Bài báo này tiếp tục công bố các kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học của loài này. Đối tượng nghiên cứu: Mẫu Bù dẻ tía Uvaria grandiflora Roxb. ex Hornem được thu thập tại tỉnh Quảng Trị. Phương pháp nghiên cứu: Chiết phân đoạn bằng các dung môi hữu cơ. Thành phần dễ bay hơi được phân tích bằng hệ thống sắc ký khí khối phổ GC-MS.
NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC PHÂN ĐOẠN N-HEXANE CỦA CÂY BÙ DẺ TÍA (UVARIA GRANDIFLORA) THU HÁI TẠI QUẢNG TRỊ Lê Thị Bích Hiền1, Lê Thị Hồng Oanh2, Hồ Việt Đức1, Võ Quốc Hùng1, Nguyễn Thị Hoài1 (1) Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược Huế (2) Trường Đại học Dược Hà Nội Tóm tắt Đặt vấn đề: Bảo tồn phát triển tri thức địa sử dụng thuốc yêu cầu cấp thiết Dựa kinh nghiệm sử dụng thuốc đồng bào dân tộc tỉnh Quảng Trị, loài Bù dẻ tía Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem nghiên cứu sàng lọc cho thấy có tác dụng gây độc tế bào ung thư in vitro Bài báo tiếp tục công bố kết nghiên cứu thành phần hóa học lồi Đối tượng nghiên cứu: Mẫu Bù dẻ tía Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem thu thập tỉnh Quảng Trị Phương pháp nghiên cứu: Chiết phân đoạn dung môi hữu Thành phần dễ bay phân tích hệ thống sắc ký khí khối phổ GC-MS Nhận biết cấu tử thực thông qua so sánh kiện phổ MS chúng với phổ chuẩn công bố thư viện phổ Wiley NIST Kết quả: Thành phần phân đoạn nghiên cứu δ-cadinene (42,94%) caryophyllene (9,51%) Các hợp chất γ-muurolene, ar-curcumene, calarene, β-vetivenene, β-bisabolene, cadina-1,4-diene calacorene lần phân lập từ loài U grandiflora thu hái Quảng Trị Theo tài liệu tham khảo, số thành phần cơng bố có nhiều tác dụng sinh học tốt kháng vi sinh vật, chống oxy hóa, kháng viêm, đặc biệt α-humulene caryophyllene chứng minh có khả gây độc tế bào ung thư in vitro Kết luận: Đã xác định 16 hợp chất dễ bay từ phân đoạn n-hexane Bù dẻ tía Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem Từ khóa: Uvaria grandiflora, δ-cadinene, α-humulene, caryophyllene Abstract CONSTITUENTS OF N-HEXANE FRACTION EXTRACTED FROM UVARIA GRANDIFLORA COLLECTED FROM QUANG TRI PROVINCE Le Thi Bich Hien1, Le Thi Hong Oanh2, Ho Viet Duc1, Vo Quoc Hung1, Nguyen Thi Hoai1 (1) Faculty of Pharmacy, Hue University of Medicine and Pharmacy (2) Hanoi University of Pharmacy Background: Today, conservation and development of indigenous knowledge of medicinal plants are the urgent demand of science Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem which is used by medicinal experience of people of ethnic minorities in Quang Tri province has shown in vitro cytotoxic activity in our previous screening tests This article is an ongoing research to determine the chemical ingredients of this species - Địa liên hệ: Nguyễn Thị Hoài, email: hoai77@gmail.com - Ngày nhận bài: 20/2/2013 * Ngày đồng ý đăng: 5/4/2013 * Ngày xuất bản: 30/4/2013 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 14 81 Materials: The aerial parts of Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem were collected from Quang Tri Province Method: Fractional extraction was performed by using organic solvents Volatile components were analysed by gas chromatography – mass spectrometry (GC-MS and indentified by comparison with published mass spectra database Wiley and NIST Results: Two major components are δ-cadinene (42.94%) and caryophyllene (9.51%) Some ingredients that consist of γ-muurolene, ar-curcumene, calarene, β-vetivenene, β-bisabolene, cadina-1,4-diene and calacorene have never been reported from U.grandiflora collected from Quang Tri province According to others references, some of these compounds have abundant bioactivities such as antimicrobial, antioxidant, antiinflammatory activities, especially α-humulene and caryophyllene with anticancer activities in vitro Fractional extraction was performed by using organic solvents Volatile components were analysed by gas chromatography – mass spectrometry (GC-MS and indentified by comparison with published mass spectra database Wiley and NIST Conclusion: A total of sixteen volatile compounds were indentified in n-hexane fraction of Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem Key words: Uvaria grandiflora, δ-cadinene, α-humulene, caryophyllene ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam quốc gia có mức độ đa dạng sinh học cao giới với hệ thực vật ước tính đến 20.000 – 30.000 loài [1] Tuy vậy, số đối tượng sử dụng làm thuốc ghi nhận khoảng 3.900 loài, chủ yếu xuất phát từ kinh nghiệm cộng đồng dân tộc nhiều địa phương nước [5] Là quốc gia đa văn hóa với 54 dân tộc sinh sống khắp lãnh thổ [7], dân tộc lại biết đến thuốc chăm sóc sức khỏe chữa bệnh đặc thù dân tộc mình, nói nước ta sở hữu kho tàng tri thức thuốc quý giá chưa khám phá nghiên cứu đầy đủ Kinh nghiệm sử dụng thảo dược cộng đồng người dân tộc phổ biến qua truyền từ đời sang đời khác có nguy bị thất truyền nhiều nguyên nhân [6] Vì vậy, việc bảo tồn tri thức địa đóng vai trò quan trọng việc gìn giữ sắc văn hóa dân tộc, đặc biệt nhằm phục vụ hiệu cho cơng tác chăm sóc bảo vệ sức khỏe nhân dân Từ việc điều tra, tìm hiểu thuốc dùng để chữa bệnh đồng bào dân tộc Pako, Vân Kiều – Tỉnh Quảng Trị, số loài chi Uvaria (họ Na – Annonaceae) phát hiện, bao gồm Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem, Uvaria cordata (Dun.) Wall ex Alston 82 Uvaria fauveliana (Fin & Gagnep.) Ast Trong đó, Bù dẻ tía (U grandiflora) – gọi Bù dẻ hoa to, Chuối chồng – người dân sử dụng để điều trị đau dày, ngộ độc thực phẩm, chữa sưng u… Các nghiên cứu công bố trước thử nghiệm invitro cho thấy lồi có tác dụng gây độc mạnh dòng tế bào ung thư thử nghiệm bao gồm LU-1 (ung thư phổi người), KB (ung thư biểu mô), MDA-BA-321 (ung thư vú), Hep G2 (ung thư gan người), SW-480 (ung thư ruột kết) MKN7 (ung thư dày) với giá trị IC50 thấp [4] Bài báo tiếp tục công bố kết nghiên cứu bước đầu thành phần hóa học U grandiflora phân đoạn n-hexane ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Nguyên liệu sử dụng phần mặt đất Bù dẻ tía (Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem - Annonaceae) Mẫu thu huyện Đakrông, Quảng Trị vào tháng 11 năm 2011 Tên khoa học xác định PGS.TS Ninh Khắc Bản – Viện Hoá Sinh Biển – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Mẫu rửa sạch, thái nhỏ, phơi, sấy khô 50oC – 60ºC, sau xay thành bợt thơ bảo quản nơi khơ thống Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 14 Hình Cây Bù dẻ tía Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp - Tạo dịch chiết toàn phần phương pháp ngâm lạnh với methanol - Chiết xuất phân đoạn phương pháp chiết lỏng – lỏng, rắn – lỏng [3] - Phân đoạn n-hexane phân tích định tính hệ thống sắc ký khí khối phổ GCMSQP2010Plus/Shimadzu Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm, thực phẩm Thừa Thiên Huế Việc xác nhận cấu tử thực cách so sánh kiện phổ MS chúng với phổ chuẩn công bố thư viện phổ Wiley NIST 2.2.2 Tiến hành Bột Bù dẻ tía, khối lượng 6,0 kg, chiết với methanol tuyệt đối phương pháp ngâm lạnh (48 giờ/lần x lần) Gộp dịch chiết methanol cất thu hồi dung môi áp suất giảm, 56oC cắn thu cao cắn tồn phần Phân tán cắn nước, sau lắc với dung mơi có độ phân cực tăng dần n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate n-butanol Cô quay cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu các cao cắn ký hiệu theo thứ tự từ UGA đến UGD Phần dịch nước lại đem sấy 50oC cho bay hết dung môi hữu cơ, sau đưa lên cột Dianion-HP, rửa nhiều lần nước cất cho methanol tuyệt đối chảy qua cột, thu dịch chiết pha nước, ký hiệu UGW Tiến hành chiết pha rắn UGA với hệ dung môi n-hexane: ethyl acetate theo tỷ lệ 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, 5:1, 1:1 ethyl acetate 100%, thể tích 0,5 lít hệ, thu phân đoạn ký hiệu từ A1 đến A7 Phân đoạn A1 phân tích sắc ký cột pha thường, hệ dung môi rửa giải n-hexane 100% n-hexane : acetone (7,5:1) Kiểm tra sắc ký lớp mỏng, gộp chung phân đoạn giống thu phân đoạn ký hiệu từ A1A đến A1D Phân đoạn A1A (khối lượng 1,06 g) tách từ dịch rửa giải n-hexane có dạng dầu khơng tan nước, màu vàng suốt Phân tích qua sắc ký lớp mỏng cho thấy hỗn hợp khó phân tách phương pháp sắc ký cột thơng thường Vì vậy, sắc ký khí khối phổ máy GCMSQP2010Plus/Shimadzu sử dụng để phân tích thành phần phân đoạn Cột DB-5MS có kích thước 0,25 μm × 30 m × 0,25 mm Chương trình nhiệt độ cài đặt với điều kiện 40oC/1 phút, tăng 5oC/1 phút đến 280oC, trì ổn định 20 phút, khí mang Heli KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Từ phân đoạn A1A, q trình phân tích cho thấy có 16 hợp chất dễ bay Trong δ-cadinene thành phần (42,94%), hợp chất có hàm lượng thấp giảm dần theo thứ tự caryophyllene (9,51%), β-vetivenene (8,89%), α-selinene (5,83%), γ-muurolene (5,31%), α-amorphene (4,87%), số thành phần khác có hàm lượng từ 0,27% đến 3,82% Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 14 83 Hình Sắc ký đồ phân đoạn A1A hệ thống GCMS-QP2010Plus/Shimadzu Thông tin hợp chất, thời gian lưu tỉ lệ diện tích peak trình bày chi tiết bảng Bảng Các hợp chất nhận biết phân đoạn A1A sắc ký khí khối phổ 84 STT Thời gian lưu Hợp chất Tỷ lệ % 24,96 caryophyllene 9,51 25,31 α-copaene 0,27 25,65 aromadendrene 1,56 26,17 α-humulene 3,16 27,04 γ-muurolene 5,31 27,18 α-amorphene 4,87 27,78 ar-curcumene 0,30 27,39 β-selinene 3,07 27,61 calarene 1,85 10 27,75 α-selinene 5,83 11 27,96 β-vetivenene 8,89 12 28,31 β-bisabolene 2,74 13 28,48 γ-cadinene 3,82 14 28,86 δ-cadinene 42,94 15 29,19 cadina-1,4-diene 3,01 16 29,59 calacorene 2,89 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 14 Trong thành phần nhận biết trên, có hợp chất tương tự với nghiên cứu Đỗ Ngọc Đại cộng (2010), sử dụng phương pháp chưng cất lôi nước để chiết xuất tinh dầu từ Bù dẻ tía [2] Tuy nhiên, khác phương pháp phân lập nên thành phần hàm lượng tương đối có khác biệt Theo đó, thành phần 33 hợp chất phân lập phương pháp lơi nước nhóm tác giả bicyclogermacrene (35,7%), β-caryophyllene (13,9 %) (Z)-β-ocimene (10,7 %) Bảng So sánh tỷ lệ thành phần tinh dầu tương đồng hai nghiên cứu loài Uvaria grandiflora Tỷ lệ % STT Hợp chất caryophyllene 9,51 13,9 α-copaene 0,27 0,3 aromadendrene 1,56 0,4 α-humulene 3,16 3,9 α-amorphene 4,87 1,8 β-selinene 3,07 1,7 γ-cadinene 3,82 vết δ-cadinene 42,94 0,6 Phân đoạn TLTK [2] A1A Các hợp chất lại A1A γ-muurolene, ar-curcumene, calarene, β-vetivenene, β-bisabolene, cadina-1,4-diene calacorene chưa có thành phần tinh dầu cơng bố nhóm tác giả δ-cadinene thành phần tinh dầu chiết từ số loài Annona muricata (Pelissier et al., 1993), Uvaria charnae (Oguntimein et al., 1989), Xylopia pynaertii (Fournier et al., 1994), tinh dầu hoa Cananga odorata (Lawrence, 1982), Monodora tenuifolia (Adesomoju et al., 1991) có rễ, loài Cleistopholis patens (Ekundayo et al.,) [11] Hợp chất caryophyllene thành phần chủ yếu tinh dầu chiết từ số loài thuộc chi Uvaria giới [13] Kết thử hoạt tính kháng khuẩn cho thấy hai chất có tác dụng kháng chủng vi khuẩn Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus cereus Staphylococcus epidermidis Đồng thời chúng có hoạt tính kháng nấm khảo sát với chủng Aspergillus niger, Penicillium ochrochloron, Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccosum Candida albicans [12] Một nhóm nghiên cứu Tây Ban Nha (2010) khảo sát thành phần tinh dầu lồi Salvia officinalis hoạt tính chống ung thư chúng Kết cho thấy phân đoạn chứa chủ yếu α-humulene (76,34%) có hoạt tính kháng ung thư mạnh dòng tế bào RAW264.7 (ung thư đại thực bào chuột) HCT-116 (ung thư ruột kết) với giá trị IC50 tương ứng 41,9 77,3 μg/mL Phân đoạn chứa caryophyllene (54,23 %) có hoạt tính gây độc tế bào hai dòng với IC50 tương ứng 90,5 145,8 μg/mL [8] Nghiên cứu trước hai thành phần α-humulene caryophyllene phân lập từ lồi Cordia verbenacea chúng có khả kháng viêm rõ rệt mơ hình gây viêm chuột [10] Như vậy, thấy, nhiều thành phần hoá học phân đoạn n-hexan Bù dẻ tía chất có hoạt tính sinh học tốt: tác dụng kháng sinh kháng nấm (cadinene caryophyllene), kháng ký sinh trùng sốt rét (cadina-1,4-diene), chống oxy hóa gây độc tế bào ung thư in vitro (α-humulene caryophyllene) Những kết góp phần làm sáng tỏ kinh nghiệm sử dụng dân gian đặt tiền đề cho nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài thời gian tới KẾT LUẬN Từ lồi Bù dẻ tía (Uvaria grandiflora Roxb Annonaceae), thu mẫu huyện Đakrông, Quảng Trị, xác định 16 thành phần từ phân đoạn n-hexane phương pháp chiết xuất, sắc ký kết hợp hệ thống sắc ký khí khối phổ Thành phần có hàm lượng lớn δ-cadinene (42,94 %), caryophyllene (9,51%) Đây thông báo hợp chất γ-muurolene, ar-curcumene, calarene, β-vetivenene, β-bisabolene, cadina-1,4diene, calacorene lần xác định có lồi U Grandiflora Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 14 85 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Tài nguyên Môi trường (2005), “Báo cáo trạng môi trường quốc gia - Chuyên đề Đa dạng sinh học”, tr 9-11 Đỗ Ngọc Đài, Trần Đình Thắng, Trần Minh Hợi, Nguyễn Xuân Dũng (2010), “Thành phần hóa học tinh dầu Chuối chồng (Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem) thu hái Tỉnh Hà Tĩnh”, Tạp chí sinh học, 32(3), tr 62-64 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Thành phố Hồ Chí Minh, tr 19-23, 43-52, 58-74 Nguyễn Thị Hoài, Trịnh Thị Điệp, Đỗ Thị Thảo, Nguyễn Khánh Thuỳ Linh, Nguyễn Bích Hiền, Hồng Thị Diệu Hương (2012), “Sàng lọc hoạt tính diệt tế bào ung thư số thuốc đồng bào Pako, Vân Kiều Quảng Trị”, Tạp chí Dược liệu, 17(2), tr 95-100 Trần Văn Ơn (2005), “Tài nguyên thuốc xố đói giảm nghèo cộng đồng dân tộc vùng miền núi Việt Nam”, Tạp chí Dân tộc học, 2, tr 31-41 Đỗ Thị Phương (2005), “Khảo sát kinh nghiệm sử dụng thuốc nam người dân tộc Vân Kiều huyện Đakrong, Tây Nguyên”, Tạp chí Y học thực hành, 12, tr 32-36 Quỹ dân số Liên hiệp Quốc (2011), “Các dân tộc Việt Nam: Phân tích tiêu từ Tổng điều tra dân số nhà Việt Nam năm 2009”, tr 7-8 Adil el Hadri, María Ángeles Gómez del Río, Jesús Sanz, Azucena González Coloma, Mohamed Idaomar, Bartolomé Ribas Ozonas, Juana Benedí González, María Isabel Sánchez Reus (2010), “Cytotoxic activity of α-humulene and transcaryophyllene from Salvia officinalis in animal 86 and human tumor cells”, An R Acad Nac Farm., 76(3), pp 343-356 Afoulous Samia, Hicham Ferhout, Emmanuel Guy Raoelison, Alexis Valentin, Bộatrice Moukarzel, Franỗois Couderc, Jalloul Bouajila (2013), Chemical composition and anticancer, antiinflammatory, antioxidant and antimalarial activities of leaves essential oil of Cedrelopsis grevei”, Food and Chemical Toxicology, http:// dx.doi.org/10.1016/j.fct.2013.02.008 10 Fernandes Elizabeth S., Giselle F Passos, Rodrigo Medeiros, Fernanda M da Cunha, Juliano Ferreira, Maria M Campos, Luiz F Pianowski, João B Calixto (2007), “Anti-inflammatory effects of compounds alpha-humulene and (−)-transcaryophyllene isolated from the essential oil of Cordia verbenacea”, European Journal of Pharmacology, 569(3), 228-236, http://dx.doi org/10.1016/j.ejphar.2007.04.059 11 Gilbert Fournier, Abbas Hadjiakhoondi, Brigitte Charles, Michel Leboeuf, André Cavé (1994), “Volatile components of Anaxagorea dolichocarpa fruit”, Biochemical Systematics and Ecology, 22(6), pp 605-608 12 Helen D Skaltsa, Costas Demetzos, Diamanto Lazari, Marina Sokovic (2003), “Essential oil analysis and antimicrobial activity of eight Stachys species from Greece”, Phytochemistry, 64, pp 743–752 13 Muriel K A., T Z Felix, G Figueredo, P Chalard, T N’Guessan Y (2011), “Essential oil of three Uvaria species from Ivory Coast”, Nat Prod Commun., 6(11), 1715-8 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 14 ... TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHI N CỨU 2.1 Đối tượng nghi n cứu Nguy n liệu sử dụng ph n mặt đất Bù dẻ tía (Uvaria grandiflora Roxb ex Hornem - Annonaceae) Mẫu thu huy n Đakrông, Quảng Trị vào tháng... Như vậy, thấy, nhiều thành ph n hố học ph n đo n n- hexan Bù dẻ tía chất có hoạt tính sinh học tốt: tác dụng kháng sinh kháng n m (cadinene caryophyllene), kháng ký sinh trùng sốt rét (cadina-1,4-diene),... hoạt tính sinh học lồi thời gian tới KẾT LU N Từ lồi Bù dẻ tía (Uvaria grandiflora Roxb Annonaceae), thu mẫu huy n Đakrông, Quảng Trị, xác định 16 thành ph n từ ph n đo n n- hexane phương pháp