Ở Việt Nam lá Trứng cá được sắc uống để điều kinh, trị các bệnh về gan, được trồng rộng rãi và chưa nhiều nghiên cứu. Đó là lý do tiến hành đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây Trứng cá (Muntingia calabura L.)”. Lá Trứng cá thu hái tại thành phố Biên Hòa, tỉnh Đồng Nai vào tháng 06/2017. Sử dụng phương pháp chiết ngấm kiệt với cồn 80%, phân bố lỏng – lỏng, sắc ký cột pha thuận, và các phương pháp tinh chế để phân lập các hợp chất tinh khiết. Xác định cấu trúc các chất đã phân lập bằng phương pháp phổ học (UV, MS, NMR).
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC TỪ LÁ TRỨNG CÁ Lê Thị Thu Hồng*, Võ Văn Lẹo** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Ở Việt Nam Trứng cá sắc uống để điều kinh, trị bệnh gan, trồng rộng rãi chưa nhiều nghiên cứu Đó lý tiến hành đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học Trứng cá (Muntingia calabura L.)” Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Lá Trứng cá thu hái thành phố Biên Hòa, tỉnh Đồng Nai vào tháng 06/2017 Sử dụng phương pháp chiết ngấm kiệt với cồn 80%, phân bố lỏng – lỏng, sắc ký cột pha thuận, phương pháp tinh chế để phân lập hợp chất tinh khiết Xác định cấu trúc chất phân lập phương pháp phổ học (UV, MS, NMR) Kết quả: Từ 10 kg bột dược liệu chiết ngấm kiệt, loại chlorophyll, lắc phân bố lỏng-lỏng, loại dung môi thu cao n-hexan (8,02 g), chloroform (49,06 g), ethyl acetat (261,26 g) Từ 60 g cao ethyl acetat phận lập flavonoid hợp chất phenol là: quercetin (232 mg) (1), isoquercitrin (25 mg) (4), acid gallic (870 mg) (2) davidiin (90 mg) (3) Kết luận: Davidiin isoquercitrin lần phân lập từ Trứng cá Từ khóa: Trứng cá ABSTRACT STUDIES ON CHEMICAL CONSTITUENTS FROM LEAVES OF MUNTINGIA CALABURA L MUNTINGIACEAE Le Thi Thu Hong, Vo Van Leo * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 99 – 103 Objectives: To isolate and identify chemical constituents of leaves of Muntingia calabura L Materials and Methods: Leaves of Muntingia calabura were collected in Bien Hoa in June, 2017 Percolation, liquid-liquid distribution, column chromatography and other purification methods were used for extraction and isolation The structures of compounds were identified, using spectrometric methods: UV, MS and NMR, in comparison with literature data Results: 10 kg dried leaves of M calabura was extracted with ethanol 80% Afterwards, the solvent was evaporated to get a condense Ethanol 80% extract Ethanol 80% extract was partitioned with the solvents of increasing polarities to obtain four fractions after evaporation: n-hexan extract (8.02 g), chloroform extract (49.06 g) and ethyl acetate extract (261.26 g), respectively Two flavonoids together with two other phenoilc compounds: quercetin, isoquercitrin, gallic acid, and davidiin, were isolated from 60 g ethyl acetate extract Conclutions: Davidiin and isoquercetin were isolated from M calabura for the first time Keywords: Muntingia calabura L ĐẶTVẤNĐỀ Cây Trứng cá (Mungtingia calabura L.) có nguồn gốc nhiệt đới châu Mỹ Ở Việt Nam Trứng cá trồng rộng rãi Flavonoid *Khoa Dược, Đại học Lạc Hồng Tác giả liên lạc: ThS Lê Thị Thu Hồng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền thành phần hóa học phân lập từ Trứng cá Từ lâu Việt Nam Trứng cá sắc uống để lợi kinh trị bệnh gan(9) Trên giới có nhiều nghiên cứu tác dụng **Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ĐT: 0388306182 Email: hongle5792@gmail.com 99 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Trứng cá kháng khuẩn, kháng viêm, độc tế bào hoạt tính chống oxy hóa(5) Ở Việt Nam chưa có nhiều cơng bố chất phân lập đươc từ Trứng cá Mục tiêu nghiên cứu Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc hóa học chất từ Trứng cá (Muntingia calabura L.) NGUYÊNLIỆU- PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thí nghiệm Nguyên liệu Nguyên liệu Trứng cá (10 kg) thu hái thành phố Biên Hòa, tỉnh Đồng Nai vào tháng 6/2017 Mẫu dược liệu TS Võ Văn Chi, nguyên giảng viên Bộ môn Dược liệu, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh định danh, xác định tên khoa học Muntingia calabura L., thuộc họ Trứng cá (Muntingiaceae) Mẫu nghiên cứu lưu giữ Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh với mã MC-01 Dung mơi hóa chất, trang thiết bị Dung môi sử dụng nghiên cứu dung môi đạt tiêu chuẩn tinh khiết dùng phân tích hợp chất tự nhiên, bao gồm ethanol, methanol, n-hexan, chloroform ethyl acetat, nguồn gốc Trung quốc Sắc ký lớp mỏng thực mỏng silica gel F254 (Merck) Phát đèn UV bước sóng UV 254 nm, UV 365 nm, thuốc thử VS (vanillin sulphuric) thuốc thử FeCl3 5% cồn Sắc ký cột tiến hành với silica gel pha thuận, Trung Quốc, cỡ hạt 0,040-0,063 mm Phổ khối (ESI-MS) đo máy ALIGENT 1100 MC-LSD Trap Viện cơng nghệ hóa học Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC đo dung môi DMSO-d6 máy Bruker AM 500 FT-NMR spectrometer Viện hóa học, Viện Hàn lâm khoa học cơng 100 nghệ Việt Nam Chiết xuất, phân lập Bột khô (10 kg) chiết ngấm kiệt ethanol 80% Cô thu hồi dung mơi, thu 1,5 lít cao tồn phần, để lạnh loại chlorophyll Cao toàn phần sau loại chlorophyll thêm nước, lắc phân bố với dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexan, chloroform, ethyl acetat Cô thu hồi dung môi thu cao: hexan (8,02 g), chloroform (40,06 g), ethyl acetat (216,26 g) Tiến hành sắc ký cột nhanh với 60 g cao phân đoạn ethyl acetat thu 15 phân đoạn (PĐ 1-15) Tủa từ phân đoạn PĐ5, 7, 14 lọc rửa, kết tinh lại methanol thu hợp chất (232 mg), (870 mg), (90 mg) Phân đoạn 15 triển khai qua sắc ký cột cổ điển với hệ dung môi chloroform-methanol với tỉ lệ methanol tăng dần thu phân đoạn 15A-15H Từ phân đoạn 15E thu hợp chất (25 mg) KẾT QUẢ Hợp chất Bột vơ định hình màu vàng, cho màu vàng với thuốc thử vanillin-sulfuric Phổ ESI-MS m/z [M-H]- = 301,20, ứng với khối lượng phân tử 302, công thức phân tử C15H10O7 Phổ 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz): 146,8 (C-2); 135,6 (C-3); 175,8 (C-4); 160,6 (C-5); 98,1 (C-6); 163,8 (C-7); 93,3 (C-8); 156,1 (C-9); 103,0 (C-10); 121,9 (C-1’); 115,0 (C-2’); 145,0 (C-3’); 147,6 (C-4’); 115,5 (C-5’); 119,9 (C-6’) Phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz): 6,18 d (2) (H-6); 6,40 d (2) (H-8); 7,67 d (2) (H-2’); 6,88 d (8) (H-5’); 7,53 dd (8;2) (H-6’) Phổ 13CNMR có tín hiệu ứng với 15 carbon, khơng có tín hiệu đối xứng, δCmax 175,9 C=O) Phổ 11H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz): 6,92 s (H-2/6); 9,13 s (OH-3/5); 12,16 s (>COOH) Phổ 13C-NMR có tín hiệu, tín hiệu đối xứng với ∆δC= 36,77, δCmax 167,4, tất tín hiệu có độ dịch chuyển 100 ppm Vậy hợp chất có carbon với vòng thơm nhóm thế, nhóm –COOH Phổ 1H-NMR có tín hiệu proton đối xứng vòng thơm δH 6,18 s Kết hợp tất liệu so sánh với tài liệu tham khảo(8) hợp chất xác định acid gallic Hợp chất Bột vô định hình khơng màu khơng màu với thuốc thử vanillin-sulfuric Phổ ESI-MS m/z [M-H]- =937,0951, ứng với khối lượng phân tử 938, công thức phân tử C41H29O26 Phổ 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz): Glucose 94,5 (C-1); 71,4 (C-2); 68,8 (C-3); 71,2 (C-4); 75,4 (C-5); 64,1(C-6); HHDP: 116,04 (C-1’); 122,67 (C-2’); 106,96 (C-3’); 143,87 (C-4’); 135,77 (C-5’); 144,53 (C-6’); 165,92 (C-7’); 115,49 (C-1”); 123,51 (C-2”); 106,92 (C-3”); 144,10 (C-4”); 135,54 (C-5”); 144,76 (C-6”); 167,29 (C-7”); Gallic-II: 117,87 (C-1-II); 108,87 (C-2/6-II); 143,37 (C-3/5-II); 138,99 (C-4-II); 164,45 (C-7-II); Gallic-III: 118,20 (C-1-III); 108,97 (C-2/6-III); 1145,53 (C-3/5-III); 138,16 (C-4-III); 164,91 (C-7III); Gallic-IV: 118,02 (C-1-IV); 108,97 (C-2/6-IV), 145,51 (C-3/5-IV); 139,12 (C-4-IV); 165,33(C-7-IV) Phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz): Glucose 5,94 d (4,5) (H-1); 5,58 dd (10;4) (H-2); 5,71 t (H-3); 5,18 dd (9;3,5) (H-4); 4,38 t (H-5); 5,56 t 4,30 m (H-6); 6,56 s (1H, H-3’); 6,58 s (1H, H-3”); 6,93 s (2H, H-2/6-II); 6,86 s (2H, H-2/6-III); 6,88 s (2H, Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học H-2/6-IV) Phổ 13C-NMR hợp chất có 35 tín hiệu carbon, có cặp tín hiệu carbon đối xứng cách khoảng 30 ppm, tín hiệu carbonyl C=O δC 167,29; 165,92; 165,33; 164,91; 164,45 đặc trưng cho acid gallic; tín hiệu carbon vùng 60-80 ppm, tín hiệu carbon δC 94,5 đặc trưng cho đường carbon Phổ 1H-NMR có tín hiệu proton vòng thơm 6,93 s (2H); 6,88 s (2H); 6,86 s (2H) 6,58 s (1H); 6,56 s (1H) Dự đốn hợp chất có 41 carbon phân tử có acid gallic gắn vào phân tử đường, có acid gallic nối với tạo khung hexahydroxydiphenol (HHDP), làm tính đối xứng acid gallic, giảm tín hiệu proton Từ phổ 1H-NMR, HSQC, HMBC, COSY xác định đường carbon đường β-D-glucose, khung HHDP gắn OH vị trí số 1,6 đường Kết hợp tất liệu so sánh với tài liệu tham khảo(3) hợp chất xác định davidiin (2,3,4-tri-O-galloyl-1,6-(S)-hexahydroxydiphenoylβ-D-glucopyranosid) Hợp chất Bột vơ định hình màu vàng, cho màu vàng với thuốc thử vanillin-sulfuric Phổ ESI-MS m/z [M-H]- = 463,05, ứng với khối lượng phân tử 464, công thức phân tử C21H20O12 Phổ 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz): 156,1 (C-2); 133,3 (C-3); 177,4(C-4); 161,2 (C-5); 98,8 (C-6); 164,5 (C-7); 93,6 (C-8); 156,3 (C-9); 103,8 (C-10); 121,1 (C-1’); 115,2 (C-2’); 144,8 (C-3’); 148,5 (C-4’); 116,1 (C-5’); 121,6 (C-6’); 100,9 (C-1’’’); 74,3 (C-2’’’); 76,7 (C-3’’’); 70,2(C-4’’’); 77,8 (C-5’’’); 61,0 (C-6’’’) Phổ 1HNMR (DMSO-d6, 500 MHz): 6,19 d (2) (H-6); 6,39 d (2) (H-8); 7,56 d (2) (H-2’); 6,84 d (9) (H-5’); 7,57 m (H-6’) Phổ 13C-NMR có 21 tín hiệu carbon, δCmax 177,4, khơng có tín hiệu carbon đối xứng, tín hiêu carbon downfiled >130 ppm Kết hợp với phổ 1H-NMR có tín hiệu proton δH 12,62 s, hai tín hiệu proton ghép cặp meta δH 6,18 (1H, d, J=2 Hz) 6,39 (1H, d, J=2 Hz) dự đoán hợp chất có khung quercetin tín hiệu carbon vùng dịch chuyển từ 60-80 ppm, tín hiệu carbon δC 100,9 tín hiệu proton δH 6,18 5,44 d (7,5 Hz) đặc chưng cho tín hiệu đường β-D- 101 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học glucose Từ phổ HMBC tín hiệu 5,44 d (7,5 Hz) H-1 amomer đường tương tác với carbon δC 133 (C-3) nên đường gắn OH vị trí C-3 khung quercetin Kết hợp liệu so sánh với tài liệu tham khảo(1) hợp chất xác định isoquercitrin (quercetin-3-O-β-Dglucopyranosid) Hình Cơng thức hóa học tương tác HMBC chất phân lập BÀN LUẬN KẾT LUẬN Bốn hợp chất phân lập từ phân đoạn ethyl acetat Trứng cá có hai flavonoid quercetin, isoquercitrin, acid hữu acid gallic, tanin davidiin Quercetin báo cáo phân lập từ Trứng cá năm 1990(6) Isoquercitrin lần báo cáo Trứng cá Hai flavonoid phổ biến dược liệu Davidiin ellagitannin lần phân lập từ Trứng cá Muntingia calbura L Năm 1982 davidiin báo cáo phân lập lần từ lồi Davidia involucrata sau nhiều báo cáo phân lập từ loài Polygonum capitatum, Acer saccharum, Antidesma (4,10,11) pentandrum Davidiin nghiên cứu có tác dụng chống ung thư biểu mô tế bào gan, chất tiềm chống ung thư tế bào gan, có tác dụng ức chế liên quan đến thụ thể µopioid(7,10) Bốn hợp chất 1-4 phân lập từ phân đoạn ethylacetat Trứng cá xác định quercetin, acid gallic, davidiin, isoquercitrin Trong hợp chất davidiin (3) tanin lần phân lập từ Trứng cá 102 TÀI LIỆU THAM KHẢO Deepralard K, et al (2009) "Flavonoid glycosides from the leaves of Uvaria rufa with advanced glycation end-products inhibitory activity" Thai Journal of Pharmaceutical Sciences, 33:84-90 Güvenalp Z, et al (2005) "Flavonol glycosides from Asperula arvensis L" Turkish Journal of Chemistry 29(2):163-169 Haddock EA, et al (1982) "The metabolism of gallic acid and hexahydroxydiphenic acid in plants Part Esters of (R)-and (S)hexahydroxydiphenic acid and dehydrohexahydroxydiphenic acid with D-glucopyranose (1C4 and related conformations)" Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1, pp.2535-2545 Hatano T, et al (1990) "Gallotannins having a 1, 5-anhydro-Dglucitol core and some ellagitannins from Acer species" Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 38(7):1902-1905 Mahmood N, et al (2014) "Muntingia calabura: a review of its traditional uses, chemical properties, and pharmacological observations" Pharmaceutical biology, 52(12):1598-1623 Seetharaman TR (1990) "Polyphenols of Muntingia calabura" Fitoterapia, 61(4):374 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Takemoto M, et al (2014) "Inhibition of protein Sumoylation by davidiin, an ellagitannin from Davidia involucrata" The Journal of Antibiotics, 67(4):335 Theepireddy SKR, et al (2015) "The isolation, characterization and quantification of gallic acid from the fruit extract of Terminalia chebula" International Journal of Medicine and Pharmaceutical Research, 3(2):983-988 Võ Văn Chi (2012) “Từ điển Cây Thuốc Việt Nam” Nhà xuất Y học, pp.75 10 Wang Y, et al (2014) "A potential antitumor ellagitannin, davidiin, inhibited hepatocellular tumor growth by targeting EZH2" Tumor Biology, 35(1):205-212 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học 11 Yoshida T, et al (1992) "Tannins of euphorbiaceous plants X Antidesmin A, a new dimeric hydrolyzable tannin from Antidesma pentandrum var barbatum" Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 40(2):338-342 Ngày nhận báo: 28/07/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/08/2019 Ngày báo đăng: 14/09/2019 103 ... đươc từ Trứng cá Mục tiêu nghiên cứu Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc hóa học chất từ Trứng cá (Muntingia calabura L.) NGUYÊNLIỆU- PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thí... davidiin Quercetin báo cáo phân lập từ Trứng cá năm 1990(6) Isoquercitrin lần báo cáo Trứng cá Hai flavonoid phổ biến dược liệu Davidiin ellagitannin lần phân lập từ Trứng cá Muntingia calbura... định tên khoa học Muntingia calabura L., thuộc họ Trứng cá (Muntingiaceae) Mẫu nghiên cứu lưu giữ Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh với mã MC-01 Dung mơi hóa chất, trang