Luận văn sư phạm Nghiên cứu một số thành phần hoá học của cây Thiên lý (telosma Cordata (Burm .F.) Merrill)

Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i L IC M Tr N c tiên v i s bi t n sâu s c em xin chân thành c m n TS Lê Minh Hà ng i h ng d n, ch b o t n tình cho em su t th i gian nghiên c u hồn thành khóa lu n phịng Hóa Cơng Ngh , Vi n Hóa h c h p ch t thiên nhiên, Vi n khoa h c công ngh Vi t Nam Em xin chân thành bi t n s giúp đ to l n quý báu Em c ng xin chân thành c m n t i ban lãnh đ o cán b phòng Hóa cơng ngh , Vi n hóa h c h p ch t thiên nhiên, Vi n khoa h c công ngh Vi t Nam t o u ki n giúp đ em th i gian th c hi n khóa lu n V i t t c lịng kính tr ng lòng bi t n chân thành, em xin c m n th y giáo TS Nguy n V n B ng, th y đ nh h b c đ u tiên, h tr ng hoàn thành khoá lu n ng cho em t nh ng ng d n em t n tình su t trình h c t p t i Em xin chân thành c m n th y cô Khoa Hoá h c-Tr ng HSP Hà N i t o d ng cho em nh ng ki n th c quý báu su t trình h c t p t i tr ng Hà N i, tháng n m 2009 Sinh viên Nguy n Th Nguy t Nga Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i L I CAM OAN tài: “ Nghiên c u thành ph n hóa h c c a Thiên lý” cơng trình nghiên c u c a riêng d is h ng d n khoa h c c a TS Lê Minh Hà Các s li u, k t qu nêu khoá lu n trung th c Các k t qu không trùng l p v i k t qu đư đ c công b Sinh viên Nguy n Th Nguy t Nga Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i M CL C L ic m n L i cam đoan M cl c Nh ng ch vi t t t Danh m c hình v vƠ b ng bi u Trang M đ u CH NG T NG QUAN tƠi li u 1.1 Gi i thi u v th c v t h Thiên lý 1.1.1 Vài nét v h Thiên Lý 1.1.2 Gi i thi u v Thiên Lý 1.1.3 Công d ng tác d ng d 1.2 T ng quan v ph 1.2.1 Ph c lý c a Thiên Lý ng pháp chi t m u th c v t ng pháp chi t 1.2.3 Qúa trình chi t th c v t 10 ng pháp s c ký 1.3.1 C s c a ph 1.4 T ng quan v ph 13 ng pháp s c ký 1.3.2 Phân lo i ph 9 1.2.2 C s c a trình chi t 1.3 T ng quan v ph 13 ng pháp s c ký 13 ng pháp xác đ nh c u trúc c a h p ch t thiên nhiên 17 1.4.1 Ph h ng ngo i (Infrared Spectroscopy) 17 1.4.2 Ph kh i l ng (Mass Spectroscopy) 17 1.4.3 Ph c ng h ng t h t nhân 19 Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng CH Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i NG IT NG VƠ PH NG PHáP NGHIÊN C U 23 2.1 M u th c v t 23 2.2 Các dòng t bƠo nghiên c u 23 2.3 Ph 23 ng pháp x lý m u th c v t 2.4 Các phu ng pháp s c ký đ phơn l p ch t t d ch chi t 23 2.5 Các ph 23 ng pháp hoá lý đ nh n d ng c u trúc 2.6 Ph ng pháp đánh giá ho t tính đ c t bƠo 24 2.7 Ph ng pháp u tra s li u 24 NG PH N TH C NGHI M 25 CH 3.1 D ng c , thi t b vƠ hoá ch t 25 3.2 i u ch ph n chi t 26 3.3 Th ho t tính sinh h c c n chi t 26 3.3.1 Ho t tính đ c t bào 26 3.3.2 Ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh 28 3.3.3 Ho t tính ch ng oxi hố 29 3.4 Chi t tách vƠ phơn l p h p ch t 31 3.5 Xác đ nh c u trúc h p ch t 31 3.5.1 D ki n ph c a kaempferol 3-O-õ-D-glucopyranoside (1) 31 3.5.2 D ki n ph c a ch t Quercetin 3-O-õ-D-glucopyranoside (3) 31 Ch 33 ng K T QU VƠ TH O LU N 4.1 Thu hái vƠ xác đ nh tên khoa h c cơy Telosma cordata 33 4.2 i u ch ph n chi t 35 4.3 K t qu th ho t tính sinh h c c n chi t c a Thiên lý 35 4.3.1 K t qu th ho t tính đ c t bào 36 4.3.2 K t qu th ho t tính ch ng oxi hố 37 4.3.3 K t qu th ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh 38 Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i 4.4 Chi t tách, phơn l p h p ch t t c n chi t metanol thiên lý 38 4.5 Xác đ nh c u trúc ch t 38 4.5.1 Xác đ nh c u trúc ch t 38 4.5.2 Xác đ nh c u trúc ch t 41 Kêt lu n 44 TƠi li u tham kh o 45 Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i DANH M C NH NG CH VI T T T quay c c (Specific Optical Botation)   D 13 C-NMR Ph c ng h ng t h t nhân cacbon 13 Cacbon–13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H-NMR Ph c ng h ng t h t nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H COSY 2D-NMR H– 1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy Ph c ng h ng t h t nhân chi u Two – Pimensional NMR CC S c ký c t (Column Chromatography) DEPT Distortionless Enhancement By Polarisation Trasfer ESI – MS Ph kh i l ng phun mù n t Electron Spray Ionization Mass Spectranetry FAB – MS Ph kh i l ng b n phá nguyên t nhanh Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivily HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HR – FAB – MS Ph kh i l ng b n phá nguyên t nhanh phân gi i cao Hight Resolution Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry IR Ph h ng ngo i (Infrared Spectroscopy) Me Nhóm Metyl NOESY Nucler Overhauser Effect Spectroscopy TLC S c ký l p m ng (Thin Layer Chromatography) Hep- G2 Dòng t bào ung th gan (Hepatocelluar carcinoma) RD Dòng t bào ung th màng tim (Rhabdo sarcoma) Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i Danh m c hình v vƠ b ng bi u Trang Hình 1.1.a M t s h Thiên lý Hình 1.1.b M t s h Thiên lý Hình 1.1.c Cây Thiên Lý (Telosma coradata (Burm.f.) Merrill) Hình 4.1 Cây Thiên lý (Telosma cordata) 33 Hình 4.2 C u trúc c a ch t 40 Hình 4.3 Ph c ng h ng t h t nhân proton 1H-NMR c a ch t 40 Hình 4.4 Ph c ng h ng t bon 13C-NMR c a ch t 41 Hình 4.5 C u trúc c a ch t 42 Hình 4.6 Ph c ng h ng t h t nhân proton 1H-NMR c a ch t 43 Hình 4.7 Ph c ng h ng t bon 13C-NMR c a ch t 47 B ng 4.1 Hàm l ng c n chi t t Thiên lý 34 B ng 4.2 K t q a th ho t tính đ c t bào c n chi t metanol Thiênlý………………………………………………………………………36 B ng 4.3 K t qu th ho t tính ch ng oxi hố d ch chi t metanol Thiên lý………………………………………………………………………37 B ng 4.4 K t qu th ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh c n chi t c a T cordata………………………………………………………… 37 S đ 4.1 Qui trình chi t phân đo n t Telosma cordata 35 S đ 4.2 S đ phân l p h p ch t t T cordata……………….38 Nguy n Th Nguy t Nga L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i M U I Lí ch n đ tài Thu c ch a b nh m t thành ph n không th thi u cu c s ng T xa x a cho đ n nay, ng i đư bi t s d ng c vào vi c u tr b nh M c dù lo i thu c tây y chi m m t ph n l n ph nh ng thu c có ngu n g c th o d Vi t Nam đ c đánh giá n ng pháp u tr c v n gi m t v trí h t s c quan tr ng c th 16 th gi i v s phong phú đa d ng sinh v t Trong th m th c v t đa d ng phong phú vào lo i b c nh t th gi i Hi n nay, đư bi t 10.386 lồi th c v t b c cao có m ch, d đốn có th 12.000 lồi Trong s này, ngu n tài nguyên làm thu c chi m kho ng 30% Theo tài li u c a Pháp, tr D c n m 1952 tồn ơng ng ch bi t có 1350 lồi thu c n m 160 h th c v t Sách “Nh ng thu c v thu c Vi t Nam” c a GS T t L i (1999) gi i thi u 800 v thu c Sách “Cây thu c Vi t Nam” c a L Tr n ng Y Lê c (1997) có ghi 830 thu c Cu n “T n thu c Vi t Nam” c a TS Võ V n Chi (1997) đư th ng kê kho ng 3200 loài thu c, nh ng ch c ch n không ph i nh ng s cu i [1], [2] Nguyên nhân c a s phong phú tr c h t n c ta n m khu v c nhi t đ i gió mùa, có khí h u nóng m quanh n m, đ m cao (trên 80%), l ng m a l n, nhi t đ trung bình kho ng 15-270C thu n l i cho s sinh tr ng phát tri n c a c Do đ c m khí h u v trí đ a lí thu n l i nên tài nguyên th c v t n c ta vô phong phú đa d ng Vi c nghiên c u, tìm ki m h p ch t có ho t tính sinh h c cao t ngu n th c v t đ ng d ng Y h c, hóa h c m c đích khác cu c s ng c a ng i, m t nh ng nhi m v quan tr ng đư đ khoa h c n Nguy n Th Nguy t Nga c nhà c quan tâm L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i Ngày v i s phát tri n c a khoa h c k thu t nói chung n n Y h c c truy n dân t c v i ph ng thu c đông y v i y h c hi n đ i đư có nh ng đóng góp to l n vi c phịng ch a b nh, t ng c ng tu i th cho ng i, nâng cao ch t l ng cu c s ng Các ph ng thu c y h c c truy n đư th hi n nh ng m t m nh u tr b nh đ c tính tác d ng ph Chính v y vi c tìm hi u, nghiên c u thành ph n hóa h c ho t tính sinh h c c a h p ch t h th c v t n c ta s c s khoa h c cho vi c nghiên c u s d ng thu c m t cách h p lí mang l i hi u qu cao Cây Thiên lý (hay g i Hoa lý, D lài h Telosma Cordata (Burm f.) Merrill thu c đ ta th ng đ ng) tên khoa h c c tr ng ph bi n c s d ng đ ph c h i c th thi u ng , làm t ng c sinh l c nhanh Cây có nhi u tác d ng d n c ng c lý dân gian nh ng cho đ n v n cơng trình nghiên c u v lo i th o d c Xu t phát t nh ng lý th c ti n mong mu n làm phong phú thêm ngu n ki n th c lo i này, ch n đ tài: “Nghiên c u thành ph n hóa h c c a Thiên lý (Telosma Cordata)” Nhi m v vƠ m c đích nghiên c u - Thu hái xác đ nh tên khoa h c Thiên lý - Th m dị ho t tính sinh h c - Phân l p m t s h p ch t t Thiên Lý - Xác đ nh c u trúc hóa h c c a h p ch t phân l p đ Nguy n Th Nguy t Nga c b ng ph ng pháp ph L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i CH NG T NG QUAN tơi li u 1.1 Gi i thi u v th c v t h Thiên lý 1.1.1 Vài nét v h Thiên lý [1], [2] Vi t Nam, h Thiên lý (Asclepiadaceae) đ c bi t đ n v i 21 chi, 41 loài (Võ V n Chi, 1998), ph n l n th c v t đ u d ng dây leo có m c đ i nhau, thân có nh a m m u tr ng [1] Trong h Thiên lý, chi Telosma đ c bi t g m loài: T procumbens T cordata Cây T procumbens (Cam th o Bia) đ khu r ng r m có đ cao th p Nam, tồn đ c tìm th y Philipin, Vi t Nam Trung Qu c Vi t c dùng nh ch t long đ m dùng thay cho cam th o v ng t c a Cây T cordata (Burm f.) Merrill Vi t nam g i Thiên lý, đ c tr ng nhi u n i ch y u đ n Cây m c mi n B c đ làm c nh, hoa dùng n đ , Malaixia, Thái lan, Trung qu c Philipin Theo y h c dân gian, hoa c a có tác d ng gi i nhi t, an th n, giúp ng ngon ch a m t m i đau l ng Lá dùng tr m n nh t, v t loét, tr b nh tr sa d có k t qu [2] Ngồi chi Telosma, h Thiên lý đ c bi t đ n v i chi Dischidia g m loài: D formosana, D majo, D nummularia , D acuminata D rafflesiana Vi t nam m i ch th y có nh t D acuminata Cost v i tên g i tai chu t hay dây h t bí, phân b ch y u gian, toàn đ c s d ng đ ch a b nh viêm nhi m, viêm đ ni u m t s b nh ph khoa Cây đ l y t vùng núi Vi t nam Theo y h c dân i giư đ p lên v t th c dùng d ng ti t i d ng thu c s c ho c dùng ng ch ng viêm nhi m [2] D i m t vài hình nh minh h a m t s h Thiên lý (hình 1.1.a, hình 1.1.b) [14] Nguy n Th Nguy t Nga 10 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i H-NMR (CD3OD) ppm: 6.15 (1H, s, H-6); 6.35 (1H, s, H-8); 7.71 (1H, s, H-2’); 6.88 (1H, d, J=2.0Hz, H-5’); 7.56 (1H, d, J=3.0Hz, H-6’); 5.23 (1H, d, J=6.0Hz, H-1”-Glc) 13 C-NMR (CD3OD) ppm: 158.4 (C-2); 135.6 (C-3); 179.4 (C-4); 162.9 (C-5); 100.0 (C-6); 166.4 (C-7); 94.8 (C-8); 158.8 (C-9); 104.3 (C-10); 123.2 (C-1’); 115.9 (C-2’); 145.8 (C-3’); 149.9 (C-4’); 117.5 (C-5’); 123.0 (C-6’); 104.4 (C-1”); 75.7 (C-2”); 78.3 (C-3”); 71.1 (C-4”); 78.0 (C-5”); 62.5 (C-6”) ch ng K t qu vƠ th o lu n 4.1 Thu hái vƠ xác đ nh tên khoa h c cơy Telosma cordata c m nh n d ng: Hình 4.1 Cây Thiên lý (Telosma cordata) Cây Thiên lý có tên khoa h c Telosma cordata thu c h Thiên lý (Asclepiadaceae), đ c thu hái vào tháng n m 2007 t i V gia Ba Vì M u th c v t TS Ngô V n Tr i (Vi n D Nguy n Th Nguy t Nga 42 n qu c c Li u) giám đ nh L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i Thiên lý m t loài nh , m c leo, thân h i có lơng, nh t b ph n cịn non Lá hình tim, thn, khía mép nh ng kho ng 5-8mm v phía cu ng, đ u nh n, có lơng gân Phi n dài 6-11cm, r ng 47,5cm, cu ng c ng có lơng, dài 12-20mm Hoa to, nhi u, màu vàng xanh l c nh t r t th m m c thành xim d ng tán nách lá, có cu ng to, h i có lơng dài 10-22mm, mang nhi u tán m c mau li n v i Cây phân b t t nh phía Nam Trung Qu c bao g m c đ o H i Nam đ n Vi t Nam, Lào, Campuchia m t s n Vi t Nam, Thiên lý đ c khác ông Nam c tr ng r i rác kh p t nh thu c đ ng b ng trung du B c B 4.2 i u ch ph n chi t 10,0kg Thiên lý t khô thu đ i đ c r a s ch, ph i c 1,5kg sau đem nghi n nh chi t v i metanol (4 l n, m i l n 60 phút, b ng thi t b đ c b có đ bày xung n c phân b l i b ng dung môi phân c c t ng d n: n-hexan, etyl axetat nc c n chi t t b ng 4.1 s B ng 4.1 Hàm l STT Tên i áp su t gi m c c n chi t t ng metanol C n chi t t ng butanol, d ch chi t t thu đ 400C) siêu âm L c d ch chi t qua gi y l c, g p l i c t lo i dung môi d thu đ ngâm C n metanol Nguy n Th Nguy t Nga đ ng ng 4.1 ng đem lo i dung môi ng, k t qu đ c trình ng c n chi t t Thiên lý Th tích dung Kh i l ng Hàm l ng (%) mơi (lít) (gam) so v i m u khô 10,0 52,0 0,78% 43 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i t ng C n n-hexan 5,0 11,2 0.17% C n etylaxetat 5,5 15,5 0,23% C n n-butanol 3,0 7,3 0,11% B t khô T cordata (10 kg) Chi t v i MeOH, 400 c t lo i dung môi C n chi t metanol t ng (52g) B sung n c t lo i dung môi c, chi t v i n-hexan L p n c, b sung EtOAc TC1A: c n n-hexan (11,2g) c t lo i dung môi L p n c, b sung n-Butanol TC1B: c n etyl axetat (15,5g) Nguy n Th Nguy t Nga 44 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i c t lo i dung môi TC1C: c n nbutanol (7,3g) S đo n t đ TC1D: l p n c l i 4.1 Qui trình chi t phân Telosma cordata Nguy n Th Nguy t Nga 45 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i 4.3 K t qu th ho t tính sinh h c c n chi t c a Thiên lý 4.3.1 K t qu th ho t tính đ c t bào C n chi t metanol thiên lý đ c ti n hành th ho t tính đ c t bào t i phòng Sinh h c th c nghi m, Vi n Hoá h c H p ch t thiên nhiên Dòng t bào ung th gan Hep-G2 (hepatocellular carcinoma), t phịng thí nghi m Bioassay tr ng ih cD c Illinois - USA Dòng t bào ung th màng tim RD (rhabdo sarcoma) dòng ung th màng t cung Fl (Fibril sarcoma of Uteus) t Vi n VSDT T Các t bào đ ng dinh d tr c gi Nit l ng, đánh th c trì mơi ng MEME ho c DMEM Ch t chu n d có kh n ng di t t bào nh ng tính ch t ellipithine, vinblastine ho c taxol pha DMSO K t qu th ho t tính đ c t bào đ B ng 4.2 K t q a th c trình bày b ng 4.2 b ng 4.3 ho t tính đ c t bào c n chi t metanol Thiên lý Dòng t bào Dòng t bào Ph n tr m s ng sót (%) Gía tr IC50 (g/ml) ST Ký hi u T m u Hep-G2 Fl RD DMSO 100,0  0,0 100,0  0,0 100,0  0,0 Ch ng (+) 2,05  1,07 2,00  0,09 TC-MeOH 39,0  2,5 12,6 0,8 Hep-G2 Fl RD 2,03  0,60 0,002 0,004 0,0025 5,6  2,4 34,2 33,0 35,2 Ch ng (+): ellipithine DMSO K t qu cho th y d ch chi t metanol th hi n ho t tính đ c t bào y u v i c ba dòng t bào ung th gan (Hep-G2), ung th màng t cung (Fl) ung th màng tim (RD) v i giá tr n ng đ c ch t i thi u IC50 34,2; 33,0 35,2 g/ml Nguy n Th Nguy t Nga 46 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i 4.3.2 K t qu th ho t tính ch ng oxi hố: B ng 4.3 K t qu th ho t tính ch ng oxi hoá d ch chi t metanol Thiên lý STT Ký hi u m u Gía tr IC50 (g/ml) Gía tr SC% DMSO 0,00  0,00 Ch ng (+) 78,33  0,49 9,9 TC-MeOH 52,3  0,90 56,9 K t qu th ho t tính ch ng oxi hoá cho th y d ch chi t metanol c ng có ho t tính ch ng oxi hoá v i giá tr SC = 52,3  0,9% IC50 = 56,9g/ml 4.3.3 Ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh Ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh đ c ti n hành t i phòng Sinh h c th c nghi m, Vi n Hoá h c H p ch t thiên nhiên, m u chi t đ đánh giá ho t tính kháng sinh phi n vi l ng 96 gi ng theo ph c ng pháp hi n đ i c a Vander Bergher Vlietlinck (1991), MC Kane,L., & Kandel (1996) K t qu đ c th hi n b ng 4.4 B ng 4 K t qu th ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh c n chi t c a T cordata N ng đ Kí Vi khu n Gr (-) c ch t i thi u (MIC: g/ml) Vi khu n Gr (+) N mm c N m men hi u E P B S Asp F C S m u coli aerugi subtilis aureus niger oxysporu albicans cerevisi nosa Nguy n Th Nguy t Nga m 47 ae L p K31C – Khoa Ho H c Tr T.C- ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i - - - 125 - - - - MeOH K t qu cho th y, c n chi t metanol có ho t tính nh t kháng vi khu n Gr(+) Staphylococcus aureus ATCC 12222 v i giá tr n ng đ c ch t i thi u MIC b ng 125g/ml 4.4 Chi t tách, phơn l p h p ch t t c n chi t etylaxetat cơy thiên lý tìm ki m thành ph n có ho t tính, b ng vi c s d ng l p l i s c ký c t v i ch t h p ph silica gel, dung môi r a gi i CHCl 3-MeOH v i đ phân c c t ng d n, đư phân l p đ c ch t t Thiên lý C n etylaxetat T cordata (15gam) SKC CHCl3 - MeOH (99:1 – 1:1) TC-1B-1 TC 1B-4 SKC CHCl3MeOH (25:1) TC 1B-5 TC 1B-6 SKC CHCl3MeOH (20:1) Ch t (TC-1) Ch t (TC-2) S đ 4.2 S đ phân l p h p ch t t T cordata Nguy n Th Nguy t Nga 48 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i 4.5 Xác đ nh c u trúc h p ch t 4.5.1 Xác đ nh c u trúc ch t Ch t phân l p đ c d ng b t màu vàng Ph hi u c a hai proton th m không c p đôi H-8) v i hai proton th m c p đôi H-NMR c a cho tín 6,17 (1H, s, H-6) 6,36 (1H, s, v trí ortho- 8,06 (2H, d, J = 8,0 Hz, H-2’và H-6’) 6,90 (2H, d, J = 8,0 Hz, H-3’và H-5’), tín hi u đ c tr ng cho d n xu t c a kaempferol hay 7,5,4’-trihydroxyflavon [7] Ngoài ra, tr n ph H-NMR c n th y xu t hi n t n hi u c a m t proton anomer t i 5,27 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1”) H ng s t ng tác (J) c a c c proton anomer kh ng đ nh cho s có m t c a m t đ n v đ ph 13 C-NMR c a xu t hi n tín hi u c ng h ng có c u h nh õ Tr n ng c a 21 cacbon, tín hi u c a c u trúc aglycon d ng kaempferol đ c kh ng đ nh t i 158.4 (C-2); 135.5 (C-3); 179.5 (C-4); 162.3 (C-5); 99.9 (C-6); 165.9 (C-7); 94.8 (C-8); 159.0 (C-9); 105.7 (C-10); 122.7 (C-1’); 132.2 (C-2’ C-6’); 116.0 (C-3’ C-5’); 161.5 (C-4’) [9] C c t n hi u c n l i thu c v đ n v đ ng hexose Các tín hi u c a nhóm CH t i 104.1 (C-1”); 75.7 (C-2”); 78.0 (C-3”); 71.3 (C-4”); 78.0 (C-5”) nhúm CH2 t i h p cho s có m t c a m t phân t đ 62.6 hoàn toàn phù ng glucopyranose Ph kh i l ESI-MS c a v i pic ion t i m/z 447 [M-H]- t ng ng ng v i công th c phân t C21H20O11 (M=448) So s nh d li u ph c a ch t v i c c s li u ph c a kaempferol 3-O-õ-D-glucopyranoside đ h p hoàn toàn, v y ch t đ c công b [9] cho th y cú s ph c xác đ nh kaempferol 3-O-õ-D- glucopyranoside Nguy n Th Nguy t Nga 49 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i 3' OH 1' O OH O 1'' 5'' 4'' OH 3'' OH 5' 6' O O HO OH 4' 2'' OH Hình 4.2 C u trúc c a ch t Hình 4.3 Ph c ng h Nguy n Th Nguy t Nga ng t h t nhân proton 1H-NMR c a ch t 50 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i Hình 4.4 Ph c ng h ng t bon 13C-NMR c a ch t 4.5.2 Xác đ nh c u trúc ch t Ch t nh n đ c d ng b t màu vàng Ph t n hi u c a hai proton th m không c p đôi (1H, s, H-8), ba proton th m H-NMR c a ch t cho 6,15 (1H, s, H-6) 6,35 7,71 (1H, s, H-2’); 7,56 (1H, d, J=3,0 Hz, H- 6’) 6,88 (1H, d, J=2,0 Hz, H-5’), v i tín hi u c ng h cacbon ph 13 C-NMR t i ng c a 158.4 (C-2); 135.6 (C-3); 179.4 (C-4); 162.9 (C-5); 100.0 (C-6); 166.4 (C-7); 94.8 (C-8); 158.8 (C-9); 104.3 (C-10); 123.2 (C-1’); 115.9 (C-2’); 145.8 (C-3’); 149.9 (C-4’); 117.5 (C-5’); 123.0 (C-6’) cho th y ch t d n xu t c a quercetin (7,5,3’,4’- tetrahydroxyflavon) [11] Ngoài ra, tr n ph H-NMR c a c n th y t n hi u c a m t proton anome 5,23 (1H, d, J=6,0 Hz, H-1”) g i ý cho s có m t c a m t đ n v đ c u h nh õ Tr n ph 15 tín hi u c ng h 13 ng cú C-NMR c a cho tín hi u c a 21 cacbon, lo i tr ng c a ph n aglycon s c n l i t n hi u c a cacbon Nguy n Th Nguy t Nga 51 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i g m nhúm CH t i 104.4 (C-1”); 75.7 (C-2”); 78.3 (C-3”); 71.1 (C-4”); 78.0 (C-5”) nhúm CH2 t i 62.5 đ nv đ i u cho th y s có m t c a m t ng glucose phân t ch t K t h p v i ph kh i l MS c a v i pic ion t i m/z 463 [M-H]- t ng ESI- ng ng v i công th c phân t C21H20O12 (M=464) so s nh v i tài li u đ c cơng b [9] cho th y c u tr c c a hoàn toàn ph h p v i quercetin 3-O-õ-D-glucopyranoside OH 3' OH 1' O OH O HO O 2'' OH 3'' OH 5' 6' O 1'' 5'' 4'' OH 4' OH Hình 4.5 C u trúc c a ch t Nguy n Th Nguy t Nga 52 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i Hình 4.6 Ph c ng h ng t h t nhân proton 1H-NMR c a ch t Hình 4.7 Ph c ng h Nguy n Th Nguy t Nga ng t bon 13C-NMR c a ch t 53 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i k t lu n L n đ u tiên Thiên lý Telosma cordata đ thành ph n hoá h c ho t tính sinh h c K t qu thu đ T 1,5kg khô Thiên lý đư thu đ c nghiên c u v c là: c 52 gam c n chi t metanol t ng, t phân tách s b thành ph n d ch cô: c n n-hexan (11,2gam, 0,17%), c n etylaxetat (15,5gam,0,23 %) n-butanol (7,3gam, 0,11%) C n chi t metanol Thiên lý bi u hi n ho t tính đ c t bào v i dòng t bào ung th ng i t bào ung th gan (Hep-G2); ung th màng t cung (Fl) ung th màng tim (RD) v i giá tr n ng đ c ch t i thi u IC50 34,2; 33,0 35,2 g/ml; ho t tính ch ng oxi hoá v i giá tr IC50 56,9g/ml ho t tính kháng vi khu n Gr(+) Staphylococcus aureus v i giá tr n ng đ c ch t i thi u MIC 125g/ml T c n chi t metanol T cordata b ng ph ph ng pháp ph hi n đ i nh H-NMR, 13 ng pháp s c ký C-NMR ESI-MS đư phân l p xác đ nh c u trúc c a h p ch t flavonoitglycoside kaempferol 3-O-õ-D-glucopyranoside (1) quercetin 3-O-õ-D-glucopyranoside (2) Nguy n Th Nguy t Nga 54 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i TƠI LI U THAM KH O i TƠi li u b ng ti ng vi t Huy Bích, Bùi Xuân Ch ng, Trung àm, Nguy n Th ng Dong, Ph m V n Hi n, Ph m Duy Mai, Ph m Kim Mưn, oàn Th Thu, Nguy n T p Tr n Hoàn (2004), Cây thu c đ ng v t làm thu c Vi t Nam, Nxb khoa h c k thu t Hà N i, (2), trang 125-137, 858-859, Hà N i Võ V n Chi (1991), T n thu c Vi t Nam- Nhà xu t b n Khoa h c K thu t, Hà n i 3.Võ V n Chi, T n th c v t thông d ng, T p 1, NXB Khoa h c K thu t (2003) Nguy n H u nh, ình R ng (2003), Hóa h u c 1, Nxb Giáo d c, Hà N i T t L i (2001), Nh ng thu c v thu c Vi t Nam, Nhà xu t b nY h c, Hà n i Lư ình M i(2005), ”Tài nguyên th c v t Vi t Nam – Ngu n h p ch t t nhiên đ y ti m n ng’’, H i th o qu c gia – y h c c truy n u tr ung th H u Vinh, Nguy n Xuân D ng, Tr n Th M Linh, Ph m Vi t Hùng (1985), Các ph ng pháp s c ký, Nxb khoa h c k thu t, trang 4-13,225- 229 Nguy n ình Tri u, Các ph NXB ng pháp v t lý ng d ng hóa h c i h c qu c gia Hà N i, (2006) II TƠi li u b ng ti ng Anh Braca A; Polete M; Sanog R; Sanou H; et al Chemical composition and antioxidant activity of phenolic compounds from wild and cultivated Nguy n Th Nguy t Nga 55 L p K31C – Khoa Ho H c Tr ng Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i scherocenye hnie (Anacardieceae) leaves- J Agri Food Chem, 51, 66896695, (2003) 10 Byung, S.-M.et al., Planta Met., 1999, 65, 374- 375 11 Collins FW; Bohm BA; Welkins CK - Flavonol glycoside gelletes from Tellima frandifloae - Phytochemistry, 14, 1099, (1975).’; 12 Duc Do Khac, Sung Tran Van, Angela Martha Campos, Jean- Yves Lallemand and Marcel Fetizon, Ellagic acid compounds from Diplopanax stachyanthus, Phytochemistry, Vol 29 (1), 251-256 (1990) 13 Liang Guang- Yi, Alexander I Gray and Peter G Waterman, Pentacylic triterpenes form the fruits of Rosa sterilis, Journal of Natural Products, Vol 52 (1), pp 162-167 (1989) 14 Peter J Houghton and Lu Ming Lian, Triterpenes from Desfontainia spinosa, Phytochemistry, Vol 25 (8), pp 1939- 1944 (1986) III TƠi li u n t 15 htpp://www.Thaythuoccuaban.com 16 htpp://forun.ctu.edu.vn 17 htpp://www.Irc.hueuni.edu.vn Nguy n Th Nguy t Nga 56 L p K31C – Khoa Ho H c ... 1.1.b M t s h Thiên lý 1.1.2 Gi i thi u v Thiên Lý [1], [2], [5] * Cây Thiên lý (Telosma cordata (Burm f.) Merrill) [2] Thiên lý g i hoa lý hay d lài h ng Tên khoa h c : Telosma cordata (Burm f.)... xác đ nh tên khoa h c cơy Telosma cordata c m nh n d ng: Hình 4.1 Cây Thiên lý (Telosma cordata) Cây Thiên lý có tên khoa h c Telosma cordata thu c h Thiên lý (Asclepiadaceae), đ c thu hái vào... Khoá lu n t t nghi p i H c S Ph m Hà N i Danh m c hình v vƠ b ng bi u Trang Hình 1.1.a M t s h Thiên lý Hình 1.1.b M t s h Thiên lý Hình 1.1.c Cây Thiên Lý (Telosma coradata (Burm. f.)