BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG CAO THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHITOSAN TRONG BẢO QUẢN HỖN HỢP CAROTENOPROTEIN THU ĐƢỢC TỪ PHẾ LIỆU TÔM VÀ ỨNG DỤNG VÀO PHỐI TRỘN THỨC ĂN CHO CÁ HỒI GIỐNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÁNH HÕA – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG CAO THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHITOSAN TRONG BẢO QUẢN HỖN HỢP CAROTENOPROTEIN THU ĐƢỢC TỪ PHẾ LIỆU TÔM VÀ ỨNG DỤNG VÀO PHỐI TRỘN THỨC ĂN CHO CÁ HỒI GIỐNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60420201 Quyết định giao đề tài: 67/QĐ-ĐHNT ngày 24/01/2017 Quyết định thành lập HĐ: Ngày bảo vệ: Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS NGUYỄN VĂN HÕA PGS.TS TRANG SĨ TRUNG Chủ tịch Hội đồng: Khoa sau đại học: KHÁNH HÕA - 2017 LỜI CAM ĐOAN Đề tài có tham khảo kết số tác giả nghiên cứu ứng dụng chitosan đƣợc trích dẫn đầy đủ Tuy nhiên tơi xin cam đoan kết đề tài: “Nghiên cứu sử dụng chitosan bảo quản hỗn hợp carotenoprotein thu từ phế liệu tôm ứng dụng vào phối trộn thức ăn cho cá hồi giống” nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khoa học khác thời điểm Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn đƣợc ghi rõ nguồn gốc Nha Trang, ngày … tháng … năm 2017 Tác giả luận văn Cao Thị Huyền Trang iii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: TS Nguyễn Văn Hòa PGS.TS Trang Sĩ Trung hết lòng bảo hƣớng dẫn tận tình, thƣờng xuyên theo dõi trình thực đề tài TS Lê Minh Hồng, ThS Nguyễn Cơng Minh, ThS Phạm Thị Khanh tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình thực đề tài Ban giám hiệu, Khoa Sau đại học, Viện công nghệ sinh học môi trƣờng, Khoa công nghệ thực phẩm Trƣờng Đại học Nha Trang tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập, nghiên cứu bảo vệ đề tài Các thầy cô, anh chị, cán quản lý Phòng thí nghiệm-Trung tâm Thực hành Thí nghiệm tạo điều kiện giúp đỡ tơi tận tình thiết bị máy móc để tơi hồn thành tốt nội dung đề tài Gia đình tất bạn bè giúp đỡ, động viên suốt trình học tập thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Nha Trang, ngày … tháng … năm 2017 Tác giả luận văn Cao Thị Huyền Trang iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .iii LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ x TÓM TẮT LUẬN VĂN xii LỜI MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chitosan 1.1.1 Cấu trúc, tính chất phƣơng pháp sản xuất chitosan 1.1.1.1 Cấu trúc chitosan 1.1.1.2 Tính chất chitosan 1.1.1.3 Phƣơng pháp sản xuất chitosan 1.1.2 Ứng dụng chitosan 1.1.2.1 Ứng dụng chitosan thực phẩm 1.1.2.2 Ứng dụng chitosan nông nghiệp thủy sản 1.1.2.3 Ứng dụng chitosan xử lý môi trƣờng 1.1.2.4 Ứng dụng chitosan y học công nghệ sinh học 1.1.3 Cơ chế chống oxi hóa chitosan 1.1.4 Tình hình nghiên cứu khả chống oxy hóa chitosan ngồi nƣớc 10 1.1.4.1 Tình hình nghiên cứu khả chống oxi hóa chitosan giới 10 1.1.4.2 Tình hình nghiên cứu khả chống oxi hóa chitosan Việt Nam 10 1.2 Q trình oxy hóa chất chống oxy hóa 11 1.2.1 Q trình oxy hóa 11 1.2.2 Cơ chế hoạt động chất chống oxy hóa 13 1.3 Tổng quan carotenoprotein 14 1.3.1 Carotenoprotein tự nhiên 14 1.3.2 Astaxanthin 16 1.3.2.1 Tính chất hóa học astaxanthin 18 1.3.2.2 Tính chất vật lý astaxanthin 19 v 1.3.2.3 Ứng dụng astaxanthin 19 1.3.2.4 Biến đổi astaxanthin trình chế biến, bảo quản 20 1.3.3 Các cơng trình nghiên cứu hỗn hợp carotenoprotein 21 1.3.3.1 Các cơng trình nghiên cứu hỗn hợp carotenoprotein nƣớc 21 1.3.3.2 Các công trình nghiên cứu hỗn hợp carotenoprotein ngồi nƣớc 22 1.3.4 Các phƣơng pháp thu nhận hỗn hợp carotenoprotein 23 1.3.4.1 Phƣơng pháp lên men 23 1.3.4.2 Phƣơng pháp ủ xilô 24 1.3.4.3 Phƣơng pháp xử lí hóa chất, kết hợp với enzyme 25 1.3.5 Các phƣơng pháp bảo quản hỗn hợp carotenoprotein 26 1.3.5.1 Phƣơng pháp cô đặc 26 1.3.5.2 Phƣơng pháp bao gói, bảo quản hỗn hợp carotenoprotein 27 1.3.5.3 Phƣơng pháp sử dụng chất bảo quản 28 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Nguyên vật liệu 29 2.2 Hóa chất 29 2.3 Dụng cụ thiết bị 30 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 30 2.4.1 Phƣơng pháp chuẩn bị mẫu 30 2.4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ, độ deacetyl, dung mơi hòa tan chitosan đến chất lƣợng hỗn hợp trình bảo quản 31 2.4.2 Xác định độ ổn định nƣớc viên thức ăn bổ sung dịch thủy phân giàu protein (carotenoprotein) vào thức ăn thủy sản 37 2.5 Phƣơng pháp phân tích 39 2.6 Phƣơng pháp xử lí số liệu 39 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Thành phần hóa học dịch thủy phân protein nghiên cứu 40 3.2 Ảnh hƣởng thời gian yếu tố bảo quản đến chất lƣợng hỗn hợp 42 3.2.1 Ảnh hƣởng thời gian yếu tố bảo quản đến hàm lƣợng astaxanthin 43 3.2.2 Ảnh hƣởng thời gian yếu tố bảo quản đến tổng nitobazo bay (Total volatile basic nitrogen content - TVBN) 48 vi 3.2.3 Ảnh hƣởng thời gian yếu tố bảo quản đến độ thủy phân (Dgree of hydrolysis - DH) 53 3.2.4 Ảnh hƣởng thời gian yếu tố bảo quản đến hàm lƣợng protein hòa tan (Total soluble protein) 55 3.3 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ nƣớc đến độ ổn định viên thức ăn 60 3.3.1 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ nƣớc tĩnh đến độ ổn định viên thức ăn 61 3.3.2 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ sục khí đến độ ổn định viên thức ăn 64 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 Kết luận 66 Kiến nghị 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu : Nội dung COS : Chitosan oligosaccharide CTS 0.5 : Sử dụng chitosan có nồng độ 0,5% CTS 1.0 : Sử dụng chitosan có nồng độ 1,0% CTS 1.5 : Sử dụng chitosan có nồng độ 1,5% CTS 2.0 : Sử dụng chitosan có nồng độ 2,0% DD : Degree of deacetylation (Độ Deacetyl) ĐC : Mẫu đối chứng FCR : Feed Conversion Ratio (Hệ số chuyển đổi thức ăn) VSV : Vi sinh vật viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1.Các dung mơi thƣờng sử dụng để hòa tan chitosan Bảng 1.2 Tính chất chitosan ảnh hƣởng độ deacetyl Bảng 1.3 Một số ứng dụng chitosan thực phẩm Bảng 1.4 Thành phần hóa học phế liệu tơm Litopenaeus vannamei 15 Bảng 1.5 Hàm lƣợng astaxanthin từ phế liệu sinh học loài giáp xác 17 Bảng 3.1 Thành phần hóa học hỗn hợp carotenoprotein 40 Bảng 3.2 Đánh giá cảm quan hỗn hợp carotenoprotein 42 Bảng 3.3 Hàm lƣợng hỗn hợp sau 18 tuần bảo quản 58 ix DANH MỤC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo chitosan .3 Hình 1.2 Cấu tạo astaxanthin 16 Hình 1.3 Một số đồng phân astaxanthin 17 Hình1.4 Liên kết astaxanthin-protein phế liệu tơm 18 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tiêu đầu vào 31 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 32 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tỉ lệ chitosan có độ deacetyl cao .34 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tỉ lệ chitosan có độ deacetyl thấp .36 Hình 2.5 Xác định độ ổn định nƣớc viên thức ăn .38 Hình 3.1 Hỗn hợp carotenoprotein .42 Hình 3.3 Sự thay đổi hàm lƣợng astaxanthin theo thời gian sử dụng acid formic hòa tan chitosan .44 Hình 3.4 Sự thay đổi hàm lƣợng astaxanthin theo thời gian sử dụng acid citric hòa tan chitosan 44 Hình 3.5 Hỗn hợp carotenoprotein sau 18 tuần bảo quản .48 Hình 3.6 Sự thay đổi hàm lƣợng nitơ bazơ bay theo thời gian sử dụng acid formic hòa tan chitosan 49 Hình 3.7 Sự thay đổi hàm lƣợng nitơ bazơ bay theo thời gian sử dụng acid citric hòa tan chitosan 49 Hình 3.8 Hỗn hợp carotenoprotein .52 Hình 3.9 Sự thay đổi độ thủy phân theo thời gian sử dụng acid formic hòa tan chitosan .53 Hình 3.10 Sự thay đổi độ thủy phân theo thời gian sử dụng acid citric hòa tan chitosan 53 Hình 3.11 Sự thay đổi hàm lƣợng protein hòa tan theo thời gian sử dụng acid formic hòa tan chitosan 55 Hình 3.12 Sự thay đổi hàm lƣợng protein hòa tan theo thời gian sử dụng acid citric hòa tan chitosan 55 Hình 3.13 Viên thức ăn .61 Hình 3.14 Trang thiết bị trình tạo viên thức ăn 61 x Xác định hàm lƣợng protein hòa tan phƣơng pháp buiret Pha thuốc thử biuret Hòa tan 1.5 g Copper Sulfate (CuSO4) 6.0 g sodium potassium tartrate (KNaC4H4O6 4H2O) 500 ml nƣớc cất, khuấy cho thêm 300 ml NaOH 10% Dung dịch đƣợc khuấy trộn làm đầy đến 1000 ml nƣớc cất Xác định hàm lượng protein mẫu Cân xác 1g mẫu vào ống ly tâm 50ml, thêm vào 9ml Lắc phút sau để yên 30 phút Đêm ly tâm 5000 vòng, thời gian ly tâm 15 phút Lấy 1ml dịch sau ly tâm cho vào ống nghiệm, thêm vào 4ml thuốc thử biuret Ủ nhiệt độ phòng 30 phút Dùng 1ml nƣớc cất thay cho 1ml dịch sau ly tâm ta đƣợc mẫu trắng thí nghiệm Sau ủ, tiến hành đo độ hấp thụ quang học dung dịch bƣớc sóng 570 nm ta xác định đƣợc giá trị Ym Thay giá trị Ym vừa xác định đƣợc vào phƣơng trình đƣờng chuẩn y=0,048x + 0,01 ta tính đƣợc giá trị Xm Hàm lƣợng protein mẫu đƣợc xác định theo cơng thức sau: % protein Trong đó: Vl (ml )* X m (mg / ml )*0,999*10 *100*100 m *(100 W )*1000(mg / g ) Vl : Thể tích dịch lọc (ml) Xm: Hàm lƣợng protein ml dịch lọc (mg/ml) W: Độ ẩm mẫu 1000: Hệ số chuyển đổi g mg Xác định số TVB-N Lấy xác 5g mẫu, thêm vào 10ml acid trichloroacetic sau đồng hỗn hợp máy đồng Tiến hành lọc hỗn hợp qua giấy lọc Whatman số để lấy dịch lọc Sử dụng chƣng cất đạm bán tự động để chƣng cất, cho vào ống Kjeldahl 25ml dịch lọc, cho vào 6ml dung dịch NaOH 10% gắn ống vào hệ thống chƣng cất để tránh làm thất thoát bazo bay Chuẩn bị cốc hứng chứa 10ml acid boric 4%, 0,04 ml hỗn hợp methyl đỏ bromocresol green đặt dƣới đầu nito bazo bay hơi, cho đầu ống ngập dung dịch Tiến hành chƣng cất khơng nito bazo bay (thử giấy đo pH đầu ống, PH=7) Chuẩn độ cốc hứng thu đƣợc dung dịch chuẩn HCL 0,1N dung dịch vừa xuất màu hồng nhạt ổn định 30s lắc Chỉ số TVB-N (mg/5g mẫu tƣơi) đƣợc tính công thức nhƣ sau: TVB-N (mg/5g) = ( ) Trong đó: a: số ml acid HCL chuẩn tiêu tốn b: nồng độ acid HCL chuẩn Phụ lục Nguyên liệu Tiền xử lí với acid Acid clohydric (HCl) : 0,4% (v/w) Acid formic (HCOOH) : 0,2% (v/w) Đầu tơm/nƣớc : 1/3 Thời gian/nhiệt độ xử lí: giờ/28-30 C Ép Bã Dịch Cô đặc Điều chỉnh pH sau cô đặc Hỗn hợp carotenoprotein Sơ đồ 2.1: Quy trình tách chiết hỗn hợp carotenoprotein từ đầu tơm theo phƣơng pháp xử lý hóa học Chitosan có độ deacetyl thấp Độ deacetyl : 70 ±3% Độ nhớt : 460 ±5 mm.Pa Chitosan có độ deacetyl cao Độ deacetyl : 90± 2% Độ nhớt : 1500 ±70 mm.Pa Khối lƣợng phân tử : 1150± 50 kDa Hình 2.1 Chitosan sử dụng đề tài Hình 2.2 Máy quay chân khơng Phụ lục 3: Kết phân tích thí nghiệm 1.Ảnh hƣởng thời gian điều kiện bảo quản đến hàm lƣợng astaxanthin (ppm) 1.1 Sử dụng dung môi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.1 Hàm lƣợng astaxanthin sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần Đối chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 Tuần 178,61 0,04 179,07 0,06 180,02 0,02 183,21 0,02 181,95 0,08 Tuần 174,54 0,07 175,60 0,33 177,78 0,54 181,61 0,99 180,76 0,11 Tuần 167,26 0,07 170,53 0,32 174,14 0,53 179,03 0,98 176,32 0,11 Tuần 150,01 0,06 154,04 0,29 161,21 0,49 169,06 0,92 166,02 0,10 Tuần 10 138,41 0,30 142,49 0,16 145,17 0,32 157,30 0,67 150,47 0,16 Tuần 12 121,01 0,05 125,07 0,23 135,03 0,41 146,15 0,80 140,00 0,09 Tuần 14 117,29 0,05 121,43 0,22 132,05 0,40 140,28 0,76 136,97 0,09 Tuần 16 114,53 0,05 118,16 0,22 124,54 0,38 138,60 0,75 129,50 0,08 Tuần 18 108,42 0,04 110,20 0,20 115,15 0,35 122,61 0,67 118,48 0,17 1.2 Sử dụng dung môi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.2 Hàm lƣợng astaxanthin sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 Tuần 178,61 0,04 179,35 0,06 182,08 0,10 183,02 0,09 182,29 0,10 Tuần 174,54 0,07 175,39 0,15 176,94 0,35 180,10 0,71 178,92 0,21 Tuần 167,26 0,07 168,63 0,14 171,59 0,33 177,19 0,70 173,17 0,20 Tuần 150,01 0,06 151,56 0,13 160,04 0,31 165,03 0,65 163,43 0,19 Tuần 10 138,41 0,30 140,18 0,77 145,46 0,60 157,35 0,49 148,78 0,97 Tuần 12 121,01 0,05 125,64 0,11 139,06 0,27 148,20 0,58 144,08 0,17 Tuần 14 117,29 0,05 120,15 0,10 131,34 0,26 142,26 0,56 135,17 0,16 Tuần 16 114,53 0,05 119,43 0,10 127,63 0,25 138,25 0,55 132,21 0,16 Tuần 18 108,42 0,04 111,90 0,10 117,38 0,23 125,05 0,49 119,36 0,14 1.3 Sử dụng dung môi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.3 Hàm lƣợng astaxanthin sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183.79 0,34 183,79 0,34 Tuần 178,61 0,04 179,13 0,08 180,24 0,04 181,20 0,08 181,49 0,04 Tuần 174,54 0,07 175,47 1,01 176,43 0,57 177,52 0,67 177,84 0,72 Tuần 167,26 0,07 169,17 0,97 169,56 0.55 171,50 0,65 173,65 0,71 Tuần 150,01 0,06 153,03 0,88 157,30 0.51 160,98 0,61 164,97 0,67 Tuần 10 138,41 0,30 140,51 0,87 146,11 0.47 152,91 0,63 157,76 0,52 Tuần 12 121,01 0,05 125,23 0,72 135,06 0.44 146,09 0,55 150,14 0,61 Tuần 14 117,29 0,05 121,63 0,70 129,26 0.42 139,21 0,53 145,51 0,59 Tuần 16 114,53 0,05 117,55 0,68 123,14 0.40 131,63 0,50 134,26 0,55 Tuần 18 108,42 0,04 110,29 0,64 115,20 0.37 120,46 0,46 124,73 0,51 1.4 Sử dụng dung môi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90 % Bảng 3.4 Hàm lƣợng astaxanthin sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90 % Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 183,79 0,34 Tuần 178,61 0,04 180,06 0,03 181,17 0,04 183,14 0,08 182,33 0,08 Tuần 174,54 0,07 177,16 0,65 178,19 0,62 182,25 0,15 179,56 0,06 Tuần 167,26 0,07 171,30 0,63 172,71 0,60 176,27 0,15 174,39 0,06 Tuần 150,01 0,06 154,27 0,56 162,31 0,57 169,37 0,14 165,63 0,05 Tuần 10 138,41 0,30 142,77 0,16 150,26 0,32 157,66 0,33 153,02 0,33 Tuần 12 121,01 0,05 125,96 0,46 140,05 0,49 151,40 0,13 149,08 0,05 Tuần 14 117,29 0,05 121,32 0,44 128,43 0,45 145,08 0,12 141,41 0,05 Tuần 16 114,53 0,05 117,56 0,43 123,40 0,43 142,02 0,12 137,12 0,04 Tuần 18 108,42 0,04 111,68 0,41 119,13 0,42 130,46 0,11 125,61 0,04 Ảnh hƣởng thời gian điều kiện bảo quản đến hàm lƣợng Tổng nito bazo bay (mgN/100g) 2.1 Sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.5 Hàm lƣợng nitơ bazơ sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD độ 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 Tuần 20,74 1,11 20,50 0,78 20,48 0,00 20,35 0,18 20,11 0,22 Tuần 21,26 0,37 20,95 0,67 20,72 0,20 20,55 0,08 20,35 0,56 Tuần 22,12 0,10 21,53 0,00 21,53 0,74 21,26 0,37 20,74 0,37 Tuần 23,36 0,37 22,80 0,64 22,58 0,74 21,74 0,85 21,28 0,20 Tuần 10 24,15 0,74 23,63 0,74 23,36 0,37 22,84 0,37 21,79 0,37 Tuần 12 24,82 0,49 24,68 0,00 24,15 0,00 23,36 0,37 22,58 0,74 Tuần 14 26,51 0,37 26,34 0,12 25,55 0,49 24,41 0,37 23,89 0,37 Tuần 16 27,56 0,37 27,31 0,25 26,51 0,37 25,35 0,26 24,78 0,97 Tuần 18 29,03 0,78 28,50 0,75 27,65 0,24 26,89 0,01 26,55 0,33 2.2 Sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.6 Hàm lƣợng nito bazo bay sử dụng dung môi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 Tuần 20,74 1,11 20,48 0,74 20,48 0,74 20,21 0,37 20,21 0,37 Tuần 21,26 0,37 21,14 0,10 20,74 1,11 20,48 0,74 20,61 0,65 Tuần 22,12 0,10 21,79 0,37 21,60 0,10 20,81 0,47 21,22 0,48 Tuần 23,36 0,37 22,58 0,74 21,96 0,76 21,00 0,00 21,28 0,20 Tuần 10 24,15 0,74 23,36 0,37 22,58 0,74 21,40 0,17 21,79 0,37 Tuần 12 24,82 0,49 24,23 0,11 23,25 0,22 22,12 0,10 22,31 0,37 Tuần 14 26,51 0,37 25,28 0,12 24,76 0,12 23,33 0,11 23,89 1,11 Tuần 16 27,56 0,37 26,77 0,51 25,98 0,12 24,57 0,67 25,45 0,87 Tuần 18 29,03 0,78 27,60 0,53 27,13 0,50 25,36 0,51 26,43 0,75 2.3 Sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.7 Hàm lƣợng nitơ bazơ sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 Tuần 20,74 1,11 20,49 0,03 20,32 0,22 20,31 0,24 20,21 0,37 Tuần 21,26 0,37 20,94 0,08 20,82 0,48 20,63 0,22 20,48 0,74 Tuần 22,12 0,10 21,86 0,48 21,40 0,37 21,33 0,47 21,07 0,10 Tuần 23,36 0,37 22,73 0,96 21,93 0,37 21,74 0,65 21,53 0,74 Tuần 10 24,15 0,74 23,89 0,37 22,84 0,37 22,58 0,74 22,12 0,10 Tuần 12 24,82 0,49 24,68 0,00 24,02 0,33 23,66 0,06 23,07 0,48 Tuần 14 26,51 0,37 25,55 0,49 24,94 0,37 24,31 0,23 23,70 0,63 Tuần 16 27,56 0,37 26,78 0,75 25,99 1,11 25,46 0,37 24,58 0,37 Tuần 18 29,03 0,78 27,94 0,02 27,68 0,43 26,95 0,49 26,43 0,25 2.4 Sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.8 Hàm lƣợng nitơ bazơ sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 20,00 0,08 Tuần 20,74 1,11 20,49 0,02 20,37 0,15 20,16 0,30 20,40 0,49 Tuần 21,26 0,37 20,94 0,08 20,75 0,39 20,35 0,37 20,68 0,10 Tuần 22,12 0,10 21,93 0,17 21,26 1,11 20,54 0,65 20,80 1,02 Tuần 23,36 0,37 22,54 0,48 21,60 0,85 20,74 0,37 21,26 0,37 Tuần 10 24,15 0,74 23,37 0,37 22,31 0,37 21,26 0,37 21,53 0,00 Tuần 12 24,82 0,49 23,97 1,23 23,10 0,00 21,79 0,37 22,20 0,21 Tuần 14 26,51 0,37 25,28 0,12 24,41 0,37 22,53 0,06 23,25 0,22 Tuần 16 27,56 0,37 26,25 0,50 25,37 0,24 23,63 1,19 24,64 0,98 Tuần 18 29,03 0,78 26,95 0,25 26,34 0,87 25,18 0,39 25,47 0,70 Ảnh hƣởng thời gian điều kiện bảo quản đến hàm lƣợng protein hòa tan (%) 3.1 Sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.9 Hàm lƣợng protein hòa tan sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồngđộ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 Tuần 34,04 0,32 33,07 0,05 31,05 0,23 28,04 0,06 29,04 0,38 Tuần 39,35 0,35 38,23 0,35 36,77 0,71 31,26 0,09 33,58 0,04 Tuần 45,46 0,59 44,07 0,34 41,83 0,04 33,24 0,52 35,18 0,26 Tuần 51,05 0,05 49,10 0,18 47,67 0,56 38,02 0,03 39,09 0,22 Tuần 10 53,05 0,12 51,56 0,12 49,25 0,22 41,55 0,42 43,17 0,48 Tuần 12 55,09 0,33 53,60 0,25 52,06 0,97 46,97 0,03 48,25 0,04 Tuần 14 57,05 0,17 55,29 0,24 53,02 0,99 49,05 0,79 51,02 0,03 Tuần 16 59,05 0,72 56,60 0,25 55,10 0,40 49,80 0,30 51,97 0,61 Tuần 18 61,02 0,63 58,31 0,46 56,87 0,73 50,27 0,60 51,75 0,26 3.2 Sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.10 Hàm lƣợng protein hòa tan sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Mẫu đối Nồng Nồng độ Nồng độ Nồng Tuần chứng SD độ 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD đô 2.0% SD Tuần 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 Tuần 34,04 0,32 32,22 0,19 29,93 0,42 28,67 0,33 29,03 0,13 Tuần 39,35 0,35 37,26 0,48 34,75 0,04 30,37 0,53 32,36 0,57 Tuần 45,46 0,59 44,18 0,39 42,09 0,61 33,29 0,48 37,31 0,52 Tuần 51,05 0,05 49,00 0,43 47,01 0,28 32,98 0,42 37,07 0,47 Tuần 10 53,05 0,12 50,80 0,63 48,55 0,20 33,09 0,55 38,19 0,26 Tuần 12 55,09 0,33 53,11 0,56 50,00 0,65 36,05 0,42 40,22 0,48 Tuần 14 57,05 0,17 54,12 0,35 52,05 0,50 39,02 0,32 43,08 0,17 Tuần 16 59,05 0,72 56,04 0,21 53,22 0,17 39,97 0,30 47,17 0,26 Tuần 18 61,02 0,63 58,78 0,30 55,05 0,39 43,58 0,30 48,57 0,47 3.3 Sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.11 Hàm lƣợng protein hòa tan sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 Tuần 34,04 0,32 33,36 0,22 30,44 0,42 29,48 0,81 28,17 0,27 Tuần 39,35 0,35 37,01 0,31 35,08 0,04 30,28 0,53 28,42 0,22 Tuần 45,46 0,59 43,14 0,13 41,01 0,77 33,18 0,09 29,08 0,22 Tuần 51,05 0,05 47,86 0,81 46,08 0,57 35,07 0,27 30,42 0,66 Tuần 10 53,05 0,12 49,56 0,57 47,59 0,79 36,01 0,63 31,22 0,67 Tuần 12 55,09 0,33 53,03 0,49 51,05 0,12 40,23 0,30 35,88 1,15 Tuần 14 57,05 0,17 55,04 0,14 53,00 0,56 42,09 0,87 37,05 0,61 Tuần 16 59,05 0,72 57,05 0,64 54,15 0,34 44,02 0,17 40,14 0,35 Tuần 18 61,02 0,63 57,75 0,51 55,19 0,38 50,77 0,35 47,28 0,16 3.4 Sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.12 Hàm lƣợng protein hòa tan sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 27,27 0,72 Tuần 34,04 0,32 33,03 0,36 32,34 0,17 27,50 0,21 29,07 0,21 Tuần 39,35 0,35 37,73 0,40 35,87 0,97 29,56 0,40 31,62 0,63 Tuần 45,46 0,59 42,08 0,52 40,04 0,30 30,33 0,56 33,04 0,13 Tuần 51,05 0,05 49,02 0,21 46,07 0,27 31,03 0,35 34,04 0,31 Tuần 10 53,05 0,12 50,55 0,30 47,26 0,50 31,41 0,29 34,32 0,73 Tuần 12 55,09 0,33 52,10 0,54 49,03 0,45 34,47 0,42 37,08 0,48 Tuần 14 57,05 0,17 54,03 0,65 50,53 0,42 36,22 0,85 38,36 0,56 Tuần 16 59,05 0,72 55,19 0,30 51,06 0,30 37,34 0,34 40,03 0,26 Tuần 18 61,02 0,63 56,16 0,26 52,52 0,47 40,38 0,17 45,11 0,57 Ảnh hƣởng thời gian yếu tố bảo quản đến độ thủy phân ( DH %) 4.1 Sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.13 Độ thủy phân sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD độ 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 Tuần 57,09 0,76 58,07 0,30 58,32 1,50 59,09 0,91 58,54 0,76 Tuần 53,03 0,48 53,58 1,57 55,12 1,24 57,31 1,41 56,59 1,09 Tuần 47,08 0,81 49,00 0,80 52,11 0,95 56,55 1,44 54,11 0,80 Tuần 45,08 1,39 46,53 0,34 49,03 0,33 56,05 0,83 53,05 0,82 Tuần 10 39,95 0,16 43,09 0,16 47,05 0,32 55,09 0,96 51,15 0,64 Tuần 12 38,21 1,32 41,04 0,16 45,04 0,95 54,07 0,80 50,24 0,32 Tuần 14 32,09 0,16 35,20 0,31 42,11 0,46 50,10 0,94 47,58 0,78 Tuần 16 25,04 0,82 31,04 0,16 35,96 0,48 48,09 1,28 45,15 0,48 Tuần 18 22,71 0,49 26,83 0,96 32,38 0,48 45,72 0,48 41,64 0,96 4.2 Sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.14 Độ thủy phân sử dụng dung mơi hòa tan acid formic hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 Tuần 57,09 0,76 58,51 0,91 58,94 0,30 59,71 0,76 59,01 1,83 Tuần 53,03 0,48 54,03 1,40 56,13 0,15 59,35 0,93 58,10 1,73 Tuần 47,08 0,81 49,08 0,63 53,08 0,95 58,06 1,12 56,59 0,48 Tuần 45,08 1,39 47,09 1,01 52,06 0,85 57,45 0,69 56,56 0,86 Tuần 10 39,95 0,16 44,33 0,47 50,60 0,48 57,50 0,64 55,70 0,16 Tuần 12 38,21 1,32 42,12 0,47 47,01 0,48 57,05 0,64 55,02 0,48 Tuần 14 32,09 0,16 35,54 0,78 43,05 0,15 55,75 0,77 53,08 0,95 Tuần 16 25,04 0,82 31,06 0,47 39,04 0,63 53,10 1,12 50,32 0,79 Tuần 18 22,71 0,49 28,30 0,63 34,00 1,11 50,17 0,48 48,19 0,32 4.3 Sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Bảng 3.15 Độ thủy phân sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 70% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 Tuần 57,09 0,76 57,57 0,61 58,45 1,21 58,74 1,20 60,05 1,36 Tuần 53,03 0,48 54,02 0,16 56,26 1,08 57,06 0,62 59,10 0,47 Tuần 47,08 0,81 49,00 0,32 54,16 0,31 56,30 1,10 57,25 0,64 Tuần 45,08 1,39 47,11 0,34 50,33 0,67 54,08 0,34 56,37 0,34 Tuần 10 39,95 0,16 44,24 0,32 46,10 0,94 50,18 1,11 55,90 1,28 Tuần 12 38,21 1,32 41,97 0,64 47,54 0,78 51,08 0,16 53,86 1,60 Tuần 14 32,09 0,16 39,72 0,78 43,31 0,31 49,11 0,15 52,30 0,78 Tuần 16 25,04 0,82 32,10 0,48 37,12 0,16 47,72 0,79 50,01 0,32 Tuần 18 22,71 0,49 27,11 0,48 34,24 0,78 43,59 0,32 48,88 0,64 4.4 Sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Bảng 3.16 Độ thủy phân sử dụng dung mơi hòa tan acid citric hòa tan chitosan có độ deacetyl 90% Mẫu đối Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tuần chứng SD 0.5% SD 1.0% SD 1.5% SD 2.0% SD Tuần 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 60,27 0,15 Tuần 57,09 0,76 58,59 1,35 59,08 2,13 60,19 0,76 59,81 1,05 Tuần 53,03 0,48 54,27 0,78 57,08 1,24 59,72 1,24 58,18 0,93 Tuần 47,08 0,81 51,08 0,64 55,04 0,80 59,02 1,12 57,07 0,80 Tuần 45,08 1,39 48,06 0,17 53,06 1,16 57,84 1,17 55,80 1,01 Tuần 10 39,95 0,16 45,09 0,16 51,31 1,28 57,28 0,80 53,91 0,16 Tuần 12 38,21 1,32 43,17 0,32 49,05 0,64 57,39 0,32 52,10 1,44 Tuần 14 32,09 0,16 38,05 0,78 43,95 0,93 55,89 1,08 50,50 0,62 Tuần 16 25,04 0,82 33,11 0,80 40,35 0,80 54,10 0,80 50,06 0,80 Tuần 18 22,71 0,49 29,15 0,32 36,84 0,64 51,84 0,48 49,16 0,48 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ nƣớc tĩnh đến độ ổn định viên thức ăn 5.1 Phối trộn nồng độ 1% Bảng 3.17 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ nƣớc tĩnh đến độ ổn định viên thức ăn phối trộn nồng độ 1% Bọc Thời gian Trộn lẫn Mẫu (%) SD Mẫu(%) SD 10 phút 98,85 0,40 98,76 0,90 20 phút 97,85 0,34 98,16 0,46 30 phút 95,55 0,28 95,48 0,20 40 phút 92,24 1,09 91,74 1,03 50 phút 88,93 0,28 87,61 0,45 60 phút 83,63 0,71 83,65 0,09 5.2 Phối trộn nồng độ 3% Bảng 3.18 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ nƣớc tĩnh đến độ ổn định viên thức ăn phối trộn nồng độ 3% Bọc Thời gian Trộn lẫn Mẫu(%) SD Mẫu(%) SD 10 phút 99,04 0,63 99,13 0,20 20 phút 98,23 0,34 98,43 0,42 30 phút 96,41 0,35 96,33 0,03 40 phút 93,17 0,54 92,78 0,91 50 phút 90,58 0,22 89,57 1,04 60 phút 86,13 0,28 85,87 0,25 5.3 Phối trộn nồng độ 5% Bảng 3.19 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ nƣớc tĩnh đến độ ổn định viên thức ăn phối trộn nồng độ 5% Bọc Thời gian Trộn lẫn Mẫu(%) SD Mẫu(%) SD 10 phút 99,33 0,15 99,43 0,72 20 phút 98,53 0,09 98,73 0,40 30 phút 96,63 0,06 96,43 0,86 40 phút 93,82 0,11 93,39 0,13 50 phút 91,54 0,76 90,68 0,94 60 phút 87,85 0,01 87,15 0,29 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ sục khí đến độ ổn định viên thức ăn 6.1 Phối trộn nồng độ 1% Bảng 3.20 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ sục khí đến độ ổn định viên thức ăn phối trộn nồng độ 1% Bọc Thời gian Trộn lẫn Mẫu(%) SD Mẫu(%) SD 10 phút 98,38 0,07 98,31 0,10 20 phút 97,24 0,19 96,67 0,15 30 phút 93,23 0,47 91,24 0,05 40 phút 86,11 1,16 82,24 0,59 50 phút 77,38 1,82 75,06 0,99 60 phút 70,83 0,86 68,10 0,74 6.2 Phối trộn nồng độ 3% Bảng 3.21 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ sục khí đến độ ổn định viên thức ăn phối trộn nồng độ 3% Bọc Thời gian Trộn lẫn Mẫu(%) SD Mẫu(%) SD 10 phút 98,48 0,27 98,44 0,10 20 phút 97,63 0,44 97,25 0,55 30 phút 94,62 0,26 93,11 0,52 40 phút 89,13 0,28 84,16 0,80 50 phút 79,70 0,45 77,97 0,10 60 phút 74,24 0,58 69,84 0,05 6.3 Phối trộn nồng độ 5% Bảng 3.22 Ảnh hƣởng chitosan, thời gian, chế độ sục khí đến độ ổn định viên thức ăn phối trộn nồng độ 1% Bọc Thời gian Trộn lẫn Mẫu(%) SD Mẫu(%) SD 10 phút 98,62 0,11 98,55 0,44 20 phút 98,00 0,03 97,73 0,92 30 phút 95,73 0,49 94,34 0,16 40 phút 90,03 0,12 85,02 0,65 50 phút 82,11 0,53 79,01 0,31 60 phút 76,25 0,76 71,26 0,39 ... Nghiên cứu sử dụng chitosan bảo quản hỗn hợp carotenoprotein thu từ phế liệu tôm ứng dụng vào phối trộn thức ăn cho cá hồi giống” Mục tiêu nghiên cứu Sử dụng chitosan để bảo quản hỗn hợp carotenoprotein. .. Nghiên cứu sử dụng chitosan bảo quản hỗn hợp carotenoprotein thu từ phế liệu tôm ứng dụng vào phối trộn thức ăn cho cá hồi giống” Mục tiêu cụ thể đề tài nghiên cứu bổ sung chitosan vào hỗn hợp. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG CAO THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHITOSAN TRONG BẢO QUẢN HỖN HỢP CAROTENOPROTEIN THU ĐƢỢC TỪ PHẾ LIỆU TÔM VÀ ỨNG DỤNG VÀO PHỐI TRỘN THỨC ĂN CHO CÁ