Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 86 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
86
Dung lượng
1,18 MB
Nội dung
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM
--- o0o ---
HỒ THỊ KIM TRÂM
NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHITOSAN ĐỂ THU NHẬN
SINH KHỐI VI TẢO Thalassiosira pseudonana VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ
NĂNG CHỐNG OXY HÓA CỦA SINH KHỐI VI TẢO THU ĐƯỢC
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC
NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM
GVHD: TS. NGUYỄN THẾ HÂN
KHÁNH HÒA -06/ 2015
i
LỜI CẢM ƠN
Sau thời gian nghiên cứu tại phòng thí nghiệm trường Đại học Nha Trang,
đến nay em đã hoàn thành công việc nghiên cứu của mình.
Lòng biết ơn sâu sắc nhất em xin gửi đến TS. Nguyễn Thế Hân người đã tận
tình hướng dẫn, giúp đỡ em trong suốt quá trình nghiên cứu.
Em cũng xin chân thành cảm ơn tới các thầy cô trong khoa Công nghệ Thực
phẩm, các thầy cô quản lí phòng thí nghiệm đã tạo điều kiện cho em hoàn thành đề
tài tốt nghiệp.
Lòng biết ơn sâu sắc nhất em xin gửi đến gia đình đã nuôi dưỡng, dạy dỗ và
luôn động viên, ủng hộ em trong suốt quá trình học tập.
Sau cùng em xin dành cho bạn bè lời cảm ơn vì đã chia sẻ, động viên và đã
cùng đồng hành với em trong suốt thời gian học tại trường.
Với kiến thức và tầm nhìn còn hạn chế cũng như bước đầu chưa có kinh
nghiệm trong nghiên cứu, bài luận này không tránh khỏi những thiếu sót. Rất mong
sự chân thành góp ý và sửa chữa của thầy cô và toàn thể các bạn.
Em xin chân thành cảm ơn!
Nha Trang, tháng 6 năm 2015
Sinh viên thực hiện
Hồ Thị Kim Trâm
ii
MỤC LỤC
DANH MỤC BẢNG
DANH MỤC HÌNH
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
LỜI MỞ ĐẦU .......................................................................................................... 1
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN ................................................................................... 6
1.1. Tổng quan về vi tảo Thalassiosirapseudonana .................................................. 6
1.1.1.
Phân loại ................................................................................................... 6
1.1.2.
Đặc điểm hình thái cấu tạo của Thalassiosira pseudonana ....................... 6
1.1.3.
Phân bố ..................................................................................................... 7
1.1.4.
Thành phần dinh dưỡng của Thalassiosira pseudonana ........................... 8
1.1.4.1. Protein ......................................................................................................8
1.1.4.2. Lipit .......................................................................................................8
1.1.4.3. Carbohydrate .........................................................................................9
1.1.4.4. Vitamin.....................................................................................................9
1.1.4.5. Sắc tố .....................................................................................................9
1.1.4.6. Chất chống oxy hóa ...............................................................................9
1.1.5.
Ứng dụng của Thalassiosira pseudonana ............................................... 10
1.1.5.1. Làm thức ăn cho động vật thủy sản ..................................................... 10
1.1.5.2. Dùng làm nhiên liệu sinh học .............................................................. 10
1.1.5.3. Làm dược phẩm................................................................................... 10
1.2. Tổng quan về chitosan .................................................................................... 11
1.2.1.
Cấu trúc hóa học và tính chất của chitosan ............................................. 11
1.2.1.1. Cấu trúc hóa học .................................................................................. 11
1.2.1.2. Tính chất của chitosan ......................................................................... 12
1.2.2.
Ứng dụng của chitosan ........................................................................... 13
iii
1.2.3.
Nguyên lí sử dụng chitosan thu sinh khối vi tảo và ứng dụng trong xử lý
nước thải .............................................................................................................. 16
1.3. Một số phương pháp thu sinh khối vi tảo...................................................... 17
1.3.1.
Phương pháp lắng ................................................................................... 17
1.3.2.
Phương pháp ly tâm ................................................................................ 17
1.3.3.
Phương pháp lọc ..................................................................................... 18
1.3.4.
Phương pháp keo tụ ................................................................................ 18
1.4. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về thu sinh khối vi tảo ............. 20
1.4.1.
Tình hình nghiên cứu trong nước ............................................................ 20
1.4.2.
Tình hình nghiên cứu ngoài nước ........................................................... 20
CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ................... 22
2.1. Đối tượng nghiên cứu ..................................................................................... 22
2.2. Vật liệu nghiên cứu ......................................................................................... 22
2.2.1.
Vi tảo Thalassiosira pseudonana ............................................................ 22
2.2.2.
Chitosan .................................................................................................. 22
2.3. Hóa chất .............................................................................................................. 22
2.4. Dụng cụ và thiết bị .......................................................................................... 22
2.5. Phương pháp nghiên cứu................................................................................ 23
2.5.1.
Xác định hàm lượng ẩm ....................................................................... 23
2.5.2.
Xác định điều kiện thu sinh khối vi tảo................................................... 23
2.5.3.
Xác định hàm lượng các chất có hoạt tính sinh học ................................ 24
2.5.3.1. Chuẩn bị dịch chiết .............................................................................. 24
2.5.3.2. Xác định hàm lượng carotenoid tổng số và chlorophyll ...................... 24
2.5.3.3. Xác định hàm lượng polyphenol tổng số ............................................. 25
2.5.4.
Xác định khả năng chống oxy hóa .......................................................... 25
2.5.4.1. Xác định khả năng khử gốc tự do DDPH ............................................ 25
2.5.4.2. Xác định tổng năng lực khử................................................................. 26
2.6. Phương pháp bố trí thí nghiệm ...................................................................... 26
iv
2.6.1.
Sơ đồ thí nghiệm tổng quát ..................................................................... 26
2.6.2.
Xác định loại chitosan............................................................................. 27
2.6.3.
Thí nghiệm xác định pH. ........................................................................ 28
2.6.4.
Xác định nồng độ chitosan dùng để thu sinh khối vi tảo ......................... 29
2.6.5.
Thí nghiệm xác định thời gian thu sinh khối vi tảo ................................. 30
2.7. Phương pháp phân tích .................................................................................. 31
2.7.1.
Xác định hàm lượng ẩm trong tế bào vi tảo ............................................ 31
2.7.2.
Xác định hàm lượng carotenoid tổng số, hàm lượng chlorophyll a,
chlorophyll b ........................................................................................................ 31
2.7.3.
Xác định hàm lượng polyphenol tổng số ................................................ 33
2.7.4.
Xác định khả năng khử gốc tự do DPPH ................................................ 34
2.7.5.
Xác định tổng năng lực khử .................................................................... 35
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN.............................. 37
3.1. Kết quả xác định điều kiện thu sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana 37
3.1.1.
Ảnh hưởng của loại chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo ........ 37
3.1.2.
Ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo ....................... 40
3.1.3.
Ảnh hưởng của nồng độ chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh khối ........... 44
3.1.4.
Ảnh hưởng của thời gian lắng đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo ...... 48
3.2. Kết quả xác định hoạt tính sinh học của vi tảo Thalassiosira pseudonana .51
3.2.1.
Kết quả xác định hàm lượng polyphenol tổng số, chlorophyll a, chlorophyll b
và carotenoid tổng số ....................................................................................................... 51
3.2.2.
Khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo thu được bằng chitosan ...52
CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ............................................................. 56
TÀI LIỆU THAM KHẢO..................................................................................... 58
PHỤ LỤC ............................................................................................................... 62
v
DANH MỤC BẢNG
Bảng 3.1. Hàm lượng polyphenol tổng số, chlorophyll a, chlorophyll b và
carotenoid tổng số.................................................................................................... 52
Bảng 3.2. Giá trị EC50 của sinh khối vi tảo thu bằng chitosan và vitamin C ............. 54
vi
DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1. Vi tảo Thalassiosira pseudonana ...............................................................7
Hình 1.2. Cấu trúc của chitosan............................................................................... 11
Hình 2.1. Cách xác định chiều cao cột lắng ............................................................. 24
Hình 2.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát............................................................. 26
Hình 2.3. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định loại chitosan ......................................... 27
Hình 2.4. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định pH ........................................................ 28
Hình 2.5. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định nồng độ chitosan .................................. 29
Hình 2.6. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định thời gian thu sinh khối vi tảo ................ 30
Hình 2.7. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hàm lượng chlorophyll a, chlorophyll b
và carotenoid tổng số ............................................................................................... 32
Hình 2.8. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hàm lượng polyphenol tổng số ............. 33
Hình 2.9. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định khả năng khử gốc tự do DPPH ............. 34
Hình 2.10. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tổng năng lực khử .............................. 35
Hình 3.1. Đánh giá hiệu suất thu hồi khi sử dụng 2 loại chitosan DD70 và DD85
38
Hình 3.2. Ảnh hưởng của loại chitosan đến Hiệu suất lắng và Hệ số lắng (A) và Tỉ
lệ phần thể tích lắng (B)........................................................................................... 39
Hình 3.3. Đánh giá hiệu suất thu hồi sinh khối ở những pH khác nhau ................... 42
Hình 3.4. Ảnh hưởng của pH đến (A) Hiệu suất lắng và Hệ số lắng, (B) Tỉ lệ phần
thể tích lắng ............................................................................................................. 43
Hình 3.5. Hình ảnh sinh khối vi tảo thu bằng chitosan ở các nồng độ khác nhau
45
Hình 3.6. Ảnh hưởng của nồng độ chitosan đến hiệu suất thu hồi vi tảo (A) Ảnh
hưởng đến Hiệu suất lắng và Hệ số lắng, (B) Ảnh hưởng đến Tỉ lệ phần thể tích
lắng..............................................................................................................................46
Hình 3.7. Đánh giá hiệu suất thu hồi sinh khối ở những thời gian khác nhau
49
Hình 3.8. Ảnh hưởng của thời gian lắng đến Hiệu suất lắng và Hệ số lắng (A) và Tỉ
lệ phần thể tích lắng (B)........................................................................................... 50
vii
Hình 3.9. Khả năng chống oxy hóa (A) Tổng năng lực khử và (B) Khả năng khử
gốc tự do DPPH của sinh khối vi tảo thu bằng chitosan và vitamin C...................... 55
viii
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
FE
: Hiệu suất lắng
CF
: Hệ số lắng
SSVF : Tỉ lệ thể tích phần chất rắn lắng
EC50 : Giá trị nồng độ tại đó tổng năng lực khử hoặc khả năng bắt gốc tự do DPPH
đạt 50%
PUFA : Các axit béo chưa no
EPA : Axit Eicosapentaenoic
ARA : Axit Arachidonic
DHA : Axit Docosahexaenoic
DPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl
PUFA : Polyunsaturated fatty acid
1
LỜI MỞ ĐẦU
1. Tính cấp thiết của đề tài
Vi tảo là loài sinh vật đơn bào, thường được tìm thấy ở vùng biển nước mặn
và nước ngọt với các kích thước khác nhau, từ vài đến vài trăm micromet. Vi tảo có
khả năng nuôi sinh khối lớn, dễ tiêu hóa và có hàm lượng dinh dưỡng cao. Nhờ
những tính chất này mà vi tảo được xem như một mắt xích quan trọng trong chuỗi
thức ăn và cung cấp đầy đủ chất dinh dưỡng cần thiết cho động vật nuôi. Vi tảo
được sử dụng là nguồn thức ăn quan trọng cho tất cả các giai đoạn phát triển của
động vật thân mềm 2 mảnh vỏ như: hầu, vẹm, điệp, sò, ngao. Chúng còn là thức ăn
cho ấu trùng của hầu hết các loài tôm, cá, ốc và động vật phù du. Đến nay, có
khoảng trên 40 loài tảo đã được phân lập, nuôi cấy và sử dụng làm thức ăn cho ấu
trùng các loài thủy sản. Một số loài tảo được nuôi và sử dụng phổ biến trên thế giới
là: Thalasiossira pseudonana, Skeletonema, Chaaaetoceros calcitrans, Chaetoceros
mulleri, Nannochloropsis ocula, Chlorella minutissima,... Tại Việt Nam, loài vi tảo
Thalassiosira sp. được nuôi để làm nguồn thức ăn cho tôm thẻ chân trắng.
Bên cạnh làm thức ăn cho động vật thủy sản, vi tảo còn được xem là nguồn
nguyên liệu tiềm năng để chiết xuất các chất có hoạt tính sinh học cần thiết cho sức
khỏe con người. Một số hợp chất có hoạt tính sinh học từ vi tảo đã được chiết rút
bao gồm: các axit béo không no (như EPA và DHA), chất màu (như chlorophyll và
carotenoid), các chất có khả năng chống oxy hóa, các chất có khả năng kháng virus,
các chất có khả năng kháng viêm,… (Raposo và cộng sự, 2013). Nhiều sản phẩm
thực phẩm chức năng từ vi tảo đã được thương mại hóa.
Vi tảo còn được coi là nguồn nguyên liệu tiềm năng để sản xuất dầu diesel
sinh học, có thể hoàn toàn thay thế diesel hóa thạch trong tương lai, với sản lượng
dầu cao hơn đến 10-20 lần so với các loài thực vật trên cạn (Kaewkannetra và cộng
sự, 2012).
2
Trong những năm gần đây, nghiên cứu sản xuất dầu diesel sinh học từ vi tảo
được sự quan tâm của nhiều nhà khoa học trên thế giới. Tảo sản xuất dầu ngay trong
tế bào khi quang hợp với thành phần dầu lên đến 80% khối lượng khô. Dầu tảo có
khả năng chuyển đổi thành dầu mỏ nhân tạo hoặc nhiên liệu sinh học sạch và tốt
hơn hẳn các loại xăng dầu hiện có. Theo tiêu chuẩn đánh giá của American Society
for Testing Material (ASTM), dầu từ tảo có thuộc tính tương tự các loại dầu thô tiêu
chuẩn, nhưng an toàn hơn nhờ nhiệt độ phát cháy cao hơn, ít độc hại, không gây
hiệu ứng nhà kính, có thể sử dụng trực tiếp cho động cơ diesel hoặc pha trộn với các
loại dầu có nguồn gốc khác theo tỷ lệ khác nhau. Các nhà khoa học đã chứng minh,
tảo giúp giảm đến 70-90% vấn đề ô nhiễm môi trường. Quá trình chuyển hóa năng
lượng trong tảo hấp thụ một lượng lớn CO2. Mỗi kg sinh khối tảo tiêu thụ 1,8 kg
CO2 trong quá trình quang hợp. Có thể thấy, dầu tảo là khám phá có ý nghĩa vô
cùng to lớn bởi thế giới vẫn đang nỗ lực tìm giải pháp thay thế cho các nguồn nhiên
liệu hóa thạch (Minh Thảo, 2014).
Để sử dụng làm thức ăn cho động vật thủy sản, sinh khối vi tảo cùng với môi
trường nuôi cấy được cung cấp trực tiếp vào ao nuôi. Điều này dẫn đến nhiều bất
cập. Thứ nhất, việc vận chuyển hoặc bơm trực tiếp môi trường nuôi chứa sinh khối
vi tảo đến ao nuôi làm tăng chi phí sản xuất, hiệu quả sử dụng thấp. Thứ hai, trong
môi trường nuôi, có thể chứa một số thành phần không có lợi cho sức khỏe của
động vật thủy sản, đặc biệt là ở giai đoạn ấu trùng. Để sản xuất nhiên liệu sinh học
từ vi tảo, hầu hết các phương pháp đòi hỏi phải thu sinh khối, sau đó sấy khô và
ép/chiết. Như vậy, sinh khối vi tảo cần được thu trước khi sử dụng vi tảo làm thức
ăn cho động vật thủy sản, thực phẩm cho con người, cũng như sản xuất nhiên liệu
sinh học.
Tuy nhiên việc tách sinh khối vi tảo ra khỏi môi trường nuôi là một thách
thức lớn về công nghệ và kinh tế. Phần lớn các loài vi tảo có kích thước tế bào nhỏ
từ 1-30 m và nồng độ sinh khối trong môi trường nước nuôi thấp từ 0,5-2,0 g/L
tùy thuộc vào phương pháp nuôi cấy. Hiện nay, một số phương pháp đã được sử
dụng để tách sinh khối vi tảo như: lắng, lọc, ly tâm và sử dụng chất trợ lắng.
3
Phương pháp ly tâm có thể sử dụng thể thu sinh khối của nhiều loài vi tảo khác
nhau. Tuy nhiên, phương pháp này có chi phí năng lượng cao, làm tăng chi phí sản
xuất. Norsker và cộng sự (2011) đã ước tính phương pháp ly tâm có chi phí năng
lượng đầu vào tương đương với khoảng 50% chi phí năng lượng trong quá trình sản
xuất nhiên liệu sinh học từ vi tảo. Chisti (2007) cũng ước tính rằng chi phí của quá
trình thu sinh khối vi tảo để sản xuất dầu diesel chiếm khoảng 50% chi phí sản xuất.
Một nhược điểm khác của phương pháp ly tâm là đòi hỏi nhiều thời gian (Grima và
cộng sự, 2003). Lắng, lọc cũng là phương pháp đã được sử dụng để thu sinh khối vi
tảo. Tuy nhiên, cũng giống như phương pháp ly tâm, phương pháp này có chi phí
cao. Ngoài ra, nhược điểm lớn nhất của phương pháp lắng lọc đó là nó chỉ thích hợp
để thu các loài vi tảo có kích thước lớn như Spirulina (de Godos và cộng sự, 2011).
Sử dụng các chất trợ lắng được cho là phương pháp có hiệu quả cao trong
việc thu sinh khối vi tảo với chi phí vừa phải (de Godos và cộng sự, 2011). Dựa vào
đặc tính hóa học, người ta chia các chất trợ lắng thành hai loại: chất trợ lắng vô cơ
và chất trợ lắng hữu cơ/đa điện phân (polyelectrolyte). Các muối kim loại như ferric
chloride (FeCl3), aluminum sulfate (Al2(SO4)3) và ferric sulfate (Fe2(SO4)3) là những
chất trợ lắng vô cơ được sử dụng phổ biến. Tuy nhiên, các muối kim loại này có giá
thành cao. Khi sử dụng để thu vi tảo chúng tạo thành một lớp cặn trong môi trường
nuôi cấy và sẽ ảnh hưởng xấu đến quá trình phát triển sinh khối vi tảo. Môi trường
nuôi muốn tái sử dụng phải loại bỏ những cation kim loại này. Ngoài ra, các muối
ion kim loại còn được chứng minh ảnh hưởng xấu đến sức khỏe của người và động
vật sử dụng chúng (Huang và cộng sự, 2000) và làm giảm pH của môi trường đáng
kể.
Chitosan là một polyme sinh học, thân thiện với môi trường, an toàn cho
người sử dụng. Chitosan có nhiều ứng dụng trong ngành dược phẩm và thực phẩm.
Gần đây, chitosan cũng được sử dụng để làm chất trợ lắng trong xử lý nước thải do
có khối lượng phân tử lớn và mật độ điện tích cao. Chitosan có các nhóm mang điện
tích dương (NH3+ và NH2) có khả năng hấp thu những vi sinh vật tích điện âm,
trong đó có vi tảo. Với những đặc điểm này, chitosan được xem là chất trợ lắng
4
tiềm năng có thể sử dụng để thu sinh khối vi tảo, giúp giảm chi phí và nâng cao chất
lượng của sinh khối thu được. Trên thế giới đã có một số nghiên cứu sử dụng
chitosan để thu sinh khối vi tảo: Xu và cộng sự (2012) đã dùng chitosan để thu sinh
khối Chlorella sorokiniana, Farid và cộng sự (2012) đã dùng nano-chitosan để thu
sinh khối vi tảo Nannochloropsis sp… Tuy nhiên cho tới nay chưa có bất cứ công
trình nghiên cứu nào công bố về việc sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo
Thlassiosira pseudonana. T. pseudonana là một loại vi tảo được nuôi nhiều tại Việt
Nam để dùng làm thức ăn cho tôm ở giai đoạn ấu trùng. Hàm lượng một số chất
dinh dưỡng cơ bản trong loài vi tảo này đã được công bố, tuy nhiên dữ liệu về các
hoạt chất sinh học như các hợp chất polyphenol, chlorophyll, carotenoid và khả
năng chống oxy hóa trong loài vi tảo này vẫn còn rất hạn chế.
Xuất phát từ những lý do trên tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu sử dụng
chitosan để thu nhận sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana và đánh giá
khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo thu được”.
2.
Mục tiêu của đề tài
(1) Xác định điều kiện thích hợp để thu nhận sinh khối vi tảo Thalassiosira
pseudonana bằng chitosan;
(2) Xác định hàm lượng polyphenol, carotenoid, chlorophyll và đánh giá hoạt
tính chống oxy hóa của sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana thu
được bằng chitosan.
3. Nội dung nghiên cứu
Ðể thực hiện các mục tiêu nghiên cứu trên, đề tài thực hiện những nội dung
sau đây:
Mục tiêu 1: Xác định điều kiện thích hợp để thu nhận sinh khối vi tảo
Thalassiosira pseudonana bằng chitosan
1.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của loại chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh
khối;
1.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi sinh khối;
1.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ chitosan;
5
1.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian lắng.
Mục tiêu 2: Xác định hàm lượng polyphenol, carotenoid, chlorophyll và đánh
giá hoạt tính chống oxy hóa của sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana
thu được bằng chitosan.
2.1. Xác định hàm lượng polyphenol;
2.2. Xác định hàm lượng chlorophyll;
2.3. Xác định hàm lượng carotenoid tổng số;
2.4. Xác định khả năng khả năng bắt gốc tự do DPPH;
2.5. Xác định tổng năng lực khử của sinh khối vi tảo thu được.
4. Những đóng góp của đề tài
4.1. Ý nghĩa khoa học
Kết quả nghiên cứu của đề tài sẽ bổ sung dữ liệu khoa học về việc sử dụng
chitosan để thu sinh khối vi tảo nuôi trồng ở Việt Nam. Kết quả cũng cung cấp dữ
liệu khoa học về thành phần, hàm lượng một số chất có hoạt tính sinh học và khả
năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana thu bằng
chitosan.
4.2. Ý nghĩa thực tiễn
- Sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo sẽ giúp giảm chi phí và nâng cao
chất lượng sinh khối, do đó đề tài thành công sẽ góp phần nâng cao hiệu quả kinh tế
của cơ sở nuôi thủy sản sử dụng loài vi tảo này làm thức ăn, nâng cao giá trị kinh tế
cho loài vi tảo Thalassiosira pseudonana;
- Kết quả của đề tài cũng là cơ sở để sản xuất một số sản phẩm thực phẩm
chức năng (nước uống, viên nang) từ sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana.
6
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN
Vi tảo (microalgae) là tất cả các tảo có kích thước hiển vi, là thành phần chủ
yếu tạo nên năng suất sơ cấp của thủy vực và giữ vai trò quan trọng trong việc duy
trì sự phát triển của hệ sinh thái nước (Dương Đức Tiến, 2006). Muốn quan sát
chúng phải sử dụng tới kính hiển vi. Trong số khoảng 50.000 loài tảo trên thế giới
thì vi tảo chiếm đến khoảng 2/3.
1.1. Tổng quan về vi tảo Thalassiosira pseudonana
1.1.1. Phân loại
Vi tảo Thalassiosira pseudonana thuộc:
Ngành: Bacillariophyta
Lớp: Bacillariophyceae
Bộ: Centrales
Bộ phụ: Discineae
Họ: Thalassiosiraceae
Giống: Thalasssiosira
Loài: Thalassiosira pseudonana
1.1.2. Đặc điểm hình thái cấu tạo của Thalassiosira pseudonana
Thalassiosira pseudonana là một loại tảo khuê có dạng hình hộp, rất mỏng,
có kích thước trung bình từ 6-20 x 8-15 µm (vào mùa đông kích thước lớn hơn vào
mùa hè). Mặt vỏ hình chữ nhật và đường kính dài hơn trục vỏ tế bào. Đai vỏ không
đều, mép đai có 2-28 mấu nhỏ, một mấu có dạng hình môi để liên kết với tế bào bên
cạnh. Thường thì chỉ có duy nhất một gai ở mép và ở trung tâm. Gai ở mép có thể
dễ dàng nhìn thấy được khi quan sát trên kính hiển vi. Bề mặt của màng tế bào tảo
tròn nhiều vằn, sọc. Các vằn, sọc này có thể thẳng hoặc ngoằn ngoèo, mật độ vằn
sọc khoảng 10-20 vằn sọc/10 µm. Tế bào Thalassiosira pseudonana chỉ có một
nhân, hình cầu. Thalassiosira pseudonana thường sống đơn độc, đôi khi liên kết với
nhau thành tập đoàn (dạng bản). Có hai hình thức: các tế bào tập hợp với nhau
thành từng nhóm hoặc mắt xích giữa các tế bào (dạng chuỗi). Nếu nó kết hợp với
7
nhau thành từng nhóm thì được liên kết với nhau bằng sợi kitin nhỏ, còn ở dạng
chuỗi các tế bào xoắn chuỗi với nhau qua bề mặt màng tế bào. Màu của tảo
Thalassiosira pseudonana thay đổi từ màu nâu đến màu xanh hoặc màu vàng tùy
thuộc vào số lượng của diệp lục. Tuy nhiên, màu sắc này thay đổi không ảnh
hưởng đến chất lượng của tảo. Thể sắc tố của tảo Thalassiosira pseudonana nhỏ,
nhiều và có hình hạt (Hình 1.1).
Thalassiosira pseudonana là loại tảo giàu dinh dưỡng, đặc biệt là các axit
béo không no, carbohydrate, protein… cộng với kích thước siêu vi của nó nên rất
phù hợp với các trại sản xuất cá biển (làm thức ăn cho copepoda), các trại sản xuất
nhuyễn thể (trong giai đoạn nhuyễn thể có kích thước 200 µm trở lên) và các trại
sản xuất tôm giống từ giai đoạn mysis đến giai đoạn postlarvae. Nó làm tăng tỷ lệ
sống và khả năng tăng trưởng của các đối tượng trên.
Hình 1.1. Vi tảo Thalassiosira pseudonana
1.1.3. Phân bố
Tảo silic phân bố rất rộng trong môi trường nước mặn, lợ, ngọt. Cũng gặp
trên đất đá, trong các thủy vực chúng có thể sống trôi nổi hoặc ở đáy. Số lượng loài
ở đáy nhiều hơn nhưng số lượng cá thể và sinh khối lại ít hơn so với các loài sống
trôi nổi. Ở các biển lạnh tảo silic phân bố nhiều hơn biển ấm. Trong những hồ nước
ngọt trong suốt chúng có thể phân bố ở độ sâu 50-60m còn trong nước biển khoảng
100-350m. Riêng tảo Thalassiosira pseudonana thường sống trong môi trường
nước mặn. Chúng được nuôi để làm thức ăn cho nhiều ấu trùng động vật hải sản
sống đáy như bào ngư, ốc hương...
8
1.1.4. Thành phần dinh dưỡng của Thalassiosira pseudonana
Protein, lipit, carbohydrate là những thành phần chủ yếu cấu tạo nên tế bào vi
tảo. Những chất này chiếm 90-95% khối lượng khô tế bào, 5-10% khối lượng chất
khô còn lại bao gồm các vitamin, sắc tố, các chất chống oxy hóa… Thành phần dinh
dưỡng của vi tảo Thalassiosira pseudonana biến đổi theo thời gian sinh trưởng và
điều kiện nuôi trồng.
1.1.4.1. Protein
Hàm lượng protein trong mỗi tế bào vi tảo được coi là một trong những yếu tố
quyết định giá trị dinh dưỡng của vi tảo. Theo một nghiên cứu của Brown và cộng sự
(1997), trong tảo đơn bào hàm lượng protein dao động từ 6-52%; carbohydrate từ 523% và lipit từ 7-23% khối lượng chất khô. Cũng theo Volkman và cộng sự (1989),
hàm lượng protein tổng số ở vi tảo Thalassiosira pseudonana là 17,8%.
1.1.4.2. Lipit
Trong lipit thì thành phần và hàm lượng các axit béo đóng vai trò quyết định
giá trị dinh dưỡng của vi tảo.
Các axit béo chưa no (PUFA), đặc biệt là axit Eicosapentaenoic (EPA), axit
Arachidonic (ARA) và axit Docosahexaenoic (DHA) giữ vai trò quan trọng trong
việc đánh giá chất lượng của vi tảo trong việc ứng dụng làm thức ăn cho người và
động vật. Các axit béo chưa no là thành phần cần thiết cho sự phát triển bình
thường, khỏe mạnh của hệ thần kinh, tim mạch. Axit Docosahecxaenoic (DHA),
Axit Eicosapentaenoic (EPA), Axit Arachidonic (ARA) rất cần thiết đối với động
vật nuôi thủy sản (McEvoy và Bell, 1997; Brown và cộng sự, 1997; Vilchis và
Doktor, 2001).
Vi tảo được coi là có giá trị dinh dưỡng tốt cho các đối tượng nuôi nếu hàm
lượng PUFA (DHA, EPA) dao động từ 1-20 mg/ml tế bào (Thinh, 1999). Theo một
nghiên cứu của Brown và cộng sự (1989), hàm lượng axit béo không no (EPA +
DHA) của Thalassiosira pseudonana là 7,2 mg/ml tế bào. Tuy hàm lượng này thấp
hơn so với Chaetoceros calcitrans (17,8 mg/ml tế bào) và Pavlova lutheri (10,1
9
mg/ml tế bào), nhưng Thalassiosira sp. vẫn là nguồn thức ăn tự nhiên giàu dinh
dưỡng cho ngành nuôi trồng thủy sản.
1.1.4.3. Carbohydrate
Theo Brown và cộng sự (1991), hàm lượng hydrocarbon của các loài tảo khá
cao, dao động 5-23% khối lượng khô tế bào. Ở tảo Thalassiosira, hàm lượng
hydrocarbon chiếm 7,8% khối lượng chất khô. Hydrocarbon ở tảo tồn tại chủ yếu ở
các dạng đường glucose, galactose, mantose, ribose và các polysaccharide khác.
Trong đó, glucose chiếm hàm lượng cao nhất, dao động 21-87%, tiếp theo là
galactose, mantose và ribose.
1.1.4.4. Vitamin
Vi tảo là nguồn cung cấp vitamin quan trọng cho các đối tượng thủy sản nuôi. Vi
tảo giàu nguồn vitamin và khoáng chất, điều này giúp chúng được ứng dụng như
một chất dinh dưỡng bổ sung vào thực phẩm. Một số loài Chlorella chứa nhiều
vitamin hơn hầu hết các loài thực vật trên cạn (Blazencic, 2007). Những loại
vitamin chính thường gặp trong tảo nuôi gồm: Thiamin (B1), Riboflavin (B2),
Pyridoxin (B6), Cyanocobalamin (B12), axit Ascorbic (C), axit Nicotinic (B3), axit
Pantothenic (B5), Tocopherol (E), Caroten (Provitamin A), Choline.
1.1.4.5. Sắc tố
Chlorophyll xanh lục và carotenoid vàng, đỏ, cam là những chất màu chủ yếu
trong các loài tảo. Mỗi loài tảo có chứa từ 5-10 loại carotenoid khác nhau.
Chlorophyll a là thành phần sắc tố quang hợp chính trong các loài tảo, ngoài ra còn
có chlorophyll b và chlorophyll c. Trong tế bào tảo, carotenoid đóng vai trò như sắc
tố bổ trợ quang hợp và là tác nhân bảo vệ tế bào tảo tránh khỏi tác hại của cường độ
ánh sáng quá cao.
1.1.4.6. Chất chống oxy hóa
Nhiều hợp chất chống oxy hóa được tìm thấy trong các loài vi tảo như các
hợp chất polyphenol, các phycobiliprotein và các vitamin (Plaza và cộng sự, 2008).
Phenolics, flavonoids, astaxanthin, anthocyanins, carotenoids, chlorophyll, vitamin
E, vitamin C… là những hợp chất chống oxy hóa được tìm thấy trong vi tảo. Với
10
thành phần chất chống oxy hóa đa dạng, nhiều loại vi tảo đã được ứng dụng trong
thực phẩm chức năng, mỹ phẩm để ngăn ngừa sự lão hóa.
1.1.5. Ứng dụng của Thalassiosira pseudonana
1.1.5.1. Làm thức ăn cho động vật thủy sản
Vi tảo đã được ứng dụng rộng rãi trong ngành nuôi trồng thủy sản để làm thức
ăn cho nhiều loài thủy sản như nhuyễn thể 2 mảnh vỏ, các loài cá, tôm, mực ở giai
đoạn ấu trùng (Brown, 2002). Mặc dù có hàng trăm loài tảo được nghiên cứu để ứng
dụng làm thức ăn nhưng chỉ có rất ít loài được sử dụng cho ngành nuôi trồng, trong đó
có loài Thalassiosira (Brown và cộng sự, 1996; Spolaore và cộng sự, 2006).
Với những đặc tính ưu việt không gây ô nhiễm môi trường, cung cấp đầy đủ
các vitamin, chất khoáng, vi lượng, đặc biệt chứa rất nhiều loại axit béo không no,
tảo Thalassiosira pseudonana nói riêng và tảo đơn đơn bào nói chung ngày càng
được ứng dụng rộng rãi để làm thức ăn trong ngành nuôi trồng thủy sản.
1.1.5.2. Dùng làm nhiên liệu sinh học
Nhiên liệu sinh học là một nguồn năng lượng sạch và thân thiện với môi
trường. Việc sử dụng nhiên liệu sinh học sẽ hạn chế được hiện tượng hiệu ứng nhà
kính và sự nóng lên của Trái đất. Hiện nay, sử dụng nhiên liệu sinh học thay thế cho
các loại nhiên liệu hóa thạch đang ngày càng được quan tâm và ứng dụng, đặc biệt
là ở những nước có nền kinh tế phát triển.
Nhiên liệu sinh học được sản xuất bằng phản ứng chuyển hóa este từ dầu của
nhiều loại cây trồng như hướng dương, đậu nành, cọ và tảo. Vi tảo đã được ứng
dụng rộng rãi trong việc sản xuất nhiên liệu nhờ vào khả năng quang hợp cao, sinh
khối lớn, khả năng phát triển nhanh (Miao và cộng sự, 2004) và đặc biệt vi tảo cho
sản lượng dầu cao hơn 10-20 lần so với các loài thực vật trên cạn (Kaewkannetra và
cộng sự, 2012). Lipit trong vi tảo có khả năng được chuyển đổi thành dầu diesel
sinh học, carbohydrate được chuyển thành ethanol và H2, protein được biến đổi
thành dạng nguyên liệu thô cho công nghệ phân bón sinh học (Raja và cộng sự,
2013).
1.1.5.3. Làm dược phẩm
11
Vi tảo giàu các hợp chất có hoạt tính sinh học nên có thể được dùng để phát
triển dược phẩm và thực phẩm chức năng. Tảo silic đã được ứng dụng trong thuốc
kháng viêm (Dolatabadi và de la Guardia, 2011; Gordon và cộng sự, 2009; Losic và
cộng sự, 2010; Nassif and Livage, 2011).
1.2. Tổng quan về chitosan.
Chitin/chitosan là một polyme sinh học được chiết rút từ nhiều nguồn nguyên
liệu khác nhau: phế liệu thủy sản, vi nấm, vi khuẩn. Tuy nhiên, nguồn nguyên liệu
chính để sản xuất chitin/chitosan là từ phế liệu thủy sản: tôm cua, nang mực… mỗi
nguồn nguyên liệu khác nhau sẽ cho hàm lượng chitin cũng như tính chất của
chitosan khác nhau. Hình 1.3 mô tả quy trình tổng quát quá trình sản xuất chitosan
từ phế liệu thủy sản.
1.2.1. Cấu trúc hóa học và tính chất của chitosan
1.2.1.1. Cấu trúc hóa học
Chitosan một polysaccharide mạch thẳng, là dẫn xuất đề acetyl hoá của
chitin, trong đó nhóm (–NH2) thay thế nhóm (–COCH3) ở vị trí C(2). Chitosan
được cấu tạo từ các mắt xích D-glucozamin liên kết với nhau bởi các liên kết b-(14)-glicozit, do vậy chitosan có thể gọi là poly b-(1-4)-2-amino-2-deoxi-D-glucozơ
hoặc là poly b-(1-4)-D- glucozamin (cấu trúc III) (Hình 1.2).
Hình 1.2. Cấu trúc của chitosan
Công thức phân tử: (C6H11O4N)n
Trong đó: n nằm trong khoảng 700 ÷ 4.500 (đôi khi đến 6.000).
Phân tử lượng: Mchitosan = (161,07)n
Do chitosan được điều chế từ quá trình khử acetyl hóa chitin nên khối lượng
biểu kiến của nó tùy thuộc vào giá trị của n, phần trăm nhóm acetyl và cả điều kiện
12
điều chế của nó. Cấu trúc của chitosan là một tập hợp các phân tử liên kết với nhau
bởi các cầu nối glucozit và hình thành một mạng các sợi có tổ chức. Chitin, chitosan
là polysaccharide có đạm, không độc hại, có khối lượng phân tử lớn. Các tính chất
của chitosan như khả năng kết dính, khả năng tạo màng, tạo gel, hấp phụ chất màu,
kim loại, khả năng kháng vi sinh vật được quyết định bởi cấu trúc hóa học của
chitosan như phân tử lượng, độ deacetyl.
Phế liệu thủy sản
Khử protein
Khử khoáng
Tẩy màu
Chitin
Deacetyl
Chitosan
Hình 1.3. Sơ đồ tổng quát quá trình sản xuất chitin, chitosan từ phế liệu
thủy sản
1.2.1.2. Tính chất của chitosan
Chitosan là một polymer hữu cơ, có nhiều trong vỏ các loại giáp xác. Ðây là
polyme hữu cơ phổ biến trong tự nhiên sau cellulose, được ước tính 100 tỉ tấn/năm.
Chitosan đã được nghiên cứu và ứng dụng khá nhiều, nhất là vào khoảng thời gian
từ 1975-1985. Nó có những đặc tính ưu việt mà các polyme tổng hợp khác không có
như: khả năng phân huỷ, dễ tương thích, không độc hại và các đặc tính lý học, sinh
13
học như: khả năng tạo gel, liên kết với các chất màu, lipit, protein và khả năng
kháng khuẩn (Knorr, 1983; Hirano,1996; Ng 2000).
Không giống như chitin chỉ tan trong một số ít hệ dung môi, chitosan tan tốt
trong các axit hữu cơ thông thường như axit formic, axit acetic, axit citric, axit
lacic. Khi hòa tan chitosan trong môi trường axit loãng chitosan tồn tại ở dạng điện
tích (+) nên có những đặc tính khác biệt với các polysaccharide khác thường vốn ở
dạng trung tính hoặc ở điện tích âm. Chitosan dương tính có khả năng kết hợp với các
chất rắn hữu cơ hay bề mặt tế bào, là những chất có ion âm. Ðây là cơ sở để ứng dụng
chitosan trong việc kết hợp với các chất béo để chế tạo sản phẩm làm giảm cân, băng
dán mỹ phẩm vào da hay tóc và kết hợp với kim loại nặng và hoá chất màu.
Các tính chất của chitosan như khả năng hút nước, khả năng hấp phụ chất
màu, kim loại, kết dính với chất béo, khả năng kháng khuẩn, kháng nấm, khả năng
tạo màng… phụ thuộc rất lớn vào độ deacetyl hóa. Chitosan có độ deacetyl cao thì
có khả năng hấp phụ chất màu, kim loại cũng như khả năng kháng khuẩn, kháng
nấm, tạo màng cao hơn so với các mẫu chitosan có độ deacetyl thấp hơn. Ngoài các
tính chất trên thì chitosan còn có khả năng chống oxy hóa. Khả năng chống oxy hóa
của chitosan phụ thuộc vào độ deacetyl, phân tử lượng và độ nhớt của chitosan.
Chitosan có độ nhớt thấp thì khả năng chống oxy hóa cao.
1.2.2. Ứng dụng của chitosan
Do các ưu điểm trên của chitosan nên nó càng được ứng dụng nhiều trong
sản xuất và đời sống.
Trong thực phẩm
Chitosan là một polyme hữu cơ tự nhiên an toàn với những tính chất đặc
trưng như khả năng kháng khuẩn, kháng nấm, chống oxy hóa, tạo màng, tạo gel,
hấp phụ chất màu, khả năng làm trong… nên được ứng dụng nhiều trong công
nghiệp chế biến và bảo quản thực phẩm.
Ứng dụng tạo màng của chitosan trong bảo quản rau, quả
Chitosan có khả năng tạo màng rất tốt. Màng chitosan là một màng bán
thấm, do đó nó có khả năng làm thay đổi thành phần các chất khí trong môi trường
14
bảo quản. Với một nồng độ phù hợp, màng chitosan sẽ tạo ra rào cản, ngăn không
cho oxy tiếp xúc với bề mặt rau quả nên sẽ hạn chế được quá trình biến nâu của
quả; đồng thời hàm lượng CO2 bên trong màng tăng lên sẽ ức chế quá trình hô hấp,
giúp hạn chế quá trình tổn thất chất khô. Hơn nữa, do màng chitosan có khả năng
kháng khuẩn, kháng nấm nên sẽ giảm hiện tượng hư hỏng do vi sinh vật, kéo dài
thời gian bảo quản của rau quả.
Ứng dụng khả năng kháng khuẩn, kháng nấm của chitosan trong quá trình
chế biến, bảo quản thịt, cá
Thịt và các sản phẩm từ thịt rất giàu protein và lipit nên rất dễ bị hư hỏng do
vi sinh vật và quá trình oxy hóa lipit trong quá trình bảo quản. Chitosan có tính
kháng khuẩn và hạn chế quá trình oxy hóa lipit nên được dùng để bảo quản thịt
nhằm hạn chế quá trình hư hỏng của thịt (Kamil và cộng sự, 2002; No và cộng sự,
2002).
Với khả năng chống oxy hóa, tạo màng, kháng khuẩn, chitosan được sử dụng
trong quá trình chế biến và bảo quản các loại cá có chứa nhiều mỡ như cá tra, cá
trích… đặc biệt là các sản phẩm ở dạng fillet. Khả năng chống oxy hóa lipit nhờ vào
khả năng tạo phức với sắt trong thịt cá và khả năng ngăn cản oxy tiếp xúc với bề
mặt cá. Jeon và cộng sự (2002) cho rằng cơ chế chống oxy hóa của chitosan có thể
là do hoạt tính tạo phức với các ion kim loại hoặc do chitosan kết hợp với lipit.
Ứng dụng chitosan trong công nghiệp sản xuất nước quả trong
Trong công nghiệp sản xuất nước quả trong, làm trong là công đoạn quan
trọng, ảnh hưởng đến chất lượng của thành phẩm. Chitosan với đặc tính là một keo
dương trong dung dịch axit loãng, sẽ thể hiện khả năng keo tụ, tạo bông khi kết hợp
với các hợp chất phenol, chất keo và các chất lơ lửng còn lại trong nước quả, làm độ
trong của nước quả tăng lên. Chitosan có ái lực tốt đối với các hợp chất polyphenol
như catechin, proanthocyanidin, axit cinnamic, và các dẫn xuất của chúng (Perlata
và cộng sự, 1989). Ngoài ra, khả năng kháng nấm, kháng khuẩn của chitosan cũng
được ứng dụng trong công nghiệp sản xuất nước quả để ức chế hoạt động gây hư
hỏng của nấm men, nấm mốc. Chitosan sử dụng ở nồng độ 0,3 g/L nước quả có khả
15
năng ức chế hoàn toàn nấm mốc trong nước táo sau 13 ngày bảo quản (Roller và
Covill, 1999; Rhoaades và Roller, 2000).
Ứng dụng khả năng tạo gel của chitosan trong chế biến thực phẩm
Nhờ vào đặc tính kháng khuẩn và tạo gel mà chitosan được ứng dụng trong
quá trình sản xuất đậu phụ để tăng độ bền gel và kéo dài thời gian bảo quản. Bổ
sung 2% chitosan đã làm tăng độ bền gel của đậu phụ (No và Mayers, 2004). Đậu
phụ sử dụng chitosan có thể kéo dài thời gian sử dụng hơn 3 ngày so với đậu phụ sử
dụng CaCl2. Ngoài ra, chitosan cũng được sử dụng như một chất tạo cấu trúc dẻo,
dai cho thực phẩm thay thế cho hàn the.
Ứng dụng của chitosan trong nông nghiệp
Trong nông nghiệp, chitosan được sử dụng để tăng cường sự hoạt động của
các vi sinh vật trong đất, bọc các hạt giống nhằm ngăn ngừa sự tấn công của nấm
trong đất và tăng khả năng nảy mầm của hạt, kích thích hệ miễn dịch, kích thích
sinh trưởng và tăng năng suất thu hoạch.
Mục đích sử dụng chitosan bọc hạt giống để chống nấm và kích thích nảy
mầm đã được thử nghiệm với lúa, đậu nành và nhiều loại hạt giống khác (Agarwal
và Sinclair, 1997; Goulart và cộng sự, 2002). Sau 6 tháng bảo quản, tỉ lệ nảy mầm
của các hạt được bọc chitosan cao nhất, đạt 74% so với tỉ lệ nảy mầm của các hạt
lúc ban đầu là 90-92% (Sawatwanich và cộng sự, 2007).
Chitosan cũng được nghiên cứu thử nghiệm phun lên rau cải (Brassica
campestris spp.) cho năng suất thu hoạch cải tăng lên (Wongroung và cộng sự,
2002). Ðồng thời nó còn có tác dụng cố định phân bón, thuốc trừ sâu, tăng cường
khả năng nảy mầm của hạt. Qua nghiên cứu ảnh hưởng của chitosan và các nguyên
tố vi lượng lên một số chỉ tiêu sinh lý-sinh hoá của mạ lúa ở nhiệt độ thấp, kết quả
cho thấy chitosan vi lượng làm tăng hàm lượng diệp lục tổng số và hàm lượng nitơ,
đồng thời các enzyme như amylase, catalase, peroxidase cũng tăng lên và chitosan
còn góp phần cải tạo đất khô cằn, bạc màu, giữ ẩm cho cây trồng.
Trong thủy sản
16
Chitosan được nghiên cứu ứng dụng nhiều nhiều trong lĩnh vực nuôi trồng
thủy sản. Chitin và chitosan được nghiên cứu bổ sung vào thức ăn cho tôm, cá để
kích thích sinh trưởng, tăng miễn dịch và cải thiện môi trường ao nuôi (Anderson và
Siwicki, 1994; Wanichpongpan và Chandrkrachang, 2002). Ngoài ra, chitosan cũng
được ứng dụng làm màng bao, chất kết dính để tăng độ ổn định của thức ăn tôm
trong ao nuôi (Trung và Phượng, 2005; Phượng và cộng sự, 2008). Việc nghiên cứu
sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo làm thức ăn cho ngành nuôi trồng thủy sản
cũng được nghiên cứu và ứng dụng ở nhiều nước trên thế giới.
Trong y học
Chitosan đã được ứng dụng trong y học như: chỉ khâu tự tiêu, chất đông
máu, làm lành vết thương, da nhân tạo và một số ứng dụng còn đang nghiên cứu
như: tác động kích thích miễn dịch chống sự phát triển khối u, đặc tính làm giảm
cholesterol, hay nghiên cứu làm thuốc chữa bệnh viêm loét dạ dày, tá tràng… Ngoài
ra chitosan còn được dùng để cố định tế bào Saccharomyces cerevisiae để lên men,
được bổ sung vào làm nguyên liệu sản xuất giấy, thay hồ tinh bột để hồ vải giúp sợi
bền mịn, bóng đẹp, cố định hình in, kết hợp với một số thành phần khác để sản xuất
vải chịu nhiệt, vải chống thấm.
Trong công nghiệp xử lý nước thải
Chitosan được ứng dụng để loại bỏ các ion kim loại nặng trong nước thải
như đồng, chì, thủy ngân, crôm.. nhờ các nhóm amin của chitosan có ái lực mạnh và
có khả năng tạo phức với các ion kim loại nặng (Knorr, 1983; Kurita và cộng sự,
1986; Kim và cộng sự, 1997; Varma và cộng sự, 2004).
Trong ngành chế biến thủy sản, xử lí nước thải là một vấn đề cấp thiết. Tận
dụng khả năng tạo kết tủa, tạo bông tốt của chitosan để tận thu protein từ dịch thải
máu cá, nước rửa surimi… nhằm sản xuất các sản phẩm giá trị gia tăng và giảm bớt
chi phí xử lí nước thải. Ngoài ra, chitosan còn được sử dụng để xử lý chất màu của
nước thải từ các nhà máy dệt may nhờ vào khả năng hấp thụ chất màu.
1.2.3.
Nguyên lý sử dụng chitosan thu sinh khối vi tảo và ứng dụng trong xử
lý nước thải
17
Các chất hữu cơ trong nước thải cũng như tế bào vi tảo trong môi trường
nuôi thường tồn tại ở dạng keo và bền. Chitosan là một polyme dương tự nhiên, trên
phân tử có nhiều nhóm NH3+. Các chất hữu cơ nói chung và vi tảo là những phần tử
mang điện âm. Ứng dụng chitosan trong công nghiệp xử lí nước thải và thu sinh
khối vi tảo dựa vào lực tương tác tĩnh điện giữa phân tử chitosan và các hợp chất
hữu cơ mang điện âm. Khi chitosan tiếp xúc với các chất hữu cơ tích điện âm sẽ tạo
thành những khối có kích thước lớn hơn và lắng xuống nhờ trọng lực.
1.3. Một số phương pháp thu sinh khối vi tảo
Hiện nay sinh khối vi tảo có thể được thu hoạch bằng một số phương pháp
như: lắng, ly tâm, lọc và sử dụng chất keo tụ (trợ lắng), hoặc kết hợp của những
phương pháp này.
1.3.1. Phương pháp lắng
Trong phương pháp lắng, lực hấp dẫn khiến các hạt chất lỏng hoặc rắn tách
từ chất lỏng có mật độ khác nhau, nhưng quá trình này có thể rất chậm, nhất là khi
sự khác biệt mật độ hoặc kích thước hạt nhỏ (Heaven, 2013). Việc làm lắng đọng vi
tảo là khác nhau giữa các loài, nhưng cũng có thể biến đổi trong cùng một loài. Mức
lắng đọng có thể phụ thuộc vào cường độ ánh sáng (Waite và cộng sự, 1992). Theo
Bienfang (1981), sự thiếu hụt về dinh dưỡng có thể làm giảm tỷ lệ lắng tụ. Quá
trình lắng còn ảnh hưởng bởi độ tuổi của tế bào, tỉ lệ tế bào lắng sẽ tăng lên đối với
các tế bào già đặc biệt là tế bào lão hóa (Smayda, 1970). Tốc độ lắng của vi tảo có
kích thước nhỏ trong khoảng 4-5 m trong là không đáng kể (Waite và cộng sự,
1992). Mặc dù có một số ưu điểm, nhưng tới nay phương pháp lắng chưa được sử
dụng rộng rãi để thu vi tảo (Uduman và cộng sự, 2010).
1.3.2. Phương pháp ly tâm
Phương pháp ly tâm có thể sử dụng để thu hầu hết các loài vi tảo (Mohn,
1988). Tuy nhiên, nhược điểm lớn nhất của phương pháp này là có chi phí cao.
Gudin và Thepenier (1986) ước tính rằng chi phí của quá trình phục hồi có thể
chiếm từ 20-30% tổng chi phí sản xuất sinh khối. Chisti (2007) báo cáo rằng chi phí
của quá trình thu sinh khối vi tảo chiếm tới 50% chi phí cuối cùng của sản xuất dầu
18
diesel. Hơn nữa, Norsker và cộng sự (2011) tính toán rằng phương pháp ly tâm đòi
hỏi một năng lượng đầu vào tương đương với khoảng 50% năng lượng có sẵn trong
sinh khối vi tảo thu được. Ngoài ra, quá trình ly tâm có thể gây vỡ tế bào làm ảnh
hưởng đến chất lượng của sinh khối vi tảo thu được.
1.3.3. Phương pháp lọc
Nhiều loại bộ lọc đã được sử dụng để thu hoạch tảo và phương pháp lọc đã
được phát hiện thỏa đáng việc khôi phục tế bào tảo tương đối lớn (Molina Grima và
cộng sự, 2003); nhưng cũng có thể bị cản trở bởi băng thông thấp và tắc nghẽn
nhanh chóng (Mohn, 1988; Oswald, 1988). Mặc dù có một loạt các thiết kế bộ lọc,
bộ lọc màng có thể được chỉ đơn giản là phân loại theo các lỗ hoặc lớp màng kích
thước; lọc vĩ mô > 10 m, vi lọc 0,1-10,0 m, siêu lọc 0,02-0,20 m và thẩm thấu
ngược < 0,001 m. Và do đó áp lực để buộc chất lỏng thông qua một lớp màng,
năng lượng hoạt động cần thiết, thường sẽ tăng lên cùng với việc giảm kích thước lỗ
màng, vì phạm vi kích thước của vi tảo thường là giữa 2 và 30 m (Brennan và
Owende, 2010; Molina Grima và cộng sự, 2003). Phương pháp siêu lọc là một lựa
chọn tốt cho sự phục hồi, đặc biệt là các tế bào rất mỏng manh, nhưng vẫn chưa
được sử dụng đối với vi tảo (Mata và cộng sự 2010; Molina Grima và cộng sự,
2003), chi phí vận hành và phí bảo trì rất cao (Mata và cộng sự, 2010). Chất hữu cơ
ngoại bào được ghi nhận là dẫn đến tắc nghẽn nhanh chóng của các màng siêu lọc
trong phương pháp lọc của Spirulina (Rossi và cộng sự, 2004).
1.3.4. Phương pháp keo tụ
Phương pháp keo tụ thường được sử dụng cùng với các phương pháp thu hoạch
khác (Brennan và Owende, 2010). Trong phương pháp này, các tế bào tảo kết hợp
với nhau làm tăng kích thước, qua đó giúp tăng tỉ lệ lắng đọng hoặc tuyển nổi (Mata
và cộng sự, 2010). Phương pháp keo tụ được xem là một phương pháp ưu việt hơn
các phương pháp khác vì phạm vi áp dụng rộng rãi, nó có thể sử dụng để thu các vi
tảo có kích thước khác nhau (Uduman và cộng sự, 2010). Phương pháp này cũng
được chứng minh là phương pháp có chi phí phù hợp để thu vi tảo (Benemann và
cộng sự, 1980). Quá trình keo tụ có thể xảy ra một cách tự nhiên ở một số vi tảo,
19
được gọi quá trình tự động tạo bông, vi tảo có thể tập hợp thành từng cục để đáp
ứng với áp lực môi trường thay đổi về nitơ, pH và oxy hòa tan (Schenk và cộng sự,
2008; Uduman và cộng sự, 2010). Tuy nhiên, phương pháp keo tụ thường sử dụng
các hóa chất có khả năng trợ lắng. Các chất trợ lắng phổ biến nhất được sử dụng
trong thu hoạch vi tảo là sắt clorua (FeCl3), nhôm sunfat (Al2(SO4)3) và sắt sunfat
(Fe2(SO4)3) (Brennan và Owende, 2010). Ngoài ra, vôi (calcium hydroxide, CaCO3)
cũng được sử dụng để loại bỏ chất rắn lơ lửng và vi tảo từ nước thải từ những năm
1920 (Oswald, 1988). Muối kim loại đa hoá trị, sắt clorua, sắt sulfat và nhôm clorua
(phèn) thường được sử dụng trong xử lý nước thải để loại bỏ tảo đã cho thấy hiệu
quả trong việc làm kết bông cả Chlorella và Scenedesmus (Molina Grima và cộng
sự, 2003). Ở điều kiện kết lắng tối ưu về hàm lượng, độ pH và chất lượng nước sau
xử lý bùn, muối sắt cho hiệu quả kết lắng thấp hơn so với phèn trong sự kết bông vi
tảo (Shelef và cộng sự, 1984). Chất kết bông vô cơ được chứng mình là có thể có
ảnh hưởng xấu đến chất lượng vi tảo thu được về khả màu sắc, khả năng sinh trưởng
(Molina Grima và cộng sự 2003; Papazi và cộng sự 2010; Schenk và cộng sự, 2008).
Chitosan, một polyme hữu cơ cation, có nguồn gốc từ vỏ giáp xác đã được sử dụng
trong xử lý nước thải đối với ngành công nghiệp thực phẩm (Harith và cộng sự, 2009).
Chitosan đã được chứng minh là có hiệu quả trên một loạt các vi tảo nước ngọt (Harith
và cộng sự, 2009; Molina Grima và cộng sự, 2003).
Hiện nay các phương pháp trên đều có thể được sử dụng để thu sinh khối vi tảo,
tuy nhiên mỗi phương pháp đều có những hạn chế nhất định:
- Phương pháp lọc, ly tâm đòi hỏi chi phí đầu tư cao, mặt khác còn ảnh hưởng
đến chất lượng sinh khối vi tảo thu được (các chất dinh dưỡng, chất có hoạt tính
sinh học bị thất thoát do quá trình ly tâm làm phá vỡ tế bào).
- Sử dụng các muối kim loại nặng: các kim loại nặng tồn tại trong sinh khối
sau khi thu hoạch sẽ khó ứng dụng làm thức ăn cho động vật, do đó khả năng ứng
dụng bị hạn chế.
Do đó, việc sử dụng chitosan-một polyme sinh học an toàn, thân thiện với
môi trường để thu sinh khối là điều rất cần thiết.
20
1.4. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về thu sinh khối vi tảo
1.4.1. Tình hình nghiên cứu trong nước
Ở Việt Nam, chitosan đã được nghiên cứu trong lĩnh vực xử lý nước thải,
nhưng những thông tin liên quan đến việc ứng dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo,
trong đó có loài Thalassiosira pseudonana, còn rất hạn chế.
1.4.2. Tình hình nghiên cứu ngoài nước
Harith và cộng sự (2009) đã nghiên cứu sử dụng các chất trợ keo tụ khác
nhau bao gồm chitosan và hệ chất đa điện phân (polyelectrolytes) thương mại
Magnafloc (LT 25 và LT 27), trong việc thu sinh khối vi tảo Chaetoceros calcitrans.
Kết quả cho thấy hiệu quả thu hồi sinh khối vi tảo phụ thuộc vào pH của môi trường
và đạt hiệu suất cao nhất ở pH 8,0 (đối với chitosan) và pH 10,2 (đối với LT 25 và LT
27).
Xu và cộng sự (2013) đã sử dụng chitosan như chất trợ keo tụ tự nhiên để thu
sinh khối của vi tảo xanh Chlorella sorokiniana. Kết quả cho thấy trên 99% sinh
khối của vi tảo được kết lắng ở nồng độ chitosan 2 mg/L và pH nhỏ hơn 7. Sơ bộ
đánh giá chi phí tác giả cho rằng sinh khối vi tảo Chlorella sorokiniana thu theo
phương pháp sử dụng chitosan thấp hơn so với phương pháp ly tâm và lọc. Tác giả
ước tính để thu một tấn sinh khối vi tảo bằng chitosan thì chi phí khoảng 200 USD.
Granados và cộng sự (2012) nghiên cứu sử dụng chitosan, một số muối kim
loại và hệ chất đa điện phân để thu sinh khối của một số loài vi tảo nước ngọt
(Chlorella vulgaris, C. fusca, Scenedesmus sp. và S. subspicatus). Tác giả kết luận
rằng hiệu quả thu hồi sinh khối của vi tảo phụ thuộc vào chất trợ keo tụ và nồng độ
sử dụng của chúng.
Salim và cộng sự (2011) lần đầu tiên sử dụng sinh khối của các loài vi tảo có
khả năng trợ keo tụ để keo tụ sinh khối của các loài vi tảo khác. Trong phương pháp
này không cần sử dụng các chất trợ keo tụ hóa học. Theo đó, một số loài vi tảo có khả
năng sử dụng như một chất trợ keo tụ bao gồm Tetraselmis suecica, S. obliquus và
Ankistrodemus falcatus để thu sinh khối của hai loài vi tảo Neocholoris oleobundans
21
và C. vulgaris. Cả ba loài vi tảo sử dụng đều có thể sử dụng như là chất trợ keo tụ.
Trong phương pháp này không cần sử dụng các chất trợ keo tụ hóa học.
So sánh hiệu quả thu sinh khối vi tảo Nannochloropsis sp. bằng nanochitosan
với chitosan được thực hiện bởi Farid và cộng sự (2013). Theo tác giả, nanochitosan
cho hiệu quả thu sinh khối vi tảo cao hơn chitosan khoảng 9%. Như vậy, kích thước
của chất trợ keo tụ có thể là một trong những yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả trợ lắng
vi tảo.
22
CHƯƠNG 2.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu của đề tài là điều kiện thu sinh khối vi tảo
Thalassiosira pseudonana bằng chitosan và hoạt tính sinh học của sinh khối vi tảo
thu được.
2.2. Vật liệu nghiên cứu
2.2.1. Vi tảo Thalassiosira pseudonana
Vi tảo Thalassiosira pseudonana ở cuối pha tăng trưởng của chu kỳ sinh
trưởng được nuôi trồng tại Công ty Uni President-Ninh Phước, Ninh Thuận.
Vi tảo Thalassiosira pseudonana được nuôi trong môi trường dinh dưỡng
AGP 10%, độ mặn 30‰. Trong quá trình nuôi sục khí 24/24h, nhiệt độ duy trì ở 2632oC, cường độ chiếu sáng 5000 lux, pH được khống chế ở 6,5-7,2. Trong quá trình
nuôi có bổ sung 1 số chất đạm.
2.2.2. Chitosan
2 loại chitosan được sử dụng trong đề tài có độ deacetyl 70 và 85 (DD70 và
DD85) được sản xuất từ đầu và vỏ tôm thẻ chân trắng Litopenaeus vannamei tại
công ty Longshin-khu công nghiệp Suối Dầu-Cam Lâm-Khánh Hòa.
2.3. Hóa chất
Hóa chất sử dụng trong nghiên cứu là các hóa chất đạt hạng phân tích bao
gồm: axit acetic, NaOH, HCl, chitosan (DD70, DD85), nước cất, ethanol, 1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), Na2CO3, thuốc thử Folin-Ciocalteu, axit gallic,
giấy quỳ, K3(Fe[CN]6), FeCl3, axit trichloracetic (TCA) và vitamin C.
2.4. Dụng cụ và thiết bị
Các thiết bị được sử dụng cho nghiên cứu bao gồm:
- Máy ly tâm lạnh
- Máy quang phổ UV-VIS
- Tủ sấy
23
- Bể ổn nhiệt
- Máy đồng hóa
- Cân phân tích
- Máy lắc
Các dụng cụ thí nghiệm khác như: cuvet, cốc thủy tinh, đũa thủy tinh, ống
nghiệm, ống đong, cân phân tích, giấy quỳ,…
2.5. Phương pháp nghiên cứu
2.5.1. Xác định hàm lượng ẩm
Hàm lượng ẩm của vi tảo được xác định bằng phương pháp sấy ở 105oC.
2.5.2. Xác định điều kiện thu sinh khối vi tảo
Điều kiện thu sinh khối được xác định thông qua việc đánh giá hiệu suất kết bông
tế bào vi tảo (Flocculation efficiency, FE), hệ số tập trung nồng độ (Concentration factor,
CF), tỉ lệ theo thể tích phần chất rắn lắng được (Settleable solid volume fraction, SSVF)
(Sirin, 2013) (Hình 2.1).
Hiệu suất lắng của vi tảo được xác định bằng cách đo mật độ quang học tế
bào tảo trước khi keo tụ và mật độ quang học của phần chất lỏng sau khi keo tụ.
Mật độ quang học (Optical desity OD) được đọc bằng máy quang phổ theo phương
pháp của Lee và cộng sự (1998).
Mật độ quang học của vi tảo Thalassiosira pseudonana được đo bằng máy
quang phổ ở bước sóng 450 nm.
Hiệu suất lắng được tính bằng công thức:
Hiệu suất lắng (%) = (ODđ – ODs)/ODđ x100
ODđ : mật độ quang học của dung dịch tảo trước khi keo tụ
ODs : mật độ quang học của phần nước trong sau khi keo tụ
Hệ số tập trung nồng độ (CF) được tính bằng công thức:
Hệ số tập trung nồng độ (CF) = (h0/hf) x hiệu suất lắng (Lee và cộng sự, 2009).
Tỉ lệ theo thể phần chất rắn lắng được (SSVF) được tính bằng công thức:
Tỉ lệ theo thể phần chất rắn lắng được (SSVF) = (hf/h0) (Graves và cộng sự,
1979).
24
Hình 2.1. Cách xác định chiều cao cột lắng
2.5.3. Xác định hàm lượng các chất có hoạt tính sinh học
2.5.3.1. Chuẩn bị dịch chiết
2 g vi tảo tươi (đã tách bớt nước) được chiết bằng 30 ml dung dịch ethanol
95% và được đồng hóa. Hỗn hợp được đem đi ly tâm lạnh với tốc độ 10.000 vòng,
trong 10 phút ở 4oC để chuẩn bị cho các test thử.
2.5.3.2. Xác định hàm lượng carotenoid tổng số và chlorophyll
Các hợp chất có hoạt tính sinh học trong tế bào vi tảo Thalassiosira
pseudonana như chlorophyll a, chlorophyll b, carotenoid tổng số được xác định
theo phương pháp của Nayek Sumanta và cộng sự (2014). Phần trong của dịch chiết
thu được sau ly tâm lạnh được đem đi đo độ hấp thụ ở các bước sóng 470, 649, 664
nm bằng máy quang phổ kế. Hàm lượng carotenoid tổng số, chlorophyll a và
chlorophyll b được xác định theo công thức sau:
Cha = 13,36A664 – 5,19 A649 (µg/ml).
Chb = 27,43A649 – 8,12 A664 (µg/ml).
Cx+c = (1.000A470 – 2,13Cha – 97,63Chb)/209 (µg/ml).
Trong đó: A: bước sóng
Cha: Chlorophyll a
Chb: Chlorophyll b
25
Cx+c: Carotenoid tổng số
Kết quả trình bày bởi µg/g nguyên liệu khô.
2.5.3.3. Xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Hàm lượng polyphenol được xác định theo phương pháp của Singleton và
cộng sự (1999) với một vài hiệu chỉnh nhỏ. Lấy chính xác 0,1 ml dịch chiết trộn với
0,9 ml nước cất. Sau đó cho thêm 1 ml thuốc thử Folin-Ciocalteu 10% và 2,5 ml
Na2CO3 7,5%. Lắc đều hỗn hợp bằng máy Vortex. Hỗn hợp được trong điều kiện
tối và nhiệt độ phòng trong vòng 30 phút trước khi đo độ hấp thụ quang học ở bước
sóng 760 nm trên máy quang phổ kế (Spectrophotometry, Carry 50, Varian,
Australia). Kết quả được báo cáo bởi mg axit gallic/g nguyên liệu khô.
Kết quả được báo cáo bởi mg axit gallic/g nguyên liệu khô.
2.5.4. Xác định khả năng chống oxy hóa
Khả năng chống oxy hóa của vi tảo được xác định bằng cách xác định khả
năng khử gốc tự do DDPH và năng lực khử của dịch chiết tế bào.
2.5.4.1. Xác định khả năng khử gốc tự do DDPH
Xác định khả năng khử gốc tự do DPPH là phương pháp được sử dụng rộng rãi
để đánh giá khả năng khử gốc tự do của các mẫu khác nhau (Lee và cộng sự, 2003).
Phương pháp bắt gốc tự do 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) được phát
minh bởi Blois (1958) 19. DPPH là một gốc tự do bền, có màu tía và có độ hấp
thu cực đại ở bước sóng 517 nm. Khi có mặt chất chống oxy hóa, nó sẽ bị khử thành
2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazine (DPPH-H), có màu vàng (hình 1.2). Đo độ giảm độ
hấp thu ở bước sóng 517 nm để xác định khả năng khử gốc DPPH của chất chống
oxy hóa.
26
2.5.4.2. Xác định tổng năng lực khử
Năng lực khử của một chất là khả năng chất đó cho điện tử khi tham gia vào
phản ứng oxi hóa khử. Khi xác định năng lực khử ta cũng xác định được năng lực
kháng oxy hóa của một chất. Tổng năng lực khử được xác định theophương pháp
của Oyaizu (1986) với một vài hiệu chỉnh nhỏ.
Nguyên tắc xác định hoạt tính chống oxy hóa của phương pháp này là dựa
trên khả năng của các chất chống oxy hoá trong việc khử phức K3Fe(CN)6 thành
phức K4Fe(CN)6, phức này tác dụng với FeCl3 thành KFe[Fe(CN)6] (xanh Pruss)
49. Khi đó, độ tăng cường độ màu xanh tỷ lệ với hàm lượng chất chống oxy hóa
có trong nguyên liệu. Mức độ tăng cường độ màu này được đo ở bước sóng 700 nm
trong sự so sánh với chất chuẩn là dung dịch axit ascorbic.
2.6.
Phương pháp bố trí thí nghiệm
2.6.1. Sơ đồ thí nghiệm tổng quát
Vi tảo
Bố trí thí nghiệm xác định các điều
Thu sinh khối
kiện thu sinh khối vi tảo (pH, nồng
bằng chitosan
độ chitosan, thời
gian thu, loại
chitosan).
Kết
quả
và
Sinh khối vi tảo
Bố trí thí nghiệm xác định hàm
thảo
lượng ẩm, hàm lượng chlorophyll a,
luận
chlorophyll b, carotenoid tổng số,
polyphenol tổng số và khả năng
chống oxy hóa của vi tảo.
Hình 2.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát
27
Thuyết minh sơ đồ:
Thí nghiệm được thực hiện trên vi tảo Thalassiosira pseudonana đang ở cuối
pha tăng trưởng của chu kì sinh trưởng của công ty UNI-President-Ninh Thuận.
Thực nghiệm nhằm xác định điều kiện thu cho hiệu suất thu sinh khối vi tảo cao
nhất và đánh giá hoạt tính sinh học của sinh khối thu được.
Hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo (250 ml) được cho vào ống
đong 250 ml rồi tiến hành thử nghiệm xác định điều kiện thu sinh khối.
Từ sinh khối vi tảo thu được tiến hành đánh giá hoạt tính sinh học thông qua
xác định hàm lượng các chất có hoạt tính sinh học, khả năng chống oxy hóa. 2 g
sinh khối vi tảo tươi được chiết bằng 30 ml ethanol 95%, sau đó hỗn hợp dịch chiết
được đưa đi ly tâm lạnh với tốc độ 10.000 vòng trong 10 phút ở 4oC. Phần dịch
trong được thu lại và đưa đi test.
2.6.2. Xác định loại chitosan
Mục đích thí nghiệm: Xác định loại chitosan thích hợp để thu sinh khối vi tảo.
Sơ đồ thí nghiệm:
Hỗn hợp môi trường nuôi và
sinh khối vi tảo
Nhóm 1: Chitosan có độ
deacetyl 70
Nhóm 2: Chitosan có độ
deacetyl 85
Xử lý ở pH 7 (pH môi trường
nuôi) với nồng độ chitosan 10
mg/L trong 10 phút
Xử lý ở pH 7 (pH môi trường
nuôi) với nồng độ chitosan 10
mg/L trong 10 phút
Đo độ đục của hỗn hợp trên
Đo độ đục của hỗn hợp trên
Kết quả và thảo luận
Hình 2.3. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định loại chitosan
28
Thuyết minh sơ đồ: Thí nghiệm được tiến hành trên ống đong 250 ml. Hỗn
hợp gồm môi trường nuôi và sinh khối vi tảo (250 ml) được cho vào ống đong. Sau
đó hỗn hợp được xử lý bằng 2 loại dung dịch chitosan có độ deacetyl khác nhau (70
và 85) ở pH môi trường nuôi, nồng độ chitosan 10 mg/L (theo thể tích hỗn hợp tảo
và môi trường nuôi) để thu sinh khối vi tảo. Hỗn hợp sau đó được khuấy mạnh
trong 30 giây và để ổn định trong 10 phút rồi tiến hành đo độ đục ở bước sóng 450
nm (bước sóng hấp thụ tối đa của hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo
Thalassiosira pseudonana).
2.6.3. Thí nghiệm xác định pH
Mục đích nghiên cứu: Xác định được pH thích hợp để thu sinh khối của vi
tảo.
Sơ đồ thí nghiệm:
Hỗn hợp môi trường nuôi và
sinh khối vi tảo
Thu sinh khối vi tảo bằng dung
dịch chitosan có độ deacetyl 70
tại các pH khác nhau
pH4
pH5
pH6
pH7
pH8
Đo độ đục của hỗn hợp trên
Kết quả và thảo luận
Hình 2.4. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định pH
pH9
29
Thuyết minh sơ đồ: Thí nghiệm được tiến hành trên ống đong 250 ml. Hỗn
hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo (250 ml) được cho vào ống đong. Dung
dịch NaOH 0,1 M và HCl 0,1 M được sử dụng để điều chỉnh pH của môi trường.
Sau đó cho dung dịch chitosan có độ deacetyl thích hợp với nồng độ 10 mg/L vào
hỗn hợp ở các pH khác nhau từ 4 đến 9. Hỗn hợp được khuấy mạnh trong 30 giây
và để ổn định trong 10 phút. Độ đục của hỗn hợp được đo ở bước sóng 450 nm
(bước sóng hấp thụ tối đa của hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo
Thalassiosira pseudonana).
2.6.4. Xác định nồng độ chitosan dùng để thu sinh khối vi tảo
Mục đích thí nghiệm: Xác định nồng độ chitosan thích hợp để thu sinh khối
vi tảo.
Sơ đồ thí nghiệm:
Hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối
vi tảo
Thu sinh khối vi tảo bằng dung dịch
chitosan có độ deacetyl thích hợp với
các nồng độ khác nhau tại pH 6
0,8
1,6
2,4
3,2
4,0
5,2
6,0
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
Đo độ đục của hỗn hợp trên
Kết quả và thảo luận
Hình 2.5. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định nồng độ chitosan
30
Thuyết minh sơ đồ: Thí nghiệm được tiến hành trên ống đong 250 ml. Hỗn
hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo (250 ml) được cho vào ống đong. Dung
dịch NaOH 0,1 M và HCl 0,1 M được sử dụng để điều chỉnh pH của môi trường sau
đó được xử lý bằng dung dịch chitosan có độ deacetyl thích hợp với các nồng độ
khác nhau tại pH thích hợp. Hỗn hợp sau đó được khuấy mạnh trong 30 giây và để
ổn định trong 10 phút. Độ đục của hỗn hợp được đo ở bước sóng 450 nm (bước
sóng hấp thụ tối đa của hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo Thalassiosira
pseudonana).
2.6.5. Thí nghiệm xác định thời gian thu sinh khối vi tảo
Mục đích thí nghiệm: Xác định thời gian thích hợp để thu sinh khối vi tảo.
Sơ đồ thí nghiệm:
Hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi
Thu sinh khối vi tảo bằng chitosan DD70
với nồng độ 4 mg/L, tại pH 6 ở các
khoảng thời gian khác nhau
1
1,5
2,5
5
10
15
20
40
60
phút
phút
phút
phút
phút
phút
phút
phút
phút
Đo độ đục của hỗn hợp trên
Kết quả và thảo luận
Hình 2.6. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định thời gian thu sinh khối vi tảo
31
Thuyết minh sơ đồ: Thí nghiệm được tiến hành trên ống đong 250 ml. Hỗn
hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo (250 ml) được cho vào ống đong. Dung
dịch NaOH 0,1 M và HCl 0,1 M được sử dụng để điều chỉnh pH của môi trường.
Sau đó hỗn hợp được xử lý bằng dung dịch chitosan với nồng độ 4 mg/L, tại pH 6
trong các khoảng thời gian khác nhau từ 0 đến 60 phút. Hỗn hợp được khuấy mạnh
trong 30 giây và tiến hành đo độ đục sau các khoảng thời gian khác nhau ở bước
sóng 450 nm (bước sóng hấp thụ tối đa của hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi
tảo Thalassiosira pseudonana).
2.7. Phương pháp phân tích
2.7.1. Xác định hàm lượng ẩm trong tế bào vi tảo
Mục đích thí nghiệm: Xác định hàm lượng ẩm và hàm lượng chất khô trong
vi tảo.
Cốc sấy được sấy đến khối lượng không đổi (khối lượng giữa hai lần liên tiếp
sai khác không quá 5x10-4 g). Cân chính xác 2 g tảo tươi cho vào cốc sấy. Chuyển cốc
vào tủ sấy, sấy ở nhiệt độ 60C trong 2 giờ. Sau đó, nâng nhiệt độ lên 105C, sấy liên tục
trong 2 giờ. Mang cốc đi cân lại khối lượng. Hàm lượng ẩm được tính theo công thức:
W (%) = [(m1 + mt) – m2]/[(m1 + mt) – m1] x100
Trong đó:
W: hàm lượng ẩm (%)
m1: khốilượng cốc sấy sau khi sấy đến khối lượng không đổi (g)
mt: khối lượng tế bào vi tảo (g)
m2: khối lượng cốc sấy + khối lượng vi tảo sau khi sấy ở 105oC (g)
2.7.2. Xác định hàm lượng carotenoid tổng số, hàm lượng chlorophyll a,
chlorophyll b
Mục đích thí nghiệm: Xác định hàm lượng carotenoid tổng số, hàm lượng
chlorophyll a, chlorophyll b trong tế bào vi tảo.
32
Sơ đồ thí nghiệm:
Sinh khối vi tảo
Chiết trong Ethanol
Ly tâm lạnh
Lọc thu dịch trong
Đo độ hấp thụ
Kết quả
Hình 2.7. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hàm lượng chlorophyll a,
chlorophyll b và carotenoid tổng số
Thuyết minh sơ đồ: Cho 30 ml ethanol 95% vào 2 g tế bào vi tảo tươi, dùng
máy đồng hóa để phá vỡ tế bào vi tảo và trộn đều hỗn hợp, sau đó đem đi ly tâm
lạnh với vận tốc 10.000 vòng, trong 10 phút ở 4oC. Phần dịch trong sau khi lọc được
đo độ hấp thụ ở các bước sóng 649, 664, 470 nm bằng máy quang phổ kế. Kết quả
được tính theo công thức:
Cha = 13,36A664 – 5,19 A649
Chb = 27,43A649 – 8,12 A664
Cx+c = (1.000A470 –2,13Cha – 97,63Chb)/209
Trong đó: A: bước sóng
Cha: Chlorophyll a
33
Chb: Chlorophyll b
Cx+c: Carotenoid tổng số
Kết quả báo cáo là nồng độ sắc tố được tính µg/g nguyên liệu khô.
2.7.3. Xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Mục đích thí nghiệm: Xác định hàm lượng polyphenol tổng số trong tế bào
vi tảo.
Sơ đồ thí nghiệm:
Nước cất
Na2CO3 7,5%
Dịch chiết
Folin 10%
Lắc
Ủ 30 phút
Đo độ hấp thụ
Kết quả
Hình 2.8. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Thuyết minh sơ đồ: Lấy chính xác 0,1 ml dịch chiết (0,178 g/ml) trộn với
0,9 ml nước cất. Sau đó cho thêm 1 ml thuốc thử Folin-Ciocalteu 10% và 2,5 ml
Na2CO3 7,5%. Lắc đều hỗn hợp bằng máy Vortex. Hỗn hợp được trong điều kiện
tối và nhiệt độ phòng trong vòng 30 phút trước khi đo độ hấp thụ quang học ở bước
sóng 760 nm trên máy quang phổ kế (Spectrophotometry, Carry 50, Varian,
Australia). Kết quả được báo cáo bởi mg axit gallic/g nguyên liệu khô.
34
2.7.4. Xác định khả năng khử gốc tự do DPPH
Mục đích thí nghiệm: Đánh giá khả năng chống oxy hóa của tế bào vi tảo
thu được.
Sơ đồ thí nghiệm:
Nước cất
Dịch chiết
Lắc
Ủ 30 phút
Đo độ hấp thụ
Kết quả
Hình 2.9. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định khả năng khử gốc tự do DPPH
Thuyết minh sơ đồ: Thí nghiệm được tiến hành ở các nồng độ mẫu khác
nhau (25, 50, 75 và 100 µl), được trộn với nước cất để đạt thể tích tổng cộng 3 ml.
Sau đó thêm 1 ml dung dịch DPPH 0,2 mM (pha trong ethanol 99,7%), lắc đều
bằng máy lắc và để yên trong bóng tối 30 phút. Độ hấp thụ quang học được đo ở
bước sóng 517 nm.
Khả năng khử gốc tự do DPPH được xác định theo công thức sau:
DPPH (%) = (ACT – ASP)/ACT × 100
ACT: Độ hấp thu quang học của mẫu trắng không chứa dịch chiết;
ASP: Độ hấp thu quang học của mẫu có chứa dịch chiết.
Kết quả báo cáo là % khử gốc tự do DPPH và giá trị EC50.
35
2.7.5. Xác định tổng năng lực khử
Mục đích thí nghiệm: Xác định khả năng chống oxy hóa của sinh khối tảo
thu được.
Sơ đồ thí nghiệm:
Nước cất
Dịch chiết
Ủ 30 phút
TC
A
FeCl3
Nước cất
Đo độ hấp
Kết quả
Hình 2.10. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tổng năng lực khử
Thuyết minh sơ đồ:
Thí nghiệm được tiến hành ở các thể tích mẫu khác nhau (200, 400, 600, 800
µl) sau đó cho thêm nước cất vào để để đạt được thể tích cuối cùng 1,5 ml trước khi
thêm 0,5 ml K3(Fe[CN]6) 1%. Hỗn hợp được ủ ở 50C trong 20 phút. Sau đó thêm
0,5 ml TCA 10% và 2 ml nước cất, cuối cùng cho thêm 0,4 ml FeCl3 0,1%. Độ hấp
thụ quang học được xác định tại bước sóng 700 nm (Spectrophotometry, Carry 50,
36
Varian, Australia). Độ hấp thụ quang học càng cao thì năng lực khử càng mạnh. Kết
quả báo cáo là độ hấp thụ ở 700 nm và giá trị EC50. Mỗi phân tích được tiến hành
lặp lại 2 lần.
2.8. Phương pháp xử lí số liệu
Mỗi thí nghiệm lặp lại ít nhất 2 lần. Kết quả được xác định bằng giá trị trung
bình độ lệch chuẩn (KQ = TB ± SD). Tính toán số liệu và vẽ đồ thị được thực
hiện bằng phần mềm Microsoft Excel phiên bản 2010. So sánh giá trị trung bình
được thực hiện bằng phần mềm SPSS phiên bản 16.0.
37
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả xác định điều kiện thu sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana
Việc lựa chọn điều kiện thu sinh khối vi tảo phải thỏa mãn được yêu cầu về
kĩ thuật, kinh tế và môi trường.
3.1.1. Ảnh hưởng của loại chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo
Độ deacetyl, khối lượng phân tử, độ nhớt… là những tính chất quan trọng
của chitosan. Những tính chất này ảnh hưởng không những đến hoạt tính sinh học
mà còn ảnh hưởng đến hiệu quả kết lắng của nó.
Trong nghiên cứu này, 2 loại chitosan có độ deacetyl khác nhau là 70 và 85
(DD70 và DD85) đã được sử dụng. Thí nghiệm được tiến hành ở pH môi trường nuôi
(pH 7), nồng độ chitosan 10 mg/L (theo thể tích hỗn hợp tảo và môi trường nuôi)
với thời gian lắng 10 phút. Kết quả ảnh hưởng của loại chitosan đến hiệu suất thu
hồi sinh khối được thể hiện ở Hình 3.1 và Hình 3.2. Kết quả này bao gồm ảnh
hưởng của loại chitosan đến hiệu suất lắng FE, hệ số tập trung nồng độ CF và tỉ lệ
thể tích lắng SSVF. Hiệu suất lắng FE, hệ số lắng CF càng lớn và tỉ lệ thể tích lắng
SSVF càng nhỏ thì hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo càng cao.
Kết quả thực nghiệm cho thấy khi sử dụng 2 loại chitosan đều cho hiệu suất
lắng trên 90%, cấu trúc bông tảo tốt được thể hiện qua 2 chỉ số CF và SSVF. Tuy
nhiên hiệu suất thu hồi khi sử dụng 2 loại chitosan DD70 và DD85 lại ko có sự khác
biệt đáng kể. Cụ thể, hiệu suất kết bông vi tảo khi dùng DD70 là 94,72%, DD85 là
93,79%; chỉ số CF khi dùng DD70 là 0,31, DD85 là 0,30; chỉ số SSVF khi dùng DD70
và DD85 lần lượt là 3,00 và 3,11.
Chitosan có độ deacetyl càng cao thì càng có nhiều nhóm NH3+ tích điện
dương, khả năng tương tác tĩnh điện với các tế bào vi tảo tích điện âm sẽ càng cao,
hiệu suất kết bông sẽ càng cao, hiệu suất thu hồi càng lớn. Tuy nhiên việc sử dụng
loại chitosan có độ deacetyl bao nhiêu để hiệu suất thu hồi đạt cao nhất thì còn tùy
thuộc vào đặc tính, mật độ tế bào cũng như độ mạnh điện tích bề mặt của vi tảo sử
dụng.
38
Kết quả nghiên cứu cho thấy hiệu suất thu hồi sinh khối tảo giữa 2 loại
chitosan ko có sự khác nhau đáng kể, nên loại chitosan có độ deacetyl 70 được sử
dụng để thu sinh khối tảo Thalassiosira sp. để đảm bảo hiệu quả về mặt kinh tế.
DD70
DD85
Hình 3.1. Đánh giá hiệu suất thu hồi khi sử dụng 2 loại chitosan DD70 và DD85
39
CF
Hiệu suất lắng
3,25
94,80
3,20(A)
94,60
3,15
94,40
3,10
3,05
94,20
3,00
94,00
2,95
93,80
CF
Hiệu suất lắng (%)
95,00
2,90
93,60
2,85
93,40
2,80
93,20
2,75
2,70
93,00
DD 70
DD 85
Loại chitosan
0,35
0,30
SSVF
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
DD 70
DD 85
Loại chitosan
Hình 3.2. Ảnh hưởng của loại chitosan đến Hiệu suất lắng và Hệ số lắng (A)
và Tỉ lệ phần thể tích lắng (B)
40
3.1.2. Ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo
Để nghiên cứu ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi sinh khối, các yếu tố
khác được giữ cố định bao gồm: 10 mg/L chitosan DD70 và thời gian 10 phút.
Thí nghiệm được tiến hành ở các pH môi trường khác nhau từ 4-9. Kết quả
của sự ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi được thể hiện ở Hình 3.3 và Hình
3.4. Để đánh giá tổng thể hiệu quả thu hồi sinh khối vi tảo bằng chitosan ở các pH
khác nhau, hiệu suất lắng (FE), hệ số tập trung nồng độ (CF) và tỉ lệ phần thể tích
lắng (SSVF) được xác định.
Kết quả cho thấy pH môi trường nuôi có ảnh hưởng đáng kể đến hiệu suất
thu hồi vi tảo. Ở pH 4 hiệu suất lắng FE 89,99%, CF 2,00 và SSVF 0,45. Tiếp tục
nâng pH môi trường lên pH 5 và 6 thì hiệu suất thu hồi tiếp tục tăng. Cụ thể khi
điều chỉnh đến pH 6, hiệu suất lắng FE đạt 94,72%, CF 3,12 và SSVF 0,30. Tuy
nhiên, khi tiếp tục tăng pH môi trường lên pH > 6 thì hiệu suất thu hồi lại giảm đáng
kể. Cụ thể ở pH 9, hiệu suất kết bông giảm gần 3 lần so với ở pH 6, với hiệu suất
kết bông ở pH 9 chỉ còn 34,07% , hệ số CF 1,30 và SSVF 0,26 (p < 0,05). Thông
qua hiệu suất lắng bằng việc đo mật độ quang tế bào thì ở pH 4, 5, 6, 7 đều cho hiệu
suất lắng gần bằng nhau, nhưng cấu trúc bông tảo lại có sự khác biệt rõ rệt: ở pH 5
và 7 cho hiệu suất tới 91% nhưng cấu trúc bông tảo lại kém, bông không tạo thành
cục lớn, liên kết giữa các tế bào tảo kém nên hiệu suất thu hồi ko cao (hệ số SSVF ở
pH 6 và 7 lần lượt là 0,30 và 0,36). Như vậy, pH 6 cho hiệu suất thu hồi vi tảo cao
nhất trong dải pH nghiên cứu (p < 0,05).
Từ kết quả nghiên cứu này cho thấy pH môi trường nuôi có ảnh hưởng lớn
đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo. Ở pH 6 cho hiệu suất thu hồi sinh khối cao
nhất (p < 0,05). Kết quả này tương tự với nghiên cứu của Xu và cộng sự (2012) khi
dùng chitosan để thu hồi sinh khối vi tảo Chlorella sorokiniana, kết quả ở pH 6 cho
hiệu suất thu hồi lên tới 99%. Theo Xu và cộng sự (2012), ở pH dưới 7 cho hiệu
suất thu hồi lên tới 99%. Hiệu suất thu sinh khối cao ở vùng pH axit yếu có thể
được giải thích như sau: ở môi trường pH axit yếu sẽ làm tăng hoạt tính của
chitosan từ đó làm tăng hiệu suất thu hồi sinh khối nhờ vào việc giảm độ nhớt của
41
môi trường và làm giảm điện tích trung bình bề mặt của tế bào vi tảo (Morales và
cộng sự, 1985), các tế bào vi tảo sẽ dễ dàng tiếp xúc với bề mặt tích điện dương của
chitosan thông qua lực tương tác tĩnh điện. Hơn nữa, chitosan có điểm đẳng điện ở
pH khoảng pH 6,5 (Cheng và cộng sự, 2011), và chính vì vậy nên chitosan sẽ tích
điện dương ở pH 6 nhiều hơn hơn ở pH 7 và những pH cao hơn, điều này làm cho
chitosan như là một chất keo tụ dương có hiệu quả ở môi trường axit yếu.
Tuy nhiên, báo cáo của Ravi Divakaran và Sivasankara Pillai (2002) cho
rằng hiệu quả thu sinh khối của Spirulina, Oscillatoria, Chlorella và Synechocystis
cao nhất ở pH7, trong khi nghiên cứu của Cheng và cộng sự (2011) lại cho rằng pH
8,5 là pH tối thích để thu sinh khối Chlorella sorokiniana. Cũng theo Cheng và
cộng sự, hoạt tính của chitosan bị ảnh hưởng nhiều bởi độ nhớt, độ mặn và nhiệt độ
của môi trường; hàm lượng carbohydrate ở thành tế bào cũng là nguyên nhân chính
ảnh hưởng đến hiệu suất kết bông vi tảo; ngoài liên kết tĩnh điện giữa các nhóm tích
điện dương trên chitosan và bề mặt tích điện âm của tế bào vi tảo, lực liên kết giữa
các ion trong môi trường với các thành phần polysaccharide của tế bào tảo cũng ảnh
hưởng đáng kể đến hiệu suất kết bông. Chính vì vậy nên mới có sự khác nhau giữa
những nghiên cứu này.
42
pH 4
pH 7
pH 5
pH 8
pH 6
pH 9
Hình 3.3. Đánh giá hiệu suất thu hồi sinh khối ở những pH khác nhau
43
3,50
d
d
3,00
2,50
d
d
b
2,00
1,50
b
CF
Hiệu suất lắng (%)
100,00
90,00
80,00
70,00
60,00
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
(A)
CF
Hiệu suất lắng
1,00
0,50
0,00
pH4
pH5
pH6
pH7
pH8
pH9
pH
SSVF
0,50
0,45
0,40
d
(B)
c
c
b
0,35
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
b
a
0,05
0,00
pH4
pH5
pH6
pH7
pH8
pH9
pH
Hình 3.4. Ảnh hưởng của pH đến (A) Hiệu suất lắng và Hệ số lắng, (B) Tỉ lệ
phần thể tích lắng
(Chữ cái trên cột khác nhau chỉ ra sự khác nhau có ý nghĩa thống kê p < 0,05)
44
3.1.3. Ảnh hưởng của nồng độ chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh khối
Hình 3.5 và Hình 3.6 mô tả ảnh hưởng của nồng độ chitosan đến hiệu suất
thu hồi sinh khối vi tảo.
Nghiên cứu tiến hành ở pH 6 với sự thay đổi nồng độ chitosan từ 0,8 đến 6,0
mg/L (theo thể tích hỗn hợp tảo và môi trường nuôi). Từ kết quả nghiên cứu cho
thấy, nồng độ chitosan có ảnh hưởng đáng kể đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo.
Khi tăng nồng độ chitosan thì hiệu suất thu hồi sinh khối tăng lên rõ rệt. Ở nồng độ
0,8 mg/L đã cho thấy hiệu quả kết bông, tuy nhiên hiệu suất vẫn rất thấp (< 20%),
hệ số tập trung nồng độ CF chỉ đạt 0,17 và tỉ lệ thể tích phần kết bông cực đại
(1,00). Khi tăng nồng độ chitosan từ 0,8 lên 3,2 mg/L thì hiệu suất kết bông tăng lên
5 lần, chỉ số CF tăng 12 lần và SSVF giảm xuống 2 lần. Cụ thể: ở nồng độ chitosan
3,2 mg/L hiệu suất kết bông tảo đạt 91,84%, CF 2,09 và SSVF 0,44. Ở nồng độ 4
mg/L, hiệu suất thu hồi vẫn tiếp tục tăng nhẹ. Tiếp tục nâng nồng độ chitosan lên
5,2 và 6,0 mg/L thì hiệu suất kết bông, hệ số CF và SSVF hầu như không có sự thay
đổi (p < 0,05). Vì vậy nồng độ chitosan thích hợp để thu sinh khối là 4,0 mg/L.
Hiệu suất thu hồi sinh khối tăng nhanh khi bổ sung từ 0,8 đến 4,0 mg/L
chitosan, nhưng từ nồng độ 4,0 mg/L trở lên thì hầu như không thay đổi. Khi bổ
sung chitosan vào hỗn hợp môi trường nuôi, các nhóm tích điện dương của chitosan
sẽ đính lên bề mặt tích điện âm của tế bào vi tảo bằng liên kết tĩnh điện, giữa các tế
bào tảo sẽ hình thành cầu nối liên kết chúng lại với nhau để tạo thành hạt có kích
thước lớn hơn và bắt đầu lắng xuống nhờ trọng lực. Nồng độ chitosan tăng đồng
nghĩa với việc sẽ có nhiều tế bào tảo được kết bông hơn và hiệu suất thu hồi sẽ càng
cao. Tuy nhiên, nồng độ thích hợp để đạt hiệu suất mong muốn còn tùy thuộc vào
mật độ tế bào tảo trong môi trường nuôi. Nếu mật độ tảo thưa thì lượng chitosan
cần bổ sung sẽ thấp và ngược lại. Nếu mật độ tảo thấp mà nồng độ chitosan bổ
sung quá cao thì có thể sẽ làm giảm hiệu suất thu hồi sinh khối do thừa nhóm
tích điện dương trong dung dịch, chúng sẽ đẩy nhau ra xa, ngăn cản việc hình
thành cầu nối giữa các tế bào tảo.
45
0,8 mg/L
3,2 mg/L
1,6 mg/L
4,0 mg/L
2,4 mg/L
6,0 mg/L
Hình 3.5. Hình ảnh sinh khối vi tảo thu bằng chitosan ở các nồng độ
khác nhau
Nhiều nghiên cứu khác cũng chỉ ra rằng nồng độ chitosan có ảnh hưởng đến
hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo. Xu và cộng sự (2012) đã báo cáo rằng hiệu suất
thu hồi sinh khối Chlorella sorokiniana cao nhất là 10 mg chitosan/g sinh khối khô
ở pH 6. Trong khi một nghiên cứu khác của Hyuckjin Kwon và cộng sự (2013) lại
46
cho rằng với nồng độ chitosan 4,0 mg/ml đã cho hiệu suất thu hồi tảo Tetraselmis sp
gần đến 90%. Gualteri và cộng sự (1988) đã báo cáo rằng hiệu suất thu sinh khối
Euglena gracilis đạt 96-98% khi dùng 200 mg/L chitosan ở pH 7,5. Những sự khác
nhau về nồng độ chitosan tối ưu để thu sinh khối vi tảo có thể là do sự khác nhau về
đặc điểm giống loài, mật độ tế bào tảo, điều kiện nuôi trồng, pH, nhiệt độ môi
trường nuôi, sự khác nhau về thành phần dinh dưỡng, mức độ trưởng thành, chất
lượng loại chitosan sử dụng,…
Từ thực tế kết quả nghiên cứu, với nồng độ chitosan 4,0 mg/L ở pH 6 thích
hợp nhất để thu sinh khối Thalassiosira pseudonana, nồng độ chitosan này thỏa
mãn được tính kinh tế, lại đảm bảo được yêu cầu về mặt kĩ thuật.
47
120,0
d
e
c
80,0
f
ef
e
3,5
f
3,0
e
2,5
60,0
2,0
d
b
1,5
40,0
c
1,0
20,0
0,0
a
0,5
b
0,0
a
0,8
1,6
2,4
3,2
4,0
5,2
6,0
Nồng độ chitosan (mg/L)
1,2
1,0
(B)
SSVF
0,8
d
0,6
0,4
b
b
4,0
5,2
0,2
0,0
0,8
1,6
2,4
3,2
Nồng độ chitosan (mg/L)
6,0
CF
Hiệu suất lắng (%)
100,0
4,0 (A)
CF
Hiệu suất lắng
48
3.1.4. Ảnh hưởng của thời gian lắng đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo
Nghiên cứu được tiến hành ở pH 6 với 4 mg/L (theo thể tích hỗn hợp tảo và
môi trường nuôi) chitosan DD70. Hình 3.7 và đồ thị Hình 3.8 mô tả ảnh hưởng của
thời gian lắng đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana. Kết
quả thực nghiệm cho thấy thời gian lắng có ảnh hưởng đáng kể đến hiệu suất thu
hồi sinh khối tảo. Trong 2,5 phút đầu sau khi ngừng khuấy, hiệu suất kết bông tảo
tăng rất nhanh. Hiệu suất kết bông ở phút thứ 2,5 tăng gấp 2,3 lần so với ở phút thứ
nhất từ 40% ở phút thứ nhất lên tới 93% ở phút thứ 2,5; chỉ số SSVF cũng giảm
đáng kể, ở phút thứ 2,5 chỉ số SSVF đã giảm tới 1,8 lần so với phút đầu tiên (p <
0,05). Ở phút lắng thứ 5 hiệu suất kết bông tảo vẫn tăng nhẹ, nhưng từ phút thứ 5
trở đi thì hầu như không thay đổi nữa, tuy nhiên các chỉ số CF và SSVF vẫn còn có
xu hướng thay đổi. Ở phút lắng thứ 5 chỉ số CF là 2,53 và SSVF là 0,37 nhưng đến
phút thứ 10 thì chỉ số CF đã tăng lên 3,12 và chỉ số SSVF giảm xuống còn 0,30.
Điều này chứng tỏ hiệu suất thu hồi vẫn còn tăng đến phút thứ 10. Từ phút thứ 10
trở về sau, hiệu suất thu hồi ko có chiều hướng tăng thêm (kết quả từ phút thứ 20
không thể hiện trên biểu đồ).
1,0 phút
1,5 phút
2,0 phút
49
2,5 phút
5,0 phút
10,0 phút
15,0 phút
Hình 3.7. Đánh giá hiệu suất thu hồi sinh khối ở những thời gian khác nhau
Sau khi tác động lực khuấy làm tăng khả năng tiếp xúc giữa tế bào vi tảo và
chitosan thông qua tương tác tĩnh điện, các nhóm tích điện dương của chitosan sẽ
đính vào bề mặt tích điện âm của tế bào vi tảo tạo thành các hạt có kích thước lớn
hơn và bắt đầu lắng xuống. Cứ như vậy môi trường nuôi sẽ dần dần trong và chiều
cao phần lắng sẽ giảm dần, hiệu suất thu hồi sẽ tăng. Nhưng từ phút thứ 10 trở đi thì
hầu như hiệu suất kết bông, chỉ số CF và SSVF hầu như không thay đổi nữa. Hiện
tượng này có thể là do các phân tử chitosan đã bão hòa số lượng tế bào tảo, không
còn nhóm NH2 tích điện dương để tiếp tục kết bông tảo. Thời gian gian để đạt hiệu
suất thu hồi mong muốn trong nghiên cứu này là ở phút thứ 10.
50
d
d
d
c
d
g
f
4,0
3,5
3,0
b
e
a
2,5
2,0
d
1,5
c
1,0
b
a
CF
Hiệu suất lắng FE (%)
100,0
90,0
80,0
70,0
60,0
50,0
40,0
30,0
20,0
10,0
0,0
(A)
CF
Hiệu suất lắng
0,5
0,0
1,0
1,5
2,0
2,5
5,0
10,0
15,0
SSVF
Thời gian (phút)
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
f
(B)
e
d
c
b
1,0
1,5
2,0
2,5
5,0
a
a
10,0
15,0
Thời gian (phút)
Hình 3.8. Ảnh hưởng của thời gian lắng đến Hiệu suất lắng và Hệ số lắng (A)
và Tỉ lệ phần thể tích lắng (B)
(Chữ cái trên cột khác nhau chỉ ra sự khác nhau có ý nghĩa thống kê p < 0,05)
51
3.2. Kết quả xác định hoạt tính sinh học của vi tảo Thalassiosira pseudonana
3.2.1. Kết quả xác định hàm lượng polyphenol tổng số, chlorophyll a, chlorophyll
b và carotenoid tổng số
Nghiên cứu này đã xác định một số hợp chất có hoạt tính sinh học của vi tảo
Thalassiosira pseudonana: hàm lượng polyphenol tổng số, chlorophyll a, chlorophyll
b và carotenoid tổng số. Kết quả thể hiện ở Bảng 3.1. Ở nồng độ dịch 0,19 g nguyên
liệu khô/ml dịch chiết sinh khối, hàm lượng polyphenol tổng số là 5,67 mg GAE/g
nguyên liệu khô; hàm lượng chlorophyll a, chlorophyll b và carotenoid tổng số lần
lượt là 8,13, 38,75 và 133,18 µg/g nguyên liệu khô. Hemalatha và cộng sự (2013)
cũng đã nghiên cứu xác định hàm lượng polyphenol tổng số trên 3 loài vi tảo
Navicula clavata, Chlorella marina và Dunaliella salina với 3 dung môi chiết khác
nhau. Theo Hemalatha và cộng sự, sinh khối Chlorella marina chiết bằng methanol
cho hàm lượng polyphenol tổng số cao nhất, 0,78 mg GAE/g nguyên liệu khô. Với
kết quả này có thể thấy hàm lượng polyphenol tổng số trong vi tảo T. pseudonana cao
gấp 7,3 lần so với Chlorella marina. Koen Goiris và cộng sự (2011) đã báo cáo
hàm lượng polyphenol của một số loài vi tảo trong nghiên cứu của họ. Theo đó
hàm lượng polyphenol của Phaeodactylum tricornutum, Tetraselmis suecica và
Nannochloropsis sp. lần lượt là 3,75, 1,71 và 1,39 mg GAE/g nguyên liệu khô,
thấp hơn so với hàm lượng polyphenol ở T. psedonana lần lượt 1,51, 3,32 và
4,08 lần. Một nghiên cứu khác của Taweesak Khuantrairong và Siripen
Traichaiyaporn (2011) trên loài Cladophora sp. đã báo cáo hàm lượng chlorophyll
a, chlorophyll b và carotenoid tổng số lần lượt là 148, 56 và 889 µg/g nguyên liệu khô.
Nhìn chung hàm lượng chlorophyll a, chlorophyll b, carotenoid tổng số ở vi
tảo Thalassiosira pseudonana đều thấp hơn so với các loài tảo khác được nuôi trồng
trên thế giới; tuy nhiên hàm lượng polyphenol tổng số lại cao hơn đáng kể. Sự khác
nhau này có thể là do sự khác nhau về đặc điểm giống loài, đặc điểm địa lí, thời
gian sinh trưởng, thành phần dinh dưỡng của tế bào và phương pháp thực hiện
nghiên cứu.
52
Bảng 3.1. Hàm lượng polyphenol tổng số, chlorophyll a, chlorophyll b và
carotenoid tổng số
Chỉ tiêu
Hàm lượng
Polyphenol tổng số (mg GAE/g nguyên liệu khô)
5,67
0,04
Chlorophyll a (µg/g nguyên liệu khô)
8,13
1,28
Chlorophyll b (µg/g nguyên liệu khô)
38,75
5,72
Carotenoid tổng số (µg/g nguyên liệu khô)
133,18
4,53
3.2.2. Khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo thu được bằng chitosan
Kết quả nghiên cứu trên Bảng 3.1 cho thấy sinh khối vi tảo Thalassiosira
pseudonana có chứa nhiều hợp chất có khả năng chống oxy hóa như polyphenol,
chlorophyll a, chlorophyll b và carotenoid tổng số. Tiếp theo, khả năng chống oxy
hóa của của sinh khối thu được được đánh giá theo hai phương pháp khác nhau:
tổng năng lực khử và khả năng khử gốc tự do DPPH, được nghiên cứu. Kết quả thể
hiện ở Hình 3.9 (A) và Hình 3.9 (B). Kết quả cho thấy tổng năng lực khử cũng như
khả năng bắt gốc tự do DPPH của sinh khối vi tảo thu bằng chitosan tăng lên cùng
với nồng độ sử dụng. Ở nồng độ dịch chiết sinh khối là 0,22 mg/ml, tổng năng lực
khử là 0,38; trong khi đó giá trị này ở nồng độ 0,89 mg/ml là 0,90. Tương tự, năng
lực khử DPPH ở nồng độ 0,03 và 0,14 mg/ml tương ứng là 14,96 và 59,15%. Để
đánh giá khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo, nghiên cứu này sử dụng axit
ascorbic (vitamin C) là một chất đối chứng dương ở cùng nồng độ, để so sánh. Kết
quả nghiên cứu thể hiện ở Hình 3.9 (A) và Hình 3.9 (B). Nói chung, khả năng
chống oxi hóa của sinh khối vi tảo đánh giá theo cả hai phương pháp, đều thấp hơn
so với vitamin C. Ví dụ, năng lực khử tại nồng độ 0,45 mg/ml của sinh khối vi tảo
và vitamin C tương ứng là 0,55 và 0,96. Khả năng khử gốc tự do DPPH tại nồng độ
0,07 mg/ml của sinh khối vi tảo là 42,09%; trong khi đó, giá trị này của vitamin C
là 65,74%.Để so sánh một cách chính xác khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi
tảo và vitamin C, giá trị EC50 (nồng độ mà ở đó khả năng khử và bắt gốc tự do đạt
50%)
53
được sử dụng. Kết quả giá trị EC50 của sinh khối vi tảo thu bằng chitosan và vitamin
C thể hiện ở Bảng 3.2. Đối với năng lực khử, giá trị EC50 của dịch chiết từ sinh khối
vi tảo và vitamin C là 0,37 và 0,15 mg/ml. Như vậy, giá trị EC50 đối với năng lực
khử của vitamin cao hơn dịch chiết sinh khối vi tảo 2,5 lần. Tương tự đối với
phương pháp đánh giá khả năng khử gốc tự do DPPH, giá trị EC50 của vitamin C là
0,05 mg/ml cao hơn 1,8 lần so với dịch chiết sinh khối vi tảo (0,09 mg/ml). Như
vậy, khả năng chống oxy hóa của dịch chiết sinh khối vi tảo thấp hơn so với vitamin
C, một trong những chất chống oxy hóa mạnh nhất được biết đến. Sự khác nhau này
có thể được giải thích như sau: trong nghiên cứu này sử dụng dịch chiết thô, trong
thành phần của dịch chiết có nhiều nhóm không có hoặc có khả năng chống oxy hóa
yếu; trong khi đó vitamin C là hợp chất chống oxy hóa mạnh và ở dạng tinh khiết.
Nghiên cứu của Simić và cộng sự (2012), sử dụng phương pháp của Oyaizu
(1986) để đánh giá tổng năng lực khử của loài tảo lục Trentepohlia umbrina. Theo
Simić và cộng sự, ở nồng độ 1 mg/ml sinh khối Trentepohlia umbrina, độ hấp thụ ở
700 nm là 0,06; trong khi với chỉ với 0,22 mg/ml sinh khối Thalassiosira
pseudonana, độ hấp thụ ở bước sóng này là 0,38. Theo nghiên cứu của Shanab và
cộng sự (2012) về khả năng chống oxy hóa của một số loài vi tảo đã báo cáo khả
năng khử gốc tự do DPPH của Nostoc muscorum, Chlorella vulgaris, Anabaena
flousaquae và Phormedium fragile ở nồng độ 50,00 mg/ml lần lượt là 70, 68, 72 và
26%; trong khi với nồng độ Thalassiosira pseudonana 0,14 mg/ml, khả năng khử
gốc tự do DPPH lên tới 59%. Một nghiên cứu khác của Vlad Enache và cộng sự
(2012) trên loài Tetraselmis chuii đã kết luận khả năng chống oxy hóa của loài tảo
này khi chiết bằng methanol ở nồng độ 10 mg/ml là 34%. Nghiên cứu của Sasidharan
Sreenivasan và cộng sự (2007) về khả năng chống gốc tự do của tảo Gracilaria
changii đã kết luận giá trị EC50 khử gốc tự do DPPH của loài tảo này là 14,7 mg/ml
(với dung môi chiết là methanol 80%). Một nghiên cứu khác của Simić và cộng sự
(2012), sử dụng phương pháp tương tự của Dorman và cộng sự (2004) để thử
nghiệm khả năng bắt gốc tự do của loài vi tảo lục Trentepohlia umbrina đã kết luận
giá trị EC50 của loài này là 0,67 mg/ml.
54
Như vậy, có thể nói rằng sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana thu bằng
chitosan có hàm lượng polyphenol cao hơn cũng như khả năng chống oxy hóa mạnh
hơn so với nhiều loài vi tảo khác nuôi trồng trên thế giới. Kết quả này là cơ sở quan
trọng để khẳng định tính năng của sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana trong
việc sử dụng làm thức ăn giàu dinh dưỡng và các tính năng bảo vệ cơ thể cho tôm
nuôi.
Bảng 3.2. Giá trị EC50 của sinh khối vi tảo thu bằng chitosan và vitamin C
Giá trị EC50 (mg/ml)
Chỉ tiêu
Khả năng khử gốc tự do
DPPH
Tổng năng lực khử
Sinh khối vi tảo
Vitamin C
0,09
0,05
0,37
0,15
55
1,60
Tảo
Vitamin C
(A)
Độ hấp thụ ở 700 nm
1,40
1,20
1,00
0,80
0,60
0,40
0,20
0,00
0,22
0,45
0,67
0,89
Khả năng khử gố tự do DPPH (%)
Nồng độ chất khô (mg/ml)
90,0
Vitamin C
80,0
(B)
70,0
60,0
50,0
40,0
30,0
20,0
10,0
0,0
0,03
0,07
0,10
0,14
Nồng độ chất khô (mg/ml)
Hình 3.9. Khả năng chống oxy hóa (A) Tổng năng lực khử và (B) Khả năng
khử gốc tự do DPPH của sinh khối vi tảo thu bằng chitosan và vitamin C
56
CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Để ngành nuôi trồng thủy sản phát triển cả về sản lượng lẫn chất lượng thì
vấn đề con giống và nguồn thức ăn là rất quan trọng. Vi tảo với thành phần chất
dinh dưỡng và hàm lượng axit béo không no cao, đặc tính dễ tiêu hóa và có khả
năng tăng sức đề kháng cho thủy sản chống lại dịch bệnh nên đã được nhiều nước
trên thế giới sử dụng làm thức ăn cho thủy sản nuôi: cá, tôm, ốc, nhuyễn thể 2 mảnh
vỏ, đặc biệt là ở giai đoạn ấu trùng. Tuy nhiên, việc ứng dụng vi tảo để làm thức ăn
cho thủy sản tại các ao nuôi ở Việt Nam vẫn chưa được phổ biến.
Nuôi trồng thủy sản là một trong những ngành có tiềm năng phát triển ở
nước ta, tuy nhiên những năm gần đây, tình trạng dịch bệnh ở động vật thủy sản
thường xuyên xảy ra, đặc biệt là ở tôm. Nguyên nhân có thể là do nguồn nước bị ô
nhiễm, nguồn thức ăn nhân tạo không đảm bảo, dẫn đến sức đề kháng của động vật
nuôi kém. Thalassiosira pseudonana là một loại tảo cát được phép sử dụng làm
thức ăn cho động vật thủy sản và được nuôi nhiều ở nước ta. Trên thế giới đã có
nhiều nghiên cứu thu nhận sinh khối vi tảo làm thức ăn cho động vật thủy sản bằng
nhiều chất kết lắng khác nhau như: chitosan, FeCl3, (Al2(SO4)3), (Fe2(SO4)3)… Tuy
nhiên, sinh khối vi tảo thu nhận bằng các muối kim loại cho khả năng ứng dụng
thấp do sự tồn tại của các kim loại trong sinh khối sau khi thu ảnh hưởng xấu đến
động vật. Sử dụng chitosan-một polyme tự nhiên để thu sinh khối cho chất lượng
sinh khối cao nhất, ít làm ảnh hưởng tới pH, vì vậy chi phí xử lý nước sau khi thu
sinh khối thấp. Do đó, nghiên cứu này tập trung vào việc sử dụng chitosan để thu
nhận sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana tại Ninh Thuận làm thức ăn cho
động vật thủy sản nuôi, góp phần nâng cao giá trị của loài vi tảo này, đồng thời tăng
hiệu quả kinh tế cho các hộ nuôi. Kết quả nghiên cứu đã xác định được điều kiện
thích hợp để thu sinh khối vi tảo với hiệu suất cao nhất là ở môi trường nuôi pH 6,
sử dụng 4 mg/L chitosan DD70 trong thời gian 10 phút. Và kết quả nghiên cứu cũng
đã xác định được khả năng chống oxy hóa của Thalassiosira pseudonana thông qua
xác định hàm lượng polyphenol tổng số, carotenoid tổng số, chlorophyll a,
57
chlorophyll b, tổng năng lực khử và khả năng bắt gốc tự do DPPH. Với kết quả thu
được có thể thấy vi tảo Thalassiosira pseudonana tại vùng biển Ninh Thuận có khả
năng chống oxy hóa cao, có tiềm năng sử dụng làm thức ăn cho động vật thủy sản,
con người cũng như làm thực phẩm chức năng, mỹ phẩm hạn chế tác hại của quá
trình lão hóa.
Tuy nhiên để có thể đưa kết quả nghiên cứu này vào thực tiễn, những nghiên
cứu tiếp theo cần tập trung vào một số hướng sau đây: ngoài những ảnh hưởng của
điều kiện lắng (pH, loại chitosan, nồng độ chitosan sử dụng, thời gian lắng) cần tập
trung nghiên cứu ảnh hưởng của một số điều kiện khác như tốc độ khuấy, nhiệt độ,
độ mặn môi trường nuôi, dinh dưỡng của tế bào để hiệu suất thu được sinh khối vi
tảo Thalassiosira pseudonana cao nhất. Nghiên cứu điều kiện chiết (phương pháp
chiết, loại dung môi, tỉ lệ dung môi/nguyên liệu, thời gian chiết) để thu được hàm
lượng polyphenol, carotenoid, chlorophyll và khả năng chống oxy hóa cao nhất.
Xác định nhóm chất có khả năng chống oxy hóa và tinh chế những nhóm chất này
là cơ sở để thương mại hóa sử dụng trong thực phẩm (sử dụng chlorophyll,
carotenoid như một chất màu tự nhiên), thực phẩm chức năng (các viên nang, nước
uống bổ sung chất chống oxy hóa) cũng như dùng trong mỹ phẩm. Nhiều nghiên
cứu trên thế giới đã chứng minh trong sinh khối vi tảo có chứa hàm lượng lipit rất
cao, là nguồn nguyên liệu tiềm năng để sản suất nhiên liệu sinh học thay cho nguồn
nhiên liệu hóa thạch đang ngày càng cạn kiệt. Vì thế, có thể dùng sinh khối vi tảo
phục vụ cho ngành năng lượng. Ngoài ra, nguồn vi tảo ở nước ta vẫn chưa được
khai thác và không có giá trị kinh tế. Vì vậy, tiến hành nghiên cứu điều kiện thu
nhận sinh khối, khả năng chống oxy hóa của các loài vi tảo khác nhau, ở các vùng
khác nhau và ở những thời điểm khác nhau trong năm là cần thiết để góp phần nâng
cao giá trị kinh tế cho người nuôi vi tảo, nâng cao hiệu quả cho ngành nuôi trồng
thủy sản, làm cơ sở để phát triển ngành nhiên liệu sinh học và các sản phẩm có giá
trị cao.
58
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt:
1. Cái Ngọc Bảo Anh (2010). Ảnh hưởng của dinh dưỡng đến sinh trưởng
và quần thể, chất lượng của 3 loài vi tảo (Nannochloropsis oculata, Isochrysis
galbana và Tetraselmis chuii) và luân trùng (Brachionus plicatilis). Luận án tiến sĩ
nông nghiệp.
2. Nguyễn Văn Bằng, Nguyễn Văn Tuyến (2002). Nghiên cứu một số tính
chất Hoá học và vật lý của N-metylenchitosan. Tạp chí Hoá Học và ứng dụng, số
5/2002.
3. Phạm Lê Dũng, Nguyễn Thị Đông, Phạm Thị Mai, Lê Thanh Sơn, Nguyễn
Kim Thanh, Võ Thị Thứ, Trịnh Bình, Nguyễn Thị Bình, Bạch Huy Anh, Cao Vân
Điểm (2001). Màng chitosan Vinachitin. Tạp chí Hoá Học, Tập 39, số 2.
4. Huỳnh Thị Ngọc Như (2010). Sự thay đổi hình thái tế bào theo chu kỳ
tăng trưởng của vi tảo silic Thalassiosira sp. trong môi trường nuôi cấy nước biển
nhân tạo. Tạp chí khoa học ĐHSP TP HCM, số 21 2010.
5. Trang Sĩ Trung (chủ biên) và các tác giả khác. Chitin-Chitosan từ phế liệu
thủy sản và ứng dụng (2010). NXB Nông nghiệp.
6. PGS.Ts. Vũ Ngọc Út. Vai trò của thức ăn tự nhiên trong nuôi trồng thủy
sản. Nguồn UV-Việt Nam.
7. Phan Văn Xuân (2010). Ảnh hưởng của một số yếu tố sinh thái lên sự phát
triển của quần thể tảo Thalassiosira sp. nhập nội và thử nghiệm nuôi sinh khối.
Luận văn thạc sĩ Đại học Nha Trang.
Tài liệu tiếng nước ngoài:
8. Chen G, Zhao L, Qi Y, Cui YL (2014). Chitosan and its derivatives
applied in harvesting microalgae for biodiesel production: an outlook. Journal of
Nanomaterials, 2014, Article ID 217537.
59
9. Cheng SY, Zheng Y, Labavitch MJ, VanderGheynst SJ (2011). The
impact of cell wall carbohydrate composition on the chitosan flocculation of
Chlorella. Process Biochemistry 46 (2011) 1927-1933.
10. Enache V al et (2012). Growth, lipid contents and bioactivities of the
microalga Tetraselmis chuii in a low-cost, custom-made photobioreactor. TEORA Telemark Open Research Archive.
11. Farid SM, Shariati A, Badakhshan A, Anvaripour B (2012). Using
nano-chitosan for harvesting microalga Nannochloropsis sp. Bioresource
Technology 131 (2013) 555-559.
12. Godos I, Guzman HO, Soto R (2011). Coagulation/flocculation-based
removal of algal-bacterial biomass from piggery wastewater treatment. Bioresource
Technology, 102, 923–927.
13. Goiris K, Muylaert K, Fraeye I, Foubert I, Brabanter JD, Cooman DL
(2011). Antioxidant potential of microalgae in relation to their phenolic and
carotenoid content.
14. Granados M, Acién FG, Gómez C, Fernández-Sevilla JM, Molina Grima
E (2012). Evaluation of flocculants for the recovery of freshwater microalgae.
Bioresource Technology 118: 102-110.
15. Hemalatha A, Girija K, Parthiban C, Saranya C, Anantharaman P (2013).
Antioxidant properties and total phenolic content of marine diatom, Navicula clavata
and green microalgae, Chlorella marina và Dunaliella salina. Pelagia Research
Library.
16. Harith TZ, Yusoff MF, Mohd S, Mohamed SM, Mohamed Din SM,
Ariff BA (2009). Effect of different floculants on the floculation perfomance of
microalge, Chaetoceros calcitrans, cells. African Journal of Biotechnology, 59715978.
17. John J, Heaven MS (2012). A review of the harvesting of microalgae for
biofuel production. Rev Environ Sci Biotechnol (2013) 12:165-178.
60
18. Kwon H, Lu M, Lee EY, and Lee (2013). Harvesting of microalgae using
ùlocculation combined with dissolved air flotation. Biotechnology and Bioprocess
Engineering 19: 143-149 (2014).
19. Khuantrairong T and Traichaiyaporn P (2011). Enhancement of
carotenoid and chlorophyll content of an edible freshwater alga (Kai: Cladophora
sp.) by supplementary inorganic phosphate and investigation of its biomass
production. Maejo Int. J. Sci. Technol. 2012, 6(01), 1-11.
20. Prabakaran P, Ravindran AD (2011). A comparative study on effective
cell disruption methods for lipid extraction from microalgae. Letters of Applied
Microbiology, 53, 150-154.
21. Renault F, Sancey B, Badot PM, Crini G (2009). Chitosan for
coagulation/flocculation processes-an eco-friendly approach. European Polymer
Journal, 45, 1337–1348.
22. Schenk PM, Thomas-Hall SR, Stephens E (2008). Second generation
biofuels: high-efficiency microalgae for biodiesel production. BioEnergy Research,
1, 20-43.
23. Shanab MMS, Mostafa SMS, Shalaby AE, Mahmoud IG (2012).
Aqueous extracts of microalgae exhibit antioxidant and anticancer activities. Asian
Pac J Trop Biomed.
24. Simić S, Kosanić M, Ranković B (2012). Evaluation of In Vitro
Antioxidant and Antimicrobial Activities of Green Microalgae Trentepohlia
umbrina. Not Bot Horti Agrobo, 2012, 40(2): 86-91.
25. Sirin S (2013). Pre-concentrtion strategies for microalgae harvesting as
biorefinery process chain. Department of Chemical Engineering.
26. Sreenivasan S, Ibrahim D, Kassim NJM (2007). Free radical Scavenging
Activity and Total Phenolic Compounds of Gracilaria changii. International
Journal of Natural and Engineering Sciences 1 (3): 115-117, 2007.
27. Sumanta N, Choudhury IH, Nishika J and Suprakash R (2014).
Spectrophotometric Analysis of Chlorophylls and Carotenoids from Commonly
61
Grown Fern Species by Using Various Extracting Solvents. Research Journal of
Chemical Sciences.
28. Uduman N, Qi Y, Danquah MK, Forde GM, Hoadley A (2010).
Dewatering of microalgal cultures: a major bottleneck to algae-based fuels. Journal
of Renewable and Sustainable Energy, 2, Article ID 012701.
29. Vandamme D, Foubert I, Meesschaert B, Muylaert K (2010).
Flocculation of microalgae using cationic starch. Journal of Applied Phycology, 22,
525-530.
30. Xu Y, Purton S, Baganz F (2012). Chitosan flocculation to aid the
harvesting of the microalga Chlorella sorokiniana. Bioresource Technology 129,
296-301.
PHỤ LỤC
Phụ lục 1: Kết quả đo mật độ quang học tế bào của hỗn hợp môi trường
nuôi và tảo ban đầu khi chưa bổ sung chitosan
Độ hấp thụ ở 450 nm
Lần 1
0,4705
Lần 2
0,4697
Trung bình
0,4701
0,0006
Phụ lục 2: Kết quả xác định hàm lượng ẩm
Khối lượng Khối lượng Khối lượng
cốc sau sấy cốc sau sấy
Hàm
cốc + mẫu lượng ẩm
Hàm lượng
chất khô
(g)
và mẫu (g)
sau sấy (g)
(%)
(%)
Lần 1
21,6350
23,6350
22,0095
81,2750
18,7250
Lần 2
21,6660
23,6660
22,0390
81,3500
18,6500
21,6505
23,6505
22,0243
81,3125
18,6875
0,0219
0,0219
0,0209
0,0530
0,0530
Trung bình
Phụ lục 3: Kết quả xác định ảnh hưởng của loại chitosan đến hiệu suất thu hồi
sinh khối vi tảo
Loại Chitosan
DD85
Độ hấp thụ ở
450 nm
Chiều cao cột
lắng (cm)
Hiệu suất lắng
(%)
Concentration
factor (CF)
Lần 1
Lần 2
0,0286
0,0295
7,0000
6,6000
93,8524 93,7247
DD70
TB
0,0292
0,0004
6,8000
0,2828
93,7886
Lần 1
Lần 2
0,0249
0,0247
6,7000
6,5000
94,7033
94,7458
0,0903
2,9094
3,0816
0,3226
0,3042
2,9955
0,1213
(SSVF)
0,3134
0,0130
0,0248
0,0001
6,6000
0,1414
94,7245
0,0301
3,0673
3,1631
0,3088
0,2995
Tỉ lệ phần thể
tích lắng
TB
3,1152
0,0677
0,3042
0,0065
Phụ lục 4: Kết quả xác định ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi sinh khối vi tảo
pH
4
5
6
7
8
9
Độ hấp thụ ở
Lần 1
0,0468
0,0431
0,0249
0,0418
0,2270
0,3115
450 nm
Lần 2
0,0473
0,0432
0,0247
0,0428
0,2271
0,3084
Chiều cao cột
Lần 1
9,5000
8,2000
6,7000
7,5000
6,5000
5,5000
lắng (cm)
Lần 2
10,0000
8,1000
6,5000
8,0000
6,9000
5,9000
Lần 1
90,0447
90,8317
94,7033
91,1083
51,7120
33,7380
Lần 2
89,9383
90,8105
94,7458
51,691
34,3970
89,9910
90,8210
51,7020
34,0670
Hiệu suất
lắng (%)
TB
0,0752c
0,0150d
94,7245
0,0301e
90,8956
91,0019
0,1504d
0,0150b
0,4663a
Concentration
Lần 1
2,0568
2,4037
3,0673
2,6361
1,7264
1,3311
Lần2
1,9517
2,4328
3,1631
2,4655
1,6256
1,2651
1,2981
factor (CF)
TB
2,4183
3,1152
2,5481
0,1676
0,0744c
0,0206d
0,0677e
0,1206d
0,0712
Lần 1
0,4378
0,3779
0,3088
0,3456
0,2995
0,2535
Lần 2
0,4608
0,3733
0,2995
0,3687
0,3180
0,2719
Tỉ lệ thể tích
lắng SSVF
2,0042
0,0467a
0,4493
0,3756
TB
0 , 0163 d
0,0033c
0,3041
0,0065b
0,3571
0,0163c
0,3088
0,0130b
0,2627
0,0130a
Phụ lục 5: Kết quả xác định ảnh hưởng của nồng độ chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh khối
Nồng độ chitosan (mg/L)
0,8
1,6
2,4
3,2
4,0
5,2
6,0
Độ hấp thụ
Lần 1
0,3892
0,2663
0,1128
0,0392
0,0249
0,0295
0,0295
ở 450 nm
Lần 2
0,3895
0,2612
0,1083
0,0375
0,0247
0,0306
0,0282
Chiều cao
Lần 1
21,7000
15,0000
11,9000
9,7000
6,7000
6,5000
5,5000
Lần 2
21,7000
14,0000
12,0000
9,4000
6,5000
6.7000
5,7000
Lần 1
17,2091
43,3524
76,0051
91,6613
94,7033
93,7257
93,7247
Lần 2
17,1453
44,4375
76,9623
92,0220
94,7468
93,4917
94,0013
cột lắng
(cm)
Hiệu suất
lắng (%)
TB
17,1772
0,0451a
43,8949
76,4847
91,8422
94,7245
93,6077
93,863
0,7671b
0,6769c
0,2557d
0,0301e
0,1655ef
0,1955f
Concentration
Lần 1
0,1721
0,6272
1,3860
2,0506
3,0673
3,1290
3,6979
Lần 2
0,1715
0,6888
1,3917
2,1244
3,1631
3,0280
3,5787
0,1718
0,6580
2,0875
3,1152
3,0785
3,6383
factor (CF)
TB
0,0005a
Tỉ lệ thể tích
0,0436b
1,3889
0,0041c
0,0522d
0,0677e
0,0714e
0,0843f
Lần 1
1,0000
0,6912
0,5484
0,4470
0,3088
0,2995
0,2535
Lần 2
1,0000
0,6452
0,5530
0,4332
0,2995
0,3088
0,2627
0,4401
0,3042
0,3042
0,2581
lắng SSVF
TB
1,0000
0,0000f
0,6682
0,0326e
0,5507
0,0033d
0,0098c
0,0065b
0,0065b
0,0065a
Phụ lục 6: Kết quả xác định ảnh hưởng của thời gian lắng đến hiệu suất thu sinh khối vi tảo
1,0 phút
1,5 phút
2,0 phút
2,5 phút
5,0 phút
10,0 phút
Lần 1
0,2755
0,1818
0,0538
0,0306
0,0255
0,0249
Lần 2
0,2821
0,1921
0,0543
0,0319
0,0269
0,0247
Chiều cao cột
Lần 1
19,7000
16,2000
13,3000
10,9000
8,2000
6,7000
lắng
Lần 2
19,4000
16,7000
13,9000
10,7000
8,0000
6,5000
Lần 1
41,3955
61,3274
88,5556
93,4910
94,5756
94,7033
Lần 2
39,9915
59,136
88,4493
93,2142
94,2778
94,7458
Độ hấp thụ
Hiệu suất lắng
(%)
TB
40,6935
60,2319
88,5025
93,3525
94,4267
94,7245
Concentration
Lần 1
0,45598
0,8215
1,4449
1,8612
2,5028
3,0673
Lần 2
0,4473
0,7684
1,3808
1,8904
2,5573
3,1631
factor (CF)
TB
Tỉ lệ thể tích
0,4517
0,7950
1,4128
1,8758
2,5300
0,0385e
3,1152
0,0061a
0,0375b
0,0453c
0,0206d
0,0677f
Lần 1
0,9078
0,7465
0,6129
0,5023
0,3779
0,3088
Lần 2
0,8940
0,7696
0,6406
0,4931
0,3687
0,2995
phần lắng
SSVF
0,9009
0,7581
0,6267
0,4977
0,3733
0,3042
TB
0,0098f
0,0163e
0,0196d
0,0065c
0,0065b
0,0065a
15 phút
20 phút
25 phút
40 phút
60 phút
Lần 1
0,0293
0,0295
0,0294
0,0294
0,0292
Lần 2
0,0289
0,0275
0,0268
0,0275
0,0271
Chiều cao cột
Lần 1
6,0000
6,0000
6,0000
6,0000
6,0000
lắng (cm)
Lần 2
6,2000
6,2000
6,2000
6,2000
6,2000
Lần 1
93,7673
93,7247
93,7460
93,7460
93,7886
Lần 2
93,8524
94,1502
94,2991
94,1502
94,2353
93,8098
93,9375
94,0225
93,9481
94,0119
0,0602d
0,3008d
0,3911d
0,2858d
0,3159d
Độ hấp thụ
Hiệu suất lắng
(%)
TB
Concentration
Lần 1
3,3913
3,3897
3,3905
3,3905
3,3920
Lần 2
3,2848
3,2953
3,3005
3,2953
3,2982
factor (CF)
3,3380
3,3425
TB
Tỉ lệ thể tích
3,3455
0,0752g
0,0668g
0,0636g
Lần 1
0,2765
0,2765
Lần 2
0,2857
0,2857
3,3429
3,3451
0,0673g
0,0663g
0,2765
0,2765
0,2765
0,2857
0,2857
0,2857
phần lắng
SSVF
TB
0,2811
0,0065a
0,2811
0,0065a
0,2811
0,0065a
0,2811
0,0065a
0,2811
0,0065a
Phụ lục 7: Kết quả xác định hàm lượng Chlorophyll a, Chlorophyll b và
Carotenoid tổng số trong vi tảo
Độ hấp thụ ở các bước sóng (nm)
664
Độ hấp thụ
Hàm lượng
Chlorophyll a
649
470
Lần 1
Lần 2
Lần 1
Lần 2
0,0165
0,0162
0,0207 0,0243 0,3989 0,3920
Lần 1
9,0400
Lần 2
7,2240
(µg/g nguyên liệu
khô)
TB
Hàm lượng
Lần 1
34,7040
Chlorophyll b
Lần 2
42,8000
8,1320
1,2841
(µg/g nguyên liệu
khô)
TB
Hàm lượng
Lần 1
136,3840
Lần 2
129,9840
Carotenoid tổng
số (µg/g nguyên
liệu khô)
TB
38,7520
133,1840
5,7247
4,5255
Lần 1
Lần 2
Phụ lục 8: Xây dựng đường chuẩn axit gallic
Để xác định hàm lượng poyphenol tổng, ta dựng đường chuẩn axit gallic.
Cách tiến hành xây dựng đường chuẩn axit gallic như sau: Cho vào 7 ống nghiệm,
mỗi ống 0,1 ml dung dịch axit gallic với các nồng độ lần lượt cho mỗi ống là: 0,05;
0,10; 0,25; 0,50; 0,75; 1,00 và 1,50 mg/ml. Sau đó cho 0,9 ml nước cất vào mỗi
ống, rồi cho tiếp 1 ml thuốc thử Folin-Ciocalteu (10%) và 2,5 ml Na2CO3 7,5%. Lắc
đều rồi để phản ứng xảy ra trong tối 30 phút ở nhiệt độ phòng. Sau đó lấy ra đo
bước sóng ở 760 nm trên máy quang phổ kế (Spectrophotometry, Carry 50, Varian,
Australia). Mỗi phân tích được tiến hành lặp lại hai lần, kết quả báo cáo là giá trị
trung bình độ lệch chuẩn.
Độ hập thụ ở bước sóng 760 nm
Phụ lục 9: Đường chuẩn axit Gallic
1,6
y = 0,891x + 0,069
R² = 0,992
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0,0
0,5
1,0
Nồng độ axit gallic (mg/ml)
1,5
2,0
Phụ lục 10 : Kết quả xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Nồng độ sinh
khối khô
Độ hấp thụ ở
ổng số
760 nm
khô)
(g/ml)
Lần 1
Lần 2
Lần 1
0,1318
0,1325
5,6386
Lần 2
TB
0,1870
5,7015
5,6701 0,0445
Phụ lục 11: Kết quả xác định tổng năng lực khử của sinh khối tảo thu
bằng chitosan
Nồng độ chất khô (mg/ml)
Độ hấp
thụ ở 700
nm
EC50
0,2200
0,4500
0,6700
0,8900
Lần 1
0,3846
0,5489
0,7468
0,9016
Lần 2
0,3830
0,5537
0,7441
0,9024
Trung
0,3838
0,5513
0,7455
0,9020
bình
0,0011
0,0034
0,0019
0,0006
Lần 1
0,3720
Lần 2
0,3715
(mg/ml)
Trung
bình
0,3718
0,0004
Phụ lục 12: Kết quả xác định khả năng khử gốc tự do DPPH của sinh khối vi
tảo thu bằng chitosan
Nồng
độ chất
khô
Khả năng khử gốc tự do
Độ hấp thụ ở bước sóng 517 nm
DPPH (%)
(mg/ml)
Mẫu 1
0,0344
Mẫu 2
0,1372 0,1380
Control Control
1
2
0,1664
0,1572
Lần 1
Lần 2
17,5481 12,2137
Trung
bình
14,9567
3,7719
0,0688
0,0951 0,0923
0,1664
0,1572
42,8485 41,1850
42,0890
1,1056
0,1031
0,0712 0,0698
0,1664
0,1572
57,2115 55,5980
56,4277
1,1410
0,1375
0,0649 0,0673
0,1664
0,1572
60,9976 57,1883
59,1471
2,6936
Lần 1
EC50 (mg/ml)
Lần 2
Trung
bình
0,0883
0,0936
0,0910 0,0037
Phụ lục 13: Kết quả xác định tổng năng lực khử của vitamin C
Nồng độ chất khô (mg/ml)
Độ hấp
thụ ở 700
nm
0,11
0,22
0,45
0,67
0,89
Lần 1
0,4426
0,7358
0,9572
1,3508
1,4803
Lần 2
0,4662
0,7254
0,9714
1,3619
1,4912
Trung
bình
EC50
(mg/ml)
0,4544
0,0167
0,7306
0,0074
0,9643
0,0100
Lần 1
0,1467
Lần 2
0,1523
Trung
bình
1,3564
0,1495
0,0040
0,0078
1,4858
0,0077
Phụ lục 14: Kết quả xác định khả năng khử gốc tự do DPPH của vitamin C
Nồng độ
Khả năng khử gốc tự do
Độ hấp thụ ở bước sóng 517 nm
DPPH (%)
chất khô
(mg/ml)
0,0344
Mẫu 1
Mẫu 2
0,1082
0,1013
Control
Control
1
2
0,1664
0,1572
Lần 1
Lần 2
3,7821
35,5598
Trung
bình
34,6710
1,2570
0,0688
0,0578
0,0521
0,1664
0,1572
64,6267 66,8575
65,7421
1,5774
0,1031
0,0417
0,0393
0,1664
0,1572
74,4798 75,0000
74,7399
0,3678
0,1375
0,0289
0,0246
0,1664
0,1572
82,3133 84,3511
83,3322
1,4409
Lần 1
EC50 (mg/ml)
Lần 2
Trung
bình
0,0532
0,0492
0,0512 0,0028
[...]... dương (NH3+ và NH2) có khả năng hấp thu những vi sinh vật tích điện âm, trong đó có vi tảo Với những đặc điểm này, chitosan được xem là chất trợ lắng 4 tiềm năng có thể sử dụng để thu sinh khối vi tảo, giúp giảm chi phí và nâng cao chất lượng của sinh khối thu được Trên thế giới đã có một số nghiên cứu sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo: Xu và cộng sự (2012) đã dùng chitosan để thu sinh khối Chlorella... này đã được công bố, tuy nhiên dữ liệu về các hoạt chất sinh học như các hợp chất polyphenol, chlorophyll, carotenoid và khả năng chống oxy hóa trong loài vi tảo này vẫn còn rất hạn chế Xuất phát từ những lý do trên tôi thực hiện đề tài Nghiên cứu sử dụng chitosan để thu nhận sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana và đánh giá khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo thu được 2 Mục tiêu của đề... Scenedesmus sp và S subspicatus) Tác giả kết luận rằng hiệu quả thu hồi sinh khối của vi tảo phụ thu c vào chất trợ keo tụ và nồng độ sử dụng của chúng Salim và cộng sự (2011) lần đầu tiên sử dụng sinh khối của các loài vi tảo có khả năng trợ keo tụ để keo tụ sinh khối của các loài vi tảo khác Trong phương pháp này không cần sử dụng các chất trợ keo tụ hóa học Theo đó, một số loài vi tảo có khả năng sử dụng. .. vi tảo Thalassiosira pseudonana bằng chitosan 1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của loại chitosan đến hiệu suất thu hồi sinh khối; 1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của pH đến hiệu suất thu hồi sinh khối; 1.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ chitosan; 5 1.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian lắng Mục tiêu 2: Xác định hàm lượng polyphenol, carotenoid, chlorophyll và đánh giá hoạt tính chống oxy hóa của sinh khối vi tảo. .. học về vi c sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo nuôi trồng ở Vi t Nam Kết quả cũng cung cấp dữ liệu khoa học về thành phần, hàm lượng một số chất có hoạt tính sinh học và khả năng chống oxy hóa của sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana thu bằng chitosan 4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo sẽ giúp giảm chi phí và nâng cao chất lượng sinh khối, do đó đề tài thành công... hợp để thu nhận sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana bằng chitosan; (2) Xác định hàm lượng polyphenol, carotenoid, chlorophyll và đánh giá hoạt tính chống oxy hóa của sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana thu được bằng chitosan 3 Nội dung nghiên cứu Ðể thực hiện các mục tiêu nghiên cứu trên, đề tài thực hiện những nội dung sau đây: Mục tiêu 1: Xác định điều kiện thích hợp để thu nhận sinh khối. .. hiệu quả thu sinh khối vi tảo cao hơn chitosan khoảng 9% Như vậy, kích thước của chất trợ keo tụ có thể là một trong những yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả trợ lắng vi tảo 22 CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu của đề tài là điều kiện thu sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana bằng chitosan và hoạt tính sinh học của sinh khối vi tảo thu được 2.2... hiệu quả thu hồi sinh khối vi tảo phụ thu c vào pH của môi trường và đạt hiệu suất cao nhất ở pH 8,0 (đối với chitosan) và pH 10,2 (đối với LT 25 và LT 27) Xu và cộng sự (2013) đã sử dụng chitosan như chất trợ keo tụ tự nhiên để thu sinh khối của vi tảo xanh Chlorella sorokiniana Kết quả cho thấy trên 99% sinh khối của vi tảo được kết lắng ở nồng độ chitosan 2 mg/L và pH nhỏ hơn 7 Sơ bộ đánh giá chi... thì có khả năng hấp phụ chất màu, kim loại cũng như khả năng kháng khuẩn, kháng nấm, tạo màng cao hơn so với các mẫu chitosan có độ deacetyl thấp hơn Ngoài các tính chất trên thì chitosan còn có khả năng chống oxy hóa Khả năng chống oxy hóa của chitosan phụ thu c vào độ deacetyl, phân tử lượng và độ nhớt của chitosan Chitosan có độ nhớt thấp thì khả năng chống oxy hóa cao 1.2.2 Ứng dụng của chitosan. .. Thuyết minh sơ đồ: Thí nghiệm được thực hiện trên vi tảo Thalassiosira pseudonana đang ở cuối pha tăng trưởng của chu kì sinh trưởng của công ty UNI-President-Ninh Thu n Thực nghiệm nhằm xác định điều kiện thu cho hiệu suất thu sinh khối vi tảo cao nhất và đánh giá hoạt tính sinh học của sinh khối thu được Hỗn hợp môi trường nuôi và sinh khối vi tảo (250 ml) được cho vào ống đong 250 ml rồi tiến hành ... chống oxy hóa loài vi tảo hạn chế Xuất phát từ lý thực đề tài Nghiên cứu sử dụng chitosan để thu nhận sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana đánh giá khả chống oxy hóa sinh khối vi tảo thu được ... nano -chitosan để thu sinh khối vi tảo Nannochloropsis sp… Tuy nhiên chưa có công trình nghiên cứu công bố vi c sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo Thlassiosira pseudonana T pseudonana loại vi tảo nuôi... lượng sinh khối thu Trên giới có số nghiên cứu sử dụng chitosan để thu sinh khối vi tảo: Xu cộng (2012) dùng chitosan để thu sinh khối Chlorella sorokiniana, Farid cộng (2012) dùng nano -chitosan để