hoc và tâc dung duac lÿ cüa lâ Hen - Luân vân tôt nghiêp Duoc sî Dai hoc khoâ 42. 14. Duong Trong Hiéu (1998), Phông và diêu tri Hen phé quân NXB Y hoc, trang 10-25. 15. Pham Hoàng Hô (1972), Cây cô miên Nam Viêt Nam, quyên II, trang 191. 16. Nguyên Thi Thanh Huong (1993), Gôp phàn nghiên cûu cây Coc man - Công trinh tôt nghiêp Duoc sî Dai hoc khoâ 43. 17. Nguyên Thi Thanh Huong (1995), Gôp phàn nghiên cûu vi thuoc Côc man vê thành phàn hoâ hoc và tâc dung khâng khuan - Công trinh tôt nghiêp tro lÿ nghiên cuu và giâng day khôa 6. 18. Dô Tât Loi (1997), Nhûng cây thuoc và vi thuoc Viêt Nam NXB Khoa hoc và Kÿ thuât, trang 652-714. 19. Nguyên Thi Phuong Mai (1994), Thành phàn hoâ hoc và tâc dung khâng khuan cüa cây Côc mân - Công trinh tôt nghiêp Duoc sî Dai hoc. 20. Chu Vân Mân, Dào Hüu Hô (2001), Giâo trinh thong kê sinh hoc - NXB Y hoc. 21. Trân Thi Oanh (1999), Gôp phàn nghiên cûu phucmg thuoc Tam tüthang - Luân vân tôt nghiêp Thac sî Duoc hoc. 22. Pham Xuân Sinh (1999), Phuong phâp ché bien thuoc Co truyén - NXB Y hoc. 23. Pham Xuân Sinh (1994), Gôp phàn nghiên cûu cây lâ Hen Tap chf Duoc hoc, sô' 1. 24. Pham Xuân Sinh (2001), Thuoc Co truyên phông và tri bênh ho, hen - NXB Y hoc. 25. Nguyën Manh Tuyën (1998), Gôp phàn nghiên cûu phuong thuôc Nhi tràn thang gia giâm - Luân van tôt nghiêp Thac sî D u üc. - %647 - [...]... phõn (g) b l khụi luong duỗfc liờu lõ Hen dem chiột (g), c l luỗfng õm trong lõ Hen dem chiột (g) Kột quõ dinh luỗfng duoc tợnh trung binh tir 3 lõn thuc nghiờm: Vụi: a = 0,0089 (g) b = 10,012 (g) c = 0,1915 (g) Tợnh duỗfc hm luỗfng alcaloid ton phõn trong lõ Hen trung binh l: 0,11% b Nghiờn cufu vở glycosid tim: Chiột xuõ't glycosid: Cõn khoõng 10g bụt thụ lõ Hen Loai chõt bộo bng ether dõu hoõ Tiờn... ton phn (g) b l khụl luong duoc lieu l Hen dem chiột (g), c l luong õm trong la Hen dem chiột (g) Kột quõ dinh luong duoc tợnh trung binh tự 3 ln thuc nghiờm Vụi: a = 0,0041 (g) b = 10,0126 (g) c = 0,1783 (g) Tmh duoc hm luong glycosid tim trong la Hen trung binh l: 0,05% c Nghiờn cufu vờ tanin: Dinh luong tanin theo phuong phõp bụt da:[6] Cõn chmh xõc 10g la Hen (dõ xõc dinh luong õm) cho vo binh... T0 (g) Hm luỗfng % tanin trong lõ Hen duoc tmh theo cụng thỹc: X(%) = (T| - V T->10ioo a (l-p ) Trong dụ: a l khụi luỗfng duỗfc liờu lõ Hen dem chiột (g), p l luỗfng õm trong lõ Hen (g) Kột quõ dinh luỗfng duỗfc tmh trung binh tự 3 lõn thuc nghiờm Vụi: T, = 0,2992 (g) T2 = 0,2898 (g) T0 = 0,0002 (g) a =10,0117 (g) p = 0,1529 (g) Tmh duỗfc hm luỗfng tanin trong lõ Hen trung bợnh l: 1,12% 2.2.2 - Thuf... Sa bụ kột luõn trong lõ Hen cụ chira alcaloid (Bõng 1) b Dinh tợnh saponin: Lõy khoõng 2g bụt thụ lõ Hen Thờm 20ml nuục c õ t Dun soi nhe trong 2 phut Loc lõy dich cho vo ụng nghiờm Lc theo chiờu doc trong 5 phỹt, thõy tao bot De yờn 15 phỹt, thõy cụt bot võn cụn Cho 3 giot H2S04dc, thõy cụt bot tan hột Bot tao thnh khụng phõi do saponin Phõn ỹng õm tợnh So bụ kột luõn trong lõ Hen khụng cụ saponin (Bõng... (Bõng 1) c Dinh tmh acid hỹu ca: Lõy khoõng 3g bụt thụ la Hen cho vo cục co mụ Thờm 20ml nuục cõt Dun sụi 5 phỹt Loc lõy dich lm phõn ỷng: Lõy 1ml dich loc cho vo ong nghiờm Thờm khoõng lOmg bụt Na2C 03, khụng thõy bot khi noi lờn Phõn ỷng õm tmh Sa bụ kột luõn trong la Hen khụng cụ acid hỷu co (Bõng 1) d Dinh tợnh tanin: Lõy khoõng 3g bụt thụ la Hen cho vo cục cụ mụ Thờm 20ml nuục cõt Dun sụi 5 phỹt... Sa bụ kờ't luõn trong lõ Hen khụng cụ flavonoid (Bang 1) f Dinh tợnh anthraglycosid (phõn ỷng Boctrager): Lõy khoõng 3g bụt thụ lõ Hen cho vo binh non dung tich 100ml Thờm 40ml H2S04 10% Dun sụi cõch thỹy 15 phỹt De nguụi, loc Dich loc cho vo binh gan Lõc vụi 5ml ether ethylic Thờm 3ml dung dich NaOH 10% thõy lụp nuục khụng cụ mu dụ sim Phõn ỷng õm tmh Sa bụ kờt luõn trong lõ Hen khụng cụ anthraglycosid... lg bụt thụ lõ Hen cho vo ụng nghiờm lụn Thờm 10ml nuục cõt Dun sụi cõch thỹy 5 phỹt Loc lõy dich lm thf nghiờm: Cho vo ụng nghiờm 2ml dich chiột Thờm 0,5ml thuục thỹ Fehling A cụng vụi 0,5ml thuục thỹ Fehling B Dun sụi cõch thỹy vi phỹt Thõy cụ xuõt hiờn tỹa dụ gach Phõn ỷng duang tợnh Sa bụ kờ't luõn trong lõ Hen cụ chỷa duụng khỹ (Bõng 1) h Dinh tợnh coumarin: Lõy khoõng lg bụt thụ lõ Hen cho vo ụng... bộo 10 Sterol Caroten Boctrager Thuục thur Fehling A+B Khụng cụ + - Khụng cụ ++ Cụ Mụ- dụng vụng Lacton Diazo hoa Khụng cụ - Liebermann +++ Baljet +++ Lộgal +++ Keller - Kiliani +++ Dộ lai vờt Cụ + Cụ Liebermann- Burchardat + Cụ Dung dich H2S04 dc + Cụ 19 * Nhõn xột: Qua dinh tợnh mụt s6 hop chõt trong lõ Hen thõy: Lõ Hen thu hõi vo thõng 7/2002 co cõc chõt sau: Alcaloid, tanin, glycosid tim, ducmg khỹ,... sõc k l&p mụng alcaloid alcaloid ton phn ton phn trong lõ Hen Vet Rr Mu sõc vet A! 0,38 Dụ cam nhat a2 0,53 Dụ cam a3 0,67 Dụ cam dõm a4 0,88 Dụ cam dõm *Nhõn xột: Tự kờt qỹa trờn thõy rang: alcaloid cỹa lõ Hen gụm 4 vờt trong dụ vờ't sụ 3 v sụ 4 l dõm, rụ 22 > Dinh luỗfng alcaloid ton phõn bng phurong phõp cõn: Cõn chrnh xõc 10g bụt thụ lõ Hen (dõ xõc dinh luỗfng õm) Tiờn hnh chiột xuõt theo so dụ... nghiờn cỷu: 2.1.1 - Nguyờn võt liờu: 2.1.1.1 - La Hen: (Folium Calotropis) Thu hõi la bõnh tộ cua cõy Hen (Calotropis gigantea R.Br) moc hoang vựng Bc sụng Duụng vo thõng 7-10 nm 2002 Dựng või am lau sach long v phõn trõng mõt sau la, nia sach dộ rõo nirac, phoi tõi rụi thõi nhụ, tiộp tue phoi dộn khụ, sau dụ tan thnh bụt thụ.[l,2,24] I M *7 Anh 1: Cõy Hen (Calotropis gigantea Asclepiadaceae) 10 2.1.1.2 ... [7] Ngudi ta thucmg chia thnh nhụm hen chmh: Hen di ỹng hay hen ngoai lai v khụng di ỹng hay hen nụi tai.[l 1] + Hen di ung: Dõc diờm chỷ yờu cỹa hen di ỹng l hen xuat hiờn tiờp xỹc vụi mot chõt... viờn Ngụ Duy Dụng MUC LUC Trang D^T VAN DE PHAN - TễNG QUAN 1.1 - Vi nột vờ moi liờn quan giỷra bờnh hen v sur co thõt quan 1.2 - Mot so vi thuoc chỹfa hen dựng nghiờn cihi 2 1.2.1-La Hen 1.2.2... tõc dung hiờp dụng vụi Adrenalin Bờnh hen xuyờn ụ nuục ta ngy cng phõt triởn manh; Cụ tụi 5% dõn sụ bi bờnh ny Cõc vi thuục dộ tri hen dõn gian cụ nhiờu; song cõc phuong thuục chỹa hen xuyờn chua