Một số nghiên cứu về cây Diếp Cá...9 4.1 Phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất Sesamin, -sitosterol và Quercitrinsitosterol và Quercitrin trong cao ete dầu hỏa và cao etyl acetat t
Trang 1MỤC LỤC
MỞ ĐẦU Trang 2
1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI 2
2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2
2 1 Mục tiêu tổng quát 2
2 2 Mục tiêu cụ thể 2
3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2
3.1 Đối tượng nghiên cứu 2
3.2 Phương pháp nghiên cứu 3
TỔNG QUAN 4
1 Đại cương về thực vật 4
2 Thành phần hóa học……… 4
3 Tác dụng dược lý và ứng dụng 7
3.1 Tác dụng dược lí 7
3.2 Một số bài thuốc trị bệnh bằng rau Diếp Cá 8
3.3 Một số sản phẩm có thành phần rau Diếp Cá 8
4 Một số nghiên cứu về cây Diếp Cá 9
4.1 Phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất Sesamin, -sitosterol và Quercitrinsitosterol và Quercitrin trong cao ete dầu hỏa và cao etyl acetat thu được từ cây Diếp Cá 9
4.2 Phân lập từ các chiết xuất EtOAc tan trong toàn bộ cây Diếp Cá được 4,5-sitosterol và Quercitrin dioxoaporphine loại alkaloid, cepharadione B (1), một axit phenolic, protocatechuic acid (2) và flavonol, quercetin (3), afzelin (4), và quercitrin (5)…… 9
4.3 Tách chiết flavanoid bằng phương pháp CO2 siêu tới hạn kết hợp với sóng siêu âm; Và tinh chế bằng nhựa macroreticular hấp phụ 10
4.4 Các nghiên cứu về hoạt tính chống viêm, chống vi khuẩn và hoạt tính chống oxy hóa của Diếp Cá……….… 10
QUY TRÌNH PHÂN LẬP HOẠT CHẤT 11
DỰ KIẾN KẾT QUẢ 13
THỜI GIAN THỰC HIỆN LUẬN VĂN 13
TÀI LIỆU THAM KHẢO 14
MỞ ĐẦU
Trang 21 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI
Ông bà thường bảo với con cháu: “Đói ăn rau, đau uống thuốc” Thật vậy, ở nước ta có rất nhiều loại rau được dùng một cách quen thuộc trong đời sống hàng ngày Chúng không chỉ là những món ăn đơn sơ mộc mạc, rất thơm ngon và bổ dưỡng
mà thêm vào đó chúng còn là những vị thuốc hay, những loại dược liệu quý đáng được nghiên cứu Một trong những loại rau và cũng là nguồn dược liệu quý đó là cây Diếp Cá
Rau Diếp Cá đã được biết đến từ rất lâu đời, được dùng như loại rau ăn sống rất phổ biến, đặc biệt là ở đồng bằng sông Cửu Long Nó được xem như là một liệu pháp dược liệu thiên nhiên chống lại rất nhiều bệnh Dịch chiết của lá Diếp Cá có khả năng chống béo phì nhờ những hợp chất acid béo và glycerol[1] Mặt khác, nó có khả năng chống viêm nhiễm[2] và có hoạt tính chống bệnh SAR Đồng thời nó là một trong
12 loại thảo dược có thành phần làm hạn chế sự peroxy hóa chất béo [3] Với những tác
dụng dược lí nêu trên nên chúng tôi quyết định chọn đề tài “Khảo sát thành phần
hóa học của cây Diếp Cá” nhằm xác định được các hợp chất hóa học và từ đó phát
huy hơn nữa tác dụng dược lí của rau Diếp Cá
2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
2 1 Mục tiêu tổng quát
Định danh cây Diếp Cá cần nghiên cứu Tìm hiểu điều kiện sinh trưởng để tìm nguồn Diếp Cá sạch, đảm bảo được những thành phần dinh dưỡng quan trọng trong cây Diếp Cá
Tìm hiểu chung về cây Diếp Cá, thành phần hóa học của cây Diếp Cá và tìm các phương pháp chiết, cô lập các hợp chất hóa học đó
2 2 Mục tiêu cụ thể
Tìm hiểu về thành phần hóa học chính của cây Diếp Cá
Khảo sát các cao Ethyl acetate, cao n-sitosterol và QuercitrinHexan, cao Methanol.
Thử hoạt tính sinh học của cao Ethyl acetate, sàng lọc, tìm kiếm các hợp chất hóa học mới có trong cây Diếp Cá
Chọn mẫu có hoạt tính hoặc có chất mới, phân lập theo các quy trình riêng
để tách chiết và thu chất tinh khiết
3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Trang 33.1 Đối tượng nghiên cứu
Phần trên mặt đất của cây Diếp Cá được thu hái tại Đồng Bằng Sông Cửu Long,
do công ty Dược Hậu Giang cung cấp mẫu
Diếp cá tươi được phơi khô, bảo quản trong túi ny lông và được cắt nhỏ trước khi sử dụng
3.2 Phương pháp nghiên cứu
Đưa ra quy trình tách chiết các hợp chất trong rau Diếp Cá một cách tối ưu Chiết thân và lá Diếp Cá bằng kỹ thuật ngâm dầm kết hợp với siêu âm
Phân nhóm các hợp chất theo độ phân cực của dung môi bằng các phương pháp chiết lỏng -sitosterol và Quercitrin lỏng với máy siêu âm, đun hoàn lưu, cô quay,
Phân lập các chất tinh khiết bằng các phương pháp sắc ký: sắc ký bản mỏng, sắc ký cột trung áp, sắc ký cột flash,
Xác định cấu trúc bằng các phương pháp phổ nghiệm: IR, MS, 1H-sitosterol và QuercitrinNMR, 13C-sitosterol và Quercitrin NMR, COSY, HSQC, HMBC, …
Dùng máy GC/MS xác định cấu trúc của các hợp chất dễ bay hơi.
Dùng máy NMR để xác định chính xác cấu trúc của hợp chất
TỔNG QUAN
Trang 41 ĐẠI CƯƠNG VỀ THỰC VẬT:
1.1 Đặc điểm cây Diếp cá [1]
Tên thường gọi: Diếp Cá
Tên khoa học: Houttuynia cordata Thunb
Họ Giấp cá (Saururaceae)
Tên Việt Nam: Lá giấp, Rau giấp cá, Tập thái, Ngư tinh thảo, Cỏ vảy mèo (Thái), Rau vẹn, Phjắc hoảy (Tày), Cù mua mía (Dao)
Mô tả: Cây thảo, cao 20 -sitosterol và Quercitrin 40cm Thân ngầm mọc bò ngang trong lòng đất, màu trắng, hơi có lông, bén rễ ở các mấu Thân đứng nhẵn, màu lục hoặc tím đỏ Lá mọc so
le, hình tim, đầu nhọn, mặt trên màu lục sẫm, mặt dưới màu tím, cuống lá dài, có bẹ
Cụm hoa mọc ở ngọn thân thành bông dài 2 -sitosterol và Quercitrin 2,5 cm, mang nhiều hoa nhỏ màu vàng nhạt; bao bởi 4 lá bắc màu trắng
Quả nang mở ở đỉnh, hạt hình trái xoan, nhẵn
Toàn thân vò ra có mùi tanh như mùi cá
Mùa hoa, quả: tháng 5-sitosterol và Quercitrin7
Bộ phận dùng: Toàn cây, trừ rễ, dùng tươi hoặc sấy khô
1.2 Phân bố sinh thái [1]
Phân bố, sinh thái: Chi Houttuynia Thunb chỉ có một loài Diếp Cá, phân bố
chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới của lục địa châu Á, phân bố từ Ấn Độ qua Trung Quốc, Nhật Bản, Thái Lan, các nước Đông Dương Ở nước ta, Diếp Cá mọc hoang ở các tỉnh miền núi, trung du và đồng bằng Diếp Cá được trồng phổ biến để làm rau ăn và làm thuốc, Diếp Cá được thu hái quanh năm, thường dùng tươi, có thể phơi hay sấy khô để dùng dần
1.3 Tính vị, tác dụng [1]
Diếp Cá có vị cay chua, mùi tanh, tính mát, có tác dụng thanh nhiệt giải độc, lợi tiểu tiêu thũng, sát trùng; còn có tác dụng ức chế thần kinh và chống viêm loét
Trang 5Theo Đông y, Diếp Cá dùng để chữa các bệnh về Trĩ, phát ban, tắc sữa, giải độc, kháng viêm,
Theo Tây y, Diếp Cá kích thích gây phồng do tác dụng của cordalin; Diếp
Cá giúp lợi tiểu mạnh do tác dụng của chất quercitrin; Làm chắc thành mao mạch, chữa trĩ do tác dụng của chất dioxy-flavonon Một nghiên cứu tại Nhật Bản đã cho thấy tác dụng chống oxi hóa của hợp chất quercetin.
2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC
Trong 100g rau Diếp Cá có: Nước: 91,5%; protid: 2,9%, glucid: 2,7%, lipid: 0,5%, cellulose:1,8%, Calci: 0,3mg, Kali: 0,1mg, tiền vitamin A: 1,26mg, vitamin C: 68mg Toàn cây Diếp Cá có chứa tinh dầu Thành phần chủ yếu là aldehyd và dẫn xuất nhóm ceton như methyl-sitosterol và Quercitrinn-sitosterol và Quercitrinnonyl ceton, l-sitosterol và Quercitrindecanal, l-sitosterol và Quercitrindodecanal là những chất không có tác dụng kháng khuẩn; 3-sitosterol và Quercitrinoxododecanal là chất có tác dụng kháng khuẩn Nhóm terpen: bao gồm camphen, myrcen, α-sitosterol và Quercitrinpinen, limonen, linalol Ngoài ra còn chứa acid caprinic, laurinaldehyd, benzamid, acidhexadecanoid, acid decanoic, acid palmetic, lipid và vitamin K Lá Diếp Cá có chứa β-sitosterol và Quercitrinsitosterol, alcaloid: cordalin và các flavonoid: afzelin, hyperin, rutin, isoquercitrin và quercitrin
(1) Sesamin
Công thức phân tử: C20H18O6
Tên IUPAC: 5,5'-sitosterol và Quercitrin(1S,3aR,4S,6aR)-sitosterol và Quercitrintetrahydro-sitosterol và Quercitrin1H,3H-sitosterol và Quercitrin furo[3,4-sitosterol và Quercitrinc]furan-sitosterol và Quercitrin1,4-sitosterol và Quercitrin
diylbis(1,3-sitosterol và Quercitrinbenzodioxole)
Công thức cấu tạo:
(2) β-Sitosterol
Công thức phân tử: C29H50O
O
O
H H
O O
1
2
3
4
5 6 7 8 9
10
11 12 13 14 15 16
17 18
19
20 21
22 23 24 25 26
Trang 6Nhiệt độ nóng chảy: 136 -sitosterol và Quercitrin 140oC
Tên IUPAC: 17-sitosterol và Quercitrin(5-sitosterol và QuercitrinEthyl-sitosterol và Quercitrin6-sitosterol và Quercitrinmethylheptan-sitosterol và Quercitrin2-sitosterol và Quercitrinyl)-sitosterol và Quercitrin10,13-sitosterol và Quercitrindimethyl 2,3,4,7,8,9,
11,12,14,15,16,17-sitosterol và Quercitrindodecahydro-sitosterol và Quercitrin1H-sitosterol và Quercitrincyclopenta [a] phenanthren-sitosterol và Quercitrin3-sitosterol và Quercitrinol.
Tên khác: 22,23-sitosterol và QuercitrinDihydrostigmasterol, Stigmast-sitosterol và Quercitrin5-sitosterol và Quercitrinen-sitosterol và Quercitrin3-sitosterol và Quercitrinol, β-sitosterol và QuercitrinSitosterin.
β-sitosterol và QuercitrinSitosterol là một trong số phytosterols (sterol thực vật) với cấu trúc hóa học
tương tự như cholesterol Sitosterol có màu trắng, bột sáp với một mùi đặc trưng Nó
kỵ nước và hòa tan trong rượu
Công thức cấu tạo:
(3) Afzelin
Công thức phân tử: C21H20O10
Tên IUPAC: 4H-sitosterol và Quercitrin1-sitosterol và QuercitrinBenzopyran-sitosterol và Quercitrin4-sitosterol và Quercitrinone, 3-sitosterol và Quercitrin((6deoxy-sitosterol và Quercitrinalpha-sitosterol và QuercitrinL-sitosterol và Quercitrin
mannopyranosyl)oxy)-sitosterol và Quercitrin5,7-sitosterol và Quercitrindihydroxy-sitosterol và Quercitrin2-sitosterol và Quercitrin(4-sitosterol và Quercitrinhydroxyphenyl)
Tên khác: Kaempferol 3-sitosterol và Quercitrinrhamnoside
Công thức cấu tạo:
(4) Hyperin
Công thức phân tử: C21H20O12
OH
O
OH
O
OH OH
OH
CH 3 O
HO
H H H
H
Trang 7Hyperin còn gọi là Hyperoside Quercetin 3-sitosterol và QuercitrinD-sitosterol và Quercitringalactoside; Hyperin; 2 -sitosterol và Quercitrin (3,4-sitosterol và QuercitrinDihydroxyphenyl) -sitosterol và Quercitrin3 -sitosterol và Quercitrin (beta-sitosterol và QuercitrinD-sitosterol và Quercitringalactopyranosyloxy) -sitosterol và Quercitrin5,7-sitosterol và Quercitrindihydroxy-sitosterol và Quercitrin4H-sitosterol và Quercitrin1-sitosterol và Quercitrin
benzopyran-sitosterol và Quercitrin4-sitosterol và Quercitrinon
Công thức cấu tạo:
(5) Rutin
Công thức phân tử: C27H30O16
Tên IUPAC: 2 -sitosterol và Quercitrin (3,4-sitosterol và Quercitrindihydroxyphenyl) -sitosterol và Quercitrin5,7-sitosterol và Quercitrindihydroxy-sitosterol và Quercitrin3-sitosterol và Quercitrin{[(2 S, 3 R, 4 S, 5
S, 6 R) -sitosterol và Quercitrin3,4,5-sitosterol và Quercitrintrihydroxy-sitosterol và Quercitrin6-sitosterol và Quercitrin({[ (2 R, 3 R, 4 R, 5 R, 6 S) -sitosterol và Quercitrin3,4,5-sitosterol và Quercitrintrihydroxy-sitosterol và Quercitrin6-sitosterol và Quercitrin
methyloxan-sitosterol và Quercitrin2-sitosterol và Quercitrinyl] oxy} methyl) oxan-sitosterol và Quercitrin2-sitosterol và Quercitrinyl] oxy} -sitosterol và Quercitrin4H-sitosterol và Quercitrinchromen -sitosterol và Quercitrin4-sitosterol và Quercitrinon
Tên khác: Rutoside, Phytomelin, …
Rutin được tìm thấy trong các trái cây chua, cây có múi (cam, bưởi, chanh)
và quả mọng như dâu nam việt quất
Công thức cấu tạo:
(6) Isoquercitrin
Công thức phân tử: C21H20O12
OH
O
OH
O
OH
O
OH OH
OH CH 2 OH
Trang 8Tên IUPAC: 2 -sitosterol và Quercitrin (3,4-sitosterol và Quercitrindihydroxyphenyl) -sitosterol và Quercitrin5,7-sitosterol và Quercitrindihydroxy-sitosterol và Quercitrin3-sitosterol và Quercitrin[(2S, 3R, 4S, 5R, 6R) -sitosterol và Quercitrin3,4,5-sitosterol và Quercitrintrihydroxy-sitosterol và Quercitrin6-sitosterol và Quercitrin(hydroxymethyl)oxan-sitosterol và Quercitrin2-sitosterol và Quercitrinyl]oxy-sitosterol và Quercitrinchromen-sitosterol và Quercitrin4-sitosterol và Quercitrinon
Isoquercitrin (Bioquercetin) là dạng tự nhiên của quercetin Nó có thể được tìm thấy thường trong táo, hành củ, trái cây và rau quả khác
Công thức cấu tạo:
(7) Quercitrin
Công thức phân tử: C21H20O11
Tên IUPAC: 2 -sitosterol và Quercitrin (3,4-sitosterol và QuercitrinDihydroxyphenyl) -sitosterol và Quercitrin5,7 -sitosterol và Quercitrin3-sitosterol và Quercitrin[[dihydroxy (2 S, 3 R, 4 R,
5 R, 6 S) -sitosterol và Quercitrin 3,4,5-sitosterol và Quercitrintrihydroxy-sitosterol và Quercitrin6-sitosterol và Quercitrinmethyl-sitosterol và Quercitrin2 -sitosterol và Quercitrin tetrahydropyranyl] oxy]-sitosterol và Quercitrin4-sitosterol và Quercitrinchromenone
Quercitrin là một glycoside hình thành từ các flavonoid quercetin và các đường deoxy rhamnose
Công thức cấu tạo:
(8) Quercetin
Công thức phân tử: C15H10O7
Trang 9Tên IUPAC: 2-sitosterol và Quercitrin(3,4-sitosterol và Quercitrindihydroxyphenyl)-sitosterol và Quercitrin3,5,7-sitosterol và Quercitrintrihydroxy-sitosterol và Quercitrin4H-sitosterol và Quercitrinchromen-sitosterol và Quercitrin4-sitosterol và Quercitrinone
Nhiệt độ sôi : 316oC
Công thức cấu tạo :
3 TÁC DỤNG DƯỢC LÍ VÀ ỨNG DỤNG
3.1 Tác dụng dược lí [1]
Diếp Cá từ lâu đã được Đông y dùng
chữa các bệnh về tiêu hóa, phát ban, tắc sữa Gần
đây, Tây y cũng phát hiện ra nhiều tác dụng quý
của nó như kháng khuẩn, tiêu diệt ký sinh trùng,
chống ung thư
Diếp Cá có vị chua, cay, tính mát, tác động vào 2 kinh can và phế Tác dụng chủ yếu là thanh nhiệt, giải độc, thoát mủ (đối với mụn nhọt làm mủ), thông tiểu tiện, giảm phù thũng, sát khuẩn, chống viêm
Theo nghiên cứu của y khoa hiện đại, trong cây Diếp Cá có chất decanoyl-sitosterol và Quercitrin acetaldehyd mang tính kháng sinh Loại rau này có tác dụng kháng khuẩn như ức chế
tụ cầu vàng, liên cầu, phế cầu, trực khuẩn bạch hầu, e.coli, trực khuẩn lỵ, xoắn khuẩn leptospira Nó cũng có tác dụng đối với virus sởi, herpes, cúm và cả HIV, do tác động vào vỏ bọc protein của virus
Cũng theo Tây y, Diếp Cá giúp lợi tiểu do tác dụng của chất quercitrin, làm chắc thành mao mạch, chữa trĩ do tác dụng của chất dioxy-sitosterol và Quercitrinflavonon Ngoài ra, nó còn
có tác dụng lọc máu, giải độc, giải nhiệt, kháng viêm, tăng sức miễn dịch của cơ thể
Một nghiên cứu tại Viện đại học Y dược Toyama, Nhật Bản, đã cho thấy tác dụng chống oxi hóa của 12 loại dược thảo và hợp chất được chiết xuất từ chúng Diếp
Cá là một trong 4 chất có tác dụng chống oxi hóa mạnh nhất Hợp chất quercetin của Diếp Cá loại trừ được các gốc tự do "cứng đầu" nhất
Theo một nghiên cứu của Đại học Y khoa Koahsiung, Đài Loan, Diếp Cá có tác dụng ức chế đáng kể đối với sự sinh sản của virus herpes simplex Nó được xem là
O
OH OH HO
OH
Trang 10dược thảo chữa trị bệnh này Đại học Koahsiung cũng phát hiện Diếp Cá có tác dụng ngăn chặn 5 dòng tế bào ung thư máu
Một số nghiên cứu khác cho thấy Diếp Cá có tác dụng chống viêm xoang kinh niên Ngoài ra, chất Houttuynin bisulphat natri chiết xuất từ nó có thể điều trị viêm tuyến vú
3.2 Một số bài thuốc trị bệnh bằng rau Diếp Cá [1]
Ho gà: Lá Diếp Cá tươi 50g nấu đặc uống thay chè trong 5-sitosterol và Quercitrin10 ngày liền Viêm phế quản: Lá Diếp Cá, cam thảo đất mỗi thứ 20g, sắc đặc uống dần Đau mắt đỏ: Lá Diếp Cá rửa thật sạch, giã nhỏ bọc vào giữa 2 lớp giấy bản hoặc gạc sạch, đắp lên mắt khi đi ngủ
Viêm tuyến vú: Lá Diếp Cá, lá cải trời mỗi thứ một nắm nhỏ khoảng 30g
Cả hai vị đem giã nát hoặc xay sinh tố, chế thêm nước, gạn lấy nước uống Bã còn lại chưng với dấm đắp lên vú
Kinh nguyệt không đều: Lá Diếp Cá tươi 30g hoặc 12g khô sắc uống hàng ngày
Chữa trĩ: Hàng ngày ăn sống Diếp Cá; ngoài ra có thể dùng lá Diếp Cá nấu nước để xông, ngâm, rửa lúc thuốc còn nóng Bã còn lại bịt vào hậu môn
Sốt rét: Lá Diếp Cá (thường dùng loại tía) 2 nắm, giã nhỏ, dùng lụa bọc lại, xát khắp người vào lúc sắp lên cơn sốt rét sẽ ngủ được và ra mồ hôi thì đỡ
Viêm phổi, viêm ruột, lỵ, viêm thận, phù thũng: Lá Diếp Cá 50g sắc uống hàng ngày
Viêm tai giữa: Lá Diếp Cá khô 20g, táo đỏ 10 quả Nước 600ml sắc còn 200ml chia uống 3 lần trong ngày
Sởi mới phát: Lá Diếp Cá vò nát, thêm nước vắt lấy nước cốt để uống Nên kết hợp cho thêm một nhúm hạt mùi giã dập, ngâm trong rượu, bọc trong miếng giẻ xoa khắp người cho trẻ
3.3 Một số sản phẩm có thành phần rau Diếp Cá
3.3.1 Sữa rửa mặt TRESOR D’ORIENT
Thành phần: Chiết xuất rau Diếp Cá, Chiết xuất trà xanh
(Camellia sinensis), Men vi sinh
Công dụng: Tăng tuần hoàn vùng da mặt, diệt khuẩn , se
khích lổ chân lông, kích thích trồi nhân mụn ẩn đặc biệt là đối với mụn đầu đen